xz .ece bft,. 1 UStM': JütoTiglTJ ^ENEWYÖMBOpiCALGARP| ZEITSCHRIFT FÜR WTSSENSCHAFTLirHE MIKROSKOPIE UND FÜR MIKROSKOPISCHE TECHNIK. Unter besonilerer Mitwirkung von Prof. Dr. Leop. Dippel Prof. Di*. Max Flesch in Darmstadt, in Bern, Prof. Dr. Artli. Wichmann in Utrecht herausgegeben von Dr WILH. JUI. BEHRENS in Giktingen. BAJVD I, Heß 1. Mit 13 Holzschnitten. Brauiischweig, C. A. Schwetschke und Sohn (M. Bruhn). 1884. Inhalt. Seite Griltay, Dr. E,, Theorie der Wirkung und des Gebrauches der Camera lucida . 1 Dippel, Prof. Di", L., Mikrograi)hische Mittheilungen 23 I. Ableitung der Formel etc. II. Bemerkungen über einige Probecbjecte aus der Gattung Grammatophora. ; lU. Die Correctionsfassung bei Objectivsystemen für homogene Immersion. Flescli, Prof. Dr. M., lieber einen heizbaren, zu schnellem Wechsel der Temperatur geeigneten Objecttisch 33 Brass, Dr. A., Die Methoden bei der Untersuchung thierischef Zellen . 39 Baiimgarfen, Prof. Dr. med. P., Beiträge zur Darstellungsmethode der Tuberkelbacillen 51 Schaarschmidt, Dr. J., Ueber die mikrochemische P^eaction des Solanin 61 Gierke, Prof. Dr. H., Färberei zu mikroskopischen ^wecken .... 62 Giltay, Dr. E., Deber die Art der Veröffentlichung neuer Reactions- und Tinctionsmcthoden 101 Referate und Besprechungen 103 1. Lehr- und Handbücher S. 103. — 2. Mikro.sk op und mikro- skopische Apparate S. 108. — 3. Die Anwendung der Photo- graphie zur Abbildung mikroskopischer Objecto S. 109. — 4. Präparationsmethoden im Allgemeinen S. 113. — 5. Präpa- parationsmethoden für specielle Zwecke. A. Niederste Thiere und Pflanzen S. 117. B. Zoologisches S. 123. C. Botanisches S. 128. D. Mineralogisch-Geologisches S. 138. E. Technisches S. 140. Neue Literatur 143 Fragekast«n IGO (Ü])ersetzitiigsreclit vor])ehalteii). ZEITSCHRIFT FÜR WISSENSCHAFTLICHE MIKROSKOPIE UND FÜR MIKROSKOPISCHE TECHNIK. Unter besonderer Mitwü-kung von Prof. Dr. Leop. Dippel Prof. Dr. Max Flesch in Darmstadt, in Bern, Prof. Dr. Arth. Wichmann in Utrecht herausgegeben von Dr WILH. JUL. BEHRENS in Göttingen. BAJSI) I (Jahrgang 1884). Mit 57 Holzschnitten. Brauuschweig, C. A. Schwetschke und Sohn (M. Bruhn). 1884. Alle Rechte vorbehalten. 1 11 li a 1 1 s V e r z e i oh ii i s s. I. Original-Abhandlungen. Seite Baumgarteii, P., Beiträge zur Darstellungsmethode der Tuberkelbacillen 51 • — • — , üeber Untersuchungsmethoden zur Unterscheidung von Lepra- und Tuberkelbacillen 367 — , — , üeber eine gute Färbungsmethode zur Untersuchung von Kern- theilungsfiguren 415 Behrens, W., Noch ein automatisches Mikrotom 244 — , — , Eine neue Construction des AisnE'schen Beleuchtungsapparates . 409 Blochmann. F., Ueber Einbettungsmethoden 218 Brass, A., Die Methoden bei der üntersuchimg thierischer Zellen . . 39 Cliiiisoli, V., Die Vergrösserung der dioptrischen Apparate. Uebersetzt und mit einem Nachtrage versehen von G. Fjsciikr 558 Dippel, L., IVIikrographische Mittheilungen 23 — , — , Die Anwendung des polarisii-ten Lichtes in der Pflanzenhistologie 210 — , — , Kalium-Quecksilberjodid als Quellungsmittel "...21 — , — , J. D. Möller's Probeobjecte in Phosphorlösung 413 — , — , Endomersionsobjective 485 Edinger, L., Notiz, betreifend die Behandlung von Präparaten des Cen- tralnervensystems, welche zur Projection mit dem Scioptikon dienen sollen 250 Elirenbauni, E., Ueber eine Methode zur Anfertigung von Dünnschliffen zoologischer Objecte 414 Flemniing, AV., Mittheiluü^ . zur Färbetechnik 349 Flesch, 3L, Ueber einen heizbaren, zu schnellem Wechsel der Temperatur geeigneten Objecttisch 33 • — , — , Welche Aussichten bietet die Einführung des elektrischen Lichtes in die Mikroskopie? 175 — , — , Notiz über die Anwendung des Farbstoffes des Rothkohls in der Histologie 253 IV Inhaltsverzeichniss. Seite Flesch, M., Ueber einige Versuche mit elektrischem Glüh- und Bogen- licht 561 — j — , Zu Weigert's Hämatoxylinfärbung des centralen Nervensystems . 564 Gierke, H., Färberei zu mikroskopischen Zwecken .... 62, 372, 497 Giltay, E., Theorie der Wirkung und des Gebrauches der Camera lucida 1 — j — j Ueber die Art der Veröifentlichung neuer Reactions- und Tinctions- methoden 101 — j . — ^ Ueber die Lage des Brennpimktes resp. der Brennlinie der Doppel- kugel oder des Hohlcylinders 479 Gottschau, M., Vorzüge und Nachtheile verschiedener Mikrotome und ihrer Hilfsapparate 327 Hansen, E. Clir., Ueber das Zählen mikroskopischer Gegenstände in der Botanik 191 Henking, H., Neue Construction des Objecthalters am Schlittenmikrotom, eine genaue Einstellung des Objectes bezweckend 491 van Heiirck, H.. Entgegnung auf den Artikel des Herrn Stein etc. . . 419 von Hölinel, F., Ueber eine Methode zur raschen Herstellimg von brauch- baren Schliffpräparaten von harten organisirten Objecten . . . 234 Holzner, G., Zur Geschichte der Tinctionen 254 Jung, H., Ueber ein neues Compressorium 248 Lindt, O., Ueber den mikrochemischen Nachweis von Brucin und Strychnin 237 Ludwig, F., Ueber die spectroskopische Untersuchung photogener Pilze 181 Jlartinotti, G., Sull'uso dell'allume di cromo nella tecnica microscopica 361 Moeller, J., Das neue Patentschlittenmikrotom von C. Reichert . . . 241 — , ■ — , Ein neues Präparirmikroskop 412 Scliaai'schmidt, J., Ueber die mikrochemische Reaction des Solanin . . 61 Stein, Th., Die Verwendung des elektrischen Glühlichtes zu mikroskopi- schen Untersuchungen und mikrophotographischon Darstellungen 161 Wichmann, A., Ueber eine Methode zur Isolirung von Mineralien behufs ihrer mikroskopischen Untersuchung 417 II. Referirte Literatur. Action of Tannin on Infiisoria 585 Adanikiewicz, A., Neue Rückenmarkstinctionen. I. Ergebnisse am nor- malen Gewebe 587 Andres, A., Giesbreclit, W., Mayer, P., Neuerungen in. der Schneide- technik 270 Bachmann, Otto, Unsere modernen Mikroskope und dei'en sämmtliche Hilfs- und Nebenapparate für wissenschaftliche Forschungen . . 106 Bausch and Lomf, Optica! Company safety nose-piece 431 Bayer], Bernliard, Die Entstehung rother Blutkörperchen im Knorpel am Ossificationsrande 289 Beck's condenser with two diaphragm-plates ... * 432 IiihaltsverzeicLiiiss. V Seite Becke, F., üeber die üntersclieidimg von Augit und Bronzit in Dünn- schliffen 139 Bergouziiii, SuU'hso del collodio e del fenolo nella tecuica microscopica 439 Berthold, G., Beiträge ziu' Morphologie vnid Physiologie der Meeresalgen 119 Bertliold, Victor, Ueber die mikroskopischen Merkmale der wichtigsten Pflanzenfasern 140 Bizzozero, G., Handbuch der klinischen Mikroskopie. Autorisirte deutsche Original-Ausgabe v. A. Lustig u. St. Berxheimer 423 — , — •, Manuel de microscopie clinique. Traduit de l'italien sur la 2"io edition par' Ch. Fjrket 423 — , — , et Torre, A., De l'origine des corpuscules sanguins rouges dans les differentes cla&ses des Yertebres 589 Blaue, H., Encore une methode pour conserver et colorer les Protozoaires 282 Bollinger, O., Zur Aetiologie der Tuberculose 455 Boiiuet, R., Kurzgefasste Anleitung zur mikroskopischen Untersuchung thierischer Gewebe für Anfänger in der histologischen Technik . 567 Born, G., Die Plattenmodellirmethode 278 Braun, 3Iax, Die thierischen Parasiten des Menschen nebst einer An- leitung zur praktischen Beschäftigung mit der Helmmthologie für Studirende und Aerzte 285 — , — , Zur Entwicklungsgeschichte des breiten Bandwurms. (Bothrioce- phalus latus Brehms) 446 Brefeld, Ose, Botanische Untersuchungen über Hefepilze. Fortsetzimg der Schimmelpilze Heft V. Die Brandpilze I (Ustilagineen) . . 128 — , — , Die künstliche Cultur parasitischer Pilze 295 Biisk, G., Paper cells 277 Calliauo, C, II regolatore del preparato al microscopio 433 — , — , Un nuovo regolatore del preparato al microscopio 433 Cattaueo, Fissazione, colorazione e conservazione degli infusorii . . . 441 Celli. A. e Guarnieri, G., Intorno alla profilassi della tuberculosi . . 590 Chadwick, H. C, On some experiments made with a view of killing hydroid Zoophytes and Polyzoa, with the tentacles extended . . 445 Cheshire, F., Cutting sections of probosces of honey-feeding Insects . . 287 Ciaccio, G. V., Sur la terminaison des fibres nerveuses motrices dans les musclcs stries de la Torpille 447 Cohen, E., Sammlung von Mikroi^hotograiihien zur Veranschaulichung der mikroskopischen Structur von Mineralien und Gesteinen, aufge- nommen von J. GiiiMM in Offenburg 138 Cole, A. C, Logwood staining 584 Cox, J. D., A new form of microscope-stand with concentric movements 427 Cybulsky, Ivan B., Das Nervensystem der Schnauze und Oberlippe von Ochsen 288 (Davis, G. E.), Focussing the Image in photomicrography 112 ( — , — ), Penetration in objectives 112 Decker, F., Ein neuer Schnittstrecker 438 Deecke, Mikrotome. Cutting and mounting sections through the entire human braiu 127 VI Inhaltsverzeicliniss. Seite Dimmock, (t.. Collecting together scales of Insects and other minute objects lipon one place on a slide 286 Dippel, L., Boeckek's, E., Neues grosses Mikrotom 267 — , — , Das grosse Miki-otora von Dr. C. Zeiss 268 — , — , Das Mikroskop und seine Anwendung. 2. Aufl. Till. I. Handbuch der allgemeinen Mikroskopie 103 Distortion produced by camera lucida's 261 Ellgelmann, Th. AV. , Das Mikrospectralpbotometer, ein Apparat zur quantitativen Mikrospectralanalyse 257 Feaunley's Modification of the Groves-William etber freezing microtome 434 Fischer. B. und Proskauer, B., Ueber die Desinfection mit Chlor und Brom 599 Flögel, J. H. L., Mein Dunkelkasten 266 — , — , Serienpräparate 274 Fraucotte, P., Description des differentes methodes employees pour ranger les coupes en series sur le port-objet 579 — , — , Description des differentes methodes employees pour ranger les coupes et les Diatomees en serie sur le port-objet 579 — , — , Microtomes et methodes d'inclusion 571 — , — , Nouveaux reactifs colorants 440 Franke], B., Ueber die Färbung des Koch'schen Bacillus und seine se- miotische Bedeutung für die Krankheiten der Respirationsorgane 455 Frenzel, J., Beitrag zur mikroskopischen Technik (Aufkleben der Schnitte) 113 — , — , Neuer Beitrag zur mikroskopischen Technik (Aufkleben der Schnitte) 113 Freud, S., A new histological method for the study of nerve tracts in the brain and spinal cord. Brain. 1884 588 Friedlaentler, C, Mikroskopische Technik zum Gebrauch bei medicini- schen und pathologisch-anatomischen Untersuchungen 423 Gärtner, G., Ueber den Nachweis des Wärmetonus der Blutgefässe mittels elektrischer Beleuchtung 263 Gage, S. H., Gataloguing. labelling and storing microscopical preparations 280 — , — , Observations on the fat cells and connective-tissue corpuScles of Necturus [Menobranchus] 288 — , — , and Smitli, Th., Serial microscopic sections 275 Gardiner, W., The determination of Tannin in vegetable cells . . . 464 Gerlaeh, L., Technische Notiz 436 Giacomini, Modificazione al processo classico di induramento dei centri nervosi 449 — , Nuovo microscopio per l'esame delle sezioni dell'entero encefalo umano adulto 427 Gibbes, H., Rapid method of demonstrating the tubercle Bacillus without the use of nitric acid 292 Gibelli, Giusseppe, Nuovi studi sulla malattia del Castagno detta dell' inchiostro 137 Giltay, E., Ueber das Verhalten von Hämatoxylin gegen Pflanzenmem- branen ' 135 Inhaltverzeichniss. YU Seite Graham, E., Ivory drop-black 277 Gram, C, Ueber die isolirte Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparateu 451 Green, S., On an easy method of preparing Insects for the microscope 287 Griesbacb, H., Die Azofarbstofie als Tinctionsmittel für menschlicbe und tbierische Gewebe 580 Grueuhagen, A., Die Nerven der Ciliarfortsätze des Kaninchens . . . 448 Geunow's Camera hicida _ 108 Haberlaudt, G., Ueber die physiologische Function des Centralstranges im Laubmoosstämmchen 133 H(anaiisek), Ed., Eine zweckmässige Mikroskopirlampe 266 Hartwich, C, Uebersicht der technisch und pharmaceutisch verwendeten Gallen 310 Haükk's photomicrographic apparatus 110 Haushof er, K., Beiträge zur mikroskopischen Analyse 465 Hesse, W., Ueber quantitative Bestimmung der in der Luft enthaltenen Mikroorganismen 597 van Heurck, H., La lumiere electrique appliquee aux recherches de la micrographie . , 264 Hillhouse, W., Einige Beobachtungen über den intercellularen Zusammen- hang von Protoplasten 300 Hitchcock, R., Instructions in dry-plate photography . 112 — , — , Photography and its value in microscopical investigations . . . 112 HoflFmaun, F. W., Einfacher Einbettungsapparat 435 Israel, O., Ueber die Cultivirbarkeit des Actinomyces 297 Johne, Zur mikroskopischen Technik 581 Johnson, G. J., Photomicrography 111 Jnng, H. , Neuer Zeichenapparat (Embryograph) für schwache Ver- grösserungen 261 Kent, AV. S., Potassic Jodide for preserving Infusoria 119 Kiaer,'C., Photomicrography by lamplight 113 Kingsley, J. S., Rapid microscopic mounting 577 Klebs, Georg, Organisation einiger Flagellatengruppen und ihre Bezie- hung zu Algen und Infusorien 120 Klein, C, Ueber das Krystallsystem des Leucit und den Einfluss der Wärme auf seine optischen Eigenschaften 611 Klein, AV., Beiträge zur Kenntniss der optischen Aenderungen in Kry- stallen unter dem Einflüsse der Erwärmung 611 Kny, L., Das Wachsthum des Thallus von Coleochaete scutata in seinen Beziehungen zur Schwerkraft und zum Lichte 607 — , — , Die Beziehungen des Lichtes zur Zelltheilung bei Saccharomyces cerevisiae 609 Koch, R., Die Aetiologie der Tuberculose 453 — , Gaffky und Löffler, Experimenteile Studien über die künstliche Abschwächimg der Milzbrandbacillen und Milzbrandinfection durch Fütterung 594 Koestler, Max, Ueber das Eingeweidenervensystem von Periplaneta Orientalis 287 Vin Inhaltsverzeicliniss. Seite Kossmaiin, R., Zur Mikrotomtechnik 269 Krause, F., üeber einen bei der acuten infectiösen Osteomyelitis des Menschen vorkommenden Mikrokokkus 460 Kriiess. Spectral-Spalt mit symmetrischer Bewegung der Schneiden . . 259 Lagerlielm , G. , Eine Präparii-methode für trockene mikroskopische Pflanzen 608 Latteiix, F., Manuel de technique microscopique ou guide pratique pour l'etude et le maniement du microscope 423 Lavdowsky, M., Mikroskopische Untersuchungen einiger Lebensvorgänge des Blutes 588 Leitgeb, H., Ueber Bau und Entwicklung der Sporenhäute und deren Verhalten bei der Keimung 608 — , — , Ueber Bau und Entwicklung einiger Sporen 132 Lelong's microtome 268 Levick, J., Exhibiting Volvox and Amoeba 444 Linck, (x., Ein neues Reagenz zur Unterscheidung von Calcit und Dolo- mit in Dünnschliffen 466 Lissauer, Ueber die Veränderungen der Ci.ARK'schen Säulen bei Tabes dorsualis; Zusatz zu dem Obigen von C. Weigert 290 Loeff 1er, F., Untersuchungen über die Bedeutung der Mikroorganismen für die Entstehung der Diphtherie beim Menschen, bei der Taube und beim Kalbe 601 Löwe, L., Beiträge zur Anatomie und Entwicklungsgeschichte des Nerven- systems der Säugethiere und des Menschen 585 Loliniann, P., Neue Beiträge zur Kenntniss des Eklogits vom mikro- skoi)isch-mineralogischen und archäologischen Standpunkte . . . 467 Lovett, E., On an improved method of preparing embryological and other delicate organisms for microscopical examination .... 577 Mari)niaun, G., Die Spaltpilze. Grundzüge der Spaltpilz- oder Bacterien- kunde 117 Martinotti, G., Sulla colorazione doppia coH'ematossilina e coU'eosina 582 MattheAVS, J., Device for facilitating the exchange of objectives . . . 431 3IcLarens, Microscope with rotating foot 429 Meriaii, A., Beobachtungen am Tridj-mit 468 Mej'er, Arthur, Das Chlorophyllkorn in chemischer, morphologi- scher und biologischer Beziehung. Ein Beitrag zur Kenntniss des Chlorophyllkornes der Angiospermen und seiner Metamor- phosen 302 — , — , Ueber die mikroskopische Untersuchung von Pflanzenpulvern, speciell über den Nachweis von Buchweizenmehl in Pfeflferpulver und über die Unterscheidung des Maismehles von dem Buch- weizenmelile 309 Miliarakis, Spyridion, Die Verkieselung lebender Elementarorgane bei den Pflanzen 306 Miteliell, C. L., Staining with haematoxylon 583 Molisoll, Hans, Ueber den mikrochemischen Nachweis von Nitraten und Nitriten in den Pflanzen mittels Diphenylamin oder Brucin . 134 Inhaltsverzeichniss. JX Seite Morris, Malcolm and Henderson. G. C, The cultivation and life- history of the ringworm fungus (Trichophyton tonsurans). . . . 295 Müller, N. J. C, Polarisationserscheinungen i^flanzlicher und künstlicher Colloidzellen 299 Nelson's microscope lamp 433 van Noorden, C, Die Entwicklung des Labyrinthes bei Knochenfischen 447 Olivier, L., Les procedes operatoires en histologie vegetable 137 Pfltzer, E., Ueber ein Härtung und Färbung vereinigendes Verfahren für die Untersuchung des plastischen Zellleibs 116 Plawt, H., Färbtmgsmethoden zum Nachweise der fäulnisserregenden und pathogenen Mikroorganismen 293 Pringslieim, N., üeber Cellulinkörner, eine Modification derCellulose in Körnerform 133 Prinz, W. et van Ermengeni, E., Recherches sur la structure de quelques Diatomees contenues dans le „Cementstein" du Jutland .... 609 Rabl-Rückhard, Das Grosshirn der Knochenfische und seine Anhangs- gebilde 447 Renaut, J., Sur le mode de preparation et l'emploi de l'eosine et de la glycerine hematoxyliques en histologie 582 (Retzius, G.), Employment of the freezing method in histology . . . 574 Rindfleisch, Ueber Tuberkelbacillen 293 Rosoll, A., Beiträge ziu- Histochemie der Pflanze 463 Rnssow, E., Ueber den Zusammenhang der Protoplasmakörper benach- barter Zellen 301 Schaarschmidt, Julius, Beiträge zur näheren Kenntniss der Theilung von Synedra Ulna (Nitzsch) Ehrenb 122 — , — , Einige Fälle der Communication von Protoplasten und des Vor- kommens intracellulären ProtoiDlasmas 301 — , — , Zellhautverdickungen und Cellulinkörner bei den Vaucherien und Charen 298 Schällibaum, H., Ueber ein Verfahren mikroskopische Schnitte auf dem Objectträger zu fixiren und daselbst zu färben 113 Schill, E. und Fischer, B,, Ueber die Desinfection des Auswurfs der Phthisiker 458 Schnetzler, J. B., Notiz über Tanninreaction bei Süsswasseralgen . . 298 Schröder, H., Eine neue Camera lucida . ... 259 — , — , On a new camera lucida . 259 — , — , Zeichenapparat 262 Schulgin, M., Zur Technik der Histologie 268 Schnitze, Fr. Eilh., Ein Schnittstrecker 278 Schwarz, Frank, Die Wurzelhaare der Pflanzen. Ein Beitrag zur Bio- logie dieser Organe 136 Scott, W. B., Imbedding in egg mass 434 (Smith, G.), Apparatus for photo-micrography HO Sollas, W. J., Improved method of using the freezing microtome . . . 574 Stearn, C. H., On the use of incandescence lamps as accessories to the microscope 264 X Inhaltsverzeicliniss. Seite Stein, Th., Verwendung des elektrischen Glühlichts zu physiologischen Untersuchungen 265 Stilliug, J., Untersuchungen über den Bau der nervösen Centralorgane 586 Stöhr, Ph., Ueber Mandeln und Balgdrüsen 582 Stowell, C. H., Studies in histology, II. Hardening, softening, dissociat- ing and normal fluids 575 Strasburger, Er., Zur Entwicklungsgeschichte der Sporangien von Trichia fallax . 462 Streng, A., Ueber eine Methode zur Isolirung der Mineralien eines Dünnschliffs behufs ihrer mikroskopisch-chemischen Untersuchung 308 — , — , Ueber eine neue mikroskopische Reaction auf Natrium .... 307 Swift's fine adjustment 480 Thoma, R., Sliding microtome [Imbedding methods] 272 Thoulet, J., Mesure par la reflexion totale des indices de refraction des mineraux' microscopiques 308 Threlfall, R., A new method of mounting sections 113 Tiemann, Untersuchung des Wassers auf entwicklungsfähige Mikro- organismen 141 Trntat, E. . Traite elementaire du microscope. Premiere partie: Le microscope et son emploi 107 Tschermak, G., Die mikroskopische Beschaffenheit der Metoriten er- läutert durch photographische Abbildungen 467 Tschircii, A., Untersuchungen über das Chlorophyll. III. Schluss. IV. Die Reindarstellung des Chlorophyllfarbstoflfes 603 Voit, C. V., Verwendung der elektrischen Beleuchtung bei anatomischen, mikroskopischen imd spectroskopischen Arbeiten 265 Waddington, Henry J., The action of tannin on the cilia of Infusoria, with remarks ontheuse of Solution ofsulphurous oxide in alcohol 283 AValmsley, Photomicrographic apparatus 111 Weigert, C, Ausführliche Beschreibung der in Nr. 4 erwähnten neuen Färbungsmethode für das OentralneiTensystem 290 — , — , Ueber eine neue Untersuchungsmethode des Centralnervensystems 123 ■ — , — , Ueber Schnellhärtung der nervösen Centralorgane zum Zweck der Säurefuchsinfärbung 127 Wenham's reflex illuminator 432 White, T. €., Photomicrography 111 Wille, N., Ueber die Zellkerne und die Poren der Wände bei den Phyko- chromaceen 123 Zeiss's mineralogical microscope 430 Graf Zeppelin, Max, Ueber den Bau und die Theilungs-Vorgänge des Ctenodrilus monostylos nov. spec 286 Verzeichiiiss der Herren Mitarbeiter an Band I. Dr. 0. Bachmann in Plauen i. V. Prof. Dr. med. P. Baumgarten in Königsberg i. P. Dr. W. J. Behrens in Göttingen. Prof. Dr. B. Benecke in Königsberg i. P. Dr. F. Blochmann in Heidelberg. Dr. A. Brass in Leipzig. Prof. Dr. L. Dippel in Darmstadt. Dr. med. L. Edinger in Frankfurt a. M. Dr. E. Ehrenbaum in Kiel. Prof. Dr. W. Flemming in Kiel. Prof. Dr. M. Flesch in Bern. Kaplan Georg Fischer in Tölz (Oberbayern). Dr. E. Giltay in Leiden. Prof. Dr. Hans Gierke in Breslau. Prosector Dr. M, Gottschau in Basel. Dr. H. Griesbach in Basel, Prof. Dr. E. Chr. Hansen in Kopenhagen. Dr. Heinricher in Graz. Dr. H. Henking in Göttingen. Prof. Dr. H. van Heurck in Antwerpen. Dr. F. von Hoehnel in Wien. Prof. Dr. Holzner in Freising (Oberbayern). H. Jung in Darmstadt. Dr. G. Kohl in Marburg. Dr. Otto Lindt in Aarau. Dr. F. Ludwig in Greiz. XII Verzeichniss der Herren Mitarbeiter an Band I. Prosector Dr. G. Martinotti in Turin. Dr. J. Moeller in Wien-Mariabrimn. Dr. J. Schaarschmidt in Klausenburg. Dr. Th. Steck in Bern. Hofrath Dr. Th. Stein in Frankfurt a. M. Dr. J. E. Weiss in München. Prof. Dr. A. Wichmann in Utrecht. Dr. 0. E. R. Zimmermann in Chemnitz i. S. Errata. p. 226 Z. 11 V. 0. lies Leberscheibe statt Lederscheibe. „ 279 „ 14 „ „ Masse (Paraffinmasse) „ Wasser. Vorbemerkung des Herausgebers. Das erste Heft der Zeitschrift für wissenschaftliche Mikro- skopie und für mikroskopische Technik wird hiermit dem mikro- skopirenden Publicum vorgelegt. Bislang existirte in Deutschland eine Zeit- schrift für wissenschaftliche Mikroskopie nicht; es erklärt sich dieses aus dem Umstände, dass der Deutsche mikroskopirt, um neue Thatsachen zu finden, während man in manchen anderen Ländern, wo zahlreiche mikroskopische Journale erscheinen, mikroskopirt um zu miki'oskopiren. Die Tendenz der Zeitschrift ist eine rein wissenschaftliche; sie wendet sich an den mikroskopirenden Fachmann, nicht an mikroskopirende Dilettanten. Sie wird, um dem Bedürfnisse jenes, sowie dem wissenschaft- licher Institute Rechnung zu tragen, mit Ernst an ihre Aufgabe hinantreten und jede dilettantenhafte Spielerei ausschliessen. Die Zeitschrift begreift das Gebiet der Mikroskopie im ganzen Um- fange, sie berücksichtigt also Instrumentenkunde, zoologische, medicinische, botanische und mineralogische Mikroskopie gleichmässig. Die Methoden dieser einzelnen Dißciplinen bieten so häufig gegenseitige Anknüpfungspunkte, er- gänzen einander so häufig und können so häufig mit geringen Modificationen in allen Gebieten angewandt werden, dass der Mikroskopiker von heute auch die Methoden der verwandten Disciplinen berücksichtigen m u s s. Konnte man bislang den Errungenschaften der Mikroskopie auf dem eigenen Gebiete nur schwierig folgen, so war es gar ein Ding der Unmöglichkeit für den Fach- wissenschaftler, auch die analogen Methoden der verwandten Disciplinen kennen -zu lernen und zu berücksichtigen, was doch im Interesse der eigenen Untersuchungen nur wünschenswerth gewesen wäre. — Diese Schwierigkeit soll* die neue Zeitschrift aus dem Wege räumen. Da sich dem Einzelnen die Beherrschung eines so immensen Gebietes entzieht, so stehen dem Herausgeber (dessen Specialgebiet die Botanik ist) mehrere bewährte Kräfte für die übrigen Specialgebiete mit Rath zur Seite, nämlich für die Instrumentenkunde HeiT Prof. Dr. Lkoi'old Djim-ei, in Darm- atadt, für die zoologisch-medicinische Mikroskopie Herr Prof. Dr. Max Flesch in Bern und für die mineralogische Mikroskopie Herr Prof. Dr. Auth. Wich- mann in Utrecht. Es muss ausdrücklich hinzugefügt werden, dass die Zeitschrift nur die Mikroskopie berücksichtigt, also ausser der Inetrumentenkunde die Methodik mikroskopischer Untersuchungen, Darstellungsmethoden mikroskopischer Ob- jecte, Darstellungsmethoden mikroskopischer Reagentien und Beschreibung ihrer Anwendung — dahingegen wird sie anatomische, histologische oder physiologische Arbeiten nicht publiciren. In erster Linie bringt sie Originalabhandlungen, welche in deut- scher, französischer oder englischer Sprache geschrieben sein können, sodann Besprechungen und Referate der wichtigeren einschlägigen Literatur, endlicli thnnlichst vollständige Titelübersicliten der gesammten ein- schlägigen neuen Literatur des In- und Auslandes. Bezüglich der Referate und Besprechungen mag ausdrücklich hervorgehoben werden, dass sie nur die wichtigeren literarischen Erscheinungen berücksichtigt, welche wirklich Neues bringen, dass sie hingegen Unwichtiges unberücksichtigt lässt, wie z. B. die vielen kleinen, von Dilettanten und für Dilettanten ge- schriebenen Noten in englischen oder amerikanischen mikroskopischen Jour- nalen. Eine Fachschrift wie die vorliegende kann nur in dem Falle prosperiren und nachwirkenden Nutzen stiften, wenn sie von den dazu berufenen Seiten allgemein unterstützt wird, wenn die mikroskopü-enden Fachleute nicht ver- gessen, dass dieselbe nur in ihrem eigensten Interesse existirt und daher allgemeine und thatkräftige Unterstützung verdient. Obzwar sich auf persönliche Einladung des Herausgebers bereits eine grosse Zahl Wissen- schaftler, zum Theil von sehr bedeutendem Namen, bereit erklärt haben, an der Zeitschrift ständig oder gelegentlich mitzuarbeiten, so richtet der Heraus- geber hierdurch nochmals die ergebenste Bitte an alle Diejenigen, welche auf dem Gebiete der wissenschaftlichen Mikroskopie thätig sind, ihn bei diesem Untei'nehmen zu unterstützen und ihm ihre diesbezügliche Absicht brieflich mitzu- theilen. Einem der nächsten Hefte soll ein ausführliches Verzeichniss der Herren Mitarbeiter beigegeben werden. Mit einer weiteren Bitte wendet sich der Unterzeichnete an die Herren Institutsvorsteher, nämlich mit der, dahin wirken zu wollen, dass die in ihrem Institute gefundenen neuen (brauchbaren) Methoden an dieser Stelle bekannt gegeben werden. Bislang wurden sie gewöhnlich beiläufig in grösseren Publica- tionen erwähnt, wo sie Derjenige meist nicht auffand, dem sie von grösstem Nutzen gewesen wären. Schliesslich werden die Herren Autoren gebeten, dem Herausgeber ein Exemplar ihrer Publicationen, welche sich zur Besprechung in diesen Blättern eignen, zuzusenden. Dieselben werden Eigenthum der betreffenden Herren ^ Referenten, und wäre es im Interesse der letzteren wünschenswerth, in grösse- ren Abhandlungen die hier zu berücksichtigenden Stellen oder Capitel kenntlich zu machen. Obgleich das vorliegende Unternehmen lange geplant und sorgfältig über- dacht, auch mündlich imd brieflich mit competenten Wissenschaftlern reiflich erwogen wiirde, so ist dennoch die Möglichkeit nicht ausgeschlossen, dass das- selbe verbesserimgsfähig wäre. Bezügliche Vorschläge nimmt der Herausgeber gern und dankbar entgegen. Die Zeitschrift erscheint in Vierteljahrsheften, zu je 8—10 Bogen ; zur Illustration werden schwarze und colorirte Lithographien, sowie Holzschnitte, je nach Wunsch der Herren Mitarbeiter, verwandt. Göttingen, 31. Dec. 1883. Dr. W. J. Behrens. Band I. Heft 1. Theorie der Wirknno' und des Gebrauches der Camera, lucida. Von Dr. E. Giltay, Assistent am Hotüiiisclicii Institut der Universität Leiden. Hierzu 10 Holzschnitte. Unter den sogenannten Hilfsapparaten, welche für den praktischen Mikroskopiker von der grössten Wichtigkeit sind, nimmt die Camera lucida eine hervorragende Stelle ein. Die Sicherheit und Schnellig- keit, womit mit ihrer Hilfe die Umrisse mikroskopischer Objecte auf Papier gebracht werden können, haben diesen Apparat daher auch bei sehr Vielen Eingang finden lassen. Doch giebt es, wie ich meine, noch eine verhältnissmässig grosse Anzahl von Personen, von denen sie nicht angewendet wird. Die dies bewirkenden Ursachen werden wohl ver- schiedene sein. Bei Einigen ist es wahrscheinlich der Mangel au Uebung, die für die Formen, in denen das Werkzeug bis dahin angefertigt wurde, besonders bei einigen Personen in nicht geringem Grade erfordert wurde ; weiter klebten auch den besten Formen UnvoUkommenheiten an, die in einzelnen Fällen den Gebrauch sehr schwierig, für Einige fast un- möglich machten. Der Zweck dieses Aufsatzes ist, zuerst im allgemeinen die Theorie dieser Instrumente zu verfolgen, eine Theorie, welche sogar in den besten und ausfülirlichsten Lehrbüchern etwas stiefmütterlich behandelt worden ist. Und doch kann man nur bei genauer Bekanntschaft mit der Theorie eines Werkzeuges dessen Wirkung für alle Fälle beherrschen. Aus diesen Beobachtungen werden sich dann von selbst ein Paar Verbesse- rungen ergeben, die, angebracht an jener Form des Instrumentes, welche Zeitsclir. f. wiss. Milirosltopie. I. 1. 1 E. Giltav: Camera lucida. I, 1. gewiss eiue der vollkommeusteu ist (die AßBE'sche Camera), die Camera lucida zu einem Werkzeuge machen werden, welches allen Anforderungen genügt, die mau ihm gerechter Weise zumuthen kann. Bevor wir jedoch insbesondere zu der Theorie der Camera lucida übergehen können, ist es uothwendig, einige allgemeine Gegenstände aus der Lichtlehre in Erinnerung zu bringen. Jeder Puukt eines selbstleuchteuden oder aus allen Richtungen Licht empfangenden und reHectireuden Objects sendet, wie bekannt, nach allen Richtungen Lichtstrahlen aus, die sich in gerader Linie fort- bewegen. Wenn die Lichtkegel, die von solch einem Objecte ausgehen, sich immer in demselben Medium fortbewegen, dann werden die Strahlen, welche von einem bestimmten Punkte ausgegangen sind , nicht mehr zur Vereinigung kommen '. Will man jedoch, dass die Lichtkegel, die von dem Object ausstrahlen, sich einzeln Avieder zu einem Punkte ver- einigen, will mau also, dass von dem leuchtenden Objecte ein (reelles) Bild entstehe , dann ist es nothwendig , die Lichtkegel in ein anders brechendes Medium übergehen zu lassen, welches von dem ersteren durch eine geeignete (z. B. kugelförmige) Fläche abgegrenzt wird. Zu prak- tischen Zwecken ist es fast immer leichter, die Lichtkegel nur eine kurze Strecke durch ein solches anders brechendes Medium streichen zu lassen ; dieses letztere Medium soll dann an mindestens einer Seite von einer Kugelfläche begrenzt sein ; die andere Fläche kann flach sein. Dergleichen Objecte, die bei optischen Instrumenten zum Entwerfen der Bilder verwendet werden, heisseu, wie bekannt, Linsen. p]ine Linse ist also ein durchsichtiges Medium, welches an einer Seite durch eine Planfläche begrenzt sein kann, au wenigstens einer Seite aber durch eine Kugelfläche begrenzt sein muss. Die Linie, welche den Krümmungs- mittelpuukt der Grenzflächen in sich aufnimmt, heisst „optische Achse". Für die Bilderzeugung können natürlich mehrere brechende Medien respective mehrere Linsen gebraucht werden , denn , wenn jede Liuse insbesondere ein Bild entwirft, so wird auch jede folgende in einer solchen Serie (System) ein neues Bild entwerfen von dem durch den vorangehenden Theil des Systems entstandenen Bilde ; die Wirkung der Linse selber beruht überhaupt auf nichts Anderem, als auf wiederholter Bilderzeugung durch die beiden Grenzflächen. Wenn mehrere Grenzflächen respective Linsen zur Bilderzeugung gebraucht werden , ist man gewohnt , zur Erhöhung der Reinheit der Bilder sämmtliche Krümmungscentren jener Grenzflächen auf eine gerade ') Abgesehen von einer Wiedervereinigung durch Reflexion. 1,1. E.Giltay: Camera lucida. 3 Linie fallen zu lassen; man nennt ein solches System ceutrirt. Diese Linie bildet dann die optische Achse des Systems. Das Haiiptgesetz bezüglich des Ganges der Lichtstrahlen durch derartige Systeme, kraft dessen eben die Bilderzeugung stattfindet und von welchem wir oben schon in einem besonderen Falle Gebrauch machten, lautet: Die Lichtstrahlen, welche bei ihrem Eintreten in das System auf einen Punkt gerichtet waren, werden auch beim Verlassen desselben auf einen Punkt gerichtet sein ^ Der Punkt, auf den die Strahlen bei ihrem Eintritte gerichtet sind, heisst „Leuchtpunkt", der Punkt, auf den sie bei ihrem Austreten ge- richtet sind, „Bildpunkt". Leucht- und Bildpunkt gehören gegenseitig zu einander (sind reciprok), d. h. wenn der Bildpunkt zum Leucht- punkte wüi'de, so würde auch der Leuchtpunkt zum Bildpuukte werden. Zwei derartige, als Leucht- und Bildpunkte zusammengehörige Punkte heissen „coujugirte Punkte". Denkt mau sich senkrecht zur optischen Achse vou einem Systeme in jedem zweier conjugirteu Punkte eine Fläche, dann kann man an- nehmen, dass jeder Leuchtpunkt in der einen Fläche in der anderen seinen Bildpunkt hat. Dergleichen Flächen heissen dann „conjugirte Flächen". Liegt also ein leuchtendes Object in einer von zwei conju- girteu Flächen, dann wird das Bild in die andere Fläche fallen. Wenn die Lichtstrahlen eines ein- oder austretenden Lichtkegels einander wirklich schneiden, dann heisst der Leucht- oder Bildpunkt reell; begegnen sie sich jedoch nicht in Wirklichkeit, sondern schneiden sich nur die verlängerten Strahlen, dann heisst der Bild- oder Leucht- punkt virtuell. Wir werden hier die Lehre der Bilderzeugung nicht im einzelneu verfolgen, nur müssen wir noch etwas genauer sehen, wie zu einem ge- gebenen Objecto das Bild construirt werden kann, wenn zwei conjugirte Flächen und die Lage der sogenannten Knotenpunkte bekannt sind. Sei OÄ (Figur 1) die optische Achse eines brechenden Systems, von dessen Zusammensetzung uns nichts weiter bekannt ist, weder die Zahl der brechenden Flächen , noch ihre gegenseitige Lage , noch auch ihre Krümmungsradien oder die Brechungsindices der das System bil- denden Media, Nur wollen wir, um unserer Vorstellung über die Lage ') Streng genommen gilt dies nur für diejenigen Lichtstrahlen, die einen so kleinen Winkel mit der optischen Achse bilden, dass man für ihren Sinus den Bogen an die Stelle setzen darf. 1* E. Giltay: Camera lucida. I. 1. des Systems zu Hilfe zu kommen, die erste (i?,) und die letzte (ßo) Grenzfläclie in einem Durclisclinitte zum Papier in Zeichnung bringen. Es bestehen nun bei jedem System brechender Flächen zwei Punkte, Knotenpunkte genannt , von denen wir voraussetzen, dass sie in diesem concreten Falle in l\ und Z;., liegen, und welche die folgende merkwür- dige Eigenschaft haben: Wenn ein Lichtstrahl (z. B. i?i Sj) vor seinem Eintritt in das brechende System auf den ersten Knotenpunkt gerichtet ist (die verlän- gerte J?| Sx geht durch Zi^i), dann wird dieser Strahl nach dem Austritt aus dem System auf den zweiten Knotenpunkt gerichtet sein (i?2 s^ ist auf 7^2 gerichtet) und parallel laufen mit der Richtung, in der er eingefallen ist (i^, li^ und JRo ky sind parallel). Dergleichen auf die Knotenpunkte gerichtete Strahlen heissen „Richtungsstrahlen". jR, 5, und Pi.2 Si sind also Bahnen , welche der Lichtstrahl selbst durchläuft, Siki und 80^2 sind im allgemeinen nur Hilfslinien, wodurch die dem eingefallenen Lichtstrahle R, 5, entsprechende Bahn gefunden wird. Wenn nicht mehr als die Lage der Knotenpunkte bekannt ist, kann der Weg, den der Strahl innerhalb des Systemes folgt, nicht angegeben werden. — Zum Ueberfluss sei noch erwähnt, dass die Brechungsindices der Medien ilf| und Mj hierbei ganz unbestimmt sind; sie brauchen also keineswegs gleich zu sein, J/, könnte z. B. Luft, Mo Wasser sein. Bei bekannter Lage der Knotenpunkte kann jetzt für jedes Paar congruenter Flächen zu jedem in einer derselben befindlichen leuchten- den Objecte das Bild construirt werden. Es seien z. B. C| und Co zwei congruente Flächen und i?j r, eine leuchtende Linie, deren Bild wir zu bestimmen wünschen. Da C, und Co conjugirte Flächen sind, so wissen wir schon, dass das Bild in der Fläche Co wird liegen müssen. Versuchen wir, auch den Bildpunkt zu finden, der einem der Punkte auf 72, r, und zwar jRi entspricht. Da Co an Cj conjugirt ist, wissen wir nun, dass kraft I, 1. E. Giltay: Camera lucida. 5 obigen Haiiptgesetzes die Strahlen, welche von JR, ausgehen und durch das System gebrochen werden, irgendwo in der Fläche Oj wieder in einem Punkte, dem Bildpunkte, zusammenkommen werden. Kennen wir also von einem jener Lichtstrahlen den Schnittpunkt mit der Fläche C.,, dann werden auch alle anderen von Bi herstammenden Lichtstrahlen einander in diesem Punkte begegnen müssen, wodurch also der Bildpunkt vollkommen bestimmt sein würde. Wie wir eben sahen , wird nun der gewünschte Schnittpunkt mit C2 von einem jener Strahlen gefundeu durch die beiden Richtungsstrahlen i?i ^, und J^2^'2- 7?| ist der eine Endpunkt der leuchtenden Linie, r^ der andere. In derselben Weise wie bei B^ wird weiter der Bildpuukt r., zu fi construirt, wodurch Lage und Grösse der Bilder ganz bestimmt sind. Jetzt, wo wir in der Hauptsache die aus der Lichtlehre zu be- nutzenden Hilfsmittel in Erinnerung gebracht haben, können wir zu unserer eigentlichen Aufgabe übergehen. Wir werden jedoch die zahl- reichen Formen, die man der Camera gegeben hat, nicht alle in Betracht ziehen, sondern uns darauf beschränken, die Wirkung bei einer der- selben an der Hand der Theorie zu verfolgen. Wünscht man, sich über die Wirkung anderer Formen zu orientiren, dann wird man das hier Behandelte ohne Mühe auch auf andere Apparate der gleichen Art über- tragen können, wenn man sich vorher über deren mechanische Einrich- tung durch eiues der ausführlicheren Lehrbücher über das Mikroskop unterrichtet hat. Als Beispiel wählen wir die Camera lucida nach Abbe '. Das Princip derselben ist sehr einfach. lieber dem Ocular des Mikroskops ist unter einem Winkel von 45" eine spiegelnde Fläche (S Figur 2) angebi'acht. Dieses Spiegelchen hat in seiner Mitte eine kleine Oeffnung von solcher Weite, dass Lichtstrahlen, die aus dem Mikroskop treten, durch dieselbe hindurchgehen, und dass also das mikroskopische Bild, welches durch seine Oeifnung wahrgenommen wird, ungehindert betrachtet werden kann. Die Weite der aus dem Mikroskop tretenden Lichtbündel ist auf verschiedenen Höhen über dem Ocular eine verschiedene. Legt man ein Stückchen sehr dünnes, durchscheinen- des Papier auf das Ocular eines eingestellten Mikroskopes, so sieht man auf dem Papier den Durchschnitt des austretenden Lichtes als einen hellen Kreis. Bewegt man das Papier in der Richtung der Achse des Tubus in die Höhe, so wird der Kreis immer kleiner und kleiner, erreicht ') Nr. 64 des Katalogs Nr. 26 der oi^tischen Werkstätte von Cakl Zeiss in Jena. E. G i 1 1 ay : Camera lucida. I, 1. 2. ein Minimum und wird dann wieder grösser. Dadurch, dass nun das Spiegelchen auf derartiger Höhe an- gebracht ist, dass die Oeffnung mit der Minimumweite des austreten- den Lichtbündels ' zusammenfällt, braucht die Oeffnung nicht gross zu sein, um bei den stärkeren Systemen all das ausstrahlende Licht durch- zulassen. Die Höhe des Spiegelchens würde bei verschiedenen Ocularen verschieden sein müssen. Bei der Camera lucida nach Abbe befindet sie sich in einer festen Hülse in einer Höhe berechnet für Ocular Nr. 2. Hierdurch hat man, wenn man will , den Nachtheil, dass nicht bei jedem Ocular die Camera mit gleicher Leichtigkeit zu gebrauchen ist, doch zugleich den viel grösseren Vortheil , dass , verwendet bei dem Ocular, wofür sie passt, das mikro- skopische Bild praktisch unverändert bleibt. Seitwärts von dem kleinen Spie- gelchen befindet sich bei S^ ein grösserer drehbarer Spiegel, welcher parallel mit dem kleinen Spiegelchen gestellt werden muss, und welcher dazu dient, die von der horizontalen Zeichenfläche kommenden Strahlen nach dem kleinen Spiegelchen hin- zulenken, welches diese dann nach dem Auge reflectirt. Betrachten wir nun den Strahlengang etwas näher. Sei MK der das optische System enthaltende Tubus. Wenn ver- ') Die Oeffiumg soll also in der Höhe des sogenannten „Augenpunktes" angeliracht sein und muss so viel als möglicli mit der „Austrittspupille" (Abbe) des ganzen Systemes zusammenfallen. I, 1. E Giltay: Camera liicida. 7 mittels dieses Systemes, mit dem Auge 0 ein kleines Object {^oiv) be- trachtet wird, dann wissen wir, dass sich das System in solcher Ent- fernung von dem Object befindet, dass die von dem Object herstammen- den , aus dem Ocular tretenden Lichtstrahlen auf eine Fläche gerichtet sind, welche sich in jener Distanz vor dem Auge befindet, wofür dieses augenblicklich accommodirt ist, in Figur 2 auf die Fläche v, ^v^ . Jeder der ursprünglich von vtv ausgehenden Lichtkegel ist also nach dem Austritt aus dem Ocular auf einen Punkt der Fläche Vi tVi gerichtet. Die Lichtkegel verhalten sich also eben als ob in Vy w^ ein umgekehrtes vergrössertes Bild von vtv sich befände, und wir können auch weiterhin Object und Mikroskop ausser Betracht lassen, denn das Mikroskop be- zweckt gleichsam, dass für das Object viv ein anderes (v, w^) an die Stelle tritt. Die von y, it\ herstammenden Lichtstrahlen treten also durch die OelFnung in dem Spiegelclien S in das Auge. Das brechende System des Auges besteht, wie man weiss, aus drei verschieden brechenden Medien, die durch Kugelflächen abgegrenzt sind: dem wässerigen Medium [w Figur 3), der Linsen- substanz (J) und dem Glaskörper {(j). An der Hinterseite wird der Glaskörper be- 3. grenzt durch die Netz- haut; cTie wässerige Flüssigkeit wird vor der Luft beschützt durch die durchsichtige Hornhaut. Die wässerige Flüssigkeit und der Glaskörper werden hauptsächlich von der Linse geschieden. Durch eine Vergleichung der Figuren 1 und 3 ersieht man nun leicht, dass, was von Figur 1 gesagt wurde, sofort auf Figur 3 Anwen- dung findet. Die Medien Tlfi und M, in Figur 1 spielen dieselbe Rolle wie die Luft vor dem Auge und wie der Glaskörper in Figur 3 , indem die Fläche 5, und B, in Figur 1 mit der Hornhaut (Ji) und der hin- teren Fläche der Linse in Figur 3 verglichen werden können. Da nun die Medien Luft, wässerige Flüssigkeit, Linsensubstanz, Glaskörper durch Kugelflächen begrenzt sind, so müssen wieder zwei Knotenpunkte vorhanden sein. Diese giebt es auch in Wirklichkeit, sie liegen dicht bei der Hinterfläche der Linse. Man wird hier vielleicht einwenden, dass das Auge als brechendes System unter verschiedenen Umständen nicht dasselbe bleibt, sondern dass ein in die Ferne sehendes Auge ein ganz anderer optischer Appa- ö E. Giltay: Camera lucida. I, 1. rat ist, als ein in die Nähe sehendes. Dies ist auch wirklich der Fall; in Folge der Accomodation ändern sich die Krümmungsflächen der Linse, die Netzhaut verharrt in fester Lage; die an der Netzhaut conjugirte Fläche verlegt sich jedoch durch die Accommodatiou von unendlicher Distanz bis in einer Weite von nur wenigen Centimetern vor dem Auge. Die Veränderung, welche die Lage der Knotenpunkte hierbei erleidet, ist jedoch so gering (noch nicht ein halbes Millimeter) , dass diese bei allen Constructionen vernachlässigt werden darf. Wir werden sogar noch eine weitere Vereinfachung einführen und die beiden Knotenpunkte als in 1: (Figur 2) zusammengefallen betrachten ; sie liegen auch factisch so dicht beisammen, dass unsere Figur 2 in dem Maassstabe, worin sie ge- zeichnet wurde, kaum mit einzelneu Knotenpunkten anzufertigen ge- wesen wäre. Kehren wir zurück zu dem Falle der Bilderzeugung, welchen zu verfolgen wir soeben beschäftigt waren. Wir setzten voraus, dass die optische Achse ' des Auges mit der des Mikroskopes zusammenfiel und nahmen weiter an, dass das Auge 0 das Object v w deutlich sieht , wo- bei das von dem Mikroskop entworfene virtuelle Bild in Vi «ü, zu liegen kommt. Das Auge ist nun für die Distanz JcCi accommodirt und sind also- Netzhaut und f, 'Wt conjugirte Flächen. Wie entsteht nun von t?, «<;, ein Bild in dem Auge? Da wir uns die Mühe gegeben haben, die Principien etwas ausführ- licher zu behandeln, so ist die Aufgabe selbst bald gelöst. Kraft des Ge- sagten haben wir nur von y, und w, aus Linien zu ziehen durch den aus der Zusammenschmelzung der beiden Knotenpunkte entstandenen Punkt ä;: wo diese Linien die Netzhaut schneiden (in v.y und «(;.,), befinden sich die Grenzpuukte des Bildes. Es stellt also v^ Co w-i das Bild vor. Indem nun das Auge durch die Oeffnung in der Spiegelfläche S das mikrosko- pische Bild gewahrt, kann es auch vermittels beider Spiegel von neben dem Mikroskop gelegenen Objecten ein Bild empfangen. Damit man völlig einsehe, wie dies geschieht, werden wir für einen Augenblick, da ja Object und Bild reciprok sind, von dem Netzhautbilde ausgehen. ') Eigentlicli fallen die Krümm ungsmittelpunkte der Grenzflächen im Auge nicht genau auf eine gerade Linie, wenigstens nicht bei den von Helmholtz gemessenen Augen. Auch fällt die Richtung, worin wir etwas scharf beobachten (Gesichtslinie Helmholtz), nicht genau zusammen mit der Linie, die im Auge wenigstens annähernd als optische Achse gelten kann. Diese Abweichungen, die ausserdem individuell sehr verschieden sind, können wir hier unbeachtet lassen. J. 1. E. Giltay: Camera lucida. 9 Wir setzen also voraus, dass v^ Co Wo leuclitend ist imd stellen uns die Frage: wo vermittels Reflexion an den beiden Spiegeln seitwärts des Mikroskops ein Bild entstehen würde? Wir gebrauchen also wieder die Richtungsstrahlen VolcOi, c-ilio w^Vo^- Weiter denken wir uns vorläufig, dass sich im Spiegel S keine Oeffnung befände. Die erwähnten Lichtstrahlen würden dann nach dem einfjicheu Gesetze der Reflexion gegen Planspiegel derart zurückge- worfen werden, dass sie auf einen Punkt Ä,'] gerichtet wären, welcher in gleicher Distanz hinter dem Spiegel liegt, als /;; vor demselben. Weil der Spiegel unter 45" gegen die optische Achse geneigt ist, wird der Strahl C-iko^ welcher in der Richtung der Achse einfällt, senkrecht dazu re- flectirt werden. Dieselben Betrachtungen und dieselbe Construction haben wir bei dem Spiegel S, nur zu wiederholen. Nach der Reflexion werden also die Strahlen 0O3, Oi O4, O0O5 auf einen Punkt /ja gerichtet sein, welcher eine solche Lage einnimmt , dass Ico b =^ kih und also h^ O3 = ki 0;^ . Wir setzten also voraus, dass das Auge accommodirt war für eine Distanz ^'c,. Das Bild der leuchtend gedachten Linie V2tü.> wird also seitlich vom Mikroskop entstehen in einer Entfernung = hCi- Es be- finde sich die Fläche v^'W ow ) .Vs) 91/ ' W^i Vs 5%' '" 4'/,' '■" 3'7,' ■ ''' 2'/,/ 2'/4' %■ I, 1. E. Giltay: Camera lucida. 21 erfordert, dass, wenn eine Linse zu schwach ist, man das fehlende mit ein wenig Accommodation ergänzen kann, ist sie jedoch zu stark positiv, dann ist in unserem Auge kein Corrigens mehr vorhanden. Man braucht übrigens beim Bestimmen des muthmaasslich erforderlichen Glases gar nicht zu ängstlich zu sein, denn die im Handel vorkommenden Brillen- gläser haben natürlich nur annähernd die Brennweite, die sie nach ihrer Nummer haben sollten. Schliesslich muss ja immer die Praxis ent- scheiden, ob das Glas seiner Bestimmung genügt. Nur sorge man im Voraus so viel als möglich dafür, dass man keine zu starke Linse be- kommt; eine kleine Accommodationsanspannuug schadet nicht, wird meistens leicht erhalten und kann sogar das Zeichnen erleichtern. Eine Bemerkung noch wird vielleicht nicht überflüssig sein. Der Mensch ist bekanntlich in hohem Grade ein Sklave der Gewohnheit. Wenn man anfängt zu mikroskopiren, hält es schwer, wegen der Um- kehrung des Bildes, und also auch der Bewegungen des Objectglases, dieses letztere leicht und sicher zu führen. Ist man jedoch einmal daran gewöhnt und arbeitet man gelegentlich mit einer Präparirlupe , welche das Bild gerade lässt, dann hat es seine Schwierigkeiten, die Bewe- gungen in dem Sinne auszuführen , wie wir es übrigens Hunderte von Malen tagtäglich thun. Es hatte sich die Umkehrung der Bewegungen mit dem Acte des Mikroskopirens associirt. — So geht es auch mit der Accommodation. Wenn man anfängt mit dem Mikroskop zu arbeiten, ermüdet es sehr, wahrscheinlich wohl zum grossen Theile in Folge einer - starken Anstrengung der Accommodation '. Bald jedoch lernt ') Da man weiss, dass Dasjenige, was man beobachtet, nahe bei uns ge- legen ist, scheint man, wenn man anfängt zu mikroskopiren, es nicht über sich zu vermögen, das Auge derart einzustellen, wie man beim Betrachten eines in der Feme gelegenen Objectes gewöhnt ist. Daher können auch Anfänger, ■wenn sie mit einem Auge mikroskopiren, das andere nicht geöffnet halten. In Folge der Accommodation wird dann in diesem Auge ein mehr oder weniger vollkommenes BUd vom Tisch auf der Retina entworfen; in der Vorstelhmg des Beobachters wird jenes Bild über das mikroskopische Bild superponirt und kann für die Wahrnehmung des letzteren sehr hinderlich sein. Lässt man jedoch seine Accommodation ruhen, dann ist das Bild des Tisches (und vom Fusse des Mikroskopes) so diffus, dass man nichts Bestimmtes davon sieht, dass man also leicht von ihm abstrahirt, und es also einfach nicht mehr sieht. Wenn Jemand, der ans Mikroskopiren gewöhnt ist und der seine Accom- modation dabei ausser Thätigkeit setzt, sich überzeugen will, wie lästig es ist, auch im Auge, das nicht in die Mikroskopröhre schaut, ein scharfes Bild zu empfangen, dann mache er folgendes einfaches Experiment. Er stelle sein Mikro- skop auf eine Fläche, die ein scharf sichtbares Büd liefern kann, z. B. auf 22 E. Giltay: Camera lucida. I, 1. man den Accommodationsmuskel während des Mikroskopirens zu ent- spannen. Ist man hiermit zu Stande gekommen, und will man mit der Camera zeichnen, dann kostet die mm etwa erforderliche Accommoda- tion wieder Mühe. Ist man endlich auch hieran gewöhnt und bringt man zuletzt an der Camera eine Einrichtung an, welche gestattet, aber zugleich erfordert, dass man seine Accommodation ruhen lässt, dann geschieht es, dass man auch hiermit sich anfangs wieder nicht vertragen kann. Man lernt dies Alles jedoch bald. Nur muss man nicht zu schnell ,das durch Berechnung gefundene Glas für zu stark halten, wie es in Folge verkehrter Bestimmung der grössten deutlichen Sehweite vor- kommen könnte. Doch giebt es Personen, die sich niemals daran ge- wöhnen können beim Mikroskopiren oder beim Zeichnen mittels der Camera ihre Accommodation ganz fallen zu lassen. Solchen wird es jedoch der Mühe wohl lohnen, einfach empirisch zu bestimmen, welches das meist convexe oder wenigst concave Glas ist, das sie bei ihrer Camera zum leichten Zeichnen nöthig haben '. Ich selbst (der ich im einen Bogen weisses, beschriebenes Papier ; sieht er nun z. B. mit dem rechten Auge bei Nicht-Accomodation in den Tubus, dann wird er, da das geöffnete linke Auge (das wii' emmetrop annehmen) nur ein diffuses Bild empfängt, doch gut beobachten können ; hält man jedoch vor das linke Auge eine Linse, deren Brennweite der Distanz dieses Auges zum Papiere gleich ist, dann wird auch das Bild im linken Auge scharf, und zugleich auch das mikroskopische Bild undeutlich. Mit Hinsicht hierauf ist es auch rationell, dass bei der Arbeit das JVIikro- skop auf eine dunkle Tischfläche gestellt sei, und dass nicht nur der Object- tisch, sondern der ganze Fuss des Mikroskopes (wie z. B. bei Stativ Nr. 1 von Zeiss) schwarz sei. ') Hypermetropen , die schon, um in die Ferne zu schauen, einen Theil ihrer Accommodation in Thätigkeit setzen müssen, können selten oder nie, besonders wenn ihre Anomalie etwas stark entwickelt ist, ihre ganze Accom- modation ruhen lassen, sogar dann nicht, wemi man ihnen Linsen vorhält, die ihnen nur bei Nicht-Accommodation das Sehen ermöglichen. Nur ein Theil ihrer Hypermetropie verräth sich auf diese Weise und ist, wie man sagt, „manifest". Den latenten Theil der Hj-permetropie kann man nur durch künstliche Läh- mung der Accommodation, z. B. durch Atropin, kennen lernen. Für die Camera wird man also bei Hypermetropie höchstens nur mit dem manifesten Theile Rechnimg zu halten haben. Dieser Theil ist jedoch durchaus nicht leicht zu bestimmen, imd zM-ar aus dem einfachen Grunde, weil eine bestimmte Person sich in dieser Hinsicht nicht immer gleich verhält und z. B. bei der Prüfung erst einen bestimmten Grad von manifester Hypermetropie würde voraussetzen lassen, nachher einen viel stärkeren und endlich wieder einen schwächeren: Hypermetrope wissen, so zu sagen, nicht wie es mit ihren Augen steht; wenn sie in einem Augenblicke gut sehen, ist dies im nächstfolgenden unter den J, 1. Dippel: Mikrographische Mttheilungen. 23 leicliten Grade hypermetrop bin) wurde dadurch zur Verwendung einer meine Accommodatiou ganz oder fast ganz ausser Wirkung setzenden Linse gebracht , dass ich vor einiger Zeit eine etwas ausführliche , sehr feine Zeichnung anzufertigen hatte, wobei es nothwendig war, die Blei- stiftspitze fortwährend ganz scharf zu sehen. Es strengte dies meine Augen so an, dass ich auf ein Mittel sann, mir die Sache zu erleichtern. Jetzt, wo ich es einmal gefunden und angewandt habe, giebt es mir so viel Erleichterung, dass ich es kaum mehr entbehren könnte. Möchten auch Andere, die an Augenbeschwerden beim Gebrauch ihrer Camera lucida leiden, aus obigen Betrachtungen Nutzen ziehen ! Mikrograpliisclie Mittheilungeu. Von Prof. Dr. Leopold Dippel in Darmstadt. Hierzu 1 Holzschnitt. T Ai,i •* -. -n, 1 Xf/ei« + e^^ — 2 6,62 cos i I. Ableitung der Formel a =^ — — ' — ' -. — \-^ 2 gl 62 sin i auf Seite 312 meines Handbuchs der allgemeinen Mikroskopie. Einige in Folge missverständlicher Auffassung gegen die Richtig- keit der obenstehenden Formel erhobene Bedenken veranlassen mich, deren Ableitung an dieser Stelle darzulegen, um dieselbe dem allge- meinen Verständnisse näher zu bringen. Wie in dem Texte gleich unterhalb der Formel bemerkt ist, handelt es sich dabei um die Bestimmung derjenigen numerischen Apertur, welche zur gleichzeitigen Sichtbarmachung zweier verschiedene lineare Abstände e, und €2 besitzender, sich unter einem Winkel i schneidender Streifensysteme (oder in solche geordneter Structurelemente) für den selben Umständen nicht mehr der Fall (vgl. Donders, die Anomalien der Re- fraction und Accommodation des Auges. Deutsche Originalausgabe p. 198 ff.). Doch ist auch bei Hypermetropen viel Erleichterung vom Gebrauch einer Linse bei der Camera zu erwarten. Wenn die Prüfung der Augen eine erste An- deutung über das erforderliche Glas gegeben hat, wird die Erfahrung zeigen, welche Linse auf die Dauer den meisten Nutzen gewährt. 24 Dippel: Mikrographische Mittheilungen. I, 1. Fall erforderlich wird, dass Cg grösser als Ci . cos i. Denn wäre dieses letztere Product gleich oder kleiner als e^ — womit selbstverständ- lich auch für das in Frage kommende, aus den Verbindungslinien der drei Maxima p ^ g^ , c[^ ^es Beugungsspectrums gebildete Dreieck £i cos i <; £3 sein müsste — so würde an Stelle des spitzen Winkels, w^elcher der Seite Sj des Dreiecks p g^ ^2 gegenüberliegt, ein rechter oder stumpfer Winkel treten und die kleinere numerische Apertur, welche für die Auflösung des engeren Streifensystemes mit dem Abstand s, der Einzelspectren genügt, auch für die Sichtbarmachung der beiden Streifen- systeme ausreichend erscheinen. Die gesuchte numerische Apertur (:= a) wird nun, wie aus der beistehenden Figur ersichtlich ist , dargestellt durch das lineare Maass des Radius der Aus- trittspupille (des Oeffnungsbildes), welche die drei Maxima p, q^, gg iß sich auf- nimmt, d. h. des Radius eines dem Drei- ecke /j g, g2 umschriebenen Kreises, und da der Winkel i dem halben zu der — die dritte Seite des Dreiecks bildenden — Sehne £;, gehörigen Centriwinkel 2 gleich ist, so ist nach einem bekannten trigonometrischen Satze : £q r = 2 sin i also, weil gemäss der sogenannten Cosinusregel : £3 = V^i ^ -f- £2 '^ — 2 £1 £2 . cos i r = l/£,2 _|. e^2 _ 2£, £2 cos l 2 sin i Nun ist einerseits der Radius der in der hinteren Brennebene des Objectivsystems gelegenen Austrittspupille nach den Sätzen auf Seite 199 des Handbuches bestimmt durch die Gleichung: r z= a . f (f'= Brenn- weite des Objectivs). Andrerseits lassen sich die Seiten £, und £0 X . f X f des Dreiecks pq^ q^ ausdrücken durch die Quotienten ' und — ~, da die in der Austrittspupille gemessene lineare Entfernung je zweier Maxima des Beugungsspectrums einer Streifung — und zwar völlig un- abhängig von der Richtung des Lichteiufalles — allgemein gegeben ist durch die Gleichung: Ij 1. Dippel: Mikrographische Mitthoihirgen. 25 t := f . n . sin u = f . a = f . — (Seite 111, 112 und 311). Wir erhalten demgemäss: r =z a . f =^ oder: / ^2" H 2 2 . '— . COS t 2 sin i fV e\ + e\ 2 COS- 1 2 sm * woraus nach einfach auszuführenden Reductionen: __ Xj/e-i -\- e\ — 2 ßi 62 cos i 2 Ci 62 sin i n. Bemerkungen über einige Probeobjeete aus der Gattung Grammatophora. Da in der neuesten Zeit noch mehrfach Verwechslungen zwischen Grammatophora marina W. Sm. und Grammatophora oceanica Ehrbg. (Gr. marina Ktzg.) vorgekommen sind und sich meine älteren, längst berichtigten ' Angaben über die Streifenzahl auf 10 \i wiederholt finden (in einer allerneuesten Compilation über das Mikroskop werden der „Grammatophora marina" wieder 25 Streifen auf 10 \i zugetheilt), sehe ich mich veranlasst, die oben genannten Probeobjeete, welche auf Seite 401 und 402 des Handbuchs der Mikroskopie kurz besprochen sind, et- was eingehender zu betrachten, indem ich für die ausführliche Bespre- chung auf die oben genannte (Berliner) Zeitschrift für Mikroskopie von 1880 verweise. Fassen wir zunächst die der Verwechslung anheim gefallene Art ins Auge, so wurde dieselbe meines Wissens nur von dem älteren BouRGOGNE in Paris seit Ende der fünfziger Jahre und später von dessen Sohne und Nachfolger bis zum Jahre 1880 (von da ab wollte Bour- GOGNE Sohn auf meine Veranlassung hin die Bezeichnung Gr. oceanica Ehrbg. einführen), dann von einer mir nicht mehr erinnerlichen engli- 1) Siehe Max Schultze's Archiv für mikroskopische Anatomie Bd. V p. 283 und Bd. IX p. 803, ferner Zeitschrift für Mikroskopie Bd. II, 1880, Heft 9. 26 Dippel: Mikrographische Mittheilungen. I, 1. sehen Firma (Topping?) mit dem Namen: „Grammatophora marina Ktzg." (bei BüuKGOGNE mit Hinzufügung des Fundortes Cherbourg) als Probeobject ausgegeben '. Ausserdem erscheint sie in dem von Möller in seinem Preisverzeichnisse von 1877 angebotenen EiNLENSTEiN'schen Typen als Grammatophora marina Lyngb. unter der No. 52 (Ins. Faeroe), wobei indessen zu bemerken ist, dass unter der gleichen Nummer merk- würdigerweise auch Präparate mit der gröber gezeichneten Gr. marina (beide Arten jedoch niemals gemischt in einem und demselben Präparate) enthalten sind. Diese Form nun stellt das von Schacht- und mir früher ' als Grammatophora marina beschriebene Probeobject mit 25 Streifen auf 0"01 mm (10 [jl) dar. Nach meinen eingehenden Untersuchungen müsste ich dasselbe als mit der Grammatophora ocenanica Ehrbg. (Grammato- phora marina Ktzg.) identisch, dagegen als von der Grammatophora marina, welche W. Smith zuerst in der Synopsis of British Diatomaceae beschrieben hat, verschieden erkennen. Ich habe daher diese Art, und zwar in der Form, wie sie in den oben genannten Präparaten auftritt *, um sie für den Mikroskopiker scharf abzugrenzen (und unbekümmert um eine anderseitig befürwortete Einordnung als Varietät der Grammato- phora marina) in meinen früheren Auseinandersetzungen und ebenso in dem Handbuch der allgemeinen Mikroskopie als Grammatophora oceanica Ehrbg. bezeichnet und hervorgehoben, dass ich diese Be- zeichnung an die Stelle der früheren : „Gr. marina" gesetzt wissen wolle. Die Anzahl der Streifen hatte ich früher etwas zu gross bestimmt und hat sich dieselbe nach meinen neuen mittels ausgezeichneter Objective vorgenommenen Zählungen, welche durch Bestimmungen aus Messung des Abstandes der Beugungsspectren controllirt wurden, auf 22 Streifen in 10 |jt festgestellt, welche Zahl für die längsten wie für die kürzesten Exemplare constant bleibt. Von den beiden nachfolgenden Arten lässt sich diese Grammatophora, deren Länge etwa 21 bis 110 (jl, deren Breite in der Frontalansicht 10 bis 15 [i beträgt, leicht durch die 5-5 bis 6*5 |i, betragende Entfernung der secundären Scheidewände (septae. 1) Eine vollständig gleiche Form habe ich in einer Anfsammlung aus dem chinesischen Meere vorgefunden. 2) Das Mikroskop p. 31. 3) Das Mikroskop und seine Anwendung 1. Auti. Bd. I p. 129, Fi^r 88 und 89. *) Es giebt von dieser Grammatophora allerdings auch Abänderungen aus anderen Fundorten mit feinerer Streifung, die dann -als Gr. oceanica Ehrbg. var. %• zu verzeichnen wären. I, 1. Dippel: Mikrograiihische Mittheilungen. 27 vittae) von den Sclialenrändern (auf der Gürtelansicbt) unterscheiden, da dieselbe zwischen derjenigen der beiden anderen in der Mitte steht. Das von den deutschen Präparatenhandlungen als Grammatophora marina (theilweise mit der Bezeichnung Ktzg.) seit Ende der sechziger Jahre ausgegebene Probeobject wurde, wie schon oben erwähnt, zuerst von W. Smith a. a. 0. und auch von Rabenhoest in seiner Flora Euro- paea Algarum unter diesem Namen beschrieben, und ich selbst habe in den oben genannten Arbeiten auf den Unterschied zwischen ihr und dem früher von mir als Gr. marina beschriebenen Probeobjecte aufmerk- sam gemacht, sodass wenn man heute, nach jenen Klarlegungen und dem Erscheinen des Handbuchs, von der von mir als Probeobject empfohlenen Gr. marina spricht, nur diese Form, die ich als Grammatophora marina W. Sm. bezeichne, im Auge haben darf. Als Probeobject unterscheidet sie sich wesentlich von der vorhergehenden Art dadurch, dass sie — und zwar sowohl an längeren wie kürzeren Exemplaren — nur 15 bis 16 Querstreifen auf 10 |x besitzt, also viel leichter zu lösen ist wie jene. In der Länge dilferirt sie nicht wesentlich von der Gr. oceanica, da diese zwischen 30 bis 140 [x schwankt; dagegen unterscheidet sie sich durch die Schalenbreite von 8*5 bis 16 [x, wie durch die Entfernung der se- cundären Scheidewände, welche 7*5 bis 8"75 [x beträgt, ganz entschieden, sodass beide Arten auch schon bei oberflächlichem Ansehen leicht aus- einandergehalten werden können (vergleiche auch die Figuren 235 und 237 des Handbuchs, in denen der erwähnte Unterschied noch deutlicher hervortreten würde, wenn die erstere nicht geringer vergrössert wäre, als die letztere, und bei dieser die Streifen wegen der Ausführung in Holzschnitt nicht etwas weiter abstehend gezeichnet wären, wie es der Natur nach sein müsste). Bezüglich der von Schacht ' und mir ^ als Probeobject für die stärksteu und schärfsten Objectivsysteme empfohlenen Grammatophora subtilissima (Baily?) hat lauge Zeit ein arges Missverständniss geherrscht, was wohl auch heute noch nicht gänzlich beseitigt ist. Es mögen daher auch dieser Art einige erläuternde Worte gewidmet werden, um etwaige Täuschungen bei deren Verwendung von Seiten der Mikroskopiker aus- zuschliessen. Aechte Präparate hat nur J. Bourgogne in den sechziger Jahren geliefert uud ausserdem befanden sich in den Händen einzelner Mikroskopiker von Baily herrührende Originalpräparate , von denen durch die Güte des Herrn Professor Schiff — früher in Florenz jetzt ») Das Mikroskop 2. Aufl. p. 30 Tfl. I Figur 13. '0 Das Mikroskop etc. 1. Aufl. Bd. I p. 129 Figur 90. 28 Dippel: Mikrographische Mittheilungen. I, l. in Genf — eines in meinen Besitz kam. Die Grammatophora dieses Präparates, wie derjenigen von J. Bouegogne zeigen 34 bis 36 Quer- streifen auf 10 [i und stehen somit an Schwierigkeit der Lösung etwa der echten „Frustalia saxonica" (Nav. rhomboides var. saxonica) aus der sächsischen Schweiz gleich. Dagegen wurde seit langen Jahren in Deutschland, wie in England und Frankreich unter dem Namen Gr. sub- tilissima ein Probeobject ausgegeben, welches keineswegs diesen Namen verdient. Verführt durch die Aehnlichkeit in der Gestalt, hat man nämlich die häufig vorkommende Grammatophora macilenta W. Sm., ohne weiter zuzusehen und sich um die feinere Structur zu kümmern, als Gr. subtilissima aufgelegt und vertrieben, und ich glaube w^ohl kaum fehlzugehen, wenn ich annehme, dass sich dieses Object in den Händen der meisten Mikroskopiker befindet, die das andere zu besitzen glauben. Als Probeobjecte stehen nun aber die beiden in Frage kommenden Arten weit von einander ab, da Gr. macilenta W. Sm. nur 25 bis 26 und in den schlankeren Exemplaren 26 bis 28 Querstreifen auf 10 |x enthält. Allerdings tritt gerade bei dieser Art ein Umstand hervor, der sich bei den übrigen Arten der Gattung wenigstens nicht in dem Grade findet. Es giebt nämlich Aufsammlungeu, in denen die Zeichnung auffallend minder scharf hervortritt als in anderen, sodass sich die Schwierigkeit in Bezug auf die Sichtbarmachung der sich an Zahl etwa gleich bleiben- den Querstreifen bei dem einen Exemplare etwas bedeutender heraus- stellt als bei dem anderen. Die ächte Gr. subtilissima ist selten, und unter einer sehr grossen Anzahl von Grammatophora-Aufsammlungen aus verschiedenen Meeren habe ich sie nur in denen, welche Möller als Diatomaceen von Hon- duras ' ausgiebt, sowie in einer mir von Herrn Hüttendirector Janisch mitgetheilten Aufsammlung, ebenfalls von Honduras, gefunden. Ob Möller in neuester Zeit zu seinem Probeobjecte: Gr. subti- lissima auf meine ihm gemachte Mittheilung hin Material obiger Art ver- wendet, also die ächte Form ausgiebt, ist mir nicht bekannt, da seit mehreren Monaten an ihn bestellte in Phosphorlösung eingelegte Probe- objecte zur Zeit noch nicht geliefert sind 2. 0 No. 654 des Katalogs von 1877. No. 838 des neuesten Katalogs 1883. ^) Die Figur 238 in dem Handbuche ist nach einem Exemplare des Original- präparates von Baii.t entworfen. I, 1. Dipijel: Mikrographische Mittheilungeu. 29 III. Die Correctionsfassung bei Objeetivsystemen für homogene Immersion. Meine Auseinandersetzung über diesen Gegenstand in der Zeitschrift für Instrumeutenkuude * hat in der 1882er Octobersitzung der Roj'al Microscopical Society * eine Besprechung erfahren, Avelche mich veran- lasst, zur Auflilärung der deutschen Leser des Londoner Journals hier mit ein paar Worten auf die angeregte Frage zurückzukommen. Wie aus dem Bericht über die angezogene Sitzung hervorgeht, wurden meine auf theoretische Erwägungen gegründeten Darlegungen von den an der Besprechung sich betheiligenden Mitgliedern der Royal Microscopical Society theilweise gebilligt, theilweise verworfen. Wer die Verhältnisse kennt, sieht sofort, dass Uebereinstimmung mit mir nur bei allen denen vorhanden ist, die mit der Theorie des Mikroskops und der mikroskopischen Abbildung sowie mit dem wissenschaftlichen Ge- brauche unseres Instrumentes vertraut sind, dass dagegen der Wider- spruch von einer Seite ausgeht, der ich in meinem Aufsatze die Correc- tionsfassung ausdrücklich zugestanden hatte. Wenn der bekannte Optiker J. Beck meint, meine theoretische Erör- terungen seien eine Schutzrede dafür, dass man lieber mit einer schlechten Zeichnung des Bildes sich zufrieden geben, als sich die Mühe nehmen solle, durch Verwendung der Correctionsschraube eine vollkommene Definition herbeizuführen, so documentirt diese Aeusserung höchstens, dass der ganz tüchtige und im Betrachten von Probeobjecten geübte Optiker ^-on dem, was wir unter Forschung verstehen und von den Ob- jecten, wie sie dem wissenschaftlichen Mikroskopiker vorliegen, sowie von dem Ziele, welches meine Betrachtungen im Auge haben, keinen Begriff hat, und ich brauche in einer deutschen Zeitschrift wohl kaum ein Wort darüber zu verlieren, dass es sich von meiner Seite nicht um die Vermeidung eines für die Sicherheit der Beobachtungsresultate uoth- wendigen Aufwandes von Zeit und Mühe und ein Begnügen mit unvoll- kommener Bildzeichnung (Definition) handeln kann. Die Auslassungen von J. Mayall verlangen schon eher eine nähere Betrachtung, um sich davon zu überzeugen, dass sie das nicht beweisen, was sie beweisen sollen. Die Erfahrung in Bezug auf die Zeichnung der Schüppchen von Podura besagt weiter nichts, als das, was ich in meinem Aufsatze als 0 Jahrgang II, 1882, Heft 8. 2) cfr. Journal of the Royal Microsc. Soc. London, Scr. II vol. II, 1882 pt. 6 p. 906. 30 Dippel: Mikrographische Mittbeilungen. I. 1. einen tlieoretiscli zuzugebenden Vortlieil bezeichnete, indem ich sagte, dass die Correctionsfassnug im Stande sei, diejenigen (verhältniss- mässig ziemlich beträchtlichen) Aberrationen zu beseitigen, welche durch trocken eingelegte, von dem Deckglas durch eine dünne Luftschichte getrennte Objecte eingeführt werden. Bei derartigen Objecten kann der Unterschied in der Schärfe und deutlichen Sicht- barkeit anderen am Deckglase haftenden Objecten von derselben Structur gegenüber ein ziemlich bedeutender werden, da im einen Falle (bei homogener Immersion mit 1*25 numerischer Apertur, wie sie die ersten ZEiss'schen Systeme besassen) eine numerische Apertur von 1*25, im anderen von nur 1*12 wirksam wird und das mikroskopisclie Bild — alle anderen Umstände als gleich vorausgesetzt — um so schärfer ge- zeichnet erscheint, je mehr gebeugtes Licht von dem Objectivsystem aufgenommen wird (man betrachte z. B. nur einmal die Zeichnung von Pleurosigma angulatum bei centraler Beleuchtung mittels dreier Objectiv- systeme von l'O, 1*10 und 1*25 numerischer Apertur und man wird den Unterschied leicht herausfinden. Ganz gleich wie bei Podura verhält sich die Sache wohl in Bezug auf die im weitereu Verlaufe seiner Besprechung erwähnten Objecte, die nicht genannt sind, und in Bezug auf die wir daher nicht einmal im Stande sind zu beurtheilen, was etwa subjectivera Ermessen zuzuschreiben ist, während andei'erseits, da diese Objecte in zwei Klassen zerfallen, von denen die eine von Objectiven mit und ohne Correctionsfassung gleich gut definirt werden , die andere dagegen nicht, leicht auf verschiedene Art ihres Einschlusses geschlossen Averden kann. Dass die einen von irgend welchen Einschlussmitteln umhüllt sind, während es sich bei den anderen wieder nur um trocken eingelegte Objecte und zwar mit ..Obertlächen- zeichnuug" („superficial structure") handelt, dürfte wohl zweifellos sein und geht auch aus meinen weiter unten mitgetheilten Untersuchungsresul- taten hervor. Nun richtet sich aber die Adresse meiner Betrachtungen in der Zeitschrift für Instrumentenkunde (wie auch p. 244 Bd. XII des Bota- nischen Centralblattes von 1882) durchaus nicht an Solche, welche das Mikroskop nur als Mittel zur Betrachtung von Probeobjecten und ähn- lichen Dingen benutzen, sondern an die wissenschaftlichen Forscher, und für diese erscheinen die hier erörterten Thatsachen, welche, wie schon oben hervorgehoben wurde, nichts weiter besagen, als das, was ich in Bezug auf trocken eingelegte Objecte u. s. w. ausdrücklich zuge- geben hatte (also nicht einmal einen Gegensatz zu meinen Anschauungen bilden), von keinem Betracht, da Objecte, zu deren wissenschaftlichen I, 1. Dippel: MikrograpMsche Mittheilungeu. 31 Beobachtung die homogene Immersion herangezogen wird, wohl stets von Wasser oder einer etwas stärker brechenden Flüssigkeit umhüllt erscheinen. Wenn weiter Herr J. Mayall der Royal Microscopical Society die interessante Mittheihing machen zu müssen glaubt, dass Professor Abbe in seiner früheren Ueberzeuguug gegen die Verbindung des Correctious- systems mit Objectiven für homogene Immersion schwankend geworden sei, und dass sich derselbe gegen meine geäusserten Ansichten mindestens theilweise gegnerisch verhalte, so verdient diese Mittheilung doch eine kleine Richtigstellung. Ich selbst habe in meiner Arbeit im Eingang gesagt, dass diese im wesentlichen sich an die mir brieflich mitge- theilten Betrachtungen Professor Abbe's anlehnt und im Texte mehrfach auf die Uebereinstimmung zwischen Professor Abbe's und meiner An- sicht hingewiesen. Welche die Ansichten Professor Abbe's in Be- zug auf die Beigabe der Correctionsfassung für homogene Immersion sind, das ergeben, neben der schon auf p. 274 der Zeitschrift für In- strumentenkunde angeführten, folgende Stellen aus unserer kurz vor dem Erscheinen meines Aufsatzes (Juli 1882) geführten Correspondenz. Professor Abbe sagt wörtlich : ' „Bei alledem bleibe ich nicht nur bei meiner früheren Ansicht über die Unzweckmässigkeit einer Correctionsfassung — ich bin im Gegentheil mehr und mehr zu der üeberzeugung gekommen, dass die Beseitigung der Correction geradezu der praktisch wichtigste Vortheil ist , der für das wissenschaftliche Arbeiten durch die homogene Immersion gew^onnen ist". und ferner: „Die Correctionsfassung ist ein sehr schönes Ding, wofern man sie nicht benützt, sondern immer auf demselben Theilstrich stehen lässt, am besten festgeschraubt". Kann man ein entschiedeneres Verdammungsurtheil der Correction für homogene Immersion finden, als dieses — natürlich in Rücksicht auf den wissenschaftlichen Gebrauch der betreffenden Objective ■ — von dem allercompetentesten Richter gefällte? Die Fertigung der Corrections- fassung ist denn auch in dem Zsiss'schen Institute, wie sich Professor Abbe ausdrückt, nur nachgegeben, d.h. sie wird auf besonderen Wunsch geliefert. Um praktisch festzustellen, wieweit die Bildzeichnung (Definition) der Objective für homogene Immersion durch die von mehreren engli- 1) Ich bin ausdrücklicli ermächtigt von Professor Abbk's betreffenden Aeusserungen jeden beliebigen Gebrauch zu machen. 32 Dippel: Mikrographische Mittheilungen. I, 1. sehen und anderen Beobachtern hervorgehobenen Verhältnisse berührt wird, habe ich eine Reihe von vergleichenden Untersuchungen angestellt und gebe in Nachfolgendem kurz deren Resultate. An der Silberplatte lassen sich die Aberrationen, welche bei ziem- lich stark von dem Mittel (für die Vig"' und Via'" Zeiss und Seibert 0*15 mm) abweichenden Deckglasdicken, die Differenzen betragen 0*05 mm, durch ein auf derartige Prüfungen eingeübtes Auge allerdings noch erkennen, das Verhalten lässt aber schon darauf schliessen, dass diese Abweichungen für Objecte anderer Art kaum in Betracht kommen können. Nahm ich in Monobrom-Naphthalin liegende Schalen vonPleurosigma angulatmn, welche unter Deckgläsern von O'l bis 0*18 mm liegen, so war ein Unterschied in der Schärfe der Zeichnung nicht zu erkennen, mochte ich als Immersionsflüssigkeit das von Schimmel & Co. in Leipzig bezogene Cedernholzöl , die neueste ZEiss'sche Mischung von verdicktem Cedern- holzöl mit Ricinusöl (für mein Objectiv mit n = 1'508) oder eine solche von gleichen Theilen Cedernholzöl und Ricinusöl (Seibeet) verwenden. Aehnlich verhielten sich in das gleiche Mittel eingeschlossene und unter verschieden dicken Deckgläsern liegende Schalen der grossen Navi- cvxla rhomboides der Diatomeenerde von Cherryfield, deren Zeichnung in allen Fällen vollkommen klar und scharf gezeichnet erschien. Ja selbst die Zeichnung der Surirella gemma, die bekanntlich schwer zu lösen ist, blieb sich unter ähnlichen Umständen, man kann sagen vollständig gleich. Trocken eingelegte Objecte derselben Diatomeen Hessen, sobald an dem Deckglase festklebende Exemplare beobachtet wurden, ebenfalls keine merkbaren Unterschiede erkennen und ebenso verhielten sich histologische Objecte; Kernzeichnungen, quergestreifte Muskelfasern? Bacterien u. dgl. Es liegt also für den wissenschaftlichen Mikroskopiker durchaus kein Grund vor, von der festen Fassung abzugehen und sich durch die Auslassungen Derjenigen beirren zu lassen, welche das Mikroskop ledig- lich zur Demonstration der Zeichnungen auf Diatomeeuschalen benutzen. Zum Schlüsse will ich nicht verfehlen noch besonders darauf auf- merksam zu machen, dass man beim Gebrauch der von mir neben der ABBE'schen Probeplatte, welche ich für das einzig zuverlässige Probe- object ansehe, zur praktischen Prüfung des Zeichnuugsvermögens em- pfohlene Probeobjecte, wie die Schüppchen von Podura plumbea und Pieris brassicae, die nöthige Vorsicht beobachten muss. Man sehe nament- lich darauf, dass man bei diesen stets auf das Deckglas aufzubringenden Objecten solche Exemplare, welche fest an der Deckglasoberfläche I, 1. Flesch: Ueber einen heizbaren Objecttiscli. 33 kleben und die Zeichnung vollkommen scharf zeigen , auswähle , sich diese dann in irgend einer Weise bezeichne und bei Vergleichen immer wieder nur diese verwende. Ich selbst benutze stets eine und dieselbe ausgewählte, mir ihrer Lage nach genau bekannte Schuppe der sich — soweit es erforderlich ist — durch ihre Deckglasdicke unterschei- denden Präparate. Das Herausfinden derartiger Schuppen fällt nicht schwer, wenn man mittels eines für die verwendete Deckglasdicke ge- nau corrigirten Objectives die Präparate sorgfaltig durchmustert und die von den verschiedenen Schüppchen gelieferten Bilder vergleicht. lieber einen heizbaren^ zu schnellem Weclisel der Temperatur g^eeig'neten Objecttiscli. Von Dr. Max Flesch in Bern. Hierzu 1 Holzschnitt. Die hier zu beschreibende Vorrichtung ist bis jetzt nur im Modell- Exemplar erprobt und erscheint noch mancher Verbesserung fähig; gleichwohl dürfte schon jetzt eine Beschreibung derselben statthaft sein, weil, soweit mir bekannt ist, seit dem Umschwünge, welchen die Con- struction des Mikroskopes durch die Anwendung des ABBE'schen Be- leuchtungsapparates erfahren hat, noch keiner der zur Erwärmung oder Abkühlung des Präparates dienenden Apparate so gestaltet worden ist, dass er einerseits die volle Ausnutzung der neueren optischen Hilfs- mittel in Betracht zieht, anderseits in Bezug auf die Regulirung der Temperatur allen Ansprüchen genügt. Allerdings wird jeder „Heiztisch" dem von dem einzelnen Unter- sucher benutzten Stativ speciell angepasst werden müssen; es wird ferner derselbe je nach besonderen Untersuchuugszwecken zu modificiren sein; auch der unsrige, wenn auch bei der Probe für einen speciellen Zweck ausreichend befunden, wird noch Abänderungen unterzogen, über deren Erfolg später berichtet werden soll. Als ich zur Anschaffung eines heizbaren Objecttisches genöthigt war, hatte ich eigene Erfahrungen nur mit dem ScHULTZE'schen gesammelt. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 1. 3 34 Fies eil : Ueber einen heizbaren Objecttiscb. I, 1. Derselbe benutzt bekanntlich als Wärmequelle Spiritusflammen, mittels deren die beiden Arme einer hufeisenförmigen Metallplatte erhitzt wer- den ; die Fortleitung der Wärme in dem Metall ermöglicht eine Tem- peratur-Erhöhung des auf dem Mittelstücke des Hufeisens aufliegenden Präparates. Der Apparat wird auf den gewöhnlichen Objecttisch auf- gesetzt, er verzichtet also theilweise auf die Vorzüge der Cylinderblen- dung, des — zur Zeit der Construction noch nicht bekannten — Abbe- schen Apparates u. s. f. Die Heizmethode ist eine ganz unzureichende ; die Gefahr der Ueberhitzung der Präparate eine sehr grosse; Unter- suchungen über das Verhalten von Geweben bei Abkühlung auf niedere Temperaturen sind überhaupt nicht ermöglicht. Andere Constructionen ' hatte ich nicht benutzen können. Von den mir in der Beschreibung bekannt gewordenen ist bei der von Ranvier angegebenen auf die zweckmässige Einfügung der Blendung geeignete Fürsorge getroffen; die Erwärmung erfolgt durch circulirendes warmes Wasser; es ist specielle Rücksicht darauf genommen, dass auch das Objectiv mit er- wärmt wird, somit der Wärmeverlust durch Ableitung ein möglichst ge- ringer wird. Derselbe dürfte durch einfache Modificationen die Anwen- dung des Beleuchtungsapparates gestatten und käme so in mehrfacher Hin- sicht den Ansprüchen, die ich stellen zu müssen glaubte, am nächsten. Gelegentlich der Abfassung des Referates über Untersuchungsmethoden für den Jahresbericht der Zoologischen Station zu Neapel sind mir noch zwei Vorschläge bekannt geworden, die jeder in seiner Art wesentliche Vortheile zu bieten scheinen. Der eine von Hartley ^ ging dahin, ein U-förmig gebogenes Glasrohr auf dem gewöhnlichen Objecttisch so zu fixiren, dass das Präparat auf dasselbe, mit der Längsrichtung des Objectträgers entsprechend den Schenkeln des U aufgelegt wird. Er- wärmt wird dasselbe durch einen das Glasrohr durchfliessenden Strom heissen Wassers; das eine Ende des Rohres ist zu diesem Zwecke mit einem Gefäss, in welchem Wasser siedend erhalten wird, durch einen Gummischlauch und Heber verbunden; das andere Ende ist in eine Spitze ausgezogen, durch welche das Wasser tropfenweise abfliesst. Die Schnelligkeit des Abflusses wird regulirt durch höhere oder tiefere Stellung des Heiz-Gefässes ; je nach derselben wird sich das Wasser auf dem Wege durch den Gummischlauch mehi' oder weniger schnell abkühlen. Es ist klar, dass man statt heissen kaltes Wasser durch 0 Vgl. DippEL, Das Mikroskop Bd. I p. 653. ^) Hartley, A. H., A Warmstage for the Microscope. Amer. Monthly Microsc. Joiu:n. Bd. I, p. 181—182 (Zool. Jabresber. f. d. J. 1880, Bd. I, p. 24). I, 1. Fl e seh: Ueber einen heizbaren Objecttiscli. 35 das Rohr leiten kann, dass man ferner leicht Vorsorge tragen kann, um schnell abwechselnd niedere oder hohe Temperatur zu erzeugen. Dagegen ist eine genaue Bestimmung der Temperatur nicht möglich und können die optischen Hilfsapparate nicht benutzt werden. Weit vollkommener in letzterer Hinsicht ist die Vorrichtung von Symons '. Dieselbe be- steht — ich benutze hier das Referat des Zool. Jahresb. — „aus einer mit Wasser gefüllten Metallkapsel, in deren Wände, entsprechend der Beleuchtungsöifnung im Objecttisch, dünne (Deck-) Glasplättchen ein- gefügt sind. Auf das obere derselben wird das zu untersuchende Ob- ject direct aufgelegt, sodass die Erwärmung eine möglichst directe ist. Eine spiralig gewundene Röhre ist in die Kapsel der Art eingelegt, dass seitliche, dem Zu- und Abflüsse dienende Verlängerungen des Rohres aus der Wand der Kapsel hervorragen. Ein weiterer Ansatz dient der Einfügung des Thermometers. Zur Heizung dient ein Strom von Wasserdampf oder besser von heissem Wasser. Um schnelle Tem- peraturwechsel bewirken zu können, ist das Zuflussrohr in zwei Schenkel getheilt, deren jeder einen Hahn trägt, man kann durch Umstellen der Hähne sehr schnell heisses oder kaltes Wasser, eventuell Kältemischungen auf einander folgen lassen". Die letztere Vorrichtung erscheint, so weit man auf Grund der Beschreibung urtheilen kann, sehr zweckmässig ; es unterliegt keinem Zweifel, dass deren Anpassung an das Stativ in einer Weise erfolgen könnte, die allen optischen Ansprüchen freien Spielraum gewährt. Es waren zwei Bedenken, die mich hinderten, dieselbe ohne Weiteres zu adoptiren ; einmal fürchtete ich, dass, weil ja jeder Tempe- raturwechsel zunächst dem Wasser, welches das Heizrohr umspült, und erst indirect den Wänden des Kastens mitgetheilt wird, derselbe nicht so schnell, als es für meine speciellen Zwecke erwünscht war, auf das Präparat wirkte ; dann aber fürchtete ich die Zerbrechlichkeit der als Unterlage für das Präparat dienenden Deckglasplättchen und namentlich ein Springen derselben bei rascher Abkühlung. Die Anforderungen, welche bei der Anfertigung des heizbaren Ob- jecttisches zu erfüllen sind, ergeben sich aus dem Vorstehenden. Es soll die Heizeinrichtung im Stande sein, auf längere Zeit eine constante Wärmequelle zu bilden; es soll zugleich ein rascher Temperaturwechsel möglich sein. Im Prinzip erreicht dies am besten die HARTLEy'sche Einrichtung. An Stelle des U förmig gebogenen Rohres tritt aber eine *) Symons, W. H., On a Hot and Cold Stage for the Microscope. Journ. of the Royal Microsc. Society Ser. II vol. II, 1882, p. 21—22. (Zool. Jahresber. H. 3 J. 1882 p. 32). 3* 36 Flesch: Ueber einen heizbaren Objecttiscli. L 1. Metallkammer von rechteckiger Form, welche in der Mitte von der Blendungsöffuung durchsetzt ist; von der Seite her sind Zu- und Abfluss- rohr sowie ein Ansatz für ein Thermometer angebracht. Es sollte ferner der Objecttisch so an dem Mikroskopstativ angebracht werden, dass durch ihn eine Erhöhung des Tisches nicht stattfände, dass also ein darauf liegender Objectträger in normaler Weise mit der freien Fläche des AsBE'schen Beleuehtungsapparates in Contact stehen könnte. Hierzu bot nun das von mir benutzte Stativ der SEiBEEx'schen Werk- stätte ' die günstigste Gelegenheit. Dasselbe ist ein mittleres Stativ mit drehbarem Objecttisch; letzterer ist so construirt, dass nicht, wie bei Haktnack, Leitz u. a. der Tisch mit dem Oberbau des Instrumentes um die optische Achse gedreht wird; es wird vielmehr nur eine dünne, in den Objecttisch eingelassene runde Metallplatte auf demselben be- wegt. Es wurde daher die Kammer des heizbaren Objecttisches so eingerichtet, dass sie an Stelle der drehbaren Platte eingesetzt werden kann. Allerdings kann nun aus technischen Gründen nur schwer die Kammer so eng sein, dass sie nicht die Dicke jeuer Platte übertrifft. Dies war indessen kein wesentliches Hiuderniss. Für das gewöhnliche Arbeiten dürfte wohl nie ein bedeutenderer Grad schiefer Beleuchtung nöthig werden, als der bei Anwendung des AsBE'schen Apparates er- reichbare. Hierfür ist aber die Dicke des Objecttisches gleichgiltig; nur für die Bedürfiiisse derjenigen, welche sich ausschliesslich mit dem Entziffern von Diatomeenzeichuungen und ähnlichem abgeben, dürften besonders dünne Objecttische zur Erlangung sehr scharfer Beleuchtungen noch in Betracht kommen. Indem also die gewöhnUche dünne Platte des SEiBEKi'schen Drehtisches gegen eine etwas dickere vertauscht wird, wie mir von Herrn Seibekt vorgeschlagen worden ist (dies war zur Zeit der Demonstration des Modellexemplars gelegentlich der Freiburger Naturforscher- Versammlung noch uicht ausgeführt), kann erreicht werden, dass nach Belieben der gewöhnliche Objecttisch direct durch den heiz- baren ersetzt wird; es kann also auch nach Belieben ein Beleuchtungs- oder Polarisatiousapparat bei der Untersuchung verwendet werden, wie bei dem gewöhnlichen Objecttisch. Da der specielle Zweck, zu welchem ich den Apparat zu benutzen haben werde, in Hinblick auf Beleuchtung u. s. f. keine weitgehenden Anforderungen stellt, so habe ich besondere Proben nach dieser Seite ') Vergl. über dasselbe: Flesch, M. , Ueber einige Verbesserungen an Seieeet und Krafft's Mikroskop-Stativ. Waldeyee's Archiv f. mikroskop. Anat. Bd. XIX p. 504, 505. 1, 1. Flesch: Ueber einen heizbaren Objecttisch. 37 noch nicht vorgenommen; ich behalte mir vor, hierüber noch Versuche anzustellen. Mir war es hauptsächlich darum zu thun , schnellen Temperaturwechsel und namentlich nach Belieben niedere Temperaturen zu erzielen. Die Probe des Apparates nach dieser Hinsicht gab Veran- lassung, noch der Einrichtung zur Regulirung des Wasserstromes eine geeignete Form zu geben. Das heisse Wasser wird durch einen Heber zugeführt aus einem Gefäss — etwa einem grossen Becherglas — in welchem Wasser siedet. Die Verbindung des Hahnes mit der Kammer erfolgt unter Vermittelung eines T Rohres (a) in der Weise, dass durch Benützung eines Quetschhahnes in jedem Augenblick der Zu- fluss des heissen Wassers durch den einen Schenkel (a') abge- schnitten, dafür aber durch den anderen (a") kaltes Wasser nach Oeifnen eines zweiten Hahnes zugelassen werden kann. Da nun der Abfluss des Wassers hier ge- wöhnlich nur tropfenweise er- folgen soll, so muss dafür gesorgt werden, schnelleren Abfluss im Augenblicke des Temperatur- wechsels zu erzielen. Anfangs suchte ich dies durch Oeflfnen eines an dem' Abflussrohr angebrachten Quetschhahnes zu ermöglichen. Es zeigte sich indessen, dass es schwer hielt, schnell genug wie- der auf die alte AbflussgeschAvin- digkeit einzustellen. Es wurde desshalb auch an dem Abfluss- rohr eine etwas complicirtere Einrichtung nöthig. Demselben wurde ein T Rohr angefügt, dessen beide Querschenkel durch Gummi- schläuche mit jenen eines zweiten T Rohres verbunden wurden; der Verticalschonkel des letzteren öffnete sich frei als Abflussrohr. Von den verbindenden Gummischläuchen war der eine für gewöhnlich durch eine Sperrpincette (d) geschlossen; der andere (d) trug einen Quetsch- hahn, mittels dessen auf eine bestimmte Stromschnelligkeit eingestellt wurde. Sollte der heisse Strom dm-ch kaltes Wasser ersetzt werden, so werde im Moment der Oefiiiung des für den Zufluss kalten Wassers 38 Flesch: lieber einen heizbaren Objecttiscb. I, 1. bestimmten Hahnes die Sperrpiucette (d) geöffnet. In wenigen Secimden konnte so die Temperatur der Kammer nm mehr als 30" variirt wer- den; sobald der Temperaturwecbsel erreicht war, wurde die Sperr- piucette geschlossen und so der Abfluss wieder verlangsamt. Noch bin ich nicht aller Schwierigkeiten in der Temperaturregu- lirung Herr geworden, wenngleich ich für meine Zwecke zur Zeit alles Nöthige erreichen kann. Die eine Schwierigkeit liegt darin, dass in dem Zuflussrohr selbst eine ziemlich bedeutende Abkühlung des heissen Wassers stattfindet, diese ist imi so grösser, je langsamer das Wasser fliesst, je länger also ein Theil desselben in dem Rohre stagnirt. Sollte es darauf ankommen. Stunden oder Tage lang constante Temperatur zu erhalten, so wird nach meinen Proben die Anwendung des Apparates ein mangelhaftes Resultat geben. Hier dürfte wohl ein schneller Strom mittels einer Gasflamme und des Thermoregulators auf constanter Tem- peratur gehaltenen Wassers das Richtigere sein 5 Versuche in diesem Sinne habe ich nicht gemacht ; deren Ergebniss wird indessen kaum zweifelhaft sein können. Ferner gelingt es nicht, beliebige Temperaturen bei der Abkühlung zu erwerben ; ich konnte die niedere Temperatur nur dann constant erhalten, wenn ich kaltes Wasser von dem ge- wünschten Wärmegrad selbst durch die Kammer strömen Hess. Einige andere Unvollkommenheiten theilt der Apparat mit allen mir bekannten Constructionen mit Ausnahme der RANViER'schen ; es wird stets die Temperatur des Objectträgers eine andere sein, als die des Tisches, speciell aber wu'd gerade die Stelle des Präparates noch einer stärkeren Wärmeableitung nach dem Objective unterworfen sein. Bei dem RANviER'schen heizbaren Objecttisch besteht die Heizkammer aus zwei über einander stehenden Abtheilungen; in einem Spalte zwischen diesem liegt das Präparat, die untere enthält die Blenduugsöffnung, die obere umfasst das Objectiv. Es liegt auf der Hand, dass ich dies ohne weiteres auch bei der beschriebenen Einrichtung hätte erreichen können ; ich fiirchtete indessen, dass die Erwärmung des Objectivs leicht eine zu hohe imd schädliche werden könnte. — Bei Stativen, bei welchen die Einpassung des Tisches statt des Drehtisches nicht mögUch ist, müsste man Bedacht darauf haben, die Blendungshülsen gewünschten Falles über die Ebene des gewöhnlichen Objecttisches an der des oben aufgestellten Heiztisches zu erheben. Auch dann dürfte aber die mitge- theilte Einrichtimg, im wesentlichen eine Ausarbeitung des von Haetley (s. 0.) vorgeschlagenen, in mancher Hinsicht sich nützlich erweisen. I, 1. Brass: Die Methoden bei der Untersuchung thierischer Zellen. 39 Die Methoden bei der Untersucliuno' tMerischer Zellen. Von Dr. Arnold Brass, Assistent am zoologischen Institut der Universität Leipzig. Während meiner Studien über die Structiir der Zellen und die physiologische Bedeutung der einzelnen Zelltheile habe ich zu Unter- snchungsmethoden greifen müssen, welche von den augenblicklich üb- lichen zum Theil bedeutend abweichen. Ich will es daher versuchen, den Weg, welchen ich bei jenen Studien eingeschlagen habe, in der Kürze im Zusammenhange mitzutheilen. Wenn wir Zellen untersuchen, so haben wir uns natürlich stets da- nach zu fragen, ob dieselben frei sind oder ob sie mit anderen, gleich- artigen Zellen zu sogenannten Geweben zusammentreten. Ferner hat man genau den Bau der Zellen und die Structur der einzelnen Gewebe, die Intercellularsubstanzen und die Membranen zu berücksichtigen und dementsprechend die angewandten Methoden zu modificiren. Ich werde daher auch im Folgenden einzutheilen versuchen zwischen freien Zellen imd solchen, welche zu Geweben vereinigt sind. Die Untersuchungen der freien Zelle. Bei den freien Zellen hat man wieder zwei Hauptgruppen zu unter- scheiden; die erste Gruppe umfasst diejenigen, welche als sogenannte einzellige Organismen ein selbständiges Leben führen, die zweite Gruppe umfasst jene Zellen, welche innerhalb höherer Organismen selbstän- dig auftreten, das heisst, nicht zu geschlossenen Geweben vereinigt sind. Ich bin nun bei allen jenen Untersuchungen stets folgenden Weg gegangen. Zuerst untersuchte ich die Zellen lebend und zwar möglichst imter Verhältnissen, welche denen gleichkommen, unter welchen die be- treffenden Objecte für gewöhnlich existiren. Bei den niederen ein- zelligen Organismen macht eine solche Untersuchung keine Schwierig- keiten, anders verhält es sich aber bei der Untersuchung jener frei im Thierkörper vorkommenden Zellen. Hatte ich die Zellen genügend lebend studirt, so wandte ich verschiedene Reagentien an, um mir über 40 Brass: Die Methoden bei der Untersuchung thierischer Zellen. I, 1. die Structur der Zelle näheren Aufschluss zii verschaffen und erst ganz zuletzt suchte ich durch Tinctiousmittel einen letzten noch weiter gehen- den Aufschluss über den Bau der Zellschichten zu gewinnen. In meinen „biologischen Studien" habe ich zu Genüge meine Ansichten über den Bau der Zelle mitgetheilt und ich kann mich daher, was die Structur der Zelle anlaugt, hier auf diese Arbeit berufen. Die Präparations- methoden habe ich in der betreffenden Arbeit nur angedeutet und des- halb fasse ich sie jetzt noch einmal in grösserer Ausführlichkeit zu- sammen. a. Die Untersuchungen der einzelligen Organismen. Bei der Untersuchung dieser für unsere Erkeuntuiss der zusammen- gesetzten Thiere so überaus wichtigen Gebilde muss man natürlich nach den verschiedenen Untersuchungsobjecten verschiedene Methoden der Untersuchungen einschlagen. Eine nackte, hüllenlose Amöbe wird ganz anders zu behandeln sein, als eine solche, welche sich encystirt hat und dann mit einem mehr oder minder starken Chitinpanzer umgeben ist. Ebenso wird die Untersuchung eines mit zarten Wimpern be- setzten Infusors sich auch in den einzelnen Fällen ungleichartig stellen, müssen. Kommt es mir darauf an, die lebenden Thiere zu untersuchen, so nehme ich mir die betreffenden Individuen direct frisch aus den Einzel- culturen heraus und bringe sie mit möglichst viel Wasser unter das Mikroskop; ich stelle meine Untersuchungen stets ein, sowie ich an den Bewegungen und Veränderungen des betreffenden Individuums merke, dass das umgebende Medium ein anderes geworden ist. Um den Sauer- stoffgehalt des Wassers unter dem Mikroskope möglichst lange in gleicher Menge zu erhalten, bringe ich stets mit den betreffenden Ob- jecten einige kleine grüne Algen unter das Deckglas, welche hinreichend Sauerstoff produciren, um das Leben der Amöben und Infusorien in dem Wasser zu unterhalten. Anfänglich wird man natürlich mit schwachem System arbeiten und später zu immer stärkeren übergehen. Da die meisten Protozoen äusserst beweglich sind, so lange sie Hunger haben, thut man gut, sie mit zerriebenen Pflauzentheilchen u. s. w. vorher ordentlich zu füttern; dann verharren sie während der Untersuchung meist nach kurzer Zeit ruhig an einer Stelle und beginnen alsbald die aufgenommenen Nahrungstheile zu assimiliren. Jetzt kann man auch mit stärkeren Systemen arbeiten, ohne allzuhäufig durch die plötzliche Foi'tbewegung der betreffenden Objecte gehindert zu werden. Bei Amöbenuntersuchungen ist man auch schon anfänglich im Stande, starke I, 1. Brass: Die Methoden bei der Untersuchung thierischer Zellen. 41 Systeme in Anwendung zu bringen, denn die Fortbewegung der Amöben ist eine so gleichmässige und langsame, dass man mit Leichtigkeit durch Verschiebung des Objectträgers ein bestimmtes Individuum im Gesichtsfelde behalten kann. Bei den Amöbenschwärmern liegt die Sache allerdings anders, denn diese bewegen sich ebenso rapid, wie viele Infusorien, aber dennoch kann man auch sie, durch Unter- bringungen geeigneter Nahrung unter den Objectträger, zwingen, ihre Bewegungen einzustellen. Den Körper der lebenden Protozoen kann man mm weiterhin durch Anwendung verschieden durchfallenden Lichtes zu sondern suchen, und namentlich sind es die verschiedenen Schichten, welche ein jeder dieser niederen Organismen aufweist, die bei verschiedener Beleuch- tung mehr oder minder klar hervortreten. Um die Beleuchtung für starke Systeme möglichst intensiv zu machen, ist es zweckmässig, dass man sich während der Untersuchungen des ABBE'schen Beleuchtuugs- apparates bedient, und ich habe bei demselben mit vielem Erfolg noch eine Blende eingeschoben, welche für manche Untersuchungen ganz unentbehrlich ist. Bekanntlich werden von dem Beleuchtungsapparate die Lichtstrahlen in ganz stumpfen Winkeln durch das Object hindurch- getrieben. Diese Lichtstrahlen bilden zusammen einen niedrigen Kegel mit stumpfer Spitze (die letztere soll ungefähr am Objecte liegen). Die Beleuchtung des Objectes ist also eine fast allseitige. Für viele Unter- suchungen muss es nun wünschenswerth erscheinen, die Beleuchtung vollständig einseitig zu machen, und das geschieht am zweckmässigsten dadurch, dass man von dem Lichtkegel, welcher auf das Object fällt, den grössten Theil der Strahlen abschneidet und nur die von einem Mantelabschnitte kommenden zutreten lässt. Um dies zu erreichen, lege ich unter den Beleuchtungsapparat eine kreisrunde Blende ein, in welcher ein Quadrant dieses Kreises theilweise herausgeschnitten ist. Ich schneide am Räude der Blende ein Kreisstück heraus, und zwar habe ich es am besten gefunden, wenn man den äussersten Rand zwei Millimeter breit stehen lässt, dann diesem Rande parallel einen je nach Bedürfuiss zwei bis drei Millimeter breiten Streifen herausschneidet. Man kann sich so verschiedene Blenden anfertigen, solche, bei denen der herausgeschnittene Streifen durch den gesammten Quadranten geht, oder solche, bei denen derselbe nur einen Theil des Quadranten aus- macht, und endlich solche, bei welchen mehr als ein Quadrant durch- schnitten ist, ja man kann selbst durch einen Kreisschnitt die Hälfte der Blendenfläche durchschneiden. Legt man eine solche Blende unter die Beleuchtungslinse, so werden selbstverständlich nur seitlich vom 42 Brass: Die Methoden bei der Untersucliiing thierischer Zellen. I, 1. Spiegel kommende Strahlen hinclnrchgelien und nur diese Strahlen werden durch den Beleuchtungsapparat hindurchgebrochen, und in Folge dessen ist die Beleuchtung des Objectes eine ganz einseitige. Da nun das Plasma der Zellen in den verschiedenen Schichten verschiedene Dichtigkeit besitzt, so werden sich bei solch schief durchgehendem Lichte nebeneinander liegende, verschieden dichte Schichten natürlich scharf von einander absetzen. Habe ich die Zellen hinreichend im lebenden Zustande untersucht, so lasse ich auf die lebenden Objecte verschiedene Reagentien ein- wirken und zwar möglichst mannigfaltige. Es muss uns darauf an- kommen, die einzelnen Schichten der Zelle so zum Absterben zu bringen, dass ihre Structur möglichst in derselben Weise erhalten bleibt, wie sie uns in der lebenden Zelle entgegentritt. Deshalb verwerfe ich bei meinen Untersuchungen alle plötzlich wirkenden Reagentien oder wende dieselben doch nur in solchen Verdünnungen an, dass sie mög- lichst langsam das Leben der einzelnen Zellschichten zerstören. Wenn wir z. B. stärkere Lösungen von Ueberosmiumsäure auf Zellen ein- wirken lassen, so gewahren wir, dass die Säure rapid schnell in das Innere der Zelle eindringt und das Leben derselben vernichtet, gleich- zeitig aber auch in ihr eine Summe von Veränderungen hervorbringt, welche nicht alle dem Bau der Zelle entsprechen dürften, sondern welche zum Theil das richtige Bild, welches wir vom Zellinnern zu haben wünschen, zerstören und uns Trugbilder vorführen. Für die freien Amöben, sowie überhaupt für membranlose Zellen imd Protozoen habe ich als ein vorzügliches Conservirungsmittel eine Lösung kennen ge- lernt, welche aus einem Theile Chromsäure, einem Theile Platinchlorid, einem Theile concentrirter Essigsäure und 400 bis 1000 Theilen Wasser besteht. Lässt man eine solche Lösung auf einen hüllenlosen Protozoenkörper einwirken, da- durch, dass man einen Tropfen derselben an den Rand des Deckglases bringt, so gewahrt man, wenn die Lösung — was man allerdings aus- probiren muss — hinreichend verdünnt ist, dass die Zellen nicht plötz- lich absterben, sondern dass sie oft noch stundenlang in dieser Lösung am Leben bleiben, und dass der Tod derselben ganz allmählich erfolgt, indem zunächst die äusseren Schichten erstarren und dann erst die inneren Schichten, eine nach der anderen, anfangen ihre Functionen einzustellen; am längsten bleibt der Kern am Leben, man sieht noch Bewegungen in demselben, wenn die Bewegungen in den äusseren Schichten schon aufgehört haben. Vergleicht man eine so getödtete Amöbe z. B. mit einer noch lebenden, so gewahrt man, dass die Structur I, 1. Brass: Die Methoden bei der üntersucliimg thierischer Zellen. 43 der Schichten mir ganz verschwindend wenig verändert ist und dass erst nach längerer Einwirkung des Reagenzes diese Structur eine andere wird, das heisst, die einzelnen Schichten heben sich schärfer und schärfer gegen einander ab, das zu einer jeden Schicht gehörige Plasma stellt sich einheitlicher dar und unterscheidet sich schärfer von den nebenliegenden Schichten. Wendet man üeberosmiumsäure an, so gewahrt man, dass die Structur der Zellen nicht in derselben Weise die gleiche bleibt, wie bei Anwendung des eben mitgetheilten Verfahrens, sondern dass sich in den verschiedenen Zellschichten Diflferenzirungen bemerkbar machen, welche ursprünglich nicht vorhanden waren und auch durch kein anderes Rea- genz in solcher Schärfe klar zu machen sind. Fragen wir uns nach dem Grunde dieser Erscheinung, so lautet darauf die Antwort, die Üeber- osmiumsäure dringt nicht gleichmässig in den Schichten der Zelle vor, sondern sie verfolgt mit grosser Schnelligkeit die Stellen des geringsten Widerstandes ; so dringt sie z. B. auf der Oberfläche nur an eirfzelnen Punkten ein, dort, wo sie grade am leichtesten einzudringen vermochte, die zwischenliegenden Stellen werden sofort verändert und für weiteres Eindringen von Säure unzugänglich gemacht. Innerhalb der Plasmazone dringt dann die Üeberosmiumsäure in dendritisch ver- zweigten Streifen vorwärts, sie oxydirt das Plasma in der unmittelbaren Nähe dieser Streifen und erzeugt dadurch Bilder von der inneren Zell- structur, welche nicht correct sind. Um sich von der Richtigkeit dieses eben Angeführten zu überzeugen, kann man ganz einfach so verfahren, dass man einen Tropfen concentrirter Eiweisslösung in eine Ueber- osmiumsäure-Lösung hineinfallen lässt; auch hier gewahrt man, dass die Üeberosmiumsäure nicht gleichmässig durch den doch jedenfalls gleich- artigen Tropfen hindurch gegangen ist, sondern dass sie denselben in verschiedenen Streifen und Bändern durchzieht. Besonders wird von der Säure das als Nahrungsmaterial eingelagerte Plasma der Zelle oxy- dirt, und in Folge dessen scheinen grade diese Zellsubstanzen schärfer ausgebildet zu sein. Ganz ähnlich wie die Üeberosmiumsäure wirkt die Pikrinschwefel- säure (jenes bekannte Gemisch aus Pikrinsäure und Schwefelsäure), nur hat dies nicht, wie die üeberosmiumsäure, die übele Eigenschaft, die betreifenden, mit ihr behandelten Objecto stark in der Färbung zu ver- ändern. Andere Reagentien habe ich bei Protozoen nicht in Anwen- dung gebracht, weil ich trotz allen Bemühens keine günstigen Resultate mit denselben erlangte. Eine besondere Präparationsmethode erfordern jene Protozoen, welche ihren Körper stark mit undurchsichtigem 44 Brass: Die Methoden bei der Untersucliung tliierischer Zellen. I, 1. Nalirungsmaterial augefüllt haben, \\iele der zu den Moneren gezählten Protozoen, wie z. B. die Vampyrellen, zeigen in den mittleren ScMcliten eine solch grosse Anzahl von Körnern abgelagert, dass die centralen Schichten vollständig durch dieselben verdeckt und unkenntlich gemacht werden. Es war dies der Grund, dass man den betreffenden Individuen bis jetzt z. B, die Anwesenheit eines Kernes vollständig abgesprochen hat. Mir kam es bei meinen Untersuchungen darauf an, in jedem Falle durchaus sicher zu sein, ob das betreffende Individuum mit einem Kerne versehen sei oder nicht, und ich versuchte daher auf alle mögliche Weise die Fremdkörper zunächst zu zerstören und den central gelegenen Kern möglichst sichtbar zu machen; schliesslich ist es mir in allen Fällen durch das folgende Verfahren gelungen: Zunächst isolire ich die be- treffenden Individuen, dann bringe ich sie für kurze Zeit in jenes als Pikrinschwefelsäure bekannte Gemisch ; nach imgefähr 3 bis 4 Minuten entferne ich die überschüssige Pikrinschwefelsäure wieder und bringe die Objecte für kurze Zeit in siedend heisses Wasser, wasche sie darauf etwas aus und setze nun eine geringe Quantität Ammoniaklösung zu, wo- durch das vorher stark coutrahirte Präparat wieder auf seine frühere Form gebracht wird; ist diese letztere hergestellt, so neutralisire ich das Ammoniak durch wenig Essigsäure, und daraufhin färbe ich das Object entweder mit ammoniakalischem Carmin oder mit Boraxcarmin. Nachdem ich die Objecte wieder ausgewaschen habe, bringe ich sie in verdünntes Glycerin und untersuche sie auf ihre feinere Structur. Die Pikrinschwefelsäure zerstört das Nahrungsmaterial, wenn es in der Zelle aufgespeichert ist, das Ammoniak löst schliesslich die etwa noch vor- handenen fettigen Theilehen auf, und in Folge dessen wird das Präparat soweit als möglich durchsichtig. Färbt man vor einer solchen Behand- lung, so färben sich auch die Körnchen ziemlich intensiv, und dadurch wird der Kern wenig oder gar nicht sichtbar gemacht. In neuester Zeit habe ich zur Fixirung von Protozoen mit vielem Glück auch eine coucentrirte Sublimatlösung augewandt, nur muss man später möglichst vorsichtig alle Spuren von Sublimat auswaschen, weil sich dieselben sonst unter Umständen in Form kleiner Krystalle ab- scheiden können. Ich muss übrigens gestehen, dass ich bei den Protozoen ohne Reagentien und Färbemittel bessere Resultate erhalten habe, als nach Anwendung derselben. 1, 1. Brass: Die Metboden der Untersuchung tliieriscber Zellen. 45 b. Die frei im Körper vorkommendeu Zellen. Da sämmtliclie Zellen, welche isolirt in höheren thierischen Organis- men leben, membranlos sind, so ist die Untersuchung derselben im Grossen und Ganzen eine ähnliche, wie die der hüllenlosen Protozoen. Wenn es mir darauf ankommt, die Zellen lebend zu untersuchen, so bringe ich sie entweder in Lymphflüssigkeit oder Angenflüssigkeit, Jod- serum oder auch in 0'6- bis O'Tprocentige Kochsalzlösung unter das Deckglas, erwärme den Objectträger und untersuche sie ganz ähnlich wie die Amöben mit schwachem und starkem System. Es kommt bei diesen Untersuchungen natürlich auch stets darauf an, das Einschluss- mittel möglichst sauerstoflVeich zu wählen, deshalb schüttle ich die Koch- salzlösung vor dem Gebrauche tüchtig in einem grösseren Glase oder ich nehme ganz frisches Augenwasser, welches ja immerhin eine grössere Menge gelösten Sauerstoffs enthält. In diesen Flüssigkeiten bleiben auch die Gewebe , z. B. die Drüsenzellen und die Keimschläuche und Keim- zellen niederer Thiere lange am Leben, und kann man sie alsdann stundenlang ungehindert beobachten. Schwierig sind die Untersuchungen an isolirteu Eizellen höherer Wirbelthiere. Jene Eier, welche nach aussen abgelagert werden, enthalten so grosse Mengen von Dotter, dass eine Untersuchung der lebend frischen Objecte geradezu unmöglich ist. Die Eizellen der Säugethiere sind aber andererseits so sehr empfindlich, dass man dieselben nur in günstigen Umständen lebend unter dem Objectglase zu untersuchen vermag. Ich habe dieselben auf heizbaren Objecttis'chen untersucht und habe dann als Einschlussmittel Lymphe genommen, der ich eine Spur von kohlensaurem Natron zusetzte. Das letztere darf allerdings nur in Spuren vorhanden sein, ungefähr Ya pro mille. Auf diese Weise gewann ich wenigstens einigermaassen befrie- digende Resultate, indem das Leben der Zellen erst nach einiger Zeit erlosch, wenn ich sie frisch aus dem warmen Follikel herausgenommen hatte. Bei jenen Säugethiereiern, welche schon befruchtet sind und sich au den Uteruswandungen festgesetzt haben, wird man wenig Glück haben, wenn man versucht, dieselben lebend zu betrachten. Ich habe wenigstens den Process der Furchung niemals genau an denselben zu Studiren vermocht. Als Reagentien habe ich bei den Untersuchungen der eben genannten freien Zellen genau dieselben angewandt, wie bei den Untersuchungen der hüllenlosen Protozoen. 46 Brass: Die Methoden bei der Untersuchung thierischer Zellen. I, 1. Die Behandlung der Gewebe. Audi hier habe ich so viel als möglich lebend zu untersuchen ge- trachtet und habe in Folge dessen stets wo es anging die Gewebe frisch aus dem Körper entfernt und sie dann in 0*6- bis O'Tprocentiger Koch- salzlösung oder in Jodserum respective in Lymphflüssigkeit untersucht. Man muss sich allerdings hier bemühen, mit Nadel und Scheere möglichst dünne Gewebsschichten zu isoliren, denn sowie sich mehrere Zelllagen übereinander befinden, werden die Bilder, welche man von den einzelnen Zellen erhält, durch die Lichtreflexe von nebenliegenden Zelltheileu durch Schatten, welche dieselben werfen u. s. w. gestört und gefälscht. Am leichtesten lassen sich die Gewebe niederer Thiere untersuchen, weil dieselben längere Zeit in den obengenannten Flüssigkeiten am Leben bleiben. Es ist ja bekannt, dass man die Vorgänge der Zell- theilung bei ihnen noch mehrere Stunden hindm'ch zu verfolgen im Staude ist. Gewebe der Warmblüter verändern sich alsbald nach dem Tode, wenn man nicht künstlich erwärmte Objecttische zu Hülfe nimmt und dieselben möglichst warm von dem Körper auf dem Objecttisch überträgt. Verschiedene Zellen verhalten sich hier auch ganz verschie- den. Am günstigsten für die Untersuchung sind die Samen und Eizellen liöherer Thiere, weil dieselben verhältnissmässig lange den äusseren Einflüssen widerstehen und ihre ursprüngliche Structur beibehalten. Sehr schnell verändern sich die Sinneszellen, die Nervenfasern und Ganglienzellen. Will man die Gewebe höherer Thiere ohne Anwendung von Reagentien untersuchen, so thut man gut, sie gefrieren zu lassen, dann auf dem Gefriermikrotom zu schneiden und die Schnitte nach dem Aufthauen in indiff'erenten Flüssigkeiten zu untersuchen. Bei allen Untersuchungen vermeide man aber möglichst die Anwendung von Wasser, indem sich in demselben alle Gewebszellen mehr oder minder schnell verändern und zur genauen Untersuchung untauglich werden. Bei Geweben, in denen es mir sehr darauf ankommt, die innere Struc- tur der Zellen möglichst zu erhalten, verwende ich niemals reines Wasser, sondern ich wasche diese Gewebe nach der Behandlung mit Reagentien selbst mit Wasser aus, dem entweder Alkohol oder einige Tropfen Säure zugesetzt worden sind. Als bestes Mittel zur sogenannten Erhärtung der Gewebe habe ich stets die Chromsäure in stärkeren Verdünnungen kennen gelernt. Kleinere Thiere, Embryonen höherer Thiere, vor allen Dingen solche, welche nicht mit einem festen äusseren Skelett ausgestattet sind, bringe ich lebend in eine Vg- bis Yaproc entige Lösung von Chromsäure und lasse sie in derselben bis zum Absterben, dann setze ich noch einige LI. Brass: Die Methoden bei der üntersucliung thierisclier Zellen. 47 Tropfen concentrirter Chromsäurelösung zu und halte das Präparat je nach seiner Stärke mehr oder minder lange in der Säure zurück, schliess- lich wasche ich es mit SOprocentigem Alkohol aus und bringe es dann zum Zwecke der vollständigen Wasserentziehuug nach und nach in immer concentrii-teren, bis schliesslich absoluten Alkohol. Recht hübsche Resultate habe ich auch durch Anwendung der schon oben erwähnten Mischung von Chromsäure, Platiuchlorid und Essigsäure erhalten. In einzelnen Fällen setzte ich dieser Mischung auf circa 50 g Lösung noch 2 bis 3 Tropfen einproceutiger Ueberosmiumsäure zu. Die Färbemittel, welche ich bei Geweben anwende, bestehen theils aus Boraxcarmin-, theils in Ammouiakcarmin- oder in Hämatoxyliulösung. Es ist schwer zu entscheiden, welcher Tinctionsmethode der Vorzug zu geben ist; man hat sich in bestimmten Fällen stets selbst von der besten Färbeweise zu überzeugen. Ich habe seiner Zeit einmal den Satz ausgesprochen, dass Färbe- mittel falsche Bilder erzeugten. Dieser Ausspruch hat selbstverständlich bei der Richtung der histologischen Forschimg in unseren Tagen von allen Seiten Widerspruch erfahren. Ich bin aber nicht geneigt, den- selben irgendwie zu modificiren , sondern halte ihn vollständig aufrecht, werde mich aber an dieser Stelle bemühen, einige Gründe für die Rich- tigkeit des Ausspruchs beizubringen. Es ist die Richtung unserer Zeit, der sogenannten chromatischen Substanz der Zellen und den Verände- rungen, welche dieselbe durchläuft, die grösste Aufmerksamkeit zu schenken, ja man hat die chromatische Substanz als das Wesentlichste innerhalb der Zelle bezeichnet und hat geglaubt, au dieselbe alle Vor- gänge, welche wir mit dem Ausdruck Leben belegen, verknüpft zu sehen. Ich bin diesen Ansichten entgegen getreten und will es jetzt versuchen, klar zu legen, inwieweit die chi'omatische Substanz überschätzt worden ist. Es muss natürlich auffallen, dass Färbemittel innerhalb der Zellen an verschiedeneu Stellen der Zellen in verschiedener Quantität abgelagert werden, dass also verschiedene Schichten verschiedene Mengen von den Färbstoffen möglichst fest zu halten vermögen. Vor allem sind es ein- zelne Theile des Kernes, welche sich sehi- intensiv tingiren, und da die Theile gleichzeitig während der Zell Vermehrung höchst charakteristische Form Veränderungen durchlaufen, so richtet man natüi'lich das Augenmerk auf dieselben und sucht eine Erklärimg für die so mannigfaltigen Umwand- lungen zu finden. Ganz von vornherein aber schon neigte man zu der Annahme, dass die chromatische Substanz, weil sie so constant vorkommt und sich so intensiv zu färben vermag, auch grosse physiologische Eigenschaften in der Zelle auszuüben vermöchte, und man sah sie für 48 Brass: Die Methoden der Untersuchung thierischer Zellen. I, 1. den wichtigsten Theil des Zellkörpers an. Aber scliou die Unregel- mässigkeit, mit der die chromatische Substanz in der Zelle abgelagert ist, Hess mich vermutheu, dass sie doch vielleicht nicht jene active Thätigkeit im Körper der Zelle ausübte, Avelche mau bei ihr vorausge- setzt hatte. Durch meine weiteren Untersuchungen kam ich zu dem Schlüsse, dass diese Stoffe eingelagertes Nahrungsmaterial für die Zelle darstellten. Waren meine Voraussetzungen richtig, so musste es mir durch geeignete Präparationsmethoden gelingen , die Zellen auf irgend eine Weise von diesen Stoffen zu befreien, und schliesslich habe ich eine Methode angewandt, welche mich auch zum Ziele geführt hat und mir deutlich zeigt, dass meine Voraussetzungen die richtigen gewesen sind. Ich lasse nämlich die Zellen hungern dadurch, dass ich die Individuen schlecht ernähre, oder ich lasse sie systematisch aushungern. Bei nie- deren Thieren, bei Insecteu, Würmern u. s. w. und auch bei niederen Wirbelthieren geht dies verhältnissmässig leicht; man braucht die be- treffenden Individuen nur in kältere Temperaturen zu bringen und kann sie so zwingen, all das Eeservematerial , welches sie in ihrem Körper aufgespeichert haben, nach und nach zu verdauen. Man gewahrt dann ganz deutlich, wie zunächst die Körnchensubstanz innerhalb der mittleren Plasmaschichten aufgelöst und resorbirt wird und wie dann schliesslich auch jene Substanz, welche im Kerne aufgespeichert war und selbst das Kernkörperchen oder die Kernkörperchen nach und nach vollständig verschwinden. Um bei höheren Wirbelthieren diese Processe verfolgen zu können, habe ich Infectionsversuche bei denselben gemacht. So habe ich bei Papageien und einigen anderen Vögeln, bei Mäusen, Kaninchen u. s. w. Individuen mit Tuberkelgift iuficirt und sie so ganz laugsam ab- magern lassen, oder ich habe tuberculöse Individuen genommen und sie nur verhältnissmässig wenig gefüttert ; die Thiere werden äusserst mager, leben verhältnissmässig lange, und wenn man dann einzelne Gewebe untersucht, so findet man, dass die chromatische Substanz in denselben mehr oder weniger verschwunden ist, besonders waren es die Eizellen, bei denen man die oben angegebenen Veränderungen am klarsten sah. Ich habe Präparate von Ovarien, bei denen die chromatische Substanz innerhalb der Eizelle vollständig verschwunden ist, uur dort, wo Eizellen in der Nähe grösserer Gefässe gelegen haben, da gewahrt man noch in denselben Spuren von gefärbtem Nahrungsmaterial, die Kerne des Binde- gewebes u. s. w. zeigen noch deutlich ihre ursprüngliche Beschaffenheit, sie färben sich sehr intensiv und beweisen dadurch, dass nicht etv/a in der Präparationsmethode Fehler gemacht worden sind. Ich kann diese Methode, Zellen hungern zu lassen, entschieden üur empfehlen, denn sie 1, 1. Brass: Die Metboden bei der Untersucliung tliierischer Zellen. 49 wird die einzige sein, die uns darüber Aufschluss zu geben vermag, ob die chromatische Substanz wirklich etwas Passives innerhalb des Zell- körpers darstellt. Bei parasitirenden Thieren und besonders jenen Sorten, welche innerhalb des Darmkanals leben, merkt man den Ein- fluss der Nahruugsentziehung , bei den Weichthieren auch noch sehr deutlich. Ich habe dadurch, dass ich z.B. Mehlwürmern wochen- und monatelang jegliche Nahrung entzog, die in ihnen schmarotzenden Gre- garinen, welche für gewöhnlich durch die zahlreich aiifgespeicherte Nahrung undurchsichtig sind, vollkommen durchsichtig zu machen ver- sucht. Die Resultate, welche ich durch diese Präparationsmethode er- zielte, werde ich demnächst in der Fortsetzung meiner „biologischen Studien" veröfFentlicheu. Eiue vorläufige Mittheilung darüber ist schon in dem Zoologischen Anzeiger von Anfang December 1883 gegeben worden. Wenn ich gezwungen bin , feine Schnitte durch Untersuchungs- material zu machen, so gehe ich da stets möglichst einfach vor, denn die complicirten und verwickelten Einbettungs- und Schnittmethoden, wie sie heute üblichi sind, vernichten zum Theil die feinere Structur der Zellen vollständig und sind ganz dazu angethan, falsche Bilder zu er- zeugen. Ich halte es durchaus nicht für zweckmässig, Präparate, die man auf feineren histologischen Bau der einzelnen Zellen hin unter- suchen will, tagelang in flüssigem Paraffin liegen zu lassen und sie so vollständig mit Paraffin zu durchtränken, denn, sowie das Präparat er- kaltet, wird sich das Paraffin krystallinisch ausscheiden, und es wird dadurch die Schichten innerhalb der Zellen zerstören, indem Quetschun- gen und Contractionen vorkommen. Um dann das Paraffin später wieder zu lösen, wendet man häufig neben Xylol und Benzin auch Terpentinöl an. Ich habe aber gerade das Terpentinöl als ein Reagenz kennen gelernt, welches die einzelnen Zellen in höchst imregelmässiger Weise zum Schrumpfen bringt und dadurch sowohl die Structur der einzelnen Zellen, als auch die der Gewebe zerstört. Kann ich es nicht umgehen, irgend ein Präparat in Paraffin einzubetten , so färbe ich vorher das Präparat in toto, wasche es aus, bringe es in Alkohol und zwar nach und nach in immer stärkeren, aus dem absoluten Alkohol lege ich es in Nelken- oder Lavendelöl so lange, bis es vollständig von demselben durchtränkt ist und dann bringe ich es in Paraffin, welches nur eine wenig höhere Temperatur als die seines Schmelzpunktes hat. Nach dem Erkalten des Paraffins schneide ich das Präparat sofort, lege die Schnitte ausgebreitet unter das Deckglas, löse das anhaftende Paraffin durch Xylol oder Benzin auf und setze dann Canadabalsam, welcher in Chloro- form oder Xylol gelöst ist, zu. * Zeitschr, f. wisä. Mikroskopie. I. 1. 4 50 Brass: Die Methoden bei der Untersuchung thierischer Zellen. I, 1. Die Einschlussmittel. Bei allen Eiuschlussmitteln für das mikroskopische Präparat ver- folgt man den Zweck, die allzustarke Lichtbrechung zu vermeiden, je- doch wird mau immerhin solche Einschlussmittel nehmeu, welche nicht genau denselben Brechungsindex haben, wie die verschiedenen Proto- plasmaschichten des Präparates. Man muss in einem jeden Einschlüsse die einzelnen Schichten immerhin noch ^enau von einander trennen können, und man wird gut thun, wenn man feinere Untersuchungen machen will, die allerverschiedensten Einschlussmittel in Anwendung zu bringen. Ich habe als solche gewöhnlich nebeneinander angewandt: reines Wasser oder halbprocentige Kochsalzlösung (ersteres niemals für losgelöste Gewebszellen, sondern mir für im Wasser lebende Protozoen), Speichel, Gummischleim, dem ich etwas Salicylsäiu'e zugesetzt hatte, stark verdünntes Glycerin, Glycerin mit Essigsäure vermischt, wenig verdünntes Glycerin mit Spuren von freiem Ammoniak, welch letzteres später wieder durch hinzugefügte Essigsäure neutralisirt werden kann, endlich Schellacklösung, Sandarak und Canadabalsamlösung. Hatte ich tiugirte Objecte, und kam es mir darauf an, nur die chromatische Sub- stanz in ihren Lagerungsverhältuissen zu untersuchen, so brachte ich auf die obere Linse des Beleuchtungsapparates einen Tropfen von jenem Oele, welches dem homogenen Immersionssysteme beigegeben ist, legte dann einen dünnen Objectträger von Crownglas auf und schloss das Präparat selbst in jenes Oelgemisch ein; wenn ich nun noch mit Systemen für homogene Immersionen arbeitete, so bekam ich Bilder von den tingirten Objecten, -^vie ich sie klarer und schöner niemals gesehen habe. Die Brechungsindices waren von der oberen Linse des Beleuch- tungsapparates bis zur unteren Linse des Objectivs ziemlich die gleichen und in Folge dessen traten die gefärbten Bestandtheile der Zellen voll- kommen frei und klar hervor, dabei bemerkte man dann auch, dass man sehr häufig Trugbilder gewinnt, wenn man tingirte Objecte nur in Einschlussmitteln untersucht, welche einen anderen Brechungsindex haben als das Crownglas der Objectträger und der Deckgläschen. Um die Differenzirungen in dem hellen farblosen Zellplasma nachzuweisen, habe ich als Einschlussmittel stets mit vielem Glücke ganz verdünntes Glycerin in Anwendung gebracht. Man mag es sich immer zum Princip machen, zunächst die Eigen- thümlichkeiten der zu untersuchenden Objecte kennen zu lernen und je nach den Zielen , welche man verfolgt , verscluQdene Reagentien in An- wendung zu bringen. Mit einfachen Mitteln wird man wohl stets die I, 1. Baum garten: Beitr. z. Darstellungsmetbocle d. Tuberkelbacillen. 51 günstigsten Resultate erhalten, denn, wenn man erst einmal ein thieri- sches Gewebe durch eine Reihe der verschiedensten Reageutieu hin- durchgebracht hat, und wenn man schliesslich noch Färbemittel anwendet, so wird man sicher niemals richtige Bilder von jenen Vorgängen er- halten, welche sich im Inneren der Zelle an den eigentlich activ thätigen Plasma abspielen. In der Neuzeit hat man den als Nahrungsmaterial aufgespeicherten Körnchensubstanzen der ZeUen ein zu grosses Gewicht beigelegt, und man mag die Resultate, welche man auf die verschiedenste Weise über die Structur dieser Zelltheile erhalten hat, nun endlich dazu anwenden, die activ wirksamen Theile der Zelle genauer zu studiren, das heisst, jenes farblose, in mehreren Schichten innerhalb der Zelle eingelagerte Plasma genau zu untersuchen. Ich habe mir dies Ziel längst zur Aufgabe gesetzt, ich werde meine gewonnenen Resultate stets möglichst schnell publiciren und werde über die dabei in Anwendung gebrachten Methoden in dieser Zeitschrift von Zeit zu Zeit weitere Mit- theilungen macheu. Beiträge zur Darstelliiüg"smetliode der Tuberkelbacillen. Von Prof. Dr. med. P. Baumgarten in Königsberg i. Pr. Gleich in meiner ersten Mittheilung über die von mir unab- hängig von Koch ^ entdeckten specifischen Tuberkelbacterien 2 (Tuberkel- bacillen Koch's) hatte ich angegeben, dass es mir bisher in keiner Weise gelungen sei, die genannten Mikroorganismen durch die WEiGERT'schen Bacterienflirbuugen, selbst nicht mit Zuhilfenahme der KocH'schen Be- leuchtungsmethoden, kenntlich zu machen und hervorgehoben, dass durch diese Resistenz der gewöhnlichen Anilinfärbung gegenüber ein 1) K. Koch, Die Aetiologie der Tuberculose. Berl. klin. Wocliensclirift 1882, No. 15. 2) Centralbl. f. d. med. Wissenscli. 1882, No. 15. , 4* 52 Baumgarten: Beitr. z. Darstellungsmetliocle cl. Tuberkelbacillen. I, 1. durchgreifendes Unterscheidungsmerkmal der von mir aufgefundenen Bacterien von allen anderen bekannten Schizomycetenformen gegeben sei. Zu dem nämlichen Resultate war, wie sich herausstellte, Koch in Betreff der Tuberkelbacillen gelangt, und hatte dieser Forscher zu- gleich die Ansicht ausgesprochen, dass es nur bei Anwendung eines ganz bestimmten complicirten, von ihm beschriebenen Färbungs- und Entfärbungsverfahrens möglich sei, die genannten Mikroorganismen im gefärbten Zustande darzustellen. Seitdem ist diese Ansicht die herr- schende geworden; das später von Ehelich empfohlene, jetzt ganz allgemein angewandte Untersuchungsverfahren ' ist bekanntlich nur eine Modification der KocH'scheu Darstellungsmethode. In Folgendem soll gezeigt werden, dass entgegen obiger Ansicht, es auch mit Hilfe der gewöhnlichen Anilinfärbungen gelingt, die Tuberkelbacillen klar und präcis zur Anschauung zu bringen: 1. Färbt man feine Schnitte tuberkelbacillenhaltigen, in Alkohol, absolut, (oder MtiLLEK'sche Lösung und Alkohol, absolut, oder dünnen Chromsäurelösungen- und Alkohol, absolut.) gehärteten Gewebes 12 bis 24 Stunden bei Zimmertemperatur in stark verdünnten alkoholischen Methylviolettlösungen (hergestellt durch Eingiessen von 4 bis 5 Tropfen der concentrirten alkoholischen Lösung in ein [kleines] Uhrschälchen voll Aq. dest.), entfärbt sie danach, nach vorheriger Auswaschung in Aq. dest., 5 bis 10 Minuten in reinem Alkohol, absol., hellt sie sodann in Nelkenöl auf und bettet unverzüglich in eine Mischung von (chloroform- freiem) Canadabalsam und Nelkenöl (ana) ein, so sieht man, bei Unter- suchung der Präparate mit homogener Immersion Zeiss '/i ^ und offenem AßBE'schen Condensor, die Tuberkelbacillen als intensiv blau gefärbte Stäbchen innerhalb des blässer blau gefärbten Gewebes hervortreten. Etwaige andersartige, zufällig im Prä- parate mitvorhandene Bacterien sind durch Verschiedenheit der Form, Grösse und Anordnung fast stets leicht von den Tuberkelbacillen zu unterscheiden. Bettet man nicht in die erwähnte Mischung, sondern einfach in Nelkenöl ein, so hält sich die Färbung der Tuberkelbacillen nur >) Bürner's deutsche med. Wocbenschr. 1882, No. 19. ^) Chromsäurepräparate, die bekanntlicli überbaupt Farbstoffe relativ schwierig aufnehmen, braueben längere Zeit zur ausreiebenden Tinction, die auch dann niemals so scbön und intensiv ausfällt, wie bei Alkohol- und Müller's Lösungspräparaten. Man wende daher die Cbromsäurebärtung nur an, wenn man gleichzeitig gewisse feinere Structurerscheinungen, z. B. Kem- theilungsfiguren, studiren will. I. 1. Baumgarten: Bcitr. z. Darstcllungsmctbode d. Tuberkelbacilleii. 53 wenige Stunden, wälirönd die der accidentellen Bacterien sich tage- bis wochenlang conservirt, ein Umstand, durch welchen die Diiferential- diagnose zwischen beiden in zweifelhaften Fällen vollkommen sicher auf solchen Präparaten erledigt werden kann. — Setzt man die gefärbten Schnitte, vor der Entfärbung in Alkohol. absoL, erst 5 Minuten einer etwa zur Hälfte gesättigten Lösung von Kali carbonicum aus, so ver- liert das Gewebe während des nachherigen Aufenthaltes im Alkohol mehr oder minder vollständig seinen Farbstoff, während die Tuberkel- bacillen ihn behalten, so dass sie nunmehr um so leichter im Gewebe zu erkennen und aufzufinden sind. — Erwärmt man obige Methyl- violettlösung entweder nach Koch im Wärmeschrank bis 50'' C. oder nach Rindfleisch über der Flamme, so kann man schon nach 10 bis 20 Minuten vollkräftige Tinctionen der Tuberkelbacillen erzielen. — Starke Mineralsäuren entziehen auch deu in obiger Lösung gefärbten Tuberkelbacillen innerhalb gewisser Zeitgrenzen den Farbstoff nicht, während das Gewebe und die accidentellen Bacterien fast momentan entfärbt werden. 2. Legt man die nach 1. tingirten und circa 5 Minuten in Alkohol, absol. entfärbten, auf 15 bis 20 Minuten in eine concentrirte wässerige oder besser essigsaure (Iprocentige) Lösung von Bismarckbraun, ent- wässert 5 Minuten in Alkohol, absol. und. verfährt sodann weiter wie bei 1., so markiren sich die Tuberkelbacillen als intensiv blau gefärbte Stäbchen auf braunem Gewebsgrunde. Alle übrigen von mir auf diese Weise behandelten Bacterien verlieren dabei den blauen Farbstoff und nehmen eine mehr oder weniger ausgesprochen braune Färbung an. Schaltet man die in 1. erwähnte Behandlung der Schnitte in Kali car- bonicum an geeigneter Stelle ein, so kommt die Braunfärbung des Ge- webes schneller und schöner zu Stande. Statt des Bismarckbraun kann man mit dem gleichen wesentlichen Erfolge rothe Anilinfarbstoffe oder auch Carminborax und Pikrocarminborax ^ verwenden. 3. Annähernd die gleichen Resultate kann man erreichen, wenn 1) Die bei der Benutzung dieser beiden letztgenannten Farbstoffe üblicbe nachträgliche Behandlung der tingirten Schnitte mit salzsaurem Glycerin kann auch hierbei mit Vortheil angewandt werden : Man legt die 5 Minuten mit Carmin- oder Pikrocarminborax getränkten Schnitte 5 Minuten in das ge- bräuchliche Salzsäure-Glyceringemisch (1 Th. 25procentige CIH, 10 bis 15 Th. Glycerin), danach in Alkohol, absol. u. s. f. Bei Pikrocarminborax muss na- türlich ziu" Erhaltung des gelben Farbtones Pikrinalkohol und als Eia- schlussmasse Dammarharz statt Canadabalsam zur Verwendung kommen. 54 Baumgarten: Beitr. z. Darstellimgsmetliocle d. Tuberkelbacillen. I, 1. statt des M e t h y 1 violetts Gentiana violett benutzt wird; doch ist die Bacillenfarbe dann nicht so schön und kräftig wie nach Methylviolett- tränkung. Wenig geeignet ist das Fuchsin zu diesen Färbungen, weil bei dem längeren Verweilen der gefärbten Schnitte im Alkohol die rothe Bacillenfarbe stets stark mit ausgezogen wird. 4. Positive, zur Erkenuimg ausreichende Färbungen erzielt man auch, wenn an Stelle der verdünnten alkoholischen ent- sprechend diluirte wässerige Lösungen applicirt werden ; auch hier steht das Methylviolett in der Leistungsfähigkeit obenan. Bei An- wendung concentrirter wässriger Methylviolettlösuug ist schon nach einstündiger Einwirkung in Zimmertemperatur der erste Beginn der Bacillentinction zu constatiren. 5. Alles was sub 1. bis 4. für Schnittpräparate angegeben wurde, gilt ohne Weiteres für D e c k g 1 ä s ch e n t r o c k e n p r ä p a r at e. Da sich letztere ceteris paribus überhaupt leichter anfärben als erstere, so treten natürlich auch die oben beschriebenen Färbungen in sehr viel kürzeren Zeiträumen als den für die Schnitte angegebenen am Deck- glaspräparate auf Wählt man stärker gesättigte Lösungen als die sub 1. bezeichnete, so kann man schon in Ya bis 1 Stunde ziemlich intensive Tinctionen der Tuberkelbacillen mit allen drei genannten Farbstoffen bei Zimmertemperatur erzielen. Lässt man nach kurzem, höchstens 1 minutenlangem ' Auswaschen in Alkohol absol. etwa 5 Minuten eine concentrirte Bismarckbraun- respective Methylenblaulösung einwirken und bettet, nach dem Abspülen des zweiten Farbstoffes in Aq. dest. und Trocknung sofort in die sub 1 erwähnte Einschlussmasse ein, so er- hält man das bekannte Bild der blau respective roth gefärbten Tuber- kelbacillen auf braunem respective blaugrünem Untergrunde u. s. w. Aus Vorstehendem erhellt, dass es zur exacteu Darstellung der Tuberkelbacillen weder des Alkalizusatzes ^^ noch der Mitwirkung starker Säuren als Entfärbungsmittel, noch selbst einer Doppelfärbung bedarf, sondern dass die gewöhnliche einfache Anilinfärbung, genügend lange an- gewandt, dazu ausreicht. Die Fähigkeit, der Entfärbung durch Kali car- b 0 n i c. Widerstand zu leisten und dadurch um so deutlicher innerhalb des entfärbten Gewebes hervorzutreten, welche oben, als Hilfsmittel der Dar- *) Da der Aufenthalt in Alkohol bei den Deckgläschenpräijaraten nur ganz kurz zu sein braucht, eignen sich für diese eben auch Fuchsinfärbungen (vergl. Satz 3). *) Resp. Carbolsäurezusatzes (Ziehl) Deutsch, med. Wochenschr. 1882, oder überhaupt irgend eines Zusatzes. I, 1. Baumgarten: Beitr. z. Darstelliuigsmethode d. Tuberkelbacillen. 55 l, a. iJl.,Llli^^l.i l,Oil. ^V-i^i. ^. ^U,iOVV.iX..L.10 Stellung mittels einfacher Färbung, benutzt wurde, theilen die Tuberkel- bacillen mit allen übrigen Bacterien ', darin liegt also durchaus nichts Besonderes. Freilich sind bei diesen einfachen Färbungen die Tuberkel- bacillen nicht durch ihre Farbe, sondern nur durch ihre Form, Grösse und Anordnung als solche charakterisirt, doch dürften diese morphologischen Kriterien (ohne deren Berücksichtigung man übrigens auch bei dem complicirten Färbungsverfahren nach Koch-Ehklich nicht auskommt, vergl. später) wohl in den meisten Fällen die Diagnose sichern. Für zweifelhafte Fälle ist überdies oben auf die Thatsache hingewiesen worden, dass im reinen Nelken öl einschluss die durch einfache Anilintinction gewonnene Bacillenfarbe binnen wenig Stunden schwindet, während alle übrigen Mikroorganismen, soweit bekannt, unter gleichen Verhältnissen die Farbe tage- bis wochenlang festhalten. — Weiterhin ist oben gezeigt, dass zur positiven Differenzirung der Tuberkelbacillen von anderweitigen Bacterienspecies mittels ver- schiedener Färbung, auch nach der e i n fa c h e n Anilinfärbung die Anwendung eines zweiten, durch Farbencontrast zugleich die Auffindung der Bacillen erleichternden Farbstoffes vollkommen wirksam ist; auch eignen sich, wie bemerkt, zu solcher Nachfärbung nicht nur Anilin- sondern auch Carminfarben etc. Koch, der Entdecker des erwähnten hochwichtigen diagnostischen Effects der Doppelfärbung, war der An- sicht, dass zur Erlangung desselben die alkalische Reaction der ersten Farblösung nothwendig sei; dem widerspricht aber eben das Resultat obiger Versuche. Auch die von Ehrlich empfohlene Mitwirkung starker Säuren, als Entfärbungsmittel vor der Anwendung des zweiten Farb- stoffs ist, wie wir sahen, entbehrlich. Dass eine deutliche Darstellung der Tuberkelbacillen durch Fär- bung anders als auf dem Wege des specifischen KocH-EHKLicH'schen Verfahrens zu erzielen sei, hat man meines Wissens bisher nicht ange- nommen. Zwar hat Ziehl (1. c.) die Benutzung des Alkali für unnöthig erklärt, aber er hat an Stelle desselben einen anderen differenten Zu- satz, die Carbolsäure, empfohlen; ferner haben Lichtheim ^ und nach ihm De Giacomi ^ angegeben, freilich nicht ohne sofort Widerspruch ') Vergl. Koch (Wundinfectionskrankheiten), dem wir bekann tlicli die Ein- führung dieses trefflichen Hilfsmittels in die bacterioskopische Technik ver- danken. ■^) Lichtheim, Zur diagnostischen Verwerthung der Tuberkelbacillen, Fortschr. der Med. 1883, No. 1. ^) De Giacomi, ibid. 1883, No. 5. 56 Baumgarten: Beitr. z. Darstelluiigsmethodc d. Tubcrkelbacillen. I, 1. von Seiten Meijche's * und Fkiedländer's ^ zu finden, dass man die Tuberkelbacillen auch in einfachen Lösungen basischer Anilinfarben tingireu könne; zur eigentlichen Dar Stellung haben aber auch sie sich des EHELicn'schen Säureverfahrens mit Herstellung einer Contrast- färbung des Untergrundes bedient. Man war eben der erst durch unsere Befunde als irrthümlich erwiesenen Meinung ^, dass die Tuberkelbacillen, trotz vollerreichter Tinction, in dem einfach gefärbten Präparate wegen Mitfärbuug des Gewebes nicht zur AA^ahrnehmmig gelangen könn-ten. Neuesteus sind Pkior'* und später Petri ^ darauf zm'ückgekommen, dass die Färbung auch mit einfacher Gentianaviolett- und Fuchsin- lösuug, ohne Zusatz von Alkali (oder Carbolsäiu'e etc.) gelänge; zm' Darstellung der Bacillen haben jedoch auch sie, (die übrigens nur an Deckgläschenpräparaten arbeiteten, an denen sich die Tuberkel- bacillen, gleich allen anderen Bacterien, anerkanntermassen sehr viel leichter anfärben, als an Schnittpräparaten), die Entfärbung durch concentrirte Säuren und die Contrastfärbung des Untergrundes an- gewendet®. Feiedläxdek ' hatte gegen Lichtheim's imd De Giacojh's Angaben angefiihrt, dass er mit den von ihm benutzten Fuchsin- und Gentianaviolettlösungen selbst nach 24stündiger Einwirkung nur ganz ungenügende Färbungen erhalten habe ; Lichtheim und De Giacomi müssten es daher mit anderen Farbstoffen als den seinigen zu thun gehabt haben, was leicht denkbar sei, da die Anilinfarben keine Stoffe von coustanter chemischer Zusammensetzung repräsentirten. Nach unseren, hier vorgelegten Beobachtungeu dürfte jedoch die Differenz einen anderen Grund haben: Lichtheim giebt an, seine Färbungen mit ein- facher „concentrirter" Lösung von Fuchsin und Gentianaviolett, die durch Eingiessen der gesättigten alkoholischen Farbstofflösung in Wasser gewonnen waren, erhalten zu haben. Fkiedläxder dagegen ') Menche, Vortrag, gehalten in der med. Section des Niederrh. Vereins für Natiu:- u. Heilk. zu Bonn 1883. ^) Feiedläkderr in Fortschr. der Med., 1883, No. 5. Notiz über die Fär- bung der TuberkelbacUlen, der Widerspruch Fbiedläkder's gegen Lichtheim's und De Giacomi's Angaben. 3) Vergl. Feiedländek, Mikroskopische Technik p. 56. ■•) Prior, Berl. klin. Wochenschr., 1883, No. 33. ä) Petri, Berliner klm. Wochenschr., 1883, No. 48. *) Prior giebt übrigens an. dass zur „exacten" Färbung mit einfachen Farblösungen die Erwärmung vorzuziehen sei, was für das Methyl violett (welchen Farbstoff Prior nicht angewendet zu haben scheint) nicht zutrifft. (Vergl. oben Satz 1). ') Frie BLANDER, Fortschr. der Med., 1883, No. 5. I, 1. Eaumgarten: Beitr. z. Darstellimgsmethodc d. Tiiberkelbacülen. 57 führt au, „wässrige" Lösungen der genannten Farbstoffe benutzt zu haben und sagt nichts über den Concentrationsgrad. Nach obigen Mit- theilungen besitzen aber die (verdünnten) alkoholischen Lösungen ein höheres Färbungsvermögen als die wässrigen und auch der Concentra- tionsgrad spielt danach eine erhebliche Rolle. Dass das Methyl- violett das beste bekannte Reagenz auf Tuberkelbacillen ist, haben bereits früher Schuchaedt und Krause ' hervorgehoben, sich hierbei auch auf eine gleichlautende mündliche Mittheilung Koch's berufend; noch auffallender als bei dem KocH-EHKLicH'schen Verfahren tritt, wie aus Obigem (3) ersichtlich, der souveräne Werth grade dieses Farb- stoffes als Bacillenfärbemittel bei unseren einfachen Tinctionsmethoden zu Tage. Dass etwaige Differenzen in der Qualität der Drogue dieses Resultat beeinflusst haben könnten, halte ich für ausgeschlossen, da ich es mit den aus verschiedensten Quellen stammenden Stoffen immer in gleicher Weise erzielt habe. Wenn ich nun also nach meinen hier mitgetheilten neueren Er- fahrungen, meine frühere Ansicht über die N ich tfärbbarkeit der Tuber- kelbacillen mittels einfacher Anilintinction zurücknehmen muss, so kann ich doch nach wie vor mit aller Bestimmtheit daran festhalten, dass die Färbbarkeit anderen Mikroorganismen gegenüber eine derart ver- schiedene ist, dass man diese Verschiedenheit zur Differentialdiagnose benutzen kann. Es färben sich nämlich, wie oben bemerkt, am Deck- gläschen angetrocknet, die Tuberkelbacillen bei Zimmertemperatur selbst in concentrirten Anilinviolettlösungen erst nach y^- bis ^/^ stündiger Ein- wirkung leicht an, während alle übrigen Bacterienspecies, soweit be- kannt, darin sofort oder fast sofort intensiv tingirt werden. Selbst die Leprabacillen machen nach den Angaben Neissek's und Koch's hier- von keine Ausnahme. Es gewährt also dieses Verhalten die Möglich- keit, die Tuberkelbacillen von allen übrigen Schizomycetenformen sicher zu unterscheiden und auf dieser Möglichkeit beruht mein früher ange- gebenes Verfahren -, die Tuberkelbacillen in Sputis etc. nachzuweisen. Dieses Verfahren hat vor den positiven P'ärbungsmethoden, die Koch- EHBLicn'sche Reaction nicht ausgeschlossen, zunächst den Vortheil, ein, Soviel wir wissen, absolut pathognomonisches Resultat zu ge- währleisten, während bekanntlich auf die erstere nicht nur die Lepra- bacillen, sondern auch noch eine Reihe anderer Mikroorganismeuformen in gleicher oder ähnlicher Weise reagiren ^ ; ferner aber den, dass sie 1) Fortschr. der Med., 1883, No. 9 p. 278. 2) Centralbl. für die med. Wissensch., 1882, No. 25. ^) Vergl. die citirten Abhandlungen von Lichtheim und De Giacomi, 58 Baum garten: Beitr. z. Darstellungsmethode cl. Tuberkelbacilleu. I, 1- gestattet, die Bacillen auch mit den gewöhnlichen Mikroskopen, selbst in vereinzelten Exemplaren , mit voller Sicherheit zu erkennen, während die positiven Färbuugsverfahren hierzu allgemein auerkannter- maassen die Zuhilfenahme homogener Immersion und AuBE'scher Be- leuchtung unbedingt erforderlich macheu K Die gern zugestandenen Nachtheile meines combinirten Kali-Verfahrens gegenüber den Me- thoden mit farbiger Darstellung der Bacillen beruhen darauf, dass es, zumal für den weniger geübten Mikroskopiker etwas leichter Ver- wechslungen der Bacillen mit andersartigen Objecten, kleinen Kry- stallen , Partikelchen von elastischen Fasern '^ zulässt , als die letzt- genannte Untersuchungsmethode, deren Resultate selbst dem mikro- ferner die Mittheilungen von Babes, Histolog. Studien über Tuberculose (Pester med. chir. Presse No. 38, 1883) ferner Fixklee und Ekhlei;, Zur Erkennung der Tuberkelbacülen, Centralbl. f. klin. Med., 1883, No. 15, auch Petri, 1. c. ') Wenn Weigekt in seiner Polemik gegen mein Verfahren (Deutsch, med. Wochenschr., 1883, No. 29) bemerkt, dass man doch die gefärbten Tuber- kelbacülen unter allen Umständen d. h. also auch mit den gewöhnlichen Mikro- skopen besser sehen müsse, als die ungefärbten, so übersieht er hierbei zwei Dinge: Erstens, dass die Tuberkelbacülen nach der, den ersten Act meiner Darstellimgsmethode bildenden Kalibehandlung nicht unerheblich grösser und voluminöser erscheinen, als nach der Aniünfärbung, und zweitens, dass die Auf- lösung des, die Bacillen verdeckenden „Structurbildes" (der Zellen, Kerne u. s. w.), welche an den der positiven Färbung unterworfenen Präparaten eben nur auf dioptrischem Wege, mit Hilfe des Abbe 'sehen Condensors und homogener Immersion, geleistet werden kann, bei meiner Methode auf chemi- schem Wege, nämlich durch die Kaliwirkung, erreicht wird. Dass man auch die ungefärbten Kalibacillen mit Benutzung guter Immersionslinsen und Aübe- schem Condensor „besser" sieht, als mit gewöhnlichen Mikroskopen, bedarf wohl keines Beweises ; natürlich darf man den Condensor hier nicht „offen", sondern nur mit Blenden wirken lassen. Da aber die Inanspruchnahme des Nutz- efifectes des „offenen" Condensors, wie eben auseinandergesetzt, durch meine Präparation überflüssig gemacht wird, so kann es doch unmöglich als „Nach- theü" meiner Methode betrachtet werden, „dass sie nicht gestatte, die Vor- theile der Untersuchung mit offenem ABBE'schen Condensor auszunutzen", be- kanntlich derjenige Einwurf Weigert's, an dem er noch zuletzt, nachdem er die übrigen Einwendungen aufgegeben, festgehalten hat (vergl. Börner's Dtsch. med. Wochenschr., 1883, No. 31). -) Durch Vorausbehandlung der Deckgläschen mit starker Salzsäiu-e imd dann mit Chloroform kann man die Verwechslungsmöglichkeit mit Krystall- bildungen sicher ausschliessen. Die vorherige Entfettung durch Chloroform empfiehlt sich auch für den Geübten, weil dadurch das Präpai-at gänzlich von den etwa vorhandenen, die Bacillen verdeckenden, Fettmassen befreit wird. Die Verwechslung mit Rudimenten elastischer Fächerchen dürfte von geübten Mikroskopikern wohl kaum begangen werden. I, 1. Baumgarten: Beitr. z. Darstellungsmethode d. Tuberkelbacillen. 59 skopischen Anfänger weniger leicht Veranlassung zu Missdeutungen geben können, und dass es ferner der Auffindung und Einstellung ganz vereinzelter Bacillen etwas grössere Schwierigkeiten bereitet, als die Methoden mit farbiger Darstellung, weil ein farbiges Stäbchen, ceteris paribus \ beim Suchen immer etwas leichter ins Auge fallen wird, als ein ungefärbtes. Diese Nachtheile sind aber nicht derartige, um die Vortheile des Verfahrens ganz preiszugeben; es eignet sich dasselbe vorzugsweise zur schnellen Orientirung: sind reichliche Bacillen vor- handen, so führt es sicher und schnell zum Ziele, und man hat dann nicht nöthig, die unbedingt umständlicheren und zeitraubenderen Fär- bungsmethoden anzuwenden ; sind die Bacillen spärlich, und findet man sie nicht gleich auf dem ersten Präparate mit meinem Kaliverfahren, so suche man danach nicht weiter, sondern prüfe das andere (oder die an- deren) Deckgläschen nach den Färbungsmethoden; der erlittene Zeit- verlust ist dann so gering, dass er an sich kaum in Betracht kommt, vollends aber bei häufiger Untersuchung reichlich ausgeglichen wird durch den Zeitgewinn in den vorhin erwähnten Fällen mit schnellem positiven Resultate. So schliesst also die Werthschätzung und Be- nutzung des einen Verfahrens die Anerkennung und Verwerthung der anderen nicht aus. — Fassen wir schliesslich noch einmal in Kürze die hauptsächlichen Ergebnisse unserer die Tinctionsverhältnisse der Tuberkelbacillen be- treffenden Untersuchungen zusammen, so ist zunächst constatirt worden, dass die Tuberkelbacillen gleich allen übrigen Schizomycetenformeu durch die Behandlung mit einfachen basischen Anilinfarbstoffen nicht nur zu färben, sondern auch mittels dieser einfachen Färbung selbst auf Schnitt-Präparaten, ohne vorausgehende Entfärbung des Gewebes, deut- lich darzustellen sind ; und ferner, dass auch die, die Tuberkelbacillen von anderen Mikroorganismen durch Farbenverschiedenheit differenzirende Wirkung der Doppel färbung sich in präciser Weise geltend macht ohne Alkali- (oder sonstigen) Zusatz zur ersten Lösung und auch ohne Säure- einwirkung vor der zweiten Färbung. Liegt hierin das hauptsächlichste theoretische Interesse der vorliegenden Mittheilungen, so dürfen die- selben wohl auch in praktischer Hinsicht eine Berücksichtigung bean- spruchen, insofern, als sie dem Histologen die Möglichkeit gewähren, bei Studien über die feinere Histogenese des Tuberkels und bei der Entschei- dung der Frage, ob neben den Tuberkelbacillen noch anderweite Mikro" ') D. h. also, wenn man beim Suchen nach den gefärbten Stäbchen Oelimmersionslinsen und offenen Abbe 'sehen Condensor anwendet. 60 Baiimgarten-: Beitr. z. Darstellungsmethodc d. Tulicrkelbacillen. I, 1. Organismen in den Initialproducteu des tuberkulösen Processes auftreten, sieh solcher Methoden des Nachweises der Tuberkelbacillen zu bedienen, welche nicht nur die Gewebe, insbesondere junge, zarte, zellige Elemente sehr viel weniger angreifen, als das KocH-EHBLicH'sche Färbungsver- fahren, sondern denen auch nicht, wie dem letzteren, der berechtigte Vor- wurf gemacht werden kann, dass sie etwaige andere, in den Tuberkeln vorhandene IVIikroorganismen unsichtbar machen oder gar zerstören könn- ten *. Nicht dagegen scheinen mir die neuen Methoden, vorläufig wenig- stens, dazu geeignet, das KocH-EirRLicH'sche Verfahren dort zu ersetzen oder gar zu verdrängen, wo es sich um rein diagnostische Zwecke handelt ; in dieser Beziehung hat sich dasselbe so ausgezeichnet bereits in tausendfacher Untersuchung bewährt, dass nur dann Grund gegeben sein würde, es mit einem neueren zu vertauschen, falls dieses letztere grössere Sicherheit oder grössere Schnelligkeit des Nachweises oder beides zugleich gewährleisten könnte. Keines von beiden ist jedoch bei den Färbungen mit gewöhnlichen Farblösungen der Fall ; im Gegen- theil kommt man mit der EintLicH'schen Reaction noch etwas schneller zum Ziele, als mit der blossen Doppelfärbung. Selbst die Weglassung des Auilinölzusatzes ^ kann ich bei Untersuchungen zu rein diagnostischen Zwecken nicht empfehlen ^; ich für meinen Theil habe entschieden den Eindruck gewonnen, dass die Färbungsenergie der Farb-Lösung ganz im allgemeinen durch den Anilinölgehalt gesteigert wird, und auf diesen Vortheil möchte ich den schwer färbbaren Tuberkelbacillen gegenüber nicht ohne besonderen Grund Verzicht geleistet sehen. Nur also, wo es auf gleichzeitige Verfolgung feiner histologischer Details, oder um gleichzeitige Feststellung des Mitvorhandeuseins andersartiger Bacterien- species ankommt, sind die oben sub 1 bis 5 beschriebenen Methoden, aus den angegebenen Gründen, dem EHRLicn'schen Verfahren vor- zuziehen. *) Vergl. Klebs, Archiv für experim. Pathol, Heft 1 u. 2. 2) Davon, dass andere Zusätze zuverlässiger oder wirksamer seien, als das Anilinöl, habe ich mich nicht überzeugen können. 3) Entgegen Petri 1. c. I. 1. Schaar Schmidt: Üeber d. mikrocliemisclie Reaction d. Solamn. 61 lieber die mikrocliemisclie Heaction des Solan in. Von Dr. Julius Schaarschniitlt in Klausenburg. Um Solauin auf mikrochemiscliem Wege nacliziiweiseu, benütze ich Schwefelsäure oder Salpetersäure. 0. Bach * erwähnt, dass Solanin mit Alkohol und Schwefelsäure eine schön rosen- bis kirschrothe Fär- bung zeigt; ich finde aber, dass die mikrochemische Reaction einfach mit Schwefelsäure oder Salpetersäure viel sicherer und leichter eintritt. Das Solanin wurde auf diese Weise von mir bei folgenden Solana- ceen gefunden: 1. Solanum tuberosum 2. „ nigrum 3. „ Dulcamara 4. Capsicum annuum 5. Lycopersicum esculentum 6. Mandragora officinalis. Die Schnitte werden zur Auffindung des Alkaloides in einen Tropfen Salpetersäure oder (nicht allzusehr concentrirte) Schwefelsäure gelegt und sogleich genügend bedeckt unter das Mikroskop gebracht. Die Reaction tritt in einigen Secunden auf. Die schöne rosenrothe Färbung wird besonders durch die Salpetersäure leicht und schnell her- vorgerufen, mit Schwefelsäure gelingt die Reaction etwas langsamer. Solanum tuberosum. Der Stengel, hauptsächlich aber die Knolle bilden den Hauptsitz des Solanin. In dem Stengel tritt die Reaction in den subepidermoidalen koUenchymatischen Zellschichten mehr oder weniger intensiv auf. Ebenso in den KoUenchymzellen auf der Oberseite der Blattstiele. Die Hauptader der Blätter zeigt auf ihrer Oberseite ebenfalls die Reaction, der Solaningehalt vermindert sich aber fortwährend gegen die Blattspitze zu. In den Mesophyllzellen dagegen konnte kein Solanin nachgewiesen werden. Am schönsten gelingt die Reaction mit der Knolle, wenn dieselbe quer durchschnitten mit Salpetersäure benetzt ») 0. Bach, Ueber das Solanin (Journ. f. prakt. Chemie, Bd. VIT, 1873, p. 248). 62 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I. 1. wird; es bildet sich nach einigen Secimden am Rande ein rosenrother Saum, in manchen Fällen treten sogar dem Fibrovasalsystem entsprechend röthliche Flecken oder radiale Streifen auf. Die mikroskopische Unter- suchung zeigt, dass die unter dem Periderm liegenden fünf bis sechs Zellschichten die Träger des Solanin sind, man' kann auch die Phellogen- schicht dazu rechnen. Auch die die Fibrovasalbündel umgebenden Zellen enthalten manchmal Spuren von Solauin. In der Wurzel zeigten nur manche subepidermoidale Zellen die Reaction. Bei den anderen Arten (S. nigrum, S. Dulcamara) und bei Capsicum, Lycopersicum , Mandragora sind ebenfalls die Kollenchym- schichten diejenigen, welche das Solanin enthalten. Die Reaction ge- lingt entsprechend dem Gehalte in verschiedener Intensität, manchmal ist sie, z. B. bei S. Dulcamara, auf dem Querschnitte mit blossem Auge wahrnehmbar, während Mandragora officinalis nur sehr schwach reagirt. Sehr leicht gelingt die Reaction bei Lycopersicum. Bei dieser Pflanze wurde das Solanin auch in den Blättern, nämlich in den äusser- sten Zellen des Schwammparenchyms aufgefunden. In der Frucht- schaale enthalten nur einige zerstreute Zellen nachweisbares Solanin. Wegen der vorgerückten Jahreszeit konnten andere Arten resp. andere Theile dieser Arten nicht untersucht werden. Ich will daher nur noch einige Angaben über Solanum nigrum machen. Bei dieser Art enthielt die äussere Epidermis der Kelchblätter Solaniu in solcher Quantität, dass die Blätter, in Salpetersäure getaucht, auf der Ober- fläche ganz gefärbt erschienen. Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. Von Professor Dr. Hans Gierke in Breslau. In diesem Jahr (1883) ist ein viertel Jahrhundert vergangen, seit- dem eine Untersuchungsmethode in die histologisch-zoologische For- schung eingeführt wurde, welche für die Zoologie, für alle medicinischen Wissenschaften und — wenn auch nicht in demselben Maasse — für die Botanik von allerhöchster Wichtigkeit geworden ist, und welche mehr als andere Hilfsmittel des mit dem Mikroskop arbeitenden Forschers I. 1. Gierke: Färberei zii mikroskopischen Zwecken. 63 zu den grossen Erfolgen der Neuzeit beigetragen hat. Ich meine die Methode des Färbens für mikroskopische Zwecke, d. h. die Behandlung der für die mikroskopische Untersuchung bestimmten Präparate mit Farbstoffen, welche, eine verschiedenartige Verwandtschaft mit den ver- schiedenen Elementen derselben besitzend, diese durch grössere oder geringere Intensität oder gar durch deutlich sich unterscheidende Farben differeuzirt. Zur Feier des fünfun dz wanzigj ährigen Bestehens dieser Technik sei mir vergönnt, einen Rückblick auf ihre Entwicklung zu werfen. Wir werden sehen, wie sie aus bescheideneu Anfängen empor- wuchs, zuerst langsam mit wenigen guten Methoden vorlieb nehmend, dann aber in dem letzten Jahrzehnt mit gewaltiger Schnelligkeit; so, dass es fast ein Glück zu nennen wäre, wenn einmal für einige Zeit ein Stillstand in diesem Wachsthum eintreten wollte, wenn diese Periode ihren Abschluss fände, in welcher ein epidemisch gewordener Ehrgeiz die Forscher, zumal die jüngeren anstachelt, aus dem reichen Schatz der Farbenindustrie wieder einmal einen Stoff herauszuentdecken, welcher sich entweder direct oder doch wenigstens nach einigen Umgestaltungen für die mikroskopische Färbung „warm empfehlen" lässt, und so deren histologischer Vater zu werden. Meine Abhandlung würde über- mässig lang und unerträglich langweilig werden, wollte ich eine Ge- schichte aller dieser Empfehlungeu schreiben; wir können ohne etwas zu verlieren, über manche derselben hinweggehen '. Mit diesem geschichtlichen Ueberblick werde ich eine Besprechung der einzelnen Farbstoffe und des Princips wie der Technik ihrer An- wendung verbinden. Den Schluss der Arbeit soll dann eine möglichst ausführliche Zusammenstellung aller in die mikroskopische Technik ein- geführten Farbstoffe, der vielen Angaben ihrer Zubereitung für histolo- gische Zwecke und endlich der Vorschriften, wie sie für das Studium der Gewebe zu benutzen sind, bilden. Ich glaube, dass eine solche Ar- beit nicht werthlos ist imd gerade in den ersten Heften dieser Zeitschrift ihren richtigen Platz findet. Um dieselbe nun möglichst nutzbar zu machen, habe ich die grosse Mühe nicht gescheut, bei den einzelnen Farbstoffen alle Originalarbeiten genau zu citiren, in denen irgend etwas Brauchbares hinsichtlich ihrer Verwendung zu finden ist. So ermögliche ich den Forschern, sich leicht in den ausführlicheu ursprünglichen Origi- nalarbeiten Orientiren zu können. Ich weiss aus Erfahrung an mir selber und an Anderen, dass das Fehlen einer solchen Zusammenstellung ein 1) Besonders lasse ich die nicht unbedeutende Zahl derjenigen deutschen und besonders ausländischen Arbeiten ausser Acht, welche schon früher von Anderen besprochene Farbenmethoden ihi-em Leser aufs Neue vorfuhren. 64 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. Maugel war, der sich nicht selten fühlbar machte. Mau hat ja sehr häufig den Wunsch, Genaueres über diese oder jene Methode zu erfahren und besonders zu ersehen, in welcher Weise jener Forscher sie ange- wandt hat, der sie zuerst in die mikroskopische Technik einführte. Und selbst die mit dem glücklichsten Gedächtniss Begabten werden bei der ungeheueren Fülle des Vorhandenen nicht gleich im Stande sein, die Zeitschriften und die Nummern der Bände, in denen das gerade Gesuchte zu finden ist, angeben zu können. Und die Hand- und Lehrbücher der mikroskopischen Technik befriedigen weder hinsichtlich der Vollständig- keit der Vorschriften zur Bereitung und Anwendung des Farbstoffs, noch macheu sie den Versuch die Belegstellen zu nennen *. Mit den eigentlichen Farbstoffen vereinigt muss ich durchaus die Metalle, welche zur sogenannten Imprägnation der Gewebe gebraucht werden, abhandeln. Denn obschon dieselben in ihrer Wirkungsweise sich von den Farb- stoffen unterscheiden, so ist doch der Zweck ihrer Verwendung der gleiche. Auch sie sollen eine farbige Differenzinnig der Elemente her- beiführen. — Tritt heute ein Laie in das Zimmer eines Histologen, so wimdert er sich am meisten über die Herrschaft der Farbe in dem stillen For- scherraum. Nicht die seltsamen Apparate, das Mikroskop und die Mikro- tome mit ihren drohend aufgespannten Messern ziehen des Besuchers Blicke zunächst an ; sie werden durch die vielen bunten Dinge gefesselt. Einförmig und öde hatte er sich das Mikroskopirzimmer vorgestellt, da nach seiner Ansicht das wissenschaftliche Material in ihm erst bei min- destens hundertfältiger Vergrösserung sichtbar werde. Statt dessen herrscht in dem hellbeleuchteten Räume fröhliche Farbenpracht. Wohin man schaut, glänzen bunte Sachen. Im Schrank und auf den Tischen allerhand Flaschen, grosse und kleine Schaalen mit farbigen Substanzen und herrlich schimmernden Flüssigkeiten, und überall auf den Tischen kleine Glasplatten, auf denen in allen Regenbogenfarben prangende Ob- jecte befestigt sind. Das sollen die für das unbewaffnete Auge so un- scheinbar gedachten mikroskopischen Präparate sein? Die Verwunde- rung steigt wohl noch, wenn der Besucher sein Auge über die Etiquetten der Flaschen gleiten lässt und neben den zahlreichen Farben Gold und Silber angezeigt findet. Und von all dem bunten Zeug wandert sein verwirrter Blick auf den Benutzer desselben, an dem er zu zweifeln be- ') Am ausführhclisten werden ohne Frage die Farbstoffe und ihre Anwen- dungsmethoden bei VON Thanhoffer, ,das Milcroskop und seine Anwendung' (Stuttgart 1880) abgehandelt. I, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 65 ginnt. Und was erst würde der Sanitätsrath Dr. Paul Niemeyee — der offenbar, wenigstens was die Histologie angebt, auch zu den Laien geliört — bei einem solchen Anblick sagen, da ihm schon bei der Lee- türe der Abhandlungen über die Tuberkelbacillen so zu Muth ist, als hätte er es nicht mit Medicinern, sondern mit Färbern und Leimsiedern (letzteres der zu Culturzwecken gebrauchten Gelatine wegen) zu thun'. Nun hier in seinem Arbeitszimmer neben seinem Mikroskop und unter den sichtbaren Resultaten seiner Arbeit wird der Forscher im schönen Gefühl des Stolzes über sein Können mit gulmüthigem Lächeln dem zweifelhaften Blick seines Gastes — der freilich nicht der erwähnte Dr. Paul Nlemeyer sein dürfte — begegnen. Mit Leichtigkeit vermag er denselben durch Vorführung einiger für diesen Zweck besonders ge- eigneter Paradepräparate von dem Nutzen der Farben für den Mikro- skopiker zu überzeugen ^. Peinlicher schon ist es, wenn man in grosser Gesellschaft bei Tisch den schützenden Handschuh entfernen und die in buntester Farbenpracht schillernden Hände den verwimderten aber keineswegs bewundernden Blicken seiner schönen Nachbarinnen vor- führen muss. Die Freude, welche man beim Arbeiten an dem intensiven Einwirken und der Haltbarkeit der Farbstoffe reichlich fühlte, wird jetzt einigermaassen gedämpft. Echt sind sie, das ist klar; leider nur zu echt, allen Bemühungen mit Seife und Bürste spottend. Sollten da die schönen Nachbarinnen nicht auf böse Gedanken kommen, wie jener Sanitätsrath? Nun immerhin! So ganz Unrecht werden sie ohnedies nicht haben. Es giebt schon Momente, in denen man sich selber gar zu sehr Handwerker dünkt; in denen mau sich über die gar zu grossen Zeitverluste ärgert, welche fortwährend durch das rein Technische, be- sonders durch das Färben entstehen. Die Sehnsucht nach grösserer Müsse für die Durchforschung der Präparate lässt Einen wohl zuweilen die umständlichen modernen Methoden über Anfertigung verdammen. Aber man meint es nicht so schlimm. Und schwerlich möchte man diese Färbetechnik entbehren, der man so Ausserordentliches verdankt. ') Aerztliche Sprechstunden, Zeitsclirift für naturgemässe Gesundheits- und Krankenpflege. Organ des hygieinischen Vereins zu Berlin von Dr. Paul NiEMEYEK. 2. Folge Bd. III, 1883, p. 17. ■') Die grösste Bewunderung erregte ich bei solchen Gelegenheiten wohl mit Schnitten durch die Oberlippe dunkel gefärbter Katzen mit den Wurzeln der starken Schnurrhaare, welche in doppeltchromsaurem Kali und Chromsäure gehärtet, dann in Carmin gefärbt waren. Die überaus zierlichen Bilder in den prachtvollsten, zum Theil natürUchen, zum Theil durch die Chromsäure und in mehreren Nuancen durch das carminsaure Ammoniak bewirkten Farben sind in der That imponirende Paradepräparate. Zeitsohr. f. wiss. Mikroskopie. I. 1. 5 66 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 1. Was wäre heute die Histologie oliae sie ? Wie wollten wir uns heute ein Durchforschen der thierischen Gewebe denken ohne dieses Hilfsmittel? Doch was soll ich mir Mühe geben, dasselbe zu preisen? Werden doch alle Leser dieser Abhandlung, wenn sie auch nur Einiges von der histo- logischen Forschung wissen, ebenso wie ich von den Vorzügen dieser Untersuchungsmethoden erfüllt sein. Ist es doch nicht zu viel behauptet, wenn ich sage, dass die meisten grossen modernen Entdeckungen der Pathologie und Histologie ohne sie unmöglich gewesen wären ^ Recht nützlich aber ist es für uns Jüngere, von Zeit zu Zeit einmal einen Blick auf den Zustand der Histologie vor 1858 zu werfen. Und wenn wir erkennen, was unsere Lehrer und Meister ohne unsere heutigen Methoden geleistet haben, so werden wir gut thun, den Hut tief vor ihnen abzuziehen. Wenn wir, gewöhnt, wie wir heute sind, den Farben - reactionen einen so ausserordentlichen Antheil an den Erfolgen der heutigen Forschung zuzuschreiben, uns vergegenwärtigen, wie viel be- reits die ältere histologische Wissenschaft ohne jene klargestellt hat; wenn wir die vor 1858 geschriebenen Handbücher der mikroskopischen Anatomie ^ durchstudiren , so wird wohl der Gedanke in uns lebendig 0 Weniger wichtig sind die Tinctionsmethoden für die Botanik, und finden wir daher auch, obschon ein Botaniker zuerst die Carminfärbung anwandte und besclirieb, später wenig Interesse unter den Jüngern dieser Wissenschaft für das mikroskopische Färben. So z. B. geht das für Botaniker geschriebene vortreffliche Werk von Nägeli und Schwendener: ,Das Mikroskop, Theorie und Anwendung desselben' Leipzig 1867 ganz kurz über das Thema der Farb- stofie hinweg, indem es nur „Carmin, essigsaures Cochenilleextract und Anilin- farben" als in Verwendung anführt. In einer Anmerkung wird dann gesagt: „Für die Botanik ist derWerth derselben" (der Tinctionsmethoden) „nach den bisherigen Erfahrungen jedenfalls nicht hoch anzuschlagen". Später jedoch zog auch die botanische Forschung die Färbungen mehr in Anwendung und für gewisse Zweige dieser Wissenschaft können sie heute ebenfalls nicht mehr ent- behrt werden, um zu erkennen, wie die Werthschätzung der Tinctionsmethoden bei den Botanikern stieg, mag man die beiden Auflagen des von dem Botaniker Leopold Dippel verfassten grossen Werkes : ,Das Mkroskop und seine Anwen- dung' vergleichen. Die erste Auflage geht, obgleich sie 1872 erschien, d. h. zu einer Zeit, in welcher die Durchforschung der thierischen Gewebe schon die lebhafteste Anwendung von den Tinctionsmethoden machte, über dieselben kurz hinweg und bespricht sie in einer Art, dass man ersieht, ihr Verfasser macht sich nicht viel aus ihnen. Die neue Auflage dagegen, welche 1882 er- schien, behandelt das Capitel der mikroskopischen Farbstoffe mit grösster Aus- führlichkeit und Sorgfalt. 2) So z. B. Köllikee, Mikroskopische Anatomie. Bd. II, Specielle Gewebe- lehre. Leipzig 1850— 54 und Gerlach, Handbuch der .Gewebelehre, 2. Auflage, Mainz, 1854. I, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 67 werden: „Der Scharfblick des Forschers und sein combinirender Geist vermag doch in der Histologie auch noch etwas". Und ich meine, Gott sei Dank, dass es so ist! Denn sonst sänken wir ja in der That zu Handwerkern herab und unsere Leistungen würden im genauen Verhältniss zur Güte der Farbe stehen. Und dies wäre um so schlimmer, als — es muss das harte Wort doch einmal ausgesprochen werden — unsere vorher so hoch gepriesene Methode doch keineswegs in wissenschaft- licher Weise angewendet wird und angewendet werden kann. Ich komme weiter unten darauf zurück, will aber doch schon hier darauf hinweisen, dass wir hinsichtlich der Theorie der Wirkung des Tinctionsmittels recht sehr im Dunkeln sind. Wir werden wohl Recht haben, wenn wir an- nehmen, dass wir es bei der Tinction mit einem chemischen Process zu thun haben, aber damit sind wir auch am Ende. Welche Stoffe sich da chemisch verbinden und wie sie es thun, können wir durchaus nicht sagen. Und leider müssen wir so den Spruch: „Probiren geht über Studiren" für das mikroskopische Färben gelten lassen. Darum aber thun wir sicherlich gut, uns nicht ganz allein auf dasselbe zu verlassen. Wir können ohne Zweifel die Tinctionsmethode als eine objective Forschungsmethode ansehen und sie als solche ungemein hochschätzen. Aber wir sollen auch ja bedenken, dass wir sie noch nicht ganz be- herrschen, und ferner, dass man der subjectiven Methode des Forscheus niemals entbehren kann. Ich sage dies nicht ganz ohne Grund, denn es scheint mir, als ob sich heute gar Mancher mit allzugrosser Sicherheit auf die Wirkungen der Tinctionsmethoden verliesse und allzuweit gehende Schlüsse aus ihnen ziehe. Nirgends wird so viel für mikroskopische Zwecke gefärbt wie in Deutschland. Und was in anderen Ländern an Tinctionsmethoden geübt wird, ist fast immer von Deutschen oder von in Deutschland ausgebil- deten Ausländern dorthin gebracht worden. Ich fand mehrfach gut durchgebildete americanische und englische Histologen und Zoologen, welche auf den ersten Universitäten ihres Landes studirt hatten und welche dennoch ausser einer Färbung mit Carmin und mit Anilinblau keine Tinctionsmethoden kannten. So findet man auch in den fremden Lehrbüchern der mikroskopischen Technik das Capitel, welches jene Methoden behandelt, stets viel kürzer als in unseren deutschen Werken. So steht z. B. in Beale's grossem Werke: ,How to work with the Microscope' ^, das die sonstige Technik mit grösster und in deutschen Büchern unbekannter Ausführlichkeit bespricht, über die Tinctionsme- thoden herzlich wenig. Ausser einigen Carminlösungeu scheint er nur ') Fünfte Auflage, London und Philadelphia, 1880, p. 124 ff 5* 68 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. noch Auilinblau, die Anilinfarben Mageota und Solferino und Hämatoxy- lin zu kennen. Den letzten Farbstoff braucht er nicht in Form der in Deutschland so gewöhnlichen Krystalle, sondern nur als Extract des Cam- pecheholzes. So auch begnügt sich der bekannte italienische Pathologe und Histologe Bizzozeko in seinem Handbuch der klinischen Mikroskopie mit der Angabe einer Vorschrift für Anwendung des ammoniakalischen Carmins ^, während ein deutsches Lehrbuch für die gleichen Zwecke eine ganze Reihe von Farbstoffen genannt hätte. Es sind daher auch von allen Dingen deutsche Forscher, welche die Tinctionstechnik aus- gebildet haben. Alle wichtigen sie betreffenden Entdeckuugeu sind von Deutschen gemacht worden, selbst der bedeutende französische Histologe Ranviee, ein Meister der Technik, hat in dieser Beziehung keine grossen Neuerungen schaffen können, er hat sich begnügt, die vorhandenen Me- thoden zu verbessern. Ganz allgemein wird Geelach, der Erlanger Anatom, als der Begründer der mikroskopischen Färbetechnik angesehen, da er mit der Entdeckung der tingirenden Kraft des Carmins und mit der Empfehlung dieses Stoffes als mikroskopisches Reagens 2, die Histologen anregte, diesen Stoff nach seiner Methode zu verwenden und weitere Experimente mit ihm und mit anderen Farben zu machen. In der That muss Geelach als Begründer der Tinctionstechnik angesehen werden, da die Histo- logen und Zoologen dieselbe auf seine Empfehlung hin übten, und sie nach Veröffentlichung der erwähnten Schriften sofort eine grosse Ver- breitung fand. Entdecker aber der Carminfärbung und damit der Tinctionsmethode überhaupt kann er auf keinen Fall genannt werden.' Weit davon entfernt, seine grossen Verdienste hinsichtlich der bespro- chenen Technik schmälern zu wollen, muss ich doch hervorheben, dass er keineswegs der Erste war, welcher die Carminfärbung für mikro- skopische Zwecke anwandte und empfahl. Es ging eben hier im Kleinen, wie es mit grossen wissenschaftlichen Entdeckungen der Fall zu sein pflegt. Dieselben werden nicht ganz plötzlich und unerwartet gemacht, sondern sie pflegen durch andere ähnliche, aber nicht durch Erfolg gekrönte Versuche und Bestrebungen vorbereitet zu werden. Epochemachende Neuerungen drängen sich nicht einer Zeit auf, die ') Handbuch der klinischen Mikroskopie von Dr. GruLio Bizzozero. Dtsch. Uebers. Erlangen, 1883, p. 11. -) J. Geelach, Mikroskopische Studien aus dem Gebiete der menschlichen Morphologie, Erlangen 1858 p. 1 ff. und Ueber die Einwirkung von Farbstoff auf lebende Gewebe von demselben. (Wissensch. Älitth. pbys.-med. Soc. zu Erlangen 1858 Heft I p. 5 ff). I, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 69 für sie nicht passt, sondern sie liegen gewissermassen in der Luft jener Zeit, in welcher sie sich so leicht Eingang verschaffen können. Sie sind schon halb geahnt worden und werden deshalb leicht verstanden. Diese allgemeinen Regeln also sind auch in der einfachen Geschichte unseres kleineu Gegenstandes zu erkennen. Schon lange vor Geklach's Publicationen wurden allerlei Versuche gemacht, mikroskopische Prä- parate durch Färbungen deutlicher zu machen. Es war ja auch sehr natürlich, dass mau auf diese Idee kam. Denn einmal sah man fort- während wie die Chromsäure und ihr Salz, das doppeltchromsaure Kali, welche man zum Erhärten der Organe schon damals fleissig gebrauchte, die Gewebe färbte und zwar nicht in gleichmässiger Weise, sondern diese Elemente vor jenen mehr hervorhebend. Dann besass man ja im Jod ein schon seit längerer Zeit beliebtes Mittel, um sehr entschiedene, wenn auch ganz beschränkte Farbenreactionen in den Präparaten her- vorzurufen. Endlich aber, und das ist die Hauptsache, gehörten schon damals zahlreiche Farben in die Schatzkammer des Histologen, Uebte er doch die Injectionstechnik, d. h. er spritzte die Blutgefässe mit far- bigen an Leim oder andere Dinge gebundenen Stoffen aus. Und unter den zu diesen Zwecken gebrauchten Farben war eine, deren Eigen- thümlichkeiten früher oder später mit Sicherheit zur Tinctionsmethode führen mussten. Es ist diejenige, die dann auch den dauernden Kern- punkt jener bilden sollte, der Carmin. Während nämlich die übrigen Injectionsfarben, z. B. Berliner-Blau, Chromgelb, schwefelsaurer Baryt imd andere anorganische Stoffe in feiner körniger Verth eilung angewandt wurden^ benutzte man den Carmin meistens in einer besonderen Weise. Man löste ihn nämlich in Wasser, dem etwas Ammoniak zugesetzt wurde, die entstandene purpurfarbene Flüssigkeit setzte man der in der Wärme gelösten Gelatine hinzu und tropfte endlich vorsichtig so viel Essigsäure zu, bis der Carmin wieder nach Neutralisation des Ammoniak ausfiel und nun in feiner körniger Vertheilung in der Injectionsmasse sich be- fand. War nun aber die Neutralisation nicht vollständig, blieb Am- moniak im Ueberschuss vorhanden, so diffundirte das noch gelöste Car- minammoniak leicht durch die Gefässwandung hindurch und tingirte die umliegenden Gewebe, die einzelnen Elemente in differenter Weise her- vorhebend. Und wenn gar zufällig Gewebestückchen in die nicht zur Injection gebrauchte Carminlösung geriethen, so färbten sie sich in gleicher Weise imd konnten dem Forscher den Werth der neuen Me- thode verrathen. In dieser zufälligen Weise kam auch Gerlach auf dieselbe. Es war also gewiss nicht zu verwundern, wenn mehrere Mikroskopiker unabhängig von einander zur Färbung ihrer Präparate 70 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. mit Carmin geführt wurden. Zuerst, so viel ich bei meinem eifrigen Bemühen, die ersten Versuche, Carmin als Tinctiousmittel zu verwenden, festzustellen, finden konnte, haben die Botaniker Göppeet und Cohn ^ dies gelegentlich gethan. Um beim Studium der Rotation des Zell- inhaltes von Nitella flexilis diesen besser sehen zu können und besonders um zu constatiren, ob die Cilien der kleinen in demselben befindlichen kugligen Körper (die Verfasser nennen sie Wimperkörperchen) sich bewegten oder nicht, setzten sie dem Saft Carminlösung hinzu. Sie bemerkten dabei, dass die erwähnten Wimperkörperchen sich viel dunkler roth färbten als die umgebende Flüssigkeit. Auch in Halle soll man schon vor 1858 mit Carmin tingirt haben, besonders bediente sich Welckee für das Studium der Kerne der Muskelfasern der käuf- lichen rothen Tinte, welche wohl aus Carminlösung bestand ^. In Eng- land hat der Lord S. Gr. Osboene, welcher sich mit botanischen Studien befasste. Pflanzen in Carminlösung wachsen lassen. Er konnte beob- achten, dass sie sich in ihr färbten und dass vor allen Dingen die Zell- kerne dunkler als die übrigen Elemente tingirt wurden. Er berichtete im Juni 1856 ^ über diese Versuche. Eine viel grössere Bedeutimg nun aber als diese erwähnten und mehr gelegentlichen Versuche sind die Bestrebungen Haetig's, durch Färbung der pflanzlichen Gewebe mit Carminlösung und anderen Stofi"en eine neue Untersuchungsmethode zu finden. Wie er selbst sagt, wurde er durch die obige Beobachtimg Göppeet's und Cohn's veranlasst, eine grosse Reihe von Untersuchungen in Bezug auf die Tinctionsfähigkeit der Gewebe und ihrer verschiedenen Elemente anzustellen. Ueber die Resultate derselben hat er zum ersten Mal im August 1854 berichtet* — also zu einer Zeit, wo Geelach, wie er selber sagt (1. c.) — erst auf die Tinctionskraft des Carmin aufmerksam wurde. Er setzte aber später seine Untersuchungen noch weiter fort und kommt au verschiedenen Stellen auf sie zurück. So in dem gleichen Jahr in derselben Zeitschrift ^, dann in dieser im Jahr 1858 ^ und endlich 0 GöppERT und CoHx, Ueber die Rotation des Zellinhaltes von Nitella flexilis. (Botan. Zeitg. 1843 Nr. 37). -) Ich habe dies aus mündlicher Mittheüung. 3) Vegetable cell structure and its formation as seen in the early stages of the growth of the wheat plant. (Transactions of the Microsc. Soc. vol. V. 1856). *) Chlorogen von Dr. Th. Hartig, Botau. Zeitg. 1854 Nr. 32. ■') jUeber die Functionen des Zellenkernes- von Dr. Th. Haktu; (1. c. Nr. 33) und jüeber das Verhalten des Zellkerns bei der Zelleutheilung' (1. c. Nr. 51). «) Botan. Zeitg. 1858 p. 877. I, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 71 in seinem Werk : „Entwicklungsgeschichte des Pflanzenkeims" (Leipzig 1858), wo er sehr ausführlich über die Methode und ihren Werth spricht. An Haetig's Arbeiten und durch sie hervorgerufen reihen sich Untersuchungen des hiesigen Apothekers Herrn Maschke. Auch er färbte zum Zweck botanischer Studien schon vor Geelach's Publication, liess allerdings die Resultate derselben erst 1859 drucken *. Durch Haktig's Behauptungen in Bezug auf die Theorie der Kernfärbung angereizt, unternahm er dann — ohne von Geelach's Publicationen etwas zu wissen — eine Reihe sehr interessanter Untersuchungen, indem er verschiedene Substanzen mit Carmiu färbte ^. Ich komme weiter unten auf die Resultate dieser Experimente zurück. Wie methodisch und wissenschaftlich Haetig bei seinen Tinctionen verfuhr, erkennt man leicht bei der Lectüre seiner Arbeiten. Seine Resultate sind eigentlich weitergehend als die Geelach's. Auch er coustatirte wie dieser, dass die Gewebselemente abgestorben sein müssen, um sich zu färben. Er beobachtete an den pflanzlichen Präparaten Alles, was Geelach an den thierischen fand. Er sucht die Wirkung des Carmins, die „Aufspeicherung" in den Kernen theoretisch zu erklären. Und er prüft sogar eine ganze Reihe von anderen Farbstofi"en auf ihre tingi- renden Wirkungen hin, so den Saft von Phytolacca decandra, Lakmus (das er sehr empfiehlt), Gummigutt, Kupfervitriollösung, Zinnober, schwarze Tinte. Habe ich da Unrecht, wenn ich sage, Haetig ist der Entdecker der Tinctionsmethoden? Aber wunderlicher Weise fanden diese Versuche nur spärliche Nachahmung und die Empfehlung der mikroskopischen Färbimg fiel auf steinigen Boden. Die Saat ging nicht auf. Besonders die Histologen und Zoologen nahmen keine Notiz von jenen Angaben, obgleich doch damals die stets fortschreitende Specia- lisirung der Wissenschaften noch nicht so gewaltig war wie heute, und die Forscher, noch nicht so gedrückt von der ungeheueren Last des Materials des eignen Faches, eher einmal einen Blick auf die Schriften der verwandten Wissenschaften werfen konnten. Um so auffallender ist die gänzliche Nichtbeachtung der HAETio'scheu Angaben, als dieser Forscher nicht etwa eine unbekannte Grösse, sondern ein berühmter, *) 0. Maschke, Ueber einige Metamorphosen in den Zellen der reifenden Frucht von Solanum nigrum. Botan. Zeit. 1859 Nr. 22 und 23. Der Verfasser betont im Beginn seiner Arbeit, dass dieselbe schon 1857 in derselben Weise abgeschlossen gewesen sei, wie er sie jetzt drucken Hesse. 2) 0. Maschke, Pigmentlösung als Reagenz bei mikroskopisch-physio- logischen Untersuchungen 1. c. Nr. 3 und Journ. f. prakt. Chem. v. Ekdmann und Weethee Bd. LXXVL 1859, p. 37. 72 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. anerkannter Vertreter seines Faches, und die Zeitschrift, welche sie brachte, ein vielgelesenes, verbreitetes Journal war. Doch die That- sache ist da. Nur Dippel nimmt in seinem Lehrbuch *■ die Priorität Haktig's hinsichtlich der Tinctionsmethoden in Schutz, sonst finde ich ihn nirgends erwähnt, wenn von diesen die Rede ist. Stets wird Gerlach als Entdecker derselben angegeben, Haktig ist nicht durchgedrungen. Daher habe ich auch die Macht dej* Thatsachen anerkennend, Geklach den Begründer der mikroskopischen Färbung genannt und datire deren Beginn von seiner öffentlichen Empfehlung, die von so grossem Erfolg gekrönt wurde. Aber es schien mir nur gerecht, Haktig's grosse Verdienste in Bezug auf die Tinctionen wieder in das richtige Licht zu stellen und auf sie aufmerksam zu machen. Werfen wir nun, ehe wir auf die spätere Geschichte des Carmins als mikroskopischen Tinctionsfarbstoff eingehen, einen Blick auf diese wichtige Substanz selber, auf ihre Eigenschaften und ihre Bereitungs- weise. Sie wird aus der Cochenille durch Kochen gewonnen. Coche- nille aber ist die im Handel und in der Industrie gebräuchliche Be- nennung eines Insects, des Coccus cacti, aus der Ordnung der Hemipte- ren und der Familie der Coccina (Schildläuse). Das kleine Thierchen (das Männchen misst durchschnittlich 1-5, das Weibchen 2 mm) lebt auf verschiedenen Cactusarten, besonders dem Cactus Opuntia und ist ursprünglich in Mexico und Mittelamerica einheimisch. Die alten Mexicaner züchteten schon, lange bevor Cortez ihr Reich zerstörte, in sorgsamster Weise diese farbespendenden, kleinen Geschöpfe. Von ihnen übernahmen die Spanier die Züchtung derselben. Sie machten sie zum Monopol und suchten die Verbreitung der Thierchen durch strenge Verbote der Ausfuhr zu verhindern. Dennoch wurde das kostbare Insect bald nach anderen Gegenden verpflanzt und dort ge- züchtet. So wird Cochenille jetzt ausser in Mexico auf den West- indischen Inseln, in Peru und Brasilien, auf den Canarischen Inseln, be- sonders Teneriflfa, auf Java und den Philippinen, ja in Algier, im süd- lichen Spanien und auf Sicilien gewonnen. In Mexico wird ausser der künstlich gezüchteten auch die wild vorkommende gesammelt und als schlechteres Product in den Handel gebracht, in den übrigen Ländern kommt das Insect nur auf den für diesen Zweck gepflanzten und ge- pflegten Cactuspflanzen vor. Die Männchen, welche übrigens die Poly- gamie im höchsten Maasse betreiben müssen, da nur eins auf ca. 300 Weibchen kommt, werden nicht gebraucht, nur die letzteren werden ') 1. c. 1. Aufl. p 284; 2. Aufl. p. 715. I 1. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 73 gesammelt. Da die Generationszeit nur sechs Wochen danert, kann man besonders in den tropischen Gegenden mehrere Ernten im Jahr, höchstens aber fünf, halten. Die Weibchen werden kurz vor dem Eier- legen als kugelrund angeschwollene Thierchen von den Pflanzen auf Tücher abgestrichen, getödtet und getrocknet. Das Tödten geschieht in den verschiedenen Ländern auf verschiedene Weise. Hier werden sie in heisses Wasser getaucht oder heissen Dämpfen ausgesetzt, dort werden sie in eisernen Pfannen über Feuer geröstet. In anderen Gegen- den wieder hat man besondere Oefen für diesen Zweck construirt ; end- lich überlässt man auch den glühenden Sonnenstrahlen die Tödtung. Der Farbstoff wird im Innern der Leibeshöhle erzeugt und scheint ein gleichmässig purpurngefärbter Saft zu sein. Bei mikroskopischer Be- trachtung erkennt man jedoch , dass in einem vollkommen farblosen Saft ausserordentlich kleine, purpurne Körnchen enthalten sind. Diese also bilden den werthvollen Farbstoff. Er ist durchaus nicht von gleich- massiger Güte in allen Thierchen. Grosse qualitative Unterschiede können je nach der Gegend, der Production, nach der Behandlung und nach der Zeit der Gewinnung (die erste Ernte, Zaccatilla genannt, liefert die beste Waare) constatirt werden. Die in Mexico wild leben- den Thierchen unserer Coccusart, welche ebenfalls gesammelt und in den Handel gebracht werden, stehen hinter den cultivirten weit an Güte zurück. Natürlich ist der Preis der verschiedenen Sorten sehr un- gleich, und es soll der Cochenillehandel, wegen der Schwierigkeit der richtigen Schätzung, kein leichtes Geschäft sein. Die in Honduras ge- wonnene Zaccatilla steht in der Qualität allen anderen Sorten voran. Obgleich neuerdings die Anilinfarben der Cochenille grosse Concurrenz machen, ist der Handel mit ihr doch noch von grosser Bedeutung. Im Jahr 1880 betrug der Werth der Einfuhr von Cochenille in das Deutsche Reich etwas über 1 '/a Millionen Mark. Für verschiedene neuere Recepte der mikroskopischen Färbetechnik wird die Cochenille direct gebraucht. Bei weitem häufiger aber bedient man sich des aus derselben herge- stellten Farbstoffs, des C ar mi n s. Dieser wird fabrikmässig gewonnen, da aber die dabei nothwendigen Manipulationen grosse Erfahrung und Geschicklichkeit erfordern, um ein gutes Fabrikat herzustellen, so geben sich nur wenige Fabriken damit ab. Das Verfahren ist nicht überall ganz gleich, da man den Farbstoff entweder durch Zusatz von Alaun oder von Salpeter aus dem Rohproduct gewinnt. In einigen Fabriken kocht man 1 Theil Cochenille mit 10 Theilen destillirten Wassers 5 bis 6 Minuten hindurch, setzt V,6 bis ^/^^ Theil Alaun zu, erhitzt noch ein- mal kurze Zeit und lässt dann die Flüssigkeit einige Tage in flachen 74 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 1. Porzellangefässen an der Luft stehen. Hierbei scheidet sich der Farb- stoff aus und zwar zuerst die beste Sorte (etwa 3 bis 4 Procent der Masse). Nach ihrer Entfernung bildet sich noch im Lauf einiger Zeit eine kleinere Quantität einer geringeren Sorte. Nach einer anderen Methode der Darstellung wird 1 Theil Cochenille mit 75 Theilen Wasser 2 Stunden lang gekocht und dann %2 Salpeter und 4 Minuten später */g Sauerkleesalz zugesetzt. Dann wird wieder 10 Minuten lang ge- kocht, und hierauf lässt man den Carmin sich in Porzellangefässen ab- scheiden. Die erste Methode ist die gewöhnlichere, und findet man da- her im käuflichen Carmin stets ein wenig Alaun. Wenn nun schon die Cochenille in sehr verschiedenen Qualitäten vorkommt, so ist dies mit ihrem reinen Farbstofi" noch viel mehr der Fall. Die Carminsorten unterscheiden sich ganz ungemein in Bezug auf Reinheit * und Güte. Dies wird von den Histologen häufig übersehen. Man verwendet viel- fach die erste beste in einer Droguenhandlung oder Apotheke käuf- liche Waare und wundert sich dann über die geringe Wirksamkeit des Stofffes. Man darf trotz des hohen Preises ^ nur die allerbesten Marken verwenden. Carmin Nakarete wird die beste moderne Waare genannt, sie kommt aber wieder in mehreren Marken vor. Leider muss auch ich glauben, was, wenn ich nicht irre, Czokok beklagt, dass neuerdings in der Bereitungsweise des Carmins sich irgend etwas geändert habe und derselbe in Folge dessen sich nicht mehr so gut für mikroskopische Zwecke eigne wie früher. Ich kann jetzt trotz aller Bemühung nicht wieder so sichere und gute Färbungen mit Carmin-Ammoniak erzielen wie früher. Chemisch gesprochen ist unser Farbstoff C arminsäure zu nennen und hat die Zusammensetzung C, - H,g Ojo. Gewiss wird Mancher finden, dass ich über Herkommen und Be- reitungsweise des Carmin gar zu ausführlich berichtet habe. Aber ich glaube, dass dieser Stoff es wahrlich verdient, dass die Histologen mit seiner Naturgeschichte etwas besser bekannt werden, als es bisher meistens der Fall ist ^. Wie viel verdanken wir gerade ihm, und sicher sind % aller gefärbten Sammlungspräparate mit ihm angefertigt. Von ') Je geringer der Farbstoff, desto mehr Alaun enthält er. Den schlechteren Sorten sind auch viel Kreide und andere Stoffe beigefügt. -) Nach dem Verzeichniss einer Grosshandlung kostet jetzt Carmin Nakarete. gute Marke, das Kilogramm 60 M. Im Detaü ist er natürlich viel theurer (etwa 80 M pro Kilo). Schlechtere Sorten kann man für 15 M und darunter haben. ') Begegnete mir doch einmal vor einem Jahre ein angesehener Histo- I, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 75 dem Forscher aber kann man wohl verlangen, dass er den Stoff, mit dem er fast täglich arbeitet, nicht mir äusserlich kennt, sondern dass er auch mit seinen Eigenthümlichkeiten und seinem Herkommen genau ver- traut ist. Carminsäure ist im Wasser nicht löslich, wohl aber in Verbindung mit Ammoniak als carminsaures Ammoniak und mit Essigsäure als essigsaurer Carmin. In diesen Formen wird er hauptsächlich gebraucht. Spricht man ohne weiteren Zusatz von Carminlösung, so meint man wohl stets carminsaures Ammoniak. Lange Zeit wurde diese Verbindung allein gebraucht, und sie ist es gewesen, mit der Hartig und Geklach experimentirten. Späterhin wurde Manches gegen sie eingewandt oder gar direct von ihr abgerathen. Dennoch hat sie nicht verdrängt werden können, und ist sie noch heute fast in allen mikro- skopischen Arbeitsräumen der Histologen, Zoologen und Botaniker zu finden. Weiter unten aber werden wir sehen, dass in den letzten Jahren Carminpräparate hergestellt wurden, welche doch der alten Form als Ammoniakverbindung sehr gefährliche Concurrenz machen. Bisher war mir die letztere als allgemeiner für alles zu verwendender Farbstoff bei weitem am angenehmsten. Ganz besonders aber halte ich das car- minsäure Ammoniak noch immer für das beste Tinctionsmittel des Cen- tralnervensystems, für das Geklach es auch in seiner ersten Publication hauptsächlich empfahl. Eine grosse Anzahl anderer Stoffe sind für die Färbung desselben dringend empfohlen worden, und für einzelne beson- dere Zwecke, wie z. B. die Sichtbarmachung des Fibrillennetzes in der grauen Substanz, ziehe ich auch andere Methoden vor. Aber für die Darstellung der weissen Substanz, für die Zellen mit ihren Ausläufern, für die Neuroglia etc. giebt es ganz entschieden kein besseres Mittel *. Auch für viele andere Organe und Gewebe, dann für isolirte Elemente ist es von vorzüglicher Wirkung. Freilich hat man einige Vorsichts- maassregeln zu beachten, deren Vernachlässigung gewiss viel dazu bei- getragen hat, Diesen oder Jenen gegen unsere Verbindung einzunehmen. Zunächst muss man, wie ich schon erwähnte, sich nur des vorzüglichsten Carminpräparates bedienen. Dann ist es von grosser Wichtigkeit, — und dies habe ich nirgends sonst beachtet gesehen — dass man sich eine concentrirte Lösung vorräthig hält, von der man einige Tropfen in löge, der keine Ahnung von der Verwandtschaft zwischen Cochenille und Car- min hatte. 1) Neuerdings gebrauche ich allerdings ebenso gern carminsaures Natron, das genau dieselbe Wirkung hat. 76 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. destillirtes Wasser giebt. Frische Lösungen wirken lange nicht so gut und können durch das in ihnen enthaltene freie Ammoniak sogar schaden. Ich zerreibe möglichst fein die käuflichen viereckigen Stücke, gebe Wasser und dann soviel Ammoniak hinzu, bis sich der Farbstoff ganz gelöst hat. Diese Lösung lasse ich einige Tage an der Luft in offener Schale stehen und filtrire dann. Die gewonnene, möglichst concentrirte Flüssigkeit lasse ich dann Jahre lang in verkorkter Flasche ruhen und nehme sie, wenn möglich, erst nach zwei Jahren oder noch später in Gebrauch. Sie hat sich vorzüglich gehalten; ist ein wenig ausgefallen, so kann man ja filtriren. Freies Ammoniak ist aber nicht mehr vorhanden, auch nicht in den kleinsten Spuren. Ein beträchtlicher Theil desselben hat sich mit der Kohlensäure der Luft zu kohlen- saurem Ammoniak verbunden, das üebrige ist entwichen. Die An- wesenheit dieser Verbindung ist nun aber von wesentlicher Bedeutung für eine gute Tinction. Ich wusste schon lange, wie grosse Vortheile eine alte Carminlösung hat, schob dies aber allein auf ein Verdunsten des freien Ammoniak. In diesem Jahre aber wurde ich von Herrn Apotheker Maschke, welcher sein schon 1857 bekundetes Interesse für die Carmin- färbung nie verloren hatte, darauf aufmerksam gemacht, dass die An- wesenheit von kohlensaurem oder doppeltkohlensaurem Ammoniak die Färbung befördere *. Ich habe darauf hin viele Versuche gemacht und kann nun behaupten, dass die alten Lösungen von carminsaurem Ammo- niak auch stets etwas kohlensaures oder doppeltkohlensaures Ammoniak enthalten ; und zweitens, dass diese Salze, wie übrigens auch andere Ammoniaksalze, die Färbung der Gewebe und ganz besonders der Zell- kerne sehr imterstützt. Sie wirken offenbar als Beize bei dem Process der Tinction. Ebenfalls sehr wichtig ist es, ganz ungemein verdünnte Lösungen des Carmin zu verwenden und die Präparate in ihnen 24 bis 28 Stunden liegen zu lassen. Die Flüssigkeit, mit der man tingirt, darf nur hellrosa gefärbt sein. Obgleich schon Gerlach in seinen ersten Publicationen diesen Punkt stark betonte, wird doch häufig genug eine concentrirte Lösung, welche durchaus nicht so differenzirend wirkt, an- gewandt. Der grosse Vortheil der Carmintinction mancher anderen gegenüber besteht darin, dass ihr Gelingen nicht von einer bestimmten Vorbehand- lung der Präparate abhängig ist. Zwar findet man hier und da die ') Herr Mabchke hat ebenfalls in letzter Zeit viele Versuche mit Carmin als Färbemittel gemacht und wird über- dieselben baldigst Bericht erstatten. I, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 77 Augabe, dass in Chromsäure oder deren Salzen gehärtete Objecte für diese Färbemethode ungeeignet seien; das ist aber vollkommen unrichtig; nur muss die Erhärtung allerdings eine vorsichtige sein, zu starke Ein- wirkung der Chromsäure verdirbt die Präparate. Frisches und in allen möglichen Mitteln conservirtes und erhärtetes Material kann bei richtiger Behandlung der Carmintinction unterworfen werden. Eine Ausnahme bildet nur das im Alkohol erhärtete Centralnervensystem, dies giebt ebenso- wenig mit unserem als mit anderen Farbstoffen brauchbare Präparate. Ja, will man recht gute Färbungen des Grosshirns erzielen, so muss man sogar jegliche Berührung des Präparates mit Alkohol vor der Fär- bung ängstlich vermeiden ; man darf das Gehirn nur in Chromsalzen härten, muss ohne Alkohol, die Klinge des Messers nur mit Wasser be- netzend, die Schnitte anfertigen'. Endlich ist die Tinction mit ammo- niakalischem Carmin deshalb auch so sehr zu preisen , weil sie die haltbarsten Dauerpräparate liefert. Es ist wahrlich ein Schmerz, wenn man nach Jahren die Schnitte, mit denen man sich so viele Mühe gegeben, und über deren gelungene, die Verhältnisse klar differen- zirende Färbung man sich so sehr gefreut hatte, hervorholt und sie ver- dorben findet. Diese, wie z. B. die Goldpräparate, sind zu dunkel, jene, wie die Hämatoxylinpräparate, fast farblos geworden. Auch die mit sauren Carminlösungen behandelten Schnitte können verblasst sein. Solche Trauer bereiten uns die mit carminsaurem Ammoniak — immer allerdings unter den angegebenen Bedingungen — gefärbten Prä- parate niemals. Sie scheinen im Cauadabalsam eingeschlossen für viele Generationen, für Kind und Kindeskinder bestimmt zu sein. Ich bemerke an meinen ältesten Präparaten, welche nun schon ein Decennium überdauert haben, nicht die geringste Veränderung; und bei Professor Gerlach sah ich im vergangeneu Jahre die ehr- würdigen Rückenmarksschnitte, welche, aus den ersten Jahren der Tinctionsmethode stammend, ihr fünfundzwanzigjähriges Jubiläum fei- ern konnten. Auch sie waren unverändert geblieben und vorzüglich gefärbt. Der Anfang war gemacht ! Eine neue wichtige Technik gefunden ! Gerlach's Empfehlungen hatten den besten Erfolg, und seine Methode gewann schnell zahlreiche Anhänger unter Histologen und Zoologen. Ueberall wandte man das carminsaure Ammoniak bei der Durchforschung ') Es wurde dies zuerst von Gudden und seiner Schule betont. Ich habe mich von der Richtigkeit dieser Angabe sowohl in GcDDE^ 's Laboratorium selbst als auch beim eignen Arbeiten überzeugt. 78 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. der Gewebe an und war mit der Wirkung zufrieden. Da war es sehr natürlich, dass man nun auch andere Farbstoffe, welche sich in Wasser oder Alkohol, vielleicht auch in Chloroform oder Aether lösten, probirte. Es mag wohl schwerlich einen bekannten Farbstoff gegeben haben, der nicht zu solchen Experimenten herangezogen wurde. Der Erfolg war zunächst nicht sehr gross. Man fand in den ersten sechziger Jahren keinen Farbstoff, der sich dem Carmin hinsichtlich der Tinctions- fähigkeit hätte an die Seite stellen können. Dieser färbte das thierische Gewebe überhaupt nicht recht, jener färbte zwar ganz intensiv aber diffus. Und auf die Farbenschönheit allein kam es dem Forscher nicht an; er wollte differente Wirkungen haben. Dieselben wurden nun zwar durch diesen oder jenen Stoff erreicht — aber leider war es nur ein Augenblicksbild, es war nicht fixirt in den Elementen, und die Substanz, in welcher man das Präparat untersuchte oder einschloss, entzog ihm denselben wieder. Dann aber stiess man doch auf Farbstoffe, welche in der Wirkung dem Carmin ähnlich Avaren, wenn sie ihm an Güte auch nicht gleich kamen. Selbstverständlich gab man sich nicht die Mühe, alle die missglückten Versuche den Mitforschern durch Publica- tionen anzuzeigen. Aber gäbe es bei der Kürze der seitdem vergan- genen Zeit nicht hinlängliche Gelegenheit, sich mündlich zu informiren, so würde man doch aus einer Reihe von Schriften iener Jahre ersehen können , wie viel nach neuen Tinctionsmitteln gesucht und mit ihnen experimentirt wurde. Da war es neben zahlreichen anderen Stoffen be- sonders Indigo, Lakmus, die Krappfarbeu Alizariu und Purpurin, die Auszüge der Farbhölzer, des Fernambuk- und des Campeche - Holzes und der Alcannawurzel, auf die man am meisten Vertrauen setzte. Und doch eigneten die meisten aus diesem oder jenem Grunde sich nicht, oder man hatte die richtige Methode noch nicht gefunden. So z. B. probii'te Waldeyek 1863 den wässerigen Auszug des Campeche-Holzes, hauptsächlich um den Axencylinder der Nervenfasern ohne die ihn um- hüllenden Scheiden zu färben. Die Wirkung war eine so mangelhafte, dass er von seinem Gebrauche abrieth und ihm den Farbstoff der Al- cannawurzel vorzog. Nur wenige Jahre später, 1865 konnte Feiedrich BöiEvtEE das Hämatoxylin, eben den Farbstoff des Campecheholzes, als ein vorzügliches Tinctionsmittel empfehlen. Und dies drang dann auch durch und wurde neben dem Carmin das beliebteste. Der Misserfolg des Einen und der Erfolg des Anderen hing davon ab, dass dieser er- kannte, dass das HämatoxyUn in Gegenwart des Alaun eine bedeutend bessere Färbekraft besitzt als ohne ihn, was Waldeyek noch unbekannt blieb. Ob Böhmer zufällig darauf verfiel oder durch die Keuntniss, I, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 79 dass Alaun in der Färberei (als Industrie) eine so grosse Rolle als Beizmittel spielt, darauf hingeleitet wurde, weiss ich nicht. Zu jener Zeit beschenkte die chemische Wissenschaft die civilisirte Menschheit mit einer neuen Art von Farbstoffen, die in kürzester Zeit eine ausserordentliche Wichtigkeit erlangen und in der Farbenindustrie eine förmliche Revolution hervorrufen sollten. Im Jahre 1856 kam die erste Anilinfarbe, das Mauvein in den Handel, 1858 dann entdeckte HoFiviANN das Anilinroth und nun folgten von Zeit zu Zeit neue Ent- deckungen ^ Allmählich lernte man alle Nuancen der Farbenscala aus dem Steinkohlentheer herstellen. Dass die Histologen zu ihren Tinctions- versuchen auch bald die neuen, \-iel besprochenen Anilinfarben mit heranzogen, ist ganz selbstverständlich. Doch waren die Experimente zunächst von geringem Erfolg, man erhielt nicht so differenzirte Prä- parate wie nach Carminfärbung. Waldeyer ^ war, soweit ich beim Quellenstudium eruiren konnte, der Erste, welcher Anilinfarben für die histologische Untersuchung empfahl, nachdem er lange Zeit hindurch mit Rosanilin (Anilinroth), Anilein (Anilinviolett) und Pariser Blau (Anilinblau) experimentirt hatte. Er mochte das neue Tinctionsmittel noch nicht über den Carmin stellen, empfahl es aber besonders wegen der schnellen Wirkung. In den sechziger Jahren aber machte die mikroskopische Verwendung der Anilinfarben geringe Fortschritte, man bi'auchte sie nur nebenbei und sie konnten durchaus nicht zu den Haupttinctionsmitteln gerechnet werden. Als solche und allgemein an- erkannt galten bis in die siebziger Jahre hinein nur Carmin und von 1865 bis 1866 an Hämatoxylin. So auch vermochte der Indigcarmin (indigschwefelsaures Kali), welchen Thieesch 1865 empfahl, als wirkliches Tinctionsmittel sich weder damals noch später viele Freunde zu erwerben. Man färbt wohl hier und da mit ihnen, aber doch ge- wissermaassen nur zur Abwechslung, ohne viel von ihrer Wirkung zu hoffen. Aber schon im folgenden Jahr erkannte ein durch sein unge- mein grosses Geschick in der Injectionstechnik ausgezeichneter For- scher, Chezonszczewski ' in dem Indigcarmin einen passenden Stoff für die Selbstinjection der Drüsencanälchen der Leber und fand in dieser 0 Weiter unten folgt mehr über die Geschichte und die Chemie der Anüinfarben. 2) Waldeyee, Untersuchungen über den Ursprung und Verlauf des Achsen- cyUnders bei Wirbelthieren und Wirbellosen etc. (Zeitschr. f. rationelle Med. 3. Reihe. Bd. XX, H. 3). 3) Chrzonszczewski in Arch. pathol. Anat. Bd. XXXV, 1866, u. Centralbl. f. d. med. Wiss. 1864, Nr. 38. 30 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. Methode ein Hülfsmittel der mikroskopischen Forschung, welches für die Erkenntniss der histologischen und physiologischen Verhältnisse der Leber und der Nieren noch Ausserordentliches leisten sollte. Wir müssen nun aber doch noch einen grossen Fortschritt der Tinctions- techuik aus der Mitte der sechziger Jahre erwähnen: die Methode der Doppelfärbung. Ihre eigentlichen Triumphe freilich feierte dieselbe auch erst im nächsten Decennium. Natürlich, denn aus ihr musste sich um so mehr machen lassen, je mehr dazu geeignete Farben zur Verfügung standen. Und ganz besonders schöne diflferente Bilder geben ver- schiedene Anilinfarben zusammen mit Hämatoxylin, mit Carmin etc. Obgleich nun aber die ausserordentlichen Entdeckungen, welche wir als die Erfolge der Doppeltinction aus den letzten Jahren kennen, den sechziger Jahren versagt blieben, so wurde in ihnen doch eine Farben- mischung zur Begründung der Doppelfärbung entdeckt, welche bis in die heutigen Tage hinein zu den allerbeliebtesten Tinctionsmitteln ge- hörte. Es ist das Pikrocarmin, eine Verbindung aus Pikrinsäure und Carmin. Die Pikrinsäure selbst war wegen ihrer schönen und intensiven citronengelben Farbe ebenfalls wie alle möglichen anderen gefärbten StoiFe zu Versuchen herangezogen , aber man fand sie nicht vor- theilhaft '. Schwaez ^ war der Erste, welcher die Tinctionswirkung des Carmin und der Pikrinsäure combiuirte. Er brachte die in ganz eigenthümlicher Weise vorbereiteten Präparate zuerst in Carmin und dann in Pikrinsäure. Durch den 1867 publicirten Bericht über diese Methode scheint Eaxviee auf die Idee gebracht zu sein, carminsaures Ammoniak und Pikrinsäure zu vermischen und diese Mischung zum Fäi'ben zu benutzen ^. Ihm wird daher auch das Verdienst, Pikrocarmin in die Tinctionstechuik eingeführt zu haben, gewöhnlich zugeschrieben. Eine Art der Doppelfärbung war übrigens schon vor Schwarz ausgeübt' nämlich Präparate, welche durch Metallimpräguationen gefärbt waren, noch in Carmin zu bringen. So haben M. Schtjltze und Rudneff * ein Jahr vor Schwauz durch Osmiumsäure gebräunten oder geschwärzten Schnitten noch eine Carminfärbung verliehen. Und hier komme ich nun ') Ranviek, Technique microscopique (Arch. d. Phys. No. 2 p. 319 u. No. 5 p. 6G6). 2) Scim-iRz, lieber eine Methode doppelter Färbung mikroskopischer Ob- jecte etc (Sitzungsber. d. k. k. Akad. d. Wiss. Wien. Bd. LA^). ^) Ranviee, 1. c. *) M. ScHüLTzE und RüDNEFF, Wclterc INIittheilungen über die Einwir- kung der Osmiumsäure auf thierische Gewebe. Arch. mikr. Anat. Bd. I, 1865, p. 300. I, 1. Gierke: Färberei zu inikroskopisclien Zwecken. 31 zu einer Methode von allerhöchster Wichtigkeit. Wenn ich vorher meinte, dass in den sechziger Jahren für die Tinctionstechnik nicht so epochemachende nnd auch nicht so zahlreiche Fortschritte gemacht wurden, wie in dem fünften und siebenten Decennium unseres Jahrhun- derts, so gilt dies doch nur für die eigentliche Tiuction mit gelösten Farb- stoffen. Die mikroskopische Färbetechuik enthält aber einen zweiten Zweig, die sogenannte Imprägnation ' mit Metallsalzen. Diese steht an Wichtigkeit und Bedeutung gewiss nicht hinter der Tiuction zurück, und verdankt gerade ihr die Wissenschaft eiue Reihe von ganz ungemein schönen Entdeckungen. Und alles Wesentliche dieser Methode wurde in den sechziger Jahren gefunden und publicirt, so dass sich nun dies Decennium in Bezug auf unsere Technik in würdigster Weise den anderen an die Seite stellen kann. Historische Zusamraenstellung der Literatur. Ich habe versucht, in der folgenden Zusammenstellung die ganze Literatur über Tinctionen und Imprägnationen aufzuführen; die ganze, d. h. alle Schriften, Aufsätze und Notizen, welche auch mir einiger- massen wesentlich und wichtig für unsere Technik sind. Eine Grenze musste gezogen werden, imd Abhandlungen, in denen zwar die Färbe- methode, welche den Autoren als Hilfsmittel ihrer Forschung diente, genau und ausführlich auseinandergesetzt wird , aus denen aber für unsere Technik gar nichts Neues zu entnehmen ist, wurden fortgelassen. Ebenso wurden Empfehlungen schon bekannter Methoden nur dann an- geführt , wenn sie entweder durch die wissenschaftliche Bedeutung der P^mpfehlenden Werth haben, oder wenn sie in irgend einer Hinsicht die Kenntnisse in Betreff der empfohlenen Stoffe oder der besprochenen Methode erweitern. Dass auch Arbeiten, besonders des Auslandes, fehlen werden, welche nicht fehlen sollten, ist leider nicht unwahrscheinlich. Doch hoffe ich, dass von den deutschen hierher gehörigen Angaben wenige fehlen. Von den ausländischen konnte ich überhaupt nur die- jenigen aufzählen, welche in den bekanntereu Zeitschriften zu finden sind, oder welche ihren Weg nach Deutschland, sei es auch nur in der Literatur gefunden haben. Wie ich aber mit grösster Bestimmtheit an- nehmen kann, werden im Auslande keine für uns brauchbaren Methoden angewendet werden, die uns gänzlich verborgen geblieben wären. Da 1) Ich werde weiter unten über den Unterschied zwischen diesen Metho- den ausführlich sprechen. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 1. Q 82 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 1,1. dies der erste Versuch ist, die Literatur der Tinctions- und Imprägua- tionsmethoden in möglichster Vollständigkeit zusammenzustellen, und ein zweiter wegen der grossen Mühe und in Rücksicht auf den ausserordent- lichen Zeitverlust nicht so bald angestellt werden wird, möchte es wohl im Interesse der Sache liegen, wenn Autoreu, deren auf die Färbe- technik bezüglichen und irgend Wesentliches bringenden Notizen in der folgenden Tabelle fehlen, ihren Verfasser oder die Redaction der Zeit- schrift für wissenschaftliche Mikroskopie darauf aufmerksam machen imd zugleich die Stelle, au welcher dieselben zu finden sind, nennen wollten. Solche Berichtigungen und Vervollständigungen könnten als Nachtrag veröffentlicht werden und würden den Werth der Tabelle we- sentlich erhöhen. Im Folgenden sind die mit runden Klammern () eingefassten Parthien Meinungsäusserungen des Verfassers, während das Uebrige als in dem Sinne der aufgezählten Forscher gesprochen ist. I. Carniin. Farbstoff der Cochenille. ErsteVer- Wendung. l)Göppert u. Cohn. Ueber die Rotation des Zellinhaltes von Nitella flexilis. (Bo- tan. Zeitung 1849. No. 37). Car min- 2) Hartig. saures Chlorogen (1. c. 1854 Ammo- No. 32). niak. 3) Hartig. Ueber die Fimctio- nen des Zellenkerns (1. c. No. 33). Erster Versuch einer mikroskopischen Tinction. Zum Zweck der Differenzirung der Gewebe. H. färbt das Chlorogen der Pflanzen mit Carmin und zum Vergleich mit einer Reihe anderer Farbstoffe. Versuch einer Erklärung der Tinction. Umfassende und sehr eingehende Unter- suchungen in Bezug auf die Fähigkeit der verschiedenen Elemente des Pflanzengewebes, Carmin zu binden. „Die Farbenaufspeiche- rung" kommt allein dem Kern zu. Sie ist in diesem an das Pflanzeneiweiss und an Leim gebunden. Versuche ausgewaschenen Kleber und Leim zu färben. Beide besitzen die Kraft, Farbstoffe aufzuspeichern, nicht so Gummi oder Schleim von Pflanzen. Bedingung aber für die Färbung der Zellkerne ist, dass die Pflanze oder wenigstens das zu tingirende Gewebe abgestorben ist. So lange die Zellen leben, färben sich ihre Kerne nicht. H. pro- phezeit der Färbemethode eine grosse Zukunft und empfiehlt sie. 1849 1854 1. 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 83 Carmin- saures Ammo- niak. Lebende Pflanzen färben sich beim Wachsen i. Carmin- flüssig- Tceit. Carmin- saures Ammo- niak. Carmin- saures Ammo- niak. 4) Hartig. Ueber das Verkalten des Zellkerns bei der Zellentheilung (1. c. No. 51). 5) Lord S. G. Os- borne. Vegetable cell struc- ture and its forma- tion, as seen in the early stages of the growth ofthe wheat plant. (Trans. Mi- crosc. Soc. vol. V, 1856 June). 6) Hartig. Entwicklungsge- schichte des Pflan- zenkeims. Leipzig 1858. 7) Gerlach. Mikroskopische Stu- dien aus dem Gebiet der menschlichen Morphologie. Erlan- gen 1858. 8) Gerlach. Ueber die Einwir- kung von Farbstoff auf lebende Gewebe. (Wiss.Mitth.d.phys.- med. Soc. Erlangen 1858, p. 5). H. kommt auf seine üntersuchungsmethode zurück. 0. Hess Weizen in Carmiulösung wachsen und fand dann die Gewebe gefärbt. (Also im Widerspruch zu Haktig). O's. Arbeit wird von Beai.e: How to work with the microscope er- wähnt, um zu zeigen, dass die Carmintinction schon vor Geklach angewandt sei. In dieser grossen Arbeit wiederholt H. Manches auf Carminfärbung Bezügliches aus den früheren Abhandlungen. Er Hess Wasser- algen, Charen, die Wurzeln der Hyacinthen- zwiebeln und andere Pflanzen wochenlang in Carminlösung wachsen, ohne dass sie sich färbten. Nach der Tödtung derselben trat die Tinction sofort ein [p. 6]. Im Anhang [p. 154] ei'klärt er die Carminlösung für unentbehrHch bei solchen Untersuchungen wie er angestellt hat und giebt die Bereitungsweise der Lösung an. Auch andere Farbstoffe z. B. Jod benutzte er. — Diese Schrift führt Dippel: „Das Mi- kroskop" an, um Hartig's Priorität in Bezug auf die Tinctionsmethoden zu wahren. Die früheren Arbeiten scheint er nicht zu kennen. Uebrigens haben auch einige andei-e Botaniker Hartig's Verdienste um die Tinctionsmethode hervorgehoben. Medicin und Zoologie aber wissen nichts davon. Schon 4 Jahre vor der PubUcation sah er bei Gelegenheit von Injectionen mit ammo- niakalischem Carmin, der in die Wandung der Gefässe diffundirt war, dass die Kerne sich mehr färbten als die Zellen und InterceUular- stoffe. Dadurch angereizt, färbte er Schnitte des Centralnervensystems mit concentrirter Carminflüssigkeit, ohne hierbei schöne Erfolge zu haben, da sich die Elemente nicht genug differenzirten. Zufällig blieb einmal der Durch- schnitt einer Kleiiihirnwindung in enorm ver- dünnter Carminlösung über Nacht liegen und erkannte G. nun die ungemein differenzirende Wirkung einer solchen. G. berichtet über seine Versuche, lebende thierische Gewebe zu tingiren. Dies gelang niemals. Todte Gewebe ziehen aus sehr ver- dünnten Carminlösungen allmähHch allen Farb- stoff' heraus und sammeln ihn in sich an, und zwar am meisten in den Kernen und Kern- körperchen, weniger in dem ZeUleib und am 6* 1856 1858 1858 84 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I. 1. Substan- zen, wel- che sieh mit Car- min fär- ben und nicht fär- ben. Er- klärung der Fär- bung. Carmin saures Ammo- niaJc. Oxal- saurer Carmin. 9) Masclike. Pigmentlösung als Reagenz bei mikro- skopisch - physiologi- schen Untersuchun- gen. (Botan. Zeitg. 1859, No. 3; Journ. f. prakt. Chemie v. Ebdmanx u. Wer- ther. Bd. LXXVI. 1859. p. 37). 10) Maschke. Ueber einige Meta- morphosen in den Zellen der reifenden Frucht von Solanum nigrum. (Botan. Zeitg.l859,No.22f.). 11) Thiersch. Injectionsmassen von Thiersch und W. Müller. (M. Schultze's Archiv f. mikrosk. Anat. 1865, p. 149). wenigsten in der Zwischensubstanz. Derselbe lässt sich nicht wieder auswaschen. Es schei- nen also sich eigenthümliche Anziehungen zwischen dem Farbstoff und den Eleraentar- theilen geltend zu machen, über deren physi- kalische Gründe uns zunächst noch jede An- deutung fehlt. (In diesen beiden Arbeiten steht nichts, das nicht schon von Hartig in Bezug auf pflanzliche Gewebe gezeigt worden wäre.) M. kennt Gerlach's Arbeiten nicht, nur die von Hartig. Er polemisirt gegen dessen theoretische Erklärung der Tinction und be- richtet über zahlreiche Versuche, die er in Bezug auf die Färbung organischer Körper anstellte. Hauptsächlich cxperimentirte er mit Carmin, dann aber auch mit anderen Farb- stoffen, z. B. Indigo. Er constatii't, dass es zwei Gruppen von organischen Körpern giebt, von denen die eine, deren sämmtliche Glieder zu der Proteinsubstanz gehören [Hornsub- stanz, Eiweiss, Leim], sicü leicht mit Farb- stoffen verbindet, während die andere, deren Glieder zu der Cellulosefamilie gehören [Cellu- lose, pflanzHche Schlauch- und Bläschenmem- branen, Amylum, Zucker, SchleimJ, keinen Farbstoff aufnehmen. Er empfiehlt am Schluss der Arbeit die Tinctionsmethode auf das Eifrigste „Pigmentlösung wird, ich bin dessen gewiss, in Zukunft ebenso unentbehrlich wie Jodlösung sein, und beide werden den Ehrenplatz neben dem Mikroskope mit dem ana- tomischen Messer theilen". (Diese interessante kleine Arbeit ist niemals be- achtet worden). M. theilt mit, dass er 1857 schon diese Untersuchungen abgeschlossen und niederge- schrieben habe. Er bediente sich füi- sie des Carmins. Carmin 1 Th. Liq. ammon. caust. 1 Th. Aq. dest. 3 Th. Von dieser Lösung 1 Vol. mit 8 Voll, einer wässerigen Oxalsäurelösung [1 : 22] zu mischen. Zu dieser Mischung 12 Voll. Alcohol. absol. Hierauf wii'd filtrirt. Das Filtrat kann nach Belieben durch Zusatz von Oxalsäure mehr dem Orangeroth, von Ammoniak dem Violett genähert werden. Concentrirt färbt diese Flüssigkeit in we- nigen Secunden, wobei die Zellen sich am intensivsten tingiren. • Will man langsamer I, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 85 Borax Carmin, Ulla- farbig. C armin- saures Ammo- niak mit Glycerin und Alko- hol. 12) Beale. How to werk with the Miscroscoi^e. 5. Aufl. London 1880 und in einigen frü- heren Auflagen. färben, so verdünnt man mit Weingeist von 70 bis 80 Procent [bei Zusatz von Alcoh. absol. fällt saures oxalsaures Ammoniak aus]. Bei diffuser oder zu starker Färbung kommen die Schnitte in eine Lösung von Oxalsäure und Alkohol, in der sie sich aufhellen. Die Tinctionsflüssigkeit ist für alle Präparate zu empfehlen. Vorbereitung gleichgültig. Borax 4 Th. Aq. dest. 56 Th. Carmin 1 Th. 1 Vol. dieser Lösung mit 2 Voll. Alcoh. absol. zu vermischen, dann zu filtriren. Für durch Chromsäure entkalkte Knochen und Knorpel. Bei Ueberfärbung kann man auf- hellen in einer Lösung von Borax oder Oxal- säure in Weingeist. Carmin Liq. Ammon. caust. Glycerin Aq. dest. Alkohol 10 Gran (0 6 g) '/j Drachme (3-75 g) 2 Unzen (600 g) 2 Unzen (60-0 g) Vz Unze (15-0 g) Der Carmin wird zuerst im Proberöhrchen mit dem Ammoniak übergössen, stark ge- schüttelt. Dann für einige Minuten gekocht. Darauf lässt man abkühlen und giebt nach einer Stunde Wasser, Glycerin und Alkohol hinzu. Endlich filtrirt mau und kann nun für Monate die klare Flüssigkeit aufbewahren, ohne dass sie leidet. Höchstens muss man einmal 1 oder 2 Tropfen Ammoniakflüssigkeit hinzusetzen, wenn Carmin ausfallen sollte. (B. ist ausserordentlich von dieser Form des carminsauren Ammoniaks eingenommen und stellt sie über alle anderen. Ich sehe durch- aus nicht [und ich habe sehr viel mit ihr ge- färbt], dass sie irgendwie vor dem einfachen Carmin-Ammoniak Vortheile hat. Für Schnitte auf keinen Fall, da für diese eine möglichst starke Verdünnung am günstigsten wirkt und in einer solchen das Glycerin und der Al- kohol jener Färbeflüssigkeit gar nicht mehr in Betracht kommen. Für das Durchfärben, d. h. also für das Färben ganzer Stücke, die erst nach der Tinction in Schnitte zerlegt werden sollen, kann man sie freilich eher em- pfehlen, da sich dieselben in ihr besser halten als in dem einfachen ammoniakalischen Carmin in Wasser. Es wäre möglich, dass das Gly- cerin den Farbstoff besser in grosse Stücke eindringen Hesse, hauptsächlich wirkt aber in dieser Hinsicht der Alkohol). 1865 1866 86 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. Essig- saurer Carmin. Carmin- saures Ammo- niak. Borax- Carmin. Ausge- faultes carmin- saures Ammo- niak. 13) Schweigger- Seidel. CYON,'Ueber die Ner- ven des Peritoneum. (Ber. d. Sachs. Ge- seUs. d. Wiss. 1868, p. 125). 14) Rollet. Bemerkungen zur Kenntniss der Lab- drüsen und der Ma- genschleimhaut. (Unters, a. d. Inst. f. Physiol. u. Histol. Graz. Heft 2, 1871, p. 143). 15) Grancher. Techniquemikrosko- pique. Des usages de la Solution am- moniacale de carmin en histologie. (Arch. de Physiol. t. IV p. 770). Cyon arbeitete im histologischen Labora- torium zu Leipzig und verwendete die von Schweigger-Seidel viel gebrauchte saure Car- minlösung, die er warm empfiehlt. Die Vorschrift Schweiggek - Seidel's ist diese : Gewöhnliches carminsaures Ammoniak wird im Ueberschuss mit Essigsäure versetzt, bis eine weinrothe Flüssigkeit entsteht. Die- selbe muss filtrirt werden. Die difiPus gefärbten Präparate müssen in mit Salzsäure angesäuertem Glycerin [1 : 200] gebracht werden. Der Farbstoff zieht sich dann auf die Kerne zurück, während das Protoplasma entfärbt wird. Die Päparate sind vor dem Einschluss sehr stark auszuwaschen. (Und dennoch nicht so haltbar wie die mit carminsaurem Ammoniak gefärbten). R. giebt mehrere Verfahrungsweisen, um' Carminlösungen haltbarer zu machen, sodass sie bestimmte Mengen freier Säuren vertragen, ohne dass der Farbstoff gefällt wird. G. prüft die Elemente des thierischen Körpers auf ihr Verhalten gegen carminsaures Ammoniak. Er findet : Je energischer die Vi- talität einer Zelle, desto lebhafter färbt sie sich. Elemente, welche schon durch andere Mittel, z. B. durch Chromsäure, Pikrinsäure, doppelt chromsaures Kali, Chlorgold, Jod etc. gefärbt sind, nehmen Carmin gar nicht mehr oder kaum noch auf. Ebenso verhalten sich die mit physiologischem Farbstoff gefüllten Elemente , z. B. die rothen Blutkörperchen. Diese nehmen nach Entfernung des Hämo- globins den Carmin gern auf (Gegen obige Behauptungen ist viel ein- zuwenden). 16) Woodward. Carmin 1 Th., gesättigte Boraxlösung 60 Th. The best modo of : Vermischt mit dem doppelten Vol. Alkohol carmine staining the | absolut. Er filtrirt, benutzt aber nicht wie tissues. (Monthly Mi- Thikksch das Filtrat, sondern den Rückstand, crosc. Journ. vol. VIII d. h. Krystalle von Borax-Carmin, die er wieder p. 37). auflöst und färbt. 17) Betz. B. steUt starke Carminlösung so lange in die Methode, Sonne, bis ein schmutzigrother, flockiger Nie- feine Schnitte a. d. ' derschlag entsteht. Jetzt wird filtrirt und das Centralnervensystem Filtrat benutzt, anzufertigen. (Mit- (Es ist dies der sogenannte „ausgefällte theil. d. ärztl. Ver. Wien, 1872 Bd. I, p. 9). Carmin". Er soll sich nun besser halten). 1, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 87 Carmin- saures Amnio- nialc mit Draper's Tinte ver- setzt. 1. Car- minsaures Ammo- niak mit Alkohol. IL Hoy- er^s alko- holische Carmin- lösung. 18) Lieberkühn. Ueber die Einwir- kung des Alizarin auf die Gewebe des lebenden Körpers. (Sitzungsber. d. Ge- sells. z. Beförderung d. ges. Naturwiss. Marburg, 1874, No. 3 p. 33). 19) Richardsoll. Mode of staining ani- mal tissues of a per- manent purple grey colour.(Quart. Journ. Microsc. Sei. 1874, p. 281). 20) Po liehet et Le^off. Sur la fixation du carmin de Cochenille dans les elements anatomiques vivants. (Gaz. med. de Paris 1876, No. 52). 21) Hoyer. Beiträge zur anato- mischen und histo- logischen Technik. (Arch. mikr. Anat. Bd. XIII p. 649). Versuche, ob lebende Gewebe sich färben. Injectionen von Carmin - Ammoniak in den Rückenlymphsack des Frosches. (S. oben). Carminlösung mit Tinte versetzt wird Die Bestandtheile dieser Tinte Draper's dichrotischer von R. sehr empfohlen. sind unbekannt. (Siehe 17 und oben den Text). H. meint, dass Zusatz von Alkohol die Wirksamkeit des Carmin-Ammoniak erhöhe. Darauf beruhe die Beliebtheit der BsALE'schen Lösung, denn das Glycei-in in derselben schade nur. Eine sehr intensiv färbende Carminflüssig- keit erhält er in folgender umständlichen Weise : Carmin im Kolben mit Alkohol, dem einige Procent Schwefelsäure beigemischt sind, über- gössen und bis zur Lösung erhitzt. Filtrirt und stark mit Wasser versetzt. Dem Filtrat wird Bleizucker so lange zugesetzt, als sich noch ein rosenrother Niederschlag von schwe- felsaurem Blei bildet. Sobald sich violette Niederschläge bilden, wird filtrirt, und zum Filtrat abermals so lange Bleizucker zugesetzt, als noch violette Niederschläge entstehen. Diese nun werden gesammelt, gut ausgewaschen und getrocknet, dann in ein wenig starkem Alkohol suspendirt und hierzu stark mit Schwe- felsäure angesäuerter Alkohol tropfenweise hin- zugesetzt, bis der Niederschlag sich entfärbt imd der Alkohol intensiv roth geworden ist. Diese alkoholische Lösung färbt ungemein in- tensiv. 1874 1876 88 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. Carmin- saures Ammo- niak durch Unter- stützun g der Wärme. Alkoho- lische Co- clienüle- tinctur. Alaun- Carmin. Modifi- ' cirte Schweig- ger - Sei- deVsche saure Carmin- lösung. Alkoholi- sche Carmin- löstmg. 22) Obersteiner. Technische Notiz. (Arch. mikrosk.Anat. Bd. XV p. 136). Carmin in kochender Essig- säure gelöst. 23) P. Mayer. Die Verwendbarkeit der Cochenille in der mikroskopischen Technik. (Zool. Anz. 1878, No. 15 p. 345). 24) Grenadier. Einige Notizen zur Tinctionstechnik be- sonders zur Kern- färbung. (Arch. mi- krosk. Anat. Ed. XVI p. 463). 25) Grenadier. (1. c). 26) Grenadier. (1. c). 27) Schneider. Ueber die Auflösung der Eier und Sper- matozoon in den Ge- schlechtsorganen. (Zool. Anz. 1880, v. 12. Jan. u. 24. Mai). 0. färbt Schnitte des Centralnervensystems j| 1878 in der Wärme über dem Wasserbade und ' findet, dass sie sich ungemein schnell [2 bis 5 Minuten] und sehr distinct tingiren. Er lässt das Wasser des Bades kochen und setzt Car- minlösung luid Schnitte in einem Uhrschälchen den heissen Dämpfen aus. Die Lösung scheint er ziemlich concentrirt zu nehmen, giebt aber Näheres nicht an. (Ich habe diese Methode mehrfach geprüft und kann O.'s Angaben bestätigen. Ist man aber nicht geradezu auf Schnellfärbung ange- wiesen, so ist sie nicht zu empfehlen). Gepulverte Cochenille wird mit 70procen- tigem Alkohol mehrere Tage infundirt, darauf! fiitrirt. Das Verhältniss ist 1 g Cochenille auf 8 bis 10 cc Alkohol. — Säurefreie Alkohol- präparate eignen sich zur Färbung. (Die weiter unten aufgeführte Abkochung von Cochenille mit Alaun ist weit empfehlens- werther). Eine wässerige Lösung von Alaun oder 1 1879 Alaun-Ammoniak [1 bis 5 Procent oder auch stärker] wird mit ",, bis 1 Procent gepulvertem Carmin 10 bis 20 Minuten hindurch gekocht und nach dem Erkalten fiitrirt. Die purpur- farbene Lösung färbt sehr schnell und nur die Kerne ; auch bei langer Einwirkung tritt keine Ueberfärbung ein. Eine ein- bis zweiprocentige Boraxlösung [in Wasser] wird mit '/,, bis ^/^ Procent Car- min gekocht. Die erkaltete Lösung tropfen- weise mit verdünnter Essigsäure versetzt, bis sie die Färbung der gewöhnlichen ammoniaka- lischen Carminlösung angenommen hat. Nach 24 Stunden wird fiitrirt. Die Lösung färbt diffus. Um die Färbung auf die Kerne zu be- schränken, wird im Uhrschälchen, in dem 50- bis 70procentiger Alkohol mit einem Tropfen Salzsäure sich befindet, gewaschen. In etwa 50 cc 60- bis SOprocentigem Al- kohol, der mit 3 bis 4 Tropfen Salzsäure an- gesäuert ist, wird eine Messerspitze Carmin 10 Minuten gekocht. Nach dem Erkalten fiitrirt. Auch die mit dieser Tinctur gefärbten Schnitte bedürfen noch einer Behandlung mit Salzsäure, um eine Kernfarbung zu zeigen, sonst sind sie diffus tingirt. (Die beiden letzten Carmintincturen bilden keine Vermehrung der werthvoUen Färbemittel). S. trägt in kochende Essigsäure von 45 1 1880 Procent so viel Carmin, wie sich löst und färbt entweder mit dieser Flüssigkeit direct oder verdünnt sie bis zu 1 Procent. 1, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 89 Älkoholi sehe Co- chenille- Tinctur. Älaim- Cochenille. 28) P. Mayer. üeber die in der Zoologischen Station zu Neapel gebräuch- lichen Methoden zur mikroskopischen Untersuchung. (Mtth. a. d. Zool. Stat. Neapel Bd. II p. 1 bis 27), 29) Czokor. Die Cochenille-Car- minlösung. (Arch. mikrosk. Anat. Bd. XVIII p. 712). Carmin- saures Aymno- niak in Pulver- form. Gröblich zerkleinerte Cochenille wird mit 70procentigem Alkohol übergössen und mehrere Tage damit in Berührung gelassen. Die Tinc- aber sehr discret. tur färbt nicht gerade stark 30) Hoyer. Beiträge zur histo- logischen Technik. (Biol. Centralbl. Bd. II p. 17). 70 g Cochenille, 70 g gebrannter Alaun zusammen in einer Reibschale fein veri'ieben. Dazu 700 g Aq. dest. Das Ganze zum Sieden gebracht und auf 400 g eingekocht. Nach dem Abkühlen Avird eine Spur Carbolsäure [zur besseren Conservirung] zugesetzt und dann filtrirt [vielleicht mehrere Male]. Die Flüssig- keit ist violett, hält sich etwa ein halbes Jahr und muss dann wieder filtrirt und mit Carbol- säure versetzt werden. Für alle Gewebe und nach allen Erhärtungsmethoden. Ausgezeich- netes Kernfärbemittel. Die Kerne nehmen etwa den Ton des Hämatoxyüns an, während die übrigen Bestandtheile in den verschiedenen Nuancen von Kirschroth bis Dunkelroth ge- färbt werden. (In der That der beste Ersatz des carmin- sauren Ammoniak und als Kernfärbemittel diesem vorzuziehen. Es ersetzt besonders das Hämatoxylin und kann für die gewöhnlichen Zwecke allen anderen Tinctionsmitteln, be- sonders auch den Anilinfarben, vorgezogen werden. Besonders eignet es sich auch für Anfänger, für die Laboranten in den Instituten und für die mikroskopischen Curse. Für das Centralnervensystem ist es nur zu verwenden, wenn es auf die alleinige Darstellung der Kerne ankommt. Die Nervenzellen und ihre Ausläufer treten nicht hervor. Ein Uebelstand ist, dass sehr oft, besonders im Sommer, Nie- derschläge erfolgen. Ich filtrire daher fast regel- mässig vor dem Gebrauch). H. hält mit Recht ein Trockenpräparat des carminsauren Ammoniak, das sich jeden Augenblick in ganz bestimmter Menge ver- wenden lässt und unbegrenzte Zeit hindurch aufbewahrt werden kann, für ein dringendes Bedürfniss. Um es herzustellen, löst er 1 g Carmin in 1 bis 2 cc starker Ammoniakflüssig- keit und 6 bis 8 cc Aq. dest., erwärmt so lange, bis das überschüssige Ammoniak sich verflüchtigt hat. [IVIan merkt dies daran, dass beim Sieden keine grossen Blasen mehr er- scheinen, sondern kleine. Auch wii'd die Flüssigkeit mehr hellroth]. Nach dem Erkalten wird filtrirt, und man erhält eine neutrale Lö- sung, welche mit ein oder mehr Procent Chlo- 1880 1882 90 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. Carmin- saures Natron in Pulver. 31) Maschke, ralhydrat versetzt, aufbewahrt und wie ge- wöhnlicher Ammoniakcarmin verwendet werden kann. Die Lösung wird nun mit dem 4- bis 6fachen Vol. starken Alkohols versetzt. Ein hellrother massenhafter Niederschlag fällt aus. Dieser wird durch Abfiltriren gewonnen , ge- waschen und getrocknet und kann nun als Trockenpräparat dienen. Diuxh Zusatz von Alkohol mit etwas Gly- cerin und Chloralhydrat vermischt, kann man das Pulver in eine Paste verwandeln, die eben- falls sehr haltbar ist. Beide Präparate be- stehen aus vollkommen neutralem carminsauren Ammoniak. Sie besitzen eme ausgezeichnete Färbekraft und sind sehr bequem. (Eine von Hoyer selbst dargestellte Probe wirkte als Tinctionsmittel sehr gut, von ihm an Geheimrath Heidenhain übersandte Prä- parate des Rückenmarks Hessen kaum etwas zu wünschen übrig. Durch den Handel be- zogenes, nach Hotek's Vorschrift gefertigtes Carminpräparat war sehr viel geringwerthiger und hatte lange nicht die Tinctionsfähigkeit wie gutes gewöhnliches Carminammoniak). (Herr Apotheker Maschke in Breslau hat sich in letzter Zeit sehr viel mit Experi- menten im Interesse der Carminfärbung be- schäftigt. Er stellte verschiedene Carminprä- parate her, darunter carminsaures Natron in trockener Form. Mit diesem habe ich in letzter Zeit sehr viele Tinctionsversuche angestellt und fand, dass es nach Zusatz eines Ammon- salzes in sehr geringer Menge, z. B. des doppeltkohlensauren Ammoniak [ich halte eine gesättigte Lösung desselben vorräthig und füge beim Gebrauch auf eine kleine Uhrschale Car- minlösung 2 bis 5 Tropfen dieser Lösung hin- zu] ausgezeichnete Dienste leistet. Es lässt sich genau in gleicher Weise verwenden wie carminsaures Ammoniak und hat dieselbe Wir- kung. Es ist aber selbstverständlich viel be- quemer zum Gebrauch und hat den Vortheil, dass man bestimmte Quantitäten verwenden kann. Dies Präparat wie das HoYER'sche eignen sich deshalb auch besonders für Doppelfär- bungen, zumal für Pikrocarminlösungen. Dem käuflich erworbenen HoYER'schen ziehe ich es aber entschieden vor). 1882 Ich lasse nun noch einige Carminpräparate folgen, von denen ich wohl den ersten Hersteller und Empfehler anzuführen vermag, ohne aber Jahres- zahl und Ort der Empfehlung angeben zu können. Einige von ihnen gehören zu den bekanntesten Carminpräparaten. 1, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 91 Essig- saurer Carmin. Neutrale Carmin- färbung. 32) Frey. Das Mikroskop und die mikroskopische Technik. 7. Aufl. Leipzig 1881. (In der 3. Aufl. 1868 noch nicht ange- ' geben). 33) Perls. Nach mündlicher Mittheihing an P^rey. In dessen .das jNIikro- skop und die mikro- skopische Technik' 7. Aufl. 1881. Carmin- roth. Präpa- rate in Ameisen- säure zu loaschen. 34) Rollet. 35) Ranvier. F. löst den Carmin 'gleich in der Essig- säui'e, setzt dann Wasser zu und liltrirt. P. findet, dass der gegenwärtig im Handel vorkommende Carmin (jedenfalls nicht alle Sorten. Von meinen besten Sorten löste sich so gut wie nichts in Wasser) an Wasser ge- nügenden Farbstoff abgiebt, um damit zu fär- ben. Als gute Bereitimgsweise wird empfohlen : Gepulverter Carmin wird auf dem Wasser- bade mit kleiner Flamme leicht gekocht und eine Stunde stehen gelassen. Dann wird filtrirt. Zuerst bleibt das Filtrat noch trübe. Man giesse daher dasselbe noch einmal auf dasselbe Filter, bis die Poren desselben sich etwas verstopfen und das Filtrat klar und schön roth wird. Die Flüssigkeit soll besonders Chi-omsäurepräparate besser färben als das carminsaure Ammoniak. (Ich kann diese Carminflüssigkeit dem guten und richtig angewandten carminsauren Ammoniak oder Natron durchaus nicht gleich stellen. Man erreicht keine discreten Fär- bungen). R. empfiehlt zum Färben das Carminroth in Wasser gelöst. (Kocht man die gewöhnliche Carminsaure mit verdünnter Schwefelsäure, so zerfällt sie in einen nicht gährungsfähigen Zucker und in eine dunkelrothe Masse, das Carminroth CiiHioO^. Dies ist in Wasser und Alkohol leicht löslich. Es hat durchaus keine Vortheile vor der Carminsaure). R. empfiehlt, um diffuse Carmin färbun gen distincter zu machen, die Schnitte anstatt in Essig- oder Salzsäure, in Ameisensäure zu bringen [Glycerin 100, Ameisensäure 1]. (Den zahlreichen in dieser Zusammen- stellung vorkommenden Einwänden gegen den Gebrauch des carminsauren Ammoniaks muss ich noch einmal entgegnen : 1) Ich habe concentrirte Lösungen desselben Jahre hindurch aufbewahrt, ohne dass Fäulniss auf- trat. Ich besitze noch einen kleinen Rest einer vor 8 Jahren angefertigten Lösung. Freilich stammten dieselben von vorzüglichem, vor vielen Jahren fabricirtem Carmin. 2) Die Färbungen gelingen, wenn man die früher erwähnten Vor- schriftsmaassregeln beachtet, vorzüglich. Gerade auch die Chromsäurepräparate tingiren sich leicht. 3) Das Misslingen beruht meistens auf der Methode oder auf der schlechten Qualität 92 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. T, 1. Carmin- saures Ammo- niak mit Uran- salsen. des Fabrikats. 4) Ein geringer Zusatz von ij Ammonsalzen [vielleicht auch anderen Salzen] erhöht die Wirkung ungemein und ist viel- 'j leicht für differente Tinction nothwendig. In der alten ammoniakalischen Carminlösung be- ;! findet sich bereits kohlensaures oder doppelt- kohlensaures Ammoniak, da das überschüssige Ammoniak sich mit der Kohlensäure der Luft verbunden hat). Obgleich, wie man aus meiner Zusammen- stellung ersieht, wahrlich genug Vorschriften für Carmintinctionen existiren und besonders , viele Vorschriften, die man ohne jeden Schaden ' entbehren könnte, will ich hier dennoch eine anreihen, die ich bei Untersuchungen des Centralnervensystems in früheren Jahren vieli angewendet habe. Sie empfiehlt sich beson- ders auch dann, wenn sich das Material nach , allzulangem Liegen in Alkohol nach der Er- härtung in Chromsalzen, oder auch nach zu starker Einwirkung der Chromsäure in derj Carminlösung allein nicht genügend tin.girt. ' Ich lege nämlich die Schnitte für 24 Stun- 1 den in eine Iprocentige Lösung [wässerige] von salpetersaurem oder schwefelsaurem [ebenso j gut ist auch salzsaures] üranoxyd, wasche sie gut in Wasser ab [dies ist sehr nöthig, sonst fällt Carmin aus und die Körnchen beschmutzen die Schnitte], und bringe sie für 10 bis 24; Stunden in sehr verdünnte ammoniakalische Carminlösung. Die Präparate, welche durch, das Uransalz niu- leicht gelblich oder grünlich' tingirt waren, färben sich dunkelpurpurn, die Kerne treten etwas deutlicher als bei der Färbung mit Carmin allein hervor, die Nerven- zellen und deren Fortsätze kommen ungemein schön heraus. Für andere Organe eignet sich die Methode zwar auch, hat aber da keine Vortheile vor der einfachen Färbung. Man kann auch eine dunkelpurpurfarbene Tinctions- flüssigkeit herstellen, indem man zu einer ver- dünnten Lösung des carminsauren Ammoniak etwas von einem der genannten Ui*ansalze i [1 : 100] hinzufügt und nach einigen Stunden filtrirt. Diese Flüssigkeit färbt Schnitte des centralen Nervensystems gleichfalls sehr inten- siv und cUscret. Ich ziehe aber die erster- wähnte, umständlichere Methode vor. (Carmin wird ausserordentlich oft für Doppelfärbungen benutzt. Siehe dort). 1872 1, 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 93 II. Hämatoxylin. Farbstoff des Campecheholzes. Wässe- rige Lö- sung des Farbstoffs aus Cam- pecJieholz. Häma- toxylin mit Alkohol lind Alaun. Häma- toxylin ohne Alaun. 36) Waldeyer. Untersuchungen über den Ursprung und den Verlauf des Achsen cylinders bei Wirbelthieren und Wirbellosen. Hkxlk und Pfeufeh's Zeit- schr. f. rationelle Med. 3. Reihe Bd. XX p. 200). 37) Böhmer. Aerztl. Intelligenzb, f. Baiern 1865. No. 38. 38) Frey Die Hämatoxylinfär- W. probirt,' den Achsencylinder der Nerven- fasern ausser mit Carmin und Anilinfarben auch mit den Farbstofien der Alcannawurzel, des Fernambuk- und des Campecheholzes zu fär- ben. Er erhält aber nur mit der Alcannaflüssig- keit Resultate. Die wässerigen Extracte der bei- den Farbhölzer färben zu Vieles, ausser dem Achsencylinder auch das Nervenmark. Er kann daher diese Stoffe nicht empfehlen. 1) Hämatoxylin in Krystallen 0-35 g, Ale. absol. lO'O g [Dunkelbraune, nicht dem Ver- derben ausgesetzte Flüssigkeit]. 2) Alumen depur. O'IO g, Aq. dest. 300 g. — Von der ersten Lösung werden einige Tropfen je nach der Stärke der gewünschten Concentration zu der zweiten zugegeben. Es entsteht eine tief blauviolette Flüssigkeit. (Man hält am besten die alkoholische Flüssig- keit für .Jahre vorräthig. Auch die fertige Tinctionsflüssigkeit darf man nicht frisch ver- wenden, da die Präparate dann zu sehr nach- dunkeln. Man lässt sie vielmehr am Licht stehen, bis sie nicht mehr dunkler wird, d. h. mindestens 3 bis 4 Tage. Diese Flüssigkeit verdirbt nicht leicht, doch muss sie öfter, be- sonders im Sommer filtrirt werden. Die Vor- behandlung der Präparate ist gleichgültig, sie färbt ebenso energisch und schnell die in Chromsäure wie die in Alkohol erhärteten Präparate. Man hat sehr aufzupassen, um Ueberfärbung zu verhüten. Zwar kann man in diesem Fall mit Säuren [besonders Essig- säure] auswaschen; die Präparate sind dann aber weniger haltbar. Der Fehler des Tinctions- mittels liegt überhaupt darin, dass die Präparate, zumal die in Chromsäure erhärteten, im Lauf der Jahre verblassen). F. empfiehlt sehr die neue BönMER'sche Hämatoxylintinction. Für Präparate, welche bung. (Arch.mikrosk. [ in Chromsäure, doppelt chromsaurem Kali und Anat. Bd. IV p. 345). | Kupfervitriol gehärtet sind , kann man die Lösimg ohne Alaun anwenden. Die alkoho- lische Hämatoxylinlösung träufelt man einfach in Wasser imd färbt hiermit. F. meint, dass die Färbung der Chrompräparate auf dem Princip der von Leykauf in Nürnberg ausge- gebenen Schreibtinte beruhe. [Siehe Wagner's ehem. Technol. 3. Aufl. p. 532]. 1863 1865 1868 94 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I. 1. Häma- toxylin zur Tinc- tion der animalen Muslceln. Cam- peeheJiolz- Extract mit Alaun und Alko- hol. Häma- toxylin- prüparate mit Salz- säure be- handelt. Hüma- toxylin mit Chlor- calcium und Alaun. 39) Merkel. Der quergestreifte Muskel. (Arch. mi- krosk. Auat. Ed. IX p. 293). 40) Arnold. Logwood as a stain- ingmaterial for anim- al tissues. (Quart. Journ. Microsc. 1873 p. 86). 41) Lawson Tait. Journ. of Anat. a. Pliysiol.vol.IXp.250. 42) Kleiuenberg. Angegeben in „Grundzüge der Ent- wicklungsgeschichte der Thiere" von FusTEu und Balfol'r deutsch von Ki.einen- BERG Lpz. 1876. Cam- pechehoJz- extract mit Alaun u.Kiipfer- Vitriol. 43) Alleyre Cook. Note on logwood staining Solution (Journ. of Anat. a. Physiol. vol. XIV p. 140). M. fand , dass Elauholzextract ein sehr empfindliches Reagenz auf alles Dopj^elt- brechende in der Muskelfaser sei. Einfach- brechendes bleibt ungefärbt. Campecheholz mit 3fachem Vol. Alaun zerrieben. In Wasser ausgezogen und mit V4 seines Vol. mit 25procentigem Alkohol ver- setzt. (Kann das BönMER'sche Hämatoxylin nur in dem Fall ersetzen, dass keine Krystalle zu haben sind). L. T. empfiehlt, die Präparate nach der Hämatoxylinfärbung mit 4procentiger Salpeter- säin-e zu behandeln. Die Kerne erscheinen dann braun auf kirschrothem Grunde. (Die Präparate sind durchaus unbrauch- bar für das Aufbewahren, da sie abblassen). Die KLEiNESBERü'sche Hämatoxylinlösung wird folgendermaassen hergestellt : Man macht 3 Lösungen: 1) Eine gesättigte Lösung von krystallisirtem Chlorcalcium in 70" Alkohol, dem noch so \äel Alaun, als sich lösen will, hinzugefügt wird. 2) Eine gesättigte Lösung von Alaun in 70" Alkohol. Diese zweite Lösung wird mit der ersteren in dem Ver- hältniss von 8 : 1 gemischt. 3) Eine concen- trirte Lösung von Hämatoxylin [Krystalle] a) in Alkohol oder b) in der Lösung 1. Von der Hämatoxylinlösung a oder b werden einige Tropfen zu der Mischung aus 1 und 2 ge- geben. (Für Embryonen besonders, für die sie zunächst empfohlen wii'd, leistet sie gute Dienste). Blauholz- (Logwood-) Extract 6 Th., Alaun 6 Th., Kupfervitriol 1 Th., Aq. dest. 40 Th., Thymol 1 kleiner Kiystall. — Die ersten drei Bestandtheile werden in dem angegebenen Verhältniss zusammen in einem Mörser gut verrieben. Dann so viel Wasser hinzugesetzt, dass eine dünne Paste entsteht. Zwei Tage lässt man unter gelegentlichem Unu^ühren stehen, dann wird filtrirt, vmd zum Conser- viren ein kleiner Krystall Thymol hinzugesetzt. — Die Lösung färbt frische und in Alkohol gehärtete Präparate. Yvlv Chromsäurematerial sind zu benutzen 8 Tropfen obiger Tinctur auf 120 Tropfen Aq. dest. und 1 Tropfen einer Iprocentigen Lösung von doppeltchromsaurem Kali. Für den Einschluss in Harzen sind die ; Präparate stark in absolutem Alkohol auszu- waschen, damit sie nicht ausbleichen. (Bleichen mit der Zeit doch mehr oder mindei". Der Tropfen einer so verdünnten Lösung von doppeltchromsaurem Kali ist voU- 1872 1873 1875 1876 1879 I. 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 95 Häma- toxylin mit Chlor- calcium und Alaun. Glycerin- Hüma- toxylin. Häma- toxylin mit Chlor- alumi- nium. Häma- toxylin mit alko- holischer Alaun- lösung. Häma- toxylin mit Alaun und Glycerin. 44) P. Mayer. Ueber die in der Zoologischen Station zu Neapel gebräuch- lichen Methoden zur mikroskopischen Untersuchung. (Mitth. d. Zool. Stat. Neapel Bd. IV p.l). 45) Reiiaut. Sur le mode de pre- paration, et l'emidoi de l'eosine et de la glycerine hämatoxy- lique en histologie. (Arch. de Physiol. 1881, p. 640). 46) Dippel. Das Mikroskop 2. Aufl., 1882, Bd. I p. 719. 47) Friedländer. jNIikroskopische Technik. Berl. 1882, p. 43. kommen gleichgültig, da ilim nicht die geringste Einwirkung zuzuschreiben ist. Das Salz kommt in einer 130000fachen Verdünnung zur An- Avendung). M. empfiehlt die KLEiNENBEKa'sche Me- thode der Hämatoxylinfärbung sehr. Er modi- ficirt die Vorschriit in ganz geringer Weise : 1 Vol. einer ganz conc. Lösung von Chlor- calcium und Alaun in 70" Alkohol wird noch mit 6 bis 8 Voll. 70" Alkohols verdünnt. In diese Lösung giebt man beim Gebrauch je nach der gewünschten Concentration eine beliebige Anzahl von Tropfen einer ganz concentrirten Lösung von Hämatoxylinkrystallen in absolutem Alkohol. Vollkommen neutrales, recht dickflüssiges Glycerin wird mit Alaun gesättigt. Dazu Tropfen für Tropfen etwa '/4 so viel concen- trirte alkoholisclie Hämatoxylinlösung. Ist zu viel Hämatoxylin zugesetzt, so trübt sich die Flüssigkeit, und man muss so lange Alaun- glycerin zusetzen, bis die Trübung aufhört. Dann zu filtriren. Man bewahrt zunächst so auf, dass Licht zutreten kann, bis nach einigen Wochen kein Alkoholgeruch mehr wahrzu- nehmen ist. Dann wird nochmals filtrirt und luin kann die jetzt sehr haltbare Lösung ge- braucht werden. In 5 bis 10 Minuten färben sich die Präparate. Renaut schliesst dieselben in einem Tropfen der Färbeflüssigkeit ein. (Das letzte Verfahren habe ich bei einigen Schnitten versucht. Die Präparate sind jetzt d. h. zwei Jahre nach der Anfertigung, noch ebenso intensiv gefärbt wie früher, das Glyce- rin ist entfärbt; und so sind sie recht gut. Anfänglich aber verhinderte die gleichfarbige Einschlussmasse ein scharfes Durchforschen des Schnittes). D. vereinfacht die Methode von Ki.einen- BERG und stellt eine im Principe gleiche Lö- sung her. Gesättigte alkoholische Lösung von Chloraluminium mit 6 bis 8 Voll. 70procentigem Alkohol verdünnt. Alkoholische Hämatoxylin- lösung zugefügt. Auch eine Mischung von alkoholischer Alaun- und Hämatoxylin-Lösung, beim Ge- brauch mit 50- bis 70procentigem Alkohol oder auch Wasser verdünnt, gebraucht er. F. giebt in seiner kurzen Anweisung zur pathologisch - mikroskopischen Untersuchung eine Vorschrift, die sich von der obigen von Renaut eigentlich nur dadurch unterscheidet, dass er bestimmte Volumenzahlen angiebt. Sie lautet: Hämatoxylin 2-0 g, Alkohol lOO'O g, 1880 1881 1882 1882 96 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I. 1. Aq. dest. 1000 g. Glycerin 1000 g. Alaun 2-0 g. (Häniatoxylin wird ausserordentlich häufig zu Doppelfärbungen benutzt. Siehe dort). Ohne Angabe der Zeit der Empfehlung. Wässe- rige Hä- matoxy- linlösung mit Alaun 48) Rindfleisch. | Concentrirte wässerige Lösung von Hä- matoxylin und cbon solche von Alaun. Beim Gebrauch von ersterer zur zweiten gegossen. ni. Molybdänsaures Ammoniak. Molyb- dänsaures Ammo- niak. Molyb- dänsaures Ammo- niak. 49) Merkel. VON Henle in sei- nem Handbuch der Nervenlehre des Menschen Brschwg. 1871 (Bd. III d. Handbuch d. Anat. d. Menschen) mitge- theilt. 50) Krause. 1 Vol. einer ganz concentrirten Lösung von molybdänsaurem Ammoniak wird mit 1 oder 2 Voll. Wasser verdünnt, und 1 Messer- spitze Limatura ferri hinzugesetzt. Dann träufelt man langsam unter stetem Umrühren so viel ofticinelle Salzsäure zu, als nöthig ist, um eine tief dunkelblaue, fast schwarze Fär- bung hervorzurufen. Der im Anfang des Säurezusatzes entstehende weisse , wolkige Niederschlag ist unschädlich und löst sich beim Umrühren wieder auf. Wird die Flüssig- keit aber braun statt blau, so ist sie un- brauchbar geworden. Die Lösung lässt man etwa 10 Minuten stehen und filtrirt dann. Besonders geeignet für Centralnervensystem, zumal verlängertes und Eückenmark. In 6 bis 15 Stunden sind die Schnitte gefärbt. In den Handbüchern der mikroskopischen Technik [z. B. Fkey 7. Aufl., v. Thanhoffer, DippEi. 2. Aufl.] wird Krause als Erfinder einer Methode, mit molybdänsaurem Ammoniak zu färben, angeführt. Er färbt in einer wässe- rigen Lösung desselben von 5 Procent in etwa 24 Stunden. Die Fäi'bung tiefblau. Durch 1- bis l-5procentige Gerbsäure oder 20procentige Pyrogallussäure kann man die Schnitte nach- träglich braun färben. Er empfiehlt die Tinc- tion für Nervenapparate, Drüsen- und Flimmer- zellen. 1871 1, 1. Gierke: Färl)erei zu mikroskopischen Zwecken. 97 IV. Krappfarben. Krapp- Fütte- rung. Krapp- Fütte- rung. Alizarin. 51) Lieberkühn. MüLLEu's Arch. 1864. u. Ueb. d.Wachstlium des Unterkiefers u. der Wirbel (Sitzber. d. Ges. z. Beförde- rung der ges. Natur- wiss. Marbg, 1867 No. 10). 52) Kölliker. Die normale Resorp- tion des Knochenge- webes. Lpzg. 1873. 53) Lieberkühn. 1) üeber die Ein- wirkung von Aliza- rin auf die Gewebe des lebenden Kör- pers. (Marburger Sitzungsber. 1874, p. 33) u. 2) Ueber das Verhalten des Alizarin (1. c. p. 77). Alkoho- lische Alizarin- lösung. L. fütterte lebende Thiere mit Krapp zum Zweck des Studiums des Knochenwachs- thums, da der Farbstoff mit der neu sich bildenden Knochensubstanz sich verbindet. 18G4 1867 K. benutzt Krapp zu demselben ZAveck. 1873 54) Strelzoff. Genetisch - topogra- phische Unter- suchungen des Kno- chenwachsthums. (Unters, a. d. pathol. Inst, zu Zürich, her- ausg. von Ebeeth. 1874, H. 2 p. 83). 55) Benczur. Angegeben in V, TuANHOFFEE : Das Mikroskop und seine Anwendung. Nach Fütterung von Tauben mit Krapp verband sich der Farbstoff mit den Kalksalzen der Knochen und nicht mit der organischen Grundsubstanz derselben. Man kann diese da- her durch Kochen in Natronlösung entfernen, ohne dass die Färbung leidet. Auch durch Injection einer öprocentigen neutralen Lösung von Alizarinnatrium in das Blut junger und alter Hunde erzielt man Färbungen ; bei jungen Thieren werden die ganzen Knochen, bei alten nur die Innenflächen roth. Es findet eine chemische Verbindung des Farbstoffes mit dem phosphorsauren Kalk des Knochens statt, wäh- rend der kohlensaure Kalk unberührt bleibt. Aus dem Blut verschwindet das Alizarin sehr schnell; am dritten Tage ist es nicht mehr nachzuweisen. Ebenso fixirt es sich nicht in anderen Organen. Es geht in alle über und färbt sie, aber nur für einige Zeit, indem es wieder ausgeschieden wird. Es geht dabei in Lymphe, Galle, Speichel, Harn und Koth über. Bestätigung der Angaben Lieberkühn's, dass der Farbstoff des Krapp sich an die an organische Substanz des Knochens bindet. 1874 V. TiiANHOPFEK führt eine concentrirte al- koholische Lösung von AMzarin als von Benczur für die Färbung des Centralnervensystems an- gegeben an. Die Schnitte bleiben 24 Stunden in der Lösung. Die Zellen und Axencylinder der Präparate werden bräunüchroth gefärbt. Die Zellkörper , Zellkerne und das Kern- körperchen, ebenso der Axencylinder wer- den scharf differenzirt. 1880 Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 1. 98 Gierke: Färberei zn mikroskoiiisclien Zwecken. 1,1. Purpu- rin. Purpurin mit Glyce- rin ohne Alkohol. 56) Ranvier. Des applications de la puri)urme äl'histo- logie (Arch. d. Phys. 1874, p. 761). 57) Grenacher. Nach den mikrosko- pischen Handbü- chern. Purpurin wird in kochender Alaunlösung , (1 : 200 Aq. dest.) aufgelöst. Dieser Flüssig- keit wird dann y^ ihres Volumens Alkohol von 36" (wohl nach Cartier, gleich 90" nach Thal- LEs) zugesetzt. Die Lösung ist schön orange- roth. Es färben sich in ihr die Kerne der Knorpel, das Bindegewebe, Cornea, Sehnen, Periost und die Knochen ganz intensiv. Die Grundsubstanz bleibt ungefärbt. Sehr zu empfehlen ist es für Rückenmark, das in doppeltchromsaurem Am- moniak gehärtet ist ; Präparate dagegen aus i Chromsäure und MüLLEu'scher Flüssigkeit fär- ben sich nicht gut. Im Rückenmark färben , sich die Kerne des Bindegewebes und der Ca- pillaren roth, während die Kerne der Nerven- i Zellen farblos bleiben. Es ist daher ein Älittel, I Nerven- und Bindegewebe zu unterscheiden. In eine Mischung von ganz reinem oder wenigstens sehr wenig verdünntem Glycerin und 1 bis 3 Procent Alaun wird das Purpurin, eine Messerspitze auf 50 cc jener Flüssigkeit, gegeben. Nach 2- bis 3tägigem Stehen zu tiltriren. Der Vortheü gegen R vnvier's Pirrpurin- lösung soll darin bestehen, dass sie sich länger hält und keine Niederschläge ausfallen. Sie färbt in 10 bis 30 Minuten. 1874 V. Verschiedene Farbstoffe. A Icanna. Weingei- stiger Auszug d. Alcanna- ivurzel. Lakmus. v. u. Pfeufek, 3. Reihe Bd. XX H. 3. 59) Dippel. Das Mikroskop 2. Aufl. p. 721. Hartig. Siehe No. 2. D. führt die weingeistige Alcannatinctur als Tinctionsmittel der Pflanzenhistologie an. | Sie dient besonders zum Nachweis der Harze und der Fette, welche sie blutroth färbt und ! des Protoplasmas, welches sich rosa tingirt. Er meint, dass sie sich auch für die thieri- schen Gewebe empfehlen würde. Findet, dass es wie der Carmin sich in den Zellkernen der Pflanzen anhäuft. 1863 58) Waldeyer. 1 W. empfiehlt eine wässerige Lösung des Ueber den Ursprimg Farbstoffs der Alcannawurzel, um den Axen- und Verlauf des cylinder der Nervenfasern isolirt in seinen Axencylinders bei Scheiden zu färben. Auch Alcanna in Ter- Wirbelthieren und peuthinöl leistete ihm gute Dienste, indem Wirbellosen (Zeit- das Mark erblasste , der Axencylinder roth sehr. f. rat. Med. wurde, herausg. v. Hi^nle 1882 1854 I. 1. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 99 EoihJcohl- extract. 60) Lawson Tait. On the freezing pro- cess for section-cutt- ing and on various methods of staining and mounting sec- tions. (Joum. of Anat. a.Phys.vol.IXp.250). L. T. verwirft die Anilinfarben und das „unzuverlässige" Carmin gänzlich und empfiehlt am meisten Lakmus. Folgendes ist seine Vor- schrift: Lakmuspulver in Wasser gekocht und filti'irt, dann mit etwas Alkohol versetzt. Die tingirten Schnitte werden gleichmässig tief blau. Durch Zusatz einer sehr geringen Menge Salpetersäure wird die Farbe braunroth. Jetzt wird der Schnitt schnell tüchtig gewaschen. Dann zeigt er die Kerne noch blau, das übrige Gewebe blass rosenroth. Wässeriger oder alkoholischer Extraet der Blätter des Rothkohles kann mit dem gleichen schönen Erfolg benutzt werden. Durch Zusatz von Ammoniak wird die Farbe glänzend grün, von Säuren purpurn. (Jedenfalls nur Augenblickspräparate. Zum Aufbewahren nicht geeignet). Quinoleiii uud Cyanin siehe unter Anilinfarben. 1875 VI. Indigschwefelsaures Natron (Indigcarmin). I I I Indig- 61) Thiersch. Gesättigte Lösung von Indigcarmin in [ 1865 carmin j Injectionsmassen von Oxalsäurelösung (1 : 22 bis 30 Aq. dest.). Nach in Oxal- j Thiersch u. W. Mür.- Belieben mit Weingeist zu verdünnen. Con- säure- j lek (Arch. mikr. centrirt färbt es in wenigen Stunden intensiv lösu/ng. Anat. Bd. I). , blau. Die Kerne und Zellleiber werden tin- girt. Der Ueberschuss kann in alkoholischer Oxalsäurelösung ausgewaschen werden. Indig- cai-min in den Körper lebender Thiere ge- bracht, wird von den Gewebselementen auf- genommen und wieder ausgeschieden. Trotz- dem, dass wir es hier nicht mit einer Tinc- I tion zu thun haben, lasse ich der Verwandt- I Schaft des Processes und seiner grossen Wich- tigkeit wegen die reiche Literatur hier folgen, 1 ohne aber dieselbe zu analysiren. I 62) Chrzon.sz- C. begründet diese Methode, indem er 1864 czewski. den Farbstoff in das Blut lebender Thiere 1866 1) Centralbl. f. d. spritzte und die Ausscheidung desselben in die med. Wiss. 1864, Gallencapülaren studirte. :No. 38. 2) Arch. i pathol. Anat. Bd. I XXXy p. 135. j 63) Diaconow. In den Magen oder in Blut gebrachter 1 1867 Medicinisch - chemi- Indigcarmin wird von den Secretionszellen I sehe Untersuchun- der Leber und der Niere aufgenommen und j gen hrsg. v. Hoppe- ausgeschieden. Andere Gewebe nehmen den i SsYj.ER. Berlin 1867, Farbstoff nicht auf, er geht auch nicht in die ; H. 2 p. 245. ! Lymjjhe oder das Blutserum über. i 100 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 1. 64) Heidenhain. 1) Ax-ch. mikrosk. H. benutzt den Farbstoff in obiger Weise, um nachzuweisen, dass die Stäbchenzellen der Aiiat. Bd. X p. 30. gewundenen Harncanälchen der Niere die ge- 2) Arch. f. d. ges. ! lösten Stoffe, die Glomeruli das Wasser des Phys. Bd. IX p. 1. | Harns ausscheiden. 3) Hermann, Hand- buch d. Physiologie Bd. V. Physiologie d. Absonderungsvor- gänge p. 345. 65) Arnold. Arch. f. path. Anat. u. Phys. Bd. LXIV p. 203, Bd. LXV p. 77, Bd. LXVI p. 77, Bd. LXVin p. 465, Bd. LXXm p. 125; Centralbl. f. d. med. Wiss. 1875, No. 41 u. 51. 66) Thoma. Centralbl. f. d. med. Wiss. 1875, No. 2. Arch. path. Anat. u. Phys. Bd. LXIY p. 394. 67) Küttner. Arch. f. path. Anat. u. Phys. Bd. LXV p. 12, Bd. LXVI p. 12. Centralbl. f. d. med. Wiss 1875, No.41. 68) Gerlach. Centralbl. f. d. med. Wiss. 1875, No. 48. lieber das Verhalten des indigschwefel- saiu-en Natrons in dem Knorpelgewebe lebender Thiere. Habitationsschrift. Erlangen, 1876. 69) Nykamp. Aj-ch. mikrosk. Anat. Bd. XIV p. 492. 70) Zeller. Arch. path. Anat. u. Phys. Bd. LXXIII p. 257. 1874 1875 1875 bis 1878 Die verschiedenen Arbeiten unter 65, 66, 67 , 68 und 69 behandeln die Ausscheidung des indigschwefelsauren Natrons in den Kitt- substanzen zwischen den Epithelzellen und in den Saftcanälchen, besonders (65, 68, 69) des Knorpelgewebes. Küttner untersucht die Aus- scheidimg des Farbstoffs in den Kittleisten der Lungenalveolen - Epithelien, Zeller (70) die Ausscheidung desselben in einigen Drüsen des Frosches. Den Apparat für die dauernde langsame 1875 Injection der Farbstofflösung in die Vena ab- i 1876 dominalis des Frosches giebt Arnold 1. c. Bd. LXVI. 1877 1878 Indigschwefelsaures Natron wird auch hier und da für Doppelförbuiigen benutzt. Siehe dort. (Schluss folgt in Heft 2). 1,1. Giltay: Ueber Veröffcntl. neuer Reactioiis- u. Tinctionsmethoden. lOl lieber die Art der Veröffeutliehiiiiö" neuer Reactions- und Tinctionsmetlioden. Von Dr. E. Giltay, Assistent am Botanisclien Institut der Universität Leiden. Bei der grossen Bedeutung, welche die Mikrochemie für die Natur- wissenschaften hat, werden voraussichtlich immer mehr Reactions- methoden bekannt und veröffentlicht werden. Die Art und Weise, wie das Letztere geschah, entsprach jedoch nur zu oft nicht dem Interesse Derjenigen, für welche die Veröffent- lichung bestimmt war. Bei der grossen Anzahl von Gegenständen, die man zu verfolgen, Methoden, die man zu versuchen hat, ist es wohl ein von Vielen ge- fühltes Desideratum, dass neue Reactionen, Tinctionsmethoden u. dergl. so präcise als möglich veröffentlicht werden, damit man sich in möglichst kurzer Zeit ein Urtheil über die Anwendbarkeit der betreffenden Methode für den eigenen Zweck bilden könne. Es sollten hierbei z. B. Farbenangaben (wenn sie von Einfliiss sind) so correct als möglich geschehen und nicht nach ziemlich wechselndem Sprachgebrauch, sondern unter genauer Angabe aller Einfluss habenden Umstände (z. B. Beleuchtung, Dicke der Licht absorbirenden Schicht) und unter Vergleich mit bestimmten Farbenscalen wie Cheveeul's „Des Couleurs" (Paris, Bailiiere et fils, 1864). Wenn zu einem Reagenz Stoffe verwendet werden, deren Be- nennung über ihre Natur irgend welche Zweifel übrig lassen könnte, dann sollte wo möglich die chemische Formel hinzugefügt werden. Auch wäre dies zu empfehlen mit Hinsicht auf andere Nationen, aus ähnlichen Gründen, aus denen eine Pflanze am zweckmässigsten mit ihrem inter- nationalen lateinischen Namen bezeichnet wird. Wenn von irgend einer benutzten Substanz die chemische Zu- sammensetzung nicht genügend bekannt ist (wie z. B. bei vielen Farb- stoffen), dann sollte immer neben dem Namen auch die Bezugsquelle angegeben werden , weil Fälle vorzukommen scheinen, dass bei ver- schiedenen Fabrikanten unter demselben Namen verkaufte Stoffe iu ihrer Wirkung verschieden sind. 102 G i Itay : UeLer Veiöffentl. neuer Reactions- u. Tinctionsmethodea. 1, 1. Vor allem jedoch soUteu bei Receptur und Gebrauchsanweisung Ausdrücke wie „etwas", „ein wenig", „nach Bedürfniss", „einige Augen- blicke" u. s. w. ganz gebannt, und durch genaue Maass-, Gewichts- (resp. specifische Gewichts-) und Zeitangaben ersetzt werden. Es giebt zwar sehr wenige oder gar keine Reagentien, deren Zu- sammenstellung so empfindlich ist, dass eine ganz genaue Abmessung und Abwägung der Substanzen uöthig wäre. Derjenige jedoch, welcher ein Reagenz prüfen will, braucht ein genaues Recept, damit er nicht in der Unsicherheit sich befinde, ob ein etwaiges ungünstiges Resultat A'on einer verkehrten Auffassung obiger Ausdrücke herrühre. Es thut hier gar nichts zur Sache, ob das Recept innerhalb bestimmter Grenzen in un- endlicher Weise variirt werden könnte, um nichtsdestoweniger ganz gleiche Resultate zu liefern. Wenn die Grenzen angegeben werden könnten, innerhalb denen die Mengen der das Reagenz bildenden Sub- stanzen verwendet werden können, desto besser, denn das Recept wäre dadurch um so vollkommener, und praktisch wäre dabei noch gewonnen, dass man wüsste, in wiefern mau, bei der Bereitung nach einem be- stimmten Mischverhältniss, ungenau verfahren könnte. Ist dies aber nicht der Fall, dann sollte hingegen eine Bereitungsweise genau be- schrieben werden, damit man bei der Bereitung Gewissheit habe, dass man nicht über jene Grenzen hinausgehe. Es wird wohl nicht nur ein "Wunsch des Verfassers sein, dass in Zukunft Bereitung und Anwendung neuer Reagentien, ausschliesslich in einer solchen, exacten Weise ' beschrieben werden möchten. *) Von den neueren Schriften, die, soweit dies zur Zeit möglich ist, mit dem Wunsche des Verfassers im Einklang sind, sei die Mikrochemie im „Hüfs- buch" von Wilhelm Behrens hervorgehoben; thunlichst sind hier alle genaueren Angaben gesammelt worden. h '■ Eeferate und Besprechungen. iq^ Referate und Bespreeliung'en. 1. Lehr- und Handbücher. Referent: W. Behrens in Göttingen. Dippel, L., Das Mikroskop und seine Anwendung. Zweite umgearb. Aufl. I. Theil : Handbuch der allgemeinen Mikro- skopie. Braunschweig (Vieweg und Sohn) 1883. XVIII und 1030 pp. 8» mit 579 Figg. und 1 Tti. 34 Jli Bis zum Beginn des Jahres 1883 besass man in Deutschland vor- züglich drei Handbücher für Mikroskopie, von denen es schwer war, zu entscheiden, welchem man den Vorrang geben sollte ; sie waren alle in ihrer Weise gut, wenn sie auch von etwas verschiedenen Gesichts- punkten aus geschrieben worden waren ; wir meinen die Werke von, Haeting, Dippel und Nägeli u. Schwendenek. Es Hess sich allerdings nicht leugnen, dass viele der in den genannten Werken beschriebenen Methoden, Apparate etc. antiquirt waren, was bei dem rapiden Fortschritt, den die Mikroskopie, besonders in Deutschland, in dem letzten Jahr- zehnt gemacht hatte, nicht Wunder nehmen Hess. — Es waren zu- mal die bahnbrechenden Arbeiten Prof. Abbe's in Jena, der als Phy- siker und Mathematiker, also mit ganz anderer theoretischer Vorbildung, als sie dem Zoologen oder dem Botaniker gewöhnlich zu Gebote steht, in den letzten Jahren dem Mikroskop und den mikroskopischen Appa- raten seine ganze Arbeitskraft gewidmet hat, und der fast jährlich aus der bekannten ZEiss'schen Werkstätte in Jena neue Apparate hervor- gehen lässt, die in ihrer Einfachheit die Bewunderung des Mikroskopikers erregen. Abbe hat bereits eine Reihe von Artikeln über einzelne Mikro- skoptheile und ihre Theorie in der Jenaischen Zeitschrift, dem Journal of the Royal Microscopical Society, der Zeitschrift für lustrumenten- kunde etc. veröffentHcht, allein die ganze AnBE'sche Mikroskoptheorie war bislang zusammenhängend in ihrer Eigenartigkeit nicht dargestellt 104 Referate und Besprechungen. I, 1. worden. Um so dankbarer müssen wir es anerkennen, dass Prof. Abbe sich entschlossen hat, die Exposition seiner gesammten Theorie Prof. DiPPEL für das vorliegende Werk zur Verfügung zu stellen, und dass DippEL, sich streng an dieselbe haltend, die ersten Capitel der 2. Auf- lage seines mikroskopischen Handbuchs im AsBE'schen Sinne bearbeitet hat. Schon aus diesem Grunde würden wir jetzt keinen Augenblick im Zweifel sein, dem neuen DipPEL'schen Handbuche den Vorrang vor denen von Harting und Nägeli u. Schwendener einzuräumen 5 allein auch die ganz selbständigen Arbeiten Dippel's in den folgenden Capiteln, die ungemein zahlreichen Erfahrungen eines der gewiegtesten Mikro- skopiker der Neuzeit, welche Dippel vor uns entwickelt, machen das Werk für jeden Mikroskopiker, der das Instrument, mit dem er arbeitet, von Grund aus kennen lernen will, zu einem unentbehrlichen Rathgeber, der ihn wohl selten oder nie im Stich lassen wird. Wir gönnen daher dem Werke von Herzen den Erfolg einer engUschen Ausgabe, welche, wie wir hören, in Angriff genommen ist. Es kann nicht die Aufgabe eines kurzen Referates sein, mit dem Inhalte eines so umfangreichen Werkes auch nur in grossen Zügen be- kannt zu machen, vielmehr müssen wir uns hier darauf beschränken, aus dem reichen Inhalte das Eine und das Andere hervorzuheben. Der vorliegende Band ist in vier Bücher getheilt: 1. Theorie der Bilderzeu- gung und Beleuchtung, 2. Das Mikroskop. Theorie und Einrichtung, 3. Hilfsmittel zur mikroskopischen Beobachtung, 4. Gebrauch des Mikro- skopes. — Das erste Buch basirt also gänzlich auf Abbe's eigenartigen bezüglichen Anschauungen ; wir können hier nur einfach auf dieselben hinweisen , denn der Mikroskopiker von heute darf sich diesen An- schauungen nicht mehr verschliessen, wenn er anders in seinen theore- tischen Ansichten auf der Höhe der Zeit stehen will. Die Ermittelung der Brennweiten der Systeme, der numerischen Apertur, des Corrections- zustandes sind Dinge, die, wie auch in der Vorrede ausdrücklich betont wird, jedem Mikroskopiker geläufig sein sollten. Diese Grundfactoren werden im ersten Buche zunächst theoretisch besprochen, im zweiten kommt dann Verf. auf ihre praktische Ermittelung zurück. — Das zweite Buch bespricht zuerst das einfache, dann das zusammengesetzte Mikroskop in seinen verschiedenen Theilen, nicht ohne vorher nochmals die Theorie jedes Theiles im Speci eilen zu discutiren. Daran schliesst sich die Besprechung des optischen Vermögens des Mikroskopes und dessen Prüfung, worauf dann die grosse Menge der neueren Mikroskope, sowohl der deutschen als der ausländischen Werkstätten, Revue passiren müssen und iu ihren einzelnen Theilen, zumal bezüglich derLeistungs- I, 1. Referate und Besprechungen. 105 fähigkeit des optischen Apparates kritisirt werden. Gerade das Letztere macht diesen Abschnitt zu einem ganz hervorragend wichtigen Theile des Ganzen, da er dem Anfänger, welcher sich anf eigene Faust ein Instrument anschaffen will, zuverlässigen Rath ertheilt, — Nachdem sodann die Mikroskope zu besonderen Zwecken und die am Mikroskop anzubringenden und für die Beobachtung mehr oder minder unentbehrlichen Nebenapparate (Beleuchtungsvorrichtungen, Spectral-, Polarisationsapparate, Camera lucida, Mikrometer) besprochen worden sind, wendet sich Verf. zu den für die Herstellung mikrosko- pischer Präparate nöthigen Hilfsmitteln, zumal der Bereitung der Rea- gentien. Das vierte und letzte Buch informirt sodann über den G e - brauch des Mikroskopes, sowohl des Instrumentes und seiner Hilfsapparate, sowie über die Anfertigung der zur Beobachtung nöthigen Präparate. Mit grosser Vorliebe und in einer Ausführlichkeit, wie wir sie (das eingangs erwähnte Werk von Nägeli u. Schwendbnbr aus- genommen) in anderen Büchern über Mikroskopie nicht finden, ist zu- mal die Anwendung des polarisirten Lichts bearbeitet worden, obgleich es in der Neuzeit den Anschein hat, als ob die Untersuchungsmethode pflanzUcher Gebilde im polarisirten Lichte, von der man sich seit der ersten bezüglichen Arbeit Hugo von Mohl's in der Botanischen Zeitung so viel versprach, die gehegten Erwartungen nicht erfüllen möchte; wenigstens findet Ref. bei Verfolgung der botanisch-anatomischen Lite- ratur, dass die in Frage stehende Methode von den Botanikern sehr selten und in fast allen Fällen nur nebenbei angewandt wird, was doch gewiss nicht geschehen würde, wenn man nicht auf andere Weise eben- so gut oder besser zur Erkenntniss gewisser Structuren gelangen könnte. Mit Recht wird dahingegen den Untersuchungsmethoden im prismatisch zerlegten Lichte sehr grosse Aufmerksamkeit geschenkt; es scheint auch dem Ref., dass diese Methoden für die Botanik noch eine grosse Zukunft haben werden; haben uns doch erst ganz kürzlich die vortrefflichen Untersuchungen Engelmann's gezeigt, dass man jene Methoden zur Lösimg gewisser physiologischer Fragen anwenden kann, deren endgiltige Beantwortung von grosser Wichtigkeit ist. Den Schluss des Werkes bilden Anweisungen für das Zeichnen mikroskopischer Präparate und die Herstellung der sogenannten Dauer- präparate. Die Ausstattung sowohl, wie die zahlreichen Abbildungen sind vor- züglich zu nennen. — • Der Verf. hat uns die gewiss Viele interessirende Mittheilung gemacht, dass binnen kurzem von ihm ein Grundriss der Mikroskopie, für Anfänger bestimmt, erscheinen wird. 106 Referate und Besprechungen. I. 1. Bachiuann, Otto, Unsere modernen Mikroskope nnd deren sämmtliche Hilfs- und Nebenapparate für wissen- schaftliche P'orschungen. München und Leipzig (Olden- bourg) 1883. 344 pp. 8» m. 175 Figg. 6 M In schroffem Gegensatze zu dem soeben besprochenen DippEL'schen Handbuche steht das vorliegende, wenn überhaupt ein so vortreffliches Werk, wie jenes, mit einem so traurigen Machwerke, wie dieses, ver- glichen werden kann. Der Verfasser, welcher durch sein 1879 er- schienenes Buch „Leitfaden zur Anfertigung mikroskopischer Dauer- präparate" bei uns nicht eben in gutem Andenken steht, hätte das vor- liegende Werk am besten solange ungeschrieben gelassen, bis er sich die nöthigen Vorkenntnisse für die Theorie und die Prüfung des Mikro- skopes angeeignet hätte. Der Schwerpunkt des Werkes gipfelt in dem Abschnitte: Die Mikroskope der Gegenwart p. 154 bis 279, in dem die verschiedenen Mikroskopmodelle der neueren Werkstätten abgebildet sind und ihr Preis angegeben wird. Die Abbildungen sind meist Cliches aus den Preiscouranten der Firmen und die beigegebenen Beschreibungen er- heben sich nicht über diejenigen, welche wir in den erwähnten Preis- couranten zu finden gewohnt sind. Es ist ganz unglaublich und geradezu scandalös, dass in diesem ganzen Abschnitte nicht ein einziges Wort über die Leistungsfähigkeit der von den einzelnen Werkstätten ge- lieferten Objective steht, wodurch sich gerade der entsprechende Ab- schnitt des DipPKJ.'schen Werkes so auszeichnet; freilich um derartige Angaben zu machen, dazu gehört jahrelange Arbeit und, was ebenso wichtig ist, völlige Vertrautheit mit den theoretischen optischen Vor- kenntnissen. Wenn daher Verf. in der Vorrede über diesen Ab- schnitt selbstgefällig äussert, dass sein „Buch Anspruch auf Originalität machen kann und daher von allen Freunden mikroskopischer Forschung mit Vortheil in Gebrauch genommen werden wird", so ist das erste allerdings in trauriger Weise wahr, das letzte wollen wir im Interesse unserer Wissenschaft nicht hoffen. — Die übrigen Capitel „Allgemeine optische Grundsätze, Optische Kraft des menschlichen Auges etc." können wir nach dem oben Gesagten hier mit Stillschweigen übergehen. — Dem Werke ist ein Anhang beigegeben : „Verzeichniss der bei mikroskopischen Untersuchungen zur Verwendung gelangenden Reagen- tien, Tinctions- und Imprägnationsmittel, Einbettungs- imd Verschluss- mittel, mit Angabe ihrer Herstellungsweise beziehungsweise Zusammen- setzung und ihrer speciellen Verwendung". In für den Verfasser be- zeichnender Weise ist hier Alles bunt durch einander gewürfelt, nämlich I. 1. Referate und Besprechungen. 107 nach dem Alphabete geordnet ; z. B. : Kanadabalsam, Karbolsäure, Karmin, Koch's Methode der Bacterienfärbnng, Kochsalz (!). Auch ab- gesehen von der UnvoUständigkeit dieses Verzeichnisses schliesst sich dasselbe dem Hauptcapitel des Werkes würdig an, — Vor Ankauf wird gewarnt. Trutat, Eugene, Traite elementaire du Microscope. Pre- miere partie: Le Microscope et son emploi. XV et 322 pp. 8" av. 171 Figg. et 1 pl. Paris (Gauthiers- Villars) 1883. Der Verf., Conservator am Museum für Naturgeschichte zu Tou- louse, beabsichtigt, in dem vorliegenden Werke eine elementare Be- schreibung des Mikroskopes sowie seines Gebrauches zu geben, welche zumal für Solche bestimmt sein soll, die, entfernt von Centralpunkten der Wissenschaft, bei Erlernung des Gebrauches jenes Instrumentes gänzlich auf sich selbst angewiesen sind. Es kommt ihm nicht darauf an, vorweg die optischen Gesetze der Lichtbrechung, welche beim Stu- dium des Mikroskopes in Betracht zu ziehen sind, zu entwickeln ; er tritt daher sofort in medias res ein. — Nach einer kurzen historischen Ein- leitung behandelt er in der ersten Hälfte des vorliegenden Bandes die verschiedenen Arten der Mikroskope. Er beginnt mit dem einfachen Mikroskope, beziehungsweise den Loupen und den Dou- bletts, den verschiedenen Loupenträgern und knüpft hieran die Bespre- chung der hauptsächliclisten Formen des P r ä p a r i r m i k r o s k o p e s (französische Modelle, welche sich von den deutscheu wenig unter- scheiden). Vom zusammengesetzten Mikroskope wird zunächst das Objectiv betrachtet, mit Beschreibung der verschiedenen Arten des- selben. Einige Seiten werden auch der Prüfung der Objective und den wichtigsten Testobjecten (Pleurosigma angulatum, Surirella Gemma) gewidmet. Bei dieser Gelegenheit schlägt Verf. auch ein bereits von Ranvier benutztes Probeobject für mittlere Vergrösserungen vor, welches unseres Wissens in Deutschland zu diesem Zwecke nicht benutzt wird, nämlich isolirte Muskelfasern der Flügel von Wasserkäfern: „il laut qu'avec un grossissement superieur ä 300 diametres on y voie les disques sombres alternativement epais et minces qui les caracterisent". Es folgt die Be- sprechung des Oculars, des Stativs, des Fusses, des Tisches, der Be- leuchtungsdiaphragmen und des Spiegels, des Tubus und der Einstel- lungsvorrichtungen des optischen Apparates, Beleuchtungsvorrichtungen opaker Gegenstände, der Zeichenprismen, Spectraloculare etc. Sodann 108 Referate und Besprechungen. I. 1. werden die Instrumente der wichtigeren französischen Firmen vorge- führt. Im zweiten Buche werden alsdann Regeln für den Gebrauch des Mikroskopes gegeben, wobei auch die Anwendung der Photographie und die Benützung der Projectionsmikroskope nicht ausgeschlossen werden. Zumal was Letzteres anbelangt, finden sich einige zu beach- tende Winke in dem Buche. Schliesslich behandelt der Verf., wie uns scheint, mit einer Vorliebe, die ein längeres Arbeiten auf diesem Gebiete verräth, die Anwendung jener Mikroskope, welche zur Untersuchung mineralogischer und geologischer Objecto dienen. So findet sich auch am Ende des Werkes ein beachtenswerther Anhang : Tableaux dichotomiques pour la determination microscopique des Clements mineralogiques des roches. ■A\ ,^ 2. Mikroskop und mikroskopische Apparate. Grunow's Camera lucida (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 3 p, 423 — cfr. Amer. Monthly Microsc. Journ. 1882). Die vorliegende Camera lucida bildet, wie aus der beigegebenen Durchschnittszeichnung hervorgeht, eineCombina- i tion der Camera lucida von Doyäre-Milne-Ed- j WAEDS und von Prof. Abbe. Von der letzteren i hat sie den aus zwei rechtwinkligen Prismen ge- bildeten Würfel J., über dem Ocular, von der ersteren das drehbare Prisma B entlehnt. Wir haben, jenachdem wir es ansehen wollen , eine Camera lucida nach DoYfiRE-MiiiNE-EDWAKDS, bei welcher das einfache kleine rechtwinklige Prisma über dem Ocular durch den Abbe' sehen Würfel ersetzt ist, oder eine Camera lucida nach Abbe, bei welcher das grössere Prisma von Doyere- Milne Edwards die Stelle des Spiegels einnimmt. 1 Das mikroskopische Bild wird durch die aus der versilberten Hypotenusenfläche des unteren Pris- mas (vom Würfel) herausgekratzte, '/20 ^^S^- Zoll = 1*27 mm im Durch- messer haltende Oeffnung gesehen, während die Spitze des Zeichenstiftes zunächst an der Hypotenusenfläche des Prismas 7) nach dem Würfel Ä und dann an der innerhalb derselben befindlichen Silberschicht nach dem Oc^ 1, 1. iieferate und ßesprecbungeii. 109 Auge liiu reflectirt wird. Im Ganzen und Grossen wird man mittels dieses Zeiclieuapparates die gleiche Wirkung erzielen, wie mittels der älteren Camera von Doy^ire-Melne-Edwaeds, während die Stellung des Spiegels bei der AsBE'schen Camera, wie a. anderem 0. schon von mir berichtet, das Zeichnen auf horizontaler Fläche ermöglicht, ohne dass — selbst an den äusseren Rändern des Sehfeldes — eine merkbare Ver- zerrung eintritt. Um Bild und Zeichenfläche etwa gleich beleuchtet zu sehen, müssten an dem Instrumentchen, welches allerdings einen kleineren Raum einnimmt als die sonst in jeder Beziehung vorzuziehende ÄBBE'sche Camera lucida und insofern von Einzelnen dieser vorgezogen werden möchte, übrigens noch entsprechende Rauchgläser, wie bei der AsBE'schen Camera (etwa unterhalb des Prismas B) angebracht werden. Dr. L. Dippel. 3. Die Anwendung der Photographie zur Abbildung mikroskopischer Objecto. Befereni: Professor Dr. B. Benecke in Königsberg i. P. Der grosse Fortschritt, welchen die Photographie in den letzten Jahren durch die Herstellung äusserst empfindlicher Trockenplatten gemacht hat, und der Umstand, dass solche in vorzüglicher Qualität fertig präparirt zu erhalten sind und sich, ohne zu verderben, Wochen und Monate laug aufbewahren lassen, kann nicht verfehlen, manchen Mikroskopiker, der zwar den Werth der photographischen Darstellung längst erkannte, sich aber zur Erlernung und Anwendung des umständ- licheren feuchten Collodiumverfahrens nicht entschliessen konnte, zur Benutzung der mikroskopischen Photographie anzuregen. Wie werth- voll gute Photogramme sowohl als Hilfsmittel bei der Arbeit (z. B, Auf- nahmen von Embryonen, die zur Anfertigung von Schnittserien benutzt werden sollen) wie zur Verständigung mit Fachgenossen und zur Illustration von Abhandlungen sein können, bedarf keiner weitläufigen Erörterung. Aber nur in seltenen Fällen ist es möglich, Fachphoto- graphen mit der Anfertigung solcher Aufnahmen zu betrauen, theils der Kosten wegen, und weil es oft unmöglich ist, ihnen ein Verständniss der Objecte beizubringen, theils weil zu solchen Aufnahmen dann immer nur fertig eingeschlossene Objecte Avürdeu gebraucht werden können, während der hauptsächliche Werth photographischer Aufnahmen für den mikroskopischen Forscher darin besteht, während der Beobachtung 110 Referate und Besprechungen. I, 1. von frischen, nicht eingeschlossenen Objecten, die sich oft genug schnell verändern, augenblicklich ein genaues Bild zu fixiren. Die grosse Empfindlichkeit der neueren Trockenplatten macht es selbst bei ziem- lich starken Vergrösserungen möglich, auch bei trübem Wetter mit Gas- oder Petroleumlicht zu photographiren, und so ist es natürlich, dass in letzter Zeit eine längere Reihe von Artikeln über Mikrophotographie namentlich in englischen und amerikanischen Journalen nebst einigen selbständigen grösseren Arbeiten erschienen sind. Wir werden über diese neueren Mittheilungen bei der imzweifelhaften Wichtigkeit des Gegenstandesregelmässig kurz berichten und verweisen Diejenigen, welche sich selber praktisch mit der Mikrophotographie beschäftigen wollen, auf Gerlach's in Deutschland bahnbrechend gewesene Schrift • und auf die deutsche Bearbeitung der vortrefflichen Arbeit von Moitessier 2, da ein zu ausführliches Eingehen auf den Gegenstand des beschränkten Raumes wegen hier nicht möglich ist. Eine Eigenthümlichkeit der meistens dilettantischen Mikrophoto- graphen ist es von jeher gewesen, neue Apparate zu erfinden, von denen man nur zu oft sagen muss, dass das Neue daran nicht gut und das Gute nicht neu ist. Das gilt für die meisten der im Folgenden zu be- sprechenden Mittheilungen. Hauee's Photomicrographic Apparatus nenut das Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 4 p. 559 eine kleine, von einem eigenen Träger über einem beliebigen Mikroskop gehaltene Camera ohne jede Eigenthümlichkeit. Die Abbildung ist einer kleinen Broschüre von Hauer „Grundzüge der Mikrophotographie" Leipzig (0. Wigaud) 1876 entlehnt. G. Smith's Apparatus for Micro-Photography, der in dem Brit. Journ. of Photography beschrieben ist, bespricht das Amer. Monthly Microsc. Journ. vol. II, 1883, no. 6 p. 118 als ein „ingenious arrangement". An Stelle einer ordentlichen Camera werden ein Paar in einander verschiebbare Holzkisten angewandt. An dem einen Ende werden Objectiv und Objecttisch, am andern die matte Glasplatte resp. die empfindliche Platte angebracht „in a couveniant way, such as any person can devise". ') J. Gerlach, Die Photographie als Hülfsmittel mikroskopischer Forschung Leipzig (Engelmann) 1863. ^) Die Photographie als Hilfsmittel mikroskopischer Forschung. Nach dem Französischen von Dr. A. Moitessier bearbeitet und erweitert von B. Bi:necke. Braunschweig (Vieweg) 1868. I, 1. Referate und Bcsprecliuiigen. 111 White, T. C, Photomicrography (Am. Monthly Microsc. Journ. vol. II, 1883, no. 5 p. 81). White placirt das mikroskopische Objectiv nebst Objecttisch, zwei Beleiiclitiingsliusen und einer Petroleumlampe in einem seitlich mit einer Tliüre versehenen Kasten. Eine hinter dem Objectiv angebrachte runde Oeffiiung lässt den Lichtkegel austreten, der dann in dem ganz ver- dunkelten Zimmer mittels einer auf einem Unterbau von Holzklötzen aufgestellten Visirscheibe resp. empfindlichen Platte aufgefangen wird. Für feinere Arbeiten als die Aufnahme von Fliegenrüsseln, von der hier die Rede ist, dürfte der Erfinder den Apparat selber kaum sehr praktisch finden. Walmsley's Photomicrographic Apparatus (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 4 p. 556). Ein einfacher, aus einer laugen Balgcamera und einem umgelegten Mikroskop mit Condensor bestehender Apparat, der in ganz gleicher Anordnung längst von zahlreichen älteren Mikrophotographen benutzt wird. Walmsley wendet eine Petroleumlampe mit einer grossen Be- leuchtungslinse zum photographiren au. Bei der grossen Länge des Apparates kann die Mikrometerschraube nur mittels einer um ihren Kopf laufenden und weiterhin über Rollen geführten Schnur bewegt werden. An Stelle der Visirscheibe wird bei der Einstellung des Bildes eine in einem Rahmen befestigte und für die Bildebene eingestellte Lupe angewandt '. Johnson, Gr. J., Photomicrography (Microsc. News vol. III, 1883, no. 28 p. 113). Der in der photographischen Gesellschaft zu Manchester gehaltene Vortrag enthält im Wesentlichen nur allgemein Bekanntes. Statt der Visirscheibe wird auch von Johnson wie von Walmsley die Anwendung einer für die Bildebene eingestellten Lupe empfohlen. Behufs Correction für den chemischen Focus hat Johnson an der Mikrometerschraube einen getheilten Kreisbogen und Index angebracht, eine Einrichtung, die selten von Werth sein dürfte, weil bei starken Objectiven die Focus- differenz meistens gleich Null, bei schwachen aber häufig so gross ist, dass ein Theil einer Umdrehung der Mikrometerschraube zur Correction bei Weitem nicht genügt. Zur Erhöhung der Bildschärfe empfiehlt Johnson mit Recht die (keineswegs neue) Anwendung von Diaphragmen hinter dem Objectiv, welche keine erhebliche Verlängerung der Ex- positionszeit bedingen. ') Cfr. MonESSIEE-BENECKE p. 71. 112 Referate und Besprechungen. I, 1. Focussing the Image in photomicrography (Microsc. News vol. III, 1883, no. 32 p. 233). Empfehlung des Ersatzes der Visirsclieibe durch eine für die Bild- ebene eingestellte Lupe. Hitchcock, R. , Photography and its value in micro- scopical investigations (Am. Monthly Microsc. Journ. vol. 11, 1883, no. 2 p. 33, cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 4 p. 580). Die Photographie kann die Zeichnung nicht in allen Fällen ersetzen, da sie nur das Bild einer Ebene giebt, während der Zeichner die Be- ziehung der verschiedenen Ebenen des Objectes zu einander darstellen kann, auch sind manche Farben der Objecto für die photographische Aufnahme ungünstig. Wegen der Schnelligkeit und Genauigkeit der zu erhaltenden Bilder ist die Photographie aber doch, namentlich als Hilfsmittel bei der Arbeit, sehr wichtig, auch sind die neuen Trocken- platten z. B. für gelbe Strahlen viel empfindlicher als feuchtes Collo- dium. Penetration inObjectives. (Microsc. News vol. III, 1883, no. 30 p. 172 cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 4 p. 579). G. E. Davis hält es für erforderlich, ausführlich auseinander zu setzen, dass auf der Visirscheibe und der empfindlichen photographischen Platte nur das Bild einer einzigen Ebene erscheint, während das Auge selbst bei feststehender Mikrometerschraube, vermöge seiner Accommoda- tionsfähigkeit in der Lage ist, bis zu einer gewissen Grenze auch ober- und unterhalb der eigentlichen Einstellungsebene Liegendes wahrzu- nehmen, namentlich bei Anwendung schwacher Objective. Hitchcock, R., Instructions in dry plate photography. (Am. Monthly Microsc Journ. vol. II, 1883, no. 5 p. 84, no. 6 p. 108, no. 7 p. 124). Besonders empfehlenswerth sind Carbutt's Trockenplatteu, und zwar für Negative die Marke B, für Glaspositive die weniger empfind- liche Marke A. Für concentrirt vorräthig zu haltende, beim Gebrauch zu verdünnende Entwickler werden Vorschriften gegeben. Ist durch die blosse Entwicklung genügende Intensität erzielt, so wird mit Natron fixirt, ist eine Verstärkung mit Silber oder Quecksilber erforderlich ge- wesen, mit Cyankalium. Eine etwa sehr lehmgelbe Färbung der Schicht nach Pyrogallusentwicklung, welche ein langsames Copiren bedingen würde, wird durch Anwendung verdünnter Oxalsäurelösung verbessert. Für Herstellung von Glaspositiven auf Carbutt's ,5A"-Platten im Copir- I, 1. Referate und Besprechungen. 113 rahmen genügt bei Gaslicht eine Exposition von 3 bis 5 Secunden. Die Positive für Projection sollen nicht zu dicht gemacht werden. Kiaer, C, Photomicrography by lamplight (Jouru. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 5 p. 721). Dr. C. Kiaer beschreibt sein Verfahren bei Verwendung von Petroleumlicht zu photographischen Aufnahmen auf Trockenplatten. Mit dem nassen Collodiumverfahren sind ihm selbst bei ganz schwachen Objectiven keine Aufnahmen gelungen, bei Anwendung von Trocken- platten erhält er mit einem Sonuenbrenner (Petroleum) selbst mit starken Objectiven und von gelben und braunen Objecten schnell gute Bilder. Er wendet ein grosses NACHEx'sches Mikroskop an, welches unter einem Winkel von 30° geneigt ist, und stellt die Lampe dicht vor den Spiegel mit Anwendung von Beleuclitungslinsen von 8 bis 9 cm Brennweite und ö'/g cm Durchmesser. Focusditferenz hat er nicht beobachtet und zieht das Lampenlicht dem Sonnenlicht vor, weil es keine Interfereuzerschei- uungen zeige (die bei Sonnenlicht sehr leicht durch den Beleuchtuugs- apparat zu vermeiden sind) und nicht durch hohe Temperatur die Objecte beschädige. 4. Fräparationsmethodeu im Allgemeinen. Freuzel's, Threlfall's und Schällibaum's Methoden zur Fest- legung von Präparaten auf dem Objectträger mit nachfolgender Färbung (Feenzel, J., Beitrag zur mi- kroskopischen Technik. Zool. Auz. Bd. VI, 1883, p. 51; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 2 p. 302. — Feenzel, J., Neuer Beitrag zur mikroskopischen Technik. Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 422; cfr. Journ. de Microgr. t. Vü, 1883, p. 438 ; Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 5 p. 735. — Theeleall, A., A new method of mountiug sections. Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 300; cfr. Journ. de Microgr. t. VII, 1883, p. 438, — Schällibaum, H., üeber ein Verfahren, mikroskopische Schnitte auf dem Objectträger zu fixiren und daselbst zu färben. Arch. mikrosk. Anat. Bd. XXI, 1883, p. 689 ; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. UI, 1883, pt. 5 p. 736). Da die Methode von Dr. Giesbeecht zur Festlegung von Schnitten auf dem Objectträger eine dieser Operation voraufgehende Tinction der Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 1. 8 114 Referate und Besprechungen. I, 1. zu schueidenden Objecte verlangt, es aber oft von Vortheil erscheinen kann, die Färbung erst nach dem Festlegen vorzunehmen, sind in neuester Zeit mehrere — selbstverständlich auch zum Festlegen von Schnitten aus vorher in toto gefärbten Objecten verwendbare — Me- thoden ersonnen worden, um auch diese letzte Verfahrungsweise mit Aussicht auf Erfolg zu ermöglichen. Dr. J. Feenzel empfiehlt statt der Schellacklösung eine Lösung von Guttapercha in Chloroform (1 : 100), welche in gebrauchsfertigem Zustande von Beyrich in Berlin bezogen oder auch eigenhändig be- reitet werden kann, indem man Guttapercha in Chloroform und Benzin löst, absetzen lässt, wenn sich die Flüssigkeit geklärt hat und fast farb- los geworden ist, filtrirt, dann das Filtrat unter öfterem Umschütteln zwei bis drei Wochen bei Seite stellt und nach Verlauf dieser Zeit nochmals von dem etwa gebildeten Bodensatze abfiltrirt. Die Lösung, welche eine solche Consistenz haben muss, dass sie sich nur langsam über die Glasfläche ausbreitet, wird auf die Mitte des sorgfältig ge- reinigten Objectträgers in dünner Schicht aufgetragen und diese nach dem Trocknen mit dem Präparat belegt. Die weitere Behandlung richtet sich dann nach der Einbettungsweise der Schnitte. Wenn die Objecte in Paraffin oder eine Paraffinmischung (Dr. Fkenzel verwendet eine Mischung von 4 Theilen Paraffin und 1 Theil Vaseline) eingebettet waren, so werden die Schnitte zunächst mit Alkohol betropft, um sie aufzurollen und flach auf der mit der obigen Lösung bestrichenen Fläche des Objectträgers auszubreiten. Eine folgende, fünf bis zehn Minuten dauernde Erwärmung auf 25*' bis 50" C. dient dazu, das Guttapercha klebend zu machen und die Schnitte festzu- legen. Ist dies nach Wunsch gelungen, so setzt man den Objectträger 5 bis 10 Minuten lang der Luft aus und bringt ihn dann zur Lösung des Paraffins etwa ebenso lange oder bis zu ^/^ Stunde in ein Gefäss mit einer ausreichenden Menge absoluten auf 30** bis 40" C. erwärmten Alkohols. Nach Weglösung sämmtlichen Paraffins wird das Präparat zunächst in 70procentigen, dann nach und nach in schwächeren Alkohol, endlich in Wasser gebracht und dann einer geeigneten Färbungsmethode unterworfen. Die gefärbten Schnitte werden hierauf in der bekannten Weise ausgewaschen, dann zur Entfernung des Wassers in Alkohol ge- bracht, mit einigen Tropfen Nelkenöls bedeckt und endlich in Canada- balsam oder Dammarlösung eingeschlossen. Hatte man in das in neuerer Zeit häufig verwendete Celloidin einge- bettet, so werden die auf die Guttaperchaschicht aufgelegten Schnitte, um sie festzulegen mit Benzin oder Chloroform betropft, nach dem Trocknen I, 1. Referate und Besprecliimgen. 115 gefärbt imd wie im ersteren Falle weiter behandelt, wobei das Celloidin durch das Nelkeuöl gelöst wird. Um bei der beschriebeneu Verfahruugsweise die Anwendung heissen Alkohols zu vermeiden, hat R. Thkelfall dieselbe dahin abgeändert, dass er statt einer Guttaperchalösung eine dünne Lösung von Kautschuk in Benzin anwendete, mit welcher der Objectträger in ähnlicher Weise übergössen werden soll, wie die photographischen Platten mittels Collo- diums. Die Schnitte werden auf die getrocknete dünne Kautschuk- schicht aufgelegt und darauf der Objectträger bis zu dem Schmelzpunkt des Paraffins erwärmt, wodurch erstere auf die Kautschuklage hinab- fallen und festsitzen. Zur Weglösung des Paraffins wird Naphtha oder ein leichtes Paraffinöl angewendet und mittels absoluten Alkohols aus- gewaschen. Die weitere Behandlung bleibt dieselbe wie oben ge- schildert. Nach Dr. Fbenzel hat dieses Verfahren den Nachtheil, dass das Kautschuk nicht so gut anhaftet und trocken wird, sowie dass sich dasselbe in dem Lösungsmittel für Paraffin, namentlich aber in dem empfohlenen Naphtha, schneller löst als Guttapercha. Um indessen der THRELFALL'schen Methode, welche immerhin in manchen Fällen Vortheil bieten kann, mehr Sicherheit des Erfolges zu verleihen, räth er, dieselbe in folgender Weise abzuändern. Nachdem die Schnitte auf der Kautschuklage geordnet sind, wird der Objecträger wenige Minuten auf höchstens 50" bis 55" C. erwärmt, dann nach völliger Abkühlung eine grössere Menge Naphtha über die Schnitte gegossen und rasch darüber laufen gelassen, bis diese fast trocken erscheinen. Auf diese Weise soll keine Gefahr vorhanden sein, dass sich grössere Schnitte lösen, und es kann die weitere Behandlung erfolgen. Sind die Schnitte sehr zart, so gewährt die Behandlung wie sie nachfolgend bei der modificirteu GiESBEECHT'schen Methode be- schrieben wird, die nöthige Sicherheit gegen etwaige Verluste. Wo die obigen Methoden nicht anwendbar sind, da empfiehlt Dr. Frenzel folgendes Verfahren. Nach der GiESBRECHT'schen Me- thode festgelegte Schnitte werden mit Terpentinöl behandelt, um das Paraffin zu lösen und, nachdem ersteres verdunstet oder mittels Chloro- forms ausgewaschen ist, zur Festlegung mit einer dünnen Schicht von Guttaperchalösung (durch Auftropfeu) bedeckt, welche in die Objecte nicht eindringt und anderen Flüssigkeiten in dieselbe zu difFudiren ge- stattet. Ist das Guttapercha etwas angetrocknet, dann können die Präparate wie oben weiter behandelt, gefärbt uud eingeschlossen werden. Nach H. ScHÄLLiBAUM soll eine Lösung von Schiessbaumwolle in Nelkenöl oder Lavendelöl, welche man erhält, wenn man, (je nach 8* 116 Referate und Besprechungen. I, 1. dessen Consistenz) einen Raumtheil Collodium mit drei bis vier Raum- tlieilen eines der genannten flüchtigen Oele mischt und tüchtig durch- schüttelt. Die erhaltene klare Lösung, welche bei gewöhnlicher Tem- peratur längere Zeit flüssig bleibt und an der Glasfläche gut haftet, wird mittels eines Pinsels in dünner Schicht über dem Objectträger ausge- breitet und das flüchtige Oel, nachdem die Schnitte aufgelegt sind, mittels massiger Erwärmung über dem Wasserbade im Verlauf von fünf bis zehn Minuten verdunstet. Die so festgelegten Schnitte können tage- lang mit Terpentin, Chloroform, Alkohol und Wasser behandelt werden, ohne dass Gefahr von Verlust durch Loslösuug vorhanden wäre, und es lässt sich die Färbung in einer der üblichen Weisen vollziehen, indem man dabei die Färbeflüssigkeiten in möglichst verdünntem Zustande an- wendet und nicht zu lange einwirken lässt. Entsteht bei der Festlegung durch Verwendung einer zu coucen- trirten Lösung oder Auftragen einer zu dicken Schicht eine Trübung zwischen den Schnitten — welche übrigens den Präparaten keinen Schaden bringen soll — , so kann diese dadurch leicht beseitigt werden, dass man mit einem mit Nelken- oder Lavendelöl befeuchteten Pinsel mehrmals zwischen ihnen durchfährt. Was diese Methode besonders empfehlenswerth macht, ist der Um- stand, dass dieselbe nach den Erfahrungen ihres Erfinders für alle Ein- bettungsmassen und für den Einschluss in Harze, wie in Glycerin mit gleich gutem Erfolge verwendbar ist. Dr. L. Dippel. Pfltzer, E., lieber ein Härtung und Färbung vereinigen- des Verfahren für die Untersuchung des plasma- tischen Zellleibes (Ber. Dtsch. Botan. Gesellsch. Bd. I, 1883, H. 1 p. 44). Verf., welchem die zur Härtung und Färbung bis jetzt üblichen Manipulationen zu umständlich waren, bemühte sich, ein neues Ver- fahren ausfindig zu machen und glaubt dies in einer Mischung einer concentrirten wässerigen Pikrinsäurelösung mit einer kleinen Menge wässeriger Nigrosinlösung gefunden zu haben. Nigrosin ' löst sich leicht in Wasser mit tief violettblauer Farbe, langsam in Alkohol und scheint in absolutem Alkohol unlöslich zu sein. Die tief olivengrüne Mischung tödtet sehr schnell ohne erhebliche Contraction; bei stark wasserhaltigen Objecten fügt man einige Pikrin- säurekrystalle hinzu, um eine Verdünnung des Härtungsmittels zu ver- meiden. Nach einigen Stunden der Einwirkung der Nigrosin-Pikrin- ') Qualität I, von Trommsdokff in Erfurt bezogen. I, 1. Referate und Besprechungen. 117 sänre legt man die behandelten Objecte in Wasser oder gewöhnlichen Spiritus, wodurch Pikrinsäure und das gelöste Nigrosin entfernt werden ; die Tinction der plasmatischen Theile bleibt unverändert. Die Tinctiou ist eine sehr langdauernde. Die Färbung steht im Verhältnisse zur Dichte der Plasmakörner, so dass dünne Plasmaschichten kaum wahrnehmbar, die Zellkerne und Nucleolen aber sehr intensiv blau gefärbt werden. GewöhnUche Cellu- losemembranen sowie Stärkekörner werden nicht gefärbt. Die Färbung wird sehr rein, wenn man die fertigen Präparate in concentrirtes Glycerin überträgt, oder wenn man verdünntes Gly- cerin sich langsam auf den Präparaten concentriren lässt. Am schönsten zeigt sich die Färbung , wenn man die in Alkohol ausgewaschenen Präparate zuerst mit Nelkenöl behandelt und dann in Harzen (in Ter- pentinöl gelöstem Dammarharz oder Canadabalsam) einschliesst. Con- tractionen werden dabei vermieden , wenn man mit Alkohol stark verdünntes Nelkenöl durch Verdunstung des Alkohols sich concentriren lässt. Die wässerige Nigrosin-Pikrinsäure eignet sich sehr gut, um Orga- nismen unter dem Deckglase augenblicklich zu tödten, zu fixiren und zu färben. Eine alkoholische Nigrosin-Pikrinsäure stellt man her, in- dem man Krystalle von Pikrinsäure und ein Stückchen Nigrosin zu- sammen mit Alkohol übergiesst. J . E. Weiss. 5. Präparationsmethoden für specielle Zwecke. A, JViederste Thiere und Pflanzen. Marpmann, G., Die Spaltpilze. Grundzüge der Spaltpilz- oder Bacterien künde. Halle (Buchh. d. Waisenh.) 1884. 193 pp. kl. 80 m. 25 Holzschn. Aus diesem Werkchen * fällt in unser vorliegendes Gebiet nur das Capitel „Untersuchungsmethoden" p. 107 bis 113, und zwar behandelt dasselbe zuerst die Färbetechnik, sodann die Reincultur- methodeu der Bacterien. Färbeteclmik (seit Weigeet 1875). Bacterien lassen sich sowohl in Flüssigkeiten als in Schnitten färben und können als Dauerpräparate 1) Welches übrigens eine recht brauchbare, kurze Zusammenstellung für den Mediciner zu sein scheint. Ref. 118 Keferate und Besprechungen. I, 1. in Canadabalsam , Glycerin und Glyceringelatine, Kaliumacetat einge- schlossen werden. Man wendet zum Färben Hämatoxylin oder Anilin- farben an. I. Hämatoxylin (giebt haltbare Präparate). Lösung: Lignum eampeschianum raspatum wird mit Aether übergössen, so dass derselbe alle Holztheilchen bedeckt; zu der resultirenden Lösung setzt man tropfenweis öprocentige Alaunlösung, bis eine gesättigt dunkelviolette Färbung entsteht. — Zu färbende Schnitte (resp. am Deckglas einge- trocknete Schizophyten) lässt man in der Lösung eine halbe Stunde liegen, wäscht mit Wasser aus und schliesst in Canadabalsam oder Glycerin ein. II. Anilinfarben. Als solche sind für Bacterientinctionen in Gebrauch Methylviolett (BBBBB), Methylenblau, Gentianablau, Fuchsin- roth , Diamantroth , Magentaroth , Anilinbraun (= Triamidoazobenzo- chlorid), Auilin-Vesuviu, Nigrosin, Anilingrün, Methylgrüu, Chrysoidin — die braunen Farbstoffe für solche Bacterien, welche photographirt werden sollen. Mit Methylviolett färbt man in einer alkoholischen Lösung, von der 'man einige Tropfen in 15 g Wasser gebracht hat (Einschluss in Kaliumacetat oder Balsam, nicht in Glycerin). In neuester Zeit sind besonders die Tuberkelbacillen studirt worden, deren Tinction auf verschiedene Weise geschehen kann : 1. Koch: Schnitte oder Trockenpräparate werden 24 Stunden in eine Lösung von 200 Th. Wasser, 1 Th. concentrirte alkoholische Methylenblaulösung, 0*2 Th. lOprocentige Kalilauge gelegt, werden in Wasser abgespült, iu eine frisch filtrirte, concentrirte, wässerige Vesuvin- lösung gebracht, in Alkohol abgespült und eingeschlossen. 2. Ehelich: Eine gesättigte wässerige Lösung von reinem Anilin wird mit einer der oben erwähnten Anilinfarben geschüttelt, so dass eine concentrirte Auflösung entsteht, und durch ein nasses Filter filtrirt. Man lässt die Präparate 24 Stunden liegen, wäscht aus und behandelt mit einer Lösung von 1 Th. offic. Salpetersäure in 2 Th. Wasser, bis die Färbung (des Schnittes) verschwunden ist. Sodann wäscht man wieder ab, entwässert mit Alkohol und untersucht im Wasser, wobei die Bacillen stark gefärbt erscheinen. Nach Weigeet färbt man mit 2procentigem Methylviolett in O'Öprocentigem Ammoniak und weiter nach Ehelich. Diese Präparate conserviren sich iu mit Bergamottöl versetztem Canadabalsam. 3. GiBBEs pulverisirt 2 g Magentakrystalle in einer Reibschale, setzt 3 cg reines Anilin, 20 cg Alkohol (spec. G. = 0'830) und 20 cg Wasser zu. In dieser Lösung bleiben die Präparate 15 bis 20 Minuten, I, 1. Referate und Besprechungen. 119 werden dann mit Salpetersäure 1 : 2 Wasser behandelt und mit einer concentrirten wässerigen Chrysoidinlösung nachgefärbt, mit Alkohol ent- wässert und in Balsam eingeschlossen. Noch besser soll die Färbung gelingen, wenn man die Magentalösung noch mit dem lOfachen Vol. Wasser verdünnt und durch 24 Stunden färbt. Heinculturmethoden. Diese geschehen in sterilisirten Nährlösungen, welche bestehen aus 1 Th. Ln-iBiCx'schem Fleischextract mit 100 Th. Wasser (oder 3 Th. Gelatine mit 1000 Th. Wasser) und 0-25 Th. Ammoniumphosphat — oder 1 Th. Fleischextract, 3 Th. Zucker und 100 Th. Wasser. Zur Sterilisation werden dieselben in einem kleinen verschliessbaren messingenen Dampfkessel (Buchnek) ca. 1 Stunde lang auf etwa 100° C. erhitzt, wobei die Culturgefässe mit Wattepfropfen verschlossen sind. Man bringt dann schnell die Impfprobe hinein, die man auf die Weise gewinnt, dass man von der Flüssigkeit mit einer Bacterienvegetation, in der die rein zu züchtende Form in Mehrzahl den anderen Formen überlegen, eine so starke Verdünnung herstellt, dass auf 5 bis 10 cg je eine Spaltpilzzelle kommen würde, üeberträgt man dann je 5 cg in reine, sterilisirte Nährlösung, so ist es wahr- scheinlich, von zehnmal die Hälfte Reinculturen zu erhalten. Hat man auf diese Weise keine Reincultur bekommen, so sind jedenfalls die gewünschten Pilze in den Proben angereichert und werden bei einer zweiten oder dritten Uebercultur den gewünschten Erfolg ge- währen. Bacillus subtilis (Heubacterie) wird nach Roberts reinciütivirt, in- dem man Heu mit möglichst wenig Wasser eine Stunde lang bei 36" C. digerirt, dann die Flüssigkeit durch ein Drahtsieb colirt und bis zum spec. Gew. 1-006 (1-004 Büchnee) verdünnt, neutralisirt und in einem Kolben mit Watteverschluss eine Stunde lang im langsamen Kochen erhält. Behrens. Kent's und Berthold's Methoden, Algen und Infusorien mit- tels Jodlösung zu fixiren (Kent, W. S., Manual of the Infusoria ; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. H vol. III, 1883, pt. 5 p. 730. — Berthold, G., Beiträge zur Morphologie imd Physiologie der Meeresalgen. Pringsheim's Jahrb. f. wiss. Bot. Bd. XIII, 1882, p. 704; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. H vol. III, 1883, pt. 3 p. 451; Amer. Naturalist vol. XVH, 1883, p. 456; Am. Monthly Microsc. Journ. vol. IV, 1883, no. 8 p. 157). Kent empfiehlt die Anwendung der Jod-Jodkaliumlösung als Er- satz für die Ueberosmiumsäure, da sich dieselbe, abgesehen von ihrer 120 Referate und Besprecliungen. I, 1. angenehmen Verwendbarkeit, auch durch in mancher Beziehung bessere Wirksamkeit vor dieser auszeichnen soll. Die Vorschrift zur Dar- stellung der in Verwendung zu nehmenden Lösung, von welcher der die Infusorien enthaltenden Flüssigkeit eine geringe Menge zugefügt wird, lautet : Man bereite eine gesättigte Lösung von Jodkalium in destillirtem Wasser und füge metallisches Jod so lange zu, als dasselbe noch gelöst wird. Die so erhaltene Lösung ist dann zu filtriren und soweit mit destillirtem Wasser zu verdünnen, bis sie gelbbraune Farbe angenom- men hat. Eine gesättigte Lösung von Jod in Meerwasser, welche durch Zu- satz von einigen Tropfen concentrirter alkoholischer Jodlösung zu dem ersteren erhalten wird, hat Bekthold in seinen „Beiträgen zur Mor- phologie und Physiologie der Meeresalgen" a. a. 0. als ausgezeichnetes Fixirungsmittel für die letztgenannten Organismen empfohlen. Die Algen werden etwa Ya bis 1 Minute in der Fixinmgstlüssigkeit ge- schwenkt, dann sofort in öOprocentigen Alkohol gebracht und dieser mehrmals und zwar so lange gewechselt, bis alles Jod — in der Regel schon nach Zeit von einigen Minuten — entfernt ist. Hierauf kann man zu der weiteren Behandlung, Färbung u. s. w. schreiten. Statt der alkoholischen Lösung liesse sich auch wohl die ganz gesättigte wässerige Jodkaliumlösung zur Bereitung der Meerwasserlösung verwenden. Wie sich der Zusatz der Jodlösungen zu dem Süsswasseralgen ent- haltenden Wasser in Bezug auf die Fixirung des Zellleibes verhält, hat Ref. bis jetzt noch nicht eingehend studirt. Nach einigen flüchtigen Versuchen dürften aber auch wohl hier gute Resultate erzielt werden. Br. L. Dippel. Klebs, Georg, Organisation einiger Flagellatengruppen und ihre Beziehung zu Algen und Infusorien (Unters, aus d. Botan. Institut zu Tübingen B. I, 2, 1883, p. 233 — 262 m. 2 Tfln.). Aus dieser umfangreichen Abhandlung führen wir als für unsere Zwecke interessant Folgendes an: Culturen von Euglenen. Bei diesen, wie überhaupt bei Algenculturen ist es von Bedeutung, nur auffallendes Licht zuzulassen; das einseitig einfallende Licht wirkt ungleichmässig und die Licht- empfindlichkeit tritt dabei sehr störend mit ins Spiel (p. 290). Ausge- kochter Torf mit Nährsalzlösungen getränkt wird als gutes Substrat für Euglenen- und Algenculturen empfohlen (p. 268). Zur Tödtung derCilien dient Carminsäure (in Wasser löslich), I, 1. Referate und Besprecliimgen. 121 man kann dadurch sehr leicht jede Cilie für sich tödten, die Cilie er- starrt sofort und wird abgeworfen 5 die Euglenen selbst dagegen halten sehr lange aus. Aehnlich wirken verdünnte Salzlösungen (p. 256), Membran. Das chemische Verhalten der Membran der Euglenen ist ein specifisch und graduell verschiedenes. Besonders untersucht wurde der Einfluss von Fermenten, und zwar des Pepsins und der Fäulnissbacterien. Bei Euglena viridis verschwindet im Pepsin die Membran nach 24 Stunden fast ganz, bei Phacus-Arten bleibt sie tage- lang scheinbar unverändert. Es wird durch das peptonisirende Fer- ment aus der Membran der Euglenen ein Bestandtheil entfernt, ein anderer bleibt in der ursprünglichen Structur zurück. Der erstere dürfte zu der Gruppe der Eiweissstotfe gehören, der andere mag als Zellhautstoff bezeichnet werden (p. 242). Die Membran der Euglenen ist für die verschiedensten Substanzen schwer durchlässig, selbst in so momentan tödtenden Mitteln wie Iprocentige Chromsäure lebt E. spirogyra noch merkliche Zeit, bisweilen bis zu einer Minute. In Nigrosin undlndigcarmin lassen sich Euglenen viele Wochen hindurch cultiviren, den Farbstoff nehmen sie aber niemals auf. Doch ist es bei E, spirogyra gelungen, lebende Exemplare mit Hämatoxylin blau zu färben. Nicht bloss die Höckerreihen sondern die ganze Mem- bran war dunkelblau und die Euglenen bewegten sich unzweifelhaft. Die lebenden Exemplare wurden zuerst mit 0"5procentiger Clilornatrium- lösung behandelt, dann wurde Iprocentige Chromsäure zugefügt. Nach einigen Secunden der Einwirkung wurde beides ausgewaschen und wässerige Hämatoxylinlösung hinzugesetzt. Einfach in wässeriger Hämatoxylinlösung cultivirt, leben die Euglenen sehr lange ohne sich zu färben (p. 243). Die Membran der Euglenen zeichnet sich durch ihre relativ sehr geringe Fähigkeit aus, Farbstoffe einzulagern. Es zeigt sich innerhalb der Artenreihe eine allmähliche Abnahme der Fähigkeit, wenn man von E. viridis ausgeht. Die Membran färbt sich noch mit Carminpräparaten, ähnlich mit Eosin, Anilinblau (E. deses, E. Ehrenbergii sehr schwach, die der Phacusarten nicht mehr). Ein sehr allgemeines Färbemittel ist Hämatoxylin, in welchem die Membranen blau werden. Durch Chlorzinkjod oder Schwefelsäure werden sie gelb bis braun. — Die ganze Membran der Euglenen besonders in ihren Höckern ist mit Eisenoxydhydrat imprägnirt, wodurch sie ihre gelbe bis fast schwarze Farbe erhält. Die Membran zeigt eine graduelle Verschieden- heit in der Quellungsfähigkeit. Am quellungsfähigsten ist die Membran von E. viridis, mit concentrirter Essigsäure verquillt sie so stark, dass nach Hinzufügen von Alkohol sie nicht mehr scharf begrenzt sichtbar 122 Referate und Besprechungen. I, 1. ist; sehr gering ist die Quellung selbst in Kali und Schwefelsäure bei Phacus pleuronectes (p. 241). — Zur Trennung der Höckerfäden der Euglenenmembran wird Pepsin angewendet. Es greift die Membran an, nicht aber die Höckerfäden (p. 240). Cytoplasma. Es gelingt nicht, das Cytoplasma* von der Mem- bran durch Salzlösungen zu trennen, selbst wenn man gesättigte Koch- salz- oder 40procentige Chlorcalciumlösung anwendet. Am einfachsten durch mechanischen Druck, durch Alkohol bewirkt man ebenfalls die Trennung, am besten dann, wenn man die Euglenen schon vorher ge- tödtet hatte (p. 242). Pulsirende Vacuolen. Durch wasserentziehende Substanzen kann man die Vacuolen in Stillstand überführen, wobei sich eine merk- würdige Dilatation der Hauptvacuole zeigt. Bei Anwendung lOpro- centiger Chlornatriumlösung verkleinert sich die Hauptvacuole, indem auch ihr Wasser entzogen wird. Alkaloide veranlassen eine enorme Dilatation. In schwefelsaurem Chiniu wurde nur bei Phacus pleuronectes und P, pyrum eine schwache Vergrösserung der Hauptvacuole beobachtet, die Regel ist es nicht (p. 248). Paramylon. Als Lösungsmittel wird Kali und Schwefelsäure empfohlen, von ersteren genügt eine Gprocentige Lösung, letztere muss sehr concentrirt sein (80 Vol. engl. Schwefelsäure auf 100 Vol. Wasser). Paramylon quillt nur in seinen Lösungsmitteln, charakteristisch ist es dabei, dass Lösung imd Quellung fast zusammen fallen. In öOprocentiger Kalilösung bleiben die Paramylonkörper unverändert, in 6procentiger quellen sie stark, sich sofort auflösend (p. 270). Schaarschmidt (Klausenhurg). Schaarschmidt, Julius, Beiträge zur näheren Kenntniss der Theilung von Synedra ülna(Nitzsch) Ehrenb. (Magyar Növenytani Lapok VII, 1883, Nr. 6 u. 7, p. 51). Zum Fixiren der Theilungsstadien von Synedra wird Pikrinsäure oder absoluter Alkohol benützt. Zui' Entfernung der über- flüssigen Säure werden dann die Zellen längere Zeit mit Wasser in be- kannter Weise behandelt. Zur Färbung dienen Eosin und Hämatoxylin, während letzteres die Zellhaut sowie die plastischen Theile färbt, zeichnet sich Eosin dadurch aus, dass es nur das Proto- plasma tingirt. Die auf solche Weise gefärbten Präparate halten sich gut in Glycerin. Schaarschmidt (Klausenburg). ') Strasburger, üeber XHeilungsvorgang der Zellkerne. Bonn 1882 p. 4. I, 1. Referate und Besprechungen. 123 Wille, N., Ueber die Zellkerne und die Poren der Wände bei den Phycochromaceen (Ber. Dtsch. Botan. Gesellsch. Bd. I, 1883, H. 6 p. 243). Verf. beobachtete in den Zellen der Tolypothrix lanata (Desv.) Kütz. nach der Behandlung mit verdünnter Essigsäure deutlich den Umriss des Zellkerns, in dessen Innerem sich ein bis zwei stark licht- brechende Körnchen zeigten, welche oft ein eckiges und unregelmässiges Aussehen hatten. Viele Färbemittel waren nicht anwendbar; Essigsäure und Methylgrün hatten keinen Einfluss, selbst nicht nach längerer Ein- wirkung einer concentrirteren Lösung. Eosin färbt den ganzen Zell- inhalt, den Nucleus und Nucleolus jedoch stärker. Verdünnte Häma- toxylinlösung hatte nach IGstündiger Einwirkung denselben Effect wie Eosin; concentrirtere Hämatoxylinlösung jedoch zeigte nach 20 Stunden den Nucleolus intensiv blau, den Nucleus schwach blau, den Zellinhalt kaum, die Scheiden jedoch wieder deutlich gefärbt. Bei Stigonema compactum (Ag.) fand Verf. nach der Behandlung mit Chlorzinkjod und verschiedenen, nicht näher angegebenen Färbe- mitteln, dass die einzelnen Glieder der perlschnurartigen, von einer dicken Scheide umgebenen Zellreihe durch eine einfache, sehr zarte Membran getrennt sind. J. E. Weiss. B. Zoologisches, Weigert, C:, Ueber eine neue Untersuchungsmethode des Centralnervensystems (Centralbl. f. d. med. Wiss. Bd. XX, 1882, Nr. 42 und 43 p. 753, 772). Die Berichte über die Untersuchungsmethoden des Nervensystems können nach des Ref. Ansicht nicht besser eingeleitet werden als durch ein Referat über die wichtigste Arbeit, die in den letzten Jahren auf diesem Gebiete erschienen ist, die Arbeit von Weigeet. Das Verfahren, nun seit einem Jahre bekannt, verdient das Lob, das ihm fast Alle, die sich damit beschäftigt, in vollem Maasse spenden. Noch ist es nicht in den weiteren Kreisen bekannt und geübt ; mögen diese Zeilen dazu bei- tragen, dass immer mehr Forscher sich damit vertraut machen. Die bisherigen Untersuchungsmethoden des Centralnervensystems leiden an mancherlei Unzuträglichkeiten. Bei der gebräuchlichsten Färbung, derjenigen in Carmin, werden meist nur die groben Nerven- fasern, sowie die dickeren Ausläufer der Ganglienzellen gefärbt, und 124 Referate und Besprechungen. I, 1. auch das nur an gut gelungenen Präparaten, die durchaus nicht so sicher zu bekommen sind. Die feinen Fasern, welche nicht von einer breiten Markscheide umgeben sind, namentlich die der grauen Substanz, werden oft durch die Carminfärbung eher undeutlicher, da die Zwischen- substanz sich genau in demselben Tone färbt wie die Fasern selbst. Wer z. B. kann sich rühmen mit der Carminmethode wesentlich bessere Bilder von den genannten Fasern bekommen zu haben, als diejenigen, welche Stilling von ungefärbten, in Alkohol untersuchten Schnitten giebt. Ganz dasselbe gilt für die bisher gebräuchlichen Theerfarben (Anilinblau, Nigrosin, Indulin, Eosiufarben). Die Methoden, welche mehr zeigen, die Kalimethode, die Xylol- aufhellung, die Vergoldung und die Ammoniak-Osmiumsäurebehandlung geben entweder nur vergängliche Bilder, oder lassen sich nur bei abso- lut frischen Geweben anwenden, sind ausserdem meist capriciös. Die neue, von Weigert eingeführte Färbung zeigt ausser allem Detail vollkommenster Carminpräparate noch eine Menge feinster, bis- her zum Theil unbekannter, zum Theil nur mit Gold oder Xylol nach- zuweisender Fasern in den nervösen Centralorganen. Alle sind scharf und wundervoll roth gefärbt. Ein erstaunlicher, den meisten Unter- suchern bislang unbekannter Reichthum an zarten, sich im Netz kreuzen- den Fädchen enthüllt sich z. B. in der grauen Substanz des Rücken- markes 5 wunderbar, auch für den Geübten, ist das Bild, welches die nervendurchzogene Olive, welches die Raphekreuzung in der Medulla oblongata bietet. Vor einiger Zeit wurden von Schieffebdecker mehrere Abbildungen von Rückenmarksschnitten mitgetheilt, welche Präparate wiedergaben, die im Goldbade besonders gelungen, in seltener, vielleicht einziger Weise, gelungen waren und vieles bis dahin Dunkle im Faser- verlauf besser verständlich machten. Das „Gelingen" solcher Präparate ward besonders hervorgehoben und ihre Vollkommenheit mit Recht als Grund zur VeröflFentlichung bezeichnet. Die Goldmethode ist auch heute noch nicht sicherer und noch nicht weniger capriciös. Aber Alles, was man in diesen besten Goldpräparaten sieht, kann man auf leichtere Weise und besser noch durch die WEiGEET'sche Färbung deutlich vor- treten lassen. Die Färbung wird in folgender Weise ausgeführt : Schnitte, die nicht über 0-025 dick sein dürfen, kommen zunächst auf eine Stunde in eine gesättigte wässerige Lösung von Säurefuchsin (Schaale I)'. Im Säure- *) Fuchsin S No. 130 aus der badischen Anilin- und Sodafabrik, in kleinen Quantitäten zu beziehen durch Herrn Dr. Grüblek, Leipzig, Dufourstrasse 17. I, 1. Referate und Besprecliungen. 125 fuchsin ist das färbende Princip eine Säure, im Gegensätze zum ge- wöhnlichen Fuchsin, bei welchem dasselbe durch eine Base repräsentirt wird. Die Schnitte gleichen dann etwa gut gefärbten Carmin-, Nigrosin- oder Anilinblaupräparaten. Das Bild wird aber in ganz auffallender Weise verändert, wenn man die Schnitte, nachdem man den diffus anhaftenden Farbstoff in einer grossen Schaale (Schaale U) mit Wasser abgespült hat, in eine al- koholische Kalilösuug bringt (Schaale III). Diese bereitet man für den vorliegenden Zweck so: Man bringt in 100 cc Alkohol absolut. 1 g Kali causticum fusum. Dann wartet man 24 Stunden, bis sich das, was darin überhaupt löslich ist, gelöst hat. Von dieser alka- lischen Stammflüssigkeit nimmt man auf je 100 cc Alkohol 10 cc und in diese Lösung bringt man die Schnitte. Dieses Auswaschen ist der wichtigste Act und muss genau abgepasst werden. Man sieht, wenn man die Schnitte auf einem Spatel ausgebreitet in die alkoholische Kalilösuug bringt, sogleich eine Wolke von rothem Fax'bstoff austreten. Man bewegt nun den Schnitt etwas, und sobald die erste Andeutung der grauen Substanz eintritt, nimmt man ihn heraus und bringt ihn in eine grosse Schaale (Schaale IV) mit reinem Wasser. Dieses Wasser darf keine Spur von Säure enthalten, weil sonst die Differenzirung wieder schwindet, hingegen schaden geringe etwa am Spatel haftende Kali- alkoholmengen nichts. Der Schnitt wird darin so lange abgespült, bis keine rothe Wolke mehr von ihm geht. Jetzt bringt mau ihn noch ein- mal in eine Schaale mit reinem Wasser (Schaale V) und sieht zu, ob jetzt die grauen Theile des Schnittes heller sind als die rothen. Ist dies der Fall, uud ist dabei der Schnitt noch roth, so ist die Procedur gelungen und beendet. Ist der Schnitt zu blass, so muss man ihn noch einmal färben ; ist die graue Substanz noch nicht durch hellere Farbe differenzirt, so muss der Schnitt wieder auf kiu'ze Zeit in die Kalilösung zurück und wieder von neuem in den Schaalen IV und V abgespült werden. Die Schnitte, deren Färbung gelungen ist, kommen dann in Alkohol zum Entwässern und werden in der üblichen Weise mit Nelkenöl und Cauada- balsam behandelt. Schnitte aus Celloidin-Einbettung sollten mit Xylol statt Nelkenöl behandelt werden. Diese müssen übrigens, um vollkommen entwässert zu werden, nach einander in zwei Alkoholschaalen kommen. „Trotz der vielen hierbei in Anwendung kommenden Schaalen", sagt Verf., „ist die Färbung durchaus nicht complicirt, es kommt eben bei ihr nur auf eine gewisse Accuratesse und Sauberkeit an". Ref., der nun seit fünf Monaten mit dem WEiGEKT'schen Verfalu-en arbeitet, kann das vollauf bestätigen. Hat man sich die Schaalen einmal ausgelegt 126 Referate und Besprccliungen. I, 1. und gefüllt, so wandert jeder Schnitt binnen wenigen Minuten hindurch von Nr. II bis Nr. V resp. VI und VII (Alkohol absolut.). Bei so behandelten Schnitten sind nur die Nervenfasern roth gefärbt. Die Ganglienzellen, Zwischensubstanzen, Pia etc. variiren in ihrer Tinc- tion je nach der mehr oder weniger weit getriebenen Auswaschung mit KaU-Alkohol von einem ganz blassem Aussehen bis zu einer exquisit bläulichen Färbung. Sind schon die so erhaltenen Bilder von einer überraschenden Klarheit und Schönheit, so übertreffen Schnitte, die ausser mit Säurefuchsin noch nachträglich uiit Hämatoxylin behandelt wurden, Alles was wir bisher an Färbungen im Centralnervensystem leisten konnten. Die rothe Nervensubstanz liegt eingebettet in die blass- blaue Bindesubstauz mit ihren violetten Kernen. Die rothe Färbung, welche die Nerven annehmen, liegt weder in der Markscheide, noch in dem Achseucylinder, sondern in einer der Markscheide peripher anliegenden körnigen Masse, die an den Nerven- fasern, wo gar keine deutliche Markscheide zu erkennen ist (in der grauen Substanz) den Achsencylinder dicht umgiebt. Diese „erythro- phile Substanz" (möglicherweise ein Product der Einwirkung härtender Chromsäure auf den centralen Nerv ; Ref.) findet sich in den peripheren Nerven, die eine ScHWAWsche Scheide haben, nicht in continuirlicher Lage. Deshalb ist das Verfahren für solche zunächst noch nicht zu be- nutzen ; ebensowenig bietet es Vortheile fiir die Untersuchung der End- orgaue peripherer Nerven. Auf dem Quersclmitt eines Nerven in den weissen Strängen des Fvückenmarks sieht man nicht das bekannte Sonnen- bildchen, sondern es zeigt sich zu inuerst der blassblaue Achsencylinder, dann folgt nach aussen eine helle Schicht Mark und um diese herum liegen mehrere Riuge oder ein Ring der rothgefärbten Substanz, manch- mal auch nur ein Halbriug. Zu solchen Färbungen sind nur Präparate brauchbar, welche in doppeltchromsaurem Kali, oder in Flüssigkeiten, welche dasselbe ent- halten (MüLLER'sche Flüssigkeit, EuLicKi'sche Flüssigkeit) gehärtet wurden und so lange darin verweilten, dass sie schön braun wui'den. Blassbraune oder gar in Alkohol grün gewordene Stücke geben die Fär- bung nicht. (Man kann sie aber, wie Ref. fand, auch an ihnen sehr vollkommen hervorrufen, wenn die Schnitte vor der Färbung für fünf Minuten in Salpetersäure 1 : "Wasser 20 kommen ; dort werden sie blass, perlmuttergläuzend , färben sich aber dann binnen zwanzig Minuten in der Fuchsinlösung. Leider sind so hergestellte Präparate nicht haltbar). Ganz vollkommene Präparate erhält man übrigens nur von Organen, welche ganz frisch eingelegt und sorgfältig .gehärtet sind. Die I, 1. Referate und Besprechungen. 127 Stücke sind nur oberflächlich mit Wasser abzuspülen. Solche, die nicht ganz frisch in MüLLER'sche Flüssigkeit kamen, oder die nicht sorgfältig genug behandelt wurden (bei denen z. B. die Lösungen nicht oft ge- wechselt wurden), ergeben zwar eine Tinction der gröberen oder auch der feineren Fasern der weissen Substanz, aber das dichte Fasergewirr der grauen Substanz ist nicht oder nur unvollkommen darzustellen. Edinger {Frankfurt a. M.). Weigert, C, Ueber Schnellhärtung der nervösen Central- organe zum Zweck der Säurefuchsinfärbung (l. c. Nr. 46 p 819). In der gewöhnlichen MüLLER'schen Flüssigkeit härten Rückenmarke statt in acht Wochen, schon in acht bis zehn Tagen, wenn man die Härtung im Brütofen bei 30 bis 40" Temperatur vornimmt. Man thut dabei gut, der Flüssigkeit (nach Klebs) Campher hinzu- zufügen, weil sonst leicht Mikroorganismen sich bilden. Noch schneller (schon nach ca. vier Tagen) gelingt aber die Erhärtung im Brütofen, wenn man nicht die MtriiLER'sche, sondern die ERLiCKi'sche Flüssigkeit benutzt. Sie besteht aus 2^/^ % Kali bichromicum und '/j % Cuprum sulfuricum und härtet auch ohne Benutzung höherer Temperatur sehr rasch (in acht bis zehn Tagen). Edinger. Deecke, Mikrotome. — Cutting and mounting sections through the entire human brain. (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 3 p. 449. — cfr. Proceed. Amer. Soc. Microsc. 5th. ann. meeting, 1882, pp. 275, 279.) Das „neue" Mikrotom gleicht in fast allen wesentlichen Theilen dem GuDDEN'schen. Nur am Messer finden sich einige Neuerungen. Es ist an ihm durch eine besondere Stellung der Schneide ermöglicht, dass beim Schneiden unter Alkohol auch der grösste Theil seiner Unter- fläche fortwährend angefeuchtet wird. Die Resultate scheinen gut. Verf. giebt an, dass der Geübte bei einer Schnittserie durch ein ganzes mensch- liches Gehirn nicht mehr als 2 bis 3 % Verluste habe. Die Schnitte werden sofort auf einen Bogen glasirtes Papier geschwemmt und mit diesem als Unterlage weiter behandelt, gefärbt, entwässert etc. Das Papier löst sich schliesslich auf dem Objectträger noch immer leicht vom Präparate. Edinger. 128 Referate und Besprechungen. I, 1. C. Botanisches, Brefeld's Culturmethoden zur Untersuchung der Pilze in Bkefeld, 0., Botanische Untersuchungen über Schimmelpilze Heft IV p. 1 bis 35. (Leipzig 1883). Es giebt wohl kaum einen Mykologen, der durch seine Unter- suchungen in kurzer Zeit eine so reiche Fülle von neuen Beobachtungen resp. Entdeckungen zu Tage gefördert hat, als Brefeld. Dass dies geschehen konnte, liegt zum grossen Theile mit an den von ihm ange- wendeten Culturmethoden, die wir in Folgendem vorführen wollen. An die für eine exacte Untersuchung der Pilze geeigneten Methoden stellt Brefeld die Anforderung, dass das Pilzindividuum, sei es gross oder klein, von einem einzigen Keime ausgehend, schrittweise in allen Phasen seines Lebens bis zurück zum Ausgangspunkte, bis zur Spore, verfolgt werden könne. Da die Pilze in der Natur in undurchsichtigen Medien leben und darin der Untersuchung nicht oder nur theilweise zu- gänglich sind, galt es, Substrate für ihre Entwicklung zu schaflfen, in welchen eine continuirliche Beobachtung des Pilzes und somit die Durch- führung einer geschlossenen Entwicklungsgeschichte (mit Ausschluss jeder Fehlerquelle) möglich war, die also die Mängel des natürlichen Substrates, Undurchsichtigkeit und Unzugäuglichkeit für die Beobachtung, aus- schlössen. Er bereitete zunächst für seine Pilzculturen diese Bedingungen erfüllende künstliche Nährlösungen. Für Anfertigung derselben giebt er folgende Winke : Ein Substrat, auf dem der Pilz in der Natur vor- kommt, wird aller Wahrscheinlichkeit nach auch ein geeignetes Substrat für die Entwicklung des Pilzes abgeben, und in vielen Fällen gelingt es, eine Nährlösung durch Auskochen des Substrats herzustellen. So ist der Mist von kräuterfressenden Thieren ein höchst ergiebiger Nährboden für die verschiedensten Pilzformen, und ein Decoct daraus, klar und pilzfrei gemacht, giebt eine ganz vorzügliche Culturlösung fiir sehr viele, wenn nicht die meisten Pilze ab. Man rührt den Mist mit Wasser zu einem dicken Breie an und lässt diesen einige Stunden im Dampfbade stehen. In der nach dem Erkalten abfiltrirten Flüssigkeit ist die Lösung hergestellt. Freilich ist sie in diesem Zustande noch nicht frei von allen Pilzkeimen. Dies wird sie erst durch längeres Kochen oder nach wieder- holtem Aufkochen in längeren Pausen, oder besser und leichter nach eintägigem Aufenthalte in einem Dampf bade. Verhindert man erneuten Zutritt von Pilzkeimen aus der Luft durch geeigneten Verschluss, so bleibt das Decoct unbegrenzte Zeit hindurch unveränderlich. In gleicher W'eise kann man haltbare Nährlösungen aus süssen Früchten gewinnen. Zu die- I, 1. Referate und Besprechungen. 129 sem Zwecke zieht mau am besten die getrockneten zerschnittenen Früchte, z. B. Pflaumen, Rosinen etc. mit kaltem Wasser aus und macht dann den klarfiltrirten Auszug durch Auskochen pilzfrei. Eine grössere Ver- wendbarkeit lässt sich noch durch Absättigen der freien Säure mit Am- moniak erzielen, da die aus den Früchten stammende freie Säure bei vielen Pilzen die Entwicklung hemmt. Für den praktischen Gebrauch ist es bequem, die Nährlösung im Grossen in Kolben , im Kleinen in Reagenzröhrchen auszukochen, die schon vorher mit einem Glasstabe zum Herausnehmen der Tropfen versehen und mit mehrfacher Lage von Fliesspapier verdeckt sind, oder in kleinen Spritzflaschen, aus denen man leicht einzelne Tropfen entnehmen kann. In der Regel genügt ein ein- maliges Aufkochen nach jedem Gebrauche, um sie in der Länge der Zeit pilzfrei und klar zu erhalten ; ja auch dieser Mühe ist man über- hoben, wendet man zur Aufbewahrung der Culturlösungen besondere mit Hähnen versehene Glasgefässe an. Eine bequeme Nährlösung ist weiter Bierwürze, doch ist sie schwer zu klären und bildet ausgekocht neue Niederschläge. Ferner leistet eine Abkochung von Hefe mit grösserem oder geringerem Zuckerzusatze, eine stark verdünnte Lösung von Fleisch- extract mit oder ohne Zucker gute Dienste. Endlich kann man die mannigfaltigsten Compositionen aus organischen und anorganischen Be- standtheileu gemischt und in beliebigen, für den Einzelfall besonders bemessenen Verhältnissen berechnet, anwenden. Bei dergleichen Lö- sungen ist aber besonders noch darauf zu achten, ob sie sauer oder ba- sisch reagiren. Manche Pilze sieht man in sauren Lösungen gut gedeihen, von anderen tritt nicht einmal die Keimung von Sporen ein, sobald nur eine Spur von Säure sich vorfindet. Um die Culturen rein zu erhalten, also die aller Orten in der Luft verbreiteten Pilzkeime auszuschliessen, hat nach Beefeld der Forscher sich bei seinen Untersuchungen die weitere Aufgabe zu stellen, die Utensilien rein und die zutretende Luft keimfrei zu erhalten und reine Sporen auszusäen. Die Reinigung der Utensilien erzielt man durch Siedehitze des Wassers, Ausglühen, längeres Einlegen in lOprocentige Salzsäure und darauf folgendes Abbrühen in destillirtem Wasser. Die Bildung des Staubes, die ja vornehmlich durch Trockniss und Bewegung der Luft begünstigt wird, ist möglichst durch Erschwerung der Trockniss zu vermeiden, indem der nach aussen gut abgeschlossene Culturraum im Innern feucht erhalten wird. Beefeld sagt darüber selbst : „Je weniger anderweit in diesem Räume verkehrt wird, je ausschliesslicher er den speciellen Zwecken der Pilzcultur dient, je grössere Reinlichkeit man beobachtet, umsomehr wird die Bildung des Staubes im Innern und das Eindringen desselben von aussen ver- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 1. 9 130 Referate und Besprecliimgen. I, 1. mieden werden können. In einem besonders ausgewählten und mit zweckmässigen Einrichtungen und Vorkehrungen, den Staub zu besei- tigen und seine Biklung im Innern zu verhüten, versehenem Räume, kann es nicht schwer fallen, die Luft fast ganz pilz fr ei zu er- hallten und so die grosse Fehlerquelle einer unreinen Atmosphäre bei den Pilzculturen nahezu auszuschalten". Von grösseren Pilzen vermochte Brefeld leicht reines Sporenmaterial zu gewinnen, wenn er die Sporen auf reinen Objectträgern oder Uhrgläsern auffing oder in Papierkapseln, welche einen Tag lang in einem auf 150" erhitzten Räume gelegen hatten, einsammelte. Bei kleinen Schimmelpilzen war dies schwieriger, besonders dann, wenn mehrere Formen durcheinander wuchsen. Er suchte dann durch wiederholte Culturen auf festem, pilzfreiem Substrate oder in be- sonders zusammengesetzten Lösungen die Form vorher möglichst zu isoliren und erhielt meist schon nach der dritten und vierten Cultur reines Aussaatmaterial, das in reinen Papierkapseln an trocknen Oi'teu Jahre lang aufbewahrt werden konnte. Die Isolirung eines einzelnen Keimes für die Cultur zeigte bei reinem Material keine Schwierigkeit mehr. Er mengte zu diesem Zwecke eine kleine Menge Material gleich- müssig mit Wasser und zwar mit so vielem, dass in dem mit einer Nadelspitze aufgenommenen Tropfen nur ein Keim zu finden war. Bei sehr kleinen und sehr wenig charakteristischen Sporen benutzte er statt Wasser Nährlösung, und leitete die Aussaat erst nach dem ersten Keimungsstadium ein. Für das Studium der Fadenpilze empfiehlt er, zunächst Objectträgerculturen zu machen. Die Objectträger werden nach ihrer Beschickung auf einer Leiter von Ziukblechstreifen placirt und mit einer Glocke bedeckt ; um den Innenraum mit Wasser gesättigt zu erhalten, wird die Glocke innen mittels eines Pulverisators voll kleiner Tröpfchen geblasen. Freilich stirbt trotzdem infolge von Ver- dustung des Culturtropfens der Keimling oft lange vor dem Ende seiner Entwicklung ab, und auch die Invasion fremder Keime ist nicht gänz- lich zu hindern. Um die Verdunstung zu verhüten, kann statt Wasser Caraglien oder Gelatine zur Nährlösung benutzt werden. Derartige Culturen lassen sich dann auch umdrehen, wodurch das Einfallen fremder Körper besser verhütet wird. Endlich kann man auch seine Zuflucht zu besonderen Objectträgern nehmen, in denen die Verdunstung der Nähr- lösung und die Invasion fremder Keime von vornherein unmöglich ist, ohne dass aber die Möglichkeit einer contiuuirlicheu Betrachtung beein- trächtigt wird. Sehr geeignet für viele Fälle fand Brefeld die Kammern von Recklinghausen, wie sie Geissler in Berlin anfertigt, doch ge- nügten sie nicht für alle Fälle. Als weit besser bezeichnet er solche I, 1. Referate und Besi^rechungen. 131 von einer anderen Form, die er dann auch fernerhin stets benützte. Die- selben haben keinen capillaren Raum und werden vom dünnsten Glas in Deckglasdicke gemacht, so flach auf beiden Seiten, dass immer ein gleichmässiger Ueberzug entsteht und auf der glatten, gleichmässig dicken Fläche die Fixirung eines Keimes mit starken Trockensystemen tagelang ohne Störung möglich wird. Man saugt die reinen Kammern voll und stellt nun die einzelnen, auf den Innenwänden in dem dünnen Ueberzuge von Nährlösung haften gebliebenen Keime ein. Diese Kammern sind besonders auch für Spaltpilze behufs Untersuchung derselben bis zu den kleinsten den Trockensystemen überhaupt zugänglichen Formen herab, anwendbar. Auch Hefe- und kleine Schimmelformen lassen sich bequem darin untersuchen ; endlich sind sie aber auch sehr anwendbar für Keimversuche, besonders wenn für dieselben ausser der geeigneten Nährlösung bestimmte höhere Wärmegrade nöthig sind. Der für all die beschriebenen Vorbereitungen nöthige Zeitaufwand wird durch die rapide Entwicklung der Pilze ausgeglichen. Spielt sich doch der Entwicklungsverlauf sehr vieler in wenigen Tagen ab. Freilich liegt darin auch wieder die Gefahr, die einen Pilze, die sich als Fehler eingeschUchen haben, mit anderen , die man cultiviren will , zu ver- wechseln. Unreine Culturen schliessen immer mit Penicillium , Mucor, Hefe oder Spaltpilzen ab. Die Culturmethoden für grössere Pilzformen mit länger dauernder Entwicklung anlangend, so findet Beefeld die grösste Schwierigkeit in der Bekämpfung der Spaltpilze, die zum kleineren Theile aus der Luft, zum grösseren durch die benutzten Utensilien eingeführt werden. Nur wenn die Utensilien vor der Benutzung geglüht, die Objectträger in verdünnter Salzsäure aufbewahrt wurden und die Nährlösungen einen Tag im Dampfbade gestanden hatten, wenn ferner das Aussaatmaterial mit grösster Vorsicht gewonnen und die Cultur in einem möglichst staub- freien Räume vorgenommen wurde, gelang es, die Bacterien auszu- schliessen und den vollkommenen Entwicklungsabschluss der ausgesäeten Pilze zu erreichen. So Hessen sich nicht blos Tausende von Culturen der verschiedensten kleinen Basidiomyceten auf Objectträgern zu Ende führen, sondern auch grosse Askomyceten in allen Entwicklungsstadien des vegetativen und fructificativen Lebens verfolgen. Oft Hess sich hierbei die Beobachtung machen, dass in sauren Lösungen seltener Stö- rungen durch Bacterien auftreten, und es schien vortheilhafter, solche, wenn sie vom Pilze vertragen werden, anderen vorzuziehen. Massigere Pilzformen reichten natürlich mit der geringen Nährstoffmenge auf dem Objectträger nicht aus, für sie waren Culturen auf festem Substrate 9* 132 Referate und Besprechungen. I, 1. nöthig, da solches eine üppige Ernährung ermöglicht. Hierbei war es in vielen Fällen möglich, Substrate zu schaifen, so reich an Nährstoffen, wie sie die Natur nicht bietet und dadurch Entwicklungsstadien zu er- reichen, die in der Natur nicht oder nur selten zur Entwicklung ge- langen. Dabei fällt noch ins Gewicht, dass jede Mitconeurrenz von anderen Pilzen ausgeschlossen bleibt. In diesen Culturen konnten gleich- zeitig auch Beobachtungen nach anderen Richtungen gemacht werden, die sonst kaum zur Beachtung gelangt wären, wie z. B. die mannig- fachen Wirkungen, welche das Licht auf die Pilzpflanzen ausübt. Für die massigeren Pilze ist auch wieder das nächstliegende Aussaatmaterial der Mist kräuterfressender Thiere. Derselbe wird mit Wasser zu einem dünnen Brei aufgeweicht und die Mischung einen Tag lang gut verdeckt im Dampfbade gehalten. Der flüssige Theil wird abgegossen, um als Nährlösung benutzt zu werden 5 das Feste dient, in einer reinen, mit breitem Glasdeckel verdeckten Krystallschale ausgebreitet, als Substrat. Einen noch ergiebigeren Nährboden bildet ungesäuertes Brot, das 24 Stunden lang einem Luftbade von 150 ''C. ausgesetzt gewesen ist. Während die Anwendung von Nährlösungen oder anderen Nähr- substraten der Ausgangspunkt für Pilzculturen und mykologischen Unter- suchungen bildet, die von der einzelnen Spore in geschlossener Folge hergeleitet werden sollen, giebt es nun auch Fälle, wo die Nährlösung völlig ausgeschlossen bleibt, wie bei Sklerotien und sklerotialen Zu- ständen von Fruchtkörpern (Dauermycelien etc.). Kleinere keimen oft schon nach einigen Tagen auf dem Wassertropfen des Objectträgers. Bei längerer Keimdauer ist eine feuchte Kammer anzuwenden. Grössere Fruchtkörper lässt man auf gut ausgekochtem Filtrirpapier in gut ver- decktem Uhrglase, grosse Sklerotien auf grobem Kiessande keimen. I)r. 0. E. B. Zimmermann (Chemnitz). Leitgeb, H., Ueber Bau und Entwicklung einiger Sporen (Ber. Dtsch. Botan. Gesellsch. Bd. I, 1883, H. 6 p. 246). Im Laufe der Untersuchung über den Bau und die Entwicklung von Sporen giebt der Verf. an, dass die Sporen von Preissia, Duvallia, Reboulia, Fimbriaria, Plagiochasma eine durch Chlorzinkjod stark quel- lende und sich bläuende Intine besitzen, die von einer ihr dicht an- liegenden, cuticularisirten Haut, die Verf. als Exine bezeichnet, um- schlossen ist. Bei Sphaerocarpus bedingt die Einwirkung der Chromsäure, wie schon Petounickow gezeigt hat, die Abhebung der Tetradenhaut bei längerer Einwirkung, stärkere Chromsäure aber hebt, wie auch schon Petounickow nachwies, diese Tetradenhaut rasch ab und löst sie, und I, 1. Eeferate und Besprechungen. 133 die nun freien Sporen lassen deutlich die cuticularisirte Exine und die Intine mit Celhilosereaction erkennen. Die Erkennung der einzelnen Schichten der Sporennuittorzellenmembran ermögliclit der Verf. durch Anwendung von Chlorzinkjod. J. E. Weiss. Haberlaiidt, G., Ueber die physiologische Function des Centra Istranges im Laubmoosstämmchen (Ber. Dtsch. Botan. Gesellseh. Bd. I, 1883, H. 6 p. 263). Verf. benutzt bei seinen Wasserleitungsversuchen eine wässe- rige Eosin lös ung nach dem Vorgehen Elfvings, um die physiolo- gische Function des Centralstranges im Laubmoosstämmchen festzu- stellen. J. E. Weiss. Pring'Sheim, N., Ueber Cell ulinkörner, eine Modification der Cellulose in Körner form (Ber. Dtsch. Botan. Gesellsch. Bd. I, 1883, H. 6 p. 288 m. 1 col. Tfl.). In den Schläuchen der Saprolegnien und Achlyen treten Körner auf, welche der Verf. Cellul inkörner nennt. Die wichtigeren mikro- chemischen Reactionen dieser Körner sind : 1. Jod färbt sie nicht blau und Jodlösungen bringen an ihnen keine der bekannten Farbentöne der Jodstärke hervor. 2. In allen gebräuchlichen Lösungsmitteln der Fette und Harze sind sie vollkommen unlöslich; durch absoluten und diluirten Alkohol und Aether werden die Cellulinkörner nach wochenlanger Behandlung nicht verändert. 3. Sie zeigen keine Reaction von proteinhaltigen Körpern ; so werden sie durch Jod weder gelb noch braun, durch Salpetersäure allein oder durch Salpetersäure und Ammoniak oder Kali nicht gelb, durch das MiLLON'sche Reagens nicht roth gefärbt; sie speichern FarbstolFe nicht auf, so nehmen sie Carminlösungen und Anilinroth gar nicht an und von Hämatoxylin und Anilinblau werden sie nur unter Umständen schwach gefärbt. 4. Kaustische Alkalien, wie concentrirte Kalilauge, zeigen in der Kälte selbst nach Wochen keine Einwirkung; nach längerem Kochen jedoch werden sie blasser und unscheinbarer. 5. Concentrirte Salpetersäure und Salzsäure scheinen bei gewöhn- licher Temperatur schwach darauf einzuwirken ; man kann sie in Salpeter- säure und der ScHULZE'schen Mischung kurze Zeit erwärmen; bei län- gerem Kochen werden sie sehr blass und unscheinbar. 6. Sie lösen sich schon in massig concentrirter Schwefelsäure (1 Ha SO4 : 1 H2 0) bei gewöhnlicher Temperatur, wie manche Cellulose- membranen. 134 Referate und Besprechungen. I, 1. 7. Ebenso lösen sie sich leicht ohne Rückstand sofort in wässe- riger, nicht zu verdünnter Chlorzinklösung. 8. Sie lösen sich nicht bei unmittelbarem Einbringen in Kupfer- oxydammoniak, selbst nicht bei längerer Einwirkung, Diese Reactionen gelten für alle Zustände der besprochenen Körner. Die morphologischen Charaktere und die mikrochemischen Reactionen deuten auf eine Verwandtschaft mit Stärkekörnern und Zell- membranen hin. Diese Cellulosemodification, vom Autor „Cellulin" genannt, nähert sich der Fibrose von Fkemy. Der wesentliche chemische Charakter des Cellulins besteht in der ausserordentlichen LösUchkeit in wässeriger Chlorzinklösung und in verdünnter Schwefelsäure. Die Cellulinköruer unterscheiden sich von der Membran der Saprolegnien, indem die Membranen der Saprolegnien sich durch Chlor- zinklösung bläuen, während die Cellulinkörner sich darin lösen; ferner lösen sich die Membranen von Achlya und Apodya leicht in frisch be- reiteter, ammoniakalischer Kupferoxydammoniaklösung nach vorher- gehendem Kochen in Salpetersäure oder nach Erwärmung in Salpeter- säure und Kalichlorat, während bei gleicher Behandlung die Cellulin- körner nur in ihren inneren Schichten aufquellen. Die Cellulinkörner sind chemisch von den Stärkekörnern verschieden. Die älteren Stadien der Cellulinkörner zeigen eine Schichtung ; der Kern scheint von der dichteren Substanz gebildet, ebenso wird die äusserste Schicht von dichter Substanz gebildet. J. E. Weiss. Molisch, Hans, Ueber den mikrochemischen Nachweis von Nitraten und Nitriten in den Pflanzen mit- tels Diphenylamin oder Brucin (Ber. Dtsch. Botan. Gesellsch. Bd. I, 1883, H. 3 p. 150). Während Borodin und N. A. Monteverde durch Behandlung der Pflanzenschnitte mit Alkohol den Salpetergelialt zu bestimmen suchten, verwendete der Verf. das von den Chemikern in letzter Zeit zum Nach- weise sehr kleiner Mengen von Nitraten und Nitriten empfohlene D i p li e n y 1 a m i n und Brucin um auf mikrochemischem Wege die Gegenwart der genannten Stickstoff"verbindungen zu constatiren. Diphenylamin wurde in einer Lösung von '/, (,„ bis '/, „ g in 10 cc reiner Schwefelsäure angewendet bei der Prüfung frischer Schnitte; bei eingetrockneten Schnitten wendet man sehr concentrirte Lösungen an ; die Anwesenheit von Nitriten oder Nitraten giebt sich durch eine tiefblaue Färbung zu erkennen, die längere oder kürzere Zeit an- dauert, um dann zu verschwinden oder ins Braungelbe überzugehen. I, 1. Referate und Besprechungen. I35 Sind sehr geringe Spuren dieser Salze vorhanden, so lässt raan die Schnitte auf dem Objectträger erst eintrocknen und behandelt dann mit recht concentrirter Diphenylaminlösimg. Er u ein in einer Lösung von 7,0 g in 10 cc reiner Schwefelsäure angewendet, ruft eine hochrot he oder rothgelbe vergäng- liche Färbung hervor, die jedoch bei Anwesenheit von geringen Spuren der genannten Salze nicht deutlich ist. In beiden Fällen kann die Reaction von Nitraten oder Nitriten her- rühren. J. E. Weiss. Giltay, E., üeber das Verhalten von Hämatoxylin gegen Pflanzenmembranen (Sitzungsber. d. k. Acad. d. Wiss. Amsterdam. Sitzung vom 27. Octbr. 1883 p. 2). Herr Professor Sukingar berichtet über diese Arbeit des Ref., deren Resultate sich kurz folgendermaassen zusammenfassen lassen: 1. Wie bekannt färbt Hämatoxylin intensiv die Zellkerne und weiter die meisten angehäuften plasmatischen Theile. 2. Stark gefärbt werden alle unverholzten und unverkorkten Wände. 3. Es werden auch die Hyphenwände bei mehreren Pilzen tingirt. 4. Gefärbt wird die Intercellularsubstanz der Tunica enterna von Tunicateu. 5. Nicht gefärbt werden alle vollkommen verholzten oder ver- korkten Wände und ebensowenig die cuticularisirten Membranen. 6. Bei der Färbnng erfahren die Wände keine merkliche Quellung oder Veränderung. 7. Die gefärbten Präparate können längere Zeit conservirt werden. Besonders die beiden letztgenannten Eigenschaften bilden vor dem bekannten ScHULZE'schen Reagenz entschiedene Vorzüge, und Ref ist durch viele vergleichende Beobachtungen zu der Ueberzeugung ge- kommen, dass Hämatoxylin unter Berücksichtigung des sub 1 genannten, als specifisches Reagenz auf Cellulosewände zu verwenden und sogar in den meisten Fällen dem Chlorzinkjod vorzuziehen ist. Bereitung und Anwendung sind wie folgt: Von einer Lösung von 7 g Hämatoxylin in 50 cc absolutem Alko- hol, welche vorräthig zu halten ist, werden 5 cc zu einer ^procentigen Alaunlösung gefügt. Diese Lösung trübt sich bald, sodass vor dem Ge- brauch etwas filtrirt werden muss. Es ist gut, sich die Lösung etwa eine Woche vor dem Gebrauche anzufertigen. Das zu färbende Präparat wird 5 bis 15 Minuten, wenn man eine starke Färbung wünscht, stets 10 bis 15 Minuten in dem Farbstoff ge- lassen. 136 Referate und Besprechungen. I, 1. Die weitere Behandlung ist verschieden. Wünscht man eine sehr intensive Tinction, dann wird das Präparat erst in absolutem Alkohol entwässert und dann in Nelkenöl (Brechungsindex circa 1*54) überge- bracht. Entsteht bei dem Ueberbringen in Alkohol ein tropfenförmiges Präcipitat, dann wird der Schnitt während z. B. 10 Secunden in Wasser gebracht und dann in absolutem Alkohol entwässert. Leidet durch das Nelkenöl die Sichtbarkeit des ungefärbten Präparats etwas zu viel, und ist eine weniger intensive Färbung genügend, dann wird das Prä- parat in Wasser gewaschen und in verdünntes Glyceriu (Brechungsindex = 1'40) gebracht. Ein Bild, welches ungefähr zwischen jenen beiden die Mitte hält, wird geliefert durch Lein- oder ßicinusöl (Brechungs- index circa 1-47). Dr. E. GiUay. Schwarz, Frank, Die Wurzelhaare der Pflanzen. Ein Bei- trag zur Biologie dieser Organe (Unters, aus d. bot. Inst. Tübingen Bd. I, 2, 1883, p. 135 bis 188 m. 1 Tfl. u. 3 Holzschn.). Die Membran der Wurzelhaare besteht aus zwei Theilen , einer inneren scharf abgegrenzten Schicht, die sich mit Chlorzinkjod meist blau färbt , und einer äusseren , im ungefärbten Zustande schwer zu unterscheidenden veränderlichen Schleimlage. Dieselbe färbt sich mit Chlorziukjod gelblichbraun, sie entspricht der Cuticula oberirdischer Pflanzentheile. Besonders schön sieht man die Zweischichtigkeit der Wurzelhaarmembran an den Haaren von Taxus baccata. Die innere Lage erscheint auf dem optischen Querschnitt roth, die äussere blau. Will man diese Schleimschicht bei anderen Pflanzen nachweisen, so ist es nothwendig, nur in sehr trockener Erde gewachsene Haare zu unter- suchen, da bei etwas grösserer Feuchtigkeit ein zu starkes Aufquellen event. eine Lösung resp. Vertheilung des Schleimes eintritt. Jod, Jod- schwefelsäure, verdünnte Anilinlösungen färben nicht, dagegen wird diese gummöse Schicht durch eine wässerige oder besser noch alkoho- lische Lösung von Carminsäure schön roth '. Sehr vortheilhaft ist auch die Färbung mit Anilinschwarz (Nigrosin), wodurch die Gallerthülle violett erscheint. Will man andere Anilinfarben anwenden, ist es noth- wendig, die Wurzeln 12 bis 18 Stunden in einer Tauuinlösung liegen zu lassen, giebt man dann z. B. Methylgrüu zu, so erscheint die innere >) Die aus Cochenille dargestellte Carminsäure eignet sich vor- züglich zur Färbung von gummösen Substanzen. Etwas weniger gut färbt Carthamin, man löst etwas von diesem Farbstoff in wenig kohlen- saurem Natron und neutralisii't sodann mittels Citronensäure. Besonders schön wird Cellulose tingirt (Schwarz 1. c. p. 143). I, 1. Referate und Besprechungen. 137 Membran mehr gelblich, während die äussere gummöse Schicht blass- grün erscheint. Nach längerem Liegen (14 Stunden) in dem Farbstoff nahm die äussere Membran eine mehr blaue Farbe an, wodurch sie sich noch besser abhob. Hämatoxylinlösung (zu gleichen Theilen Wasser und Alkohol) färbte die innere Membran röthlich, die äussere Schicht violett (p. 142). Scliaar Schmidt {Klausenhurg). Gibelli, Giuseppe, Nuovi studi snlla malattia delCastagno detta dell' inchiostro. Bologna 1883 (p. 8 bis 11). Im Bast, im Phelloderm und in der Borke, manchmal auch im Holz- parenchym und um den grösseren Holzgefässen des Stammes, wie auch im Holztheile und in der Rinde der Wurzel der an „malattia dell' inchiostro" erkrankten Castanienbäume findet sich Ellagen säure in Sphärokrystallen. Diese sind im Wasser und Alkalien löslich, im kohlen- saurem Kalium lösen sie sich mit gelber, in concentrirter Salpetersäure mit granatrother Farbe auf. Eisenchlorid erzeugt grün-schwarze und salpetersaures Silber rothbraune Färbung, Schaar Schmidt (K/ausenburg). OÜTier, Louis, Les procedes operatoires en histologie vegetale. (Extrait de la Revue des Sciences nat.). Paris (Savy) 39 pp. 8". Ein kurzer Abriss dessen, was man gewöhnlich als Botanische Mikrochemie bezeichnet. Verf. sagt, dass, während in der Zoo- logie die Mikrochemie schon sehr ausgebildet sei, diese Methode der Untersuchung in der Pflanzenhistologie noch „tres-rudimentaire" wäre. In wie weit dieses zutrifft, wollen wir hier nicht entscheiden ; wir wollen nur hinzufügen, dass die Pflanzenhistologie, die doch nicht sehr rudi- mentär genannt werden kann, gerade soviele mikroskopische Methoden besitzt, als sie nöthig hat. Verf. theilt das Werkchen in 7 Capitel : 1. Aufhellung, 2. Fixi- rung der Formen, 3. Contraction , 4. Präcipitation , Krystallisation, 5. Lösung, Zerstörung, 6. Färbung, 7. Conservirung. Unseres Erachtens ist dieses die denkbar unglücklichste und unpraktischste Eintheilung, die es giebt; hätte Verf. die des PouLSEN'schen Buches * beibehalten, an das er sich sonst enge hält, so würde er besser gefahren sein; bei der Eintheilung des Verf. muss nothgedrungen Alles auseinandergerissen werden. Die zahlreichen Citate scheinen meist nach Potjlsen gemacht zu sein ; wenigstens müsste Verf., wenn er selbständig in der ein- schlägigen Literatur gearbeitet hätte, doch auf die zahlreichen wichtigen 1) V. A. PouLSEN, Botanische Mikrochemie, übers, v. Mülleh, Cassel 1881. 138 Eeferate und Besprechungen. I, 1. Abhandlungen, auch französischen, gestossen sein, die Poulsen nicht citirt. Auf die bekannten Thatsachen des Inhaltes selbst einzugehen ist hier nicht der Ort; wir wollen nur die folgenden Bemerkungen machen: Verf. benutzt, um Pflanzenschnitte aufzuhellen, 36procentigen Al- kohol, dem er tropfenweise concentrirte Salpetersäure zusetzt, bis sich Dämpfe von Uebersalpetersäure entwickeln, er steckt den Alkohol dann an und erhitzt das Gemisch, um es noch mehr zu concentriren (!). GuiGNAED (1880) wendet Chromsäure an, um Zellkerne im Embryo- sack von Mimosen zu fixiren (wievielprocentig, wird nicht gesagt; cfr. übrigens Steasbükgek, Zellbildixng u. Zelltheilung 1880 p. 172 f., Flem- MiNG, FiiESCH u, A. — also nichts Neues). Die Ueberosmiumsäure (p. 8) zur Fixirung von Protozoen haben nicht ViGNAL imd Ceetes zuerst angewendet; sie ist zu diesem Zwecke in Deutschland seit Jahren in Gebrauch; viele Forscher empfehlen sie dazu übrigens nicht. Die Nachweisung der Saccharose von Boxnier (p. 13) bedarf der Bestätigung ; jedenfalls ist die Methode nur für wenige Fälle anwendbar. Bei Besprechung der Anilinfarben wird vorzugsweise der Bacterien- färbung von Koch gedacht, während diese Farbstoffe doch auch sonst in der Pflanzenhistologie die ausgedehnteste Anwendung finden. Die HANSTErN'sche Methode der Anilinfärbung wird überhaupt nicht erwähnt. Die „Corps pigmentes" also Chlorophyll nebst seinen Modificationeu und die anderen Pflanzenfarbstoffe werden auf 14 Zeilen (!) abgehandelt, obgleich das Studium dieser Stoffe, wie Verf. sagt : „presente un grand interet pour la physiologie, l'agriculture et Tindustrie". Uebrigens ist ims nichts Neues oder Erwähnen swerthes aufgefallen. Die ganze Abhandlung ist im Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 5 p. 741 übersetzt, welche üebersetzung jetzt auch von den Microsc. News abgedruckt wird. Behrens. X>. MinerologiscJi-Geologisches. Referent: Professor Dr. A. Wichmann in Utrecht. Cohen, E., Sammlung von Mikrophotographien zur Ver- anschaulich uug der mikroskopischen Structur von Mineralien und Gesteinen, aufgenommen von J. Geimm in Offenburg. Stuttgart (Schweizerbart) 1879 — 83. I. 1. Referate und Besprecliungen. 139 Die vorliegenden Tafeln gehören zweifellos zu dem Besten, was bisher in der photographischen Wiedergabe mikroskopischer Objecte geleistet worden ist. — Anf 80 Tafeln zu je vier Photographien finden sich die wichtigsten Erscheinungen, welche die Mineralien und Gesteine unter dem Mikroskope darbieten, zusammengestellt; z. B. charakteri- stische Krystalldurchschnitte, Mikrolithe, Gruppirung derselben, Kry- stallite , Einschlüsse , Anordnung derselben , Spaltung, Schlagfiguren, Streifung, Zonarstructur, Zwillingsbildungen, Verwachsungen, Aggrega- tionsformen, diverse optische Erscheinungen, Umwandlungserscheinungen, Aetzfiguren, mikrochemische Reactionen, Kieselfluorverbindungen, Mikro- structur einiger Gesteine u. s. w. Die betreffenden Objecte sind mit grosser Sorgfalt ausgewählt. Der 10. Lieferung (mit der das Werk seinen vorläufigen Abschluss findet) ist ein ausführliches Inhaltsverzeichniss beigegeben, welches in dreifacher Form zusammengestellt ist und zwar 1. nach der Art der Erscheinungen, 2. nach den Mineralien und 3. nach den Gesteinen. Die Orientirung wird hierdurch sehr erleichtert. Becke, F., lieber die Unterscheidung von Augit und Bronzit in Dünnschliffen (Tschermak's Mineralog. und petrogr. Mitthlg. Bd. V, 1883, p. .527). Die vor fünf .Jahren von Bertkand, Klein und Lasaulx fast zu gleicher Zeit vorgeschlagenen Methoden, um das Mikroskop in ein Pola- risationsinstrument mit convergentem Licht umzuwandeln, haben trotz der mannigfachen sehr nützlichen Dienste in ihrer Anwendung bei der mikroskopischen Gesteinsanalyse doch nicht ganz den in sie gesetzten Erwartungen entsprochen. Ein Uebelstand besteht momentan darin, dass bei grosser Dünne der Präparate eine Intensitätsabnahme der Interferenzerscheinungen eintritt, die sichere Beobachtungen ausser- ordentlich erschwert. Wo derartige Hindernisse nicht vorhanden sind, liefert diese Methode — und das zeigt auch die vorliegende Arbeit — gute Resultate. Der Verf. theilt seine Beobachtungen über das Verhalten der Au- gite und Bronzite im convergenten polarisirten Lichte (c. p. L.) und im parallelen polarisirten Lichte (p. p. L.) mit und beschreibt des Näheren die sich in den verschieden orientirten Schnitten darbietenden Inter- ferenzerscheinungen. Die sich ergebenden Unterschiede werden in der nachfolgenden Uebersicht wiedergegeben : 140 Referate und Besprechungen. I, 1. Bronzit (rhombisch). 1. Form meist längere Säulen mit stiunpf dachförmiger Endigung. Quer- schnitt breit rechteckig durch Vor- walten von ooPoo (100) und ocPoc (010) mit durch ooP (110) abgestumpf- ten Ecken. Spaltrisse nach ocP, sel- tener nach ooPoo oder ocPoo. 2. Querschnitte zeigen im p. p. L. gelblich-weiss I 0, Auslöschung nach den Rechteckseiten. Im c. p. L. ver- waschenes schwarzes Kreuz, das sich beim Drehen öffnet, und entweder gar keine, oder nur Spuren von Lemnis- caten am Rande des Gesichtsfeldes. Austritt der --(-Mittellinie. 3. Längsschnitte nach ocPoc (100) gelblich-weiss 1 0, gerade Auslöschung, Austritt der — Mittellinie. Tnterferenz- bild ähnlich wie beim Querschnitt. 4. Längsschnitte nach ooPoo (100). Interferenzfarben braunroth 10 bis blau II 0. Gerade Auslöschung, im c. p. L. kein Axenbild. 5. Schnitte senkrecht zur opti- schen Axe sind schmal rechteckig und zeigen im c. p. L. blos die HjT^)erbel. 6. Zwillingsbildung ist selten. Knieförmige Berührungszwillinge nach Domenflächen mPoo (okl), manchmal zu mehreren, sternförmigen Krystall- gruppen ähnlich. Augit (monoklin). 1-. Form gedrungene Säulen, häufig mit schiefer Endigung. Querschnitt meist achteckig durch gleichmässige Entwicklung von ooPoo (100), ocPoo (010) und ocP (110). Spaltrisse nach ocP. 2. Querschnitte genau _\_ zur Prismenzone zeigen im p. p. L. blau bis roth II 0. Auslöschung nach zwei Seitenpaaren des Achtecks. Im c. p. L. das Bild einer optischen Axe am Rande des Gesichtsfeldes mit dunkler Hyperbel und 1 oder 2 farbigen Ringen. 3. Längsschnitte nach ooPoo (010) haben oft schiefe Umrisse, schiefe Auslöschung, hohe Interferenzfarben bis gelbgrün III 0, kein Axenbild im c. p. L. 4. Längsschnitte nach ocPoc (100) Interferenzfarben blau-roth II 0, gerade Auslöschimg. Ein seitliches Axenbild im c. p. L. am Rande des Gesichts- feldes oder wenigstens deutlich mehrere Ringe. 5. Schnitte _\_ zur optischen Axe sind schief achteckig, ähnlich den Querschnitten, oder sie gleichen den Längssclmitten nach ocPoo (100). Im c. p. L. dunkle Hyi)erbel und ein oder zwei Ringe sichtbar. 6. Zwülingsbildung sehr häufig nach ooPoo (100) oft in Gestalt ein- geschalteter Lamellen. U, Technisches. Berthold, Victor, Ueber die mikroskopischen Merkmale der wichtigsten Pflanzenfasern (Fachzeitg. f. Waarenk. 1883, Nr. 3 p. 14). Verf. weist Cellulose und Holzstoff in den Textilfasern nach durch I, 1. Referate und Besprechungen. 141 die bekannte Jod-Schwefelsäure-Methode. Die Reagentieu bereitet er auf eine von der üblichen etwas abweichenden Weise, nämlich : Jodlösung, lg Jodkalium in 100 g Wasser gelöst und solange Jod zugesetzt, bis die Lösung gesättigt ist imd einige Jodblättchen am Boden des Gefässes zurückbleiben. Schwefelsäurelösung. 2 Voll, reinstes Glycerin und 1 Vol. Wasser werden in einem Gefäss unter Umrühren und möglichster Ab- kühlung des Gefässes nach und nach mit 3 Voll, concentrirter englischer Schwefelsäure versetzt. Die zu untersuchenden Fasern werden auf dem Objectträger kurze Zeit der Einwirkung der Jodlösuug überlassen, dann entfernt man letztere mit Filtrirpapier und setzt 1 bis 2 Tropfen der Schwefelsäure- lösung zu. Die Reagentien ändern mit der Zeit ihre Concentration ; die Jod- lösung muss dann erneuert werden, die Schwefelsäurelösung kann ge- wöhnlich durch Zusatz einiger Tropfen Schwefelsäure wieder brauchbar gemacht werden. Um Fasern im Längsverlaufe zu untersuchen, macerirt sie Verf. durch halbstündiges Kochen in einer Lösung von 10 Th. Soda oder Pottasche in 100 Th. Wasser, wäscht nach dem Kochen gut mit Wasser aus, zerreibt zwischen den Fingern, trennt die einzelnen Bastfasern auf dem Objectträger mit einer Nadel und bedeckt mit Glycerin und Deckglas. Zur Herstellung der Querschnitte werden die macerirten Fasern durch Reiben zwischen den Fingern möglichst parallel gelegt, mit einer dicken Gummilösung, der man einige Tropfen Glycerin zugesetzt hat, bestrichen und durchtränkt, zwischen zwei Korke gelegt, etwa 24 Stunden eintrocknen lassen und geschnitten. Die Beobachtung geschieht zu- nächst in Glycerin, dann unter Zuhilfenahme obiger Reagentien. Behrens. Tiemaiin, Untersuchung des Wassers auf entwicklungs- fähige Mikroorganismen (Verhandl. dtsch. Gesellsch. f. öffentl. Gesundheitspflege zu Berlin, 1883. Im Manuscript ver- vielfältigt und den Mitgliedern des X. hygienischen Congresses in Berlin als Festgabe gewidmet). Prof. TiEMANN theilt folgende neue Methode der mikroskopisch- bacteriologischen Untersuchung des Wassers mit : Es werden je 200 cc Wasser in sorgfältig gereinigte, durch heissen Dampf desinficirte, mit ebenso desinfioirtem Wattepfropf verschlossene Gläser gefüllt. Zur Entnahme des Wassers diente eine vor jedesmaligem Gebrauche mit 142 Referate und Besprechungen. I, 1. destillirtem Wasser mehrmals ausgespülte Pipette. Ein Tropfen des vorher stark geschüttelten Wassers wird auf ein Deckglas gebracht, dieses mit nach unten gerichtetem Tropfen auf einen hohlgeschliffenen Objectträger gelegt und bei lOOfacher, darauf bei 500facher Vergrösse- rung durchgemustert. Mehrere derartige Präparate werden auch unter Schutz trocknen gelassen. War der Tropfen (nach 15 bis 20 Minuten) verdunstet, so wurde die Substanz unter den Deckgläschen mit Methyleu- blaulösung gefärbt, abermals getrocknet, in Canadabalsam eingelegt und bei öOOfacher Vergrösserung untersucht. Die Bacterien erscheinen blau gefärbt. Um die Zahl der im Wasser befindlichen entwicklungsfähigen Or- ganismen zu bestimmen, wird eine bestimmte Menge Wassers (Viooo Tropfen bis 10 Tropfen) mit sterilisirter Nährgelatine vermischt. Die Tropfenzahl wird stets mit derselben graduirten Pipette, die vorher aus- gekocht und mit destillirtem und mehrmals mit dem zu untersuchenden Wasser ausgespült wurde, abgemessen. Jede Probe wird mit 10 cc verflüssigter Gelatine angestellt, die im kalten Räume auf einer vorher durch Hitze sterilisirten Glasplatte ausgebreitet wird. Unter einer feuchten Glocke im temperirten Zimmer entwickeln sich Colonien von Mikroorganismen, die an verschiedenen Stellen der Platte bei SOfacher Vergrösserung pro Quadratceutimeter gezählt werden. Die Durch- schnittszahl der gefundenen Werthe multiciplirt mit dem Flächenraum der ausgebreiteten Gelatine giebt die Zahl der in der Probe enthal- tenen entwicklungsfähigen Mikroorganismen und daraus wird die Zahl derselben pro Cubikcentimeter Wasser berechnet. Zur Zählung benützt man eine in Quadratceutimeter getheilte Platte, welche unter die Probe- platte gelegt wird. Controlversuche mit destillirtem Wasser ergaben, dass die Fehler- quellen der Methode sich in sehr engen Grenzen bewegen. Die gefun- denen Werthe sind immer geringer, als sie der Wirklichkeit entsprechen, weil oft mehrere Colonien sich decken und weil nicht alle Mikroorga- nismen zur Entwicklung kommen. Dr. J. Moeller. I, 1. Neue Literatur. 143 Neue Literatur.^ 1. Lehr- und Handbücher. Bachmann, Otto, Unsere modernen INIikroskopo und deren sämmtliche Hilfs- und Nebenapparate für wissenschaftliche Forschungen. München und Leipzig (Oldenboiu-g). 1883. XV u. 344 pp. 8". Mit 175 Abbild. 6 Mk. Behrens, W., Hilfsbuch zur Ausführung mikroskopischer Untersuchungen im Botanischen Laboratorium. Braunschweig (C. A. Schwetschke und Sohn) 1883. XII. u. 398 pp. 8«. Mit 132 Figg. und 2 Tfln. 12 Mk. [Cfr. auch Bull. Soc. Bel|e de Mcrosc. t. IX. 1883 no. V. p. 63 n. VII p. 249. — Joum. R. Microsc. Soc. Ser. II. vol. HL, 1883, pt. 2 p. 285, — Botan. Centralbl. Bd. XV, 1883, p. 85. — Fachztg. f. Waarenk. 1883 No. 3 p. 16]. Bizzozero, G., Handbuch der klinischen Mikroskopie. Autorisirte deutsche Ausgabe von A. Ldstig und S. Bernheimee. Erlangen (Besold) 1883. XU. und 251 pp. 8". Mit 47 Figg. und VII Hth. Tfln. 8 Mk. , Manuel de Microscopie clinique, avec des Instructions sur l'emploi du microscope en medicine legale et sur les Operations etc. Traduit de l'italien par Ch. Firket. Bnixelles (Manceaux) 1883. XU. und 359 pp. 8». Mit 47 Figg. und VII lith. Tfhi. 10 Fr. [Cfr. auch Bull. Soc. Beige de Microsc. t. IX. 1883 no. VIII. pag. 101]. Bonchut, E., Traite de Diagnostic et de Semiologie comprenant l'expose des procedes physiques et chimiques d'exploration medicale, auscultation etc. etc. [chap. XIV. Microscopie]. Paris 1883. *) Diese Uebersicht enthält die vom 1. Januar bis zum 1. December 1883 erschienene mikroskopische Literatur ; in den folgenden Heften werden dagegen Viertel Jahrsübersichten veröffentlicht werden. Die Titel italienischer, spanischer, portugiesischer, holländischer, dänischer, schwedischer, russischer, ungarischer, polnischer und czechischer Pubücationen werden auch in wörtlicher deutscher Uebersetzung beigegeben. — Absolute Vollständigkeit war für dieses Mal nicht zu en-eicheu, doch wird es in Zukunft möglich sein. — B. 144 Neue Literatur. I, 1. Davis, Geo. E., Practical Microscopy. 2eJ- ed. London (Bogue) 1883. 7 s. 6 d. Dippel, L., Das Mikroskop und seine Anwendung. 2. Aufl. Tbl. I. Hand- buch der allgemeinen Mikroskopie. Braunschweig (Vieweg und Sohn) 1883. XVIII. und 1030 pp. 8". Älit 579 Figg. und 1 Tfl. 34 Mk. Grifflth, J. W,, and Henfrey, A., The Micrographic Dictionary. 4"' ed. Ed. by J. W. Griffith. London (van Voorst) 1883. 8«. 2 £ 12 s 6 d. Latteiix, P., Manuel de technique microscoi)ique ou guido pratique pour l'etude et le maniemeut du microscope. 2'ne edit. Paris (Coccoz) 1883. XL et 477 pp. 18". ]\Iit 177 Figg. 7 Fr. 50 c. Trutat, E., Traite elementaire du Microscope. Premiere Partie : Le micro- scope et son emploi. Paris 1883. (Gauthier-Vülars). XV. u. 322 pp. 8". av. 171 figg. et 1 piche. 8 Fr. Miquel, P., Les organismes vivants de l'atmosphere. Paris (Gauthier -Villars). 1883. Vin. u. 310 pp. 8». Mit 86 Figg. und 2 Tfln. 9 Fr. 50 c. 2. Mikroskop und mikroskopische Apparate. a. Neue Mikroskope. Behrens, AV. J., Bericht über einige, während des Jahres 1882 publicirte Verbesserungen von Mikroskopen und mikroskopischen Apparaten (Botan. Centralbl. Bd. XIV, 1883, p. 253, p. 350). (Ciirties, Tli.), Baker's seaside microscope (Am. Monthly Microsc. Journ. vol. IV, 1883, no. 10 p. 190). Fase, H. F., On a portable binocular dissecting and mounting microscope (Journ. Quek. Micr. Club vol. I, 1883, p. 109. — cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 3 p. 415). (Hitchcock, R.), A new binocular (Am. Monthly Microsc. Journ. vol. IV, 1883, no. 5 p. 97). Bausch and Lomb Opticai. 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Band I. Heft 2. Die Verwendung^ des elektrisclien Glüliliclites zu mikroskopisclien Untersucliung^en und mikro- pliotogTapliisclien Darstellung^en \ Von Hofrath Dr. Theodor Stein in Frankfurt a. M. Hierzu 7 Holzsclinitte. Man hat den elektrischen Strom zu Beleuchtungszwecken in der mikroskopischen Technik schon seit vielen Jahren in Benutzung ge- zogen und zwar um mit Hilfe von Projectionsapparaten mikroskopische Objecte an der weissen Wand eines Auditoriums einer grösseren Zu- hörerschaft anschaulich zu machen. Der Fortschritt in der Construc- tion der Objective gestattete, auch auf diesem Wege feinere Structur- verhältnisse der Beurtheilung zu unterziehen. Jedoch fanden die be- züglichen Leistungen ihre Grenze in einer etwa SOfachen Linearver- grösserung. Wenn auch die Bilder mittels eines mikroskopischen Pro- jectionsapparates, sei es des Sonnenmikroskops, sei es des elektri- schen Projectionsmikroskops in ganz colossalen, in das Vieltausendfache gehenden Vergrösserungen an die Wand des Auditoriums geworfen wurden, so handelte es sich immer uur um ein Anseiuandertreten der Zeichnung, jedoch niemals um eine grössere Definition der einzelnen Gewebsformen, es traten durch die Vervielfachung des Durchmessers feinere Details des Objects nicht hervor. ') Vorläufige Mittheilungen über denselben Gegenstand finden sieb in der Zeitschrift des elektrotecbniscben Vereins zu Wien (Octob. 1883) und in der Elektrotechnischen Rundschau (Dec. 1883). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 2. 11 162 Stein: Die Verw. d. elektr. GlüLliclites zu mikrosk. Unters. I Das elektrische Licht, welches auf diese Weise Verwendimg fand, war dasjenige des VoLXA'schen Lichtbogens, welcher bekanntlich mittels eines Lichtregulators zwischen zwei, je nach der Stärke des Stroms ihre gegenseitige Stellung regulirenden Kohlenspitzen in namhafter Intensität erzeugt werden kann. Das seit einigen Jahren zu elektrischen Beleuchtungszwecken verwandte elektrische Glühlicht eignet sich zu der- artigen Demonstrationen weniger, weil die Lichtintensität der bisher fabricirten Kohlenglühlichtlampen eine 10- bis 50-fache Normalkerzen- stärke nicht zu übersteigen pflegt und diese Lichtkraft selbstverständlich für Projectionszwecke nicht ausreichen würde. Dagegen kam man auf die Idee, das Kohleuglühlicht zu mikroskopischen Untersuchungen mittels des gewöhnlichen, zusammengesetzten Mikroskops zu verwenden. Die ersten Untersuchungen, welche in dieser Richtung gemacht wurden, geschahen auf der Münchener Elektricitätsausstellung 1882, woselbst von der wissenschaftlichen Commission die erwähnte Beleuchtungsart sowohl zu anatomischen und mikroskopischen, als auch zu spectro- skopischen Arbeiten benutzt wurde. An der Prüfung über die Brauch- barkeit des elektrischen Lichtes zu solclien Untersuchungen betheiligten sich damals die Professoren Kühne, von Voit, Kupffer, RtJDiNGEB, und BoLLiNGER. „In allen Fällen war das Licht genügend zu den feinsten mikroskopischen Beobachtimgen und für die stärksten Vergrösserungen, dabei frei von den bekannten Nachtheilen anderer künstlicher Beleuch- tungen, wie dem Vorwiegen des Gelb und der bei grösserer Annäherung lästigen Wärmestrahlung. Das Licht wurde ebenso wie eine Studir- lampe verwendet. Das schwächste Licht von 16 Kerzen genügte noch in Entfernung von Im; die grösste Intensität von 60 Kerzen erwies sich ausreichend zum Ersätze des besten disponiblen diffusen Tages- lichtes, wenn das Licht, durch eine Sammellinse parallel gemacht, auf den Spiegel fiel. Es wurden alle möglichen Präparate : Muskeln, Nerven, Epithelien, Knochen, Haut, Embryonen, Bacterien-Objecte, Diatomeen und dergleichen untersucht. Besonders aber überraschte das untadel- hafte Bild der rothen Blutkörperchen, als desjenigen Objectes, das der künstlichen Beleuchtung bisher am meisten widerstrebte. Das Spectrum der Glühlampen ist in den Regionen des Blau und Violett unvergleich- lich intensiver, als dasjenige jeder anderen künstlichen Lichtquelle"'. Die Münchener Versuche brachten mich schon im Winter 1882 auf die Idee, das elektrische Glühlicht in Anbetracht des Umstandes, dass ») Officieller Bericht über die im Königlichen Glaspalaste zu München 1882 stattgehabte internationale Elektricitäts-Ausstellung. München 1883, p. 23G. I, 2. Stein: Die Verw. d. elektr. Glilhliclites zu mikrosk. Unters. 163 es im Verhältnisse zu seiner Lichtkraft äusserst wenig Wärmestrahleu entsendet, zur directen Beleuchtung des mikroskopischen Objectes in der Weise zu verwenden, dass ich es in Form einer kleinen Glühlicht- lampe unter den Objecttisch an Stelle des Beleuchtungsspiegels an- brachte. Da es indess damals noch keine so kleineu Kohlengiühlicht- lämpchen gab, Hess ich mir von dem renommirten Fabricanten elektri- scher Glühlichtlampen C. H. F. Müller in Hamburg kleine, ca. 1 cm lange und 3 mm weite Glühlichtlämpchen anfertigen, in welchen statt des durch den elektrischen Strom in Weissgluth gebrachten Kohlen- fadens eine Platinspirale Verwendung fand. Während ich mit den ein- schlägigen Untersuchungen noch beschäftigt war, erschien in dem Journale der Royal Microscopical Society zu London * ein Artikel von C. H. Stearn, welcher in der Sitzung der genannten Gesellschaft vom 10, Januar 1883 ein mit elektrischem Kohlenglühlichte montirtes Mikro- skop demonstrirte. Ich wandte mich deshalb wiederholt an den oben er- wähnten deutschen Fabricanten, welcher mir auch in bereitwilligster Weise Kohlenglühlichtlampen für meine Zwecke anfertigte, die ich in ähnlicher Weise, wie es Stearn gethan hat, mit einigen namhaften Modificationen zu mikroskopischen Untersuchungen verwendet habe. Die in natürlicher Grösse in Figur 1 und 2 abgebildeten Lämpchen können aus gewöhnlichem, oder auch, um das Auge nicht zu blen- den, für schwache Vergrösse- rungen aus Milch- oder Opalglas hergestellt sein. Die Adaptirung an das Mikroskop ist eine höchst einfache und kann, wie ich im Laufe dieses Aufsatzes des Nähe- ren noch auseinandersetzen werde, in zufriedenstellender Weise mit ^ äusserst geringen Kosten be- werkstelligt werden. Wir sehen in Figur 1 bei Ä ein kleineres, bei C ein grösseres derartiges elektrisches Kohlenglühlichtlämpchen in natür- licher Grösse abgebildet. Dieselben bestehen aus einer, zu diesem Zwecke sehr regelmässig geformten Glaskugel, in deren Mitte, genau centrirt, ein kleiner, an Platindrähten befestigter Kohlenbügel zu sehen 1) Cfr. Journ. R. Microsc. See. Ser. 11 vol. III, 1883, pt. 1 p. 29. 11* 164 Stein: Die Verw. d. elektr. GlüUichtes zu mikrosk. Unters. I, 2. ist, dessen beide Enden mit den ausserhalb der Glaskugel ersichtlichen Oesen f und e verbunden sind. Das Lämpchen wird in die Spirale S mit seinem Halse hineingedrückt und an die Haken /' und e' eingehängt. Die Spirale drückt das Lämpchen nach oben und vermittelt dadurch einen innigen Contact der Oesen f e mit den Häkchen f e'. Die Häk- chen stehen mit zwei Leitungsdrähten m und n in Verbindung, welche i. in eine Hartkautschukschraube eingelassen sind, welch letztere, wie in Figur 2 bei a und e ersichtlich ist, an ein an das Mikroskop ange- brachtes Charnirgelenk aufgeschraubt wird. Um ein derartiges Lämp- I, 2. Stein: Die Verw. d. elektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. 165 chen zum prächtigen Weissglühen zu veranlassen, genügt der Strom aus zwei BuNSEN'schen oder GKOVE'schen Elementen von je 20 cm Höhe oder zweier gleichgrosser GRENET'scher Tauchelemente, wie e i n solches bei G in Figur 6 bei dem daselbst abgebildeten, mikrophotographischen Apparate zu sehen ist. Die elektrische Glühlampe Figur 1 C hat einen etwas grösseren Kohlenbügel, und müssen, um dieselbe in genügende Wirksamkeit treten zu lassen, drei Elemente benutzt werden. Man kann, um einen grösseren Lichteffect nach einer Richtung hin zu er- zielen, ein Stück der Kugeloberfläche der Lämpchen, wie bei d ersicht- lich, von aussen mit Spiegelfolie belegen lassen, so dass das Licht des Kohlenbügels direct und zwar in Folge der Kugelgestalt der Lampe zum Theil in parallelen Strahlen auf das Object geworfen wird. Ueber die Qualität der Lichtstrahlung wird des Weiteren noch berichtet wer- den. Die Oesen f und e dieser Lampe werden in gleicher Weise, wie diejenigen des kleineren Lämpchens, an die Zuleitung befestigt. In Figur 2 sehen wir ein grösseres Lämpchen a und ein kleineres Lämpchen e an einem eigenthümlich aufgestellten Mikroskope befestigt. Das betreifende Instrument ist mit seinem Fusse /Sauf einen Holzkasten (Z)) geschraubt, welcher eine ähnliche Form hat, wie die Kästen der Prä- parirmikroskope. Sowohl die Lampe a als auch die Lampe e sind, um solchen eine nach jeder Richtung hin lenkbare Bewegung zu gestatten, an mit Kugelcharnieren verseheneu Stäben befestigt. Da das Mikro- skop eine zusammenhängende Metallmasse darstellt, so kann solches für die eine Leitung, z. B. die positive, benutzt werden und kann man da- durch einen Leitungsdraht ersparen, während der negative Draht hinten an dem Mikroskopstativ emporläuft und seine gut isolirten Abzwei- gungen neben dem Charniergelenke nach den beiden Lampen abgiebt. Der aus der Batterie kommende Strom tritt bei p und n in den Apparat ein. Von n führt ein verdeckter Leitungsdraht direct an den Fuss des Mikroskops, während die in die Klemmschraube p endende Leitung, be- vor dieselbe zu den Lampen tritt, erst einige Nebenapparate durchläuft, die in dem Kasten CD angebracht sind und ihrerseits wiederum mit den Knöpfen 7, 11^ III links und den Knöpfen 1 bis 7 rechts, über welchen bei g und f Kurbelcontacte schleifen, in Verbindung stehen. Die Kurbelcontacte bei f und die mit denselben in Verbindung stehen- den Drahtspiralen bei i stellen zusammen einen Spiralrheostaten dar, welcher den Zweck hat, den Strom nach Belieben zu verstärken oder abzuschwächen. Bei Benutzung einer kleinen Batterie von zwei Ele- menten ist, wie wir später sehen werden, diese Einrichtung überflüssig. Hat man aber eine grössere Batterie in Verwendung, die auch noch zu 166 Stein: Die Verw. d. elektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. I, 2. anderen Zwecken, als zur Beleuchtung eines Mikroskopes dienen soll, so würde ein derartiger Strom für die Lämpchen zu stark sein und die- selben zerstören. Es ist dalier für solclie Zwecke eine Einrichtung nöthig, mittels deren man den Strom nach Belieben reguliren kann. Der Kheostat v li i besteht aus sieben Neusilber-Drahtspiralen von ver- schiedener Dicke, welche dem Strome einen verschiedenen Widerstand entgegensetzen , wodurch die elektrische Energie in Wärme umge- wandelt, dadurch in zweiter Linie der Strom geschwächt wird und in geringerer Intensität zu den Lampen gelangt. Die Vorrichtung hat aber ausserdem noch den Zweck, einen verschiedenen Helligkeitsgrad in der Lampe nach Belieben zu erzeugen, welcher sich nach der ange- wandten Vergrösserung zu richten hat. Es ist leicht begreiflich, dass man bei einer sehr starken, viel Licht absorbirenden Immersionslinse ein stärkeres Licht nöthig haben wird, als bei der Anwendung eines schwachen Systems. Würde man aber bei einem schwachen Systeme das kräftigste Licht benutzen, so würde das beobachtende Auge hiervon ebenso geblendet werden, wie bei der Benutzung directen Sonnenlichtes mittels eines Hohl- oder Planspiegels. Man wird demnach bei einer mikroskopischen Untersuchung zuerst die Kurbel f auf dem Knopf 1 ruhen lassen und allmählich über die verschiedenen Knöpfe weiter drehen, bis man in der Lampe den Lichtgrad, den man eben zu der vorliegenden Untersuchung nöthig zu haben glaubt, erreicht hat. Das bei g abgebildete Kurbelsystem hat nur den Zweck, den Strom umzuschalten und zwar geht der Strom, wenn die Kurbel g auf dem Knopfe / steht, in die obere Lampe a ; wenn die Kurbel auf dem Knopfe // steht, geht der Strom in die Lampe e, währenddem, wenn die Kurbel^ auf dem Knopfe III steht, der Strom in keine der beiden Lampen eintritt, sondern direct in den Objecttisch B. Alle Leitungen führen durch den Knopf r und von hier durch ein aus mehreren Drähten bestehen- des Leitungskabel nach der Schraube c, von wo aus sich der Strom an die verschiedenen Stellen des Mikroskops, je nachdem man die Kurbel g di-eht, vertheilt. In den Objecttisch B habe ich zwischen die beiden Platten eine in Figur 3 besonders abgebildete Platinspirale eingelassen, welche sich bei Durch- 3. 1,2. Stein: Die Vcrw. d. elektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. 1G7 treten des Stroms erwärmt und dadurch die Luft, welche sich in der Oeff- nung des Objecttisches befindet, und in zweiter Linie das Object selbst auf einen höheren Temperaturgrad bringt. Je nachdem ein Strom von grösserer oder geringerer Quantität die bei d (Figur 2) in den Objecttisch einzu- schiebende Platinspirale durchströmt, wird dieselbe mehr oder weniger erhitzt und dadurch ein höherer oder niederer Temperaturgrad in der auf diese Weise als „elektrisch heizbarer Objecttisch" zu bezeichnenden Vor- richtung erzeugt. Die Differenz der Temperatur kann man gleichfalls mit dem Spiralrheostaten fv h i, je nachdem die Kurbel/* auf einem der Knöpfe ruht, reguliren. Was das Messen der erzielten Temperaturhöhe anbelangt, so ist es ein Leichtes, auf dem Objecttische in nächster Nähe des Objectes entweder ein Metallspiral-Thermometer oder eine thermo- elektrische Säule anzubringen, wie solche in Figur 4 und 5 abgebildet und welche folgendermassen construirt werden können. Das Metall-Thermometer, Figur 4, besteht aus einem äusseren Streifen von Messing 6' und einem inneren von Eisen r, welche an ein- \Q) 50 60 I ^0 4. ander gelöthet sind. Das Ende h der Spirale ist mittels der kleinen Lenkstange c an dem kurzen Hebelarm d, welcher den Zeiger eh trägt, befestigt. Letzterer bewegt sich leicht und frei auf der Zeigerachse X', bei Veränderung der Temperatur wird der Zeiger eh infolge Ausdehnung oder Zusammenziehung der Spirale bewegt und zeigt auf der Scala f g des Zifferblatts den Wärmegrad der Temperatur der Spirale, beziehungs- 168 Stein: Die Verw. d. elektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. I, 2. weise der die Spirale umgebenden Luft an. Die Scala fg ist in 100 Grad (Celsius) getheilt. Ein derartiger Apparat ist in unserer Figur in natürlicher Grösse abgebildet und kann mit Leichtigkeit zwischen der Objectplatte und der durch den elektrischen Strom zu erhitzenden Platin- spirale und zwar um die mittlere Oeffuung des Objecttisches (m Figur 4) herum angebracht werden, so dass die Scala unter dem vorderen Rande desselben heraussieht und man auf diese Weise die Temperatur vorn am Tische ablesen könnte. Figur 5 zeigt eine thermoelektrische Vorrichtung zur Messung der Temperatur. Bei n befindet sich eine kleine Scheibe aus Eisen e und Neusilber w; die Metalle sind concentrisch verlöthet und geht von den- selben eine Doppel- drahtleitung nach e' und n' und von hier- aus nach einem ent- fernten Galvanometer (Miütiplicator) g. Je nachdem die Tempe- ratur des Object- tisches steigt oder fällt, wird ein ent- sprechender elektri- scher Strom in der auf den Objecttisch aufzu- schraubenden thermo- elektrischen Verbin- dung entstehen und das Galvanometer ent- sprechend ausschla- gen. Durch geeignete vorangehende Messungen des Einflusses be- stimmter bekannter Wärmegrade auf die thermoelektrische Verbindimg müssen die Gradausschläge des Galvanometers verglichen werden, um den Ausschlag des Winkels der Magnetnadel dadurch in bestimmte Wärmegrade übersetzen zu können. Was nun die Beleuchtungstechnik mittels der Lämpchen a und e selbst anbelangt, so dient, was schon aus dem Bilde ersichtlich ist, die grössere und kräftigeres Licht ausstrahlende Lampe a zur Beleuchtung von oben für opake Gegenstände, während die Lampe e zur Durch- leuchtung transparenter Objecte von unten bestimmt ist und auch dem- nach an Stelle des Beleuchtungsspiegels angebracht wurde. In allen 5. 1,2. Stein: Die Verw.d. elektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. 169 den Fällen, wo man eine sehr intensive Beleuchtung mit möglichst parallelen Strahlen zu haben wünscht, ist die Benutzung des Lämp- chens e am Platze, vorausgesetzt, dass sich in dem Tische des Mikro- skops eine AsBE'sche Linsencombination, wenigstens aber ein Dujakdin- scher Condensor befindet. Das Lämpchen ist so construirt, dass es glühend einen höchst intensiv leuchtenden Punkt darstellt. Wird nun dieser leuchtende Punkt der kleinen elektrischen Lampe so nahe an den Condensor gebracht, dass er sich in dem Brennpunkte des letzteren befindet, so werden selbstverständlich die auf den ad hoc regulirten Condensor fallenden Strahlen auf seiner Jenseite parallel das Object treffen und zwar in einer so bedeutenden Intensität, wie man ein Gleiches mit einer anderen, durch Spiegelreflex erzielten, künstlichen Beleuch- tung kaum wird erreichen können. Einen weiteren Vortheil dieser Art der Beleuclitung sehe ich hauptsächlich in der unübertrefflichen Ruhe des Lichtes. Ausser zur Beleuchtung über und unter dem Objecttische, wie aus der Abbildung ersichtlich, kann man in höchst einfacher Weise die obere Lampe auch in Anbetracht ihrer freien Beweglichkeit zur Be- leuchtung eines verticalen Illuminators verwenden, indem man in diesem Falle nur nöthig hat, das Lämpchen vor die seitliche, über dem Objectiv- system befindliche Lichtöffnung des Illuminators zu bringen und hier durch Nähern oder Entfernen den richtigen Punkt herauszufinden, von wo aus in geeigneter Weise durch Vermittlung der beweglichen Spiegelfläche des Illuminators das ruhige Licht der Lampe in den Trichter des Mikroskoptubus und auf das zu untersuchende Object ge- worfen wird. Ich habe die Vorrichtungen in der geschilderten Weise construirt und ausführen lassen, um alle Eventualitäten der Anwendung des elek- trischen Lichts beziehungsweise des elektrischen Stromes zu mikro- skopischen Beleuchtungs- und Untersuchungszwecken zu prüfen. Ich gestehe gerne zu, dass ich vielleicht in meiner Eigenschaft als Elektriker dem praktischen Histologen für Beschaffung eines derartigen compli- cirten Instrumentariums etwas zu viel zumuthete. Von diesem Gedanken geleitet, habe ich auch eine einfachere Construction für die betreffenden Einrichtungen ausführen lassen, um es einem Jeden zu ermöglichen, sich mit ganz geringen Kosten praktisch von dem Werthe des elektri- schen Glühlichts für mikroskopische Arbeiten zu überzeugen. Eine solche Einrichtung ist in Figur 6 abgebildet. W^ir haben hier ein heifg zum Umlegen eingerichtetes Mikroskopstativ, an welchem der Spiegel abgenommen und durch die Glühlichtlampe l ersetzt ist. Dieselbe erhält ihren Strom aus einem Tauchelemeute G von 25 cm 170 ytciu; Die Verw. cl. clektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. I, 2 6. I, 2. Stein: Die Verw. d. elektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. 171 Höhe mit doppelten Plattenpaaren und einer kräftigen elektromotorischen Füllung versehen '. Zwei derartige Elemente genügen, um ein elektrisches Glühlicht- lämpchen von l^/a bis 2 Volts Spannung in Weissgluth zu versetzen. Der Strom geht von den Klemmschrauben j) und n nach den Klemm- schrauben p' und n' und von hier aus durch die isolirten Leitungsdrähte ö" nach dem Glüh- lichtlämpchen Z, welches nun in der oben ge- schilderten Weise sein Licht mittels Conden- sors auf das auf dem Objecttische ersicht- liche Object wirft. Bei r ist ein an dem Mikroskopstativ auf- und abschiebbares, löffei- förmiges Instrument ersichtlich, welches dazu dient, das Glühlichtlämpchen, ohne solches, wenn es während der Action für das An- rühren zu warm geworden ist, anfassen zu müssen, höher und tiefer, je nach Bedarf des Beleuclitungseffects, stellen zu können. Man kann übrigens auch das Glühlichtlämpchen separat montiren (Figur 7), indem man solches auf ein mit Charniergelenk versehenes, stark 7. gebautes und aus zwei in einander verschieb- baren Messingröhren bestehendes Stativ bringt und es auf diese Weise in freier Beweglichkeit unter oder über dem Objecttische des Mikro- skopes je nach Bedarf anbringt. Ich habe auf der Abbildung dieser einfachen Vorrichtung (Figur 6) das Mikroskop A mit einem mikrophotographischen Aufsatze B wieder- gegeben. Derselbe wird mittels der Schraube c, nachdem er über den Mikroskoptubus geschoben ist, festgespannt, die Metalle der Tauch- elemente bei dem Knopfe e in die Flüssigkeit heruntergedrückt, das Licht erzeugt und mittels desselben auf der Einstellscheibe der photo- graphischen Camera a b das Bild des Objectes entworfen , welches mittels der den Tubus regulirenden Stellschraube d eingestellt und mittels der auf dem Bilde nicht sichtbaren Mikrometerschraube auf seine ') Die benutzte Bichromatlösung besteht aus 250 g doppelchromsauren KaU's für je 1 Liter Wasser, in welche Lösung 250 cc chemisch reine Schwefelsäure in dünnem Strahle und unter stetem Umrühren allmählich ein- gegossen werden. Die elektromotorische Kraft, welche die Lösung in einem GßENET'schen Tauchelemente von 25 cm Höhe erzeugt, ist bei frischer Füllung eine verhältnissmässig sehr hohe, sie beträgt im Mittel ca. 1'5 bis 2 Volt. 172 Stein: Die Verw. d. elektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. I, 2. höchstmögliclie Schärfe gebracht wird. Mit dieser einfachen Vorrich- tung wurden vorzügliche mikrophotographische Aufnahmen angefertigt und werde ich demnächst einige derselben in meinem soeben in zweiter Auflage unter der Presse befindlichen Werke : „Das Licht im Dienste wissenschaftlicher Forschung" publiciren. Die Resultate sind insbeson- dere in Anbetracht des höchst einfachen Mechanismus so überraschend zufriedenstellende, dass einzelne Fachgenossen, welchen ich diese Me- thode der Bildgebung in praxi vordemonstrirte , und die früher wegen der Umständlichkeit des Verfahrens die intensivsten Gegner der Mikro- photographie gewesen sind, im Augenblicke zu enthusiastischen Gönnern dieser Methode umgewandelt wurden. Es ist aber auch in der That in neuerer Zeit in Folge der Einführung der Bromsilber-Gelatine-Trocken- platten die mikrophotographische Thätigkeit eine so leichte und wenig zeitraubende geworden, dass es als ein Unrecht bezeichnet werden muss, wenn nicht jeder Mikroskopiker sich für die Folge mit der Handhabimg der betreffenden Methoden vertraut macht. Die ganze Mühe beruht auf der Anschaffung der fertig präparirten und Monate lang ihre Empfind- lichkeit wahrenden Trockenplatten, dem Ankaufe einiger Hartkautschuk- oder Porzellanschalen, sowie an Chemikalien einige hundert Gramm schwefelsauren Eisenoxyds imd Oxalsäuren Kalis. Letztere Chemikalien werden nach bestimmten Vorschriften in Wasser gelöst, zur Entwicklung des Bildes benutzt. Es ist sehr wichtig, die Trockenplatten von einer zuverlässigen und soliden Firma zu beziehen , da Minimaldifferenzen in der Darstellungsweise eine total verschiedene Empfindlichkeit der Platten erzeugen, und man a priori sicher sein muss, dass alle in Verwendung ge- zogenen Platten die ganz gleichen Eigenschaften besitzen. Ich habe von den verschiedensten Firmen des In- und Auslandes im Laufe der letzten Jahre Trockenplatten für mikrophotographische Zwecke in Verwendung gezogen, jedoch in erster Linie diejenigen aus der Fabrik des Chemikers Dr. C. ScHLEussNER iu Frankfurt a. M., welche sich auch durch beson- dere Preiswürdigkeit auszeichnen, als absolut zuverlässig erkannt. Auch den Copirprocess haben die Fabrikanten photographischer Bedarfsartikel dem Mikrophotographen sehr bequem gemacht, indem fertig präparirte lichtempfindliche Papiere stets zu haben sind. Mau kann solche in den verschiedensten Farben von der bekannten Handlung photographischer Bedarfsartikel Romain Talbot in Berlin (N. Auguststrasse 68) in zu- verlässiger Waare beziehen. Mit dem oben beschriebenen einfachen mikrophotographischen Apparate * und den erwähnten Trockenplatten •) Die Einrichtung elektrischer Glühlichtbeleuchtuug kann mit einer Aus- I, 2. Stein: Die Verw. d. elektr. Glühlichtes zu mikrosk. Unters. 173 und Chemikalien können Vergrösseriingen bis zu 200 linear ausgeführt werden , während für mikrophotographische Darstellungen stärkerer Dimensionen schon die complicirtereu Instrumentarien, wie solche Seibert in Wetzlar, Zeiss in Jena, Kloex^te & Müller in Berlin u. A. liefern, nothweudig sind. Aber auch hier dürfte die Einführung des elektrischen Glühlichtes im Vereine mit Trockeuplatten sehr zu empfehlen sein, denn wenn auch durch Steigerung der Vergrösserung die Lichtiutensität be- deutend abnimmt, so reicht sie trotzdem für mikrophotographische Zwecke selbst bei den stärksten Vergrösserungeu deshalb hin, weil die Trockenplatten eine imbegrenzte Zeit der Exposition aushalten. Eine Regel lässt sich für letztere nicht geben; man muss die Expositionszeit ausprobireu und die Erfahrung muss den Einzelneu lehren, wie lange er die Platte dem Lichte exponiren muss, um ein hübsch durchgearbei- tetes Bild zu erzielen. Ist nämlich die Platte zu kurz exponirt, so treten nicht alle Details des Bildes hervor, und ist sie zu lange, d. h. über- exponirt, so verflauen die Lichter und Schatten ineinander — das Bild wird grau und ausdruckslos. Bei schwachen Vergrösserungeu ist es ein Leichtes, die richtige Expositionszeit ausfindig zu machen, weil dieselbe zwischen dem Bruchtheile einer Secunde und 15 bis 20 Secunden, je nachdem man eine 20- bis lOOfache Vergrösserung mittels der oben erwähnten Glühlichtbeleuchtung erzielen will, variirt. Bei Anwendung stärkerer Linsensysteme aber und mithin bei stärkeren Vergrösserungeu steigt die Expositionszeit schon von einer halben bis zu 10 bis 12 Minuten und hier müssen natürlich verschiedene Experimente gemacht werden, um das Richtige herauszufinden. Hat man aber einmal das entsprechende Zeitmaass gefunden, so bleibt solches für dieselbe Linse und dieselbe Beleuchtung, welch letztere in Anbetracht der Eigenschaft gäbe von 18 bis 24 M (einschliesslich zweier Glühlichtlampen) füi- jedes Mi- kroskop bestritten werden. Ich empfehle Denjenigen, welche derartige Vor- richtungen sich machen lassen wollen, die Firma „Elektrotechnisches Institut Richard Blänsdorf in Frankfurt a. M.", durch welches auch die einfache mikro- photographische Einrichtung, welche in Figur 6 abgebildet ist, ebenso wie die zugehörigen Tauchelemente bezogen werden können. Der Preis eines mikro- photographischen Aufsatzes nebst Einstellscheibe und zwei zugehörigen photo- graphischen Casetten beläuft sich auf ca. 30 M. Eine vollständige mikrophoto- graphische Einrichtung, bestehend aus dem oben erwähnten Aufsatze nebst Einstellscheibe und Casetten, einem Dutzend fertig präparirter Trockenplatten, den nöthigen Chemikalien zur Hervorrufung, den übrigen Utensilien, als Schale, Copirrahmen und präparirten Papieren für den Copirprocess etc. wird von obiger Firma für 60 bis 70 M geliefert. 174 Stein: Die Verw. d. elektr. Glübliclites zu iiükrosk. Unters. I, 2, des Kohlenfadens, bei einem bestimmten Strome eine bestimmte Licht- intensität auszustrahlen, immer die gleiche ist, dasselbe. Ich habe mit meinem grossen horizontalen mikrophotographischen Apparate, mit welchem ich, um ein Beispiel anzuführen, die Feldchen von Pleurosigma angulatum bei directer Aufnahme (öOOfache Linear- vergrösserung) bei einer Expositionszeit von 70 Secunden durch Glüh- lichtbeleuchtung dargestellt, zu diesem Zwecke ganz einfach eine Glüh- lichtlampe von 5 Volts Spannung hinter den Condensor des Objecttisches in dessen Brennpunkte festgeschraubt. Was endlich das elektrische Kohlenspitzenlicht (VoLTA'scher Licht- bogen) anbelangt, so ist solches selbst bei Anwendung der besten Regu- latoren für mikrophotographische Zwecke nicht verwendbar. Durch die beständige Arbeit an den Kohlenspitzen und die durch dieselbe be- dingte Unruhe des Lichtbogens geräth das auf der matten Scheibe der photographischen Camera entworfene Bild in eine fortwährend zitternde Bewegung, eine Erscheinung, die auf einer grossen, durch das elektri- sche Projectionsmikroskop beleuchteten hellen Fläche dem beschauen- den Auge weniger zur Empfindung kommt. Während sich über die Verwendbarkeit des elektrischen Glühlichts zu mikroskopischen Untersuchungen im Vergleiche mit anderen künstlichen Beleuchtungsarten streiten lässt und triftige Gründe für und wider geltend gemacht werden können, so bin ich überzeugt, dass die Einführung dieser Art von elektrischer Beleuchtung zum Zwecke mikro- photographischer Darstellungen in ganz kurzer Zeit eine all- gemeinere werden wird, und dass Jeder, der einmal diese Methode praktisch in Anwendung gezogen hat, zu keiner anderen der höchst mühsamen und umständlichen künstlichen Beleuchtuugsweisen mehr seine Zuflucht nehmen dürfte. I, 2. Flesch: Welche Auss. bietete!. Einf.d. elektr. Lichtes in il.Mikrosk. 175 Welche Aussicliten bietet die Einfüliruiiö' des elektrischen Lichtes in die Mikroskopie? Von Dr. Max Flesch in Bern. Die Versuche, welche in der jüngsten Zeit gemacht werden, elek- trische Beleuchtung zu mikroskopischen und mikrophotographischeu Arbeiten zu verwerthen, insbesondere aber die auf Einführung eigener, dem genannten Zwecke dienender Apparate gerichteten Bestrebungen VAN Heurck's und Stearn's ^ dürften es angezeigt erscheinen lassen, die Aussichten, welche aus der praktischen Benutzung jener Vorrich- tungen erhofft werden können, kurz zu erörtern; competenten Fach- männern wird natürlich die ausführliche Besprechung der in Betracht kommenden physikalischen Fragen vorzubehalten sein. Die Entscheidung über die Brauchbarkeit einer Lichtquelle zu mikroskopischen Zwecken ist aus denselben Erwägungen abzuleiten, welche über die maximale Leistungsfähigkeit des Mikroskopes Aufschluss geben. Im wesentlichen ist hierbei die Qualität des Lichtes, beziehungs- weise der Reichthum desselben zu kurzwelligen Strahlen massgebend. „Die Unterscheidungsgrenze des Mikroskopes, welche unter den gegen- wärtigen Verhältnissen nicht weiter gesteigert werden kann, liegt also für die gebräuchliche Beleuchtungsweise so, dass sie unter den günstig- sten Umständen für noch zulässige, äusserst schiefe Beleuchtung über ') Vergl. VAN Heurck, La lumicre electrique appliquee aux reclierclies de la micrographie (Bull, de la Soc. Beige de Microsc. 1881—1882, p. LIX) ; ferner Stearn, On tlie use of incandescence lamps as accessories to the Microscope (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. 11 vol. III p. 29). — Dem erstgenannten Autor gebührt jedenfalls die Priorität nicht nur der Anwendung, sondern auch der sachlichen Begründung seiner Versuche (dieselben sind bereits am 25. Februar 1882 publicirt); Stearn hat zuerst eigens dazu angefertigte, kleine Glühlämpchen in Anwendung gezogen; auch hat er zuerst den — jedenfalls noch nicht ge- nügend motivirten — Versuch gemacht, die Apparate am Mikroskopstativ selbst zu fixiren. Stein's spätere Publication (Elektrotechnisch ausgerüstetes Mikro- skop, Zeitschr. des elektrotechn. Ver. Wien, H. 7 v. 15. Oct. 1883, S. A.) ist im wesentlichen, soweit die Anwendung des elektrischen Lichtes in Betracht kommt, eine Copie nach Stearn. 17G Flesch: Welche Auss. bietet d. Einf. d. elekt. Lichtes in d. Mikrosk. I, 2. den Betrag von Yg, bei rein centraler aber über ^/^ der Wellenlänge (etwa 0'55 [x) des weissen Lichtes nicht hinausgeht. Mittels Beleuch- tung durch homogenes blaues Licht von etwa 0-43 [Ji Wellenlänge (FBAUNHOFEK'sche Linie G) würden sich unter den gleichen Beleuch- tungsverhältnissen die obigen Beträge höchstens auf etwa ^/^q und Yiq dieser letzteren, d. h. auf etwa 0*15 |x und 0*30 {Jt herabdrücken lassen" *. Die Möglichkeit, welche sich aus dem Vorstehenden ergiebt, die Leistungs- fähigkeit des Mikroskopes durch Anwendung des blauen an Stelle des weissen Lichtes zu erhöhen, wird es wünschenswerth machen, Beleuch- tungseinrichtuugen einzuführen, welche die Anwendung monochromati- schen Lichtes erleichtern. Van Heueck hat dies auf Grund von Mit- theilungen Abbe's bereits zur Erklärung der günstigen Resultate, welche er mittels des elektrischen Glühlichtes erzielte, in präciser Weise dar- gestellt: ,.0r comme il a ete demonstre par les mensurations faites par M. le Professeur Aöbe dans les divers eclairages monochromatiques que le pouvoir separateur d'un objectif d'une ouverture donnee, croit dans le meme rapport, que la longeur d'onde de la lumiere employee diminue, il eu resulte, que la lumiere electrique doit montrer plus facile- ment les details delicats que la lumiere jaunatre du gaz ou des lampes" 2. Dass dieselben Strahlen, welche das Maximum der Leistungsfähigkeit des Mikroskopes bedingen, auch die für photographische Zwecke günstigsten sind, ist hinlänglich bekannt ; van Heueck hat dies ausführ- lich besprochen und genaue Vorschriften über Mikrophotographie unter Anwendung des elektrischen Glühlichtes und der Trockenplatten in dem mehrerwähnten Aufsatze schon bei der ersten Empfehlung jener Be- leuchtungsmethode mitgetheilt. Als eine wesentliche Bedingung, die von einer guten Mikroskopir- lampe erfüllt werden muss, ist demnach der Reichthum des Lichtes an ') DippEL, Das Mikroskop und seine Anwendung I. Th. Allgemeine Mikro- skopie p. 324. Eine sehr hübsche gemeinverständliche Darstellung der in Be- tracht kommenden theoretischen Grundlagen verdanke ich einem, mir von dem Verf. vor längerer Zeit übersendeten Vortrage W. Fr.EMjnNe's (soviel ich weiss in den Mittheilungen des physiologischen Vereins zu Kiel enthalten). „Einiges über Bau imd Leben der Zellen und von der Grenze des Sichtbaren". Speciellere Behandlung jener Fragen — leider, wie ich gestehen muss, der mathematischen Begründung wegen mir nur zum Theil zugänglich — bieten die Abhandlungen von Abbe (in M. Schultze's Archiv 1874, Jenaer Sitzungsberichten und Journ. E. Microsc. Soc.) und Helmholtz, Die theoretische Grenze für die Leistungsfähig- keit der Mikroskope (Poggendorff's Annalen, Jubelband 1874 p. 557). ^) L. c. p. LXVIII. I, 2. Flesch: Welche Auss. bietet d. Einf. d. elekt. Lichtes in d. Mikrosk. 177 kurzwelligen Strahlen zu bezeichnen. Dieser ist bekanntlich bei glühenden Körpern von dem Hitzegrad abhängig; erst bei 1500" C. entsenden die- selben hellblaue, bei 2000" violette Strahlen. Für das elektrische Glüh- licht wird dies in der Weise zur Geltung kommen, dass je nach der Strom- stärke dieselbe Lampe ein Licht von grösserem oder geringerem Ge- halte an kurzwelligen Strahlen liefern wird. Vergleichende Bestimmungen darüber hat 0. E. Meyer ^ ausgeführt. Ihre Ergebnisse enthält die folgende Tabelle, deren Zahlen das Verhältniss angeben, in welchem die Helligkeit des elektrischen Bogenlichtes, des Glühlichtes einer durch eine GßAMME'sche Maschine gespeisten EDisoN'schen Lampe und des Gaslichtes zu derjenigen der Sonne steht, wenn die letztere durch Polarisation so weit abgeschwächt ist, dass die Helligkeit des gelben Lichtes jedesmal gleich gross ist; leider decken sich die Angaben Meyer's nicht genau für die drei untersuchten Lichtsorten. Elektr. Bogenlicht. Elektr '. Glühlicht. Gaslich Roth 209 1-48 4-07 Gelb 100 100 100 Grün 0-99 0-62 0-43 Blaugrün 0-29 Blau 0-87 0-21 0-23 Violett 103 017 015 Aeusserstes Violett 1-21 In allen untersuchten Arten künstlichen Lichtes bildet das rothe Licht einen verhältnissmässig grossen Antheil; sie erscheinen, verglichen mit der Sonne, röthlich gelb statt weiss, am wenigsten das Bogenlicht, am ausgesprochensten das Gaslicht, das Glühlicht hält die Mitte. Am reichsten an kurzwelligen Strahlen ist das Bogenlicht ; es bedarf keiner Erörterung, dass dieses für die Benutzung zu histologischen Arbeiten aus vielen Gründen kaum geeignet sein dürfte. Der grössere Gehalt des Glühlichtes an blauen Strahlen gegenüber dem Gaslicht ist, wie die Tabelle zeigt, in der Hauptsache ein relativer. — Gleichwohl dürfte ') 0. E. Meyer, Ueber die Farbe des elektrischen Lichtes (Centralbl. f. Elektrotechnik, herausg. v. Uppenboen Bd. V No. 21 p. 457), — Andere An- gaben bezüglich des Glühlichtes konnte ich nicht erhalten; für das Bogenlicht finden sich solche in „Schellen, Die magnet- und dynamo-elektrischen Maschi- nen etc. Köln 1884" ; letzteres Werk enthält eine ausführliche, gleichwohl aber auch dem gleich mir nicht speciell Vorgebildeten verständliche Darstellung des elektrischen Beleuchtungswesens. Den Herren Professor Dr. Forstee und Telegraphenadjunct Rothen in Bern, welchen ich die Kenntniss der betreffen- den Schriften schulde, sei hier bestens gedankt. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 2. 12 178 Fl e seil: Welche Auss. bietet d. Einf. d. elekt. Lichtes in d. Mikrosk. I, 2. demselben bei den von van Heurck erzielten günstigen Resultaten eine wesentliche Rolle zukommen, weil eine absolut grössere Lichtmenge bei Anwendung des Glühlichtes nutzbar gemacht werden kann (vgl. u.) — Van Heueck schreibt die guten Resultate, welche er erhalten hat, neben jenem Vorzuge der grösseren Intensität des Lichtes zu: „L'in- tensite specifique de la lumiere electrique etant beaucoup plus con- siderable que celle des autres lumieres artificielles, ou obtient uu eclairage süffisant avec un pinceau lumineux beaucoup plus etroit que celui qu'il faudrait employer pour obtenir la meme intensite lumineuse avec l'eclairage par le gaz ou par la lumiere diffuse du jour". Wir dürften danach aus der Anwendung des Glühlichtes manche Vortheile erwarten: es wird das Arbeiten mit monochromatischem Licht wesentlich erleichtert werden, da bei der grossen erreichbaren Intensität der Beleuchtung der mit der Absorption eines grossen Theiles der Strahlen verbundene Lichtverlust sich ausgleichen lässt. Hierbei kommt noch in Betracht, dass es wegen der verhältnissmässig geringen (übrigens durchaus nicht zu vernachlässigenden) Wärmestrahlung mög- lich ist, die Lampe dem zu erhellenden Objecto sehr nahe zu bringen, ohne dass das Präparat gefährdet oder der Mikroskopirende durch die strahlende Wärme belästigt wird. Letzteres verdient besondere Be- achtung; hat doch der angedeutete Missstand der Gas- und Petroleum- Lampen schon mehrfach zur Construction eigener zum Theil sehr com- plicirter Mikroskopirlampen geführt. Weitere Vorzüge bilden die Rein- heit der Farben, die bei complicirten Tinctionen, soweit ich aus wenigen Proben mit Bogen- und Glühlicht entnehmen kann, ausgezeichnet schön zur Geltung kommen — endlich die grosse Ruhe und Gleichmässig- keit des Lichtes. Zur Technik der Glühlicht-Beleuchtung möge darauf hingewiesen werden, dass nur bei sehr intensivem Glühen des Kohlenfadens, d. h. also bei relativ grossen Stromstärken der entsprechende Gehalt an blauen und violetten Strahlen erzielt wird, dass aber — wie ich aus münd- licher Mittheilung von Herrn Prof. Schiff in Genf und eigenen Er- fahrungen entnehme — es alsdann leicht geschehen kann, dass der Faden zerstört wird. — Von Wichtigkeit wäre es, dass die in Ge- brauch stehenden Vorrichtungen zur Monochromatisirung verbessert würden; bis jetzt werden zu diesem Zwecke benutzt: Einschaltung farbiger Glasplättchen zwischen Spiegel und Präparat (Altmann ', ») Altmann, R., Einige Bemerkungen über histologische Technik etc. (Arch. f. Anat. u. Physiol., Anat. Abthl. 1881. p. 219—224). 1,2. Flesch: Welche Auss. bietet d Eiiif. d. elekt. Lichtes in d. Mikrosk. 179 Flesch ') ; Deckgläser aus blauem Glas zwischen Präparat und Object ^ • mit farbigen Flüssigkeiten gefüllte Tröge mit planparallelen Glaswänden zwischen Lampe und Spiegel (Pfitzner'); mit farbigen Lösungen (Sub- strat Glycerin oder Nelkenöl) gefüllte hohle plancouvexe Beleuchtungs- linsen (Deby *) ; Schusterkugel, gefüllt mit Kupfersulfatlösung 15 : 600 H2 0 (Kitten ^) oder Kupferoxydammoniaklösung (Strasbueger), Hart- nack's Beleuchtungsapparat für homogenes farbiges Licht ^ u. a. m. Vom theoretischen Standpunkte aus würde nur die letztgenannte und ihr verwandte Vorrichtungen ausreichen ; für die Praxis dürften jedenfalls neue Versuche zu machen sein , um eine möglichst vollkommene und doch leicht zu handhabende und an jedem Mikroskop anzubringende Einrichtung zu erzielen. Aus dem Vorstehenden dürfte hinlänglich hervorgehen, nach wel- chen Richtungen Vortheile aus der Anwendung des elektrischen Lichtes für den Histologen zu erwarten sind. Vor Allem erwünscht wird die Beschaffung geeigneter Elektricitätsquellen sein. Vorläufig werden dazu auf chemischem Wege erzeugte Ströme dienen müssen , da wohl kaum Institute, noch weniger Private sehr bald in die Lage kommen werden, auf mechanischem Wege producirte Ströme zu benutzen. Geeignete Glüh- lampen sind bereits ziemlich verbreitet in Gestalt der als TROUvii'sche 0 Flesch, M. , Beleuchtimgsvorrichtung zum Mikroskopiren bei künst- lichem Lichte (Sitzungsber. d. i)hys. med. Gesellsch. Würzburg. Jahrg. 1882 p. 37). 2) Dieselben werden von Trachsel-Chrozet. Succ. Geneve 63 e Place des Grottes vertrieben ; es ist mir nicht mehr erinnerlich von wem die Empfehlung derselben — mir durch Herrn v. Külliker in Würzburg gezeigt — ausgeht. 3) Pfitznee, W., Beobachtungen über weiteres Vorkommen von Karyo- kinese (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XX p. 127). — Pfitznek verwendet mono- chromatisches Licht in eigenthümlicher Anordnung in der Art, dass er dem Gesichtsfelde durch das oben erwähnte Verfahren eine der Eigenfarbe des (künstlich tingirten) Präparates complementäre Färbung ertheilt. ") Deby, J., Receipts for microscopists (Amer. Monthly Microsc. Journ. Vol. II p. 24). Anfertigung der Linsen bei J. Browning. ^) Kitten, F., Hollow glass sphere as condensor (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. II, p. 112 nach Science-Gossip). — Die Vorrichtung ist schon länger allgemein bekannt und in Anwendung. 6) DippEL, Das Mikroskop etc. 2. Aufl. Bd. I p. 603. - Es ist mir, da mir die betreffenden Apparate noch nicht zugänglich waren, nicht bekannt, wie weit Rollett's und Aisbe's Spectropolarisatoren (vgl. darüber Dippel 1. c.) sich zur monochromatischen Beleuchtung eignen; jedenfalls würde auch für sie der hohe Preis und die Schwierigkeit der Anpassung an die kleineren Stative der Einführung hinderlich sein. 12* 180 Flesch: Welche Auss. bietet d. Einf. d. elekt. Liclites in d. Mikrosk. 1,2. Photoplior zu Laryngoskopen etc. verwendeten Apparate. Durch eine Demonstration A'on Herrn Dr. Sahli im Berner Aerztlichen Bezirksverein hatte ich Gelegenheit, eine prächtige Beleuchtung mittels eines solchen Apparates, der einfach vor den Spiegel des Mikroskops gelegt wurde, zu sehen 5 zweckmässige Stative als Träger des kleinen SwAx'schen Lämp- cheu hat bereits Steakn abgebildet. Jedenfalls sind alle zur Erleich- terung der Anwendung dienenden Versuche dankenswerth ; es mag in- dessen fraglich sein, ob der Vorschlag van Heurck's, das Mikroskop nach Wegnahme des Spiegels auf einen die Lampe enthaltenden Kasten über derselben aufzustellen vor dem Steakn's, die Lampen (je eine zur Beleuchtung mit durchfallendem , beziehungsweise auffallendem Licht) und Stromwender direct an dem Stativ anzubringen, den Vorzug verdient. Fast sollte es scheinen, als ob, von mikrophotographischen Zwecken abgesehen, vorläufig noch die histologische Praxis erforderte, dass das Stativ frei, also nicht befestigt an Leitungsdrähten, be- weglich bliebe, die Lampe etc. als Nebenapparat be- handelt würde. Der Gewinn an Leistungsfähigkeit des Mikroskopes, welchen uns das elektrische Licht nach den Erfahrungen van Heurck's in der That in Aussicht zu stellen scheint, uöthigt jedenfalls, den Ver- suchen zur Einführung von zweckdienlichen Nebenapparaten auch da sorgfältige Aufmerksamkeit zu widmen, wo vielleicht augenblicklich das eigentliche Bedürfniss der Praxis noch nicht den Ausgangspunkt für deren Construction gegeben hat. Zum Schlüsse sei noch der Anwendung des elektrischen Bogen- lichtes zu Demonstrationszwecken gedacht; in dieser Hinsicht wird das elektrische Licht, als Bogenlicht für Untersuchungszwecke trotz seines grossen Reichthumes an blauen Strahlen aus naheliegenden Gründen nicht leicht verwerthbar, sicher noch weite Verbreitung finden, nach- dem durch eine der jüngsten Zeit entstammende an anderer Stelle im Detail zu referirende Publication Steicker's * die Möglichkeit dargethan ist, auch die mittels starker Vergrösserungen erzeugten Bilder durch Projection objectiv zu demonstriren. Durch Einschaltung einer Wasser- säule zwischen den Lichtbogen und das Präparat ist die, bei früheren ähnlichen Versuchen störende Erhitzung des letzteren beseitigt. Die Vor- lesungen finden in einem durch elektrisches Glühlicht erhellten Audito- rium statt ; einfache Drehung eines Schlüssels leitet den die Glühlichter speisenden Strom nach dem Bogenlicht; Verdunkelung des Auditoriums ') Stricker, S. , lieber das elektrische Licht als Hülfsmittel für den mikroskopischen Unterricht. Wiener medicinische Jahrbücher 1883, S. 463 - 475. I, 2. Ludwig: lieber die spectroskopische Unters, photogener Pilze. 181 einerseits, Entstehung des Projectionsbildes andererseits werden durch denselben Handgriff des Vortragenden momentan ohne jeden Zeitverlust erreicht. Nach den Mittheilungen Steicker's ist die Hoffnung erlaubt, dass das elektrische Licht die Ausdehnung objectiver Demonstrationen auf das gesammte Gebiet der Histologie ermöglicht. Der Kostenpunkt wird hier nicht so schwer ins Gewicht fallen ; kann doch, wie die Vereini- gung der in getrennten Gebäuden befindlichen Institute für Physik, Phy- siologie und Pathologische Anatomie in Würzburg dies bereits praktisch ausgeführt hat, derselbe Apparat einer Reihe von Instituten gemeinsam dienen. lieber die spectroskopische Untersucliiing* photogener Pilze. Von Dr. F. Ludwig in Greiz. Bisher hat der Botaniker den Mikrospectralapparat fast nur be- nutzt, um Farbstoffe bei höheren oder niederen Pflanzen nachzuweisen und ihrer physikalischen Natur nach zu untersuchen. Im Folgenden soll gezeigt werden, wie dieser Apparat auch zur Untersuchung der Emissionsspectra mit Erfolg verwendet werden kann. Bekanntlich giebt es nicht nur eine Reihe grösserer Hutpilze, welche durchweg phos- phoresciren, wie Agaricus olearius DC, Ag. Gardneri Berk., Ag. igneus Rumph., Ag. noctilucens Lev. Ag. Emerici Berk. ', Ag. Lampas Berk., Ag. candescens F. v. Mueller ^ u. A., sondern auch eine Anzahl von Pilzen, deren Mycelien (besonders im Stadium der Rhizomorpha- und Sklerotienbildung) leuchten und andere Stoffe in „Lichtfäule" versetzen, wie Agaricus melleus Fl. Dan., Trametes pini etc., welche die Phos- phorescenz des Holzes, Collybia tuberosa Bull. ', welcher die Phos- phorescenz faulender Hutpilze, von Laub, Coniferennadeln, Zweigen, *) Ueber die zugehörige Literatur cfr. Ltowig, Ueber die Phosphorescenz der Pilze und des Holzes (Hildburgh. 1874), sowie : Pilzwirkungen (Osterprogr. d. Gjrmnas. zu Greiz 1882). ^) Nach den Beobachtungen von Dr. J. G. 0. Teppee in Adelaide in Süd- Australien. ») Ludwig in Botan. Centralbl. Bd. XII, 1882, p. 104. 182 Ludwig: Ueber die spectroskopische Unters, photogener Pilze. I, 2. Moos etc. verursacht, und schliesslich habe ich gezeigt, dass die Phos- phorescenz des Fleisches und der Seefische einzig und allein durch einen winzigen Pilz, Micrococcus Pflügeri Ludwig ', verursacht wird. Die Phosphorescenz der Milch, des Speichels, Eiters 2, Schweisses etc., welche hie und da beobachtet wurde, rührt vermuthlich gleichfalls von (anderen, noch nicht untersuchten) Spaltpilzen her. Das unbewaffnete Auge kann über die Natur des schwachen Phos- phorescenzlichtes dieser Pilze sichere Auskunft nicht ertheilen, insofern die jeweiligen subjectiven Gesichtserscheinungen die wahre Farbe öfter verdecken, und bei der Bezeichnung sehr lichtschwacher Farben die Urtheile bedeutenden individuellen Schwankungen unterworfen sind ; hier kann sichere Auskunft allein das Spectroskop ertheilen. Zudem ist es oft schwer, mikroskopisch bei lichtfaulen Substanzen den Urheberpilz richtig zu bestimmen. Dass auch da das Spectroskop zu Hilfe kommt und so noch ein besonderes botanisches Interesse bean- sprucht, zeigen die Resultate meiner bisherigen Phosphorescenzstudien. Die Analyse des Phosphorescenzlichtes ergiebt eine, den dabei betheiligten Pilzen entsprechende Verschieden- heit desselben. Die Anwendung des Spectralapparates überhaupt bei Phos- phorescenzerscheinungen verdanken wir wohl hauptsächlich Becquekel, der die Phosphorescenzspectra anorganischer, durch Insolation, Erwär- mung etc. phosphorisch werdender Körper näher untersucht und be- schrieben hat^. Es treten danach bei unorganischen Körpern die verschiedensten Verhältnisse auf. Neben continuirlichen Spectren giebt es da eine Reihe der verschiedensten discontinuirlichen. So hat üran- n itrat helle Streifen auf C, C '/g D (sehr hell), D schwach, D Ya E, E, E Va F, F, F % G; grüner Flussspat auf C, C 2/3 D (sehr hell), D Ye E, D Va E, D % E; Diamant einen hellen Schein zwischen B und C, nach D hin allmählich abnehmend, einen hellen Schein mit ver- waschenen Rändern zwischen D und B imd einen ähnlichen zwischen F und G; Arragonit ein ähnliches Phosphorescenzspectrum, nur mit einem hellen Schein zwischen C und D und einem solchen zwischen D und F, der breiter ist als der beim Diamanten. Im Lichte der Schwefel- «) Hedwigia 1884, No. 3. ') Cfr. Pilzwirkungen p. 11. — Guot und Gaimard sahen auch den eitern- den Rücken einer Meerschildkröte, der die Schilder abgerissen waren, phos- phoresciren. ^) Becquekel, La lumiere t. I p. 207. I, 2. Ludwig: lieber die spectroskopische Unters, photogener Pilze. 183 Verbindungen des Strontium, Baryum, Calcium finden sich alle Spectral- farben von Roth bis Violett vor, während die Edelsteine besonders gelbes oder blaues Licht aussenden. Die merkwürdigste Beobachtung Becquerel's besteht darin, dass Farbe und Helligkeit des Lichtes nicht nur von der Temperatur abhängen, sondern auch von der Art wie die Schwefelverbindungen dargestellt wurden, ja sogar von der molecularen Beschaffenheit der Salze, aus denen sie dargestellt wurden. So hegt das Spectrum des Schwefelcalcium im Orangegelb bei seiner Darstellung aus dichtem Kalk, aus Kreide im Gelb, aus Kalkspath im Grün, aus Marmor und dichtem Arragonit im Violett. Das Mikrospectroskop, das auch zu diesen Untersuchungen unorga- nischer Körper geeignet ist, ist zum Nachweis der Lichtsorten bei spontaner Phosphorescenz organischer Körper, so viel ich weiss, nur bei einigen Leuchtthieren angewandt worden, z. B. bei Lampyris noctiluca, deren continuirliches Spectrum nach Dr. Meldola • reich an blauen und grünen Strahlen, verhältuissmässig arm an rothen und gelben ist. Bezüglich der Phosphorescenz der anfangs erwähnten Pilze und durch sie verursachten Lichtfäule ist eine Angabe Achakd's von Interesse. Derselbe führt nämlich in einer Abhandlung - über das Leuchten des faulen Holzes als besondere Eigenschaft desselben an, dass „sein Licht nicht durch gefärbte Gläser dringt und sich durch ein Glasprisma nicht in Farben zerlegen lässt". Wie es scheint, hat man sich durch diese Angabe Achakd's abschrecken lassen, da nach ihm keine Ver- suche, das Phosphorescenzspectrum des Holzes etc. zu untersuchen, ge- macht worden sind. Doch gehen wir nunmehr auf die Untersuchung der Phosphorescenz- spectra der Pilze selber ein und behandeln wir 1. Die Zeit der Beob- achtung, 2. Den Gebrauch des Mikrospectroskopes und die Art der Beobachtung, 3. Erläuternde Anwendungen des. Bisherigen. 1. Zeit der Beobachtung. Man hat behauptet, dass die spontane Phosphorescenz durch das Tageslicht aufgehoben oder geschwächt werde, und Schäiarda sagt 1) Meldola, Spectrum of tlie light of the glowworm (Nature Vol. XXVI No. 667). 2) Achard in Nouv. Mem. de l'Acad. Roy. de Berlin 1783, p. 98. 184 Ludwig: Ueber die spectroskopische Unters, photogener Pilze. I, 2. noch in seiner Zoologie ', in der die Phosphorescenz der Thiere ziem- lich eingehend besprochen ist, dass Leuchtthiere dem Sonnenlicht aus- gesetzt und dann plötzlich in einen dunklen Raum gebracht, nicht gleich phosphoresciren, sondern erst nach einiger Zeit. Beides ist irrig, wie ich mich wiederholt bei den verschiedensten IJchtfaulen Körpern über- zeugt habe. Diese phosphoresciren bei Tag so gut wie in der Nacht. Pilze, Holz, Fleisch, die dem Tageslicht ausgesetzt waren, fingen, ins Dunkle gebracht, ebenso schnell zu leuchten an, wie die gleichen Objecte, die ich während des Tages in einem dunklen Kasten . hielt und erst im dunklen Zimmer hervorholte. Freilich schienen sie beide nicht sofort zu leuchten, sondern erst nach 4 bis 8 2, in einzel- nen Fällen erst nach mehr als 10 Minuten, aber nicht aus dem Grunde, den ScHMABDA angiebt — dieser ist offenbar für die aus dem dunklen Kasten hervorgeholten Objecte falsch — sondern weil das beobachtende Auge bei Tage so von Nachbildern, Lichtwolken und anderen subjec- tiven Erscheinungen erfüllt ist, dass jene lichtschwachen Objecte nicht sofort Eindruck machen. Erfordert also bei Tage schon die blosse Wahrnehmung des Phos- phorescenzlichtes der Pilze ein besonders vorbereitetes Auge, so gilt dies erst recht für die Vornahme von Arbeiten mit dem Mikrospectral- apparat. Das Augenschwarz hat, selbst wenn es von Liclitwolken völlig frei ist, noch eine gewisse photometrische Intensität, vermöge deren sich eben das Sehen im dunkelsten Raum noch vom Nichtsehen (etwa der Em- pfindung die der Finger oder das Hinterhaupt hat) unterscheidet. Nach den Untersuchungen Volkmann' s war die photometrische Intensität des Augenschwarzes für dessen Auge gleich der Helligkeit einer schwarzen Sammtfläche, die in 9 Fuss Entfernung von einer gewöhnlichen Stearin- kerze erleuchtet wird ^ und sie ist für jedes andere Auge besonders zu bestimmen. Mit Hilfe des FECHNER'schen („WEBER'schen") psycho- physischen Gesetzes lässt sich daraus die Intensität des Phosphorescenz- spectrums bestimmen, die das Auge eben noch wahrzunehmen vermag. Aus eben diesem Gesetz folgt aber auch, dass bei einer Intensitäts- änderung des Augengrundes, der stets additiv wirkt, der äussere Reiz in gleichem Verhältniss wachsen muss, wenn er noch gesondert unter- >) Wien 1877, p. 98. 2) Bei Ag. melleus nach 4 Minuten, bei Micrococcus Pflügeri nach 4 bis 6 Minuten. 3) Cfr, Feciiner, Psychophysik Bd. I. I, 2. Ludw g: üeber die spectroskopische Unters, photogener Pilze. 185 schieden werden soll. Nun ist bei Tage der Zustand der Sehnerven ein weit erregter als am Abend, so dass man nicht erwarten kann, ohne langen Aufenthalt im Dunkeln, Gleiches zu sehen, wie am Abend. Nimmt man noch die Lichtwolken (von den Nachbildern ganz abge- sehen) hinzu, welche bei Tag lange das Gesichtsfeld überziehen und wohl eine mehr als lOOfache Intensität von dem Augenschwarz besitzen, so wird man verstehen, dass auch die intensivste Phosphorescenz durch diese hindurch unwahrnehmbar ist, dass erst Minuten vergehen müssen, bis man überhaupt zu sehen anfängt. Zuletzt, wenn die Wolken an Umfang abnehmen, macht es nicht selten einen ähnlichen Eindruck, als wenn die Gestirne des Abends plötzlich zwischen den Lücken der vor- beiziehenden Wolken hindurchblicken. So klar sieht man momentweise die hellleuchtenden Stellen des phosphorescirenden Objectes. Sind die Wolken einmal verschwunden, so sieht man das Object klar und deut- lich, als ob ein Schleier vom Auge gezogen wäre. Aber die schwächer phosphorescirenden Stellen werden des zu hellen Augengrundes halber öfter auch dann noch nicht sichtbar. Hat man nicht viel Ruhe, Geduld und ein sehr empfindliches Auge, so thut man gut, Phosphorescenz- beobachtungen bei Tage überhaupt nicht zu machen. Die Mitte der Nacht schien mir von vornherein die geeignetste Beobachtungszeit zu sein, weil das Auge, das aus dem Schlafe erwacht, am längsten grellen Lichtern fern geblieben ist, aber dem war nicht so. Zwar dauert es in der Nacht nicht so lange, als bei Tage, bis das Auge den ersten Phos- phorescenzschein wahrnimmt, aber für Spectralbeobachtungen ist mein Auge beim nächtlichen Erwachen nicht viel besser disponirt als bei Tage. Träume scheinen den Zustand der Sehnerven in der Nacht oft noch erregter zu machen als bei Tag, wenigstens treten die Lichtwolken beim ersten Oeffnen des Auges viel lebhafter hervor. So bleibt denn der Abend als die geeignetste Zeit übrig. Während der Dämmerung klingen die Tagesbilder langsam ab, das Auge wird oft gänzlich frei von allen störenden Einflüssen. Gehe ich aus der Dämmerung in das Zimmer, in dem die Beobachtungsobjecte stehen, so sehe ich — auch wenn es noch so hell ist, dass ich die Umrisse der Objecte im Dämmerungslicht noch erkenne — die Phosphorescenz so- fort und deutlicher als bei Tag, Nun ist es Zeit, die Läden zu schliessen und den bei Tage zurechtgestellten Spectralapparat zu benutzen. Es stört mich nun auch nicht mehr beträchtlich, wenn ich eine Zeit lang an meiner Arbeitslampe (Petroleum) im Nebenzimmer gesessen habe. — Dass das Auge seine guten und schlechten Tage und Stunden hat, brauche ich ebenso wenig zu betonen, als dass Uebung dasselbe empfind- 186 Ludwig: Ueber die spectroskopische Unters, photogener Pilze. I, 2. lieber macht. Das Licht der von Collybia tuberosa in Lichtfäule ver- setzten Rindenstückchen und des Collybiamycels selbst, welche ich so- fort nach Eintritt ins Zimmer sah, sah mein College, Herr Schöber und dessen Gattin erst fünf Minuten später, dann aber deutlich und ununter- brochen. 2. Beobachtungsmethoden. Bei der Untersuchung des Spectrums benutze ich den Sorby- Browning' sehen Mikrospectralapparat mit Vergleichsprisma und Mess- apparat. Bei schwacher Objectivvergrösserung und erweitertem Spalt ist die Einstellung des Objeetes zu bewerkstelligen (die Phosphorescenz erstreckt sich fast stets über die Pilzzellen hinaus auf das Substrat), später kann man, besonders bei wenig intensivem Phosphorescenzlicht, das Objectiv wieder abnehmen. Das Spectrum ist meist schon nach kürzerem Aufenthalt im Dunkeln sichtbar, schärfer tritt es aber nach einiger Zeit hervor. Es empöehlt sieh daher, einen bequemen Sitz vor- her zurecht zu machen, auf dem man ruhig ausharren kann. Da jede Beleuchtung des Zimmers auf längere Zeit die Schärfe des gewonnenen Speetrums beeinträchtigt, so habe ich zur annähernden Be- stimmung der Grenzen des Spectrums, wo dieses continuirlich ist, zu- nächst die Durchlässigkeit des Lichtes durch einen Satz farbiger Gläser, deren Absorptionsspectrum ich im Voraus bestimmte, unter- sucht. Die Farbe des Lichtes liess sich meist durch Combination der durchlässigsten Gläser sicher bestimmen. Die genauere Lage des Spectrums wurde dann durch directe Beobachtung desselben unter An- wendung absorbirender durchsichtiger Substanzen mit bekannten Ab- sorptionsliuien (direct oder durch das Vergleiehsprisma) gewonnen. Es dienten dazu, zunächst die erwähnten Glasplatten und Stoffe mit einseitiger oder beiderseitiger Endabsorption, wobei die Einengung des Phosphorescenzspectrums durch die bekannten Absorptionsstreifen zu beachten war; oder absorbirende Substanzen mit bestimmten mittel- gelegenen Absorptionsbändern wie salpetersaure Didym- und Erbin- lösung, Fuchsinlösung, Urannitrat etc., die zum Theil die Lage der FRAUNHOFER'schen Linien (z. B. Urannitrat F, hypermangansaures Kali Eb, F etc.) bestimmen, zum Theil wenigstens die Ausdehnung des Speetrums durch Vergleich annähernd erkennen Hessen. Bei der directen Beobachtung ohne Gläser stand mir anfangs kein Messapparat zur Verfügung, ich suchte daher die Lage des Spectrums und seiner Theile (das betreffende Speetrum war discontinuirlich) in sehr primitiver Weise zu bestimmen, indem ich 'durch Drehen der I, 2. Ludwig: Ueber die spectroskopische Unters, photogener Pilze. 187 Prismen den Schnittpunkt der Axe mit dem Spectrum und das Ver- hältniss der rechts und links davon gelegenen Theile aufsuchte und dann jenen Punkt in gleicher Weise bei dem Spectrum einer Kerzen- flamme bestimmte. Die Controlle durch farbige Gläser war hier die Hauptsache. Später gelang es mir, bei hellerer Phosphorescenz mittels Vergleichsprisma das Dämmerungslicht mit den schärfsten Fraunhofer- schen Linien zum Vergleich heranzuziehen. — Den Messapparat er- leuchtete ich anfangs durch ein Stückchen phosphorescirenden Holzes, kam aber bald davon ab und verwende nun für Mikrometer wie für Vergleichsprisma ein Nachtlicht (die Linien des Natrium, Thallium und auch die sehr charakteristischen des Kohlenwasserstoffes Hessen sich hier zum Vergleich heranziehen). Das Dreieckchen darf nicht zu hell erleuchtet sein. Bei dieser Beobachtung bei Licht ist Auge und Object durch Schirme und dichte Tücher zu schützen, die richtige Aufstellung des Nachtlichtes und womöglich auch die Ablesung am Mikrometer ist durch eine zweite Person zu besorgen: — Noch sei erwähnt, dass mittels des Vergleichsprismas auch ver- schiedene Phosphorescenzen mit einander verglichen wurden. 3. Einige Anwendungen. Trametes pini (?), Rhizomorphen und Mycelhäute an frischem leuchtenden Wurzelholz von Fichten '. Ich brachte (Anfang Februar 1874) einige der hellsten Stücke des phosi^horescir enden Myceliums — das Holz war für diese Versuche, wie es mir damals schien, zu lichtschwach — ■ unter den Mikrospectralapparat im ganz dunklen Zimmer mit verschlossenen I'enstern. Das Spectrum war sehr licht- schwach und ohne bestimmte Farben ; anfangs sah ich nur einen schwachen bläulichen Schimmer, indessen waren nach zweistündigem Aufenthalt im Dunkeln die Umrisse des Spectrums deutlich. Ich be- merkte jetzt eine Menge dunkler Linien und einen breiten dunklen Streifen in dem sonst hellen Spectrum. Durch Drehen der Prismen und Vergleichen mit dem Spectrum eines angezündeten Kerzenlichtes fand ich den Anfang des Phosphorescenzspectrums beim Hellblau, von wo es sich bis ins Ultraviolett erstreckte. Die dunklen Linien lagen im Hellblauen, während das breite dunkle Band in dem noch sichtbaren ultravioletten Theil zu liegen schien. Auch mit blossem Auge sah ich nach mehrstündigem Aufenthalt im Dunkeln das Licht ») Cfr. Ludwig, Phosphorescenz der Pilze p. 23. 188 Ludwig: Ueber die spectroskopische Unters, photogener Pilze. I, 2. deutlich hellblau, während es mir bei offenen Fenstern weiss er- schienen war. Ein rothes und violettes Glas Hessen gar kein Licht des phosphorescirenden Mycels durch, während das schwächere durch das geöffnete Fenster dringende Strassenlicht durch beide Gläser sichtbar war. Sehr wenig Licht drang durch das dunkelblaue Glas, das auch das Kerzenlicht sehr abschwächte, etwas besser Hess das orangefarbene und ziemlich gut das grüne Glas das Licht durch. Fast ungeschwächt ging dieses endHch durch das hellblaue Glas, welches vom Kerzenlicht nur äusserst wenig durchliess. Die Com- bination der vier letzten, aHein für das Phosphorescenzlicht durch- lässigen Gläser Hess das durchscheinende Licht hellblau erscheinen. Die Absorptionsspectra der Gläser sind a. a. 0. beschrieben. — Die Helligkeit des Lichtes bestimmt sich daraus, dass Mycelstücken von etwa 1 qcm ihr lebhaft scintillirendes' abwechselnd hell auf- leuchtendes und verschwindendes Licht in 3 m Entfernung eben noch zeigten. Ägaricus melleus Fl. Dan. und das von ihm in Lichtfäule ver- setzte Holz haben zumeist ein ruhiges weiss lieh es Licht mit einem Stich ins Grünliche. Sein Spectrum ist continuirlich und reicht von ca. 45 bis 76 der SoEBY-BKowN'schen Scala (für D = 50, E = 72'1, b = 76-1). Bestimmt wurde dasselbe durch Vergleich mit dem DämmerungsHcht, durch absorbirende Substanzen bekannter Absorptionslage, durch den Messapparat (Nachtlicht) und durch bunte Gläser. Es sei hier bemerkt, dass, abgesehen von den Beobachtungen bei Trametes pini, stets derselbe Satz von Gläsern benutzt wurde, deren Absorptionsspectra hier nicht weiter erörtert werden sollen. Die Durchlässigkeit für das Tageslicht ist aus folgender Reihenfolge zu ersehen : orange roth violett blau grün Für das HalHmaschHcht ist die Ordnung der Durchlässigkeit: orange grün (ziemHch gut) *) TüLASNE bemerkte auch bei Ägaricus olearius ein ähnliches, bewegtes Licht (wie es auch der Phosphor zeigt). I, 2. Ludwig: Ueber die spectroskopisclie Unters, photogener Pilze. 189 violett (schwach) blau (noch schwächer) roth (undurchlässig). Das grüne Glas engt das Spectrum beiderseits etwas ein. Xylaria Hypoxylon. Nachdem schon ältere Schriftsteller und neuerdings Cvni. die Phosphorescenz dieses Pilzes behauptet, trug ich, um diese Angaben zu controlliren, von verschiedenen Stellen um Greiz trocknes und von dem Pilz in Fäule versetztes Holz, beide mit den Rhizomorphen und Xylostroma desselben ein (von Barthmühle-Steins- dorf bei Jocketa 29. IX. 83, vom Zaschberg bei Pohlitz 2. IX. 83, von Steinhübel-Schlödenmühle am 16. X. 83). Holz und Mycel leuchteten theils sofort, theils — wo keine Rhizomorphabildung vor- handen war — nach einigen Tagen, wenn es an feuchtem Ort aufbe- wahrt wurde (in der Botanisirtrommel leuchtete das am ersten Tag dunkle Holz noch nach 14 Tagen und später). Das Licht, das durch die Gläser geht: orange (am besten, aber mit beträchtlicher Schwächung) grün (weniger) violett (bedeutend weniger) blau (sehr wenig), durch roth nicht hindurch geht, erscheint dem blossen Auge grün- lich-gelb bis grünlich. Sein Spectrum ist continuirlich, reicht von ca. 55 bis 85 der bei Agaricus melleus erwähnten Scala, ist also nach dem Blauen zu verschoben gegen das des Hallimasch wie auch die gleichzeitigen Beobachtungen beider Spectra durchs Vergleichs- prisma zeigten. Im Dunkeln kann man die beiderlei Mycelien resp. davon befallenen Hölzer am Geruch unterscheiden (Hallimaschholz hat Knoblauchgeruch), auch hat Xylaria weniger intensives Licht. Collyhia tuherosa Bull, deren Sklerotien bildendes Mycel nicht nur selbst leuchtet ', sondern auch die Fähigkeit besitzt, Nadeln, Blätter, Zweige, Borke, Moos, die es durchwuchert, und faule Pilze, auf denen es wohnt, in der Umgebung phosphorescent zu machen, lässt das Licht durch orange gut, grün ziemlich gut, durch violett etwas, nicht durch roth und blau. Spectraluntersuchungen habe ich hier der geringen Intensität des Lichtes besonders bei den durch ihn ») Cfr. Ludwig, Ein neuer phospb. Pilz, Collybia tuberosa Bull. (Botan. Centrbl. Bd. XIL 1882, p. 104). 190 Ludwig: Ueber die spectroskopisclie Unters, photogener Pilze. I, 2. licbtfaulen Substanzen halber nicht angestellt. Die Intensität beträgt ca. y,7 bis '/ao derjenigen des noch in 2*20 m sichtbaren Hallimasch- lichtes. Micrococcus Fflügcri Ludwig. Der Urheber der sehr spora- disch auftretenden Phosphorescenz des Fleisches, die schon im Jahre 1592 eingehender beobachtet wurde und dann bis in die Neuzeit immer und immer wieder Aufsehen erregte ', ist nach meinen Ver- suchen unzweifelhaft identisch mit der der sehr häufig auftretenden Phosphorescenz der Seefische und lässt sich von diesen beliebig auf jede Fleischsorte übertragen. Ich habe diesen Pilz, dessen Zellen in lebhafter Bewegung und Theilung begriffen sind, bald zu zwei oder vier, bald in Stäbchen bildenden Reihen auftreten, mit obigem Namen versehen-. Das Licht des „lichtfaulen" Fleisches erscheint dem blossen Auge von der Farbe des auf eine weisse Wand fallenden Voll- mondlichtes und ist (1 qm) auf 1'85 bis 2-50 m Entfernung wahr- zunehmen. Die Ordnung der Durchlässigkeit ist blau gelb grün violett. Am besten geht das Licht durch die Combinationen blau-gelb und blau-grün, roth ist undurchlässig. Die Bacterien treten ähnlich wie der chromogene Micrococcus prodigiosus (Ehrexbeeo) zuerst in zer- streuten Zoogloeen auf, die ein helleres Liebt aiisstrahlen, als das später gleichmässig lichtfaule Fleisch. Sie sind zur Untersuchung des Spectrums zu benutzen. Die Eindämmung des Spectrums (Blau dämmt es von der Seite des Roth zur Hälfte ein etc.), die Anwen- dung von Vergleichsprisma und Messapparat ergiebt eine Ausdehnung des coutinuirUchen Spectrums von der Gegend der FRAUNHOFER'schen Linie b bis ins Violette. — Die Spectra der zahlreichen grösseren Hutpilze sind noch zu unter- suchen. Dass dabei praktischere Wege eingeschlagen werden können und eingeschlagen werden, ist mir nicht zweifelhaft. Trotzdem glaubte ich die vorstehenden Methoden mittheilen zu sollen. Vielleicht dass sie dazu beitragen, dass die mikroskopische Technik auch dem neuen Zwecke entsprechende Umänderungen der Mikrospectralapparate und Spectrophotometer ausfindig macht. ») Cfr. Ludwig, Pilzwirkungen p. 10 ff. 2) Hedwigia 1884, Nr. 3. I. 2. Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 191 Ueber das Zählen mikroskopisclier Geg'enstände in der Botanik. Von Dr. Emil Chr. Hansen, Vorstiind des Physiologischen Laboratoriums Carlsberg, Kopenhagen. Hierzu 6 Holzschnitte. Schon seit einer langen Reihe von Jahren haben die Aerzte und Thierphysiologen bei ihren Studien eine Zählung der Blutkörper unter- nommen und dadurch bedeutungsvolle Resultate erhalten. Mehrere Methoden haben sich folglich nach und nach in dieser Richtung ausge- bildet. In der neuesten Zeit ist es namentlich Malassez und Hayem, welche sich hierin verdient gemacht haben, und der von letzterem in Verbindung mit Nachet coustruirte Apparat wird jetzt am häufigsten benutzt. Eine ausführliche Darstellung, aufweiche Weise man in der Medicin und Thierphysiologie solche Zählungen unternommen hat, findet sich in mehreren Abhandlungen der neuesten Zeit und wird daher an dieser Stelle nicht gegeben werden. Vor wenigen Jahren ist Hayem's und Nachet's schöner Apparat jedoch auch in den Dienst der Botanik getreten und hat sich hier ebenfalls sehr werthvoll gezeigt. Es ist das Ziel gegen- wärtiger Abhandlung, einen Ueberblick darüber zu geben, wie und zu welchem Zwecke er auf diesem Gebiete angewendet worden ist. Da man jedoch bei botanischen Untersuchungen auch eine Zählung mikroskopi- scher Gegenstände auf anderem Wege als mittels des kürzlich erwähnten Apparates unternommen hat, so werden die hierbei angewandten JMe- thoden gleichfalls besprochen werden. Im Frühjahre 1877 lenkte Professor Panum in Kopenhagen meine Aufmerksamkeit auf den damals kurz zuvor von Hayem und Nachet construirten Apparat zur Zählung der Blutkörper und zeigte mir in seinem Laboratorium, wie man ihn zur Bestimmung der Vermehrungs- schnelligkeit gewisser mikroskopischer Organismen anwenden kann. Die Richtigkeit der Behauptung jenes Herrn wurde auch durch die Ver- suche, welche ich sogleich mit Saccharomyces cerevisiae und mit einigen Bacterienformen anstellte, völlig bestätigt. Die Versuche wurden kurz erwähnt in einer kleinen Mittheilung, welche ich in demselben Jahre 192 Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2. in der dänischen Zeitschrift für populäre Darstellungen aus der Natur- wissenschaft veröffentlichte, und im nächsten Jahre gab Panum selbst einige Erläuterungen hierüber '. Die Methode wurde jetzt auf dem Carlsberger Laboratorium zuerst von R. Pedeksen und danach von mir zu einer grösseren Reihe Unter- suchungen über die Vermehrung der Hefezellen, wenn sie sich unter verschiedenen Verhältnissen befinden, benutzt 2. Diese Arbeiten lenkten die Aufmerksamkeit des Auslandes auf die neue Anwendung des Zählapparates, und schon im Jahre 1880 finden wir ihn mit grossem Eifer bei den Studien, welche Delbrück, Hayduck und DuEST unternahmen, angewendet : „Die Bestimmung der Hefe durch Zählung", „Ueber Wachsthum und Gährwirkung der Hefe nach Beob- achtungen in der Praxis mit Hülfe der Zählmethode", „Einige Beob- achtungen über den Einfluss der Spaltpilze auf die Entwicklung und die Gährwirkung der Hefe", „Hefezählung aus der Praxis" ^ Hierdurch wurde die Methode zugleich in die Praxis der Spiritus- fabrication eingeführt. Wir werden jetzt den Apparat und das Verfahren, welches bei solchen Untersuchungen wie den eben erwälmten angewendet wird, be- schreiben. Ein wesentlicher Theil des Appparates ist das Objectglas (s. neben- stehende Figur 1, a), worauf ein kleiner abgegrenzter Raum gebildet ist, der dadurch entsteht, dass eine mit einem kreisförmigen Aus- schnitte versehene Glas- platte von genau be- stimmter Dicke auf dem Glase befestigt ist (h). In dem kreisförmigen Raum wird ein Tropfen mit den Zellen, welche l ' gezählt werden sollen, angebracht. Dieser Tro- pfen darf nicht über den abgegrenzten Raum hinausfliessen, muss aber doch so gross sein, dass er in Berührung mit dem Deckglas (c) kommt. >) Nord. med. archiv. 1878, Bd. X No. 4. 2) Compte-rendu des traveaux du laborat. de Carlsberg vol. I, livr. 1 — 3 1878—1881. 3) Zeitschrift für Spiritusindustrie 1880. Auch in M.vercker's Handbuch der Spiritusfabrication 3. Aufl., 1883. I, 2. Hansen: lieber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 193 wenn dieses aufgelegt wird. Wird nun ein liinlänglich dickes, plange- schliffenes Deckglas angewendet, so wird die Höhe der Flüssigkeits- säule im Blutzählungsapparat von Hayem-Nachet überall dieselbe sein, nämlich 0*2 mm. Zeiss in Jena hat jedoch auch in den letzten Jahren solche Objectgläser mit dünneren, ringförmig ausgeschnittenen Glas- platten verfertigt, deren Dicke, mit einer Genauigkeitsgrenze von 0-001 mm, nur 0*1 mm ist. Nachdem die Hefezellen im Anfange des Versuches in die be- treffende Nährlösung übergeführt worden sind, werden sie hier durch Schütteln oder Umrühren gleichmässig vertheilt, und, wenn ihre Anzahl nicht zu gross ist, wird sodann ein Tropfen der Mischung in den er- wähnten Raum auf das Objectglas gebracht. Die so erhaltene Flüssig- keitsschicht wird durch Projection eines in das Ocular des Mikroskopes eingesetzten Mikrometers, welches in 16 gleich grosse quadratische Felder eingetheilt ist, in kleine Prismen abgetheilt, deren Höhe 0*2 mm oder 0*1 mm (je nachdem man die erste oder die letzte der oben er- wähnten Kammern anwendet), und deren Grundfläche die Projection eines der Quadrate des Mikrometers ist. Um die oft anstrengende Zäh- lung zu erleichtern, findet sich in jedem der Quadrate wieder ein Strich 5 hierdurch bekommt das Auge einen Anhaltspunkt, und es wird möglich mit Genauigkeit zu zählen. Die Flüssigkeit muss ein solches specifisches Gewicht haben, dass die Zellen sich darin gleichmässig vertheilt halten können; aber ihr specifisches Gewicht soll doch zugleich etwas geringer sein als das der Zellen, so dass diese, wenn sie einige Minuten gestanden haben, sich auf das Objectglas hinabsenken können. Bei den Nährlösungen, von denen hier die Rede ist (Würze, ziemlich verdünnte Fruchtsäfte und Zuckerlösungen u. s. w.) wird dies im allgemeinen der Fall sein. Wenn nur von Relationen die Rede ist, so ist es natürlicherweise gleichgültig, einen wie grossen Cubikinhalt Flüssigkeit man untersucht, vorausgesetzt, dass er in derselben Versuchsreihe stets derselbe ist. Der so ein für alle Mal gewählte Cubikinhalt wird passend die V 0 1 u m e n- einheit genannt. Nachdem der Apparat eine gewisse Zeit lang auf dem Tische des Mikroskopes in Ruhe gelegen hat, damit die Senkung der Zellen vor sich gehen kann, schreitet man zur Zählung der Anzahl von Zellen, welche sich in jedem der Quadrate des Gesichtsfeldes befindet. Man wird jedoch immer einige Zellen wahrnehmen, welche nicht innerhalb der Quadrate selbst liegen, sondern auf den Grenzlinien' dieser, so dass sie eben so gut zu dem einen als zu dem anderen der zwei Nachbar- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 2. 13 194 Hansen: üeber d. Zälilen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2. quadrate gerechnet werden können. Ist man in solchen Fällen nur consequent, so kann es selbstverständlich gleichgültig sein, welchen Regeln man folgt. Wenn die Anzahl der Zellen so gross ist, dass die Zählung nicht sicher und genau ausgeführt werden kann, dann muss die betreffende Mischungsflüssigkeit verdünnt werden. Der Grad der Verdünnung muss natürlicherweise genau bestimmt und mit in die Be- rechnung aufgenommen werden, wenn man aus der gefundenen Anzahl Zellen in der gewählten Volumeneinheit der verdünnten Flüssigkeit die Anzahl derselben in der Volumeneinheit der nicht verdünnten Flüssig- keit berechnet. Da man bei dieser Berechnung die gefundene Zahl mit der Verdünnungszahl multipliciren muss, wodurch ein möglicher Fehler in der gefundenen Zahl folglich auch multiplicirt wird, so ist es einleuchtend, dass man nicht mehr verdünnen darf als unbedingt noth- wendig. Durch Anwendung eines Objectglases mit einer Flüssigkeits- säule von 0*2 mm wird die Verdünnung in bedeutenderem Maasse statt- finden dürfen, als wenn man mit einer Flüssigkeitssäule von nur 0*1 mm arbeitet. Von der Verdünnungsflüssigkeit wird nicht nur ein solches specifisches Gewicht im Verhältniss zu der beim Versuche benutzten Nährlösung und den sich darin befindenden Hefezellen, dass diese durch Umrühren sich in der Mischungsflüssigkeit gleichmässig vertheilt halten können, gefordert, sondern zugleich auch, dass sie dazu beitragen soll, die sich häufig zusammenballenden Zellen zu trennen. Das Schütteln und Umrühren allein ist nämlich nicht immer hinreichend. Ausserdem ist es auch nothwendig, dass durch Zusatz gewisser Stofi'e die Schaum- bildung, die namentlich dann hervortritt, wenn Nährsubstrate wie Würze benutzt werden, eingeschränkt wird, und dass gleich bei diesem Zusätze die Gährung und Vermehrung der Zellen unterbrochen wird. Verdünnte Schwefelsäure (1 Gewichtstheil starke Schwefelsäure auf 10 Gewichts- theile Wasser) erfüllt im ganzen diese Forderungen; ChlorwasserstoflF- säure, Ammoniak und Natronlauge lassen sich auch anwenden ; ich fand aber bei meinen zahlreichen Versuchen, dass Scliwefelsäure vorzuziehen sei. Wird eine verhältnissmässig starke Verdünnung gefordert, so wii'd man, nachdem 1 oder 2 Volumen verdünnte Schwefelsäure hinzu- gesetzt sind, destillirtes Wasser als weitere Verdünnungsflüssigkeit hin- zufügen können. Die Fehler, welche sich bei der Zählung geltend machen, rühren theils von der Präparation, theils von der Zählung selbst her. Bei der Präparation muss man namentlich sorgfältig darauf achten, dass die Maasse mit der grössten Genauigkeit genommen werden, und dass für eine gleichmässige Vertheilung der Zellen in der betreff'enden Flüssig- I, 2. Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 195 keit gesorgt ist, bevor der Tropfen in äie Kammer des Objectglases übergeführt wird. Wie das Präparat fertig gemacht wird, ist oben er- wähnt. Bei Untersuchungen über die Vermehrungsverhältnisse der Hefezellen wird man in der Regel mit einer grösseren Menge Flüssig- keit in einem Kolben, der so eingerichtet ist, dass fremde Organismen, so lauge der Versuch dauert, fern gehalten werden können, operiren. Wenn man annehmen darf, dass die Zellen durch Schütteln gleichmässig vertheilt worden sind, so werden schnell Proben herausgesucht, die man darauf in passendem Verhältnisse mit der Verdünnungsflüssigkeit ver- mischt. In der so erhaltenen Mischungsflüssigkeit sucht man dann durch Umrühren eine, soweit möglich, gleichmässige Vertheilung der Zellen zu erhalten, und wenn dies geschehen ist, wird der Tropfen schnell für den Zählungsapparat herausgenommen. Hierzu benutzt man mit Vortheil eine Haarröhre. Will man jedoch ganz sicher gehen, so darf mau sich nicht damit begnügen, eine Portion der Mischungsflüssigkeit zu machen, sondern man muss das ganze eben beschriebene Verfahren wiederholen, indem man zwei Portionen macht und von jeder derselben Tropfen zur Zählung herausnimmt. Um hierbei Fehler zu vermeiden, ist es natürlicherweise von Wichtigkeit, zu wissen, in wie vielen ver- schiedenen Feldern man die Zellen zählen muss, um eine richtige Mittel- zahl zu erhalten. Dies wird versuchsweise eruirt, indem man das Zählen so lange fortsetzt, bis es sich zeigt, dass die weiteren Zahlen ohne wesentlichen Einfluss auf die Mittelzahl bleiben. In meinen Versuchen fand ich im allgemeinen, dass die Zählung in 48 oder 64 der kleinen Quadrate (also 3 oder 4 Mal das grosse Quadrat) hinreichend war. Hayduck musste jedoch in seinen Versuchen jedes Mal eine grössere Anzahl Zählungen vornehmen. Bei all den Versuchen, welche nach dieser Methode angestellt worden sind, hat es sich gezeigt, dass sie genaue Resultate giebt, und es kommt hierzu, dass eine Bestimmung mit einer geringen Menge Material und in einer verhältnissmässig kurzen Zeit ausgeführt werden kann. Die Bestimmung einer Hefemenge durch Wägen ist dagegen bekannter Weise eine sehr langwierige uud sehr ungenaue Operatiou. Wenn man aber auch von den Fehlern der Wägmethode absehen würde, so kann sie doch nicht bei Untersuchungen über die Vermehrung der Hefe- zellen, wo es ja lediglich darauf ankommt, die Anzahl dieser zu bestimmen, augewendet werden. Nur wenn das Gewicht der Hefezellen dasselbe unter verschiedenen Verhältnissen wäre, könnte man das Gewicht der Hefe als einen Ausdruck der Anzahl von Hefezellen betrachten, es ist aber gar kein Grund vorhanden, dass dies in Wirklichkeit Statt hat. 13* 196 Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2. Umgekehrt köuneu wir folglich auch nicht von der Zahl einer ge- wissen Menge Hefezellen auf das Gewicht dieser schliessen. Nägeli hat freilich das mittlere Gewicht einer Hefezelle zu 0-000000 0005 g angegeben; allein Hatduck's Versuche zeigen, dass diese Berechnung bei weitem keine allgemeine Gültigkeit hat. Bei dem oben beschriebenen Apparat von Hayem-Nachet befand das Netzmikrometer sich im Oculare ; man hat jedoch auch Zählkammern, in deren Boden dasselbe eingeritzt ist. Nach Thoma's Anweisung werden solche bei Zeiss verfertigt. Die Flüssigkeitssäule in diesen Kammern bekommt eine Höhe von 0*1 mm, und die Mikrometereinthei- lung erstreckt sich über ein Quadratmillimeter, welches wieder in kleine Quadrate von 0*05 mm Seitenlänge eingetheilt ist. Es können freilich Fälle gedacht werden, wo man die zuletzt besprochenen Kammern den anderen vorziehen wird, aber etwas eigentlich Neues bieten sie nicht dar. Wünscht man den Cubikinhalt der Volumeneinheit, deren Zellen man zählt, kennen zu lernen, so braucht man bei letzterer Einrichtung die Berechnung nicht auszuführen, welche bei Anwendung der erstgenannten Kammer zur Bestimmung des Werthes der Oculareintheilung ge- fordert wird. In den mykologischen Werken mehrerer Autoren finden sich An- gaben der Vermehrungsschnelligkeit verschiedener Mikroorganismen in Objectträgerculturen. Zu diesen wird die eine oder die andere Form der sogenannten feuchten Kammern benutzt, und man stellt das Objectiv auf die Zelle ein, deren Entwicklung und Vermehrung man verfolgen will. Auf diese Art wird man natürUcherweise auch im Stande sein, die An- zahl der neugebildeten Zellen und die Zeit, welche ihre Entwicklung forderte, zu bestimmen; namentlich ist dieses verhältnissmässig leicht zu Anfang des Versuches ; später, wenn die Vermehrung weiter fortge- schritten ist, wird es jedoch schwieriger und zuletzt oft unmöglich. Wie vorzüglich diese Methode auch für die entwicklungsgeschichtliche Unter- suchung ist, so beschränkt ist auch die Bedeutung, welche sie für die experimentelle Physiologie hat. Hier ist man nämlich nur im Stande, die Versuchsanordnung in geringem Grade zu variiren, und da man mit nur kleinen Mengen operiren kann, so ist es in der Regel nicht möglich, die gewünschten chemischen und physikalischen Analysen zu unternehmen. In dieser Richtung steht der Forscher dagegen ganz anders da, wenn der Zählapparat benutzt wird. I, 2. Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 197 In der neueren Zeit sind an verschiedenen Orten zahlreiche Analysen des Liiftstaiibes angestellt worden, namentlich um die sich darin befind- lichen Mikroorganismen kennen zu lernen. Auch hat man versucht, durch Zählung die Anzahl, welche sich in einem bestimmten Cubikinhalt Luft befand, zu bestimmen. Zu diesem Zwecke wurde früher gewöhn- lich das Aeroskop angewendet. In den letzteren Jahren ist es besonders MiQUEL •, welcher damit gearbeitet hat. Sein Apparat (Figur 2) ist eine Modification des von Pouchet, Maddox und Cunningham be- nutzten. Er besteht hauptsächlich aus einer Glocke Ä, von deren Scheitel eine Röhre C ausgeht, in welche die Luft eingesogen und darauf ge- messen wird. Im untersten, offenen Theile der Glocke ist ein hohler Kegel B mit einer sehr feinen Oeffnung in der Spitze eingeschraubt , und über diesem ist wieder eine dünne Glasscheibe, ein Deck- glas D, angebracht, welches mit einer Mischung von Gly- 2. cerin und Glykose bestrichen ist. Eben an dieser kleberigen Flüssigkeit setzt sich der Staub ab, welcher in der Luft enthalten ist, die durch den Kegel von unten einströmt. Die hierin sich findenden Mikroorganismen werden durch Zählung bestimmt, jedoch nicht die Bacterien. Zu diesem Zweck werden mittels einer Nadel, welche vorher durch eine Flamme gezogen ist, die Staubpartikeln gut mit der kleberigen Flüssigkeit vermischt, und, wenn dies geschehen ist, wird die hierzu benutzte Nadelspitze mit einem Tropfen einer ähnlichen, aber reinen Flüssigkeit, welche dann schliesslich auch auf das erwähnte Deckglas angebracht wird, gereinigt. Alsdann wird es in der Weise auf das Objectglas gelegt, dass die aufgefangenen Staubpartikeln mög- lichst gleichmässig im Präparate vertheilt werden, welch letzteres man dann unter das Mikroskop bringt. Die Zählung geht hier nun auf die Art vor sich, dass man in den verschiedenen Theilen die sich im Ge- sichtsfelde befindliche Anzahl bestimmt um die Mittelzahl zu finden. Hieraus bestimmt Miquel dann, indem er das Verhältniss zwischen der Grösse des Gesichtsfeldes und des Präparates kennt, die ganze Anzahl der gegenwärtigen Mikroorganismen. Gegen diese Zählmethode können jedoch Einwendungen erhoben werden. Es wird z. B. nicht immer 1) Annuaire de l'observatoire de Montsouris pour las ans 1879—1882. 198 Hansen: Feber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2. möglich sein, auf die angegebene Art die sich in Glycerin und in der Zuckerlösung befindlichen Körper auch nur annähernd gleichmässig zu vertheilen, was erforderlich ist, um mit einiger Sicherheit und nicht allzu grosser Mühe die wahre Mittelzahl finden zu können. Hierzu kommt noch, dass die Bestimmung der in der kleberigen Flüssigkeit auf- gefangenen Organismen und Körperchen in vielen Fällen geradezu un- möglich sein wird. In seinen statistischen Untersuchungen der Bacterien des Luft- staubes wendete Miquel ein anderes Verfahren an, indem er nämlich Culturversuche unternahm. Die Nährlösung, welche aus neutralisirtem Fleischextract bestand, wurde in einen kugelförmigen Ballon (b) mit zwei gegenüberliegenden Röhren (Figur 3) gebracht, von welchen die eine (a) gebogen war und die andere (/") an der Ausmündungsstelle mit einem Filter (c, d) aus Asbest versehen war. Letzterer diente dazu, um wenigstens einige der Organis- men , welche in der eingesogenen Luft mit durch die Flüssigkeit schlüpfen , aufzufangen. Es wurde nämlich die Luft in die gebogene Röhre hineingeführt und verliess den Ballon durch die mit dem erwähnten Filtrirapparat ver- sehene. Wenn die Aspiration abgeschlossen war, so wurde der Asbest-Filter in die Flüssigkeit hinuntergespült, worauf man den Apparat in einen Thermostaten bei ungefähr 30 ''C. hinein- stellte, d. i. eine Temperatur, welche unter den angegebenen Verhältnissen für die Ent- wicklung der meisten Bacterien günstig zu sein schien. Um die sich in der Luft befind- lichen Bacterien zu zählen, wendete Miquel Durch eine vorhergegangene Probe soll der Ex- perimentirende sich Kenntniss von dem Volumen Luft verschaffen, welches an der angegebenen Stelle im Stande ist, die Hälfte der zum Versuche angewendeten Ballons zu inficiren. Wenn die eingesogene Luftmenge zu gering ist, um wenigstens einen der Ballons zu inficiren, so wird man selbstverständlich gar keine Auskunft über die Anzahl der Bacterien erhalten können, wenn dagegen die Luftmenge zu gross ist, so werden alle schnell mit verschiedenen Arten gefüllt werden, von welchen oft eine einzelne die Oberhand gewinnt und ganz und gar die Schwachen zurückdrängt. Um auch die weniger Kampftüchtigen in den Stand zu setzen, sich zu entwickeln, muss man versuchen, eine jede der Formen folgende Methode an. I, 2. Hansen: üeber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 199 für sich einzuführen, so dass die Schwachen der Concurrenz entzogen werden und Gelegenheit zu einer ruhigen Incubation erhalten können. Die Zählung geht dadurch vor sich, dass die Anzahl der in die Ballons eingesogenen Liter Luft bestimmt wird, welches ebenfalls der Fall ist mit der Anzahl der inficirten Kolben und der darin eingeführten Bacterien- arten, wenn diese Vegetationen entwickelt haben. Miquel hat selbst sein Augenmerk auf folgende, Fehler involvirende, Ursachen, welche dieses Verfahren mit sich bringt, gerichtet : Der Staub, welcher in einen Ballon hineingeführt wird, kann mehr als einen Keim derselben Bacterien- art enthalten, aber das Ganze wird doch später als ein einziger ge- rechnet; trotz aller Vorsicht wird nicht verhindert werden können, dass ab und zu mehrere verschiedene Ai'ten in denselben Ballon eingesogen werden, so dass eine Concurrenz entsteht, in welcher die Schwächeren unterdrückt werden, und diese werden dann oft nicht bemerkt und nicht mitgerechnet; Schimmelpilze, welche im Stande sind, sich in dem neu- tralisirten Fleischextract zu entwickeln, werden bisweilen eingeführt, und, indem sie den sich in der Flüssigkeit befindlichen Sauerstoff ab- sorbiren, können sie die Bacterien an der Entwicklung hindern ; die be- nutzte Nährflüssigkeit und die Temperatur sind freilich der Entwicklung der meisten Bacterien, jedoch nicht aller, günstig, folglich bleibt eine geringe Anzahl, welche sich der Aufmerksamkeit entzieht. Man kann hier ferner noch die Einwendung machen, dass es in den meisten Fällen unmöglich sein wird zu entscheiden, ob eine oder mehrere Species sich in jedem Kolben befinden. Von absoluten Zahlgrössen kann hier also garnicht die Rede sein ; wenn indess beständig einigermassen auf die- selbe Art gearbeitet ^\ard, wird man doch ganz brauchbare Relationen erhalten können. In den letzten Paar Jahren sind von Koch und seinen Schülern im Reichsgesundheitsamt zu Berlin zahlreiche Analysen der Mikro- organismen in Boden, Luft und Wasser ausgeführt, und hierbei Zählungen unternommen •. Eine Nährflüssigkeit, bestehend aus Fleisch- infusum, wozu 1 Procent trockenes Pepton, 0*5 Procent Kochsalz und so viel kohlensaures Natron, als zur Neutralisation erforder- lich ist, gesetzt war, wurde mit 5 bis 10 Procent Gelatine vermischt. Wenn man diese Nährgelatine, nachdem sie steif geworden ist, der directen Einwirkung der Luft aussetzt, so wird wenigstens ein Theil •) Mittheilungen des Kaiserlichen Reichsgesundheits-Amtcs Bd. I, 1881 und Deutsche Apotheker-Zeitung, 1883, No. 38, 1884, No. 2. 200 Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2. der umherschwebenden Keime abgelagert werden, und wenn die solcher- massen erhaltene Cultur einige Tage in einem feucliten Raum bei einer passenden Temperatur gestanden bat, so wird sich eine grössere oder geringere Anzahl von Vegetationsflecken zeigen. Von diesen wird in den meisten Fällen, jedoch nicht immer, ein jeder aus nur einer Art bestehen und sich also wohl auch in der Regel aus einem Keime ge- bildet haben. Der feste Nährboden bietet den grossen Vortheil dar, dass die Vegetationen nicht zusammenfliessen, sondern auch in ihrer Entwicklung fortfahren getrennt zu bleiben. Sie können folglich ge- zählt werden. Um den Inhalt der Mikroorganismen in einem abgemessenen Cubikinhalte Luft zu bestimmen, benutzte Hesse, welcher sich besonders mit diesen Untersuchungen beschäftigt hat, horizontal liegende Glas- röhren , auf deren Boden eine Schicht Nährgelatine angebracht war. Diese Röhren wurden mit einem Aspirator in Verbindung gesetzt, mittels dessen die gewünschten Luftmengen dann eingesogen wurden. Indem der Luftstrom nach und nach die Röhre passirt, werden die Keime in dieser auf die sich unten befindliche Gelatine abgelagert. Bei einer bestimmten Röhrenweite und Strömungsgeschwindigkeit liegen sie sämmtlich in der ersten Hälfte der Röhre, während die Nährgelatine in der anderen Hälfte frei bleibt, ein Beweis, dass Keime nicht mehr bis dorthin gelangt sind. Die Analysen des Wassers werden nach demselben Princip wie die vorhergehenden unternommen. Eine passende Portion wird abgemessen und mit 10 cc fliessender keimfreier Nährgelatine vermischt. Nachdem die Zellen in dieser Mischung durch Schütteln soweit als möglich gleich- massig vertheilt worden waren, wurde das Ganze auf eine horizontale, ebenfalls keimfreie Glasplatte ausgegossen. Diese wurde endlich mit einer feuchten Glasglocke zugedeckt und solchergestalt in einem warmen Zimmer aufbewahrt. Im Verlaufe von 40 bis 60 Stunden entwickelte sich eine, der im Wasser befindlichen Anzahl Mikroorganismen ent- sprechende Anzahl Vegetationsflecke. Die Anzahl dieser wurde auf die Art bestimmt, dass eine andere Platte mit einem Netzwerk von Quadrat- centimetern unter die Glasplatte gelegt wurde. Die zur Entwicklung gekommenen Colonien wurden dann auf verschiedenen Stellen der Platte mit Hülfe des Mikroskops bei SOfacher Vergrösserung gezählt ; hiernach bestimmte sich dann die Durchschnittszahl derselben. Die Anzahl der Quadratcentimeter, welche die Fläche der ausgebreiteten Gelatineschicht einnahm, wurde mit der genannten Durchschnittszahl multiplicirt. Es ergab sich hieraus die Zahl der entwicklungsfähigen Organismen, welche I, 2. Hansen: üeber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 201 in dem der Gelatine zugesetzten Quantum des zu untersuchenden Wassers enthalten war, so dass daraus die Zahl der in einem Cubik- centimeter dieses Wassers vorhandenen Keime berechnet werden konnte. Dass diese Zahl nur annähernd richtig ist, ergiebt sich von selbst. Hier- bei darf auch nicht ausser Acht gelassen werden, dass, obgleich die angegebenen Culturverhältnisse den meisten der betreffenden Organismen günstig sind, es doch aller Wahrscheinlichkeit nach eine geringere An- zahl geben wird, von welchen dies nicht gilt. Die wirkliche Zahl wird deshalb höher sein als die abgelesene; dies ergiebt sich auch daraus, dass von mehreren der Colonien, wie schon oben erwähnt, jede von mehr als einem Keim stammen. * Die in dem vorigen Abschnitte erwähnten Zählungen der Mikro- organismen im Staube der Luft und des Wassers führt uns zu der wichtigen Frage der Reinculturen, deren Lösung bekannter Weise die Grundlage aller exacten Forschung dieser Wesen bildet, sei es, dass diese ihre Entwicklungsgeschichte oder ihre Physiologie betreffen. Der einzige, auf jeden Fall sichere Weg, auf welchem wir die Reincultur irgend eines Mikroorganismus erhalten können, ist der, eine einzige Zelle iu einem passenden Nährsubstrat und auf eine solche Weise auszusäen, dass fremde Organismen fern gehalten werden können. Es wird sehr schwierig sein, ausfindig zu machen, wer zuerst diesen an sich so ein- fachen und doch so fruchtbaren Gedanken ausgesprochen hat. Die meisten Forscher der neueren Zeit hatten ihre Aufmerksamkeit hierauf gelenkt. In seinen „Untersuchungen über Schimmelpilze" hebt Beefeld die Nothwendigkeit dieses Verfahrens besonders hervor imd theilt mit, wie er selbst bei seinen entwicklungsgeschichtlichen Untersuchungen eine oder höchstens einige wenige Zellen des betreffenden Organismus in einer feuchten Kammer anbringt, um dann mittels des Mikroskopes die Entwicklung einer einzelnen, bestimmten Zelle durch alle Stadien zu verfolgen. Wie oben berührt, ist diese Methode vorzüglich, wo es sich um entwicklungsgeschichtliche Untersuchungen handelt, dahingegen ist sie von beschränktem Werthe, wenn es darauf ankommt, complicirte physiologische Experimente anzustellen. Hierzu wird in der Regel eine grössere Menge von Zellen der betreffenden Reincultur in Kolben mit Nährlösung erfordert. 202 Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2. Als eine Vorbereitimg hierzu werden in der neuesten Zeit Koch's Gelatineculturen, welche am Schhiss des vorigen Abschnittes beschrieben wurden, viel beniitzt. Um darüber ins Klare zu kommen, was man auf diesem Wege erreichen kann, stellte ich einige ControUversuche an, in- dem ich nämlich in einer passenden Nährgelatine zwei Hefearten ver- mischte, welche mit Sicherheit durch die mikroskopische Untersuchung von einander unterschieden werden können. Der Versuch wurde dann auf dieselbe Art vollführt, wie es bei den Wasseranalysen beschrieben ist. Es zeigte sich, dass die Hefezellen in den meisten Fällen sich ge- irennt halten, und dass jede für sich ausgesäet worden war, so dass die gebildeten Vegetationsflecke fast stets Reinculturen darstellten. Einige Unsicherheit bleibt also doch immer, wenn dieses Verfahren benutzt wird. Um vollständige Gewissheit zu erhalten, ob ein Vegetationsfleck aus einer oder aus mehreren Zellen gebildet ist, muss man die Cultur in einer feuchten Kammer unternehmen. Ich habe diese Versuche auf folgende Weise ausgeführt: Einige wenige Hefezellen wurden wie ge- wöhnlich in der flüssigen Nährgelatine gut vertheilt, und dann wurde von dieser Mischung eine ziemlich dünne Schicht (Figur 4 h) auf dem Deckglas (a) ausgebreitet, welches solchermassen an Böttchee's feuchte Kammer (c) befestigt wurde, dass die Gelatineschicht nach unten gekehrt war. In der Figur a i| I I , =n? bedeutet d die Wasserschicht, welche angebracht ist, um die Verdunstung zu verhindern. ~ I Wenn man Nachet's „Micro- 4. scopes renverses" anwendet, kann die von mir dazu con- struirte Kammer benutzt werden '. Das Deckglas, die Kammer, kurz alle die Apparate, welche benutzt wurden, waren im Voraus mittels einer Flamme gereinigt. Sobald die Gelatine steif geworden war, suchte ich ein Paar Zellen auf, welche ein kräftiges Aussehen hatten und deren Lage im Präparate der Entwicklung abgesonderter Colonien günstig war; ich merkte mir ihre Stellung und brachte dann die Kammer in einen Thermostaten bei ca. 25" C. an. Nach Verlauf einiger weniger Stunden war die Knospenbildung im Gange. Indem ich in kurzen Zwischenräumen das Präparat einer mikroskopischen Untersuchung unterwarf, konnte ich Schritt für Schritt der Entwicklung folgen und solchermassen sichere Auskunft erhalten, in wie weit eine jede der ') Hansen, Compte-rendu des traveaux du Laboratoire de Carlsberg 1881. I, 2. Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 203 Colonien, welche sich nun nach und nach entwickelten, aus einer oder mehreren Zellen stamme. Nach Verlauf von 24 Stunden konnte man die Vegetationsflecke mit blossen Augen unterscheiden ; sie hatten eine runde Form und waren hellgrau ; nach Verlauf von 36 Stunden waren sie so gross wie kleine Stecknadelknöpfe. In diesen späteren Stadien ist die Untersuchung sehr leicht, sie besteht nämlich nur darin, dass man nachsieht, ob sich andere Vegetationen, welche mit den zuerst be- obachteten verschmelzen können, in der Nähe der Colonien befinden. Da unsere Nährgelatine einen festen Boden bildet, in den die ausge- säeten Zellen eingegossen werden, so schadet es nicht, wenn sich mehrere dieser im Präparate befinden, vorausgesetzt, dass nur einige von ihnen so isolirt liegen, dass eine jede hinreichenden Platz hat, um ihre Colonie zu bilden, ohne dass eine Verschmelzung mit anderen ein- treten kann. Würde man eine Flüssigkeit für die Culturen anwenden, so würde dagegen ein Zusammenfliessen stattfinden ; man würde dann nur das Ziel durch Ansäen einer einzigen Zelle erreichen können, wo- durch die Aufgabe folglich weit schwieriger werden würde. Sollte sie überhaupt auf diesem Wege gelöst werden, dann würde man sich nicht darauf beschränken können , die gewöhnlichen feuchten Kammern zu benutzen, sondern man müsste eine Modification derselben anwenden. Auf dem Deckglase von Böttcher's Kammer (Figur 4) müsste man in solchem Falle ein Netzwerk einritzen, z. B. ein Quadrat, dessen Seite 4 mm lang ist, und dies müsste wieder in zahlreiche kleine Quadrate eingetheilt werden, die so gross sind, dass man eins von ihnen mittels des Objectivs, welches man benutzt, überblicken kann, um mit Bestimmt- heit die betreffenden Zellen unterscheiden zu können (Figur 5). Die Grösse des grossen Quadrats ist durch den Umstand bestimmt, dass ein sehr kleiner Tropfen, in den eine oder eventuell mehrere Zellen einge- mischt sind, innerhalb seines Umrisses angebracht werden soll. Man muss natürlicherweise dafür sorgen, dass der betreffende Tropfen nicht an irgend einer Stelle über die Grenzen des grossen Quadrats hervortritt; es würde dies nämlich auf dasselbe hinauskommen, als wollte man einen Tropfen auf einem gewöhnlichen, also nicht quadrirten Deckglas anbringen, wobei die Controlle folglich auf- &• hören würde. Ist der Tropfen applicirt, so darf er nicht zu stark gewölbt sein, um mit Sicherheit über Alles, was er ent- hält, einen Ueberblick zu haben. Die kleinen Quadrate sind eingeritzt, um Anhaltspunkte für die Zählung zu geben. Durch eine Reihe vor- ausgehender Proben müsste man endlich den Verdünnungsgrad finden. 204 Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2. welcher angewendet werden sollte, damit ein Tropfen Nährflüssigkeit von der erwähnten Grösse nur eine Zelle enthielte. Wie man sieht, ist das ganze Verfahren sehr umständlich, und denselben Zweck erreicht man schneller und leichter, wenn Gelatine angewendet wird. Wenn in der Gelatinecultur die Colonie, deren Ursprung aus einer Zelle man durch unmittelbare Beobachtung versichert ist, eine solche Entwicklung erreicht hat, dass man sie mit blossen Augen sehen kann, dann werden einige Zellen davon mittels eines vorher in der Flamme gereinigten Platindrahtes in einen Kolben mit Nährflüssigkeit schnell übergeführt um eine reichere Vermehrung zu veranlassen. Bei der Darstellung der Reincultur, deren Ausgangspunkt die Aussaat einer einzigen Zelle sein soll, ist es, wie oben erwähnt, stets die Verdünnungsmethode, welche angewendet wird. Nägeli beschreibt sein Verfahren folgendermassen*: „Zu diesem Zwecke muss eine pilz- führende Flüssigkeit, welche die gewollte Form in überwiegender Menge enthält, durch Wasser auf eine hinreichende Verdünnung gebracht wer- den. Das Verfahren wird am besten durch die Mittheilung eines be- stimmten Versuches deutlich werden. Aus faulem Harn, in welchem sich ausser Micrococcus auch Stäbchen (Bacterien) befanden, sollte ersterer rein erhalten werden. Ein Tropfen, welcher etwa 0-03 cc fasste und 500000 Pilze enthielt, wurde in 30 cc pilzfreies Wasser gegeben. Aus dieser tausendfach verdünnten Flüssigkeit wurde, nachdem sie durch Schütteln wohl gemischt war, abermals ein Tropfen in 30 cc Wasser eingetragen und somit eine millionenfache Verdünnung hergestellt, in welcher je der zweite Tropfen (von 0*03 cc) durchschnittlich einen Pilz enthalten musste. Von 10 pilzfreien Gläsern, von denen jedes mit einem Tropfen inficirt wurde, blieben vier ohne Vegetation, in einem bildeten sich Bacterien und in fünf die gewünschten Micrococcuszellen" Wie er seine Zählungen ausführte, wird nicht mitgetheilt. Ein ähnliches Verfahren wendete Buchner zur Darstellung der Reinculturen von Milzbrandbacillen an 2. Hierbei berechnete er zugleich, dass die Milz einer Maus, welche an Anthrax gestorben war, 7 '/o Mil- lionen derselben im Cubikmillimeter enthielt. Fitz beschreibt die Versuche, welche er anstellte, um Reinculturen zu erhalten, auf folgende Weise ^: „Man bestimmt in einer gewöhnlichen, noch unreinen Cultur mit Hülfe einer Zählkammer annähernd die Zahl der Spaltpilzzelleu, die in einem Tropfen enthalten sind, und verdünnt ') Nägeli, Untersuchungen über niedere Pilze, 1882, p. 13. 2) 1. c. p. 147. 3) Fitz, Berichte der deutschen ehem. Gesellschaft, 1882, p. 868. I, 2. Hansen: lieber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 205 dann einen Tropfen so stark mit sterilisirtem, destillirten Wasser, dass im Durchschnitt auf 5 bis 10 Tropfen der verdünnten, gut gemischten Flüssigkeit eine Spaltpilzzelle kommt. Man säet dann in eine Serie von ca. 50 mit Culturflüssigkeit beschickten und sterilisirteu Kölbchen je einen Tropfen aus und setzt sie alsdann in einen Thermostaten von 37 °. Von den 50 Kölbchen werden im Laufe der nächsten drei Wochen 5 bis 10 Kölbchen Pilzentwicklung zeigen". Er nimmt nun an, dass ein jeder dieser Kolben nur eine Zelle erhalten hat. Dies mag freilich wahr- scheinlich sein, aber bei genauer Prüfung zeigt es sich doch, dass diese Methode ganz zuverlässig nicht genannt werden kann. Derselbe Ein- wand gilt auch für Nägeli's und Bucm»EK's Culturen. Gleichzeitig mit den vorhergehenden Forschern verbesserte ich die Verdünmmgsmethode auf eine solche Art, dass ich durch dieselbe Rein- culturen für meine „Untersuchungen über die Physiologie und Morpho- logie der Alkoholgährungspilze" bekommen konnte '. In Pasteue's zwei- halsigen Kolben (Figur 6), in welchem Wasser durch Kochen sterilisirt und dann wieder abgekühlt worden war, brachte ich ein wenig von der Hefe, von welcher ich eine Reincultur zu erhalten wünschte. Bei vorberei- tenden Culturen hatte ich stets dafür gesorgt, dass die Cultur nicht nur aus jungen, kräftigen Zellen bestand, sondern auch, soweit es möglich war, dass Zellen der gewünschten Art die Ober- hand hatten. Durch ziemlich starkes Schütteln wurden die Zellen im Wasser gleichmässig vertheilt. Proben wurden dann herausgenommen, damit ich durch Zählung mit dem Hämatimeter bestimmen konnte, wie viele Zellen sich in 1 Cubik- centimeter der Wassermischung befanden. Hieraus wurde durch Berechnung be- stimmt, in welchem Maasse die Verdün- nung fortgesetzt werden durfte, um in 1 Cubikcentimeter der endlichen Wasser- mischung zuletzt z. B. 0-5 Zellen zu haben. Von einer Reihe Aussaaten, jede von 1 Cubikcentimeter sollte also nur jede zweite eine Hefezelle beherbergen. Um also diese Verdünnung mit hinreichender Genauigkeit und ohne in stärkerem Maasse einer ») Hansen , Compte - rendu des traveaux du Laboratoüre de Carlsberg 1881—83. 206 Hansen: lieber d. Zähleu mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2 von aussen kommeudeu Infection ausgesetzt zu sein, war der Gutta- perchaschlauch (6) auf dem kurzen, geraden Halse (a) des Kolbens in zwei Stücke getheilt, und zwischen diesen war eine passende Mess- röhre aus Glas eingeschoben, welche au beiden Enden mittels einer Klemmschraube geschlossen werden konnte. Dieser Kolben wurde auf gewöhnliche Weise schnell mit einem anderen mit sterilisirtem Wasser gefüllten in Verbindung gebracht und, nachdem dieser seine vorher be- rechnete Masse Infectionswasser empfangen hatte , behielt der letztge- nannte Kolben, Nr. 2, den Messapparat und wurde hierdurch iu Verbin- dung mit einem dritten Kolben gesetzt: Nachdem dieser inficirt worden war, wurde von ihm ein vierter auf ähnliche Art inficirt, ganz und gar nach der vorausgegangenen Berechnung. Als endlich der letzte Kolben fertig war, und eine Messröhre von 1 Cubikcentimeter an den Gutta- perchaschlauch befestigt war, wurde das genannte Maass des fertigen Infectionswassers in jeden von einer grösseren Anzahl Kolben mit sterili- sirter Würze übergeführt. W^ährend der beschriebenen Arbeit wurde dafür gesorgt, dass die Zellen durch Schütteln möglichst gleichmässig vertheilt wurden , und die Maasse wurden stets zu kleinen Theilen ge- nommen, durch wiederholtes Schütteln der Flüssigkeit unterbrochen; ferner wurden die betreffenden Kolben so schnell als möglich in Ver- bindung mit einander gesetzt und schnell wieder geschlossen, nachdem sie einen Augenblick geöffnet worden waren. Die Versuche, welche auf diese Art ausgeführt wurden, ergaben gute Resultate. Mängel haften jedoch auch dieser Methode an; namentlich ist es nicht sicher, ob die Anzahl Zellen, welche man im Voraus berechnet hat, sich wirklich im Kolben mit der fertigen Infectionsflüssigkeit befindet; es kann sogar vorkommen, dass nicht eine einzige Zelle hineingelangt ist, ferner auch, dass sich mehrere, als man gewünscht hatte, anfinden. Die Ursache hiervon muss man darin suchen, dass es sehr schwierig ist, eine gleich- massige Vertheiluug der Zellen in den starken Verdünnungen, womit man zuletzt zu arbeiten gezwungen ist, zu erlangen. Die Schwierig- keit tritt eben dann besonders stark hervor, wenn die Anzahl der Zellen sehr gering ist im Verhältniss zu der Wassermenge, in welcher sie sich befinden, und wenn nur kleine Maasse von Kolben zu Kolben überge- führt werden. Um die Verdünnungen zu umgehen, welche ausserdem viel Zeit erfor- dern, kann man mein p. 203 beschriebenes und abgebildetes Deckglas an- wenden. In einem Kolben mit sterilisirtem Wasser wird ein wenig von der zum Versuch bestimmten liefe gebracht, und, nachdem man die Zellen durch Schütteln gleichmässig vertheilt , wird hiervon mit einem dünnen Glag- I, 2. Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 207 Stabe oder mit einem passenden Platindraht ein kleiner Tropfen ent- nommen, welcher in das grosse Quadrat auf dem Deckglase übertragen Avird. Damit das Wasser nicht verdunstet und die Zellen eintrocknen, muss das Deckglas mit einer feuchten Kammer verbunden werden. (Siehe Figur 4). Es geht nicht an , dasselbe auf gewöhnliche Weise, wie oben erwähnt, auf ein Objectglas zu legen, denn der Tropfen würde alsdaim über die Grenzen hinausfliessen, womit die genaue Zählung un- möglich würde. Nachdem man die so eingerichtete Kammer auf den Mikroskoptisch gebracht hat, findet die Zählung Statt. Es ist das Sicherste, zwei Zählungen auszuführen, je eine von jedem Präparat; im Falle diese übereinstimmen, wird ein Tropfen, welcher demjenigen ähnlich ist, der zur Zählung diente, in einen Kolben übergeführt, welcher eine vorher abgewägte , bestimmte Menge sterilisirteu Wassers enthält. Die Infectionsflüssigkeit ist nun fertig , und man weiss jetzt , dass sie wenigstens sehr annäherungsweise die Anzahl Zellen enthält, die die Berechnung ergiebt. Die sicherste Zahl würde man erhalten, wenn das Deckglas selbst mit dem sich darauf befindlichen Tropfen in das Wasser übergeführt werden könnte. Zu diesem Zwecke müsste man statt des PASTEim'schen Kolben eine Flasche mit hinreichend weitem Halse an- wenden, damit das Deckglas in dem Wasser untersinken könnte. Mittels Kautschukstopfen mit Durchbohrungen und eingeschobenen Glasröhren könnte man dann die Flasche nach dem Princip des zweihalsigen Kolbens einrichten. Hat man seine Infectionsflüssigkeit ganz in Ordnung, so dass also wirklich die berechnete Anzahl Zellen sich in dem bekannten Cubik- inhalt Wasser befindet, z. B. wie oben angegeben, 0"5 Zellen in jedem Cubikcentimeter, und führt man dann mittels der Messröhre 1 Cubik- centimeter in jeden einer grösseren Anzahl Kolben mit passender Nähr- flüssigkeit über, so wird man dennoch sicherlich nie das Ideal erreichen, eine Infection gerade in jedem zweiten Kolben zu erhalten. Dies be- ruht wesentlich darauf, dass die Zellen der Infectionsflüssigkeit nicht so vollständig gleichmässig vertheilt werden können, als es erforderlich ist. Auch kann es natürlicherweise geschehen, dass einige der Zellen nicht hinreichende Lebenskraft haben, um neue Vegetationen zu begründen. Bei der Zählung wird man ebenfalls bisweilen im Zweifel sein, ob eine Zelle lebendig ist oder nicht, und ob man jede einzelne Zelle in einer Colonie mitzählen, oder ob man die ganze Colouie für eine einzige Zelle rechnen soll; das Letzte würde natürlicherweise das Richtigste sein, wenn alle Zellen zusammenhängend bleiben, bis sie in einen der Kolben mit Nährflüssigkeit übergeführt sind; wenn sie sich aber vorher trennen, wodurch sie also in den Stand gesetzt werden, jede für sich eine Vege- 208 Hansen: Ueber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. I, 2. tation zu begründen , so hat man durch jene Art des Zählens einen Fehler begangen. Die Erfahrung zeigt, kurz gesagt, dass wir, wie sehr wir uns auch anstrengen mögen, derartige Versuche nicht so mathema- tisch genau vor sich gehen lassen können, als es wünschenswerth sein dürfte. Unternimmt man Controllversuche mit zwei Arten, welche leicht von einander zu unterscheiden sind, so zeigt es sich wie bei der Gelatine- cultur, dass, wenn auch selten, Fälle eintreffen, wo beide Arten zusammen- gemischt worden sind. Es fragt sich dann, auf welche Weise man nun eine solche Vegetation, wie sie sich als sehr störende Ausnahmen wirklich einstellen, vermeiden kann, und durch welche Kennzeichen man die Kolben, die nur je eine Zelle empfangen hatten, von denen mit mehreren Zellen unterscheiden kann. Ich fand hierfür einen wichtigen Anhalts- punkt in der Anzahl der gebildeten Hefeflecke. Wenn nämlich n lebens- kräftige Hefezellen in einen Kolben mit passender Nährflüssigkeit (also z. B. Würze) übertragen werden, und der Kolben dann geschüttelt wird um die Zellen zu zertheilen , so werden sie sich , nachdem die Flüssig- keit zur Ruhe gekommen ist, auf dem Boden lagern und hier n Hefe- flecke bilden. Wenn diese eine bestimmte Grösse erreicht haben, können sie mit Leichtigkeit mit dem blossen Auge beobachtet und also gezählt werden. Die Kolben, in denen sich nur ein Hefeufleck entwickelt, haben nur eine Zelle empfangen. Hierdurch ist die Verdünnungsmethode auf diesem Gebiete einen Schritt weiter gebracht als früher. Ob sich auch ein ähnlicher Anhalts- punkt bezüglich der Bacterien wird finden lassen, weiss ich nicht. In dem Werke „Das Mikroskop" von Nägeli und Schwendener vom Jahre 1877 findet sich folgende Aeusserung p. 644: „Spaltpilze gestatten mit Sicherheit keine Reincultur, theils wegen ihrer ausser- ordentlichen Kleinheit, theils wegen ihrer allgemeinen Verbreitung im Wasser und in der Luft". Vergleicht man hiermit den Standpunkt, zu welchem die Forschung der Jetztzeit gelangt ist, so muss man aner- kennen, dass der Fortschritt in den verflossenen sieben Jahren bedeu- tend gewesen ist, obgleich noch viel zu wünschen übrig bleibt. * * * Eine neue Anwendung von Hayem's und Nachet's Zählapparat machte Alfked Jöegensen in einer technischen Untersuclnmg * zur Entscheidung der Frage, ob eine Mehlprobe nur Roggenmehl enthielte, oder ob sich zugleich auch Weizenmehl darin befände. Es wurde hier- *) JöRGENSEN in Ny Pharmaceut. Tid. Kj0benhavn -1881, Nr. 23. I, 2. Hansen: lieber d. Zählen mikrosk. Gegenstände in d. Botanik. 209 bei das Hauptg-ewiclit auf eine üntersiichimg der Stärkemehlköruer ge- legt. Dieselben haben das gleiche Aussehen bei beiden Arten Mehl. Das Roggenmehl enthält aber einen gewissen Bruchtheil von Körnern, welche grösser als die grössten im Weizenmehl sind, diese kann man also durch eine einfache mikroskopische Untersuchung erkennen ; aber die ganze übrige Masse ist in beiden Mehlsorten von ganz gleicher Grösse. Die grössten Stärkekörner im Roggenmehl sind etwa 0*05 mm lang, eine Grösse, welche bedeutend über der Maximalgrenze für die Stärke- mehlkörner des Weizens (0-0389 mm) liegt. Es frug sich nun, ob die Maximalkörner sich in einem einigermassen constanten Verhältnisse zu den anderen Körnern in Proben unverfälschten Roggenmehles befänden. Zur Beantwortung wurden Messungen und Zählungen mittels eines Netz- mikrometers und der oft genannten Zählkammer unternommen. Als Resultat ergab sieh, dass ungefähr dieselbe Anzalil Maximalkörner sich in gleich grossen Volumina Mehl befand. Ein Zusatz von Weizenmehl zu Roggeumehl wird also ein entsprechendes II erabgehen in der Anzahl der Maximalkörner der Mischung hervorrufen, der Zusatz wird durch die Zählmethode nachgewiesen werden können. Kjaekskou hat später diese Versuche wiederholt '. Um Mehl- partikel geschlemmt zu erhalten, empfiehlt er eine Zuckerauflösung von 125 g Zucker in 45 cc Wasser. Es zeigte sich, dass die Mittelzahl von 40 Zählungen der Maximalköruer in verschiedenen gleich grossen Cubik- inhalten in dem reinen Roggenmehl ungefähr doppelt so gross war als in einem Gemisch , wovon die eine Hälfte aus Roggenmehl und die andere aus Weizenmehl bestand. Mittels des Zähl- und Messapparates kann man also Auskunft über die Quantität einer eventuellen Verfälschung des Roggenmehles erhalten. Welcher Art aber die Verfälschung ist, muss natürlicherweise auf andere Weise eruirt werden. — Es ist nicht unwahrscheinlich, dass der Zählapparat in mehreren Fällen mit Vortheil bei physiologischen Studien der höheren F^tiauzen angewandt werden kann. Obenstehende Untersuchungen von Jöegensen und Kjaeeskou deuten daraufhin, derselbe Gedanke drängt sich gleich- falls unwillkürlich auf beim Lesen von Bohr's „Studier over Maelk". Kopenhagen 1880. Es wird hier nämlich eine Methode angegeben, um durch Messung und Zählung der P^ettkugeln in der Milch anuährungs- weise das Volumen des Fettes in dieser zu bestimmen ; und dass man ') Kjaeeskou in Meddelelser fra den botan. Forening i Kj0benhavn. 1883, Nr. 3. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 2. 14 210 Dippel: D. Anwend. d. polaris. Lichtes in d. Pfianzenbistologie. I, 2. hierin ein wertlivolles Hülfsmittel bei Untersuchungen über die Func- tion der Milchdrüse hat, ist unzweifelhaft. Wir haben also gesehen, welche sehr grosse Rolle die Zählung mikroskopischer Gegenstände in der Botanik in den letzten Jahren ge- spielt hat, wie namentlich Hayem's und Nachet's schöner Apparat hier schnell eine ausgedehnte Anwendung gefunden hat. Die Anwendung' des polarisirten Lichtes in der Pflanzenliistolog'ie. Von Prof. Dr. Leopold Dippel. in Unrmstadt. Hierzu 5 Holzschnitte. Die Beobachtung in polarisirtem Lichte hat in der Pflanzenhistolo- gie bisher mit wenigen Ausnahmen eine nicht sehr ausgedehnte An- wendung gefunden, obwohl dieselbe zur Entscheidung vieler Fragen von hoher Bedeutung ist. Die Ursache dieser Thatsache mag einestheils darauf beruhen, dass man noch keineswegs darüber im Klaren ist, worin die in der Pflanzenzelle, namentlich an der Zellwand, sowie an gewissen Inhaltsbestandtheilen bei der gedachten Beobachtungsweise auftretenden Erscheinungen ihren Grund haben, ob sie durch moleculare Verschiedenheit in dem Aufbau der organischen Substanz, oder ob sie durch Spannungsverhältnisse hervorgerufen seien. Andererseits mag sie darin begründet sein, dass gewisse Structurverhältnisse u. s. w., über welche die Beobachtung in polarisirtem Lichte Aufscliluss zu geben vermag, auch auf andere Weise, wie durch chemische Reactionen, Färbungen u, dgl. ermittelt werden können und dass, wenn man einen Erfolg erzielen will, der keinen Zweifel aufkommen lassen soll, gerade für diese Beobachtungsmethode in allen den Fällen, wo es sich um feine Structurverhältnisse handelt, die allergelungensten Präparate er- fordert werden , während an ungenügenden Präparaten wenig oder nichts zu sehen ist. Da aber auf der einen Seite die Beobachtung in polarisirtem Lichte die auf andere Weise gewonnenen Resultate viel- fach zu erhärten im Stande ist, während sie auf der anderen Seite unter I, 2. Diiipel: I). Anwead. d. polaris. Lichtes in d. Pflanzenhistologie. 211 den entsprechendeu Vorbedingungen Thatsaclien zu Tage zu fördern ver- mag, welche anders ganz und gar nicht mit so voller Sicherheit festzu- stellen sind, wie durch sie, so sollte dieselbe nirgends ausser Acht ge- lassen werden, wo die Verhältnisse auf deren Anwendung hinweisen. Diese Zeilen sollen dazu dienen, einer Beobachtungsmethode, welche mir bei meinen ausgedehnten Untersuchungen über die feinere Structur der Zellwand manchen Aufschluss gewährt hat, die verdiente Beach- tung zuzuwenden, und will ich zu dem Ende hier einige Thatsaclien zur Besprechung bringen, zu deren sicheren Feststellung dieselbe wohl das gewichtigste Hilfsmittel bietet. Beobachtet man in gewöhnlichem Lichte einen äusserst dünneu, vollkommen senkrecht zur Längsachse der Zellen geführten Querschnitt durch ein Gewebe mit verdickten Zell- wänden, z. B. durch das Holz eines Laub- oder Nadelbaumes, so erblickt man in der Regel das bekannte Netzwerk, welches ich als das Netzwerk der primären Wände bezeichne, während ihm Hofmeistee, Sachs und Andere den Namen „Mittellamelle" beigelegt haben, in einer Weise, die uns dasselbe als ein den Nachbarzellen ge- meinschaftliches Gebilde auffassen lässt, in welchem ausser dem bekannten Zwickel in den Ecken, wo drei oder vier Zellen zusammenstossen , eine weitere Differen- zirung nicht vorhanden ist (Figur 1). Untersucht man nun denselben Querschnitt mittels polarisirten Lichtes und zwar im dunkeln Sehfelde (bei gekreuzten Nicols), so tritt eine wesentliche Aendernng des Aussehens der sogenannten Mittellamelle auf. Das ganze, früher homogene Netz- werk erscheint, während die Primär- wandungen in hellem Weiss leuchten (von dem Verhalten der anderen Wandtheile kann ja hier ganz abgesehen werden) von den Zwickeln aus von einer feinen schwarzen Linie durchzogen, also in drei Streifen zerlegt, von denen je ein leuchtender je einer der Nachbarzellen angehört, der nicht leuchtende gemeinschaftlich erscheint (Figur 2). Die Beobachtung im polarisirten Licht sagt uns also hier mit aller Entschiedenheit: die 14* 212 Bippel: D. Anwend. d. polaris. Liclites in d. Pflanzenhistologie. I, 2. Mittellamelle ist nicht einfach, sondern sie besteht aus drei Platten, von denen sich die mittleren als einfach brechend, die beiden seitlichen als entschieden doppelbrechend erweisen, von denen also die eine ganz anderen molecularen Aufbau (und wohl auch andere chemische Con- stitution) zeigt, als die beiden anderen. Es ist wahr, es giebt auch noch andere Mittel, um die Zusammen- setzung der „Mittellamelle" zu erkennen; aber wie leicht ist man ge- neigt, bei einiger Voreingenommenheit den Erscheinungen, auf denen sie beruhen, eine andere Deutung zu geben oder auf ungenauer Beob- achtung beruhenden Thatsachen eine Bedeutung beizulegen, die ihnen nicht zukommt. Dass zwei je verschiedene Zellen angehend Primärwände in die Bildung der Mittellamelle eingehen , erkennt man ohne Weiteres in solchen Fällen, wo bei dem natürlichen Objecto die mittlere Platte durch irgendwelche Verhältnisse gelöst wurde (in manchen älteren Couiferenhölzern u. s. w.), und wird dies ferner durch die Resultate der Maceration dargethau. Aber hat mau nicht die Trennung im erstereu Fall auf die Wirkung von Spaunungsverhältnissen zurückzuführen ge- sucht, und hat man nicht das Zerfallen der Gewebe bei der Maceration auf die Lösung der ganzen „Mittellamelle", d. h. der drei dieselben zu- sammensetzenden Platten zurückgeführt ? Ferner lässt sich die mittlere Platte als in ihrem chemischen Ver- halten ganz unzweifelhaft von den Zellwäuden verschieden nachweisen und zwar sowohl durch die gebräuchlichen Reagentien auf Zellstoff, als durch Tiuction (beide nach entsprechender Vorbehandlung, wie ich in meinen betreffenden Arbeiten auseinandergesetzt habe). Aber hat mau nicht versucht, diese Thatsachen an der Hand von ein Paar (oft von recht jugendlichen Händen ausgeführten) Reactionen, die meist erst nach verschiedentlicheu Quälereien der betreffenden Präparate mittels der verschiedensten Mittel, deren Einwirkung auf die Molecularver- hältnisse der betreffenden Zellwände u. dgi. nicht einmal eine Controle gestattet, hervortreten, und bei denen der Eine eine vorübergehende schwache, der Andere eine zweifelhafte Blaufärbung entdeckt haben will, zu entkräften und damit die Behauptung, dass die mittlere Platte nicht einen stark verholzten Theil der ursprünglich aus Zellstoff be- stehenden Wand bilden könne, zu widerlegen? Dem gegenüber führt in beiden Fällen die Beobachtung im polari- sirten Lichte — ich wiederhole : aber immer nur an vorzüglich gelungenen Präparaten — zu unanfechtbaren Resultaten. Im ersteren weist sie in allen Stadien der Einwirkung des Macerationsmittels nach, dass nur die I, 2. Dippel: D. Anwenil. d. polaris. Lichtes in d. Pflanzenhistologie. 213 zuerst durch die Polarisation kenntlich gemachte mittlere Platte der Lösung anheimfällt, für andere thut sie dar, dass die Verholzung der Zellstoffwände die Doppelbrechung weder verringert noch aufhebt, indem dieselben von dem nicht mit Keagentien behandelten Schnitte an durch alle Stadien der Vorbehandlung bis zur völligen Entfernung der Holzsubstanz in den Primärwänden wie in den Verdickungsschichten den gleichen Grad der Stärke behält. Zugleich giebt sie darüber Gewissheit, dass die bei der ersten Beobachtung als einfach brechend erkannte mittlere Platte auch bis dahin einfach brechend bleibt, wo sie an dem Punkte angekommen ist, welcher der völligen Lösung vorausgeht und wo sie durch Chlorzinkjodlösung nicht mehr gelb ge- färbt wird, wo sich also der Zellstoff, wenn er vorhanden wäre, durch Doppelbrechung, und wenn auch nur durch schwache, zu erkennen geben müsste. Ist nun dadurch, dass die mittlere Platte der „Mittellamelle" im fertigen Zustande unter allen Verhältnissen als einfachbrechender Zell- wandtheil erscheint, dargethan, dass sie von den Primärwänden wie von den Verdickungsschichten in ihrem molecularen Aufbau verschieden ist und auch in ihren letzten Resten keinen Zellstoff enthält, so bleibt, da dieselbe vermöge ihrer Lage ausserhalb der Primärwand unzweifelhaft als vor dieser entstandener Bestandtheil der Zdlwand zu betrachten ist, noch die Frage zu entscheiden, welcher Art ist denn das erste feste Aus- scheidungsproduct des lebendigen Zellleibes, d, h. die erste Wandbil- dung, dem sie ihre Entstehung verdankt? Auch hier giebt uns die Be- obachtung im polarisirten Lichte wieder unzweifelhaften Aufschluss, wenn wir dieselbe auf die in der Entwicklung begriffene Zellwand an- wenden. Betrachten wir im dunkeln Sehfelde einen Querschnitt durch die Cambiumregion — am besten eines Nadelholzes — so zeigt sich folgen- des Verhalten: Je nachdem das Holz der Zeit der langsameren oder rascheren Zellvermehrung entstammt, erscheinen die Wandungen einer einzigen (Cambiummutterzelle) oder mehrerer vom Holze zum Baste sich folgender Zellenreihen (die ersten Tochterzellgenerationen) dunkler als der Grund des Sehfeldes, während die nächsten nach Holz und Bast gelegenen Zellreihen von denjenigen mit noch verhältnissmässig dünneren Wänden an bis zu denen mit mehr oder minder verdickten Wänden das gleiche Verhalten erkennen lassen, wie es weiter oben geschildert wurde: da- bei lässt sich der Uebergang der das leuchtende Netzwerk der Primär- wände durchziehenden dunkeln Streifen mit den dunkeln Wänden der 214 Dippel: D. Anwend. cl. polaris. Lichtes in d. Pflanzenbistologie. I. 2. cambialen Zellen genau verfolgen. Diese Thatsachen besagen aber : Vor der aus Zellstoff gebildeten, sich sofort durch ihre Doppelbrechung kund gebenden Primärwand, wird — und zwar für je eine in der Cambium- mutterzelle entstandene Tochterzelle — eine einfach brechende, also nicht aus Zellstoff bestehende Umhüllung aus dem Protoplasma ausge- schieden, welche bei dem Uebergang der betreffenden cambialen Tochter- zellen in Holz- oder Bastzellen verbleibt und dabei zur mittleren Platte der „Mittellamelle" wird. Damit ist die Sache entschieden und ein fester Boden gewonnen für die Deutung, welche man der durch die Zell- stoffreagentien sowie durch Färbungen mittels Carmin und Anilin er- haltenen Bilder — wie ich sie am anderen Orte geschildert habe, und deren Richtigkeit ich auf Grund meiner ausgedehnten, sorgfältigen Untersuchung festhalten muss — zu geben hat: die Mittellamelle ist aus den beiden Primärwänden der Nachbarzelle und der ihnen gemein- schaftlichen Cambialwand zusammengesetzt. Ueber die Betheiligung der Wandschichten an der Bildung desPoren- canales und des Verschlusses der Poren herrschen bekanntlich verschiedene Ansichten. Mit H. v. Mohl, Schleiden u. A, nimmt ein Theil der neue- ren Botaniker an, dass der Verschluss durch die Primärwände gebildet werde und sämmtliche secundären Wandschichten bis zu dem Poren- canale verlaufen, während Theodok Haktig die Ansicht aufstellte, dass es die innerste Zellwandschicht (das Innenhäutchen neuerer, die tertiäre Membran älterer Autoren) sei, welche sich in die Porencanäle hineinziehe und von beiden Nachbarzellen her zusam- mentreffend den Verschluss bilde (Figur 3) , welche Ansicht ich nach einer Reihe eingehender Versuche be- stätigen konnte. Die Thatsache, wie sie in der bei- ^*^^^'^~z^ stehenden Figur dargestellt ist, wird auch in neuester rr~~- f^ --^1 2gj^ ^^^ Strasbukger zugegeben, aber derselben eine andere Deutung gegeben. Nach diesem Forscher soll die Innenschicht eine spätere Differenzirung (?) vor- stellen, welche in Folge der Berührung mit dem Zell- inhalte entstehe, und es soll die stärker lichtbrechende Schicht, welche nur scheinbar von der Innenfläche aus 3. ununterbrochen sich in den Poreucanal hineinziehe, eine eben solche Differenzirung der secundären Verdickung in ihren an den Porencanal grenzenden Stellen vorstellen, während der Verschluss des Porus aus den Primärwänden gebildet werde. Da nun die sä mm t liehen Schichten der Zellwand ein Elasticitäts- ellipsoid besitzen, welches auf dem Quer- und Längsschnitt eine Durch- 1,2. Dippel: D. Verwend. d. polaris. Lichtes in d. Pflanzenhistologie. 215 ® Schnittsellipse ergiebt, bei der die kleinste Achse radial oder senkrecht zur Schichtung, die grössere aber (und zwar auf dem Querschnitte die mittlere, auf dem Längsschnitte die grösste) mit der Schichtung ver- läuft, so muss die Beobachtung im polarisirten Licht an der Hand dieser Thatsache den erforderlichen, sichersten Aufschluss über den Verlauf der Schichten geben. Ist der Verlauf der Innenschicht derart, wie von Haktig und mir behauptet, dann muss die Stellung des in die Schnitt- ebene fallenden Elasticitätsellipsoiddurchschnittes wechseln und zwar in der Weise, wie es in der Figur 4 schematisch dargestellt ist. Ent- spricht dagegen die wirkliche Structur der Ansicht Steasburgek's, dann kann ein solcher Wechsel nicht statthaben und wird die Stellung der Ellipsoiddurchschnitte in den in Frage kommenden Wandtheilen die in Figur 5 schematisch dargestellte sein müssen. Beobachten wir nun in dem mittels eines Gypsplättchens von Roth I 0. gefärbten Sehfelde einen ausreichend dünnen Schnitt (der Schnitt muss so dünn sein, dass imter der vorausgesetzten Versuchs- anordnung die Additionsfarbe nur auf Violett steigt, die Subtractions- farbe nur auf Orange herabgeht) durch das Sameneiweiss der Plytelephas macrocarpa (dieses Object ist wegen der tiefen Poren- canäle eines) Born, Ueber die Nasenliöhlen imd den Thränennasengang der Amphi- bien (Morpbol. Jahrb. Bd. II, 1877, p. 577). -) Strasser, Zur Entwicklung der Extremitätenknorpel bei Salamandern und Tritonen Q. c. Bd. V, 1879, p. 242). I, 2. Blochmann: üeber Einbettungsmethoden. 229 eine von Giesbkecht • und Bütschli ^ fast gleichzeitig aufgefundene Methode beseitigt, bei welcher als Lösungsmittel für Paraffin Chloroform benutzt wird. Man erhält im Handel Paraffinsorten von sehr verschiedenem Schmelzpunkt ungefähr von 35 bis 54" C, was von dem grösseren oder geringerem Gehalt an flüchtigen Substanzen abhängt. Am geeignetsten für unsere Zwecke sind zwei Sorten, die bei 45" respective 54" C. schmelzen. Wo es angeht, ist die Einbettung in das härtere, reine Paraffin (bei 54" schmelzbar) vorzuziehen, da sich mit demselben die feinsten Schnitte erzielen lassen. Das Einbetten geschieht nun folgendermassen: Das gut ent- wässerte Object wird aus Alkohol in reines Chloroform übergeführt und so lange darin gelassen, bis der Alkohol durch Chloroform ver- drängt ist, was ziemlich rasch geht; daraufbringt man das Object in ein flaches Schälchen mit etwas Chloroform, dem man so viel feinge- schnittenes Paraffin zugefügt hat, dass dasselbe nach Verdunsten des Choroforms das Object noch bedeckt. Dieses Schälchen mit dem Object wird nun einer Temperatur ausgesetzt, welche dem Schmelzpunkt der verwandten Paraffinsorte entspricht. Es geschieht dies am besten in einem mit Gasregulator versehenen Wärmkasten ^. Das Paraffin schmilzt sehr rasch und das Object befindet sich jetzt in einer in Folge der 1) GiESBRECHT, Zur Schneidctechnik (Zool. Anz. Bd. IV, 1881, p. 483). ■2) Bütschli, Modification der Paraffineinbettung für mikroskoi)isclie Zwecke (Biol. Centralbl. Bd. I, 1881, p. 591). 3) KossMANN, Zur Mikrotomtechnik (Zool. Anz. Bd. VI 1883, p. 19). — Im hiesigen Zoologischen Institut verwenden wir Wärmkasten aus Weissblech mit doppelten Wänden, deren Zwischenraum mit Wasser ausgefüllt ist. Es wird so eine möglichst gleichmässige Temperatur erzielt. Unter dem Kasten brennt eine kleine Stichflamme. Der Gaszufluss wird durch einen Reichert- schen Regulator regulirt, der viel compendiöser ist, als der grosse Kemp- BüNSEN'sche Regulator und eine mindestens ebenso feine Regulirung zulässt. Der Regulator sitzt in dem den Zwischenraum der Doppelwand ausfüllenden Wasser, was den Vorzug hat, dass nicht gleich bei jedesmaligem Oeffnen des Kastens eine bedeutende Vermehrung des Gaszuflusses stattfindet. Das Thermo- meter sitzt dagegen natürlich im Luftraum. Das Innere des Kastens wird durch zwei Glastafeln in drei Fächer zerlegt. Die die Vorderwand bildende Glasplatte lässt sich in einer Blechfassung einfach in die Höhe ziehen ; die Blech- fassung selbst jedoch ist nach Art einer Thür in einem Charnier beweglich. Die Maasse eines für alle Zwecke ausreichenden Kastens sind : Länge 25 cm, Höhe 23 cm, Tiefe 16 cm. Der Kasten findet nicht nur beim Einbetten, sondern auch beim Anschmelzen von Serienschnitten ausgiebige Verwen- dung. 230 Blochmann: Ueber Einbettungsmethoden. I, 2. Verdunstung des Chloroforms immer concentrirter werdenden Lösung von Paraffin in Chloroform und schliesslich, nachdem das letztere voll- ständig verdunstet ist, in geschmolzenem Paraffin. Durch diese ganz allmählich vorsichgehende Ueberfiihrung des Objects in geschmolzenes Paraffin gelingt es, dasselbe aufs vollständigste mit dem Einbettungs- mittel zu durchtränken und selbst die grössten Hohlräume auszufüllen. Das Durchdringungsvermögen der Lösung von Paraffin in Chloroform ist sehr gross, so dass sie z. B. durch ziemlich resistente Chitinhäute mit Leichtigkeit eindringt. Sehr wesentlich ist, dass alles Chloroform verdunstet ist. Man kann sich leicht davon überzeugen, ob dies geschehen ist oder nicht, wenn man einen erhitzten Schnittfischer oder Draht in das Paraffin hält; es dürfen keine Bläschen mehr aufsteigen. Nach dem Verdunsten des Chloroforms kann man das Paraffin in dem Schälchen einfach erkalten lassen, nachdem man dem Object mit- tels einer heissen Nadel die gewünschte Lage gegeben hat. Nach dem Erkalten schneidet man das Object mit dem umgebenden Paraffin her- aus und schmilzt dasselbe auf ein grösseres Paraffinklötzchen auf, um es gut im Mikrotom einspannen zu können. Bei grösseren Objecten empfiehlt es sich mehr die Einbettung in Kästchen vorzunehmen. Man kann dazu entweder zerlegbare Metall- kästchen oder solche aus dickem Stanniol oder von Papier anwenden. Die letzteren sind nach meinen Erfahrungen vorzuziehen schon wegen der Wohlfeilheit, — ein sehr geeignetes Material zu ihrer Herstellung sind alte Correspondenzkarten. — Man stellt solche Kästchen nach nebenstehendem Schema (Figur 2) her, indem man zuerst das Papier in den Linien a a' und hb' dann c c' und d d' nach der gleichen Seite bricht, dann legt man in jeder Ecke einen Bruch ÄÄ', BB; CC\ DD' an, in- dem man Äc auf Äa festhält und bricht, jedoch so, dass der Bruch nicht auf den Boden AB CD übergeht. Danach stellt man die vier Seiten des Kästchens auf und schlägt die an den kurzen Seiten überstehenden Theile hinter diese um und knickt nun schliesslich den über den Rand des Kästchens emporstehenden Theil der kurzen Seite stark gegen den Boden zu um. In dieser Art an- gefertigte Kästchen lassen sich nach der Einbettung leicht auseinander- C C D B' c d' D' 2. I, 2. Blochmann: üeber Einbettiingsmethoden. 231 nehmen ; sie halten gut 8 bis 10 Einbettungen aus und sind nach Be- lieben leicht herzustellen. In ein solches Kästchen giesst man nun auf den Boden etwas ge- schmolzenes Paraffin und lässt es erstarren ; es darf jedoch nicht zu fest werden, weil sonst das darauf gegossene Paraffin sich nicht mehr ordentlich mit ihm verbindet. Auf das eben erstarrte Paraffin legt man das Object aus dem geschmolzenen Paraffin, giesst das Kästchen voll und weist dem Object mit einer heissen Nadel seine definitive Lage an. Finden sich nach dem Erkalten in der Umgebung des Objects noch Luftbläschen, was sich durch weisses Aussehen des Paraffins zeigt, so lässt sich dies leicht corrigiren, indem man in dem Paraffin ringsum das Object einen heissen Draht führt. Dadurch werden nicht nur Luft- bläschen entfernt , sondern das Paraffin erlangt auch eine für das Schneiden ausgezeichnete homogene Beschaffenheit. Ueber das Einbetten sehr kleiner Gegenstände lassen sich keine allgemeinen Regeln geben. Dinge, die sich unter der Lupe noch orien- tiren lassen, bringe ich in einem Schälchen mit flachem Boden in den Wärmekasten ; ist das Chloroform verdunstet, so kann man unter der Lupe mit einer heissen Nadel das Object in die gewünschte Lage bringen und nach dem Erkalten herausschneiden und aufschmelzen, wie schon oben angegeben wurde. Man kann sich durch Mischen verschiedener Paraffinsorten Ein- bettungsmassen herstellen, die bei bestimmten Temperaturen schmelzen ; denselben Effect kann man durch Zusatz von Vaseline, Ceresin ', Talg oder dergleichen erzielen. Die Schnitte von in Paraffin eingebetteten Objecten werden mit trockenem Messer hergestellt, bei hartem Paraffin wird dasselbe mit Vortheil quer gestellt, nur muss man das Paraffinstück dann hinten scharfkantig zuschneiden, um ein leichtes Lösen der Schnitte vom Messer zu erzielen. ' Das Rollen der Schnitte, welches übrigens merkwürdiger Weise manchmal gar nicht auftritt, wird entweder durch einen Schnittstrecker oder durch eine gekrümmte Nadel verhindert. Beim Auflegen der Schnitte ist es vortheilhaft, sich irgend einer der in neuerer Zeit angegebenen Methoden zum Festkleben der Schnitte zu bedienen. Nothwendig wird dies, wenn es sich um Herstellung von ') Schulgin, Zur Techmk der Histologie. (Zeel. Anz. Bd. VI, 1883, p. 21). — Vaseline wurde auch schon von P. Mayer empfohlen. (Mitth. d. Zool. Stat, zu Neapel Bd. II p. 26). 232 Blochmann: Ueber Einbettungsmethoden. I, 2. Schnittserien handelt, oder wenn man die Schnitte nachträglich noch färben will. Die Hauptvortheile der Paraffiueinbettimg nach der geschilderten Methode sind vollständiges Durchdringen des Objects, Ausfüllung aller Hohlräume, ausgezeichneter Härtegrad — die dünnsten Schnitte sind von in Paraffin eingebetteten Objecten zu erhalten — unbegrenzte Halt- barkeit eingeschmolzener Objecto bei trockener Aufbewahrung. Als Nachtheile sind zu bezeichnen die Undurchsichtigkeit der Masse und die ziemlich bedeutende Erhitzung, der die Objecte ausgesetzt werden, wodurch dieselben manchmal so hart werden, dass sich keine hinreichend feine und gleichmässige Schnitte mehr erzielen lassen ; auch darf man wohl annehmen, dass durch das Auskrystallisiren des Paraffins beim Erkalten feinste Structurelemente verändert werden können. Ein anderes Einbettungsmittel, nämlich Transparentseife, benutzt man nach einer von Flemming ' angegebenen Methode und später zeigte Kadyi^, wie man aus gewöhnlicher Seife eine transparente, zum Ein- betten geeignete Masse herstellen kann. Nach Flemming löst man rohe (d. h. glycerinfreie) Transparent- seife in Ya bis '/g Volumen gewöhnlichen Spiritus in der Wärme auf und filtrirt; das Object wird aus Alkohol in diese noch warme Masse gebracht und, nachdem es von derselben durchdrungen ist, in einem Papierkästchen eingebettet. Nach dem Erstarren der Masse nimmt man das eingebettete Präparat aus dem Kästchen und lässt es einen bis zwei Tage trocknen. Die eintretende geringe Schrumpfung ist sehr gleich- massig und schadet nichts. Der Hauptvortheil ist, dass mau das Object vollständig übersehen kann. Man schneidet mit trockenem Messer, löst die Seife in Wasser auf und schliesst das Präparat in Glycerin ein. Nach Kadyi stellt man aus jeder Natronseife (am besten eignet sich sogen. Wachskernseife oder Stearinseife) auf folgende Weise eine pellucide Masse dar: Man löst 25 g dieser Seife in 100 cc 96procen- tigem Alkohol über dem Wasserbade auf und setzt vorsichtig so lange Wasser zu, bis einige auf ein Glas gebrachte Tropfeu der Masse beim Erstarren nicht mehr weiss werden, sondern durchsichtig bleiben. In diese Masse werden die Objecte wie oben eingebettet. Kadyi räth, das Messer und Object mit 96procentigem Alkohol zu benetzen und die Seife mit solchem Alkohol aus den Schnitten auszuwaschen, am besten *) Flemming, Eine Einbettungsmethode. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. V, 1875, p. 123). 2) Kadyi, Seife als Einbettungsmasse beim Anfertigen mikroskopischer Schnitte. (Zool. Anz. Bd. II, 1879, p. 476). I, 2. Bloch mann: üeber Einbettungsmcthoden. 233 wiederholt. Die Schnitte können nachträglich gefärbt werden. Man kann, um Massen von verschiedener Consistenz zu erhalten, den Seifen- gehalt der Lösung zwischen 10 bis 4 Procent variiren. Gleiche Theile Seife und Alkohol geben eine langsamer erstarrende, derbere Masse, die sich besonders zum Einbetten chitinhaltiger Objecte eignet (Weisker). Ueber beide Arten der Seifeneinbettung stehen mir keine eigenen Erfahrungen zu Gebote, doch scheinen sie im Allgemeinen nicht häufig benutzt zu werden. Aus Dem, was jedesmal bei den einzelnen Einbettungsmassen, über ihre Vortheile und Nachtheile gesagt wurde, geht hervor, dass wir zur Zeit noch keine Uuiversaleinbettungsmasse besitzen, sondern dass den Objecten entsprechend, bald das eine, bald das andere Verfahren ge- wählt werden muss. Eine Einbettungsmasse, welche bei verhältnissmässig niederem Schmelzpunkt die Objecte leicht und vollständig durchdringt und beim Erstarren zu einer pellucideu, möglichst wenig krystallinischen Masse ungefähr von der Härte des reinen Paraffins würde, dürfte wohl den meisten Anforderungen entsprechen. Vielleicht gelingt es noch, eine solche aufzufinden. Zum Schluss möchte ich noch mit wenigen Worten ein Verfahren er- wähnen, welches von v. Koch ' speciell für die Untersuchung von Corallen erdacht wurde, das aber auch bei anderen Thieren z. B. bei Echino- dermen vielleicht noch mit Vortheil Verwendung finden dürfte. Um also Schnitte derartiger Objecte ohne vorhergehendes Entkalken herzu- stellen, verfährt man folgenderraaassen. Man legt das gut entwässerte Object in eine dünne Lösung von Copalharz in Chloroform und lässt das Chloroform allmählich verdampfen z. B. im Wärmekasten oder, wie v. Koch, auf einer durch ein Nachtlicht erwärmten Thonplatte. Wenn die Masse so dick geworden ist, dass sie beim Erstarren spröde wer- dende Fäden zieht, nimmt man das Object heraus und legt es zum weiteren Austrocknen auf die Thonplatte. Ist es genügend hart ge- worden, so schneidet man dünne Scheiben davon mit der Laubsäge ab, die man mit Canadabalsam auf einen Objectträger aufkittet und bis zur gewünschten Feinheit schleift. Für gewöhnlich sind die Objecte vor- her zu färben, nach Auswaschen des Harzes lassen sich jedoch auch die Schnitte noch nachträglich färben. ») V. Koch, Ueber die Herstellung dünner Schliffe von solchen Objecten, welche aus Theilen von sehr verschiedener Consistenz zusammengesetzt sind. (Zool. Anz. Bd. I, 1878, p. 36). 234 V. Höhnel: Methode z. raschen Herst, v. brauchb. Schliffpräp. 1,2. lieber eine Methode zur raschen Herstellung^ von brauchbaren Schliffpräparaten von harten organisirten Objecten. Von Dr. Franz Ton Höhnel in Wien. Jeder der je in die Lage gekommen ist, harte organisirte Objecte z. B, harte Hölzer, Elfenbein, Knochen i\. s. w, untersuchen zu müssen, wird die Erfahrung gemacht haben , dass die bekannten Methoden, Schlitfpräparate von denselben anzufertigen, nicht ohne Mängel sind. Zunächst sind sie entschieden zu zeitraubend. Nach meiner Erfahrung braucht man zur Herstellung eines Querschliffes durch ein hartes Holz nach der herkömmlichen Methode des Schleifens mit Schmirgel in Wasser etc. zwei bis drei Stunden. Hat man nun eine grössere An- zahl von Hölzern zu prüfen, so kommt man sehr bald in die Lage, fünfzig und mehr Schliffe nach verschiedenen Richtungen und an ver- schiedenen Stellen machen zu müssen, so dass die damit verbundene höchst anstrengende und zeitraubende Arbeit geradezu für einen Ein- zelnen unausführbar wird. Mit diesem Umstände hängt offenbar zum Theil die üngenauigkeit mancher der vorhandenen Angaben über die meist sehr harten exotischen Hölzer zusammen. Ferner werden- viele organisirte Objecte (z. B. Kernhölzer), die schleimige oder lösliche Stoffe enthalten, durch das längere Liegen und Schleifen unter Wasser oft so verändert, dass die herkömmlichen Methoden geradezu unbrauchbar werden. Derartige Präparate genügen zwar, um die Zellstoffskelette zu studiren, nicht aber um die Anordnung der Harze, Gummimassen, Farbstoffe, Gerbstoffe, wie sie z. B. in Kern- hölzern sehr oft massenhaft vorkommen, zu prüfen. Endlich fand ich, dass es fast unvermeidlich ist, dass eine grössere oder geringere Menge von feinen Theilchen des Schmirgels oder Schleif- steines in das Präparat treten, die ohne Beschädigung oder Verände- rung der Inhaltsbestandtheile oder ohne zeitraubende Proceduren nicht entfernt werden können. Ich bin daher im Laufe meiner Arbeiten in meinem Laboratorium für technische Mikroskopie und Waarenknnde von dem Schleifen mit Schmirgel ganz abgekommen und stelle meine Präparate durch Feilen 1,2 V. Höhnel: Methode z. raschen Herst, v. brauchb. Schliffpräp. 235 und Schleifen auf sehr feinkörnigen Quarzsteinen (Missisippisteine, Arcansassteine und gewisse belgische und englische Steine sind solche) im trockenen Zustande her. Dazu kommen noch einige Hand- griffe, welche die Herstellung beschleunigen. Ich bin im Stande in 20 bis 25 Minuten einen Längsschliff durch ein hartes Holz, und in 25 bis 30 Minuten einen Querschliff durch ein solches (sammt Einschliessen in Canadabalsam) fertig herzustellen. Die Präparate genügen zu gewöhn- lichen Untersuchungszwecken vollständig und zeigen keine Schliffstreifen, wenn sie vielleicht auch nicht den höchsten Ansprüchen genügen. Indessen ist es nach meiner Methode bei einem Aufwände von wenig mehr Zeit und Sorgfalt möglich, auch beliebig schöne Präparate zu erhalten. Des Näheren ist der Vorgang bei der Herstellung der Präparate folgender : Zunächst erwärmt man Canadabalsam im Wasserbade und richtet einen reinen Objectträger mit Deckglas her. Dann nimmt man das zu präparirende Object (z. B. ein Stück harten Holzes) und erzeugt an der betreffenden Stelle mit einer gewöhnlichen flachen Feile (2 cm breit, Furchenbreite "/g mm) eine ebene Fläche, diese wird dann mit feineren Feilen glatter gefeilt (Feilen 2 bis 2'/2 cm breit, Furchenbreite y,o und Y,5 mm), und endlich mit einer ganz feinen Vautierfeile (flach, 2'/^ cm breit, Furchenbreite ^/.^ mm) ganz glatt gemacht. Die er- haltene 2 bis 3 qcm grosse Fläche stellt die Unterseite des Prä- parates dar und rauss desshalb wohl ganz eben sein, braucht aber sonst nicht fein ausgearbeitet zu sein. Nun spaltet man mit einem Scalpell, oder schneidet mit einer sehr feinen Laubsäge ein y^ bis 1 mm dickes Plättchen an der glatt gefeilten Stelle herab ; das Plättchen soll nicht so dünn sein, dass es sich beim Absägen biegt, darf aber auch nicht zu dick ausfallen. Das erstere desshalb, weil hiebei feine Sprünge entstehen, die sich beim Dünnschleifen sehr unangenehm geltend machen, das letztere, weil sonst die Dünnfeilarbeit zu gross wird. Nun giebt man auf den hergerichteten Objectträger einen Tropfen Canadabalsam, auf diesen das Plättchen mit der gefeilten Fläche nach unten und er- wärmt den Objectträger auf dem Drahtnetz, bis der Canadabalsam ganz dünnflüssig ist. Dann presst man das Plättchen mit dem Finger etwas an, giebt den Objectträger auf eine dicke, ebene, kalte Metallplatte, legt rasch ein kleines Fliesspapierblättchen auf das Object und presst dieses nun mit einem weichen Korke sehr fest an den Objectträger, bis der Canadabalsam ganz erkaltet ist, was auf der Metallplatte sehr rasch geschieht. Wendet man die Metallplatte nicht an, so erfolgt das Er- 236 V. Höhnel: Methode z. raschen Herst, v. brauchb. Schliffpräp. 1,2. kalten sehr langsam, besonders wenn der Objectträger dick ist. Das Object soll vollkommen eben und womöglich ohne dazwischen lagernde Luft an der Glasplatte anliegen. Da aus dem Objecto meist Luft austritt, so gelingt dies um so besser, je rascher das Präparat er- kaltet, daher die Anwendung der Metallplatte. Ist das Präparat schlecht angeklebt, so schleift es sich ungleich oder bricht leicht weg. Nun werden das Fliesspapier und der seitlich ausgetretene Balsam weggenommen. Es ist nothwendig, allen über den Schnitt hinaus- ragenden, sowie den auf denselben getretenen Balsam sorgfältig weg- zunehmen, wegen des nun folgenden Feilprocesses. Man legt hierauf den Objectträger auf die linke flache, am Schenkel ruhende Hand und feilt zunächst mit der Y^ Feile den Schnitt so lange, bis er fast gleichmässig durchscheinend und dabei schon sehr dünn ge- worden ist. Durch öfteres Durchschauen überzeugt man sich von dem Fortgange des Feilprocesses. Erst dann, wenn das Dünnfeilen der Hauptsache nach beendigt ist, nimmt man die feineren y^Q- und */, 5 Feilen, um den Schnitt glatt zu machen und schliesslich die y24 Feile, mit der er ganz glatt und glänzend wird. Will man den Schliff ganz tadellos haben, so nimmt man noch den Missisippi- oder Arcansasstein zur Hand und schleift das Präparat trocken kurze Zeit darauf. Hiebei muss der Stein hie und da mit einem mit Alkohol befeuchteten Tuche vom anhaftenden Harze be- freit werden. Bei dem letzten Feilen ist es zweckmässig, den Object- träger von dem wieder zum Vorscheine kommenden Canadabalsam mit einem Scalpell zu reinigen. Nach beendigtem Feilen (und Schleifen) wird der Objectträger und der Rand des Objectes mit einem Tuche, das mit Alkohol befeuchtet ist, gereinigt ; hierauf giebt man auf den Schliff etwas Canadabalsam und erwärmt ihn nebst dem Deckglase stai'k auf dem Drahtnetze. Dann bedeckt man das Object mit dem Deckglase, presst dieses mit dem Finger zunächst leicht an und schliesslich etwas fester mit einem dünnen Korke. Wie man die Luft aus derartigen Präparaten, z. B. durch Anwendung von Terpentinöl und öfterem Er- wärmen, ganz vertreiben kann, ist bekannt. Die beschriebene Opera- tion genügt aber zum Austreiben der Luft aus den dünneren Stellen des Präparates, und für Canadabalsampräparate ist es zweckmässig, wenn etwas Luft im Schnitte zurückbleibt. Dass man die Feilmethode zur Herstellung von Glycerinpräparaten auch verwenden könne, ist ohne weiteres klar. Da das Feilen sehr rasch von statten geht und das Object nicht abgenommen zu werden braucht, so kann man, Zufälligkeiten ausge- I, 2. Lindt: lieber d. mikroclaem. Nachweis v. Brucin u. Strychnin. 237 schlössen, mindesten zwei Präparate von 1 bis 1 '/j qcm Grösse in der Stunde fertigbringen, unter allen Umständen aber 10 bis 12 verschiedene SchlifTe im Laufe eines Tages herstellen. Nicht ganz harte oder weiche Hölzer eignen sich weniger dazu, nach der beschriebenen Methode präparirt zu werden , weil sich die grossen Lumina derselben mit den Feilspähnen anfüllen und das Feilen überhaupt nicht so glatt vor sich geht. Wenn man indessen dafür sorgt, dass die untere Seite der Lamelle gut mit dem Canadabalsam injicirt wird, so kann man auch von weicheren Objecten ganz gute Feilpräparate erhalten. Da man jedoch solche weichere Objecte schneiden kann, so haben für dieselben Schliffmethoden ohnehin eine geringere Bedeutung. Ueber den mikrocliemischen Nachweis von Brucin und Strjclinin. Von Dr. Otto Lindt in Aarau. Für einzelne Pflanzenalkaloide besitzt die Chemie Reactionsmetho- den, welche gestatten, selbst Mengen von 0*000001 g der reinen Sub- stanz noch mit Sicherheit zu erkennen. Seltsamerweise scheint wenig versucht worden zu sein, dieselben mikrochemisch zum Nachweis einzelner Alkaloide in den Gewebe- elementen des Pflauzenkörpers anzuwenden. Nur BöDECKER ' hat schon Ende der vierziger Jahre (1849) das Berberin in den Zellmembranen der Wurzel von Berberis vulgaris und von Menispernuum palmatum mit Hülfe der Salpetersäure nachge- wiesen, welche die Bildung des leicht auskrystallisirenden salpetersauren Salzes veranlasst. Später hat El. Borscow ^ in seinen Beiträgen zur Histochemie der Pflanzen zur Entscheidung der Frage über den Sitz des Veratrins in den Gewebeelementen von Veratrum album sich der Schwefelsäure be- dient, welche das Veratrin zu einer gelben, nach einiger Zeit orange, später carmoisinroth werdenden Flüssigkeit löst. Da jedoch das Rhi- ') BüDECKER in Annal. d Chem. u. Pharm., Bd. LXVI, p. 384. ■') BoKscow in Botan. Zeitg., 1874, p. 33 if. 238 Lindt: Ueber d. mikrochem. Nachweis v. Brucin u. Strychnin. I, 2. zom von Veratrum album gerade in den Zellen der Epidermis, in denen BoKscow das Veratrin in besonders deutlicher Weise nachzuweisen meinte, fettes Oel zu enthalten scheint, so ist der von Bokscow ge- leistete Beweis nicht ganz einwandfrei. Schwefelsäure und Salpeter- säure wirken auf die meisten fetten Oele farbeveränderud ein, die Gegenwart eines solchen kann daher unter Umständen zu Täuschungen veranlassen. Als Beispiel will ich nur anführen, dass das im Siebtheil der Zwiebelschuppen von Colchicum autumnale enthaltene fette Oel mit Schwefelsäure und Salpetersäure die für das Colchicin so charakteristi- sche Reaction giebt, d. h. sich mit ersterer andauernd imd rein gelb färbt, durch Zusatz von Salpetersäure von 1"4 spec. Gew. violettroth, nach einigen Secunden rothbraun wird imd später einen gelben Ton an- nimmt. Trotzdem scheint das Oel kein Colchicin zu enthalten, denn die Reaction bleibt aus, wenn die (vorher abgetrockneten) Schnitte durch Petroläther von fettem Oele befreit worden sind. Darin liegt ja eben die grosse Schwierigkeit mikrochemischer Untersuchungen, dass ein und dasselbe Reagecz gleichzeitig auf eine ganze Reihe vorhandener Körper einwirken und eine Summe von Reactionserscheinungen hervorrufen kann, welche einen sicheren Schluss auf das wirkliche Vorhandensein eines gesuchten Körpers selbst da nicht zulassen, wo doch die vorhandene Quantität desselben über die chemisch nachweisbare Minimalmenge der reinen Substanz weit hin- ausgebt. Mau wird daher, wenn der Nachweis eines bestimmten Alkaloides versucht wird, dahin trachten müssen, entweder die dasselbe begleiten- den, die Deutlichkeit seiner Reactionen beeinträchtigenden Stoffe zu elimiuiren , was durch Behandlung der Schnitte mit verschiedenen Lösungsmitteln, in denen der nachzuweisende Körper unlöslich ist, ge- schehen kann, oder aber die Anwendung neuer oder passend modificirter Reagentien zu versuchen '. Von diesem Gesichtspunkte ausgehend habe ich bei Anlass einer anderswo zu publicirenden Arbeit versucht, Brucin und Strychnin in den Samen von Strychnos nux vomica L. und von Strychnos Ignatii Berg nachzuweisen. Ich bemerke, dass dies für Brucin nicht auf einfachen Zusatz von Salpetersäure oder von Eedmakn's Reagenz ge- 1) J. Schaarschmibt's Arbeit über die mikrochemische Reaction des Sola- nins (diese Zeitschr. Heft 1 p. 61) ist mir erst nach Einsendung des Manu- scrlpts zu Gesichte gekommen. I, 2. Lindt: Ueber d. mikrochem. Nachweis v. Brucin u. Strycbnir. 239 schehen kann. Erstere wirkt so rasch auf das vorhandene Eiweiss ein, dass unter der gelben, von Xanthoproteinsäure herrührenden Färbung diejenige des Brucins nicht sichtbar wird. Das EEDMAXN'sche Reagenz dagegen ruft durch die in ihm zugebrachte Schwefelsäure die bekannte rosenrothe Färbung der Zucker Eiweissreaction hervor und färbt zudem den Zellinhalt intensiv roth, eine Reaction, die nicht durch die Alka- loide bedingt ist, da sie, wie FlItckigek ' nachgewiesen hat, auch mit dem durch Kalkwasser dargestellten Auszug aus der alkaloidfreien Fruchtschale von Strychuos nux vomica L. augestellt werden kann. Die genannten Uebelstände werden vermieden , wenn statt des EKDMAXN'schen Reagenz eine mit wenig Salpetersäure versetzte Selen- säure ^ verwendet wird, die für sich allein sich indifferent verhält. Lässt man eine solche salpetersäurehaltige Selensäure unter dem Deck- gläschen zu dem vorher durch Petroläther vom Fette befreiten zarten Schnitte zutreten, so färben sich die geschichteten Zellwaudungen rasch hellroth, allmählig orange und gelb werdend, während das Zelllumen und die in ihm enthaltene granulöse Materie ungefärbt bleiben, resp. sich als brucinfrei erweisen. Die Reaction ist sehr scharf und deutlich verlaufend. Was den Nachweis von Strychnin anbelangt, so besteht bekanntlich die schärfste Reaction in der violetten Färbung und Streifung, die ein Körnchen Kaliimibichromat in der schwefelsauren Lösung des Alkaloides hervorbringt. Mikrochemisch lässt sich diese Methode nicht verwerthen, weil die charakteristische Violettfärbung nur in unmittelbarer Berührung mit dem Bichromatkrystall vor sich geht, und die Lösung des Strych- nins in Schwefelsäure so rasch aus dem Präparate austritt, dass eine nachträgliche Färbung durch das KaHumbichromat keinerlei Aufscliluss mehr zu geben vermag über die ursprüngliche Lagerung des Alkaloides. Dagegen gelingt dies leicht durch Anwendung einer Lösung von schwefelsaurem Ceroxyd in Schwefelsäure, sofern vorher durch wiederholte Maceration mit Petroläther (von 45*' nicht über- steigendem Siedepunkt) und absolutem Alkohol fettes Oel, Trauben- zucker und das in absolutem Alkohol lösliche Brucin entfernt worden sind. Das Strychnin selbst ist weder in Petroläther noch in absolutem Alkohol löslich, so dass ein Verlust desselben nicht zu befürchten ist. Eine vorherige Entfernung des Zuckers ist nothwendig, weil auch *) Vgl. Fr.ücKiGER, Pharmakognosie d. Pflanzenreiches. 2. Aufl., p. 961. 2) Auf 5 Tropfen Selensäure von 1 4 spec. Gew. 1 — 2 Tropfen Salpeter- säure von 12 spec. Gew. 240 Lindt: Ueber d. mikrochem. Nachweis v. Brucin u. Strychnin. I. 2. hier wieder, nur in etwas schwächerem Maasse als beim Brucin, die Zuckei'-Eiweissreaction die Deutlichkeit der Strychninreactiou hindern würde. Das Reagenz, das erst unmittelbar vor der Beobachtung auf das Präparat einwirken darf, färbt sofort die Zellwandungen in allen ihren Verdickungsschichten stärker oder schwächer violettblau, während das Innere der Zellen vorläufig farblos bleibt. Dieses charakteristische Moment dauert aber nur kurze Zeit ; die Flüssigkeit breitet sich rasch unter dem Deckglase aus ; die violettblaue Färbung verschwindet, während die Eiweissablagerungen einen bläulich opalisirenden Ton an- nehmen, den übrigens schon Schwefelsäure allein hervorruft und der durch zurückgelassene Spuren von Zucker schliesslich röthlich- violett werden kann. Das Zellinnere endlich färbt sich unter der Einwir- kung der Schwefelsäure auf die schon früher erwähnte Substanz inten- siv roth. Ans dem Mitgetheilten ergiebt sich, dass sowohl in den Samen von Strychnos nux vomica L. als auch in denen von Strychnos Ignatii Berg die Alkaloide in den Wandverdickungen der das Sameneiweiss bilden- den Zellen eingelagert sind, und zwar erscheinen die mehr in der Peripherie derselben gelegenen Zellen alkaloidreicher zu sein, als die- jenigen des Centrums. Ob die radial gestellten Zellen der Samen- schale beider Strychnosarten Alkaloide enthalten, ist der dunklen Farbe wegen, die sie beim Behandeln mit dem Reagenz annehmen, nicht er- sichtlich. Dagegen ist in allen Theilen des Embryo von Strychnos nux vomica Strychnin nachzuweisen. Noch mache ich darauf aufmerksam, dass es nicht erforderlich ist, die Lösung des schwefelsauren Ceroxyds, die das Salz im üeberschuss enthalten soll, jeweilen frisch zu bereiten. Das ungelöste, ursprüng- lich gelbe Salz nimmt zwar mit der Zeit eine rothe, dem Kaliumbichro- mat ähnliche Farbe an [vielleicht (S 04)0 Ce^ -(- 21 HgO nach Rammels- berg], aber ich habe nicht bemerkt, dass damit eine Abschwächung der Wirksamkeit des Reagenz verknüpft ist. I, 2. Kleinere Mittlieiluiigen. 241 Kleinere Mittlieiluno»en. Das neue Patent-Schlittenmikrotom von C. Reichert. Von Dr. Joseph Moeller in Wien-Mai'iabrunn. Hierzu 1 Holzschnitt. Das von Herrn C. Reichert in Wien constrnirte nene Mikrotom untersclieidet sicli von allen bisherigen Schlitten- und Schraubenraikro- tomen wesentlich dadurch, dass das zu schneidende Object automa- tisch gehoben wird. Es wird dadurch die Herstellung von Serien- schnitten beliebiger Dicke ausserordentlich erleichtert. Das Mikrotom hat folgende Construction (s. Abbildung a. p. 242): Der Schlitten, auf welchem mittels der Flügelschraube F das Messer 31 befestigt ist, ruht nur auf fünf Punkten, wodurch seine Führung mit ge- ringerer Reibung und doch mit hinreichender Sicherheit erfolgt. Der Messerschlitten stösst vorn — also bei jedem Rückgange der Schnitt- führuug — an die Hebelstange Ä, deren horizontaler (auf der Rückseite der Figur befindlicher, daher nicht sichtbarer) Arm in das Zahnrad ^ein- greift und es um einen oder mehrere Zähne drelit. Die Rückbewegung des Zahnrades hindert der mittels der Schraube a festgestellte Sperrhaken, Sowie nämlich der Druck des Schlittens gegen die Hebelvorrichtung aufhört, also bei beginnender Schnittführung, zieht die Spiralfeder s den Hebelarm aus dem Zahnrade zurück und stellt ihn für den folgenden Schnitt ein. Das Maass des Ausgreifens des Hakens hängt aber von der Grösse ab, um welche die Hebelstange h durch das anstossende Messer vorgeschoben wird, und diese wird durch die Schraube h (mit der Gegenmutter c) regulirt. Die Einrichtung ist so getroffen, dass in ma- ximo der Hebel bei jedem Anstoss des Messers um zehn Zähne vorgreift und dass dieser Weg durch Anziehen der Schraube h nach Belieben bis auf je einen Zahn reducirt werden kann. Die verticale Achse des Zahnrades ist in ihrem unteren (in der Figur nicht sichtbaren) Theile eine Schraube, deren einmalige Umdre- hung eine Steigung von 0*75 mm herbeiführt , und da auf dem oberen zugespitzten Theile der Achse der Objectschlitten ruht, so wird Zeitsclir. f. wis?. Mikroskopie. I, 2. 16 242 Kleinere Mittheilungen. I, 2. I, 2. Kleinere Mittheilimgen. 243 auch dieser iu demselben Masse gehoben. In die Peripherie des Zahn- rades sind 100 Zähne eingeschnitten, eine ganze Umdrehung des Rades bewirkt eine Steigung von 0-75 mm, die Drehung um die Distanz eines Zahnes daher eine Steigung von 0-0075 mm, und diese Zahl gibt zugleich die obere Grenze für die Dicke der automatisch herstellbaren Schnitte. Diese theoretische Grenze wird in der praktischen Anwendung kaum jemals erreicht werden, weil ja nicht allein die Führung des Objectes, sondern auch die Cousistenz desselben und die Schärfe des Messers auf die Dicke der Schnitte Einfluss nimmt. Von günstigen Objecten können jedoch Schnitte von 0*02 — 0"03 mm Dicke hergestellt werden, von einer Feinheit demnacli, die allen Anforderungen genügt, in den meisten Fällen gar nicht gewünscht wird. Die untere Grenze ist Yio Umdrehung, daher 0"075 mm Schnittdicke. Will man dickere Schnitte machen, so muss der Automat ausgeschaltet werden. Es geschieht das einfach, indem man die Schraube a des Sperrkegels lüftet und die Spiralfeder s aushängt. Um auch jetzt noch die Dicke der Schnitte leicht bestimmen zu können, trägt die Peripherie des Zahnrades eine Theilung, auf welcher der Zeiger g den zurückgelegten Weg anzeigt. Ausserdem kann man an dem hör b aren Eingreifen des Hebelhakens in die Zähne auch durch Zählen leicht bestimmen, wie weit jeweilig das Rad aus freier Hand ge- dreht wird. Bei fortgesetzter Schnittfülnning mit dem Automat könnte das Object unversehens so weit gehoben werden, dass das Messer in die Klammer schneidet. Dieser Gefahr wird automatisch begegnet, indem der Haken des Hebels nicht mehr in das Zahnrad eingreift, wenn dieses eine be- stimmte Höhe erreicht hat. Der Objectschlitten gleitet nicht, wie beim Mikrotom Rivet's, auf einer schiefen Bahn, sondern bewegt sich, wie schon angedeutet, nur in verticaler Richtung, es ist daher die Bahnlänge im Yerhältniss zur Schnittlänge erheblich verkürzt. In einem horizontalen Träger des Schlittens ist mittels der Schraube e der Stiel f der Klammer oder auch eines Gefrierapparates nach Bedarf höher oder tiefer einzustellen. Durch die Schraube d der Klammer wird das Object unmittelbar oder in Kork, Mark, Paraffin u. s. w. eingespannt. Die Klammer wird auch' so construirt, dass sie um eine horizontale Achse drehbar ist, daher das Object auch schief gestellt werden kann. Die Wanne W dient als Reservoir für die abfliessende Flüssigkeit und unterhalb der Klammer kann ein in der Figur nicht dargestelltes Schutzdach eingehängt werden. Die Bahn und der Mikrotomkörper sind aus Gusseisen, die 244 Kleinere Mittheilungen. I, 2. Fühnmgspiinkte des Messersclilittens aus hartem Rotlimetall. Der Mikrotomkörper hat zum Schutze gegen Alkohol eiuen Anstrich von Oelfarbe, die übrigen Bestandtheile sind vernickelt. Die Mikrotome werden in zwei Grössen angefertigt. Das grosse Modell mit einer Bettlänge von 38 cm und einem grossen, circa 23 — 25 cm langen und einem kleineren, circa 15 — 16 cm langen Messer kostet 110 fl., das kleine Modell mit einer Bettlänge von 20 cm und zwei Messern von 11— -12 cm Länge kostet 65 fl. Noch ein automatisches Mikrotom. Von Wilhelm Behrens in Güttillgen. Aus der Werkstatt des Herrn Emil W. Boeckee in Wetzlar ist uns ein neues Mikrotom zur Ansicht und Prüfung zugegangen, dem im Anschluss an die vorstehende Mittheilung die nachfolgende, kleine Notiz gewidmet sein mag. In seinem allgemeinen Aufbau stellt dieses Mikrotom eine Com- bination des BoECKER'schen „neuen grossen Mikrotomes" und des ZEiss'schen „grossen Mikrotomes" dar, welche beide von Dippel im Botanischen Centralblatte *, später auch in dessen Handbuch der allge- meinen Mikroskopie ^ abgebildet und besclirieben wurden. Durch Be- trachtung Jener beiden Abbildungen wird man sich über die Einrich- tung des vorliegenden mit Zuhilfenahme der folgenden Beschreibung genügend orientiren können. Ein schwerer, gusseiserner Fuss bildet die Basis des Ganzen. Seine obere, horizontale Platte hat eine Schwalbenschwanzführung, ver- mittels welcher sich auf den abgeschliffenen, horizontalen Seitentheilen dieser Platte ein Schlittenschieber (.§ der Abbildung 493 des DippEL'schen Handbuchs) in der Querriclitnng des Apparates bewegen lässt. Durch einen senkrechten Stahlzapfen, dem ein schräger Ausschnitt des Sdiiebers von bestimmter Länge entspricht, wird die Bewegung des Schiebers in gewissen Grenzen gilialten. Der Schlittenschieber besitzt eine ähn- liche Führung wie die untere Platte, welche aber senkrecht zur unteren ') Dippel in Botan. Centralbl. Bd. XIII. 1883. p. 249, 388. ■^) Dippel, Handbuch der allgemeinen Mikroskopie p. 679 f. T, 2. Kleinere Mittlieilungen. 245 steht, und in ihr Läuft ein gusseiserner Schlitten, dem oben, vermittels einer starken Klaue, ein Messer (in der Weise wie bei dem ZEiss'schen Mikrotom) horizontal aufgespannt werden kann, und der mit einem Griff versehen ist, um die ganze doppelte Schlittenführung in Bewegung zu setzen. Dabei vollführt das Messer eine Bewegung in der Richtung der Diagonale beider Schlittenbewegungen, Diese ganze Construction ist nicht neu, denn sie findet sich genau so bei dem von Dippel be- schriebenen BoECKER'schen Mikrotom. Vor dem bis jetzt beschriebenen Mechanismus befindet sich der Halter für das zu schneidende Object und die Vorrichtung zum all- mählichen Heben desselben (ähnlich wie bei dem ZEiss'schen, von Dippel im Handbuch Figur 492 abgebildeten Mikrotom). Neu daran ist, dass, wie bei dem vorhin beschriebenen, REicHEKT'schen Mikrotom, die allmähliche Hebung des Objectes durch den Apparat selbst automatisch bewirkt wird. Der Objecthalter hat eine senkrechte Schlittenführung wie bei Zeiss, auf den eine senkrechte Mikrometerschraube von 1 mm Schraubenhöhe wirkt. Die Mikrometer- schraube trägt eine in 100 Theile getheilte Trommel; letztere ist am Rande wie ein Zahnrad mit schief gestellten Zähnen gestaltet ; in diese Zähne greift ein einfacher Haken ein, ähnlich wie der Doppelhaken einer Schwarzwälder Uhr, der die Pendelbewcgungen auf das Räderwerk überträgt. Jener Haken steht mit einem doppelten Hebelwerk in Ver- bindung, auf welches seinerseits ein horizontaler Stift am oberen Schlitten je nach seiner, durch Schraubenbewegung zu regulirendcn Stellung, mehr oder minder verschiebend einwirkt, wenn man den Schlitten be- hufs Schneidens in Bewegung setzt. Stösst der Stift gegen das Hebel- werk, so treibt dieses die Mikrometertrommel um ein Gewisses weiter, wodurch die Hebung des Schnittobjectes gegeben ist: bei Aufhören des Druckes springt der Haken, getrieben durch eine Spiralfeder, einen oder einige Zähne weiter zurück, je nach der Stellung, die man dem Stifte gegeben hatte. Soviel über die mechanische Einrichtung des Instrumentes. Es ist dasselbe einer eingehenden Prüfung unterzogen worden. Da speciell in der Botanik Mikrotome nur selten und zu ganz bestimmten Zwecken angewendet werden, so bat ich Herrn Dr. Schieffeedeckee, mich mit seinen Erfahrungen in der zoologischen Mikrotomtechnik hierbei zu unterstützen. Wir haben die Prüfung gemeinschaftlich vorgenommen und sind zu den folgenden Resultaten gelangt. Es ist durch diesen Apparat kein Fortschritt in der Construction der Mikrotome gemacht worden, denn: 246 Kleinere Mittheilungen. I, 2. 1. Die Schnitte fallen nicht gleichmässig dick aus. Wenn man ein ganz leicht zu schneidendes Object, z. B. Hollundermark anwendet, und den Schlitten bald mit grösserem, bald mit geringerem Druck nach unten fortbewegt, so erhält man selbst bei dickeren, z. B. O'Oo bis 0*04 mm dicken Schnitten, solche von ungleiclimässiger Dicke. Ver- sucht man sehr feine Schnitte herzustellen, so erhält man, je nach dem an- gewendeten Druck bald einen Schnitt, bald nur Fragmente eines solchen. Dieses hat seinen Grund in der grossen Flächeuausdehnung zweier schleifender Flächen, welche, um einen leichten Gang zu ermöglichen, stark mit Oel eingeschmiert sein müssen. Die beiden Oelschichten sind bei wechselndem Druck nicht gleich dick ; die Differenz in ihren Dicken beträgt, auf Imndertstel Millimeter bezogen, ein Bedeutendes. Die Tendenz der Mehrzahl der modernen Mikrotome geht ja eben aus diesem Grunde dahin, die schleifende Fläche auf eine zu reduciren ; dass durch geeignete Orientirung von Messer, Object und Schlitten derselbe Effect erreicht werden kann, ist ja klar. Ja, das neue JuNo'sche Mikrotom, sowie das vorhin beschriebene REicHERT'sche, schleifen überhaupt nur auf fünf Punkten ; bei diesen Constructionen hat man dem beregten Uebelstande am meisten Rechnung getragen. — Ich kann daher der Meinung Dippel's * nicht beipflichten , der , ohne indess das „neue, grosse BoECKER'sche Mikrotom" geprüft zu haben, glaubt, dass es den an ein derartiges Instrument zu stellenden Anforderungen genüge. 2. Die Stellung des Messers gegen das Schueideobject ist eine zu steile. Man soll es, nach einem auf dem oberen Schlitten angebrachten Pfeil in 45 ''-Stellung zum Object bringen. Ist z. B. der Durchmesser des Objectes 10 mm (also ein sehr grosser), so ist die das Object durch- schneidende Stelle des Messers doch nur 27 mm lang. Bringt man das Messer in eine Stellung von 30" (die am wenigsten steile, die ihm an dem vorliegenden Apparate gegeben werden kann), so ist die schnei- dende Stelle des Messers 35 mm lang, bei einem Objecte von gleicher Ausdehnung. Das mag für widerstandsfähige Objecte, Hölzer und der- gleichen, genügen, aber für sehr zarte und leicht zu zerquetschende Objecte muss die durchschneidende Kante des Messers 70 bis 80 mm lang sein. Derjenige, welcher ein Mikrotom anwendet (wir reden hier also wohlverstanden von einem Wissenschaftler, nicht von Jemandem, der sich aus Liebhaberei mit der Herstellung „schöner" mikroskopischer Pi^äparate befasst, oder von Jemandem, der fabrikmässig verkäufliche Präparate darstellt), wird es doch gewiss vornehmlich für schwierig zu ') DippEL, Handbuch p. 681. I, 2. Kleinere Mittlieilungen. 247 präparirende Objecte anwenden, nicht etwa für Hölzer, von denen er leicht das zu untersuchende kleine Stückchen ans freier Hand präpariren kann. Hierfür ist aber die vorliegende Constructiou ganz ungeeignet. 3. Der in Frage stehende Apparat erlaubt kaum, mit Zuhilfenahme von Wasser oder Alkohol zu schneiden, denn damit würde man in sehr kurzer Zeit, durch Alkohol sogar sofort, den ganzen Mikrometerschrauben- apparat verderben. Da — wenigstens der Pflanzenanatom — fast immer feucht schneiden muss, um brauchbare Präparate zu erlangen, so verbietet sich ihm der Gebrauch des Instrumentes für die meisten Zwecke. 4. Das Mikrotom soll auf dem Tische festgeschraubt werden. Da, um das automatische Hebelwerk in Bewegung zu setzen, der vorge- schobene Schlitten au einen im Innern befindlichen Stift anschlagen muss, wodurch der ganze Apparat einen Ruck bekommt (höchst bedenk- lich !), so ist das Anschrauben geboten. Ein unbeweglicher derartiger Apparat bringt aber manche Inconvenienzen für den Arbeiter, der noch so und so viele andere Apparate handhaben muss, mit sich ; die meisten Wissenschaftler würden daher wahrscheinlich schon zu Gunsten eines frei beweglichen Instrumentes den ganzen Ilebungsmechanismus gern in den Kauf geben. 5. Die automatische Ilebungsvorrichtung ist vom wissenschaftlichen Standpunkte aus überhaupt iu das Gebiet der Spielerei zu verweisen. Der geringe Druck mit dem Finger, der die Mikrometerschraube auch ohne diesen Mechanismus hebt, wird dem Arbeiter kaum lästig werden können, und er wird, abgesehen von den oben erwähnten Inconvenienzen, zum mindesten aufgewogen durch die Nothwendigkeit bei der vorliegen- den Construction, den Schlitten bis zur Wirkung des Automaten zurück- ziehen zu müssen. Sollen Schnitte von ungleicher Dicke gemacht wer- den, so ist die Vorrichtung gar nicht zu gebrauchen, und ob sie, wenn sie ein wenig Rost angesetzt hat, noch mit Leichtigkeit functioniren wird, möchten wir sehr bezweifeln. — Aber in unserem Zeitalter geht ja Alles mit Dampf, im nächsten mit Elektricität — sollte sich nicht noch eine elektrodynamische Maschine mit dem Mikrotom in Verbindung bringen lassen? Dann könnte sich der Wissenschaftler mit imterge- schlagenen Armen und brennender Cigarre hiuter den selbstthätig arbeitenden Apparat setzen und zusehen, wie der automatisch bewegte Pinsel die Schnitte abhebt und in die mit schillerndem Anilingemisch erfüllte Glasschale überträgt. Später träte dann an ihn nur die mehr nebensächliche Arbeit heran, die Schnitte unter dem Mikroskop zu untersuchen ! 248 Kleinere Mittheilungen. I, 2. Wir haben hier ausführlicher den BoECKEK'schen Apparat be- sprochen, als es die Wichtigkeit desselben erheischte. Es geschah dieses mit Absicht, um zu zeigen, wie etwa wir uns die Besprechung neuer Apparate in dieser Zeitschrift denken. Unseres Erachtens ist es nothwendig, dass eine Zeitschrift wie die vorliegende die hier bekannt zu machenden Neuigkeiten einer genauen kritischen Prüfung unterzieht. Nur hierdurch ist es möglich, den Leser genau zu orientiren und andrer- seits die Verfertiger mikroskopischei; Apparate mit den Anforde- rungen der Wissenschaftler bekannt zu machen, und sie, wie im vorliegenden Falle, davon abzuhalten, dass sie ihre Zeit und ihr Erfindungstalent auf Spielereien vergeuden, die von dem Wissenschaftler, für den sie doch eigentlich bestimmt sind, nur mit mitleidigem Achsel- zucken betrachtet werden können. Ueber ein neues Compressorium. Von H. Jung in Darmstadt. Hierzu 1 Holzschnitt. Während einer histologischen Untersuchung niederer Thiere (Hy- dra etc.) war der Verfasser öfters genöthigt, zur Isolirung der Structur- elemente die sogenannte Methode des „Klopfens" in Anwendung zu bringen. Da nun stundenlanges Klopfen (mit dem Griffe einer Präparir- nadel etwa) ausserordentlich ermüdend ist, die Anwendung eines der bekannten Compressorien sich als unzweckmässig erwies, so kam ich nach verschiedenen Versuchen zur Construction folgenden Instrumentes: Auf der Tischplatte (^), welche vermittels der Nase (») und der beiden Schrauben (5, s) am Objecttisch des Mikroskopes befestigt wird, be- findet sich eine leichte, jedoch sichergehende Doppelhebeleinrichtung, Letztere besteht (s, Seitenansicht) aus zwei Hebeln, von denen der eine den allseitig beweglichen Ring (R) und die Stellschraube (St) trägt, der andere den Knopf (jS") besitzt. Beide Hebel gehen in dem Charnir (C) derart, dass bei einem Niederdrücken des Knopfes {K) der Ring (R) sich auch nach unten bewegt. Umgekehrt wird bei einem Aufwärts- gehen des Knopfes, durch die Feder (F) verursacht, auch der Ring in I, 2. Kleinere Mittheilungen. 249 die Höhe gehen und sich von dem auf dem Tische liegenden Präparate entfernen. Die Schraube (S'i) unterhalb des Knopfes dient zur Ver- minderung des von demselben zurückzulegenden Weges. Um das Instrument mit Erfolg zu gebrauchen, wird man nach An- schrauben desselben imd nach Festklammern des mit grossem und dickem Deckglase versehenen Präparates vorerst den Ring (R) durch seine Stellschraube so einstellen, dass er beinahe dicht auf dem Deck- glase aufliegt; dann ziehe man die Schraube (.^i) unter dem Knopfe so weit an, dass auch dieser ganz wenig mehr herabgedrückt werden kann. Nun stelle man den Tubus auf das Object ein, und die Arbeit kann be- ginnen. Noch zusammenhängende Gewebe werden (nach Maceration) durch schnelleres und anhaltendes Bewegen des Knopfes und den dadurch veränderlichen Druck des Deckglases ohne Gefahr, vernichtet zu werden, leicht zerlegt und man hat das Object beständig unter bewaffnetem Auge (bis zu 600fach. linear. Vergr. bei einer num. Ap. v. 0'60), kann also jede Veränderung constatiren. Sind die Zellen schon isolirt, so lassen sie sich bei langsamerem Klopfen so unter dem Mikroskop hin- und herrollen, dass man sie von allen Seiten beschauen kann, 250 Kleinere Mittheilungen. I, 2 namentlicli kleine Anhängsel etc. durch die Bewegung leichter bemerkt. Will man endlich das Object pressen, so löse man die Schraube (*S', ) und ziehe die Stellschraube (St) soweit als nöthig an, und das Instru- ment erfüllt nun auch die Functionen eines gewöhnlichen Compressoriums. Notiz, betreffend die Behandlung von Präparaten des Centralnervensystems, welche zur Projection mit dem Scioptikon dienen sollen. Von Dr. L. Edinger in Frankfurt a. M. Der complicirte Bau des Centralnervensystems wird dem Lernen- den nur dann verständlich, wenn es gelingt, ihm eine gewisse Anzahl Querschnitte erläuternd vor Augen zu führen. Die Herstellung von Wandtafeln so minutiöser Bilder, wie sie solche Querschnitte bieten, ist schwer und auch für den geübten Zeichner recht zeitraubend. Wo immer möglich, sollte man sich gerade auf diesem Gebiete der Projections- apparate bedienen. Da es sich meist um sehr grosse Präparate handelt, ist die Anwen- dung einer engen Blende unmöglich, und die Fülle des Lichtes, welche so das Präparat trifft, macht auch bei gutem optischen Apparate das projicirte Bild oft verwaschen, unbrauchbar. Gefärbte, in Canadabalsam liegende Schnitte sind meistens gar nicht zu brauchen, Glycerinpräparate nur dann, wenn es sich um ungemein dünne Schnitte handelt. Die Her- stellung solcher aber, durch den Gehirnstamm z. B., hat doch ihre be- kannten, relativ grossen Schwierigkeiten. Der Vortragende kommt daher, selbst wenn ihm eine gute Samm- lung fertiger Präparate zur Verfügung steht, rasch zur Einsicht, dass er nur ganz wenig zur Demonstration Geeignetes besitzt. Ich freue mich daher, nachdem ich gelegentlich einer Vorlesungsreihe dies auch er- fahren habe, ein Verfahren mittheilen zu können, das die genannten Schwierigkeiten beseitigt. Alle Schnitte, die zur Projection dienen sollen, werden vom Mikrotom in eine Lösung von Salpetersäure 1 : Wasser 15 gebracht und dort belassen bis sie — es handelt sich um Chrompräparate u. dergl. — blendend weiss geworden sind. Dann folgt Einbettung in Glycerin ohne vor- herige Abspülung. So behandelte Präparate sind, auch wenn die Schnitte I, 2. Kleinere Mittheilungen. 251 nicht ganz dünn sind, nicht nur für den genannten Zweck in bisher nicht erreichter Weise geeignet, sondern sie geben auch bei makroskopischer. Betrachtung und bei schwachen Vergrösserungen schärfer gezeichnete üebersichtsbilder als irgend andere mir bisher bekannt gewordene. Der Verfasser bedient sich des Scioptikons, wie das wohl mehrfach geschieht, auch als Apparat zum bequemen Zeichnen grosser Querschnitte bei schwachen Vergrösserungen. Auch hier hat er mit der genannten Methode die besten Erfolge erzielt. Der Lichtkegel wird von einem um 45 '^ geneigten Spiegel aufgefangen und das Bild von diesem direct auf das Zeichnenpapier geworfen, wo Salpetersäurepräparate in wunderbarer Schärfe mit allen Details erscheinen und natürlich leicht und bequem nachzuzeichnen sind. Kalium-Quecksilberjodid als Quellungsmittel. Von Prof. Dr. Leop. Dippel in Darmstadt. Die seinerzeit von J. W. Stephenson * und mir ^ als Aufbewahrungs- flüssigkeit für Diatomeenschalen empfohlene Lösung von Quecksilber- jodid in Jodkalium dürfte nach einigen von mir schon vor längerer Zeit gemachten Erfahrungen auch als Quellungsmittel zum Nachweise ge- wisser Structurverhältuisse Verwendung finden können, und will ich nicht unterlassen, die Fachkreise darauf aufmerksam zu machen, ob- gleich ich seine Wirkung erst in beschränktem Umfange prüfen konnte. Bei dem Versuche, wie sich die Zellwände des hornigen Samen- eiweisses, mit dessen Untersuchung ich mich gerade zu gewissen Zwecken beschäftigte , gegen genanntes Einschlussmittel verhalten möchten, fand ich, dass durch den Einfluss der Lösung die — sich bei der weitaus grössten Anzahl verdickter Zellwände durch ein höheres (etwa demjenigen der Primärwand gleichen) Lichtbrechungsvermögen kundgebende — „tertiäre Membran" früherer Autoren, die „Innen- ') J. W. Stephenson, On mounting objeets in phosphorus, and in a Solu- tion of biJodide of mcrcury and Jodide of potassium (Journ. K. Microsc. Soc. Ser. II vol. II, 1882, pt. 2 p. 163). ^) Dippel, Kalium-Quecksilberjodid als Einschlussmittel für Diatomaceen (Botan. Centralbl. Bd. XI, 1882, p. 105), 252 Kleinere Mittheilungen. I, 2. haut" Steasbukger's , welche ich als innerste, und ihrer Entstehung nach — im Gegensatz zu den herrschenden Ansichten — als älteste Schicht der secundären Verdickung bezeichne, je nach dem Concentra- tionsgrade des Mittels und der Eigenart der betreffenden Objecte eine bald mehr, bald minder starke Quelluug erleidet, während die übrigen Wandschichteu ganz oder nahezu ganz unverändert bleiben. Man erhält bei der Beobachtung feiner, alle Structureinzelheiten auf das klarste zeigenden Schnitten in dem Quellungsmittel äusserst charakteristische und instruetive Bilder, wie ich sie in anderer Weise bis jetzt nicht er- langen konnte. Lässt man die Wirkung so lange dauern, bis die Quel- lung constant geworden ist, so lassen sich die Präparate nach sorgfälti- gem Auswaschen mittels destillirten Wassers in Glycerin oder auch in Chlorcalcium einlegen und aufbewahren. Dabei ändert sich das Bild — namentlich bei Anwendung von Glycerin, welches manche Präparate, z. B. von Phoenix, sehr stark aufhellt — in Folge des geringeren Brechungsindex der Aufbewahrungsflüssigkeit gegen früher allerdings, aber es verliert keineswegs die oben genannten Eigenschaften. In Be- zug auf den Concentrationsgrad der Lösung lassen sich bestimmte Vor- schriften nicht geben. Man muss denselben eben fiir jeden vorliegenden (Phytelephas verträgt einen starken, Phoenix u. a. einen nur schwaclien Concentrationsgrad) Fall ausprobiren. Ich verfahre so, dass ich die Schnitte in ein Uhrschälchen mit einer kleinen Menge destillirten Wassers bringe, dann einige Tropfen der ganz concentrirten Lösung unter Um- rühren zugebe, und unter steter Controls der erzielten Wirkung unter dem Mikroskope, so lange mit der Zugabe fortfahre, bis der gewünschte Quellungsgrad erreicht ist. Es lag nach der gemachten Beobachtung natürlich auch die Frage nahe, ob die sich gegen das Quellungsmittel verschieden verhaltenden Schichten der Zellwand nicht auch ein gleiches Verhalten gegen Tinctions- mittel zeigen würden. Daraufhin von mir angestellte Versuche ergaben für Fuchsin- und Hämatoxylinlösungen ein positives Resultat, während Methylgrün, Saffranin, Corallin, Nigrosin u. s. w. keine Differenzirung hervortreten Hessen. Sorgfältig — mehrere Tage lang — ausgewaschene Schnitte einige Stunden in wässeriger Fuchsinlösung belassen, zeigten nach dem Aus- waschen in glycerinhaltigera destillirten Wasser an den dünnsten Stellen die gequollene innere Wandscliicht blassroth gefärbt, während die übrigen Wandschichteu ungefärbt blieben. Aehnlich verhielten sich in verdünnte Hämatoxylinlösung eingelegte Schnitte, indem die .gequollenen Schichten sich von den übrigen durch eine blasse violette Färbung abhoben. I, 2. Kleinere Mittheilungen. 253 Die Beobachtung im sogenannten Farbenbilde, d. h. bei Verwen- dung des vollen, die ganze Objectivöffnung ausfüllenden Lichtkegels eines AßBfi'schen Beleuchtungsapparates, kann natürlich bei der ver- hältnissmässig schwachen Färbung keine sehr auffallende Resultate liefern. Doch geben die Anilinfärbungen immerhin ein ganz instructives Bild, indem sich das blasse Roth der gequollenen Innenschicht neben dem intensiven Roth des Protoplasmas und der vollen Durchsichtigkeit der nicht gefärbten Wandschichten (Primärwand und secundäre Aussen- schichten) deutlich abhob. Gefärbte, wie auch nicht gefärbte, mit dem Quellungsmittel be- handelte Schnitte lassen sich nur in Glycerin auflegen, da essigsaures Kali die Structur nach kurzer Zeit schon undeutlich werden lässt. Ver- suche, nicht gefärbte Schnitte in der Kalium-Quecksilber-Jodidlösung aufzubewahren , führten insofern zu einem negativen Resultate , als nach einiger Zeit (je nach dem Concentrationsgrade bald früher, bald später) die Quellung der Innenschicht so überhand nahm, dass sie sich über die nicht gequollenen Wandschichten ausbreitete und diese ganz überdeckte. Doch ist der Verfolg dieses Fortschrittes — wie a. a. 0. näher dargelegt werden wird — von Interesse. Inwieweit das besprochene Mittel auch für die DifFerenzirung der Wandschichten thierischer Zellen u. s. w. von Werth ist, müssen Ver- suche entscheiden, welche sich jedenfalls empfehlen dürften. Notiz über die Anwendung des Farbstoffes des Rotbkohls in der Histologie. Von Dr. Max Flesch in Bern. In Gieeke's Zustammenstellung der in der Histologie verwendeten Färbemittel * wird auch der Empfehlung des Rothkohlfarbstoffs durch Lawson-Tait gedacht. Dieselbe hat wenig Beachtung gefunden ; für Dauerpräparate wird sie auch wohl nie eine Bedeutung gewinnen, da, wie GiERKE richtig bemerkt, die Farbe nicht haltbar ist. Ein gewisses Interesse kommt derselben gleichwohl zu wegen der in einer verschie- denen Färbung der Kerne und des Protoplasmas sich äussernden ver- ») Vgl. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 99. 254 Kleinere Mittheilungen. I, 2. schiedeneu Reaction beider. Die bezügliche Augabe Tait's hat mir gleich nach der Veröffentlichung Anlass gegeben, die Reindarstelluug des Farbstoffes zur genaueren Prüfung zu unternehmen ; von einer Publica- tion sah ich ab, weil ich über die Angaben Tait's hinausgehendes nicht fand. Vielleicht ist es indessen jetzt am Platze, auf jene Reaction hin- zuweisen, da unsere Kenntnisse über den Bau und die Bestandtheile der Zelle so weitgehende Bereicherungen erfahren haben, dass vermuthlich neue Prüfungen, welche ich leider zur Zeit nicht vornehmen kann, bessere Resultate liefern werden. Die Herstellung des Farbstoffes geschah im physiologischen Laboratorium des Herrn Professor Fick zu Würzburg; Herrn Professor Kunkel, damaligem Assistenten jenes Institutes, ver- danke ich Methode und Anleitung bei der' Ausführung. Das Verfahren war im wesentlichen folgendes (Einzelheiten habe ich leider nicht notirt) : Das wässerige Extract eines Rothkohlkopfes wurde durch Eindampfen concentrirt, dann mit einer Lösung von Bleizucker versetzt, letzterer wurde durch Einleiten von Kohlensäure in unlösliches kohlen- saures Blei übergeführt, wobei der grösste Theil des Farbstoffes mit dem Bleiniederschlag niedergerissen wird; nach Auswaschen auf dem Filter wurde das Präcipitat durch Säurezusatz gelöst, die Lösung vorsichtig neutralisirt und aufs Neue durch Schwefelwasserstoff ausgefällt. Das Filtrat enthält eine klare Lösung des Farbstoffes, die, zur Trockne ein- gedampft, theils in Wasser, theils in Alkohol gelöst zur Anwendung kam. An frischen Präparaten gelang die TAiT'sche Reaction (Kerne grün, Protoplasma roth) recht gut; ausserdem erweisen sich beide Lö- sungen als gute Kernfärbemittel ; u. a. auch bei Präparaten (in Chromsäure gehärtetes Gehirn), an welchen Carmintinction misslungen war. Die Präparate waren ebensowenig haltbar in Balsam wie in Glycerin; auch bei Aufbewahrung im Dunkeln. Die Lösungen hielten sich (die wässe- rige mit etwas Kreosot versetzt) über ein Jahr; weiter habe ich dieselben nicht aufbewahrt. Zur Geschichte der Tinctionen. Von Prof. Dr. G. Holzner in Freysing (Oberbayern). Die botanische Literatur ist so ausgedehnt geworden, dass es dem Einzelnen unmöglich ist, sämmtliche Original-Abhandlungen über einen I, 2. Kleinere Mittheilungen. 255 nicht erst in der neueren Zeit bekannt gewordenen Gegenstand nachzu- lesen. Es ist daher nicht zu verwundern, dass manche längst gemachte Entdeckungen in Vergessenheit gekommen sind '. Das verschiedene Verhalten einiger Gewebesysteme gegen orga- nische Farbstoffe war jedenfjills schon Saeeabat, genannt de la Baisse, bekannt. Albert von Haller (Bibliotheca botanica t. II p. 264) ent- hält folgenden Auszug aus Sarrabat's Abhandlung (Dissertation de la Seve. Bordeaux 1733): „Plantas in succum Phytolaccae demersit; color ascendit in corticem, magis tamen in fibras teneras: imbibit adeo succum uutritium cortex radicis, magis tamen partes radicum tenerrimae. Medulla nihil resorbet, et plantae ea resecta aeque bene vivunt. In ipso flore venae reticulatae colorem induunt, et folia in nervis purpura va- riantur". Hieraus ergiebt sich unzweideutig, dass Sarrabat die Verschieden- heit der Gewebe in der Aufnahme des Farbstoffes beobachtet hat. Noch weiter als dieser ging Georg Christian Reickel, Professor zu Leipzig, geboren 1727 zu Mühlhausen in Thüringen, gestorben 1771. Seine ^ Schrift De vasis plantarum spiralibus. Lipsiae ex offic. Breitkopfia 1758 war hauptsächlich der Frage über das Steigen der Säfte gewidmet. In- dess erzählt er seine Beobachtungen nicht nur über diesen Gegenstand, sondern er erwähnt auch wiederholt das verschiedene Verhalten der Ge- webesysteme und deren Elemente gegen den Absud des Fernambuk- Holzes und benützte dieses Verhalten umgekehrt zur Auf- findung der Ge fasse. So beschreibt er z. B. sein Experimentura X. (p. 34) mit folgenden Worten : „Phaseolorum atque Lupini semina in li- quorem illum rubrum submersi in illoque tamdiu reliqui , donec succi ^ turgidi mihi ad plantulae seminalis exclusionem proni omnino viderentur. Gravidorum horum seminum unum alterumque dissecans, in cortice in utrumque latus discedentia et liquore rubro tincta inveni va- scula nonnulla spiralia, quae in primis in Lupini * seminibus erant con- spicua; cuncta autem ad locum illum, ubi plantula inter lobos haeret 0 Die beiden nachfolgend genannten Schriften sind in Sachs, Geschichte der Botanik, 1875, p. 523 bei den Versuchen über die Saftbewegung erwähnt. Ebenso finden sich Auszüge in Kurt Sprengkl, Geschichte der Botanik Bd. II p. 229 u. 306 ; Emil Winckler, Geschichte der Botanik 1854 p. 152 u. 208 etc. 2) Haller (Bibliotheca botanica t. II p. 399) und G. W. Bischoff (Lehr- buch der Botanik Bd. II Th. 2 p. 576) bezeichnen mit Unrecht als Verfasser den Arzt Christopf Carl Reichel, gestorben zu Meissen 1750. 3) Im Original steht succis. *) Lapini heisst es im Originale. 256 Kleinere Mittbeilungen. I, 2. seminalis, tendebant '. In lobis trausversum dissectis praeter contextum cellulosum prorsus fere immutatum, ad utriusqne lateris marginem varia observabam puuctula rubra, quae microscopio considerata me de A^aso- rum spiraliiim in Ins praesentia reddebant certiorem. Horum viam et progressum secnndum longitndinem persecutus, ad plantulae seminalis i'adiculam ducebar, in qua corticem inter et cellulosara telam usque ad cuspidem decurrebant, alius vero horum vasorum fasciculus ad plantulae foliola eorumque costas egregie conspicuas amandabatur". Es ist somit kein Zweifel, dass Reichel die Tinction zu histologi- schen Zwecken ~ benützt hat ; und darum muss nach meiner Ansicht dessen Name in der Geschichte der absichtlichen Färbung der Zellen mit organischen Farbstoffen erwähnt werden. ') Im Original ist der Singular tendebat gebraucht. 2) Sachs (Geschichte der Botanik. 1875. p. .524) rühmt ar Reichel's Dissertation, dass sie sich „durch sorgfältige Literaturangaben und eigene phy- totomische Untersuchungen vor ähnlichen Producten jener Zeit vortheilhaft auszeichnet". I, 2. Referate und Besprechungen. 257 Referate und Bosprecluing'en. 1. Mikroskop und mikroskopische Apparate. Referent: Dr. F. Ludivicj in Greiz. Eugelmaim, Th. W., Das Mikrospectralpbotometer, ein Apparat zur quantitativen Mikrosp ectralaualyse. (Botan. Zeitg., 1884, No. 6 p. 81 — 87: Untersuchungen über die quantitativen Beziehungen zwischen Absorption des Lichtes und Assimilation in Pflanzenzellen. L Abschnitt). Die bisher gebräuchlichen Mikrospectraloculare (Sokby-Browning, Zeiss-Abbe etc.) dienten nur dazu, die Absorption des Lichtes durch mikroskopische Objecte qualitativ zu bestimmen, Hessen aber eine quanti- tative Untersuchung, eine Messung des Lichtverlustes, nicht zu. Verf., der mittels seiner Bacterienmethode au verschieden gefärbten Pflanzen- zellen einen innigen Zusammenhang zwischen der Assimilation und der Licht-Absorption nachgewiesen, hat nun einen Apparat erfunden, der auch bei mikroskopisch kleinen Gegenständen, organischen wie unorga- nischen, die Lichtsorption zu messen gestattet. Der Apparat, der sich fast an allen Mikroskopstativen anbringen lässt, ist bereits bei C. Zeiss in Jena ausgeführt worden. Er besteht aus einem oberen Theile, dem eigentlichen Spectroskop, und einem unteren, dem Spaltapparat, an dem noch Vergleichsprisma und seitlicher Beleuchtungsapparat angebracht sind. Die Spaltmechanik des unteren Theiles besteht aus zwei durch Mikrometerschraube symmetrisch beweglichen Spalthälften, deren Mittel- linien stets zusammenfallen, dem Objectspalt und Vergleichsspalt. Auf der Trommel der beiden Mikrometerschrauben sind die Spaltweiten in Einheiten von 0*01 mm abzulesen, |jl aber noch sicher zu schätzen. Das zum Zweck feinerer Einstellung auf horizontal beweglichem Object- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 2. 17 258 Referate und Besprechungen. I, 2. tisch gelegene Object wird mit Hilfe einer Ocularlupe so eingestellt, dass es in der Mitte des Objectspaltes (.s) möglichst genau an der Grenze des Vergleichsspaltes {si) erscheint. Unter den Vergleichsspalt lässt sich ein total reflectirendes Prisma schieben, das durch ein seitlich ein- geschraubtes Röhrchen mittels eines allseitig beweglichen Spiegels aus derselben Quelle wie das Object sein Licht erhält. Zur gleich- massigeren Beleuchtung von Si enthält das Röhrchen eine SammelUnse, die von der äusseren zur Aufnahme der Diaphragmen bestimmten Oeff- nung desselben ein virtuelles Bild an der Stelle des Mikroskoptubus ent- wirft, an der sich die Oeffnung des Objectivs befindet, durch die s er- leuchtet wird. Wird das Vergleichsprisma, bei dessen Gebrauch erst mittels des Spectroskops zu controlliren ist, ob das s und 5j erleuch- tende Licht (vor Einschiebung des Objectes) gleiche Zusammensetzung hat, weggelassen, so wird Si durch das unmittelbar neben dem Object vorbeigehende, vom Mikroskopspiegel ausgehende Licht erhellt, und dann ist die gleichmässige Beleuchtung leichter zu erzielen. — Das Spectroskop, welches nach Einstellung des Objectes und Entfernung der Lupe aufgesetzt wird, enthält CoUimatorlinse und Prismensystem, welch letzteres in einem um 60'' gegen die Mikroskopachse geneigten Röhrchen mit schwachem Objectiv zwei Spectra erzeugt. Diese werden durch eine Ocularlupe betrachtet und haben in den von Zeiss construirten Apparaten von der FßAUNHOFER'schen Linie a bis G eine Länge von 185 mm (erscheinen also ca. vier Mal so lang als im ZEiss-AßBE'schen Spectralocular). Zur Einengung des sehr hellen Gesichtsfeldes (bei Gaslicht können noch die stärksten Oelimmersionslinsen verwendet wer- den), zur Ablesung der Wellenlängen etc. sind zweckmässige Einrich- tungen angebracht. Die Lichtabsorption wird nun ähnlich wie bei den für makro- skopische Zwecke bestimmten Spectralphotometern aus der Breite der Spalte bestimmt, nachdem durch Aenderung der Weite von Si die In- tensität beider Spectra gleichgemacht worden ist. Da die Spaltweiten annähernd den Intensitäten Jj und J proportional sind, so findet man aus den abgelesenen Spaltweiten leicht die relative Intensität -— und damit die Grösse der Absorption des Lichtes n = — ^ — - , vorausge- setzt, dass der Lichtverlust nur auf Absorption beruht. Diese Voraus- setzung tritft zwar nicht genau zu, doch sind die Schwierigkeiten, die aus dem Verlust an reflectirtem Licht, durchs Licht hervorgerufenen Ortsveränderungen der Zellen (Oscillarieen, Naviculaceen), photokineti- I, 2. Referate und Besprecliungen. 259 sehen Bewegungen etc. erwachsen, nicht so gross und leichter zu be- seitigen, als es auf den ersten Blick erscheint. Verf. giebt noch nähere Anweisungen über die Beschaffung einer Constanten Lichtquelle, über die bei der Benutzung des Apparates zu beobachtenden äusseren Umstände und theilt eine Reihe von Versuchen (an Zellen von Bulbochaete, Kalibromat, Eisenglanz) mit, die die allge- meine Verwendbarkeit seiner Methode beweisen. Kruess, Spectral-Spalt mit symmetrischer Bewegung der Schneiden. (Cakl's Report, f. Phys. Bd. XVIII p. 217; Repert. d. analyt. Chem. Bd. II p. 17 ; Zeitschr. f. Instrumentenk. Bd. III, 1883, p. 62). Bei dem Viekordt' sehen Doppelspalt mit einer festen und einer, in zwei gesonderten Hälften beweglichen Schneide ist mit einer Aende- rung der Spaltbreite eine Aenderuug der mittleren Wellenlänge des durchgehenden Lichtstrahles verbunden. Glan und Hitpner hatten da- her die Lichtschwächung, anstatt durch Verschmälerung der einen Spalt- hälfte, durch Polarisation herbeigeführt, dabei aber andere Vortheile des Doppelspaltes aufgegeben. Daher kam man auf den Gedanken, jenen Uebelstand durch symmetrische Aenderuug der Spaltbreite, bei der die Mittellinie dieselbe bleibt, abzuhelfen, stiess aber zunächst auf technische Schwierigkeiten. Die KsuEss'sche (patentirte) Erfindung ermöglicht ohne besondere Schwierigkeiten jene symmetrische Bewegung der Schneiden. Während die beiden Spalthälften durch eine Spiralfeder genähert werden, wird eine Erweiterung durch eine Mikrometerschraube bewirkt, die in dem mit der einen Spalthälfte verbundenen Schlitten liegt, und deren Mutter sich an der anderen Spalthälfte befindet. Die symmetrische Bewegung vermittelt ein Stahlhebel, der in der Grund- platte einen festen Drehpunkt hat und längs dessen sich (durch Federn gegen ihn gedrückt) zwei Stahlachsen gleitend bewegen können, die in gleichen Entfernungen von der Drehachse in den beiden Schlitten der Schneiden befestigt sind. B, Camera lucida. Schröder, H., On a new camera lucida (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. 11 vol. III, 1883, pt. 6 p. 813). — Eine neue Camera lucida (Centralzeitg. f. Opt. u. Mechan. Bd. V, 1884, No. 3 p. 25). Um einzelne Uebelstände zu beseitigen, welche gewissen Con- structionen der Camera lucida anhaften, hat H. Schröder ein dem 17* 260 Referate und Besprecliungen. 1,2. Biuocular-Prisma von Wenham sich anschliessendes Prismensystem con- struirt, bei welchem, wenn man es als Camera lucida gebraucht, die Bewegimg des Auges — also auch die zeitweise Unterbrechung der Arbeit — keinen Einfluss auf die Zeichnung äussert und diese bei voller Uebersichtlichkeit des Sehfeldes keine Verzerrung erleidet. Das Prisma wird gebildet aus einem rechtwinkligen Prisma A B (J und aus einem rhomboidischeu Prisma DEFG^ welche durch eine sehr düuneLuftschicht von einander getrennt werden. Dieselben sind derart mit einan- der verbunden, dass die beiden Flächen B C und DE parallel verlaufen, und dieser Theil der Combina- tion gleich einer dicken parallelflächi- gen Glasplatte wirkt, durch welche die Zeichenfläche gesehen wird. Das rhomboidale Prisma ist so geschliffen, dass für den Fall als die Fläche G F senkrecht zur Achse des Mikroskopes steht, der Achsenstrahl // ohne Brechung bis nach I in der Fläche EF verläuft, von wo aus er nach J in der Fläche D G total reflectirt wird. Von diesem Punkte aus wird ein Theil des Strahles in der Richtung JK zurückgeworfen, der andere nach J' in der Fläche Ä C des rechtwinkligen Prismas durchgelassen, so dass er, in Folge der dieser Fläche gegebenen Neigung, von da aus wiederum theilweise nach K zurückgeworfen und mit dem anderen von J'aus reflectirten Theil vereinigt wird. Der Winkel bei G ist so bemessen, dass auch die äussersteu Randstrahlen des Sehfeldes H' noch ohne merklichen Lichtverlust von der Fläche D G aus nach K reflectirt werden. Durch die gedachte Anordnung kommt der Augenpunkt des Mikro- skopes unmittelbar über die Camera lucida zu liegen, so dass bei einem Ocular mit einem Bildwinkel von 30 •* das Sehfeld keinerlei Beschrän- kung erleidet und alle von demselben umfassten Einzelheiten genau nachgezeichnet werden können (was übrigens wie bekannt auch bei der ZEiss'schen und der AßBE'schen Camera lucida der Fall ist). Die Fassung des Instrumentchens ist dazu eingerichtet, um auf den Tubus aufgesteckt und durch Verschiebung auf demselben für den Augenpunkt justirt zu werden. I, 2. Referate und Besjirechungen. 261 Soll auf horizontaler Fläche ^zeichnet werden, so mnss das Mikro- skop um 45" gegen die Tischebene geneigt werden. Im anderen Fall, d. h. wenn die Achse des Mikroskopes senkrecht bleibt, muss die Zeichenfläehe eine Neigung von 45" erhalten. In beiden Fällen kommt das Papier unmittelbar unter die Camera zu liegen, und man erblickt dieses und den Zeichenstift direct, während das mikroskopische Bild auf ersteres projicirt erscheint. Ungefähr gleiche Lichtstärke von Bildfeld und Zeichenfläche wird auf gleiche Weise — am besten mittels Rauchgläser — hergestellt, wie bei den übrigen ähnlichen Zeichenapparaten. Die erforderliche Neigung des Mikroskopes, welche auch bei mit der be- treffenden Einrichtung versehenen Stativen nur dann statthaft erscheint, wenn es sich um Zeichnung eingekitteter Präparate handelt, auf der einen Seite, die im anderen Falle gebotene recht unbequem starke Nei- gung der Zeichenfläche dürften der sonst recht sinnreichen Vorrichtung wohl immerhin eine ziemliche Beschränkung für weiter gehenden Ge- brauch auferlegen. Br. L. Dippcl. Jung, H., Neuer Zeichenapparat (Embryograph) für schwache Vergrösserungen (Zeitschr. f. Instrumentenk. Bd. m, 1883, p. 65). Das Instrument wurde vom Verf. nach Rathschlägen von Dr. v. Koch construirt und von W. Emil Boeckek in Wetzlar ausgeführt. Es be- steht in der Hauptsache aus einem grossen Präparirstativ, welches mit BBtrcKE'scher Lupe und einem der Camera nach Zeiss ähnlichen Prisma versehen ist. Der Spiegel ist allseitig beweglich. Tischgrösse 100 X 120 mm. lieber dem Tisch ist zum Zweck auffallender Beleuchtung ein zweiter Spiegel angebracht, welcher sein Licht von dem ersten Spiegel empfängt. Die Brennweiten der beiden Spiegel sind so regulirt, dass bei starken Vergrösserungen noch immer das theoretisch mögliche Maximum der Beleuchtung nahezu erreicht wird. Schwächere Beleuch- tung wird durch Verstellung der Spiegel erhalten. „Namentlich hat die Spiegeleinrichtung vor den bekannten Beleuchtungslinsen den grossen Vortheil, dass das Sehfeld immer etwas matt und gleichmässig be- leuchtet wird, was bei nicht scharfen Contouren vieler Naturgegenstände die Sichtbarkeit ausserordentlich erleichtert". Das optische System liefert Vergrösserungen von 1 bis 30, Sehfeldgrössen von 65 bis 7 mm. Die Camera erfordert eine um 22" zur Tischebene geneigte Zeichen- fläche. — Zum Präpariren können seitlich am Instrument Handauflagen befestigt werden. Giltaij (Leiden). Distortion produced by camera lucida's (Amer. Monthly Microsc. Journ. Vol. IV, 1883, no. 3, p. 43). 262 Referate und Besprechungen. I, 2. Verf. verglich eine Camera nach Gbiinow und eine ältere (mit zwei Prismen) nach Zeiss, Seiner Meinung nach soll bei der Gkunow- schen Camera die Regulirung der Beleuchtung mehr Sorgfalt erfordern als bei der anderen; bei der Camera nach Zeiss soll nämlich das Auge selbst regulirend auftreten können, indem es sich etwas mehr über das Prisma oder etwas mehr seitlich über das Ocular stellt und auf diese Weise entweder mehr Lichtstrahlen von dem Papier oder von dem Mikroskop in sich aufnimmt. Verf. bestimmte auch die Bildverzerrung bei beiden Cameras mit einem % Objectiv. Da die diesbezüglichen Experimente zu einem endgiltigen Vergleich zu wenig variirt wurden, wird es genügen, zu erwähnen, dass Verf. unter den von ihm verwendeten Umständen mittels der GKimow'schen Camera zwischen beiden Seiten der Felder eine DilFerenz in der Vergrösserung erhielt von 5, während die Camera nach Zeiss eine Differenz von 4*5 gab. Giltaij {Leiden). Schröder, Chr., Zeichenapparat. (Zeitschr. f. Instrumeutenk. Bd. III, 1883, p. 80). Das Instrument besteht in erster Linie aus einem Tisch, welcher circa zweimal so breit als lang ist. Für die linke Hälfte besteht die Platte aus einer Glastafel; unter derselben wird der zu zeichnende Gegenstand mittels dazu angebrachter Vorrichtungen befestigt. Auf der Glastafel steht in senkrechter Richtung zu ihrer Fläche ein Diopter, welches an das eine Ende eines Pantographen befestigt ist. Verschiebt man das Diopter derart auf der Glasplatte, dass man den Schnittpunkt des in demselben befindlichen Fadenkreuzes den Umrissen des zu zeich- nenden Körpers folgen sieht, dann zeichnet das andere Ende des Panto- graphen diesen Gegenstand im Umrisse ab, und zwar geschieht dies auf der oben erwähnten, anderen Hälfte der Tischfläche. Die eine Hälfte des Tisches ist aber reservirt für die Bewegung des Visirinstrumentes, die andere für jene des Zeichenstiftes. Giltay {Leiden). C Die Anwendung des eJehtrischen Strotnes &u mikroskopisclien Untersuchungen, Referent: Hofrath Dr. Th. Stein in Frmikftirt a. M. Der mächtige Einfluss, welchen die ausgedehnte Entwicklung der modernen Elektrotechnik auf allen Zweigen des Wissens und Könnens gewonnen, hat sich auch auf das naturwissenschaftliche Studium , ins- besondere aber auf die bildliche Darstellung naturwissenschaftlicher Objecte erstreckt. Speciell ist es die optische Projectiouskunst, welche I, 2. Referate und Besprechungen. 263 sich des elektrischen Lichtes bedient und bei dieser wiederum die An- wendung desselben zur Darstellung mikroskopischer Präparate mit Hilfe des Projections-Mikroskops. In vielen physiologischen Instituten des In- und Auslandes wird der mit elektrischem Lichte versehene, optische Projectionsapparat schon seit mehreren Jahren zu Unterrichtszwecken benutzt, und in Wien hat man sogar am physiologischen Institute einen eigenen, mit elektrischem Lichte versehenen Hörsaal zu gleichem Zwecke gebaut, welcher kürzlich mit einigen einschlägigen Vorträgen eröffnet wurde. Aber auch zur directen Beobachtung mikroskopischer Bilder hat sich seit Erfindung des elektrischen Glühlichts die Anwendung des elektrischen Stromes bewährt. Freilich ist diese verhältnissmässig kräftige Beleuchtung nur da indicirt, wo in Folge der Anwendung sehr starker Objective ein bedeutender Lichtverlust die Definition der Bilder beeinträchtigt, sowie in solchen Fällen, wo man das Mikroskop zu raikrophotographischen Darstellungen zu benutzen die Absicht hat. Während für die mikroskopische Projectionsbildgebung im Grossen das elektrische Bogenlicht verwendet werden muss, ist für die gewöhnlichen mikroskopischen Untersuchungen bei directem Einblicke in das Instru- ment nur Glühlichtbeleuchtung verwendbar. Die jüngsthin in den ge- dachten zwei Richtungen zu Tage getretenen Anwendungen und Con- structionen bilden den Inhalt der in Folgendem zu besprechenden Mit- theilungen. Gärtner, Gr., Ueber den Nachweis des Wärmetonus der Blutgefässe mittels elektrischer Beleuchtung. (Allg. Wiener medic. Zeitg. No. 7, 1884, p. 69). Das elektrische Bildmikroskop, welches sich im Wiener physiolo- gischen Institute, woselbst Verf. an der Lehrkanzel für allgemeine experimentelle Pathologie thätig ist, als vortreffliches Hilfsmittel für den histologischen Unterricht bewährte, hat Gelegenheit gegeben, eine interessante und wichtige neue Beobachtung zu machen, welche beweist, dass das elektrische Bildmikroskop nicht nur ausschliesslich ein Behelf zum Lehren, sondern auch ein Mittel zur Forschung geworden ist. Die neue Beobachtung betrifft das Mesenterium des lebenden Frosches und das Verhalten der vom Blute durchströmten Gefässe. Ein geeignetes Präparat wurde in das Bildmikroskop gebracht und der Lichtquelle zweier Kohlenkegel, welche eine Leuchtkraft von 2500 Normalkerzen entwickelten, die auch Wärmestrahlen in grosser Menge enthielten, aus- gesetzt. Bei den betreffenden Demonstrationen wurden die Wärme- strahlen durch mehrfache Schutzvorrichtungen möglichst fern gehalten und das verdunstende Wasser continuirlich erneuert. Bei dieser Gelegen- 264 Referate und Besprechungen. I, 2. heit wurde die Beobachtung gemacht, dass, sobald man mehr Wärme- strahlen auf das Object fallen Hess, auf der dem Apparate gegenüber liegenden weissen Projectionswand die Abbildungen der Blutgefässe sich merklich veränderten und Contraction der Gefässwäude eintrat. Dass die Contraction ein Lebensvorgang der Gefässwäude sei und nicht eine durch die Hitze bedingte Verschnmipfung der Gewebe bedeute, wurde dadurch bewiesen, dass die Einwirkung der hohen Temperatur auf möglichst kurze Zeit eingeschränkt worden ist, wodurch nach einigen Minuten eine Wiedererweiterung der Gefässwäude wahrgenommen wer- den konnte. Der Umstand, dass die Circulation in den verengten Ge- fässen fortbesteht, spricht dafür, dass die Temperatur, die in solcher Weise auf die Musculatur der Blutgefässe einwirkt, nicht excessiv hoch sein kann; denn betrüge sie nur etwas über 60°, so müssten die Ei- weisskörper des Blutes gerinnen, und die Circulation würde sofort sistirt werden. Die den Aerzten wohlbekannte und besonders in der Gynäkologie angewandte hämostatische Wirkung der Wärme findet gleichfalls durch diese mittels des elektrischen Bildmikroskops gemachten Beobachtungen eine experimentelle Grundlage. Stearn, C. H., On the use ofincandescence lamps as acces- sories to the microscope. (Journ. R. Microsc. Soc. ser, II vol. III, 1883, pt. 1 p. 29). In der Sitzung der Royal Microscopical Society vom 10. Jan. 1883 hielt Herr C. H. Steakn einen umfassenden Demonstrationsvortrag über die Anwendung des elektrischen Glühlichts zu mikroskopischen Unter- suchungen. An einem zu diesem Zwecke besonders adaptirten Mikro- skope waren kleine, in der Fabrik der bekannten elektrischen Glüh- licht-Company SwAN in England dargestellte, erbsen- bis haselnussgrosse Lämpchen sowohl direct über, als unter dem Objecte angebracht. Der zuführende Strom geht vorher, um die hochempfindlichen Lämpchen nicht zu zerstören, durch einen in geeigneter Weise an dem Fusse des Mikro- skops angebrachten Spiralrheostaten, in welchem die elektrische Energie in einfacher Weise regulirt werden kann, indem ein Theil derselben beim Durchpassiren der in dem Spiralrheostaten vorhandenen Widerstände in Wärme umgewandelt wird. Die Lämpchen bilden einen Ersatz für die künstliche Beleuchtung mittels Gas- oder Petroleumlichtes und sind für Denjenigen recht geeignet, welchem eine wohlgepflegte galvanische Batterie zur Verfügung steht. van Heiirck, H., La lumiere electrique appliquee aux recherches de la micrographie. . (Journ. de Microgr. A. VII, 1883, Mai p. 244). T, 2. Referate und Besprecliungen. 265 Die in dem Journal de Micrographie von van Heükck über den oben besprochenen Gegenstand piiblicirte Arbeit enthält ausschliesslich unter Benutzung derselben Abbildungen, welche in dem Journal der Royal Microscopical Society enthalten sind, den Inhalt des Artikels von Stearn mit Beigabe einiger Notizen über die zu verwendenden Elektricitätsquellen. Einleitend spricht van Heurck über verschiedene grössere Apparate zur Erzeugung elektrischer Ströme, indem er auch hier seinen Stoff aus den verschiedensten Zeitschriften, mit bekannten Cliches versehen , zusammenstellt. Was in einem Artikel über das minutiöse Glühlicht für mikroskopische Zwecke die Schilderung und Abbildung einer nach elektrischen Pferdekräften zu beurtheilenden elektrodynamischen Maschine oder einer colossalen Accumulatoren- Batterie bezwecken soll, ist uns nicht verständlich. Für die Speisung des elektrischen Glühlichts zu mikroskopischen Untersuchungen sind eine kleine Tauchbatterie von 2 bis 3 Bechern, ev. zwei BuNSEN'sche oder GKOVE'sche Elemente vollkommen hinreichend. Will man grössere Glühlichtlampen für stärkere Vergrösserungen benutzen, so ist die Zahl der Elemente bis etwa 10 bis 12, je nach Bedarf des Lichtes, zu steigern. Stein, Th., Verwendung des elektrischen Glühlichts zu physiologischen Untersuchungen. (Elektrotechn. Rundsch. No. 3, 1883, p. 39). Obiger Aufsatz des Ref. enthält eine vorläufige Mittheilung über ein elektrisch montirtes Mikroskop, welches mit kleinen Glühlichtlampen (von C. H. F. Müller in Hamburg) versehen ist und ausserdem einen Rheostaten zur Dämpfung des Lichtes, sowie eine Einrichtung im Object- tisch enthält, mittels deren bei Hindurchtreten des elektrischen Stromes die Präparate in beliebiger Gradhöhe während der Untersuchung er- wärmt werden können. Ueber das betreffende Instrumentarium und dessen Verwendung zu mikroskopischen und mikrophotographischen Zwecken ist an anderer Stelle in dieser Zeitschrift ausführlich be- richtet worden. Voit, C. V., Verwendung der elektrischen Beleuchtung bei anatomischen, mikroskopischen und spectro- skopischen Arbeiten. (Centralztg. f. Opt. und Mech. Bd. IV, 1883, p. 206). Diese Arbeit, welche aus dem officiellen Berichte der Münchener Elektricitäts-Ausstelhmg in die Centralzeitung für Optik und Mechanik herübergenommen ist, enthält keine bemerkenswerthen Neuheiten. Voit theilt nur auf Grund der Arbeiten der internationalen wissenscliaftlichen 266 Referate und Besprechungen. I, 2. Commission der Münchener Elektricitätsausstellung mit, dass man an , Stelle einer gewöhnlichen Studirlampe eine elektrische Glühliehtlampe zu den in dem Titel erwähnten Zwecken aufstellen und als reflectirtes Licht zu jeder Art von einschlägigen Untersuchungen mit Vortheil ver- wenden könne. X>. Beleuchtungsvor7'ichtU7iffen. H(auausek), Ed., Eine zweckmässige Mikroskopirlampe. (Beilage d, Zeitschr. f. laudwirthschaftl. Gewerbe. Fachzeitung f. Waarenk., 1883, No. 6 p. 32). An der von Robert Rühe in Landsberg a. W. construirten Petro- leumlampe wird über den Glascyliuder ein conisches Metallrohr ge- schoben, mit welchem ein schräg gestellter Cylinder verbunden ist. Der letztere kann am oberen Ende durch einen Metalldeckel, an dem ab- wärts gerichteten Ende durch eine Sammellinse von geringer Krümmung geschlossen werden. Vor die Linse kann eine in verschiedenen Nuancen blau gefärbte Glasplatte geschoben werden. Als Vortheile dieser Con- struction führt Verf. an : 1) der Metallkörper hält das directe Flammen- licht ab, so dass nur die vom Beleuchtungsapparate des Mikroskopes ausgehenden Strahlen zur Geltung gelangen können. 2) Er schützt den Beobachter auch vor der strahlenden Wärme der Lichtquelle. 3) Das in den Beleuchtungsapparat des Mikroskopes gelangende Licht ist milde und gestattet selbst ein andauerndes Arbeiten bei künstlicher Beleuchtung. 4) Die bläuliche Nuancirung des Lichtes ist bei der Be- obachtung weniger störend als das gelbe Licht der offenen Flamme. J. Moelhr. Flögel, J. H. L., Mein Dunkel kästen (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 566). Schon vor längerer Zeit hat Flögel einen Dunkelkasten construirt, welcher beim Mikroskopiren grossen Vortheil gewährt und von vielen be- kannten Forschern warm empfohlen worden ist. Auch Dippel * hat in der neuen Auflage seines Handbuches den FLöoEL'schen Dunkelkasten abge- bildet und besprochen. Im Anschluss an das dort Gesagte fügt Flögel noch einige Bemerkungen über die Anwendung und Wirkung des Apparates hinzu. Die richtige Anbringung der Beleuchtungsöffnung stellt er als Hauptsache hin, dieselbe muss derart placirt sein, dass ihr oberer Rand genau in der Höhe des Mikroskoptisches liegt. Die Wirkung des Appa- >) DippEi-, Das Mikroskop Bd. I, p. 752. I, 2. Keferate und Besprechungen. 267 rates gipfelt in einer Verschärfung des Sehvermögens, welche erstens durch Abbiendung von Lichtstrahlen, die von beleuchteten Metalltheilen des Mikroskopes und von umliegenden Gegenständen in das mikrosko- pireude Auge dringen, zweitens aber dadurch erreicht wird, dass auch das ruhende Auge vor Lichteindrücken bewahrt bleibt, was für das schärfere Sehen mit dem arbeitenden Auge nicht ohne Literesse ist. Grieshach (Basel). 2. Präparationsmethoden im Allgemeinen. A. llikrotofiie und Mikrotomtechnik, Dippel, L., Boecker's, E., Neues grosses Mikrotom. (Das Mikroskop und seine Anwendung, I. Thl. Handbuch der all- gemeinen Mikroskopie. — cfr. Botan. Centralbl. Bd. XIII, 1883, p. 388). Das Instrument ist ein Cylindermikrotom mit sehr complicirter Schlittenführung, durch welche ein Zerreissen und Quetschen der Ge- webe vermieden werden soll. Zu dem Zweck laufen über die Schnitt- fläche hin zwei Schlitten, der untere in dem Tisch, welcher den Cylin- der trägt, der obere Schlitten in dem unteren. Jener erhält seine Führung durch einen Schlitz, in welchem der obere Theil des Cylinders steckt, dieser, der obere Schlitten, läuft in einer dem unteren Schlitten eingeschnittenen Coulisse. Auch der obere Schlitten besitzt einen Schlitz, welcher schräg gerichtet ist, und in welchen hinein gleichfalls der Cylinder ragt. Beim Bewegen des oberen Schlittens wird auch der untere in rechtwinklig seitlicher Richtung verschoben , und das Messer läuft dadurch in der entsprechenden Diagonale. Zum Schneiden mit freier Hand wird noch eine auf dem Schlitten zu befestigende Glas- platte beigegeben. Abgesehen von der Hebung des Präparates in einem Cylinder, worauf Referent noch in einer späteren Abhandlung speciell zu sprechen kommen wird, scheint die Schlittenführung zu complicirt, als dass sie Anforderungen, feine Schnitte zu geben, genügen kann ^ Jedenfalls ist ein baldiges Abnutzen der Führungen unausbleiblich, und damit zu- gleich das Lockerwerden der Schlitten. Was ferner den Zweck be- trifft, durch diagonale Messerführung ein Quetschen und Zerreissen der 1) Cfr. auch diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 246. 268 Referate luul Besprechungen. I, 2. Gewebe zu verhindern, so geht man solchen Vorkommnissen schon bei dem einfachen Schlittenmikrotom dadurch aus dem Wege, dass man die Klinge möglichst parallel der Richtung stellt, welche der Messer- schlitten innehält, und dass man das Messer, wenn möglich, in seiner ganzen Länge benutzt. Gottschaii (Basel). Dippel, L., Das grosse Mikrotom von Dr. C. Zeiss. (Das Mikro- skop und seine Anwendung von L. Dippel. I. Thl. Handbuch der allgemeinen Mikroskopie. — cfr. Botan. Centralbl. Bd. XIII, 1883, p. 388). Das ZEiss'sche Mikrotom hat in neuerer Zeit wesentliche Ver- besserungen erfahren, die besonders darin bestehen, dass die Klammer wie bei dem SpENGEL'schen Mikrotome in zwei zu einander senkrechten Richtungen geneigt werden kann, eine Beweglichkeit, die ein genaueres Einstellen des Präparates auf eine bestimmte Schnittrichtung ermög- licht. Auch das Messer kann gegen die Schnittfläche in beliebiger Weise geneigt werden, so dass dadurch gleichfalls einem von Histo- logen mehrfach geäusserten Verlangen Rechnung getragen wird. Ge- frierapparat wird auf Wunsch dem Instrumente beigegeben. Gottschau [Basel). Lelong's microtome. (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 5 p. 733). Der Apparat vermehrt die schon ziemlich grosse Zahl von Mikrotom - Constructionen um eine neue, die ebenso unpraktisch wie exclusiv in ihrer Anwendung ist. Die Mechanik verräth völlige Unkenntniss der neueren Fortschritte und „Dr. P. Latteux recommends the Instrument more particularly for hairs". Wie muss wohl ein entsprechendes Mikrotom for nails aussehen ? ! Gottschau (Basel). Schulgin, M., Zur Technik der Histologie (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 21; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 2 p. 298). Schulgin in Heidelberg hat nach eigenen Angaben durch den Mechaniker Jung daselbst das Messer am THOMA'schen Mikrotom der- artig construiren lassen, dass es der Länge nach bewegt werden kann. Der Vorzug dieses neuen Messers besteht darin, dass nicht immer der- selbe Theil der Schneide den Paraffinblock trifft. Als Einbettungsmasse empfiehlt Schulgin nicht reines Paraffin, sondern eine Mischung des- selben (Schmelzpunkt 55^) mit Ceresin und Vaselin. Durch diesen Zusatz wird das Brüchigwerden dünner Schnitte verhindert. Je nach der Menge des zugesetzten Ceresins oder Vaselins erhält man die Ein- bettungsmasse fester oder weicher. Grieshach (Basel). I, 2. Referate und Besprechungen. 269 Kossmaun, R., Zur Mikrotomtechnik (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 19 ; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 2 p. 308). Die früher von Giesbeecht vorgeschlagene Paraffinmethode zur Anfertigung von Schnittserien und die Durchtränkung des zu schneiden- den Objectes mit Chloroform, bevor man es einbettet, wird von Koss- MANN in Heidelberg als das beste Hilfsmittel bei der Schneidetechnik warm empfohlen. Für seine Untersuchungen an Bopyriden findet er allerdings , dass die völlige Verdunstung des Chloroforms sehr lange Zeit in Anspruch nimmt und manchmal selbst unvollkommen ist, so dass nachher im fertigen Paraffinklotz von Chloroformblasen herrührende Hohlräume zurückbleiben. Kossmann wendet daher zur Verdunstung statt des üblichen Wasserbades ein Luftbad an. Dieses besteht aus einem Eisenblechschränkchen mit gläserner Schieberthür (zu beziehen bei Desaga in Heidelberg). In dem Schränkchen befinden sich zwei Regale von Glas. Zwei Oeffnuugeu der Sclirankdecke nehmen ein Thermometer und einen Kemp - BuNSEN'schen Gasregulator für niedrige Temperaturen auf. Die Heizung geschieht durch einen mit dem Regu- lator verbundenen BuNSEN'schen Brenner. Das Luftbad ist Tag und Nacht geheizt, und es herrscht darin eine constante Temperatur von 50" C. Das eine Glasbrettchen trägt die Gefässe mit der Paraffinmischung. Kossmann empfiehlt zwei Paraffin- sorteu, die eine von 56" C, die andere von 36° C. Schmelzpunkt. Für das Gelingen der Schnitte ist es wichtig, aus beiden Sorten eine Mischung herzustellen, welche der Zimmertemperatur entspricht. Für 18" C. Zimmertemperatur ist eine Mischung von 48" C. Schmelzpunkt die beste, an heisseu Sommertagen muss man die härteste Paraffinsorte rein nehmen. In die hergerichtete Paraffinmischung wird das mit Chloroform durchtränkte Object gelegt; man lässt es je nach seiner Grösse 2 bis 3 Tage darin liegen, um die Imbibition voll- ständig zu bewerkstelligen. — Der zweite gläserne Träger im Luftbade hat den Zweck, einige Objectträger aufzunehmen. lieber eine Schellack- schicht auf denselben wird, nach früheren Angaben von Giesbrecht, Kreosot gepinselt. Dasselbe verdunstet ohne zusammenzuriunen binnen kurzer Zeit. Einstäuben und durch Feuchtigkeit hervorgerufene Nieder- schläge werden durch das geheizte Luftbad vermieden. Am Schluss seines Artikels giebt Kossmann noch an, dass man das Zurückdrehen der Mikrometerschraube am Mikrotom in wenigen Secunden dadurch be- werkstelligen kann , dass man sich eines mit geharzter Schnur ver- sehenen Fiedelbogens bedient. Die Schnur wird um den glatten Hals 270 Referate und Besprechungen. I, 2. der Schraube, zwischen den beiden am Rande gekerbten Scheiben ge- legt nnd der Bogen abwechselnd nach links mit gespannter und nach rechts mit schlaffer Schnur geführt. Grieshach (Basel). Andres, A., (xiesbreclit, W., Mayer, P., N e u e r u n g e n i n d e r Schneidetechnik (Mitth. d. Zool. Station zu Neapel Bd. IV, 1883, H. 3 p. 429). Die Verff. glauben nach reichlicher Erfahrung der Paraffinein- bettungsmethode, was auch dagegen gesagt werden möchte, vor allen übrigen Einbettungsarten die Krone ertheilen zu müssen. Um das lästige Einrollen der Schnitte zu beseitigen, haben sie einen besonderen Schnittstrecker construirt, welcher ihrer Ansicht nach dem Fr. E. SchuiiZe- schen vorzuziehen ist. Mit dem Kleinerwerden des Paraffinklotzes beim Schneiden gestalten sich nämlich die Druckverhältnisse des Gewichtes am ScHULZE'schen Schnittstrecker, weil derselbe am Objectschlitten be- festigt ist, verschieden, und eine gleichmässige Arbeit während der ganzen Dauer des Schneidens ist daher nicht wohl möglich. Der neue Schnittstrecker wird am Messer befestigt und behält stets dieselbe Stellung, welche man ihm anfangs gab, bei, so dass er regelmässig und sicher arbeitet. Die in der That höchst sinnreiche Einrichtung ist folgende : Am Messerrücken kann eine metallene Klemmvorrichtung ange- bracht werden. Dieselbe besteht aus zwei hakenförmig gekrümmten Stücken. Die hakenförmige Krümmung greift vom Messerrücken her über die Oberfläche des Messers. Je nachdem das Messer auf der Oberfläche concav oder plan ist, muss der Haken an der der Messer- oberfläche aufliegenden Partie convex oder ebenfalls plan gearbeitet sein, damit zur grösseren Festigkeit die Berührung eine möglichst all- seitige sei. Jedes der beiden Metallstücke trägt an seinem nicht ge- krümmten Theile eine Feder, welche gegen die Unterfläche des Messers drückt, so dass auf diese Weise die Klemmvorrichtung am Messer fest- hält. Der Abstand der beiden Metallstücke von einander beträgt einige Centimeter. Die beiden Metallstücke sind an der hakenförmigen Krümmung parallel der Längsachse des Messers durchbohrt, um einem Tförmig ge- arbeiteten Träger als Lager zu dienen, derselbe wird so eingepasst, dass er um seine Längsachse mit Hülfe einer kleinen Handhabe drehbar ist. Der auf die Messerschneide zulaufende Schenkel des TStückes trägt dem Gelenkstücke parallel einen in der Richtung der Querachse des Messers mehrfach durchbohrten Metallbalken. In die Löcher kann ein Metall- zapfen eingeführt werden, auf dessen der Messerschneide zugewendeten I, 2. Referate und Besprechungen. 271 Ende, unter rechtem Winkel, ein cylindrischer Stalilstab mit Hülfe einer durchbohrten Platte geschoben wird. Dieser Stahlstab bildet den eigent- lichen Schnittstrecker. Derselbe schwebt parallel der Messerschneide dicht über und vor dieser. Seine völlige Parallelstellung zur Schneide in der Verticalebene wird einfach durch Drehen seines Zapfens in dem Loche des Balkens erzielt. Zur Parallelstellung in der Horizontalen dienen zwei Schrauben, welche in dem Gelenkstücke des Trägers gegen den Messerrücken wirken ; sein verticaler Abstand von der Schneide endlich, welcher sich nach der Dicke des anzufertigenden Schnittes richten muss, wird durch eine Schraube bewerkstelligt, welche den durch- löcherten Metallbalken in der Verticalebene durchbohrt und gegen die Oberfläche des Messers wirkt. Beim Arbeiten müssen also die Schnitte zwischen der Messerschneide und dem als Schnittstrecker fungirenden Stahlstab hindurchgehen, Avobei sie durch letzteren am Einrollen ver- hindert werden. Das Gelenk erlaubt, den Schnittstrecker sammt seinem Halter mittels der Handhabe soweit zurückzulegen, dass man Messer- schneide und Stahlstab je nach Bedarf reinigen kann. Des Weiteren besprechen die Verff. einige vortheilhafte Aenderun- gen am TnoMA'schen Mikrotom. Dahin gehört zuerst eine Einschnapp- vorrichtung, welche den Zweck hat, „den jedesmaligen Betrag der Drehung an der Mikrometerschraube dem Ohre vernehmbar zu machen", um die Arbeit des Auges zu erleichtern. Alsdann hat auch der Object- halter nicht unbedeutende Abänderungen erfahren. Das zu schneidende Object kann diesen Veränderungen zu Folge jetzt in allen drei Rich- tungen des Raumes bewegt werden. Zum Schluss erwähnen die Autoren noch einige kleine Vorrichtungen, welche die Manipulationen beim P^in- betten in Paraffin erleichtern sollen. Dahin gehört ein messingenes Wasserbad, dessen Einrichtung derartig ist, dass das Hinzutreten der Wasserdämpfe an die Objecte vermieden wird. Die Paraffineinbettung geschieht nicht in Kästchen aus Papier oder Stanniol, sondern zwischen zwei geknickten, so -TlZIIii= geformten Metallbalken (Schriftsetzermetall oder Messing). Dieselben werden beim Gebrauche geschlossen auf eine Glasplatte gelegt, und ihre Wände sowie auch die letztere vor dem Eingiessen des Paraffins mit Glycerin eingerieben, um das Anhaften des- selben zu verhüten. Wird es erforderlich die Eiubettungsmasse längere Zeit in dem zur Aufnahme bestimmten Räume flüssig zu erhalten, so giesse man nach Bestreichung mit Glycerin noch dünnflüssiges CoUo- dium hinein und verdunste den Aetheralkohol auf einem Wasserbade. Auf diese Weise ist zwischen den Metallbalken einerseits, und ihnen und der Glasplatte andrerseits, ein so fester Schluss zu Stande gekommen, 272 Referate und Besprechungen. I, 2. dass, wenn der App.arat zum Flüssiglialten des Paraffins auf einem Wasserbade steht, keine Spur der Masse ausfliesst. Es verdient noch erwähnt zu werden, dass die Verbesserungen am Mikrotom, sowie der Schnittstrecker aus der mechanischen Werkstatt von R. Jung in Heidel- berg bezogen werden können. Gricshach (Basel). TlioniJi, R., Sliding microtome [Imbedding methods]. (Journ, R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 2 p. 298). Im ersten Theile der Abhandhing giebt Thoma eine Beschreibung seines schon in ViechoW''s Archiv 1881 veröffentlichten Mikrotomes und fügt dieser Abhandlung Abbildungen bei. Neu ist darin die Be- schreibung und Abbildung einer Klammer, welche auf drei Axen ge- dreht werden kann und, gleicli der von Gottschau in dem Sitzungsber. d. Phys.-med. Gesellsch. zu Würzburg 1881 angegebenen, eine viel- fachere Lageveränderung und daher auch genauere Einstellung des Objectes zur Schnittebene gestattet, als die ähnlich construirte Klammer der neuen Zsiss'schen Mikrotome. Es folgt die Beschreibung des Ein- bettens von Präparaten in Eiweiss: Eiweiss und Dotter einiger Hühner- eier werden zusammengethau und solange geschlagen, bis die Flüssig- keit gleichmässig gelb und dünnfliessend ist. In die durch ein Tuch gegossene Masse wird das schon in Alkohol gehärtete Präparat gebracht und durch Nadeln darin schwebend, aber überall von der Masse bedeckt erhalten. Die erste Härtung der Flüssigkeit mit dem Präparat muss dann in Alkoholdämpfen vor sich gehen, die 30" C. nicht überschreiten dürfen. Zu dem Zweck hat Thoma folgenden Apparat construirt: Ein flaches Wasserbad auf einem Dreifuss wird durch eine kleine Flamme erwärmt, lieber dem Wasserbade liegt eine dünne Platte, auf welcher unter einer Glasglocke die zu härtenden Präparate stehen. Dieselben sind aber nicht direct auf die Platte gestellt, sondern auf eine, ein kleines Alkoholbad bedeckende, durchlöcherte Zinnplatte. Nach wenigen Tagen ist die Härtung genügend, um sie in gewöhnlichem Alkohol fort- setzen zu können und, je nach Wunsch, durch öfteres Wechseln des starken Alkohols zu jedem beliebigen Härtegrad zu bringen. Bei mehr als 30^0. nimmt die Einbettungsmasse an Volumen zu, und es ent- wickeln sich in ihr viele Luftblasen. Alle Löcher sind in dem die Masse haltenden Kästchen zu vermeiden, da die Flüssigkeit sehr leicht durch die kleinsten Spalten rinnt; andererseits schmiegt sie sich aber auch allen Erhabenheiten und Vertiefungen des Präparates genau an, ohne dasselbe zu durchdringen. Die Schnitte lassen sich in jeder be- liebigen Dicke ausführen. Der einzige Naclitheil ist die Unmöglichkeit, das Eiweiss nach dem Schneiden vom Schnitt zu entfernen, ein LTmstand, I, 2. Referate und Besprechungen. 273 der besonders bei Schniitfärbung unangenehm ist, da dann das Eiweiss mitgefärbt wird. Bei vorherigem Durchfärben des Präparates entgeht man diesem Uebelstand, und die Einbettungsmasse bleibt fast farblos, aber nicht durchsichtig. Diese Einbettungsmethode wurde angegeben von Bunge und allmählich modificirt von Calberla und Rüge. Anders verhält es sich bei der Einbettung in flüssigem Celloidin, eine Methode, welche von Duval angegeben, von Merkel und Schiefferdecker wenig verändert wurde'. Bei dieser Methode wird das Präparat von der Einbettungsmasse durchdrungen und bleibt selbst nach dem Schneiden und Einlegen in Glycerin völlig durchsichtig, ebenso wie das aussen noch anhaftende Celloidin. Deshalb empfiehlt es sich sehr zum Studium normalen und pathologischen Lungengewebes. Es folgen Beschreibung der BüTscHLi'schen Einbettung in Chloroformparaffin und die uns schon durch KossMANN ^ bekannten Mittheilungen ^. GoUschau (Basel). Schulze, Fr. Eilll., Ein Schnittstrecker (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 100; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 3 p. 450). Verf. weist darauf hin, wie schwierig es sei, dünne, mit dem Mikrotom an in Paraffin eingebetteten Objecten entnommene Schnitte vor dem Einrollen zu bewahren. Mit Untersuchungen von Challenger-Hexactinellen beschäftigt, bei welchen es sich darum handelte, dünne Schnitte durch röhrenartige Kieselgebilde vor dem Zerbrechen durch Einrollen zu sichern, con-" struirte Schulze einen einfachen aber sinnreichen Apparat, welcher die erforderliche Abhilfe vollständig gewähren soll. Auf dem Paraffinblock, in welchem das zu schneidende Object sich befindet, ruht ein neu- silbernes Gewicht in Form einer etwa 8 mm laugen, an den Enden ab- gerundeten Walze, welche an einem, von ihrer Mitte sich senkrecht er- hebenden, kleinen runden Metallstiel befestigt ist. Dieser wird von einer röhrenförmigen Hülse umschlossen, und zwar in der Weise, dass er sich darin leicht und ohne Reibung auf- und abwärts schieben und sich drehen lässt. An die Hülse ist das eine Ende einer S förmig ge- bogenen feinen Uhrfeder gelöthet; das andere freie Ende derselben kann in einen Metallstift eingeklemmt werden, welcher behufs Befesti- gung in ein drehrundes Loch des Objectschlitteus passt. Auf die Lage des Loches und die Länge und Biegung der Uhrfeder kommt es wesent- ') Cfr. Arch. f. Anat. u. Physiol. anat. Abtbeü, 1882, p. 199. 2) Zool. Anz. 1883, pag. 19. 3) Cfr. auch diese Zeitschrift Bd. I, 1884, p. 223 ff. Zeitsclir. f. wisg. Mikroskopie. I. 2. ly 274 Referate und Besprechungen. I, 2. lieh an, wenu der Schnittstrecker sich bewähren soll. Diese Einrich- tungen sind so zu treffen, dass das Walzengewicht horizontal auf dem vorderen Theile der Oberseite des zu schneidenden Paraffinklotzes leicht, aber seiner ganzen Länge nach, aufruht. Ferner ist es noth- wendig, die Walze so zu drehen, dass ihre Längsachse der des Messers parallel läuft. Trifft beim Anziehen die Messerschneide das Paraffin, so hindert der sanfte Druck der Walze die vordere Partie des Schnittes am Einrollen und der ganze Schnitt bleibt daher eben. Der ScHüLZE'sche Schnittstrecker lässt sich an jedem Schlitten- mikrotom anbringen ; für 3 '/, Jl/l wird derselbe von dem Mechaniker Fe. Fasching in Graz, Burgergasse 13, angefertigt. Gricshach ( Basel). B. I*räparatlonsfnethod€ii. Flögel, J. H. L., Serienpräparate (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 565). Bekanntlich hat schon Giesbkecht ' eine Methode zur Auflegung von Schnittserien, welche aus Paraffineinschmelzungen der Objecte erhalten werden, empfohlen 2. Während sich die Einbettungsmasse bei dem GiESBBECHx'schen Verfahren auflösen sollte, kam es Flögel darauf an, zum Fixiren eine solche Substanz zu verwenden, in welcher die Einbettungsmasse absolut unlöslich ist. Zu diesem Zwecke bereitet sich Flögel eine Lösung von Gummi arabicum ( 1 : 20). Durch Zusatz von Alkohol beugt er der Schimmelbildung vor. Der zu verwendende, sorg- fältig gereinigte Objectträger wird in seiner ganzen Ausdehnung mit einer dünnen Schicht der Gummilösung gleichmässig Übergossen. Für das Fixirungsverfahren kommen dann zwei Methoden zur Anwendung. Handelt es sich um äusserst zarte und kleine Schnitte, so verwendet mau den Objectträger, nachdem die Gummilösung bei senkrechter Auf- stellung desselben getrocknet ist. Hat man die Paraffinschnitte auf der Trockenplatte geordnet, so haucht man vorsichtig so lange darauf, bis die dünne Gummischicht wieder flüssig wird; eine Beseitigung des Paraffins, falls eine nicht zu grosse Anzahl von Schnitten (nicht über 50) ein Präparat bilden, ist überflüssig, da der Balsam dasselbe löst. Grössere und dickere Schnitte ') GiESERECHT lu Zool. Aoz. Bd. IV, 1881, p. 484. ^) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 113. I, 2. Referate und Besprechungen. 275 werden besser gleich nach dem Uebergiesseu des Objectträgers in der noch weichen Gummischicht auf demselben geordnet. Ist mit einer grossen Anzahl von Schnitten beim ersten Verfahren, oder durch die Grösse derselben beim zweiten Verfahren zu viel Pa- raffin auf den Objectträger gelangt, so wird dasselbe vor dem Auflegen des Deckglases mittels Benzin entfernt, wobei die Schnitte ihre Lage unverändert beibehalten, und erst nach dem völligen Verdunsten des Benzins der Balsam zugesetzt. Der Gummiüberzug auf dem vom Deck- glase nicht bedeckten Räume des Objectträgers lässt sich später leicht abwaschen. Griesbach (Basel). (jJige, H., and Smith, Th., Serial microscopic sections. (The medical Student Vol. 1 No. 2, 1883, p. 14). Die Verif. stellen die in den letzten Jahren bekanntgewordenen Methoden über Schneidetechnik übersichtlich zusammen, indem sie sich dabei namentlich auf die Arbeiten von Boen (Arch. mikr. Anat. Bd. XII, 1883, p. 584), FosTEK und Sangley (Practical Physiol., 1876, p. 219), ScHAEEEK (Histology and the Microscope, 1877, p. 198), Minot (Amer. Naturalist, 1877, p. 208) Bütshli (Biolog. Centralbl. Bd. I, 1881, p. 591), Bergmann (Arch. of Med., 1881, April), Birge (Amer. Monthly Microsc. Journ. , 1882, p. 73), Whitman (Amer. Naturalist, 1882, p. 667), F. E. Schultze (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 100), Giesbrecht (Zool. Anz. Bd. IV, 1881, p. 484), Gage (Proceed. Amer. Soc. Micro- scopists, 1883), ScHÄLLiBAUM (Arch. mikrosk. Anat. Bd. XXI, 1883, p. 689), Feenzel (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 21, 51, 442), Theel- FALL (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 300), sowie auf die einschlägigen Artikel im Journ. R. Microsc. Soc, 1881 — 1883 beziehen. Sie be- ginnen mit der Einbettungsmethode und empfehlen, das Object, wenn die Schnitte hernach mit Schellack moutirt werden sollen, vorher in toto mit Kleinenberg's Hämatoxylin zu tingiren, worin man das Prä- parat 3 bis 4 Tage lässt und es dann mit Alkohol auswäsclit. Um die anzufertigenden Schnitte vor dem Einrollen zu bewahren, verweisen die VerfF. auf die Erfindungen von F. E. Schultze ^ und Giesbrecht *, haben aber auch selbst eine Art Schnittstrecker construirt, welcher in Form eines 4 mm langen, metallenen Stabes nach Art des Giesbrecht- ANDEEs-MEYER'schen am Messer befestigt wird und in derselben Weise wirkt wie jener. Soll ein Object, beispielsweise ein kleiner Organismus, ganz in Schnitte zerlegt werden, so empfehlen die Verff. dasselbe vor 0 Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 273. 2) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 270. 18* 276 Referate und Besi)rechungen. I, 2. der Einbettung sorgfältig zu zeichnen und die Entfernungen gewisser Gemarkungen, wie Herz, Augen etc. von jedem Körpereude zu be- stimmen, so dass sich der Fortschritt der Schneideurbeit von Zeit zu Zeit angeben lässt. Nachdem die Schnitte mit Hilfe der bekannten Schellackmethode auf den Objectträger befestigt und Oel und Paraffin beseitigt worden sind, empfehlen die Verff. beim Einschliessen des Ob- jectes, den Balsam nicht über die Schnitte auf dem Objectträger auszu- breiten, sondern die Unterseite des Deckgläschens damit zu bestreichen. Hierdurch wird eine Lageveränderung der geordneten Schnitte auch dann verhindert, wenn sich der eine oder andere während der vorher- gehenden Manipulationen vielleicht ein wenig gelöst haben sollte. Die Anordnung der Schnitte geschieht am besten untereinander in Parallel- reihen. Will man die von einem ungefärbten Objecte entnommenen Schnitte auf dem Objectträger färben, so muss man zum Montiren Collo- dium anwenden. Eine aus 2 g Schiessbaumwolle (wie sie die Photo- graphen gebrauchen) auf 54 cc Schwefeläther und 18 cc eines 95pro- centigen Alkohols hergestellte und filtrirte Collodiumlösung empfiehlt sich als recht brauchbar. Während nach Schäxlibaum ein Gemisch von Collodium und Nelkenöl zur Anwendung kommt, empfehlen die Verflf., diese Substanzen einzeln zu gebrauchen, für das weitere Ver- fahren wird der bekannte Weg eingeschlagen. Zum nachherigen Auf- hellen kann man ein Gemisch von 1 Th. Carbolsäure und 4 Th. Ter- pentinöl benutzen. Das Einschlussmittel bereitet man passend aus 25 g reinen Canadabalsams , 2 cc Chloroform und 2 cc Nelkenöl. Diese Mischung räumt irgendwelche dunkle Stelleu , welche vielleicht im CoUodiumhäutchen noch erscheinen mögen, hinweg. Die Verff. fügen ihrem Artikel noch die Abbildung eines der Auf- nahme der Einbettungsmasse dienenden Gefässes bei, welches sich seit einem Jahre gut bewährt hat. Dasselbe hat die Form einer Giesskanne. Durch den Deckel eines cylindrischen, metalleneu Gefässes ist in den Hohlraum desselben ein zweiter, mit Ausguss versehener, kleinerer Metallcylinder durch Löthung so eingelassen, dass die parallelen Läugs- axen der beiden Cylinder nicht zusammenfallen. Der äussere Cylinder dient als Wasserbad, der innere zur Aufnahme des Paraffins; damit beim Erhitzen die AVasserdämpfe entweichen können, trägt der als Wasserbad fungirende äussere Cylinder auf dem flachen Deckel eine Schraubendüse. In die geschmolzene (die Temperatur von 55*' C. nicht übersteigende) Einbettungsmasse wird das vorpräparirte Object in einem Drahtiietzkästchen, welches mit einer Handhabe versehen ist, hineinge- hängt und bleibt so lange (je nach der Beschaffenheit 10 bis 40 Stunden) I, 2. Referate und Besprechungen. 277 darin, bis es völlig vom Paraffin durchtränkt ist. Dann bettet man auf eine der bekannten Weisen ein. Der innere Cylinder kann durch einen Deckel geschlossen werden, um das Zudräugen der Wasserdämpfe und das Hineinfallen von Staub zu verhindern. Der ganze mit Henkel ver- sehene Apparat misst ungefähr 20 cm in der Höhe und 10 cm im Durchmesser. Griesbach (Basel). Graham, E., Ivory drop-black (Amor. Monthly Microsc. Journ. vol. n, 1881, p. 113 ; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. H vol. HI, 1883, pt. 3 p. 455). Graham gebraucht diese Farbe als Untergrund für alle opaken Montirungsmassen, und findet, dass dieselbe, geschickt angewendet, eine schöne und glatte Oberfläche darbietet. Die mit frischem Terpentinöl verdünnte Farbe trägt man mit einem Pinsel auf den Objectträger, welcher passend auf einer Drehscheibe ruht. Hat man nicht genügend Terpentinöl zugesetzt, so lässt sich die Farbe nicht glatt und gleich- massig ausbreiten und wird beim Trocknen streifig. War die Farbe zu sehr verdünnt, so muss man mehrere Schichten nach einander auftragen. Das XXX Ivory drop-black wird bezogen von Sherwin Williams & Co. Cleveland, Ohio. Grieshach (Basel). Busk, G., Paper Cells (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. IH, 1883, pt. 3 p. 453 ; cfr. Am. Monthly Microsc. Journ. vol. IV, 1883, no. 8 p. 157). Verf. hat gefunden, dass in gewissen Fällen, wo es vortheilhaft ist, eine zu starke Compression zu vermeiden, der Gebrauch von Papier- zellen für das Montiren gewisser Objecte, wie Hydroiden, Polyzoen etc. sich als recht statthaft erweist. Die Porosität des Papieres bildet aber ein Hinderniss, um in daraus verfertigten Zellen gewisse gebräuchliche Flüssigkeiten zu bringen. Man muss daher vor dem Gebrauche die Porosität beseitigen. Dies geschieht, indem man die Papierzellen eine Zeit lang in gummösen Substanzen einweicht, bis sie davon völlig durch- tränkt sind. Alsdann nimmt man die Zellen heraus und legt sie vor- sichtig auf den Objectträger, indem man Sorge trägt, dass keine Luft- blasen zwischen Papier und Glas bleiben. Als beste Durchtränkungs- flüssigkeit ist die gewöhnliche Lösung von Canadabalsam in Benzol zu empfehlen, doch vermeide man immer ganz ausgetrockneten Balsam und füge der Masse noch ein wenig Terpentinöl bei. Nachdem die Zellen völlig getrocknet, lässt sich etwaiger überschüssiger Balsam mit Benzol und Spiritus entfernen. Zur besseren Anheftung beschwert Busk dieselben durch ein kleines von kurzen Stäben gestütztes Bleigewicht. Dieses Verfahren erleichtert das Reinigen der Ecken und Ränder des 278 Referate und Besprechungen. I, 2. Deckglases und die Anwendung irgend eines Firnisses, um das Deck- glas zu fixiren und Luftzutritt zu verhüten. Nach einigen Tagen kann man das Präparat einschliessen. Wendet man zu diesem Zwecke Ziuk- weiss an, so wird es erforderlich, den Kitt mit einer Schicht von Gummi arabicum zu bestreichen, weil das Zinkweiss sonst unter das Deckglas dringt. GriesbacJi (Basel). Born, G., Die Plattenmodellirmethode (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXII p. 584—599). Die genannte Methode ist schon im Jahre 1877 gelegentlich der Deutschen Naturforscher- Versammlung zu München demonstrirt worden, sie hat sich inzwischen in Arbeiten des Autors selbst, ausserdem in solchen von Swikski, Stöhk, Ahlbokn u. A. bewährt ' ; einige der von Stöhr nach ihr gefertigten Modelle sind bereits durch den bekannten Modelleur Ziegler in Freiburg käuflich zu beziehen. Ein mittels des Mikrotomes in Schnitte von möglichst gleichmässiger Dicke zerlegtes Object wird in vergrössertem Maassstabe in der Weise reconstruirt, dass zunächst die einzelnen Schnitte nach Camera-Zeichnungen aus Wachstafeln nachgebildet werden, deren Dicke zur Schnittdicke genau in dem der Zeichnung zu Grunde gelegten Grössenverhältniss steht; danach werden die so erhaltenen Wachsplatten aufeinander geklebt und so zum plastischen Modell vereinigt, beispielsweise in 40facher Ver- grösserung, wenn Schnitte von Yao ^^ Dicke aus 2 mm starken Tafeln nachgeformt wurden. Wir übergehen die detaillirten Angaben Born's über die vorbereitenden Manipulationen, Härten, Färben, Schneiden, Aufrollen und Aufkleben der Schnitte, Born selbst hebt hervor, dass hierbei die verschiedensten Wege das gleiche Ziel erreichen, und be- schränken wir uns daher auf die speciell mit dem Modelliren zusammen- hängenden Handgriffe. Vor Anfertigung der Schnitte ist das ganze >) Literatur in : Born, Ueber die Nasenhöhlen und den Thränennasengang der Amphibien ; (Morphol. Jahrb. Bd. II p. 578 — 580). — Die Nasenhöhlen und der Thränennasengang der amnioten Wirbelthiere I und lU (1. c. Bd. V und Bd. VIII) (Abbildimg von Modellen). Desgl. in : Ueber die Derivate der embryonalen Schlundbogen etc. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXII Heft 2). Weitere Abbil- dungen (aus der Entwicklungsgeschichte des Schädels) sind geliefert von Stöhk (Zeitschi-, f. wissensch. Zool. Bd. XXXin und XXXVIII; Jubiläumsfestschr. d. Würzb. med. Facultät 1882, Bd. II). Ahlborn, Untersuchimgen über das Gehirn der Petromyzonten (Zeitschr. f. wissensch. Zool. Bd. XXXIX p. 191 — 293). — Weitere Benutzung fand die Methode durch Swirski, Untersuchungen über die Entwicklung des Schultergürtels etc. des Hechtes, (Diss. Dorpat 1880) und UsKow, Ueber die Entwicklung des Zwerchfelles ete. (Archiv f. mikrosk. Anat. Bd. XXII p. 157). I, 2. Referate und Besprechungen. 279 Object in Profilansicht bei der dem Modell zu gebenden Vergrösserung zu zeichnen; man kann die Umrisse aus Pappplatten ausschneiden, welche bei dem späteren Aufthürmen der Platten eine gute Grundlage abgeben. Vor dem Schneiden wird das Präparat auf einem bereits in die Klammer des Mikrotomes eingespannten Blocke fixirt; es muss vorher bereits das Messer eingeschraubt und die freie Fläche des Blockes mit dem- selben hergestellt sein, damit sie genau der späteren Schnittebeue ent- spricht. Zur Aufstellung des Präparates bilden ein nützliches Hilfs- mittel kleine Flächenwinkel, bestehend aus zwei quadratischen an einer Kante mit einander verbundenen Plättchen von 6 (auch 8 oder 10) mm Seite ; auf die Aussenfläche der Plättchen sind in gleichen Abständen je drei den beiden Seitenpaaren parallele Richtungslinien eingravirt ; man stellt entweder den Winkel auf die Schnittfläche des Paraffinblockes und fixirt das Präparat durch Auftupfen von Wasser so, dass die senkrecht zu treffende Axe einer der Linien parallel steht ; oder man befestigt zuerst das Präparat unter Benutzung der Linien auf dem Winkel, stellt diesen auf die Schnittfläche , umgiesst das Object mit Masse und löst nun den Winkel, nöthigenfalls unter leichter Erwärmung, von aussen ab. Man schneidet zweckmässig nicht dünner als '^s mm; muss man aus irgend einem Grunde feiner (z. B. '^o mm) schneiden, so kann es vortheilhaft sein, nur jeden zweiten Schnitt, natürlich in doppelter Dicke nachzu- formen, da man sonst entweder sehr viele Scheiben erhält oder mit sehr dünnen Platten arbeiten muss, je nachdem man mit starker oder schwacher Vergrösserung arbeitet. Zum Zeichnen der Schnitte ist die Camera nöthig; um genau die gleiche Vergrösserung jedesmal einhalten zu können, muss der Auszug des Tubus in der richtigen Höhe festge- stellt werden durch Einfügen von Metallstreifen von entsprechender Länge zwischen die vorspringenden Ringe beider Tubustheile. Man ent- wirft die Zeichnung in einem Act auf Papier zu dauernder Aufbewah- rung und auf die Wachsscheiben, indem man das Zeichnungsblatt auf die Wachstafel legt, zwischen beide aber ein Blatt blauen Copirpapieres einlegt. Die Vorschriften für die Herstellung der Wachsplatten ergeben sich aus dem specifischen Gewicht des Wachses (0'96— ü'97, beziehungs- weise nach Zusatz von etwas Terpentin 0-95) und dem Volumen (Fläche mal Dicke) der gewünschten Platte ; Bokn giesst z. B. zur Herstellung von Platten von 2 mm Dicke 118 g (genau 177*99 = 124-2 cm) in eine Schale von 62*100 Qram Fläche, letztere ist vorher etwa 1% cm hoch mit kochendem Wasser gefüllt; sobald das Wachs zu erstarren beginnt, wird es am Rande von den Wänden der Schale abgeschnitten, weil sich sonst dasselbe in zu grosser Dicke dort ansammeln würde ; auch 280 Referate und Besprechungen. I, 2. ohnedies sind die Ränder der Platte immer etwas dicker als der zur Verwendung gelangende mittlere Theil; der Fehler ist indessen sehr unbedeutend (auf 60 Platten kaum 1 mm). Die Platten werden schliess- lich aufeinander geschichtet, wobei die Einhaltung der richtigen Stellung mittels der vorher aufgenommenen Pappdeckel-Ausschnitte erleichtert wird. Weitere kleine Erleichterungen ergeben sich von Fall zu Fall je nach dem speciellen Bedürfniss: man wird bei manchen Objeeten anfangs Wachs aussparen an Stellen, die später als Höhlungen frei zu machen sind, um während des Modellirens bestimmte Theile zu fixiren. Feine Spalten lässt man im Modell weiter als der Wirklichkeit entspricht auftreten, indem man das Epithel beim Anfertigen der Zeichnung weglässt. Die Verbindung der Platten geschieht durch Anschmelzen der Randflächen mittels des heissen Spatels; zweckmässig ist es, vorher die Ränder durch Bestreichen mit Terpentinöl zu erweichen. FJesch (Bern). Gage, S. H., Cataloguing,labelling and storingmicroscop- ical preparations (Proceed, Amer. Soc. Microscopists. Chicago Meeting 1883 p. 169—174). Die in obiger Abhandlung mitgetheilte Methode ist aus dem prak- tischen Bedürfnisse des Verf. hervorgegangen und besitzt manches Eigenartige. Wir wollen dieselbe daher an dieser Stelle kurz skizziren, obwohl ähnliche, mehr oder minder abweichende Veranstaltungen ziemlich allseitig bei den Mikroskopikern in Gebrauch sein dürften. — Was zu- nächst die Bezeichnung der einzelnen Präparate betrifft, so giebt Gage folgendes Schema: Beispiel : 1. Nummer des Präparates und Datum i N. 96. 1880. der Anfertigimg 1 2. Den allgemein bezeichnenden Namen Nervenfasern. 3. Name des Objects, von welchem Katze, das Präparat entnommen wurde Das, was der Bezeichnung an Vollständigkeit abgeht, hat das Ver- zeichniss nachzuholen, welches in Form von einzelnen, je einem Präpa- rate gewidmeten Karten von der Grösse der gebräuchlichen Postkarten angelegt werden soll und in einem entsprechenden Etuis aufbewahrt werden kann. Werden die einzelneu Karten alphabetisch geordnet, so hat dies den Vortheil, dass diejenigen für neu hinzukommende Präparate leicht eingefügt, andere, welche sich auf zu Grunde gegangene oder be- seitigte Präparate beziehen, entfernt werden können, — Für den Inhalt der einzelnen Karten wird folgendes Schema gegeben: I, 2. Referate und Besprechungen. 281 Beispiel : 1. Allgemeine Bezeichnung. 2. Nummer des Präparates. Datum seiner Anfertigung und Name des Präparators. 3. Nähere Bezeichnung des Präparats. 4. Besondere Eigenart des Präparates. 5. Die Methode des Härtens, der Ma- ceration etc. 6. Die besondere Art der Präparation für die Beobachtung (ob Schnitt etc.) 7. Färbeflilssigkeit und zur Färbung erforderliche Zeit. 8. Aufhellungs- und Autbewahrungs- flüssigkeit, Kittsubstanz 9. Objectivsysteme, welche zur Beob- achtung des Präparates zu ver- wenden sind. 10. Bemerkungen in Bezug auf die betreffende Litteratur, Abbildun- gen etc. Nervenfasern. Nr. 96. 21. März 1880. S. H. Gage. Isolirte Fasern des Rückenmarks der Katze (Felis doraestica). Das Präparat zeigt den Achsencylinder und die RANviEi;'schen Knoten gut. 24 Stunden in 25procentigem Alkohol macerirt. Auf dem Objectträger mittels der Na- del isoLirt. üeber Nacht (12 Stunden) in Pikro- carmin gefärbt. Mit Terpentin und Carbolsäure auf- gehellt ; auf bewalu-t in Canadabalsam (Lösung in Chloroform); verkittet mit ScheUaklösung. Objective mit einer Brennweite von 18 mm und stärkere. Quain's Anatomie Bd. II p. 141 und Ranvier, Traite d'histologie p. 723. Zur Einordnung der Präparate empfiehlt Gage Schränkeben mit Schiebladen und stellt an dieselben folgende Bedingungen: 1. Schutz vor Licht und Staub; flache (horizontale) Lage der Präparate. 2. Jedes Präparat soll innerhalb der Schieblade eine besondere Abtheilung haben und in dieser auf einer Unterlage ruhen, welche in der Mitte hohl, an den beiden Enden aber abgeschrägt ist, damit wenn man auf das eine Ende des Objectträgers drückt, das andere Ende sich soweit erhebt, dass man es leicht fassen kann. 3. Jede Abtheilung soll ihre besondere Nummer erhalten, welcher die Nummer des einzulegenden Präparates gleichlauten muss. 4. Die Schiebladen sollen von einander durch Zwischen- leisten getrennt sein, aber doch so nahe beisammen stehen, dass die Objectträger nicht herausfallen können, wenn das Schränkchen geneigt oder umgeworfen wird. Jede Schieblade soll ferner an der Stirnseite links in römischen Ziffern ihre Ordnungsnummer, rechts in arabischen Ziffern die erste und letzte Nummer der darin enthaltenen Präparate tragen. Die vorgeschlagene Einrichtung ist in manchen Beziehungen recht zweckmässig. Im Ganzen und Grossen aber dürften die vom Ref. seiner- zeit ' vorgeschlagenen und seitdem in einzelnen Aeusserlichkeiten mehr- ') DippEL, Das Mikroskop etc. 1. Aufl., 1867, p. 488, Fig. 240. 282 Referate und Besprechungen. I, 2. fach abgeänderten Präparatenkästchen ihren Zweck ebensogut ent- sprechen, während deren Preis sich weit billiger stellt. Dr. L. Dippel. 3. Präparationsmethoden für specielle Zwecke, A, Frotozoen. Blanc, H., Encore une methode pour conserver et colorer les Protozoaires (Zool. Anz. Bd. VI, 1883, p. 22; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 2 p. 293; Am. Monthly Microsc. Journ. vol. IV, 1883, p. 69). Verf. fügt den bereits vorhandenen Conservirungsflüssigkeiten für Protozoen noch eine neue hinzu. Sie besteht aus : 100 Tbl. Acid. picr. conc, 2 Thl. Acid. sulfuric, 600 Tbl. Aq. dest. Diese Lösung eignet sich gut für die Conservirung der Larven von Echinodermen, Medusen und Spongien ; soll sie auch für Rhizopoden und Infusorien Verwendung finden, so füge man auf 15 cc derselben noch 2 bis 3 Tropfen einer Iprocentigen Essigsäure hinzu. Die letztere bewirkt ein scharfes Hervor- treten der Kerne und Kernkörperchen, ist aber in geringer Menge ohne störenden Einfluss auf das Protoplasma. In dieser Weise präparirt, ist die neue Mischung der von Ceetes und Laxdsbekg angewandten Osmium- säure deswegen vorzuziehen, da sie, weil die Organismen vollständig ge- tödtet oder fixirt, eine viel sicherere und gleichmässigere Tinction zu- lässt, wobei ein Auswaschen überflüssig erscheint, wenn man Sorge trägt, ein passendes Färbungsmittel auszuwählen. Blanc fixirt die Thiere nicht früher, als bis sie mit dem Deckgläschen bedeckt werden sollen, ein Verfahren, welches auch Kokschelt empfohlen hat. Er hält seine Methode für sehr A^ortheilhaft und leicht, und die Organismen werden, was Landsbekct auch sagen möge, auf diese Weise ebenso gut mit der Säure imprägnirt, als hätte man die Operation in einem Uhr- schälchen vorgenommen. Dieses Verfahren ist auch deswegen sehr vortheilhaft, weil man es nicht immer mit einer grossen Zahl von Orga- nismen, oder mit solchen Infusorien und Rhizopoden zu thun hat, welche so gross sind, dass man sie mit Hülfe der Pipette bequem auf dem Object- träger isoliren könnte. Die Einwirkungszeit der Lösung richtet sich nach der Grösse und Anzahl der Objecto, welche sich unter demselben Deck- gläschen befinden, doch darf man erst dann eine erfolgreiche Fortsetzung der Präparation erwarten, Avenu alle eine gelbliche Färbung zeigen. I, 2. Referate und Besprechungen. 283 Darauf wird so lange 80procentiger Alkohol zugesetzt, bis die Färbung ganz verschwindet; nachdem man alsdann 96procentigen Alkohol mid schliesslich absoluten Alkohol zugesetzt hat, sind die Organismen gut gehärtet, und man kann zur Tinction schreiten. Als Tinctionsmittel zieht Blanc dem Pikrocarmin eine alkoholische Lösung von SafFranin vor, welche er dadurch erhält, dass er 5 g Saffranin in 15 cc absolu- tem Alkohol löst, einige Tage stehen lässt und mit dem halben Volumen destillirten Wassers verdünnt. Der Vorzug des Saffranins vor dem Pikrocarmin besteht darin, dass es schneller färbt, und dass man die Färbung reguliren kann, je nachdem man die Kerne oder das Plasma hervortreten zu lassen wünscht. Nachdem die Objecto durchgefärbt, wäscht man mit SOprocentigem Alkohol, welcher einen Theil des Farb- stoffes extrahirt; erneuert man denselben aber mehrfach, so tritt ein Moment ein, in welchem der Farbstoff nicht mehr extrahirt wird, sondern fixirt erscheint. Dann versetzt man mit absolutem Alkohol und hellt mit Nelkenöl auf. Dadurch, dass man nach kürzerer oder längerer Zeit die Objecto vom Alkohol in das Nelkenöl bringt, kann man die Tinction derartig gestalten, dass das Plasma, mehr oder weniger intensiv gefärbt, die Kerne umgiebt. Blanc versichert, dass die Farbe sehr haltbar sei und in Canada- balsam nicht ausbleiche. Er fügt zum Schluss hinzu, dass die Methode sich auch zur Conservirung von marinen Nematoden verwenden lasse, deren dicke Chitiuhaut kein Hinderniss für die Färbung mit Saffranin bildet. Gricsbacli (Basel). Waddiilgton, Henry, J., The action of Tannin on the cilia ofinfusoria, with remarks on the use of Solution of sulphurous oxide in alcohol (Journ. R. Microsc. Sog. Ser. II vol. III, 1883, pt. 2 p. 185; cfr. Am. Monthly Microsc. Journ. vol. IV, 1883, p. 121). Um Infusorien zum Zwecke mikroskopischer Beobachtung gewisser- massen zu züchten, legt WADDrNGTON kleine Stücke eines sehr harten Zwiebacks in das Infusorien enthaltende Wasser und suspendirt die- selben durch Confervenfäden. Nach einiger Zeit bilden die Brodkrumen einen Kern, um welchen sich eine reiche Vegetation gruppirt. Diese scheint ein geeigneter Boden für die Entwicklungsfähigkeit gewisser Infusorien zu sein. Hebt man von dem Fadenconvolut etwas aus dem Wasser, so haften die Fäden natürlich fest zusammen und bilden so zu sagen ein Fanguetz für Alles, was sich zwischen ihnen befindet. Bringt man von der Fadenmasse einiges auf den Objectträger und breitet die- selbe ein wenig mit Nadeln aus, so kann man die gefangenen Infusorien, 284 Referate und Besprechungen. I, 2. deren Bewegung durch das Fadenwerk verzögert wird, verhältnisgmässig leicht beobachten, wobei sich wegen der grossen Feinheit der einzelnen Fadenenden sogar recht starke Vergrösserungen verwenden lassen. — Als Sammelpunkt für die Vegetation der Wasserpflanzen wähle man jedenfalls harten und gut ausgebackenen Zwieback, da sonst die Krumen zerbröckeln. Während man auf diese Weise Infusorien namentlich in Aquarien und grösseren Wasserbehältern züchtet, verfährt man, wenn kleinere Gefässe verwendet werden sollen, besser so, dass man in das Wasser einfach von Zeit zu Zeit einen Brei von Confervenfäden oder Anacharisblättern einträgt. Verf. beschreibt alsdann zwei Methoden , mit deren Hülfe er, namentlich bei Paramaecium Aurelia, in ausgezeichneter Weise den Cilienbesatz der Beobachtung zugänglich gemacht hat. Die eine Methode besteht in der Anwendung von Acidum tannicum. Alle bisher zur scharfen Darstellung der Cilien empfohlenen Mittel sollen der Wirkung des Tannins bei weitem nachstehen. Bringt man einen Wassertropfen mit Paramaecien auf einen Objectträger und dicht daneben einen Tropfen der Tanninlösung, so hört in dem Augenblicke, wo beide Tropfen zu- sammenfliessen, die Bewegung der Thierchen je nach dem Concentrations- grade des Reagenzes ganz auf oder erscheint geschwächt. Gewöhnlich verhalten sich die Thiere ganz ruhig und die Cilien können, prachtvoll entfaltet, wahrgenommen werden. Verf. kennt keine Zeichnung noch Beschreibung, welche das Aussehen einigermaassen wiedergegeben hätten ! Wandte man eine schwache Tanninlösung an, so wurde die Beweglich- keit der Cilien nicht sofort sistirt, und sie erschienen alsdann oftmals gekreuzt und geschrumpft, wählte man die Tanninlösung concentrirter, so traten derartige Zustände nicht ein. Bei Anwendung zu concentrirter Lösung erschienen die Cilien ebenfalls verzerrt und oft zusammenge- ballt der Körperoberfläche anhaftend. Waddington fand das durch die Tanninwirkung hervorgerufene Aussehen der Infusorien so überraschend, dass er im ersten Augenblicke auf den Gedanken kam, die vermeint- lichen Cilien seien Confervengeflecht. Indessen das momentane Hervor- treten der betreff'enden Gebilde und ControUversuche mit Osmiumsäure, welche bekanntermaassen die Cilien auch schön sichtbar macht — wenn auch nicht in dem Grade wie Tannin — räumten jeden Zweifel an der wirklichen Ciliennatur hinweg. Die Hauptwirkung des Tannins auf die Cilien besteht in einer Consistenzveränderung und Aufhellung. — Da die rhythmischen Pulsirungen der Vacuolen im Innern des Infusorien- leibes von Waddington auch nach der Einwirkung des Tannins noch beobachtet wurden, so glaubt er nicht, dass dasselbe, wenn nicht gar I, 2. Referate und Besprecliungen. 285 zu conceutrirt, eiue tödtliche Wirkung besitzt ; nur die Cilien werden so zu sagen paralysirt. Am besten eignet sich für die Versuche eine Lö- sung von Tannin in Glycerin (1 : 4). Alkohulische Lösungen sind da- gegen wegen des heftigen Austausches zwischen Wasser und Alkohol nicht zu empfehlen. An Stylonychia verläuft die Wirkung des Tannins nicht so günstig wie au Paramaecium. Cilien, welche Borstenform be- sitzen, verhalten sich dem Tannin gegenüber resistenter. Eine zweite Methode, die Cilien deutlich sichtbar zu machen, be- steht in der Anwendung einer alkoholischen Lösung von Schwefeldioxyd. Fügt man nur die geringste Spur solcher Lösung zu dem Lifusorien ent- haltenden Wassertropfen, so erblickt man nach dem Austausch der Flüssigkeiten die Thiere mit deutlich hervortretendem Wimperkleid. Nahm man die Lösung zu concentrirt, so erfolgte momentaner Tod und damit völlige Ruhe ; wählte man dieselbe aber schwächer, so wurden die Thiere nicht getödtet, sondern nur bewegungslos, doch das Wimper- spiel selbst blieb unbeeinträchtigt. Beim Verdunsten der Flüssigkeit tritt überdies die Insertion der Cilien am Körper auf das schärfste her- vor, und losgelöste Cilien erscheinen raphidenähnlich. — Waddington fügt noch die Bemerkung bei, dass sich die wässerige oder alkoholische schweflige Säure auch fernerhin gewiss als sehr brauchbares Reagenz in der Mikroskopie bewähren werde. Griesbach (Basel). JB. CoelenterateUf Echinodernienf Würmer, Braiiu, Max, Die thierischen Parasiten des Menschen nebst einer Anleitung zur praktischen Beschäftigung mit d e r H e 1 m i n t h 0 1 0 g i e f ü r S t u d i r e n d e u n d A e r z t e. Würzburg. (Adalbert Stuber's Verlagsh.) 233 pp. m. 72 Holzschn. 6 M. Dem Zwecke dieser Zeitschrift entsprechend kann auf den Inhalt dieses zweckmässigen und hübsch ausgestatteten Buches nur so weit ein- gegangen werden, als dasselbe mikroskopisch-technische Angaben enthält. Bbaun hat seinem Buche eine werthvolle Beigabe angefügt durch An- reilmng kurzer Anweisungen zu mikroskopischen Studien an typischen Formen aus den verschiedenen Gruppen der Schmarotzer. Geeignete Fundorte leicht erhältlicher Arten, Culturmethoden und Behandlung zur Vorbereitung für die mikroskopische Untersuchung sind so zu- sammengestellt, dass man über Beschaffung imd Behandlung des zum Selbststudium nöthigen Materials leicht orientirt sein wird; bei den Arthropoden ist nur die Conservirung intacter Thiere berücksichtigt. 286 Referate und Besin-echungen. I, 2. Die mitgetbeilteu Methoden sind zumeist die gewöhnlichen. Bemerkens- werth scheint uns die Empfehlung der Glycerin-Gelatiue als Einschluss- mittel für ungefärbte Präparate von kleinen Nematoden in folgende Mischung: Gelatine 20*0, Glycerin 100*0, Wasser 120*0, Carbolsäure 2*0. Die Präparate werden unter dem Deckglase mit schwachem Alko- hol (anfangs 25, dann 40 Proc.) behandelt (eventuell nach Vorbehand- lung mit MüLLEß'scher Flüssigkeit und destillirtem Wasser) ; dieser wird durch Zufügen von mit gleichen Theilen Wasser verdünntem Glycerin an den Rand des Deckglases allmählig verdrängt ; durch Verdunsten des Wassers bleibt schliesslich reines Glycerin zurück. Dieses wird nach Aufheben des Deckglases abgetupft, und durch einen Tropfen der er- wähnten, durch Erwärmen verflüssigten Gelatine ersetzt. Ein Lackein- schluss ist nicht unbedingt nöthig. Flescli {Bern). Graf Zeppeliu, Max, Ueber den Bau und die Theilungs- Vorgänge des Ctenodrilus monostylos. nov. spec. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XXXIX p. 615—652). Präparate des genannten kleinen Anneliden stellte Graf Zeppelin in der Weise her, dass er die Thiere durch eine Minute langes Ein- legen in auf 70" erhitzte Sublimatlösung tödtete ; nach dem Auswaschen kommen dieselben in TOprocentigen Alkohol, darnach zur Färbung in Pikrocarmin (nach WEiGEUT'scher Vorschrift) ' oder auch Boraxcarmin oder Cochenille, zwei Minuten für in toto zu untersuchende Thiere, 4 bis 5 Stunden für solche, die geschnitten werden sollen. Weitere Be- handlung zum Einschluss in Balsam oder zur Einbettung in Paraffin in gewöhnlicher Weise. Flesch {Bern). C Arthro2)0(7en, Referent: Dr. Th. Steck in Bern. Diminock, H., Collectingtogether scales oflnsects and other minute objects upon one place on a slide. (Psyche vol. IV, 1883, p. 71. — cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 6 p. 920—921). Um Insectenschuppen oder andere kleine Ojecte auf einer mög- lichst enge begrenzten Stelle des Objectträgers zu besammeln, bringt DiMMOCK besagte Objecte in einem Tropfen einer rasch verdunstenden Flüssigkeit, und hält Verf. Chloroform am geeignetsten. Die Schuppen 1) Vgl. „Zur Technik der mikroskopischen Bacterien-Untersuchung" in ViKCHOAv's Archiv Bd. LXXXIV p. 275-315. I, 2. Referate und Besprechungen. 287 werden dabei von einer Art Wirbelwind erfasst und setzen sich beim Verdunsten der Flüssigkeit auf einer, durch Neigen und Schütteln zu bestimmenden Stelle des Objectträgers nieder. Koestler, Max, Ueber das Eingeweidenervensystem von Periplaneta orientalis. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XXXIX, 1883, H. 4 p. 572—595). Verf. schlug bei Untersuchung des Eingeweidenervensystems von Insecten folgendes Verfahren ein: Nachdem er noch ganz frische, zu untersuchende Theile des Thieres zwei bis drei Minuten über Osmium- säure in Substanz gehalten, hierauf abgewaschen hatte, erfolgte die Ueberführung in schwachen Alkohol und dann die Färbung. Für diese passte nach der vorausgegangenen Räucherung am besten Pikrocarmin, in welchem Verf. das Object 24 Stunden zum Behufe der besseren Durchfärbung, meist im luftleeren Raum unter der Glocke einer Luft- pumpe, liegen Hess. Hierauf vollständige Härtung. Nachdem vom ge- färbten und gehärteten Object jede Spur von Alkohol durch sorgfältiges Auswaschen entfernt war, wurde dasselbe in Eiweiss, das durch Filtra- tion von allen Fasern und Schlieren befreit wurde, gelegt. Nach Ver- lauf von etwa zwei Stunden wurde das Eiweiss coagulirt und zwar, um eine möglichst gleichmässige Coagulation herbeizuführen, zuerst durch schwächereu Alkohol, dann durch absoluten, der bis 40° C. erwärmt wurde. Nachdem so die Eiweissimbibition vorüber war, konnte das Object in gewöhnlicher Weise mit Nelkenöl behandelt, in Paraffin ein- gebettet und dann mit dem Mikrotome geschnitten werden. Chesllire, F., Cutting sections of probosces of lioney- feeding Insects. (Proceed. Entomol. Soc. London, 1883, p. XIX. — cfr. Journal R. Microsc. Soc. Ser. II vol. IH, 1883, pt. 6 p. 917). Verf. empfiehlt das zu untersuchende Insect einige Zeit fasten zu lassen und dann mit einer Mischung von Honig imd Gelatine, die mit einem intensiven Farbstoffe versetzt ist, zu füttern. Nachdem das Thier einige Nahrung aufgenommen, ist demselben rasch der Kopf wegzu- schneiden ; dieser wird in Gelatine eingebettet und hernach geschnitten. Der Verlauf des Nahrungscanales ist dann leicht aus der Gegenwart des Farbstoffes zu erkennen. Green, S., On an easy method ofpreparing Insects for the microscope. (Journal Quek. Microsc. Club vol. I, 1883, p. 224 p. 253. — cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pt. 5 p. 730). Verf. giebt einige praktische Handgriffe, Insecten und Spinnen in 288 Referate und Besprechungen. I, 2. gewüuschter Haltung der Beine und Flügel aufzubewahren. Die Thiere werden mit Balsam auf dem Objectträger festgeklebt und dann in Alko- hol conservirt, nachher in Terpentin gebracht und schUesslich in Canada- balsam eingeschlossen. — Bei Spinnen wird die richtige Haltung der Beine durch ein auf dem Objectträger befestigtes Korkscheibchen, worin Nadeln eingesteckt werden können, bewerkstelligt. _D. Vertebrafen. Gage, S. H., Observations on the fat cells and connective- tissue corpuscles of Necturus [Menobranchus]. (Proceed. Amer. Soc. Microscopists Vol. IV Buffalo 1882 [erschienen 1883]). Gage hat zu Untersuchungen über das interstitielle Bindegewebe und die Fettkörper des Menobranchus im wesentlichen die Methoden Ranviek's benutzt. Aus den von ihm mitgetheilten Vorschriften u. s. f. seien hier einige, soweit dem Ref. bekannt, nicht in der Literatur ent- haltene, wenngleich gewiss auch von Anderen benutzte angeführt: Die vorläufigen makroskopischen Präparationen werden am curarisirten und chloroformirten Thier vorgenommen ; sollen die Blutgefässe injicirt wer- den, so ist das Thier vor der Präparation bezw. Chloroformirung 2 bis 3 Stunden iu Wasser von 20° C. zu setzen. Die Glascanüleu, welche zur Einstichinjection behufs Hervorrufung eines künstlichen Oedemes (nach Ranviek's Empfehlung) dienen, versieht Gage durch Aufblasen mit einer kugeligen Erweiterung etwa 3 cm vor der Spitze. — Vor dem Lackverschluss der Glycerinpräparate empfiehlt sich ein provisorischer Einschluss mit kaltflüssigem Leim, der am Glase auch dann haftet, wenn es mit Glycerin benetzt ist. Man bereitet den Leim selbst nach folgen- der Vorschrift: 75 g Leim stehen 3 Tage mit 100 cc Essigsäure an einem warmen Ort; danach werden je 100 cc Hg 0 und Alkohol (95 %) zugesetzt. Flesch {Bern). Cyl)ulsky, Irau B., Das Nervensystem der Schnauze und Oberlippe von Ochsen. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. XXXIX H. 4 p. 653—682). Cybulsky bediente sich zur Herstellung von Goldpräparaten aus der Schnauze des Ochsen behufs Studium der Nervenendigungen einer Modification der HfiNOCQUE'schen * Goldmethode ; deren Nothwendig- ') HiiNOCQUE in Arcli. de physiol. normale et paÜiologique, 1870, p. 111. I, 2. Referate und Besprechungen. 289 keit war bedingt durch die bedeutende Dicke der Epidermis, welche die Imbibition der Goldlösung erschwerte, während ihre Härte anderer- seits die Anfertigung von sehr feinen Schnitten des frischen Präparates ohne vorheriges Gefrieren ermöglichte. Ganz frische Stückchen der mit einer dünnen Lage der Lederhaut abgetragenen Epidermis werden in Ilollundermark eingebettet, mittels eines mit alkoholhaltigem Wasser befeuchteten Rasirmessers geschnitten. Die Schnitte werden mit einem Pinsel in Yg- bis yieprocentige Goldchloridlösung übertragen; die schwächeren Lösungen sind vorzuziehen. Nach ^j^ bis % Stunde werden die Schnitte mit destillirtem Wasser abgespült, dann nach höchstens l'/i bis 2 Stunden in ein hermetisch verschliessbares Gefäss mit ver- hältnissmässig viel gesättigter oder auf die Hälfte verdünnter Weinstein- säure-Lösung (deren Verwendung das Wesentliche des H:fiNOCQUE'schen Verfahrens bildet) übertragen. Dieses stellt man in auf 50 bis 60" C. erwärmtes Wasser. Schon nach '/i Stunde zeigt sich hellrothe oder bläuliche Streifung in den Schnitten in Folge der Reduction ; man unter- sucht nun zeitweise, um den richtigen Färbuugsgrad zu treffen; bis- weilen dauert die Reduction länger, und wird Erneuerung der Säure nöthig. Flescli {Bern). Bayerl, Bernhard, Die Entstehung rother Blutkörperchen im Knorpel am Ossificationsrande. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXHI H. 1 p. 30 — 45. — Doppelfärbung mit Carmin-Indigcarmin zum Nachweis von Hämoglobin p. 35). Schon 1874 hatte Mekkel ' eine Mischung von Carmin und Indig- carmin zur Doppelfärbung des Nervengewebes und des ossificirenden Knorpels empfohlen. Diese Färbung hat Bayerl, dem dieselbe nur aus späteren Angaben von Noris und Shakespeare, ebenso Merbbl be- kannt war, benutzt zum Nachweise von Hämoglobin resp. Blutkörper- chen in der Verknöcherungszone ; es färbt nämlich jene Mischung, wie gleichfalls die ältere Notiz von Merkel bereits angiebt (Ref. hat leider dieses Original nicht zur Hand; vgl. jedoch Jahresber. d. Anat. und Physiol. von Hofmann und Schwalbe f. d. J. 1874 p. 12) die Blut- körperchen grasgrün, in so charakteristischer Weise, dass jede Ver- wechslung ausgeschlossen ist. Die Mischung wird bereitet aus gleichen Theilen folgender Losungen: a) Carmin 2, Borax 8, H.^ 0 130 — b) Indigcarmin, Borax aa 8, Hj 0 130 (die zerriebenen Ingredienzien werden mit Wasser Übergossen; die Filtrate gereinigt). Bayerl ver- 1) Mr.uKEL, Technische Notizen (Unters, aus d. anat. Anstalt in Rostock p. 98 f.). Zeilscbr. f. wiss. Mikroskopie. I. 2. J^g 290 Referate und Besprechungen. I, 2. Mir im übrigen in folgender Weise: Entkalkung in Chromsäure 1*5, Salzsäure 0-5, Hg 0 lOO'O ; Auswaschen ; Härtung in Alkohol. Paraffin- Einbettung. Nach dem Schneiden Extraction der Schnitte in Terpentin, Tränkung mit absolutem Alkohol, darnach Einlegen in obige Mischung auf 15 bis 20 Minuten. Extraction durch gleichlanges Einlegen in ge- sättigte Oxalsäurelösung. Auswaschen u. s. f. Balsameinschluss. Um die Färbung haltbar zu machen, ist es zweckmässig, das zur Aufhellung dienende Nelkenöl, dessen Sauerstoff, bezw. Ozongehalt die Bleichung begünstigt, vor dem Einschluss durch Benzin zu extrahiren. (Die Doppel- färbung mit Carmin und Indigcarmin hat zahlreiche Empfehlungen ge- funden ; alle unterscheiden sich von der ersten MEKKEL'schen nur in ganz unwesentlichen Einzelheiten; wie es scheint, ist aber Merkel's Angabe fast unbekannt geblieben. Ref.). Bezüglich der Ergebnisse der Färbung sei erwähnt, dass Bayerl blaue Färbung des Knochens oder Knorpels, wie sie von Anderen erhalten wurde, nicht erzielte ; es färbte sich die Grundsubstanz des unveränderten Knorpels gar nicht, die an der Ossificationsgrenze blass rosa; die Knorpelzellen röthlich mit dunklerem Kern ; Knochen und Osteoblasten roth, Blutkörperchen grün. Die letztere Färbung ist eine specifische Eigenschaft des Hämoglobins, wie Bayerl experimentell durch Versetzen einer Lösung desselben mit der Mischung und nachträgliches Zufügen von Oxalsäure nachweist. Von anderen Gewebetheilen nehmen nur noch die der inneren Haarwurzel- scheiden ausgebildeter Haare eine grünliche Färbung an. Flesch (Bern). I. Lissauer , Ueber die Veränderungen der CLARK'schen Säulen beiTabes dorsualis; Zusatz zu demObigen von C. Weigert. (Fortschr. der Med. 1884 Nr. 4). II. Weigert, C, Ausführliche Beschreibung der in Nr. 4 erwähnten neuen Färbungsmethode für das Cen- tralnervensystem (1. c. Nr. 6). Unter Weigert's Leitung arbeitend, hat Lissauer ausser der Säure- fuchsinmethode eine andere von Weigert erfundene Färbung, welche eben so gute Resultate geben soll, angewandt. Das färbende Princip ist gewöhnliches Fuchsin in basischer Lösung. Die Schnitte werden aus der härtenden Chromsalzflüssigkeit gebracht in eine Mischung von Alkohol absol. und Aq. destill, im Verhältniss von 1:3, in welcher trocknes Fuchsin bis zur Sättigung gelöst ist. Von der concentrirten Lösung wurden 50 g abfiltrirt und hierzu 1 cc einer Mischung von Liq. Ammonii caust. 1 : Wasser 40 gesetzt. Darin bleiben die Schnitte '/a bis 2 Stunden, werden dann in Wasser abgespült und hiernach in einer I, 2. Referate und Besprechungen. 291 Schale mit 2-5- bis Sprocentiger Salzsäure bis zur DifFerenzirimg der grauen und weissen Substanz entfärbt. Nachher reichliches Abspülen in Wasser, Entwässern in Alkohol, Xylol-Aufhellung. Die Präparate gelingen etwas sicherer als die mit Säurefuchsin, bieten im Wesentlichen dasselbe Bild, zeigen aber ausserdem noch Kernfärbung. Nach den Erfahrungen, die Ref. gemacht hat, liegt ein grosser Nachtheil der Methode darin, dass im Alkohol oft recht rasch die ganze Farbe wieder ausgezogen wird, so dass man gar nicht ängstlich genug bei der Entwässerung ver- fahren kann. Aber diese Methode, ebenso wie die im vorigen He ft^ geschilderte Säurefuchsinfärbung, haben nur noch histo- rischen Werth, seit es Weigert ganz neuerdings gelungen ist, einunendlich einfacheres, leichtes und nach meinen bisherigen Versuchen immer gelingendes Verfahren, der Nerven färbung zu entdecken, das ungleich prachtvollere Bilder, schwarze Fasern auf gelbem Grunde, bietet. Das Verfahren ist das folgende: Schnitte in MtiLLER'scher oder EKLicKi'scher Flüssigkeit gehärteter Präparate, die noch braun, nicht grün sind, kommen ausgebreitet in eine Lösung von Hämatoxylin 0"75 bis 1-0, Alkohol 10-0, Wasser 90-0. Die Mischung wird gekocht und einige Tage stehen gelassen, ehe man sie in Grebraucli nimmt. In ihr verweilen die Schnitte ^ eine bis zwei Stunden bei 35 bis 45" C. im Wärmekasten oder (Ref.) 24 Stunden in gewöhnlicher Temperatur. Dabei bildet sich ein Chromlack des Hämatoxylius in den Geweben aus, der schwarz ist. In der Farb- lösung können die Schnitte ganz beliebig lange gelassen werden, ehe man zur Entfärbung schreitet. Diese wird, nach oberflächlichem Ab- spülen der anhaftenden Hämatoxylinlösung durch Wasser, vorgenommen in einer Schale, welche enthält: Borax 2*0, Ferridcyankalium 2*5, Wasser 100-0. Es dauert eine halbe Stunde und länger bis sich in den kohlschwarzen Schnitten die ersten Spuren eines Unterschiedes zwischen weisser und grauer Substanz zeigen. Die Schnitte müssen aber, und wenn auch Stunden darauf gehen, so lange in der DifFerenzirungs- flüssigkeit bleiben, bis die graue Substanz deutlich gelblich, die weisse schwarz erscheint. Dann wird gut in Wasser abgespült, und werden die Präparate durch Alkohol-Xylol-Canada durchsichtig gemacht. 1) Diese Zeitschr, Bd. I, 1884, p. 123 ff. ^) Die Gewcbsstücke sollen auf ihrem Weg von der MüLLER'schen Flüssig- keit zum Mikrotom und von da zur Farbe gar nie mit Wasser in Berührung kommen. Es muss daher mit Alkohol geschnitten werden. 19* 292 Referate und Besprechungen. I, 2. Die Hämatoxyliufärbung ist die vollkommenste aller bislang be- kannten Färbungsmetlioden für das Ceutralnervensystem, sie ist auch weniger caprieiös als irgend eines der bislang bekannten Verfahren. Ref. hat bislang vorzügliche Resultate bekommen im Rückenmark, der Brücke, der Hirnrinde und dem Nucleus dentatus des Cerebellum. Eclinger (FranJifurt a. 31.) E. Bacterien. - Befereni: Prof. Dr. med. F. Baumgartev in Königsberg in Fr. Oibbes, H., Rapid method of demonstrating the tubercle Bacillus without the use of uitric acid. (Lancet 1883, p. 771. — Microsc. News vol. III, 1883, No. 33 p. 248). Der Autor, der schon früher eine Darstellungsmethode der Tuberkel- bacillen ' angegeben, die mit ganz geringfügigen, unwesentlichen Ab- weichungen das bekannte EmiLicH'sche Verfahrungen imitirte, publicirt an oben genannter Stelle eine neue Vorschrift, die, wenn sie sich be- währen sollte, in der That einige nicht unerhebliche Vorzüge vor der EHELicn'schen Methode besitzen würde. — Gibbes' neue Vorschrift lautet: Man nehme 2 g salzsaures Rosaniliu und 1 g Methylblau und verreibe beide in einem Glasmörser; dann löse man 3 cc Anilinöl in 15 cc rectificirtem Spiritus und füge von dieser Lösung langsam dem Farbstoffgemenge zu, bis letzteres völlig aufgelöst ist. Nach Zusatz von 15 cc destillirtem Wasser ist die Reactionsflüssigkeit fertig und kann in einem verschlossenen Fläschchen aufbewahrt werden. Bei der Anwendung verfährt man folgendermaassen : Nach Her- stellung der Deckgläschenpr^parate gemäss Koch's und Ehklich's Anweisung, giesse man ein Paar Tropfen der fertigen Farbstoflflösung in ein Reagenzglas und erwärme es 5 sobald Dämpfe aufsteigen, schütte man die Flüssigkeit in ein Uhrschälchen aus und lege die Deckgläschen mit der Präparatseite vier bis fünf Minuten auf dieselbe ; dann wasche man die Präparate so lange in Methylalkohol, bis dieselben keinen Farbstoff mehr an letzteren abgeben. Nach Trocknung der Präparate in der Luft oder über der Flamme werden sie in Canadabalsam einge- bettet; die ganze Dauer der Procedur beträgt, nach Auftrocknung des Sputums etc., nicht mehr als sechs bis sieben Minuten. — Die Behand- «) Cfr. diese Zeitsclir. Bd. I, 1884, p. 118. I, 2. Referate und Besprechungen. 293 lungsmethode eignet sich auch für Schnittpräparate, und hebt Gibbes grade für diese den Werth derselben besonders hervor, weil hier der Vortheil des Wegfalls der schrumpfenden Einwirkung der Salpetersäure, durch welchen sein Verfahren hauptsächlich von dem Ehelich's differirt, noch mehr als bei den Deckgläschenpräparaten ins Gewicht falle. Der zweite Vorzug sei der, dass die Doppelfärbung mit einer und der- selben Lösung erzielt wird. An einer anderen Stelle ' erwähnt Gibbes ausdrücklich, dass sich auf den mit der oben beschriebenen Tinctions- flüssigkeit gefärbten Präparaten etwa darin vorhandene andersartige, speciell Fäulnis s Organismen mit intensiv blauer Farbe von den roth gefärbten Tuberkelbacillen abheben. Für S chnittpräparate hat Gibbes die zur Erreichung des difFerenzirenden FärbungsefFectes er- forderliche Zeit nicht abgepasst; er hat die Schnitte immer einige Stunden in seiner Farbstofflösung liegen lassen und danach die er- wähnten schönen Doppelfärbungen (rothe Bacillen auf blauem Gewebs- grunde) erhalten 2. Rindfleisch, lieber Tuberkelbacillen. (Sitzungsber. d. phys.- med. Gesellsch. Würzburg, 1882, No. 8. — cfr. Botan. Cen- tralbl. Bd. XVI, 1883, p. 19). Nach Rindfleisch gelingt die alleinige Färbung der Tuberkel- bacillen, wenn man eine Mischung von Alkohol, Wasser und Salpeter- säure zu gleichen Theilen, der einige Tropfen Fuchsinlösung zugefügt werden, anwendet. Das beste ^ Färbungsmittel ist nach Rindfleisch das in Alkohol (nicht in Wasser) lösliche Fuchsin; es reichen zwei bis drei Tropfen einer concentrirten Lösung auf 2 bis 3 cc. Anilinöl- wasser aus, am besten gelingt dann die Färbung bei 40" C. Plaut, H., Färbungsmethoden zum Nachweise der fäul- nisserregenden und pathogenen Mikroorganismen. Leipzig, Voigt. 1884. 0 Practica! histology and pathology. 2"^ ed., 1883, p. 142. 2) Anmerkung des Ref. : Leider muss ich gestehen, dass es mir bisher, trotz wiederholter Prüfung, nicht gelungen ist, die obigen Resultate von Gibbes bestätigen zu können; ich habe mit der, laut Vorschrift bereiteten Flüssigkeit zwar deutliche Rothfärbung der Bacillen, aber gleichzeitig auch Rothfärbung des Gewebes und der mitvorhandenen Fäulnissorganismen er- halten. Möglicherweise liegt das Misslingen meiner Versuche daran, dass die von mir benutzten Farbstoffe nicht völlig identisch mit denen von Gibbes waren; ich möchte deshalb keineswegs durch meine Bemerkung vor weiterer Nachprüfung abschrecken. 3) Vergl. hierüber des Ref. Mittheilung, diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 57. 294 Referate und Besprechungen. I, 2. Verf. giebt eine tabellarische Zusammenstellung der zur Zeit am häufigsten angewendeten Untersuchuugsmethoden auf Mikroorganismen. Die Anweisungen zur Ausübung der einzelnen Verfahren sind, bei grösster Kürze, präcis und leicht verständlich gehalten, so dass die Be- nutzung der Tabelle allen Denen, welche die Methoden noch nicht kennen und denen die Originalarbeiten nicht, oder wenigstens nicht leicht, zur Hand sind, empfohlen werden kann '. >) Einige Angaben respective Urtheile des Verf. bedürfen jedoch der Be- richtigung. Zunächst ist der Satz: „Die Leprabacillen sind die einzigen bis jetzt bekannten Mikroorganismen, welche sich Farbstoffen gegenüber ebenso verhalten, wie die Tuberkelbacillen", nicht haltbai'. Die Leprabacillen verhalten sich vielmehr Farbstoffen gegenüber z. Th. ganz anders, wie die Tuberkel- bacillen, wie dies ja aus des Verf Tabelle selbst hervorgeht; anderntheils kommt diejenige Eigenschaft, welche die LeprabacUlen mit den Tuberkel- bacillen theilen, nämlich die der Entfärbung durch Säuren relativ grossen Wider- stand zu leisten, auch noch anderen Mikroorganismenformen zu (vergl. hier- über die bekannten einschlägigen Angaben Lichtheim, de Giacomi, Babes, Petei). Ebensowenig zutreffend ist ferner die Angabe des Verf. : „Die Typhus- bacillen nehmen Anilinfarbstoffe nur sehr schwach auf; dieses Verhalten cha- rakterisirt sie anderen Spaltpilzen gegenüber". Dies war Eberth's ursprüng- liche Ansicht, die er aber später selbst aufgegeben hat (vergl. über die Sachlage z. B. Fkiedländer, Mikroskopische Technik p. 54). Weiterhin sagt Plaut zu „Methode Baumgarten für Sputa" : „Methode bei rein diagnostischen Zwecken nicht zu empfehlen". Dies entspricht nicht der Ansicht des Autors der Me- thode ; als schnelles Orientirungsmittel hält derselbe sie nelmehr auch zu rein diagnostischen Zwecken noch heute aufrecht (vergl. Baumgarten, Beiträge zur Darstellungsmethode der Tuberkelbacillen. Diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 54). Zu des Ref neuer Färbungsmethode (die nur sehr unvollständig wiederge- geben ist) macht Plaut den Zusatz : „Diagnostisch nicht zu verwerthen". Dies ist eine seltsame Ausdrucksweise; Ref würde seine neue Methode nicht den Fachgenossen vorgelegt haben, wenn er sich nicht diu-ch zahlreiche gewissen- hafte Prüfungen von der diagnostischen Verwerthbarkeit derselben überzeugt hätte; er hat nur gesagt, dass sie in rein diagnostischer Hinsicht quoad Tuberkelbacillen nicht mehr leiste, als das EHRLicn'sche Untersuchungsverfahren, und dass sie deshalb dies letztere, welches etwas schneller zum Ziele führt, als des Ref neue Methode, für die ärztliche Praxis nicht zu ver- drängen bestimmt sei. — Schliesslich bemerkt Ref noch, dass die von Plaut Crämer zugeschriebene Methode seines Wissens von Ziehl (Deutsche med. Wochenschr. 1883, No. 5) herrührt. Ref. I, 2. Referate und Besprechungen. 295 F. Rryiytognftien Brefeld, 0., Die künstliche Cultur parasitischer Pilze. (Botan. Unters, üb. Hefepilze. Forts, der Schimmelpilze. V. Heft. Die Brandpilze I. Lpz., 1883, p. 1 — 28). Verf. legt zunächst dar, dass für das Studium der parasitischen Pilze die Infectionsmethoden, so vortreif lieh sie auch gewesen seien und so wesentlich auch ihre vielseitige Anwendung die Kenntniss von der parasitischen Natur vieler Pilze gefördert habe, doch nicht allseitig ab- schliessende sein konnten, da sie das Urtheil des Beobachters zu sehr localisirten (nicht über den Wirth hinausgehen Hessen) und zu eng be- grenzte Ansichten über den Parasitismus, über die Wechselbeziehungen zwischen Parasit und Wirth, ferner über das Leben der parasitischen Pilze in der Natur, über Verbreitung ihrer Keime, also über Verbrei- tung der durch sie veranlassten Pflanzenkrankheiten vermittelten. Dann eröffnet er eine Perspective auf das, was seine Culturmethoden * nach dieser Beziehung zu leisten versprechen und schon geleistet haben. Da- bei theilt er mit, dass es leicht sei, viele scheinbar ganz innig an die Nährpflanze adaptirte parasitische Pilze künstlich zu erziehen, wie z, B. die Brandpilze (die Keimung derselben, die auf Wasser meist ganz dürftig erfolgt, erfolgte in Nährlösungen mit grosser Ueppigkeit, und viele Arten, die auf Wasser gar nicht zur Sporidienbildung gelangten, entwickelten in Nährlösungen sofort Sporidien) 5 aber auch verschiedene Species von Peronosporeen z. B. Phytophthora infestans, ferner Ento- mophthoreen, Askomyceten, Basidiomyceten gediehen auf künstlichen Nährsubstraten ausserordentlich üppig, oft üppiger als in der Natur. Zur Benutzung gelangten die früher angegebenen Nährsubstrate, ebenso die- selben Apparate, namentlich die kleinen flachen Kammern, in welchen die kleinsten Keime fixirt und in dünnen Adhä«;ionsüberzügen auf der Innenwand lückenlos in ihrer Entwicklung verfolgt werden können. Dr. 0. E. R. Zimmermann {Chemnitz). Morris, Malcolm and Henderson, Gr. C, The Cultivation and life-history of the ringworm fungus (Trichophy- ton tonsurans). Journ. R. Microsc. Soc. Ser. H vol. HI, 1883, pt. 3 p. 329). Nach mehreren vergeblichen Versuchen, den Ringwurmpilz (Tricho- phyton tonsurans) in Humor aqueus und Humor vitreus zu cultiviren, gelang die Zucht schliesslich in sterilisirter Pepton-Gelatine. Das >) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 128. 296 Referate und Besprechungen. I, 2. Sterilisiren der Gelatine wurde durch eine Woche lang täglich wieder- holtes, 10 Minuten langes Kochen, das Sterilisiren der Apparate und Glaszellen durch Erhitzung bis zur Dunkelrötlie herbeigeführt. Ring- wurmhaare wurden auf den Boden der Höhlung einer ausgeschliffenen Glasplatte gelegt und mit Pepton-Gelatine bedeckt. Durch Auflegen eines Deckglases wurde letztere dann von der Luft abgeschlossen und die Glasplatte darauf in einen Brütofen bei 24" C. gebracht. Nach 24 Stunden wurden die Sporen des Ringwurmpilzes birnenförmig und nach 48 Stunden waren sie zu Fäden ausgewachsen. In drei Versuchen hörte das Wachsthum der Fäden am 6. Tage auf, in den übrigen, bei welchen etwas weniger Peptongelatine angewendet und deshalb in der Zelle ein Luftraum entstanden war, erreichten die Fäden unter wieder- holter Zweigbildung den Rand der Gelatine, wo ihre Endzweige in ganz ähnlicher Weise wie Penicillium Basidien, Sterigmen und Sporenketten bildeten. Sporen aus dieser Cultur brachten auf frischer Nährgelatine dieselben Formen mit denselben Fructificationen hervor ; ferner erzeugten sie auf der menschlichen Haut unter einem mit Pflaster befestigten Uhr- glase bereits am dritten Tage eine Gruppe brennender Pusteln und am sechsten einen typischen Ringwurmfleck. Als nach Abwaschung des Fleckes vom Rande desselben abgenommene und in Kalilauge einge- weichte Epidermisschuppen untersucht wurden, fanden sich zahlreiche, mit denen von Trichophyton tonsurans übereinstimmende Sporen, die auch in der zweiten Generation wieder einen Ringwurmflecken mit den- selben Pilzen und Sporen hervorriefen. In zwei weiteren Versuchs- reihen wurden von zwölf ausgeglühten Glasröhrchen sechs mit Ring- wurmhaaren auf dem Boden des Gefässes unter der Gelatineschicht, sechs mit ebensolchen Haaren auf der Oberfläche der Gelatineschicht versehen. Nach 24 Stunden waren die Sporen in beiden Versuchs- reihen birnförmig angeschwollen und einige mit kurzen Keimfäden ver- sehen. Das Wachsthum der Mycelien nahm in den nächsten Tagen in beiden Culturen seinen Fortgang. Am sechsten Tage begannen die auf der Oberfläche befindlichen Mycelien Lufthyphen zu treiben, die in zwei Tagen reichlich Sporen entwickelten, während die untergetauchten lange Fäden bildeten, die am siebenten Tage ihr Wachsthum einstellten. Gesunde Haare gaben gleich den untergetauchten keine Resultate. Sporen aus der letzten Cultur, in gleicher Weise behandelt, erzeugten wieder dasselbe Mycel mit denselben Fructificationen. I)r. 0. E. R. Zimmermann, I, 2. Referate und Besprechungen. 297 Israel, 0., Ueber die Cultivirbarkeit des Actinorayces. (ViRCHOw's Arch. f. pathol. Anat. u. Physiol. Bd. XCV, 1884, p. 140). Verf. beschäftigte sich ein ganzes Jahr lang mit Cultnrversuchen des Actinomyces. Ein grosser Theil derselben raissglückte schon wegen der schweren Zugänglichkeit des fortpflanzungsfähigen Materials. Be- sonders schwierig war es, fremde mykotische Beimengungen, die sich stets mehr oder weniger schnell über die ganze Culturfläche verbreiteten, abzuhalten, um so mehr, da die zur Erlangung des Aussaatmaterials nöthigen chirurgischen Eingriffe dem Zutritt anderer Mikroorganismen Thor und Thür öffnen. Ferner zeigten sich die Pilzheerde sehr oft kalkig infiltrirt und deshalb abgestorben, obwohl sie äusserlich selten Abweichungen erkennen Hessen. Demnach erforderte schon die Aus- wahl des Materials die Berücksichtigung einer Anzahl von Bedingungen, welche lange nicht in jedem Object vorhanden sind. Das grösste Hin- derüiss für Reinculturen aber lag in dem langsamen Wachsthum des Pilzes selbst, welches allen wachsthumsfähigen Beimengungen hin- reichend Zeit lässt, um über die geringen Entwicklungen des Actino- myces, bevor diese noch deutlich wahrnehmbar geworden, die Oberhand zu gewinnen und sich so fortgesetzt in weitere Culturen einzudrängen. Also musste auf jeden Fall schon die primäre Cultur völlig rein sein. — Auf flüssigen Nährlösungen: Rinderbouillon, Fleischextract, Pepton- lösungen und flüssigem Rinderblutserum bei Zimmer- wie bei Körper- temperatur, ebenso auf Fleischwasser-Pepton-Kochsalzgelatine bei 20'' zeigte sich kein Erfolg. Nur das von Koch eingeführte coagulirte Rinderserum bot einen geeigneten Nährboden. Da die Versuche viele Wochen in Anspruch nahmen, machte sich die beständige Sättigung der Luft des Thermostaten mit Wasserdampf nöthig und ausserdem eine andere Maassnahme, welche sich an die Coagulirung des Serum knüpft. Diese war nämlich am besten eine möglichst schwache, um länger vor dem Vertrocknen geschützt zu sein, da ein gewisser Wasserverlust schon mit der längeren Dauer des Coagulirungsprocesses eintritt. Ueber einen Topf mit kochendem Wasser wurde ein weitmaschiges Drahtnetz so schräg gelegt, wie es die Ausbreitung des Serums in den verwendeten Gläsern erforderte, und schon innerhalb 10 Minuten Hess sich die geringe Veränderung des Aussehens wahrnehmen, welche den Beginn der Gerinnung anzeigt. Gleich darauf war es Zeit, die Procedur zu unterbrechen, und wenn auch beim Aufrichten der Gläser eine kleine Verschiebung des Coagulum stattfand, blieb doch die Oberfläche fast ungeschmälert. — Das Wachsen des Actinomyces erfolgt nun derart, 298 Referate und Besprechungen. I, 2 dass sich um die Aussaat ein sehr dünner, sammetartig rauher, leicht trocken aussehender Rasen auf der glänzenden Oberfläche des Coagu- lum ausbreitet, der bei schräg auffallendem Lichte deutlicher, bei durch- fallendem sehr leicht zu sehen ist, in und um den sich mit der Zeit kleine Knötchen (nicht vor 14 Tagen) deutlich machen, die gleichfalls bei durchfallendem Lichte am besten zu erkennen sind. Eine acht Wochen alte Cultur hatte zu beiden Seiten des Liipfstrichs kaum mehr als Ya cm Ausdehnung. Mikroskopisch stimmen die in den Culturen enthaltenen Vegetationen vollständig mit den im Thierkörper vor- kommenden übereiu. Bei schwacher Vergrösserung zeigt die Begren- zung der entstandenen Rasen einen zackigen (serpiginösen) Rand. Be- sonders eigenthünilich war dem Parasiten die ganz überraschende Wider- standsunfähigkeit gegen viele Einwirkungen, die anderen Pilzen gegen- über gleichgültig erscheinen, wodurch sich auch das Fehlschlagen aller früheren Culturversuche wie mancher Impfungen erklären lässt. Dr. 0. E. B. Zimmermann {Chemnitz). Schnetzler, J. B., Notiz über Tanninreaction bei Süss- wasseralgen. (Botan. Centralbl. Bd. XVI, 1883, p. 157). Der Tanningehalt verschiedener Süsswasseralgen, den Verf. früher sowohl in der alkoholischen Lösung des Chlorophylls als auch in in- tacten Zellfäden dieser Algen durch Anwendung von schwefelsaurem Eisenoxyduloxyd nachgewiesen hatte, wurde aufs Neue an frischen Spirogyren durch Eintauchen in die Eisensalzlösimg constatirt. Dabei machte Verf die Beobachtung, dass in den Zellen eines und desselben Fadens die Blaufärbung verschieden schnell eintritt, dass oft grün- bleibende Zellen mit blaugefärbten abwechseln, woraus Verf erkennt, dass der Widerstand des lebenden Plasmas in verschiedenen Zellen gegen die Einwirkung des Reagenz variabel sei. Erst nach dem Ab- sterben aller Zellen trat bei den Versuchen die Blaufärbung allgemein auf. Kohl {Marburg). Schaarschmidt, Jul., Zellhautverdickungen und Cellulin- körner bei den Vaucherien und Charen. (Magyar Növenytani Lapok. VIII, 1884, No. 83 p. 1—13. Mit I Taf.). Die Cellulinkörner der Vaucherien, beziehungsweise V. sessilis und V. geminata (welche vorher mit Osmiumsäure, Glycerin und Alkohol behandelt wurden) zeigen ein verschiedenes Verhalten gegen Tinctionen und Reagentien als diejenigen der Saprolegniaceen *. Der innere schwammigeTheil der jüngeren Körner speichert die Farbstoffe sehr ') Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 133 f. I, 2. Referate und Besprechungen. 299 begierig auf, während der periphere Theil gänzlich farblos bleibt oder nur in sehr geringem Grade gefärbt wird. Am stärksten werden sie durch Nigrosin und Rosanilin gefärbt, Eosin (das negative Cellulose- reagenz), Saffranin, Methylviolett, Gentianaviolett färben besonders den inneren Theil der Körner. Auffallend ist ihre Resistenz gegen starke Chemiealien; in nicht sehr concentrirter Chlorzinkjodlösung, verdünnter und concentrirter Schwefelsäure verändern sie sich auch nach mehreren Tagen kaum ; sie werden nur durch ganz coucentrirte Schwefelsäure gelöst. SchaarscJimidt {Klansenhurg). G. Höhere Pflanzen, Müller, N. J. C, Polarisationserscheinungen pflanzlicher und künstlicher Colloidzellen. (Ber. Dtsch. botan. Gesellsch. Bd. I, 1883, p. 77—83). Verf. untersucht und vergleicht die Polarisationserscheinungen an natürlichen und künstlichen Zellen. Letztere stellt er aus thierischen und pflanzlichen Colloiden her, und zwar aus Gelatine, die er überhaupt als ausgezeichnetstes Studienobject empfiehlt, ferner aus Senegal-, Kirsch-, Traganth-, arabischem Gummi und Collodium. Als eine Art kugeliger oder parenchymatischer Zellen benutzt er Luftblasen in den genannten Colloiden. Den cylindrischeu und prismatischen Zellen entsprechen künstlich bereitete Colloidcylinder und Glasringe. Die Tüpfel und Poren werden durch halbkugelige Vertiefungen in Gelatine nachge- ahmt. Die vorspringenden Membranverdickungen der Spiral-, Ring- uüd Treppengefässe bildet er nach, indem er ein kleines Rädchen, welches an seinem Rande vorspringende Unebenheiten besitzt, unter massigem Drucke über eine wenig befeuchtete CoUoidplatte hinführt. Geschichtete Epidermen vergleicht er mit einem von einer Röhre abge- sprengten Glasringe. Zug- und Druckverhältnisse der Vollkugeln stu- dirt er an Stärke und Inulin. Dieses Material wird nach folgender Methode beobachtet: Die Nicols werden gekreuzt und das Gypsplättchen Roth I in diagonale Stellung gebracht. Zuerst müssen nun in der Gypsplatte die Elasticitäts- axen, für welche Verf. Zug- und Druckrichtungen einführt, bestimmt werden. Dieselben kommen in die Diagonalen des im Ocular ange- brachten Fadenkreuzes zu liegen. Hierauf wird aus einer in der Ebene erstarrten, dünnen, homogenen, plastischen und trockenen Gelatiueplatte ein schmaler Streifen herausgeschnitten. Befeuchtet man denselben ein wenig und übt einen geringen Zug in der Längsrichtung des Streifens 300 Keferate und Besprechungen. I, 2. aus, so kommen alsbald Additious- und Substractionsfarben, bezogen auf Roth I, zum Vorschein. Mit Beziehung auf dieses Plättchen, au dessen Figur die Richtung von Zug und Druck leicht festgehalten werden kann, können nun in beliebigen Objecten die Zug- und Druckrichtungen bestimmt werden. Geben dieselben in der gleichen Richtung wie der Gelatinestreifen Additionsfarben, so entsprechen sie einem gezerrten Gelatineplättchen, einem gepressten dagegen, wenn die Additionsfarben in senkrechter Richtung dazu hervortreten. Baclmmnn {Flauere). Hillhouse, W., Einige Beobachtungen über den inter- cellularen Zusammenhang von Protoplasten. (Bot. Centralbl. Bd. XIV, 1883, p. 80). Nach Russow's früheren Beobachtungen lässt Chlorzinkjod die Tüpfelmembran auf den Radialwänden der Bastparenchym- und Bast- strahlenzellen in der Flächenansicht intensiv gelb bis gelbbraun punktirt erscheinen, während Querschnitte dieser Membranen feine gelbbraune Striche erkennen lassen. HiLiiHousE bediente sich nun bei der mikro- skopischen Untersuchung der Verbindungsfäden zwischen den proto- plasmatischen Inhalten benachbarter Zellen mit Erfolg folgenden anderen Verfahrens. Möglichst dünne Schnitte von Alkoholmaterial werden successive mit verdünnter (einige Minuten) und concentrirter (20 — 48 Stunden) Schwefelsäure imd zwar ohne Deckglas behandelt, nach dem Auswaschen in destillirtem Wasser mit Ammoniak-Carmin tingirt und in Glycerin aufbewahrt. Dabei lösten sich sowohl Zellwand als Inter- cellularsubstanz, von letzterer bleiben mitunter Spuren als blassrothes Netzwerk sichtbar, besonders da, wo sie correspondirende Tüpfelhöfe trennt. Mittels dieses Verfahrens gelang es Verf., an Schnitten durch die Blattbasis von Prunus Laurocerasus etc. deutlich die Streifung der Tüpfelmembran, an der zu beiden Seiten die knopfförmigen Enden der Plasmafäden aus den benachbarten Zellen fest anhaften, sichtbar zu machen. Nach Einwirkung von Jod und concentrirter Schwefelsäure wurden an anderen Präparaten derselben Pflanze Zellwände und Schliess- haut vollkommen gelöst, während die Plasmamassen der die Spiralge- fässe umgebenden Parenchymzellen Communicationen erkennen Hessen durch plasmatische, starkliclitbrechende, zarte Fäden. Neben den mit Knopf endenden Fäden zeigten sich noch in feine Spitzen ausgehende, die Verf. in den meisten Fällen für bei der Membranquellung zer- rissene Verbindungsfäden ansehen zu müssen glaubt. Durch diese Quellung werden die Verbindungsfädeu stark gedehnt. Bei einzelnen Objecten blieb die Schliesshaut der Tüpfel mit Chlorzinkjod, Fuchsin I, 2. Referate uiid Besprecliungen. 301 (welches eigentlich die Mittellamelle intensiver tiugirt als die Zellwand) schwach oder ganz ungeföibt. Von grossem Werth würde die Auf- findung eines Reagenzes sein, welches, ohne die Zellwäude zu färben und zum Quellen zu bringen, die Plasmasträuge kräftig tingirte. Kohl {Marhurcj). ßussow, E., Ueber den Zusammenhang der Protoplasma- körper benachbarter Zellen. (Sitzungsber. d. Dorpater Naturf.-Gesellsch. Sept. 1883, S. A. p. 5). Zum Nachweise der Continuität des Protoplasma benachbarter Zellen behandelt Russow frische Schnitte (am besten Tangentialschnitte der secundären Rinde dikotyler Gewächse) mit Judkaliumjodlösung (0-2 Proc. Jod und 1-64 Proc. Jodkalium) und ^/^ Schwefelsäure mit einem Zusatz concentrirter Schwefelsäure. Die Schnitte werden mit einem Tropfen der Jodlösung getränkt und mit Deckglas belegt. Auf den Objectträger wird ein Tropfen concentrirter Schwefelsäure ge- bracht und mit drei Tropfen der ^/4 Schwefelsäure gemischt, dann mit dem Glasstabe an den Rand des Deckglases bewegt und von der ent- gegengesetzten Seite mittels Fliesspapier rasch durchgesogen. Nach- dem die Schnitte sich gleichmässig tief blau gefärbt, werden sie mit Wasser mehrfach ausgewaschen und schliesslich mit Anilinblau gefärbt. In manchen Fällen erwies es sich als zweckmässig, vor dem Tingiren die gequollenen Schnitte einige Minuten der Einwirkung von Pikrin- säure auszusetzen. J. Moeller. Schaarschmidt, Jul., Einige Fälle der Communication von Protoplasten und des Vorkommens intracellulären Protoplasmas. (Magyar Növenytani Lapok. VIII, 1884, No. 84 p. 17^20). Die zur Auffindung der Communicationen benutzten Methoden be- ziehen sich fast ausnahmslos auf die Entfernung der Zellhäute. Das wird ziemlich gut schon durch längeres Verweilen der Schnitte in 30- bis 35procentiger oder mehr concentrirter englischer Schwefelsäure er- reicht. Die Säure wird unter ein Deckglas eingeleitet und die Wirkung sogleich beobachtet. Wenn die Zellhäute schon in genügender Weise aufgequollen oder fortgelöst sind, wird die Säure mit Vorsicht (damit die nun freien Protoplasten nicht mit fortgerissen werden) ausgewaschen. Nach Neutralisation mit Ammoniak, was z. B. für die Färbung mit Eosin unentbehrlich ist, kann man zur Tinction übergehen. Als Färbemittel eignen sich Saffranin (in Alkohol) und Eosin (in Wasser) ganz besonders. Eosin ist derjenige Farbstoff, welcher zu ähnlichen Untersuchungen am besten geeignet ist, denn es färbt die Zellhäute nicht, sondern nur die 302 Referate und Besprechungen. I. 2. Protoplasten (es ist dem Ref. bisher jedoch ein Fall vorgekommen, in dem die Bastfasern von Carica Papaya durch Eosin gefärbt wurden). Saffranin kann man besonders dann verwenden, wenn die Zellhäute gänzlich entfernt sind. Das intracelluläre Protoplasma wird durch massiges Quellen der Zellhäute am leichtesten sichtbar, z. B. in Kollenchym-Geweben. Un- entbehrlich ist das Fixiren, hier ebenso wie beim Suchen der Communi- cationen, was durch Einlegen der Objecto in Alkohol, Pikrinsäure etc. erreicht wird ; solche Schnitte werden nun mit sehr verdünnter Schwefel- säure behandelt. Schaarschmidt (Klauscnhurg). Meyer, Arthur, Das Chlorophyllkom in chemischer, mor- phologischer und biologischer Beziehung. Ein Beitrag zur Kenntniss des Chlorophyllk ornes der Angiospermen und seiner Metamorphosen. Mit 3 Tafeln in Farbendruck. Leipzig (Arthur Felix), 1883, 91 pp. 4". Als für unsere Zwecke Interessantes finden wir (Reactionen, Methoden) : H y p 0 c h 1 0 r i n r e a c t i 0 u. Die chlorophyllhaltigen Zellen werden wie bekannt mit Salzsäure behandelt. Dabei entstehen braune Hypo- chlorinkrystalle und grüne Tropfen, welche, wenn man reinen Eisessig zu dem vorher mit Filtrirpapier abgetrockneten Schnitte fügt, ebenfalls sich sofort in braune Krystalle verwandeln. Spätestens nach einer halben Stunde findet man dann alle grünen Tröpfchen gelöst, und da- für sieht man zahlreiche, meist schön ausgebildete, braune Hypochlorin- nadeln im Schnitte vertheilt. — Eisessig ist ein sicherer und schneller wirkendes Mittel zur Erzeugung der Hypochlorinkrystalle ; legt man frische Schnitte unter ein Deckglas, lässt Eisessig zufliessen, so treten innerhalb einiger Minuten, vorzüglich in etwas tiefer liegenden Zellen, gleichmässig grosse Tropfen aus den Autoplasten heraus, die sich zu einer gelblich grünen Flüssigkeit lösen, aus welcher meist inner- halb der Zelle grössere und kleinere braune Krystalle anschiessen, während die Flüssigkeit selbst immer mehr farblos wird. Die Essig- reaction gelingt zwar sehr leicht, aber doch nicht unter allen Umständen, die Säure löst z. B. auch die Hypochlorinkrystalle, wenn im Ueberschuss vorhanden. Die auf 100*^0. etwa eine halbe Stunde erhitzten Schnitte geben auch mit Essig-, ähnlich der Salzsäure, keine Hypochlorinreac- tion mehr. Zum U ra k r y s t a 1 1 i s i r e n der Hypochlorinkrystalle unter dem Deckglase wird der Schnitt, welcher durch kalten Eisessig I, 2. Referate und Besprechungen. 303 völlig entfärbt und mit Krystallen angefüllt ist, mit Eisessig erhitzt, so dass die Säure beinahe siedet, es lösen sich dann die Krystalle und schiessen meist als Drusen gerader Nadeln, welche relativ dunkel ge- färbt erscheinen, beim Erkalten des Schnittes wieder an. Diese Kry- stalle verhalten sich gegen Reagentien folgendermassen : 1. Eisessig löst kalt nur sehr wenig, heiss leicht; 2. Wasser löst kalt nicht ; kochen- des Wasser treibt Tröpfchen aus den Krystallen und zerstört die Form der Krystalle ; 3. Glycerin verändert in der Kälte nicht ; 4. Alkohol (absoluter) löst kalt völlig, aber sehr langsam; 5. Chlorallösung löst die Krystalle, ohne dass vorher bemerkbare Quellung derselben eintritt ; nach der Behandlung der Krystalle mit Chloral bleibt ein Tröpfchen ungelöst; das Tröpfchen ist in Alkohol löslich; G. Aether löst sofort; 7. Petroläther löst langsam; 8. Chloroform löst schnell; 9. Ricinusöl löst nur beim Erhitzen; 10, Kaliumhydroxydlösung löst weder in con- centrirtem noch in verdünntem Zustande; 11. Concentrirte Salzsäure schmilzt die Krystalle zusammen und lässt einen grossen, braungrünen Tropfen zurück; 12. Quecksilberchloridlösung (wässerige) bewirkt bei 24-stündiger Einwirkung, dass sich die Krystalle dann nicht mehr in Alkohol lösen ; in Aether lösen sie sich dann langsam, in Chloral schnell, ohne Rückstand; 13. Osmiumsäure härtet die Krystalle bei 24stündiger Einwirkung so, dass sie danach weder in Chloral, noch in Alkohol oder Aether löslich sind ; 14. Brom entfärbt die Krystalle sehr schnell, wenn man sie mit Wasser befeuchtet in einen bromdampfhaltigen Raum bringt; dabei werden die Krystalle, wenn die Einwirkung etwas ener- gisch ist, vacuolig. Ziemlich gleich wie die mit kaltem Eisessig erhaltenen Krystalle verhalten sich diejenigen , welche man durch Umkrystallisiren der erstereu aus heissem Eisessig darstellt, doch scheint Alkohol, Salzsäure und Eisessig etwas Aveniger energisch auf sie einzuwirken, den zwei erstereu gegenüber zeigten sich die nach Pringsheim's Methode darge- stellten auch etwas widerstandsfähiger, verhielten sich aber sonst wie die durch kalten Eisessig erhaltenen. In grösserer Menge und zwar grammweise kann man die Hypo- chlorinkrystalle nach Meyee herstellen: wenn man ganze HoUunder- blätter mit wenig Eisessig bei 100" C. im Luftstrom auszieht, die heisse Lösung durch ein Tuch giesst und erkalten lässt. Es scheiden sich dann grosse, fadenartige Krystalle aus. Dampft man bei 100" C. weiter ein, so erhält man meist Drusen, doch sind die Nadeln oft verzweigt und die Drusen sehr voluminös. Einzelne schöne Chlorophyllkrystalle (Meyer) [Chlorophyllan, 304 Eeferate und Besprechungen. I, 2. Hoppe-Seyler ; Hypocbloriu, PeikgsheimJ erhält mau auch dadurch, dass Schnitte mit Petroläther befeuchtet unter ein Deckglas gebracht und in einem mit Petrolätherdämpfen gesättigten Räume einige Tage stehen gelassen werden. Chlorophyllgerüst. Vorzüglich schön kann man das Gerüst erhalten, wenn man einen Tag über in Salzsäure gehärtete Autoplasten (von Vallisneria z. B.) mit wenig Eisessig oder mit Chlorallösung be- handelt. Das nach Extraction der Autoplasten zuerst mit Aether und hierauf mit Alkohol hergestellte Gerüst von Vallisneria spiralis und Phajus grandifolius zeigt folgende Reactionen : 1. Chlorallösung dehnt das Gerüst etwa um die Hälfte seines Volumens, ohne dass die Structur verloren geht. Durch Wasserzusatz wird das Gerüst unter Concentra- tion wieder deutlich sichtbar. 2. Eisessig quellt wie das Chloral. Die so behandelten Autoplasteu speichern wie der Rest des übrigen Plasmas kein Methylgrüu in sich auf (aus wässeriger Lösung). 3. Osmiumsäure hindert (nach 12stüudiger Einwirkung) die Quellung durch Chloral nicht. 4. Chromsäure oder rauchende Salpetersäure lösen das Ge- rüst nicht. Bei der Betrachtung der vermeintlichen Oeleinschlüsse der Chloro- phyllkörner wird zuerst das mikrochemische Verhalten ver- schiedener fetter und ätherischer Oele erörtert: I.Eisessig löst die meisten ätherischen Oele, dagegen löst Eisessig die fetten Oele meist nicht, wenn man eine zu grosse Menge der Säure vermeidet, die Reactionen müssen aus diesem Grunde alle unter dem Deckglase aus- geführt werden. — 2. Alkohol vom sp. Gew. 0"83 verhält sich wie Eis- essig gegen die fetten Oele. Absoluter Alkohol verhält sich sogar (im allgemeinen) auch quantitativ ähnlich. — 3. Wässerige Chloralhydrat- lösung. Da die Anwendung dieses Reagenz bisher nur in diesem Werke eingehender beschrieben ist, so wollen wir über dessen Wirkungs- weise Einiges hervorheben. Dieses Reagenz wirkt je nach seiner Concentration verschieden ; um daher immer die gleichen Effecte mit demselben hervorzurufen , muss eine bestimmte Concentration genau innegehalten werden. Am geeignetsten wurde eine Lösung von fünf Theilen Chloralhydrat in zwei Theilen Wasser gefunden. Diese Mischung kann allerdings nur noch bei etwa 15" C. angewendet werden, da sich bei niederer Temperatur Chloralhydrat ausscheidet. Sie ver- hält sich gegen wasserlösliche Kohlehydrate ähnlich wie Wasser, und Stärke quillt sie wie Kalilauge auf. Vorzüglich charakteristisch ist ihr Verhalten gegen Proteiustoffe , welche sie löst oder stark quillt, auch auf CcUulose wirkt sie etwas quellend ein. Da sie Stärke quillt I, 2. Referate und Besprechungen. 305 uud Jod löst, ohne es zu verändern, bietet eine mit Jod gesättigte Lösung (die man sich herstellt, indem man festes Jod mit Chlorallösung stehen lässt) ein vorzügliches Mittel zum Nachweise von Stärke in den Trophoplasten. Man legt zu diesem Zwecke den Schnitt ein Paar Minuten in dünne Jodjodkaliumlösung, trocknet ihn mit Fliesspapier ab, legt ihn unter ein Deckglas und fügt Chlorallösung zu. Nach einigen Minuten treten die Stärkeköruer deutlich mit blauer Farbe hervor. Auch als Aufhellungsmittel ist Chlorallösung in manchen Fällen von vorzüg- licher Wirkung. Die wässerige Lösung verhält sich gegen ätherische und fette Oele fast wie Alkohol. — 4. Concentrirte Kalilauge (1 KHO -f- 1*5 Hg 0) löst die fetten und ätherischen Oele nicht. — 5. Ver- dünnte Kalilauge (1 KHO -f- 9 Hg 0) verhält sich ähnlich. 6. Chloro- form (sp. Gew. 1-495), 7. Petroläther (Sdp. 60" C), 8. Aether (alkohol- frei und mit Wasser gesättigt) mischen sich mit ätherischem und fettem Oele. — 9. Eine Temperatur von 1300C. genügt, um aus dünnen Schnitten alles ätherische Oel zu verjagen, das fette Oel bleibt dabei zurück. Man erhitzt die frischen Schnitte, ohne sie mit einem Deck- glas zu bedecken, in einem Wärmkasten (Luftbade) von constanter Temperatur 10 Minuten auf 130" C. Nach dieser Operation betrachtet man die Schnitte, indem man sie in Wasser oder Chlorallösung legt. — 10. Osmiumsäurelösung (1 Os O4 -|- 49 Hg 0) bräunt oder schwärzt ätherische imd vorzüglich auch fette Oele sofort. Die vermeintlichen Oeltropfen mancher Musaceen etc. Verhaltensich gegen diese Reagentien folgendermassen : 1. Eisessig löst sie nicht, sondern bewirkt, weil er das Gerüst dehnt, sogar ein stärkeres Hervortreten der Tropfen; 2. Weingeist löst sie; 3. Chloral löst sofort; 4. Concentrirte Kalilauge scheint die Kügelchen zu lösen ; 5. Aether löst ebenfalls. Man behandelt die Autoplasten am besten zuerst mit Eis- essig und verdrängt diesen durch Aether; 6. Concentrirte Salzsäure löst nicht; 7. Sodalösuug (INagCOg -f- 2 Hj 0) und 8. Gesättigte Koch- salzlösung verändern die Tröpfchen nicht. — Es geht nach Verf. dar- aus mit Gewissheit hervor, dass die Tröpfchen nicht aus fettem Oele bestehen. Ueber das mikrochemische Verhalten der Farbstoffe mancher Chromop lasten finden wir folgende Angaben: 1. Der Farbstoff von Tropaeolum zeigt eine geringere Löslichkeit als der Chlorophyllfiirbstoff, denn Chloroform nimmt fast gar keinen Farb- stoff auf; Chloral und Petroläther lösen den Farbstoff langsam und nicht reichlich, Schwefelkohlenstoff färbt sich kaum, während Eisessig und Chloroform zu gleichen Theilen gemischt, schon in 15 Minuten fast Zeitsclir. f. wiss. Mikroskopie. I. 2. 20 306 Referate und Besprechungen. I, 2. allen Farbstoff aus den Blütenblättern lösen. Aus solcher Lösung krystallisirt der Farbstoff innerhalb 10 bis 15 Minuten aus. 2. Farbstoff von Daucus Carota. Caro tinreaction. In den äussersteu, fast ganz stärkefreien Zellen der Carotte findet man entweder kleine gelbrothe Körner oder aus mehreren zusammengeballte Massen und ferner höchst charakteristische grosse Röhren und lange Stäbe; in der Rinde kräftiger alter Möhren vorzüglich findet man auch sehr zahlreiche gut ausgebildete rechteckige oder rhombische Tafeln. Dieser Farbstoff repräsentirt das Carotin. Die Carotinkrystalle sind leicht löslich in Benzol, Schwefelkohlenstoff, fetten und ätherischen Oelen; concentrirte Schwefelsäure löst das Carotin mit purpurblauer Farbe. Als nicht weniger charakteristisches Verhalten ist noch die Unlöslichkeit derselben in Eisessig und Chloi'alhydratlösuug zu bezeichnen. Schaarsch midi {KlauscnJjurg). Miliarakis, Spyridion, Die Verkieseluug lebender Elemeu- tarorgane bei den Pflanzen. Würzb. 1884, 29 pp. 8". So betitelt ist eine dem Geheimrath von Sachs gewidmete Disserta- tion. Uns interessirt hier nur die Methode, welche der Verf. zur Dar- stellung der Kieselskelette bei seinen Untersuchungen angewendet und eingeführt hat. Sie basirt auf der Verwendung der von Pollender (1862) zu demselben Zweck vorgeschlagenen Chromsäure, die aber mit Schwefelsäure combinirt wird. Der Vorzug der neuen Methode gegen- über der Verwendung von Chromsäure allein besteht darin, dass durch letztere bei halbwegs dicken Stücken die Zerstörung der organischen Substanz zu langsam erfolgt ; gegenüber dem MoHL'schen Verfahren und dem SACHs'schen (Glühen in Schwefelsäure auf Platinblech) als die Bil- dung von Verglasungsproducten der Kieselsäure mit Kalk-Magnesia- Salzen und als, da beim neuen Verfahren während der Verbrennung der organischen Substanz die Temperatur kaum über 100" C. steigt, eine Beeinträchtigung der dünnen, verkieselten Membranen durch Hitze (beim Glühen auf Platinblech kann ein aufgelegtes Deckgläschen schon schmelzen) ausgeschlossen erscheint. Ueber die Art der Ausführung ist es am besten, dem Autor selbst das Wort zu lassen : „Das zur Untersuchung zu verwendende Blatt oder Rindeustück wird zuerst mit coucentrirter Schwefelsäure in einem Becher- glas behandelt, bis es ganz schwarz wird, oder wenigstens, wenn es sich um ein sehr zartes Blatt handelt, bis es seine Farbe verliert und halb durchsichtig wird. Dann giesst man eine 20procentige wässei'ige Lösung von Chromsäure hinein. Sofort entsteht ein heftiges Aufbrausen der Flüssigkeit und zugleich damit löst sich das Bhitt allmählig auf. I, 2. Referate und Besprechungen. 307 Die Quantität der Chromsänrelösniig richtet man nach der Grösse des Bhittstückes und der Quantität der Schwefelsäure ein. Sobald nun das Aufbrausen aufhört, füllt man das ganze Becherglas mit destillirtem Wasser und lässt es eine Stunde stehen, bis alle Kieselskelette am Boden des Gefässes sich niedergeschlagen haben. Dann giesst man das übrige Wasser vorsichtig ab und imtersucht den pulverigen Boden- satz mikroskopisch. Wenn der Niederschlag noch von Chromsäure dunkel gefärbt erscheint, verdünnt man ihn noch einmal mit destillirtem Wasser und lässt denselben noch eine Zeit lang stehen". Ref. hat die auf solchem Wege erhaltenen Kieselskelette selbst ge- sehen und kann die Methode sehr wohl empfehlen. Die Präparate zeichnen sich durch die vollständige Zerstörung der organischen Sub- stanz vortheilhaft vor durch Glühen gewonnenen aus, welche selten von Verkohlungsrestchen ganz frei sind. Ein Nachtheil des neuen Ver- fahrens ist es, dass man in Folge der energisch die organischen Gebilde angreifenden Oxydation, nur bei starker Verkieseluug zusammenhängende Skelettplatten erhält. Die Methode ist auch auf dem Objectträger durchführbar. Heinricher. S. JKhieraloyiseh-GeoJoglsclies. Referent: Professor Dr. Arthur Wichmann in Utrecht. Streng, A., Ueber eine neue mikroskopische Reaction auf Natrium. (XXII. Bericht d. Oberhess. Gesellsch. f. Natur- u. Heilk. Marburg 1883, p. 258). Um sehr kleine Mengen von Natrium mikrochemisch nachweisen zu können, bedient der Verf. sich des essigsauren üranoxyds. Das be- treffende Silicat eines Dünnschliffes wird mit einem Lösungsmittel, z. B. Salzsäure behandelt; ein oder mehrere Male eingedampft, wird der chlornatriumhaltigen Masse ein Tropfen essigsauren Uranoxyds beige- fügt. Es bilden sich dann tetraedrische Krystalle von essigsaurem Uranoxydnatrium U 0 ^ (C ^ H ^ 0 2) 2, Na C ^ H ^ 0 2. Daneben scheiden sich noch rhombische Kryställchen des essigsauren üranoxyds ab, die aber durch ihre äusseren Formen, sowie in Bezug auf ihr Verhalten gegen das polarisirte Licht leicht von dem Doppelsalz unterschieden werden können. Diese Reaction ist deshalb sehr empfindlich, weil nur 6*6 Proc. Na^O zur Bildung von 100 Thl. des essigsauren Uranoxydnatriums er- forderlich sind. Das käufliche essigsaure Uranoxyd muss mittels abso- luten Alkohols erst gereinigt werden, da es meist Spuren von Natrium enthält. 20* 308 Referate und Besprecliungen. I, 2. Streng, A., Ueber eine Methode zur Isolirung der Minera- lien eines Dünnschliffs behufs ihrer mikrosko- pisch-chemischen Untersuchung. (1. c. p. 260). Bei mikrochemischen Untersuchungen von Gesteinen tritt häufig der Fall ein, dass der Tropfen des Lösungsmittels nicht nur das zu prüfende Mineral, sondern auch noch benachbarte andere bedeckt und so die Reaction nicht sicher wird. Um diesem Uebelstande abzuhelfen, schlägt der Verf. vor, durchlöcherte Deckgläschen anzuwenden, welche auf folgende Weise hergestellt werden : Man taucht gewöhnliche Deck- gläschen in geschmolzenes Wachs und macht nach dem Erkalten mit einer Nadel eine '^ bis 1 mm grosse Oetfnung in die Mitte der mit Wachs überzogenen Fläche. Die so bloss gelegte Stelle wird mit einem Tropfen concentrirter Flusssäure versehen, bis das Deckgläschen an dieser Stelle durchgefressen ist, worauf dann das Wachs wieder ent- fernt wird. Um nun ein bestimmtes Mineral chemisch zu untersuchen, wird die eine Seite des durchlöcherten Deckgläschens rings um die Oeffmmg mit einer dünnen Lage gekochten Canadabalsams bestrichen, und diese Seite wird nach dem Hartwerden des Balsams so auf den Dünnschliff ge- bracht, dass die Oeffnung genau über dem zu untersuchenden Mineral zu liegen kommt. Mittels eines in die Nähe gebrachten, heissen Drahtes wird der Balsam geschmolzen. Die auf diese Weise mit Balsam gefüllte Oeffnung wird mittels eines in Alkohol getauchten Haarpinsels frei gemacht, und kann nun das in diese Oeffnung hineingebrachte Lösungsmittel auf das freiliegende Mineral wirken. Nach dem Ein- dampfen hat sich nicht allein in der Oeffnung, sondern auch auf dem Deckgläschen ein Rückstand der Lösung angesammelt. Durch Er- wärmen des Dünnschliffes lässt sich das Deckglas abheben, und kann man auf demselben die verschiedenen Reactionen studiren. Thoiilet, J., Mesure par la reflexion totale des indices de refraction des mineraux microscopiques. (Bull. Soc. mineralog. de France t. VI, 1883, p. 183). Nachdem bereits Sokby und Mallard Metboden behufs Ermitte- lung der Brechungsexponenten von Mineralien im Dünnschliff angegeben hatten, verwendet Thoulet zu diesem Zweck das Totalreflectometer von Kohlrausch '). Der kleine Apparat ist so construirt, dass derselbe ohne Weiteres *) KoiiLKAuscH, Ueber die Ermittelung von Lichttn-echungsverhältnissen durch Totalreflexion (Wiedemann's Ann. Bd. IV, 1871, p. 1). I, 2. Referate und Besprechungen. 309 auf dem Objecttisch eines BERTEAKD'schen Mikroskops befestigt werden kann. Derselbe besteht aus einem kleinen Fläschchen, welches ca. 1 cc Schwefelkohlenstoff fasst. Eine Durchbohrung an dem einen Ende nimmt den Halter auf, an dem das zu, untersuchende Präparat (an der Rückseite mit chinesischer Tusche geschwärzt) befestigt wird. An dem anderen Ende des Halters befindet sich eine Alhidade, die sich vor einem verticalen Theilkreise bewegt. Behufs Beleuchtung des Präpa- rates mit diffusem Licht wird das Fläschchen concentrisch von einem Röhrchen umgeben, welches aus Mattglas verfertigt oder von geöltem Papier umkleidet ist. Die Beobachtungen werden mit der Natrium- flamme ausgeführt und auch die Messungen geschehen nach der von KoHLEAuscH angewandten Methode. Der Verf. zählt schliesslich eine Reihe von Mineralien auf, deren Brechungsexponenten auf diese Weise bestimmt wurden und theilt mit, dass die erhaltenen Werthe genau mit den von Kohlrausch ermittelten übereinstimmen. I. TechniseJies. Meyer, Arthur, lieber die mikroskopische Untersuchung von Pflanzenpulvern, speciell über den Nachweis von Buchweizenmehl in Pfefferpulver und über dieUnterscheidung des Maismehles von dem Buch- weizenmehle. (Arch. d. Pharm. Bd. CGI H. 12 [1883, December] p. 912). Zur mikroskopischen Untersuchung irgend eines Pflanzenpulvers a auf seine Reinheit ist es unerlässlich, dass man die Elemente, aus denen der pulverisirte Pflanzenth^il aufgebaut ist und ebenso den mikroskopi- schen Bau der Pflanzentheile, welche zur Verfälschung benutzt werden können, bis in die kleinsten Details kenne. Diese Kenntniss ist nicht aus der Betrachtung von Schnitten oder gar des Pulvers zu erlangen, sondern es gehört dazu, dass man alle Zellformen isolirt und ihre gegen- seitige Lage im Pflanzentheil kennen lernt. Dabei ist wichtig, dass man die Elemente zeichnet und zwar stets mit denselben Vergrösse- rungen. Man braucht mindestens zwei, zweckmässig drei Objective, die mit einem schwachen Oculare Vergrösserungen von etwa 80, 180 und 500 ergeben. Man durchmustert die in Wasser liegenden Präparate bei ÖOfacher Vergrösserung, imd findet man ein fremdartiges Element, so untersucht man es mit dem Objectiv 180 genauer und zeichnet es mit Hilfe eines Zeichenprismas. Diese Zeichnungen vergleicht man dann 310 Referate und Besprechungen. I, 2. mit denjenigen, welche man sich bei derselben Vergrösserung von den Elementen der muthmasslichen Verfälschungsmittel hergestellt hat. Zu- letzt vergleicht man mit der stärksten Vergrösserung die verdächtigen Elemente mit womöglich frisch gefertigten des Verfälschungsmittels. Bei diesem Verfahren fallen die Messungen weg und Form und Grösse der Elemente kommen erst recht zur Geltung. Der eingehenden anatomischen Beschreibung und Abbildung der Buchweizen fr u cht undMaisfrucht folgt die Änw^eisung zu ihrer Präparation : Die Fruchtschale des Buchweizens wurde in natürlichem Zustande und nach Aufquellen in Kalilauge oder verdünntem Ammoniak durch Schaben in ihre Bestandtheile zerlegt. Die Samenschale lässt sich am vortheilhaftesten nach mehrtägigem Einweichen in verdünntem Ammoniak untersuchen. Kalilauge und Schulze's Gemisch waren ebenfalls er- probt worden, dabei löste sich aber das innerste Häutchen der Samen- haut. Durch einfaches Schaben der macerirten oder rohen Körner sind sämmtliche Zelleugattungen leicht zu isoliren. An frischen Maisfrüchten lässt sich die Rinde mit oder ohne Kleber- zellen leicht abziehen, sonst muss man die Körner längere Zeit in Wasser maceriren. Zur Darstellung der Epidermis weicht man die ab- gezogene Rinde in Kalilauge und sucht die hinteren Schichten wegzu- schaben. Mit dem ScHULZE'schen Gemenge isolirt man leicht die Faserzellen und die Epidermiszellen. Hat man ein Stückchen Rinde ohne Kleberzellen abgelöst, so sitzen die Schläuche dann entweder auf letzteren oder auf der Haut und lassen sich von beiden Theilen leicht mit einer Staarnadel und etwas Wasser abschaben. Die Kleberzellen- schicht löst sich ebenfalls sehr leicht von Korn und Rinde. 3Ioeller (3Iariahrunii). Hartwich, C, üebersicht der technisch und pharmaceu- tisch verwendeten Gallen (Arch. der Pharm., Bd. CGI H. 11 [1883 November] p. 819). Die bisher als Harz oder Farbstoff angesprochenen Inhaltsstoffe im Parenchym vieler Eichengallen haben einen strahligen Bau, und Verf. ist geneigt, sie für Hesperidin zu halten. Sie sind in kaltem und heissem Alkohol, Salzsäure, kaltem und siedendem Wasser unlöslich, in concentrirter Schwefelsäure nach Erwärmen löslich, in Alkalien unter Gelbfärbung löslich ; die allmählige Anwendung von alkoholischer Natron- lauge lässt oft die strahlige Structur deutlicher hervortreten; wendet man dieses Reagenz sehr schwach an, so bleibt ein durchscheinendes Skelett zurück von deutlich strahliger Structur. I, 2. Referate imil Besprechungen. 311 Im Nahrungsgewebe vieler Eicliengallen finden sich neben Amyhim und Proteinstoffen kugelige, glänzend rothbraune Körper von 30 bis 40 mm (soll wohl heissen Mikron; d. Ref.) Durchmesser, deren che- mische Constitution unaufgeklärt ist. FLtrcKiGEK hält sie für Harz, Lacaze Duthieks beschreibt sie als dem Nucleus analog und Beteeink nimmt an, dass sie aus der Zersetzung des Amylums hervorgehen. Verf. fand sie jedoch häufig in Zellen, in denen die Stärke noch ganz unverletzt war, und die verhältnissmässig weit von dem Bildungsheerd des Amylum abliegen. Sie färben sich mit Eisenchlorid langsam, aber intensiv dunkel. Ihr Verhalten gegen Alkalien zeigt deutlich das Vorhandensein einer Membran, und dass diese nicht aus Cellulose be- steht, erkennt man aus dem negativen Resultat der Zellstoff-Reactionen : weder mit Chlorzinkjod noch mit Jod-Schwefelsäure tritt Bläuung ein. Verf. stellt sie neben die von Sachs beschriebenen Gerbstoffkugeln. Moellcr (Mariobrimn). 312 . Neue Literatur. Neue Literatur. 1. Lehr- und Handbücher. Hager, H., Le microscope. Theorie et application. Trad. de rallemand par L. Planchon et L. HuGouNENQ. X et 264 pp. 8". av. 350 figg. Pai'is 1884. Heitzmann, C, Mikroskopische Morphologie des Thierkörpers im gesunden imd kranken Zustande. 8". m. 380 Figg. Wien (Braumüller). 25 M. Orth, Joli., Cursus der normalen Histologie zur Einführung in den Gebrauch des Mikroskopes sowie in das praktische Studium der Gewebelehre. 3. Aufl. Berl. (Hirschwald) 1884. gr. 8". m. 108 Figg. 8 M. Stein, S. Tli., Das Licht im Dienste wissenschaftlicher Forschung. 2. Aufl. HaUe (Knapp) 1884. 8". m. 431 Figg. u. 12 Tfln. 14 M. Stein, S. Th., Sonnenlicht imd künstliche Lichtquellen in ihrer Bedeutung für wissenschaftliche Arbeiten. Halle (Knapp) 1884. 8». m. 167 Figg. u. 2 Tfln. 4 M. 2. Mikroskop und mikroskopische Apparate. a. Neue Mikroskope. Cox, J. D. , A new form of microscope-stand with concentric movements (Proceed. Amer. Soc. Microscopists 6'i> ann. meet. p. 147). Lasaulx, A. v. , Ein neues , für petrogi-aphische und mineralogische Unter- suchungen bestimmtes Mikroskop (Verh. d. Naturhist. Ver. d. preuss. Rheinl. u. Westfalens Bd. XXXIX, 1882, Sitzungsber. p. 82). Aylwari>'s rotating and swinging tail-piece microscope (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. H. vol. 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Wohl kein lustrumeut, das wissenschaftlichen Zwecken dienen soll, hat in einer kurzen Reihe von Jahren so ausserordentlich' viel Ver- änderungen erfahren, wie das Mikrotom. Aus seinen primitivsten An- fängen hat es sich zu einer Vollendung entwickelt, die eigentlich kaum noch viel zu verbessern gestattet ; doch möchte es wohl am Platze sein, die Vorzüge verschiedener jetzt am meisten gebräuchlicher Instrumente und — weh mir — vielleicht auch ihre Mängel eingehender zu be- leuchten. Es könnte ja sein, dass eine oder die andere gute Einrich- tung des einen mit gutem Erfolge auch bei einem anderen angebracht würde, ohne dass ich im Interesse der Fabrikanten wünschen möchte, dass durch weitere Verbesserung eines schon an und für sich guten Instrumentes die Vorzüglichkeit desselben alle anderen überflüssig macht. Ein grosser Theil dieser übrigen könnte allerdings unbeschadet um die Wissenschaft vom Schauplatz verschwinden. Zweck dieser Abhandlung ist, nicht sowohl die Leistungsfähigkeit jetzt hauptsächlich beliebter Mikrotome und ihrer Hilfsapparate zu be- sprechen, als auch dem in der Mikrotomtechnik weniger Bewanderten verschiedene Hinweise zubieten, welche dies oder jenes Missliugen beim Anfertigen von Schnitten erklären und demselben Abhülfe zu schaflen versuchen. Zeitsclir. f. wiss. Mikroskopie. I. 3. 22 328 Gottschau: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. I, 3. Sämmtliche Arten von Mikrotomen * lassen sich von zwei Grund- formen ableiten, deren eine im OscHATz'schen, deren andere im Rivet- schen zu erblicken ist. Bei jenem geschieht die Hebung des Objectes durch Mikrometerschraube, bei diesem durch Verschiebung auf einer Ebene, welche allmählig gegen die horizontal gelegene Schnittebene des Messers ansteigt. Bei der Hebung durch eine Schraube ist auch freie Messerführung möglich, beim Verschieben des Objectes auf ansteigen- der Bahn muss dagegen das Messer auf einem horizontal laufenden Schlitten befestigt und geführt werden. Jene scheinbar grössere Be- quemlichkeit, das Messer nicht immer stellen und festschrauben zu müssen, mag einem Theil dieser Mikrotome, so namentlich dem durch GuDDEN und Löwe verbesserten RAxviEE'schen , grössere Verbrei- tung verschafft haben, im Grunde ist diese Art von Mikrotomen jedoch mit mehr Unbequemlichkeiten verknüpft, wie jede andere; dazu kommt, dass die Leistungsfähigkeit des Instrumentes nicht zu vergleichen ist mit derjenigen anderer Constructionen. Das Präparat muss bei den Mikrotomen mit freier Messerführung in einem Cylinder so festgeklemmt oder eingeschmolzen werden, dass es von der Mikrometerschraube ohne seitliche Abweichung nach oben gehoben Avird. Es ragt dabei um den Bruchtheil eines Millimeters über die obere Oeflfnung des Cylinders heraus, und dieser herausragende Theil wird von dem Messer abgeschnitten. Deshalb steckt der obere Rand des Cylinders in einer meist mit Glas bedeckten Metallplatte, um auf dieser Platte ein Aufliegen des mit der Hand geführten Messers und dadurch eine ruhige und sichere Führung desselben zu erzielen. Die Möglichkeit, feine Schnitte anzufertigen, hängt nun ab nicht nur von der geringen und gleichmässigen Hebnng des Präparates durch die Mikrometerschraube, sondern. ganz besonders noch von der Fixirung des Präparates, also von der Unmöglichkeit, seitlich gegen die Horizontal- ebene verschoben zu werden. Bei der Feinheit der abzutragenden Schnitte ist leicht einzusehen, dass die geringste, dem Auge nicht mehr wahrnehmbare Aenderung der Stellung des Objectes Ungleichheit der Schnitte oder Ausfallen derselben bewirken muss. ') Die hauptsächliclisten findet man erklärt und abgebildet in Dippel, „Das Mikroskop und seine Anwendung" II. Aufl. 1882, doch ist hier leider das nach Prof. Tiioma von Jung in Heidelberg ausgeführte nicht erwähnt : TiioMA, „üeber ein Mikrotom" Virciiow's Arch. Ed. LXXXIV p. 189—191 und Journ. R. Microsc. Soc. London Ser. II Vol. III, 1883, p. 298—307: diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 272 f. I, 3. Gottschau: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. 329 • « Bei den Cylindermikrotomen alter Constructiou wurde das Präparat auf einer Glasröhre festgeklemmt oder eingeschmolzen , bei anderen (Ranviee, Gudden, Oschatz) ist der Cylinder unten durch eine ver- mittels der Mikrometerschraube nach oben bewegliche Platte geschlossen. Der ganze Hohlcylinder wird hier mit einer leicht erstarrenden Masse (Paraffin, Wallrath etc.) vollgegossen und in die Masse das Präparat so eingebettet, dass von ihm beim Heraustreten aus dem Cylinder be- liebig feine, rings von der Einbettungsmasse umgebene Schnitte abge- nommen werden können. Es kommt also hierbei ganz besonders darauf an, dass der Cylinder der Einbettungsmasse genau den Wandungen des Metallcylinders anliegt, da er sonst nicht feststeht und dann natürlich kein gleichmässig dicker Schnitt möglich ist. Bedenkt man aber, dass schon, um die Walze in dem Cylinder heben zu können, ein festes An- liegen derselben nicht möglich ist, und weiss man aus Erfahrung, wie sämmtliche Einbettungsmassen beim Erkalten sich zusammenziehen, so kommt man leicht zu der üeberzeugung, dass ein genaues Einpassen mit vieler Mühe und Vorsicht verbimden ist. Der einzige Vortheil, welchen Instrumente der eben beschriebenen Art haben, besteht ausser ihrer Billigkeit — das einfache WELKER'sche kostet nur 11*5 Mark — darin, dass man durch geeignetes 'Anbringen eines Kastens rings um die Glasplatte auch unter Wasser oder Alkohol schneiden kann, was in be- sonderen Fällen, so namentlich bei sehr grossen Objecten, von Vortheil ist. Auf feine Schnitte aber, d. h. auf Schnitte von '/loo; j^ selbst auf eine fortlaufende Reihe solcher von '/go mm wird nur Der rechnen können, welcher durch lange Uebung und ausserordentliche Geschicklichkeit die technischen Schwierigkeiten zu überwinden gelernt hat, denn zu der bei solcher Schnittfeinheit zweifellos unsicheren Messerführung mit der Hand und zu der, wenn auch nur minimalen Beweglichkeit des Präparates kommt noch die Unsicherheit der gleichmässigen Hebung durch die Schraube. Angenommen, yöian könnte den todten Gang derselben durch eine Feder vollständig ainfheben, so ist es ungeheuer schwierig, derartige Mikro- meterschrauben tadellos d. h. mit absolut gleichen Abständen der Win- dungen herzustellen, ja es ist über eine bestimmte Länge und Feinheit hin- aus unmöglich. Die Ungenauigkeiten sind dann nicht durch Messung der Windungsabstände nachzuweisen, sondern allein durch den Erfolg rcsp. Misserfolg beim Gebrauch. Vorausgesetzt aber, es wäre möglich, mit pein- lichster Sorgfalt eine tadellose Schraube und Schraubenmutter herzustellen, so wird solche Herstellung bedeutend mehr Mühe und somit auch mehr Kosten verursachen , als eine ebene Bahn, auf welcher ein Schlitten 22* 330 GottscLau: Mikrotome iiml ibrc llilfsapparate. I, 3. gleicbmässig gehoben wird. Beträgt die Hebung des Objectes im Ganzen 10 Millimeter und sollen diese 10 Millimeter in völlig gleiche Theilabschnitte zerlegt werden, z. B. jeder Millimeter mir in 100, so muss es für jeden der 10 Millimeter möglich sein, neun und neunzig Mal den Gegenstand gleich hoch und nur so weit zu heben, dass er im Ganzen einen Millimeter, jedes einzelne Mal ein hundertstel gehoben ist. Für 10 Millimeter würden also 1000 Hebungsabschnitte von Vioo Milli- meter herauskommen, üeberträgt man nun diese Eintheihing auf die schiefe Ebene der Windungen an der senkrecht sich bewegenden Schraube, so leuchtet ein, dass die Abtheilungen um so kleiner werden, je dünner der Schraubendurchmesser, um so grösser, je dicker er ist. Mit zunehmender Länge der Abtheilungen wächst aber auch die Mög- lichkeit, sie vollkommen übereinstimmend zu machen, und es wäre daher nur nöthig, möglichst dicke Schrauben zu verwenden, wenn nicht zu- gleich mit der zunehmenden Dicke auch die Herstellung der gleichen Gewindeabstände bedeutend erschwert würde. Viel leichter ist eine gleichmässige Hebung auf der schrägen geradansteigenden Ebene zu erreichen. Sie bildet die Hypotenuse des rechtwinkligen Dreiecks, in welchem die senkrechte Kathete die absolute Höhe anzeigt, um welche das Object gehoben werden soll, und in welcher dasselbe bei senk- rechter Schrauben bewegung auch wirklich gehoben wird. Je länger die Hypotenuse construirt wird, um so geringer ist ihre Neigung gegen die Horizontale und um so länger der Weg, welchen der Gegenstand durch- laufen muss, um eine bestimmte Strecke gehoben zu werden. Je länger aber der Weg, um so leichter und deutlicher ist auch die Eintheihing in gleiche Abschnitte, in welchen die Vorwärtsbewegung des Gegen- standes und dadurch zugleich seine senkrechte Hebung vor sich geht. Je kürzer diese Strecken auf einer und derselben schrägen Ebene gewählt werden, um so geringer auch der Hub. Es stünde also der Hebung des Objectes um die kleinsten Theile eines Millimeters nichts im Wege, da man ja die Neigung der Ebene auf ein Minimum reduciren, und da- durch auch ihre Länge und die Grösse der Abschnitte beliebig lang •machen könnte. Schliesslich ist aber auch hier dem Können eine Grenze gesetzt, indem die Schwierigkeit, eine vollständig plane Ebene herzu- stellen, uaturgemäss mit der Länge derselben wächst. Dieser Uebel- stand kann bis zu einem gewissen Grade durch die gleitende Fläche des Schlittens aufgehoben werden, indem derselbe durch seine Länge die an einzelnen Stellen vorhandenen Ungenauigkeiten ausgleicht. Während nun bei den durch Mikrometerschraube senkrecht gehobe- nen Präparaten die Präcision erfahrungsgemäss kaum "für '/aoo Millimeter I, 3. Gottscliau: Mikrotome uikI ihre Ililfsaiiparatc. 331 zu erreichen ist, sind Schlittenraikrotome jetziger Coustruction im Stande, das Object Vi 000 Millimeter zu heben. Ein weiterer Uebelstand der Schraubenmikrotome ist die Abnutzung der Schraube, durch welche das Instrument sicher nicht an Güte gewinnt, während ein Schlittenmikrotom bei rationeller Benutzung, das heisst, wenn man den Schlitten nicht immer nur an einer Stelle benutzt und ihn stets, wenn möglich, die ganze Bahn durchlaufen lässt, durch den Gebrauch immer besser wird, da der Schlitten auf der Bahn sich immer gleichmässiger einschleift. Einem grossen Fehler der Schraubenmikrotome älterer (Cylinder-) Construction , dessen ich schon vorher Erwähnung that, hat man Ab- hülfe zu schaffen versucht: Die Beweglichkeit des Objectes im Cy- linder resp. die Schwierigkeit, dasselbe genügend zu befestigen, hat man aufgehoben durch einen Schlitten, welcher an Stelle des Cylinders das Präparat trägt, und als senkrecht stehende Platte in einer Coulisse ge- halten nach oben gehoben wird '. Das Präparat wird au ihm mittels einer Klammer festgeklemmt. Bietet diese Art der Befestigung imd Hebung auch mehr Vortheile als die frühere, so darf man doch nicht ausser Acht lassen, dass die Falze und die in sie eingreifenden Schlitten- ränder wieder aufs Genauste gearbeitet und in einander eingepasst sein müssen, und dass auch geringe Abnutzung ein Lockerwerden des Schlittens und eine selbst bei minimalem Grade immer bemerkbare Be- weglichkeit des Objectes zur Folge hat. Stellen wir nach dieser Betrachtung noch einmal kurz die Fehler und Vortheile zusammen, welche der Construction der beiden Hauptarten von Mikrotomen anhaften, so haben wir, abgesehen von allen technischen Schwierigkeiten in der Anfertigung, beim Schlittenmikrotom nur den Nachtheil, immer darauf achten zu müssen, dass der Schlitten jedesmal von Anfang bis zu Ende die Bahn durchläuft. Man darf ihn also, wenn man nicht mehr schneidet, nicht abheben, sondern muss ihn bis zum Ende der Steigung heraufschieben und abgleiten lassen. Die geringste Hebung beträgt y,oo(v/Miilitöeter. Durch Abnutzung wird die Güte des Instrumentes nicht beeinträchtigt. Bei den verbesserten Schraubenmikrotomen, also bei denen, welche das Präparat auf einem in der Verticale beweglichen Schlitten tragen, muss gleichfalls die Abnutzung der Schraube eine gleichmässige sein, und man müsste jedesmal die Schraube nach dem Gebrauch bis zu Ende drehen oder immer wieder genau da anfangen, wo man stehen geblieben 0 Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 242 : „Das neue Patent-Schlitten- mikrotom von Reicuert" und Dippel Das INIikroskop u. s. Anwendung p. 673- 332 Gottschau: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. I, 3. ist. Durch den Gebrauch ist eine Abnutzung der Schraube sowie der Schlittenführung unumgänglich, daraus folgt aber Lockerung der Theile nnd Ungenauigkeit der Hebung. Die geringste Steigung beträgt Vaoo Millimeter bei völlig tadellosen Instrumenten. Haben wir in Vorigem die Leistungsfähigkeit der beiden Haupt- constructionen einer eingehenden Prüfung nuterzogen, so bleibt noch übrig, für die einfachste Form der Mikrotome die Messerführnng und die Form der Messer näher ins Auge zu fassen. Bei sämmtlichen Mikrotomen, welche für feinere Arbeiten angefertigt werden, findet die Messerführung nicht mehr mit freier Hand, sondern durch einen Schlitten statt, der in horizontaler Ebene läuft und auf welchem das Messer fest- geschraubt ist. Die Stellung der Schneide fällt nun sehr ins Gewicht bei Anfertigung feiner Schnitte , und in richtiger Erkenntniss dieses Umstandes haben auch die Messer verschiedener Mikrotome sehr von einander abweichende Formen und Stellungen zum Präparat. Sehen wir vorläufig ab vom Schneiden am Mikrotom nnd vergegenwärtigen wir uns vor Allem, worauf überhaupt das Schneiden beruht, so werden wir nicht nur im häuslichen Leben, sondern ganz besonders bei den hierfür wohl maassgebenden Handwerkern und Künstlern beobachten, dass das Messer möglichst in seiner ganzen Länge durch den zu schneiden- den Gegenstand durchgezogen wird. Zeichnet man zum besseren Verständ- niss den Lauf des Messers auf, so er- hält mau beistehende Figur 1 einer idealen Messerführnng durch die Hand. ,„ , : \ T^ 1 Es ist in diesem Falle das Messer (m) Pr'' i ■■ \ — f,JPr -Pi* in sagittaler Stellung schräg von links nach rechts durch das Präparat (Pr) gelaufen und hat dasselbe in seiner ganzen Länge durchzogen. (Die punktir- "^\ : ten Linien zeigen den Gang der ein- zelnen Messerabschnitte). Aendern wir diese Zeichnung nur dahin ab, dass wir die Stellung des Messers in die 1. 2. Richtung bringen (Figur 2), in welcher es soeben lief, imd schneiden wir jetzt in umgekehrter Richtung von rechts nach links, indem wir das Messer gerade sagittal auf uns zuziehen, so erhalten wir den Gang des Messers am Mikrotom und die gleiche Figur wie vorhin, nur dass in letztem I, 3. GottscLaii: Mikrotome und ibre Hilfsapparate. 333 Falle das Messer um eine geringe Kleinigkeit länger sein muss und die Stellung des Präparates zu ihm etwas scliräger ist. Legt Jemand in einem speciellen Falle besonderen Wertli auf die Richtung, in welcher das Messer durch das Object gleitet, so kann er die Stellung des Ob- jectes leicht in der Weise ändern, dass die einzelnen Abschnitte der Schneide in vollkommen gleicher Weise das Präparat durchlaufen, wie in Figur 1. Die punktirte Linie (7"*r') markirt die so geänderte Stellung. Jedenfalls leuchtet hieraus schon ein, dass es verlorene Mühe ist, com- plicirte Constructionen zu ersinnen, um durch doppelte Schlittenführung ein Messer in der „Diagonale" durchs Präparat zu führen, wie z. B. bei BöcKEß's neuem Mikrotom '). Je länger die Messerschneide ist im Verhältniss zu dem zu durch- schneidenden Präparat, um so weniger Druck muss beim Schneiden an- gewendet werden, und um so vollkommener ist die Schuittführung bei Benutzung der ganzen Schneide. Je kürzer dagegen die Strecke ist bei gleicher Grösse des zu schneidenden Gegenstandes, auf welcher das Messer benutzt wird, um so grösser ist der Druck, Avelcher angewendet werden muss, und um so mehr wird aus dem Schneiden ein Abquetschen oder Meissein. Dass es bei solcher Handhabung eines schneidenden Instrumentes sehr auf das Material ankommt, welches man bearbeitet und auf die Art der Arbeit, liegt auf der Hand ; man wird z. B. schwer- lich ein Stück Fleisch abhauen, einen Knochen durchschneiden AvoUen, sondern umgekehrt verfjihren und ferner leuchtet ein, dass eine ge- schnittene Fläche viel glatter und gleichmässiger ist, als eine gequetschte, und dass daher die möglichste Ausnutzung der Messerschneide die grösste Garantie für vollkommene Schnitte bietet. Noch ein anderer Umstand fällt aber noch bei dem Schneiden eines Gegenstandes erheblich ins Gewicht : die Stellung der Flächen des Messers zur Schnittfläche. Auch hier lehrt die Erfahrung, dass ein Messer um so flacher aufj^elegt werden muss, je feiner das abzuschnei- dende Stück ausfallen scul ; stellt man das Messer in steilere Richtung zu der zu schneidenden Fläche, so Avird aus dem Schneiden schliesslich ein Schaben und Kratzen. Den feinsten und vollkommensten Schnitt erlangt man mit einem Messer, wenn man dasselbe so stellt, dass die der Schnittfläche zugekehrte Seite des Messers nur am äussersten Rande der Schneide den Gegenstand berührt, der dahinter gelegene Tlieil hin- gegen möglichst dicht ohne ihn zu berühren darüber fortgeht. Um auch in dieser Hinsicht die Möglichkeit zu haben, Wechsel eintreten zu lassen, 1) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 244 ff., 267 f. 334 Gottschau: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. I, 3. ist bei einigen Mikrotomen eine besondere Einrichtung am Messer- schlitten vorhanden, z. B. bei Zeiss und Jung, ob mit besonderem Vor- theil wird sich des Weiteren ergeben. Vor Allem ist es nöthig, die Form der sich zur Schneide ver- einigenden Messerflächen zu prüfen, also die Form des Querschnittes vom Messer. Auch hier wird es gut sein, aus Beispielen des täglichen Lebens unsere Schlüsse zu ziehen. Unsere gewöhnlichen Tischmesser, Brod- oder Bratenmesser haben sämmtlich auf dem Querschnitt die Form eines Keils mit geraden Seiten, also eines gleichschenkligen Drei- ecks (Figur 3 a). Werden sie stumpf, so streicht man sie über einen Wetzstahl und legt dabei das Messer nicht vollkommen flach auf, sondern stellt es in möglichst spitzen Winkel zu ihm. Der Erfolg solches Wetzens ist nun der, dass nicht die ganze Fläche abgewetzt wird, wie es rationell geschehen sollte, sondern nur ihr äusserster Rand und dass somit aus der einfachen dreieckigen Form des Keils 3 ein Fünfeck wird, wie Figur 3 b in vergrössertem Mass- stabe darstellt. Allerdings convergiren die neugeschaffe- nen zur Schneide sich vereinigenden Flächen nicht in so spitzem Winkel, wie die ursprünglichen breiten, die Schneide kann daher auch nicht so scharf sein, aber dafür nimmt auch ihr Instandhalten resp. ihr Ab- schleifen einen ganz geringen Bruchtheil der Zeit in Anspruch, den ein Abschleifen der ganzen Fläche erfordern würde, und die Wirkung ist dennoch im grossen Ganzen dieselbe. Je härter der Gegenstand ist, welcher durchschnitten werden soll, um so dicker ist auch das Eisen, um so stumpfer der AVinkel der Schneide, und um so öfter müssen die schneidenden Flächen zu scharfer Kante vereinigt, also abgeschliffen werden. Bei feinen Messern würde das vorher geschilderte Verfahren der Umbildung der dreieckigen Keilform in ein Fünfeck von sehr nach- theiligem Einfluss auf die Leistungsfähigkeit sein, andererseits aber auch ein sorgfältiges Abschleifen der ganzen Flächen sehr viel Zeit erfordern, und so hat man den Ausweg eingeschlagen, dass man Messer, die stets haarscharf gehalten werden müssen, mehr weniger hohl schleift. Nach dem Grade solches Hohlschleifeus unterscheidet man ganz- und halbhohl geschliffene Messer. Der Vortheil, den das Hohlschleifen mit sich bringt, ist leicht einzusehen. Man stellt durch Schleifen oder Abziehen an der Stelle, wo es überhaupt nöthig ist, also an der Schneide, zwei in mög- lichst spitzem Winkel auf einander stossende Flächen her, ohne ge- nöthigt zu sein, von einer breiten Eisenfläche die Eisentheilchen gleich- massig abzuschleifen. Es ist daher ein grober Fehler, hohl geschliffene I, 3. Gott seh au: ^Mikrotome und ihre Hilfsapparate. 335 Messer schräg und nicht völlig flach auf die abzuziehende Fläche zu legen. Halbhohl geschliffene Messer werden darnach auf dem Streich- riemen (Str) die in Figur 4 gezeichnete Gestalt auf dem Querschnitt zeigen. Bei ganz hohl geschliffenen Messern legt sich der vordere Rand au der Schneide noch flach auf die reibende Fläche des Steins oder Streichriemens, es convergiren in Folge dessen die abgeschliffenen Flächen in einem ganz enorm spitzen Winkel (Figur 5) und die Schärfe des Messers hält länger an. Dieser Vortheil ist aber mit einem namentlich für unsere Zwecke wichtigen Nachtheil verbunden, der darin besteht, dass die fast papierdünne Schneide auch wenig widerstandsfähig ist, sich leicht wölbt und so dem zu schneidenden Gegenstand ausweicht. Man kann sich hiervon leicht 5_ überzeugen, wenn man solch ein Messer ganz leicht, ohne zu schneiden über den Nagel zieht ; an der Stelle, wo es den Nagel berührt, wölbt es sich etwas nach oben. Nach Allem wird man für ein Mikrotom nicht ein Messer der letzteren Art wählen, denn es wäre eigentlich nur brauchbar für ganz weiche, wenig resistente Präparate und würde ausser dem Vorzug, dass man es weniger oft abziehen müsste, gar keine Vortheile gewähren. Um so mehr wird man von solchem Messer Abstand nehmen, als die weniger hohl geschliffenen Messer in der Feinheit der Schnitte dasselbe auch für festere Präparate leisten, wenn man sorgfältig auf ihre Instand- haltung sieht, das heisst, wenn man es sich zur Regel macht, immer nach einer bestimmten Anzahl von Schnitten (bei weichen Objecten viel- leicht nach 100, bei härteren nach 50) sie sorgfältig abzuziehen, und überhaupt für weiche Objecite ein anderes Messer zu wählen, als für harte. Zwei Formen von Messern haben sich durch die Praxis als aus- reichend bewährt: die eiue Form ist nur ganz wenig hohlgeschliffen, weicht also von der Form eines Dreiecks im Durchschnitt wenig ab. Diese Messer benutzt man für harte Objecte. Die andere Form ist die am meisten gebräuchliche, bei ihr ist die eine Seite (und zwar die nach oben gekehrte) hohl geschliffen, die untere entweder ganz plan oder nur ganz wenig hohl. Ist sie plan, so wird beim Abziehen au dem Rücken ein dünner Draht untergelegt, so dass nicht die ganze Fläche aufliegt und abgezogen werden muss, sondern nur der der Schneide zunächst liegende Theil (Figur 6). Möge der Leser entschuldigen, wenn ich an dieser Stelle gleich auf 336 Gottscliau: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. I, 3. die Art des Abziehens etwas näher eingehe. Noch in neuester Zeit findet man aber gerade hierüber einestheils so ungenaue, anderntheils auch so falsclie Angaben, dass es gerechtfertigt erscheinen möchte, der Ansicht entgegenzutreten , dass Schleifen und Abzielien eine Kunst sei, die er- lernt werden müsse, zu der aber nicht §*il_ ■■■ .-""^'-A jeder beanlagt sei, und von deren Aus- 6. Übung daher so mancher abstehen müsse. Meiue eigenen Erfahmuigen haben mich eines Besseren in sofern belehrt, als ich nicht nur an mir selbst, souderu aucli während vieler Wintersemester auf dem Präparirsaale durchgehend die Beobachtung gemacht habe, dass mit etwas gutem Willen das Abziehen und Schleifen der Messer allerdings nicht ohne einige Mühe von Jedermann gelernt werden kann. Dem Arbeiter am Mikrotom erspart solches Können ausser vielem Geld auch vielen Aerger, denn ein tadellos geschliifenes Mikrotommesscr macht überhaupt nur feine Schnitte möglich, dasselbe muss unter dem Mikroskop bei 100- bis 200maliger Vergrösserung die Probe bestehen, und nicht eine sägeu- förmige (wie häufig angenommen wird), sondern eine tadellos gerade . Linie an der Schneide aufweisen. Eine solche Schneide neu zu schaffen, dazu gehören allerdings besondere Schleifapparate, und nur wenige Schleifer sind im Stande, für ein Mikrotommesser tadellose Arbeit zu liefern, dahingegen sie im Stande zu halten ist keine grosse Kunst, sondern erheischt nur Vorsicht im Gebrauch und beim Abziehen, und dazu mögen folgende Hinweise dienen. Auf das Schleifen von Messern an dieser Stelle genau einzugehen, würde mich zu weit führen, da namentlich für unser Mikrotoramesser. be- sondere Vorrichtungen, so unter anderem besonders grosse und tadel- lose Steine nothwendig sind. Ich will daher nur über das Abziehen imserer Messer einiges anführen : Von allen Streichriemen sind von vorn- herein für Messer, die nicht ganz hohl geschliffen sind, jene zu ver- werfen, bei welchen zwei Lederriemen, die beliebig straff gespannt wer- den können, die reibende Fläche abgeben. Ein nicht biegsames Messer muss, wenn es eine feine Schneide erhalten soll, auf einer vollständig planen und daher harten Fläche hin und her bewegt werden. Dass dabei der Rücken vorangeführt wird, die Schneide ihm folgt (umgekehrt geschieht es auf dem Steiu), und dass das Wenden des Messers auf die andere Seite stets über den Rücken geschehen muss, ist ja genügend bekannt. Meine Behauptung, dass für uubiegsame Messer, also speciell für unsere Mikrotommesser, nur harte Streichriemen brauchbar sind, I, 3. Gott schau: Mikrotome und ilire Hilfsapparatc. 337 wird am besten durch Figur 4 bewiesen, bei welcher die Gestalt des Messers die leicht erkennbare Form erhält, während bei einem sich biegenden Lederriemen (Figur 7) die zur Schneide sich vereinigenden Flächen nicht plan, sondern convex, also in zwei Bogen auf einander stossen : ^^^^^.^ — -^ l C . Beide Figuren unterscheiden sich ^^-■^•-sa^y-^^^^^^^^j- ^^^rwa besonders durch den Winkel, in welchem 7 die Schneideflächen sich vereinigen und dieser Winkel ist bei weichen Streichriemen stumpfer. Ist dieser Unter- schied in der Form anfangs auch nur gering, so wird er bei anhaltendem Gebrauch immer auffallender und beeinträchtigt schliesslich sehr das Schneiden. Bei einiger Uebung ist es leicht, einem Messer anzusehen, ob es auf festem oder losem Streichriemen abgezogen ist, man sieht in letzterem Falle statt eines schmalen planen Saumes an der Schneide die schmale convexe Fläche". Von den mir bekannten verschiedenen Streich- riemen mit harter Unterlage : den Americanischen, denen von Reich und von Zimmermann, sind die letzteren von Zimmermann in Berlin unstreitig die besten. Es ist kaum nöthig, noch hervorzuheben, dass das flach aufliegende Messer beim Abziehen nicht fest aufgedrückt werden darf, da durch den Druck auch das Leder etwas herunter gedrückt wird, und so an der Schneide wieder eine Convexität entsteht. Beobachtet man die in Vorstehendem angegebenen Hauptregeln des Abziehens, so bleiben die Messer dauernd tadellos. Ich arbeite z. B. schon seit zwei Jahren mit denselben Messern, ziehe dieselben, nach 50 bis 100 Schnitten, auf No. 3 und 4 des ZmjiERMANN'schen Streichriemens sorgfältig ab und bin in Folge dessen ohne Hülfe eines Schleifers im Besitze mehrerer vollständig schartenfreier sehr scharfer Messer. Was die Stellung der unteren Messerfläche zur Schnittfläche be- trifft, so wurde vorhin hervorgehoben, dass der Messerschlitten einiger Mikrotome mit einer Vorrichtung versehen sei, um diese Neigung be- liebig vermehren oder vermindern zu können: Schneidet man einen harten Gegenstand, z. B. Ebenholz oder Knochen, so muss erfahruugs- gemäss das Messei' steiler aufgesetzt werden, als bei weichem Holz, wenn das Messer nicht abgleiten soll, und so wird mau auch beim Schneiden mit dem Mikrotom die Stelhmg verschieden wählen müssen. Berücksichtigen wir aber, dass wir schon für gut fanden, zweierlei Arten von Messern uns zu bedienen: der auf dem Querschnitt keil- förmigen und der etwas hohlgeschliffeuen, so wird uns eine derartige Einrichtung zum Stellen des Messers überflüssig erscheinen, denn am Griff kann ja schon das Messer für harte Gegenstände so gerichtet 338 Gottschau: ]Nlikrotome und ihre Hilfsapparate. I, 3. sein, dass es, auf den Schlitten geschraubt, eine etwas steilere Stellung einnimmt. Nach meiner Ansicht trägt überhaupt eine geringe Differenz in der Neigung des Messers wenig oder garnichts bei zum Gelingen feiner Schnitte, ein wirklich scharfes Messer thut immer seine Schuldigkeit, ein stumpfes muss steiler stehen, um angreifen zu können, schabt aber dafür auch mehr als es schneidet. Das häufige Misslingen beim Schnei- den mit dem Mikrotom — natürlich kann hier nur von ganz feinen Schnitten in grosser Anzahl z. B. Serienschnitten die Rede sein — ist von ganz anderen, viel schwerer wiegenden Umständen abhängig, welche, zum Theil wenigstens, auch schwer zu umgehen sind. Vor Allem kommt es auf die gleichmässige Härtung und Einbet- tung des Präparates an. Finden sich in demselben z. B. bei weicher Einbettungsmasse harte, vom Messer schwer zu überwindende Stellen, so werden diese härteren Stellen bei feinen Schnitten leicht ausfallen und erst nach mehrmaligem Höherstellen des Präparates wird sie das Messer durchdringen, sie werden natürlich dann dicker werden. Ist aber alles, Präparat wie Einbettungsmasse, in gehörigem Verhältniss der Consistenz zu einander, so ist die Zimmertemperatur sehr zu be- achten, bei welcher man schneidet, und welche auch, wenn man nicht besondere Vorkehrung getroffen hat, das Präparat besitzt. Jede Paraffin- einbettungsmasse ist nur innerhalb bestimmter Temperaturgrenzen zum Schneiden verwendbar, und die namentlich in neuster Zeit so vielfach bekannt gegebenen Modificationen bezüglich der Mischung mit Talg, V^asilin, Wallrath, Oel und anderen Fetten bergen auch nicht das Geheim- niss einer für alle Temperaturen gleich zweckmässigen Mischung. Allein die üebung lehrt, dass man in einem Zimmer von 14" R. eine Mischung mit niedrigerem Schmelzpunkt zum Schneiden verwendet, als in einem von 20", und dass man bei einer Temperatur von 24" und dar- über auf Anfertigung von Schnittserien überhaupt verzichtet, da das Abkühlen in Wasser oder in Spiritusdämpfen zu umständlich ist und zu kurze Zeit vorhält. Dass trotz Allem die Einbettung in Paraffin für Untersuchungen zoologischer Objecte nach dem von Giesbeecht ' und BtJTSCHLi ^ vorgeschlagenen Verfahren vor allen anderen den Vorzug verdient, beweist die immer grössere Verbreitung dieses Verfahrens. Weitere, nicht zu unterschätzende Aufmerksamkeit verlangt die ') GiESBRECHT, W., Zur Schncidetechnik (Zool. Anz. Bd. IV No. 32 p. 483 f ). 2) BüTscHij, 0., Moditication der Parafüneinbcttmig für mikroskopische Schnitte (Biol. Centralbl. Bd. I No. 19 p. 561 ff.). I, 3. Got tschau: Mikrotome und ihi'e Hüfsapparate. 339 Fixiruug des Messers, und diesem Punkt ist in neuester Zeit unstreitig viel zu wenig Aufmerksamkeit gezollt worden. An allen neueren Mikrotomen wird das Messer an seiner Handhabe auf verschiedene Weise am Messerschlitten festgeschraubt und ragt von hier aus frei d. h. ohne irgendwelchen Halt nach der Seite herüber, wo das Präparat sich befindet. An dem Mikrotom von Fkitsch ' lernte ich vor Jahren eine Einrichtung kennen, durch welche auch das freistehende Ende des Messers fixirt wird: Eine am Messerschlitten angeschraubte Feder übt mit einer an ihrem freien Ende befindlichen Schraube eiuen geringen Druck auf das Ende des Messers aus und stellt es dadurch vollkommen fest. Ohne den Nutzen solcher Vorrichtung genügend zu erkennen, arbeitete ich später mit einem LoNG'schen Mikrotom, an welchem diese Feder nicht vorhanden ist, und erzielte bei kleineren Präparaten auch die gewünschte Feinheit und Präcision in den Schnitten. Bei Präparaten von 8 mm Länge aber und darüber war das Schneiden trotz gleicher Sorgfalt von so vielen Misserfolgen begleitet, namentlich bei härteren Gegenständen, dass ich sehr bald die Feder des FEiTscn'schen Mikro- toms mit einer kleinen Veränderung auch auf dem meinigen anbringen Hess. Ich habe seitdem nie mehr über Ausfallen oder Uugenauigkeiten der Schnitte klagen können und mit dem relativ kleinen Instrument (Länge 20 cm) Säugethierembryonen von 18 mm Länge in Sagittal- und Frontalserien zerlegt. Der Grund, wesshalb eine derartige Feder bei grösseren Präparaten oder überhaupt, wenn man das freie Ende des Messers zum Schneiden benutzt, zur Ausführung feiner Schnitte nicht zu entbehren ist, liegt klar vor Augen. Der Stahl des Messers ist vom fixen Punkte aus mindestens 12 cm lang, ein Federn desselben, bei welchem sich das freie Ende nur um Hundertstel eines Millimeters hebt oder senkt, ist dem Auge kaum /bemerkbar, fällt dagegen bei Serien- schnitten sehr ins Gewicht. Wie stark aber ein noch so fest einge- spanntes Messer federt, davon kann mau sich an jedem Mikrotom selbst überzeugen : wenn man nur geringen Druck auf das Ende ausübt, so wechselt das Spiegelbild auf der oberen Fläche seinen Ort. Ich habe die Feder ähnlich der von Fritsch anfertigen lassen, doch mit dem Unterschiede, dass ich die Regulirung des Druckes durch eine Schraube am Schlitten bewerkstellige, welche die über dem Messer stehende Feder herunter biegt, so dass ihr Ende auf das Ende des Messers wenig drijckt. Nachdem wir im Vorhergehenden im Grossen und Ganzen die Vor- «) Cfr. DippEr, 1. c. I. Th. 2. Abthl. 2. Aufl. p. 675. 340 Gottscbau: Mikrotome und ihre Ililfsapparate. , O. Züge und Nachtheile der verschiedenen jetzt am meisten gebräuchlichen Mikrotomconstructionen einer eingehenden Besprechung unterzogen haben, und wir zu dem Schluss gekommen sind, dass für gleichmässig feine Mikrotom-Schnitte sich am Besten die Schlittenmikrotome eignen, sei es mir erlaubt, auf eine Verbesserung dieser Instrumente die Auf- merksamkeit zu lenken, die von Professor R. Thoma in Heidelberg zu- erst angegeben und von dem dortigen Mechaniker Jung ausgeführt wurde. Wenn auch die früheren Schlittenmikrotome (namentlich die Long- schen) sehr genau arbeiteten, so liefen doch nach einiger Zeit, wenn das Instrument viel benutzt wurde, Klagen ein, dass die Präcision Manches zu wünschen übrig lasse, und dass keine gleichmässig feinen Schnitte mehr auszuführen seien. Ein weiterer Uebelstand, der sich aber schon von Anfang an bemerkbar machte, war der, dass beim Schneiden der Messerschlitten immer schwerer lief, so dass man ihn öfter abheben und von Neuem ölen musste. Während diese Unbequem- lichkeit eine Folge des genauen Einschleifens der Flächen von Schlitten und Bahn war, entstand die ungenaue Schnittführung aus der ungleich- massigen Abnutzung dieser Flächen, auf welche schon anfangs dieser Arbeit hingewiesen wurde. Es war beim Schneiden nicht genügend darauf geachtet worden, dass die ganze Fläche der Bahn vom Schlitten durchhiufen wurde, sondern es war nur der gerade nothwendige Theil meist also wohl die Mitte benutzt worden. R. Thoma construirte daher eine Bahn, bei welclier der Schlitten auf 5 „Punkten" d. h. auf fünf 2 bis 3 mm schmalen Flächen läuft, und welche bei genügendem Fest- stehen des Schlittens grosse Stetigkeit und leichte Beweglichkeit des- selben gestattet. Die Einrichtung hat sich so ausgezeichnet bewährt, dass sie auch schon längere Zeit für andere Schlittenmikrotome und für den Messerschlitten verschiedener Schraubenmikrotome im Gebrauch ist. Beim JuNG'schen Mikrotom (so wird jetzt für gewöhnlich das nach Thoma's Angaben von Jung angefertigte Mikrotom bezeichnet) läuft der Messerschlitten auf 5, der Objectschlitteu auf 6 Punkten (Figur 8). Aber auch hier wird anzurathen sein, immer darauf zu achten, dass nicht nur ein Theil, sondern, wenn ir- gend möglich, stets die ganze Bahn vom Schlitten durchlaufen wird, da bei ungleichmässiger Abnutzung der langen Bahn gleichfalls Ungenauigkeiten im Gleiten des Messers sich einstellen müssen. I, G Otts eil au: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. 341 Auf die weiteren Vorzüge des JuNG'schen Mikrotomes (Figur 9) liier näher einzugehen, ist nicht der Zweck dieser Arbeit, doch kann auch ich der Ansicht anderer Forscher aus voller Ueberzeu- gung beipflichten, dass diesem Instrument die Zukunft gehört. Zum Schluss komme ich auf die Ililfsapparate eines möglichst vollkommen ausgestatteten Mi- krotoms zu sprechen, auf den Präparaten sc hie her, auf den sogenannten Schnittstre- cker und den Objecthalter. Was den Präparatenschieber an- belangt, welcher statt der Hand den Präparatenschlitten durch eine Mikrometerschraube vor- wärtsbewegt, so finden wir eine derartige Vorrichtung bei dem SpENGEL'schen und beim Jung- schen Mikrotom. Bei jenem be- trägt die Länge der Schraube gerade so viel, wie die Länge des Instrumentes, und ist seit- lich am Instrument fest auge- bracht , wird aber auch auf Wunsch fortgelassen '. Am JuNo'schen Mikrotom ist die Mikrometerschraube kürzer und wird jedesmal an geeigneter Stelle festgeschraubt, sie besitzt aber eine Schnappeinrichtung, durch welche die gewünschte Umdrehung der Schraube sich jedesmal dem Ohre vernehmbar macht, ein Vortheil, den man namentlich beim Schneiden von Serien zu würdigen lernt, bei welchen das Auge schon für die einzelnen Schnitte genügend in Anspruch genommen ist. Beschreibung und Abbildung 9. »)Cfr. DippEi. 1. c. p. 677. 342 Gottscliau: Mikrotome und ihre Ililfsapparate. I, 3. dieser Eiurichtung findet man in den Mittheilg. a. d. Zool. Stat. zu Neapel IV. Bd. Heft 3 p. 433 ; in the American Naturalist Vol. XVII, 1883, No. 12 p. 1313; in Bull, de la Soc. Beige de microsc. t. X p. 56 ; Journal de Micrographie, 1883, Nov. et Dec. lieber Schuitt- strecker ist in dieser Zeitschrift schon referirt worden (Bd. I, 1884, p. 270 und 273), ferner dies Heft (unter den Referaten). Der Objecthalter, von allen soeben angeführten Hilfsapparaten der wichtigste, möge noch in Folgendem unsere Aufmerksamkeit in Anspruch nehmen. Schon anfangs dieser Arbeit hatten wir verschiedene Formen des- selben insofern kennen gelernt, als bei den Cylinderraikrotomen der Objecthalter entweder aus einem Cylinder bestand, mit welchem das ein- geschmolzene oder eingeklemmte Object gehoben wurde, oder noch ein- facher aus einer Platte, auf welche das Object so aufgeschmolzen wurde, dass es mit dem Paraffin den ganzen Cylinder bis zur hebenden Platte möglichst vollkommen aber doch so ausfüllte, dass es in ihm nach oben herausgeschoben werden konnte. Die Nachtheile beider Methoden hatten wir zur Genüge erkannt. In neuerer Zeit ist man von dem Einschmelzen in einen Kasten auch bei den Schlittenmikrotomen vollkommen abgekommen, und wer einmal selbst die Unbequemlichkeiten des Einschmelzens und die Un- zuverlässigkeit im Fixiren des Präparates erprobt hat, kommt überhaupt nicht mehr darauf zurück. Nur in einzelnen Fällen ist bei ganz kleinen Präparaten vielleicht noch das Aufschmelzen auf eine frei stehende ge- riefte Platte, wie solche den ZEiss'schen Mikrotomen beigegeben wird, am Platz. Am wenigsten zeitraubend, am zuverlässigsten und somit am zweckmässigsten ist jedenfalls die Befestigung des Präparates zwischen Platten, welche durch Schrauben beliebig fest aneinander ge- drückt werden können, und bei welchen man nöthigenfalls immer wieder die bei verschiedener Temperatur locker werdenden Platten fester an- ziehen kann. Die einfachste Form solcher gegeneinander drückenden Platten ist die Zange, welche auch den meisten Mikrotomen sowohl Schlitten- als Schraubenmikrotomen angefügt ist. Ein grosser und häufig beklagter Uebelstand besteht bei dieser einfachen Eiurichtung darin, dass die Klammer nur um eine verticale Axe, also in der Horizontalebene drehbar ist, uud dass daher nur die Stellung des Ob- jectes zum Angriffspunkt des Messers geändert werden kann, nicht die Lage des zu schneidenden Gegenstandes zur Schnittebene des Messers. Solchem Mangel suchen auch verschiedene Verfertiger von Mikrotomen (z. B. Schanze, Zkiss, Spengel u. A.) abzuhelfen, indem sie durch 1,3. Got tscbau: Mikrotome und ihre Hilfsapjiarate. 343 Drehung um eine sagittale Axe die Aenderung der Stellung des Prä- parates in frontaler Ebene ermöglichen. Doch auch diese Neuerung ist nicht ausreichend, es fehlt die Möglichkeit des Einstelleus in der dritten Ebene. Da solch ein Mangel sich namentlich bei Serieuschnitten von Embryonen sehr bemerklich macht, wenn man genau in bilateraler Symmetrie schneiden will , und man viel kostbares Material verliert, wenn man nach den ungenügend ausgefallenen Probeschnitten das Präparat aus der Klammer nehmen und in anderer Stellung einschrauben oder gar ganz umbetten muss, so construirte Verfasser dieses im Jahre 1880 eine „Mikrometerklammer für Keil- und planparallele Schnitte", bei welcher in jedem Augenblick ohne vorherige Vorbereitung die Lage des Präparates nach drei Dimensionen geändert werden kann, und mit der man zugleich im Stande ist, Keilschnitte von bestimmter Dicke, gleichwie planparallele anzufertigen. Die Klammer kann sowohl an Schrauben- wie an Schlittenmikrotomen angebracht werden und wurde in den Sitzungsberichten der Würzburger Phys. med. Gesellschaft 1881 genau beschrieben, auf der damaligen Naturforscherversammlung in Salz- burg ausgestellt und gleichzeitig demonstrirt zusammen mit den durch sie augefertigten Schnittserien von Embryonen. Die Schnitte waren entweder keilförmig oder planparallel oder wechselnd ausgeführt, und betrug die Grösse der Schnitte in den verschiedenen Serien zwischen 3 und 18 Millimetern. Da diese Klammer in der Folge verschiedene Abänderungen erlitt, die nicht weiter bekannt gegeben sind, so möge es mir gestattet sein, an dieser Stelle die Mikrotomklamraer für Keil- und planparallele Schnitte r::.. sMsü! 10. in ihrer .neuen Form an der Hand von Abbildungen zu beschreiben (Figur 10, 11, 12). Auf dem etwas verlängerten Präparatenschlitten ist der Zapfen (Z), welcher die ganze Vorrichtung trägt, mehr nach hinten angebracht, als Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 3. 23 344 Gottschau: Mikrotome und ilire Hilfsapparate. 1,3. dies gewöhnlich z. B. bei dem LoNa'schen Mikrotom der Fall ist. Auf dem Zapfen sitzt ein Messiugblock (MhT), vt^elcher, ebenso wie die be- kannte Klammer, in horizontaler Ebene um denselben drehbar ist und durch eine Schraube (S) festgestellt werden kann. In den Messing- block wird ein fester, in einen runden Zapfen (Zx) auslaufender Balken {B) gesteckt, welcher um den Zapfen (Z,) in frontaler Ebene gedreht wer- den kann. Dieser Balken ist am freien Ende von einer Stahlschraube (6', ) quer durchzogen, auf welcher eine nach vorn und hinten in einem Schlitz verschiebbare Klammer (KT) aufsitzt. Diese ist bestimmt, das Präparat zu fassen, kann 2 cm nach vorn oder hinten geschoben werden und ist um dieselbe Axe (5, ) drehbar, auf welcher sie (quer zur Axe) geschoben 11. wird. Die Feststellung der Klammer, wenn sie in die gewünschte Stellung gebracht ist, wird durch eine Schraubenmutter [S 11) bewirkt, die auf der Axe ihre beiden Branchen anzieht und dieselben dadurch gegen eine auf der Axe befindliche Messingröhre (R) drückt, so dass nach dem Feststellen ein Verschieben unmöglich ist. Die Drehbarkeit um die Axe ist dadurch nicht beeinträchtigt. Nach hinten läuft die Präparatenklammer in einen Hebel (H) aus, der ebenso lang ist, als die kleine Klammer selbst, so dass also, wenn letztere nach vorn ganz ausgezogen wird, die Entfernung von der Axe I. 3. Gottscliau: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. 345 (Ä*) bis zum Ende der Branchen gleich ist der, von der Axe bis zum Ende des Hebels. Auf letzteren drückt eine Mikrometerschraube (Mc S) von '/a mm Steigung und 3 cm Länge. Dieselbe läuft in einem Seiten- stück des Hauptbalkens 3 cm von der Axenschraube entfernt, und ist so gestellt, dass sie in dem grössten Bogen, welchen der 3 cm lange Hebel bei vollständigem Ausziehen der kleinen Klammer beschreibt, die Sehne bildet. In letzterem Falle, wenn also die kleine Klammer von der Axe aus nach vorn und hinten gleich lang ist, beträgt die Hebung vorn gerade so viel, als die Mikrometerschraube sich gesenkt hat, und die stärkste Hebung wird 2 cm (Länge des freien Theils der Mikro- meterschraube) betragen. Die Präparate werden aber nicht senkrecht, sondern im Bogen gehoben, und so entstehen Keilschnitte, die um so spitzer zulaufen, je grösser die Länge des Präparates in sagittaler Rich- tung ist. Durch grössere oder geringere Umdrehung der Mikrometer- schraube kann man beliebige Keilschnitte von genau bestimmter Fein- heit anfertigen. Ist der Krümmungsradius des Präparates kürzer als 3 cm, so wird das vorn in der Klammer durch eine Schraube festge- klemmte Präparat mit der Klammer nach hinten geschoben. Der kleinste Radius, auf den die Klammer gestellt werden kann, ist l cm, und beträgt der Krümmungsradius nur '/g cm, so muss man das Präparat etwas näher ('/g cm) zu der Axenschraube einklemmen. Die Hebung ist natürlich bei einem Verschieben der Klammer nach hinten geringer, als in dem zuerst angenommenen Falle, da die Entfernung von der Axe zur Mikrometerschraube immer dieselbe bleibt, doch ist leicht festzu- stellen, wie viel man gehoben hat, da eine Graduirung an der Präparaten- klammer den Bruchtheil der vorderen Hebellänge zu der hinteren an- giebt, und dies Verhältniss proportional ist dem zwischen der grösseren und geringeren Hebung. Um eine grösstmögliche Gleichmässigkeit in der letzteren zu erhalten — je höher die Hebung, um so stärker wird auch die im Bogen erfolgende Rückwärtsbewegung — ist die Klammer so gestellt, dass sie sich ebensoweit unter die Horizontale senkt, als sie sich über dieselbe erhebt. Der Einwand ferner, dass die Mikrometer- schraube nicht verlässlich ist, weil sie nicht im Kreisbogen auf den Hebel wirkt, verliert dadurch an Bedeutung, dass die stärkste Verkür- zung des Druckhebels durch Geradestehen der Schraube nur 2 mm be- trägt, eine Ungenauigkeit, die selbst bei feinen Schnitten nicht bemerkt wird, wie mich die Erfahrung gelehrt hat. Um die Drehung der Mikrometerschraube genau regeln zu können, liegt auf dem Querbalken, welcher sie hält, ein in 25 Theile getheilter Doppelquadrant, und ein kleiner Schlüssel, der auf die Schraube aufgesetzt wird, trägt den für 23* 346 Gottscliau: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. den Quadranten nothwendigen beweglichen Zeiger. (Vergl. die Zeich- nung in der Perspective). Am Ende des Balkens befindet sich noch ein Loch (L), in welches ein langer Stahlstift (St) gesteckt wird, mit welchem man die Drehung um die sagittale Axe bewirkt (Einstel- lung auf bilaterale Symmetrie). Nach dem Einstellen wird dieser Stift entfernt. Auch speciell für das JuNG'sche Mikrotom wurde ein Jahr darauf ein Objecthalter zu gleichem Zweck, wie der soeben beschriebene con- struirt, und unter dem Namen „Neapler Zange" in den Handel gebracht. Dieselbe wurde verschiedenen Umwandlungen unterzogen und weicht in ihrer Construction wesentlich von der Mikrotoraklammer für Keil- und planparallele Schnitte ab. Nach den Mittheilungen a. d. Zool. Stat. z. Neapel Bd. IV Heft 3 p. 433 u. f. ruht hier das Präparat in einem Cylinder, der in einen Würfel gesteckt und um seine Längsaxe gedreht werden kann. Der Würfel hängt an zwei Zapfen in einem viereckigen Rahmen, und kann um diese Zapfen gedreht werden, also um eine fron- tale Axe. Der Rahmen liegt wieder vermittels zweier Zapfen auf dem Schlittenlager und wird, da diese Zapfen rechtwinklig zu den anderen stehen, um die sagittale Axe in seiner Stellung geändert. Die Einstellung des Rahmens sowie des Würfels geschieht durch je zwei Zahnräder, deren eines an einem Knopf gedreht werden kann. Die Fixirung in der eingestellten Lage sowie das Festpressen des Cylinders wird durch be- sondere Klemmschrauben vermittelt. Auch diese Construction ist, wie ich erfahre, neuerdings dahin abgeändert, dass der Würfel mit dem Cylinder in zwei gegeneinander zu pressende Platten umgewandelt ist. Der Grund dieser Abänderung ist nach der im Vorigen mehrfach be- tonten Umständlichkeit und Unsicherheit der Cylindereinbettung leicht erklärlich. I, 3. Gott schau: Mikrotome und ihre Hilfsapparate. 347 Stellen wir nun die Leistungen, welche beide Klammern bieten, einander gegenüber, so schrieb ich schon seiner Zeit im Jahre 1881 über die Mikrotomklammer fiir Keil- und planparallele Schnitte, dass man durch die Vorrichtung im Stande ist : 1) die Lage des Präparates zum Messer jederzeit beliebig zu ändern ^ 2) Keilschnitte von bestimmter Dicke anzufertigen und dieselben stets der Krümmung des Präparates anzupassen; 3) jederzeit ausser den Keilschnitten auch beliebig feine plan- parallele Schnitte anzufertigen 2. Die Neapler Zange gestattet bezüglich der ersten Einstellung des Präparates dasselbe, und die Unterschiede der Leistungen beider be- ruhen in Folgendem: Die Mikrotomklammer für Keil- und planparallele Schnitte kann zusammen mit dem Präparat vom Schlitten abgehoben, durch eine ein- fachere ersetzt und nöthigenfalls wieder in derselben Stellung ' aufge- steckt werden, ein Vortheil, der sehr zu Statten kommt, wenn man das Schneiden von Serien unterbrechen muss. Die Neapler Zange dagegen ist nicht durch eine einfachere zu ersetzen, wenn man nicht auch den Schlitten wechselt. Bei letzterer geschieht ferner die Einstellung durch Zahntrieb, also durch kurze Doppelhebel, welche auf einander wirken, bei der Mikrotomklammer wird die Drehung um die sagittale Axe durch einen laugen Hebelarm bewirkt, der auch die feinste, dem Auge kaum sichtbare Drehung des Objectes gestattet, während die Drehung um die frontale Axe durch die Mikrometerschraube hervorgerufen wird, nach welcher man das Heben oder Senken des Präparates aufs Ge- nauste um Bruchtheile eines Millimeters bestimmen kann. Dies Heben des Präparates kann zu jeder Zeit durch die Schraube vorgenommen werden, und man erhält dann natürlich beim Schneiden keilförmige Schnitte. Bei Hebung durch Zahntrieb dagegen muss jedesmal die be- treffende Klemmschraube vorher gelockert, nach dem Einstellen wieder angezogen werden, und man hat keinen Anhalt, um wie viel das Prä- parat gehoben ist. Es dürfte somit die Mikrotomklammer für Keil- ') Die Drehung in horizontaler Ebene geschieht auf dem Zapfen des Präparaten Schlittens (Z), die in sagittaler um die Axe (S^) der Klammer, die in frontaler durch Drehung des Balkens um seinen Zapfen (Zi) vermittels des Stahlstabes (St). ^) Indem man die Mikrometerschraube in Ruhe lässt und den Schlitten in gewohnter Weise vorwärts schiebt. 348 Gottscbau: Mikrotome und ilire Ililfsapparate. I, 3. und planparallele Schnitte noch einige Vortheile mehr in sich schliessen, als die Neapler, und wenn daher zwei Jahre nach den bekannt ge- gebenen, oben wörtlich citirten Leistungen der Mikrotomklammer in den Mittheilungeu d. zool. Stat. z. N. IV. Bd. 3. Heft p. 434 als be- sonderer Vorzug der Neapler Zange hervorgehoben wird, dass im Gegensatz zu den meisten anderen Mikrotomen nur durch sie die Möglichkeit gegeben sei, „die Richtung des Objectes aus- giebig zu ändern, ohne es zugleich stark zu heben oder zu senke n", so haben die Herren Referenten den Artikel in den Würzburger Sitzungsberichten, der seiner Zeit auch der Station in Neapel zugeschickt wurde, entweder nicht gelesen oder ein- fach ignorirt. Die Bewegung durch lange Hebel und durch Mikrometerschraube bietet Vortheile, welche der Neapler Halter trotz seiner sonstigen Vor- züge vor anderen Einrichtungen nicht besitzt, und welche er mit gleicher Präcision auch nicht erhalten kann, wenn die Einstellung durch Zahn- räder beibehalten wird. Eiu kurzer Ueberblick der in Vorigem gepflogenen Betrachtungen lässt somit erkennen, dass für die Grundform des Mikrotoms die zweck- mässigste Construction wohl gefunden sein dürfte, dass hingegen die Hilfsapparate noch einer Sichtung und theilweisen Vervollkommnung bedürfen. Basel, im Juni 1884. I, 3. Flemming: Mittlieilungen zur Färbetechiiik. 349 Mittlieilungen zur Färbeteclinik. Von Dr. W. Flemmiug, Professor der Anatomie in Kiel. I. Ein neues Verfahren zum bequemen Aufsuchen von Zell- theilungen und zur Hervorhebung der Nucleolen. Wo es sich darum handelt, in organischen Geweben Zelltheilimgen zu finden, ihre locale Menge abzuschätzen und danach die Orte stärkeren Wachsthums zu bestimmen, benutzen wir bekanntlich mit Vortheil die Hervorhebung der Mitosen (Kerntheiluugsfiguren) durch Färbung. Es sind schon verschiedene dafür geeignete Methoden mitgetheilt und in Gebrauch, die ich in der Anmerkung kurz aufführe ^ Jede von ihuen hat ihre eigenen Vorzüge und auch ihre eigenen Nachtheile oder Unbequemlichkeiten. Ich habe mir jetzt ein Verfahren herausprobirt, das ich für die im Titel genannten Zwecke allen anderen vorziehen, und auch für das feinere Studium der Kerntheilung den besten gleichstellen möchte. Es erscheint als eine verhältnissmässig geringe Modification anderer Methoden, die ich schon benutzt und mit- getheilt habe (siehe Anm. 1), es ist aber bequemer und sicherer als die meisten und weit leistungsfähiger als sie alle. Hier zunächst kurz die Regeln der Behandlung. Die frisch abgeschnittenen Gewebsstücke (am besten nicht über 0*5 cm dick) kommen in ein Gemisch von : Chromsäure von 1 p c. : 15 Maasstheile Osmiumsäure von 2 p. c. : 4 „ „ Eisessig : 1 Maasstheil oder weniger 2. *) Ausser den allgemein gebräuclilichen Kerntinctionen, nacli Vorbehaud- limg mit Alkohol, oder Pikrinsäure, oder Cliromsäure 0. a . besonders : das Chromsäure-Safraninverfahren und ähnliclie (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XIX, 1881, p. 317); Färbung am frischen Gewebe mit saurem Bismarckbraun oder Methylgrün, nach Mayzel, Fromm.\nn u. A., oder mit Essigcarmiii nach Schnei- der (Zoolog. Anz. Bd. III, 1880, 12. Jan. u. 24. Mai); Behandlung mit 3pro- centiger Salpetersäure und Hämatoxylinfärbung nach Altmann (Arch. f. Anat. u. Entwicklgesch. 1881, p. 219); Chromsäiu'e - Essigsäure - Osmiumgemische (s. Anm. 2). 2) Also ein viel stärkeres Gemisch als die ähnlichen, die ich früher emptahl (Zellsubstanz, Kern und Zelltheilung 1882, p. 381). 350 Flemming: Mittheilimgen zur Färbetechnik. I, 3. Auf genaue Einhaltimg dieses Verhältnisses kommt es übrigens nicht an. Die Flüssigkeitsmenge braucht nur etwa 4 mal (dem Volum nach) grösser zu sein als das eingelegte Stück; nach Belieben auch grösser. — Darin bleiben die Stücke mindestens einen Tag, für volle Härtung besser 2 bis 3 Tage, oder nach Belieben auch Wochen und Monate lang; sie können dabei ohne Schaden am Licht und selbst an der Sonne stehen. Schon am zweiten Tage sind sie stets verarbeitungs- fähig. Zur weiteren Präparation werden sie in gewöhnlichem Wasser eine Stunde lang oder länger ausgewaschen ^, und für das Schneiden entweder in Alkohol absolutus nachgehärtet (einige Stunden oder nach Belieben länger) und feucht unter Alkohol geschnitten (s. unten); oder, wo man durchfärben und durchschmelzen will, dieser Behandlung nach den sonst bekannten Regeln unterworfen, worüber das Nähere folgt. Die unter Alkohol gemachten Schnitte werden in Wasser rein ab- gespült, und darauf in starker Safraninlösung*, wie ich sie früher angab (s. Anm. 1), gefärbt; man braucht nur etwa 1 cc Farb- lösung auf viele Schnitte ; auf den Alkoholgehalt der Lösung kommt es hier übrigens nicht näher an. Die Objecto können schon nach einigen Stunden hinreichend von der Farbe imprägnirt sein, besser und sicherer aber lässt man sie einen Tag oder länger darin stehen. Zum Fertigstellen der Präparate wird die Tinctur mit den Schnitten in eine Schaale mit Wasser gegossen; aus dieser überträgt man die Schnitte in Alkohol absolutus, der einen geringen Zusatz von Salzsäure hat (bis 0*5 Procent), worin sie unter einigem Um- schütteln kurz verweilen, bis sich wenig oder keine Farbe mehr lösen will. Darauf kommen sie kurz in reinen Alkohol absolutus, aus dem sie auf Nelkenöl, und in Dammarlack oder Canadabalsam ^ übertragen werden. 3) Ich benutze zum Waschen bequem Deckelkästchen von Drahtgitter, die in den gefüllten und schwach durchströmten Abguss der Wasserleitung ge- setzt werden. *) Oder Gentianaviolett, das ziemlich das Gleiche leistet. Die an- deren Anilin- und Azofarbstofie , die ich an Chromsäm'cpräparaten benutzt habe (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XIX, 1881, p. 317), sowie andere (vgl. Feiedländee, Mikroskopische Technik), werden walirscheinUch grossentheils auch hier verwendbar sein. Für einige Zwecke empfiehlt sich successive Fär- bung mit Safranin und Gentiana. '') Da die alte Frage, ob Canadabalsam oder Dammarlack überhaupt vor- zuziehen sei, noch immer ventilirt zu werden scheint (so z. B. Exner, Leit- faden 1878, p. 25; Bachmann, Leitfaden 1879, p. 18), möchte ich bemerken I, 3. Flemming: Mittheilimgen zur Färbetechiük. 351 Die Anwendimg von saure m Alkohol " zum Extrahiren, die ja jetzt vielfach geübt wird, hatte ich an Chromsäure- u. a. Präparaten vielfach zu besserer Hervorliebung der Theilungsfiguren probirt, aber hier stets dem reinen Alkohol gegenüber ohne besonderen Nutzen oder auch nachtheilig gefunden. Ich kam durch zufällige Versuche darauf, dass es bei Präparaten mit Osmium vorbehandlung anders ist, und dass hier gerade der Säuregehalt des Alkohols eine nothweudige Bedingung für die scharfe Separatfärbung bildet. Es sei noch besonders bemerkt, dass das Verweilen in dem sauren und dem neutralen Alkohol hierbei durchaus nicht so ängstlich auf die kürzeste Dauer abgepasst werden braucht, als es bei ähnlicher Behand- lung von Präparaten aus blosser Chromsäure oder aus Alkohol vielfach wünschenswerth ist. Will man durchfärben, durchschmelzen und dann schneiden, so hat die letztbeschriebene Extraction natürlich mit dem Stück in toto zu ge- schehen, das dann etwas länger in dem sauren Alkohol verweilen muss, um weiter aus dem reinen Alkohol in der bekannten Weise durch Ter- pentin in flüssiges Paraffin übertragen zu werden. Bei diesem Verfahren eignet sich die Methode aber nur für recht dünne Objecte, z. B. kleinere Embryonen ; denn bei dickeren und festen Stücken muss die Extraction allzulange dauern imd erreicht die Tiefe so spät, dass dann oft die Oberfläche schon zu viel Farbe verloren hat, und ungleichmässige Tinc- tion das Ergebniss sein kann. * * * Die Präparate, die man so erhält, haben einen eigenthümlichen Charakter, in dem sie von den bekannten und jetzt üblichen Anilin- Kerntinctionen (s. oben Anm. 1 und 4) auffallend abstechen, und der sie für den im Titel genannten Zweck ganz besonders geeignet macht. und glaube mich dabei im Einklang mit vielen neueren Arbeitern, dass jedes der beiden Mittel für seinen eigenen Zweck seine Vorzüge hat. Dammarlack wende ich stets dort an, wo ich neben der Farbe noch möglichst viel Structur sehen will, denn er lässt diese (wenigstens in der Bereitung, die im Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XIX, p. 322 notirt ist) deutlicher erkennbar als Canada- balsam. Bei derartigem Zweck kann es nicht darauf ankommen, dass die Prä- parate etwas langsamer trocknen. Canadabalsam verwende ich dagegen stets dort, wo es sich um möglichst starke Aufhellung gefärbter oder farbig injicirter Objecte handelt. ") Man kann natürlich auch zuerst in eine wässerige Salzsäurelösung, und dann in reinen Alkohol übertragen. 352 Flemming: Mittheilungen zur Färbetechnik. I, 3. Es ist in der That überraschend, wie viel hier durch eine relativ so geringe Aenderung der Behandlung bewirkt ist. Die Präparate zeigen Kerntinction , aber bedeutend blassere Färbung der Gerüste in den ruhenden Kernen, und ganz auflfallend starke Festhaltung der Farbe in den chromatischen Kerntheiluugs- figuren, und ferner in allen wahren Nucleolen. Ausserdeni bleiben stark gefärbt: elastische Fasern (bräunlichroth) und verhornte innere Wurzelscheiden der Haare (lichtroth). Die relative Abblassung der Gerüste in den ruhenden Kernen muss offenbar darauf beruhen, dass sie rascher durch den sauren Alkohol extrahirt werden, als die Theilungsfiguren und die Nucleolen. Ich habe natürlich durch Prüfung bei blossen Chromsäurepräparaten u. A. versucht, ob hierbei nur der Säuregehalt des Alkohols eine Rolle spielt; das ist aber nicht der Fall, denn an solchen Präparaten werden bei gleicher Färbung und Behandlung alle chromatischen Theile in ziemlich gleichem Grade extrahirt. Es muss also eine bestimmte Vor- wirkung des Chrom - Essig - Osmiumgemisches auf die Kerntheilungs- figuren und Nucleolen im Spiel sein, welche dieselben für die Fest- haltung der Farbe besonders disponirt. Der erwähnte Umstand erleichtert nun das Sueben nach Zellthei- lungen ganz ungemein. Das Auge verlangt eben für die rasche Fixirung der Aufmerksamkeit einen gewissen Grad des Farbenunterschiedes ; darin leisten mir andere Färbungen bei weitem nicht das Gleiche. Am wenigsten thut dies Pikrocarmin, Alauncarmin, Borax- und Lithion- carmin, bei deren Anwendung die ruhenden Kerne in ganz gleicher Nuance gefärbt sind wie die Theilungsfiguren ; etwas mehr markirt erscheinen letztere durch Hämatoxylin, sowie durch die bisherige Chromsäure-Safraniumethode. Aber auch diese muss ich dem hier be- schriebenen Verfahren für diesen Zweck weit nachstellen. Bei allen jenen, besonders bei den erstgenannten, verschwinden die Theilungs- figuren so zu sagen in der Masse der gleichgradig gefärbten ruhenden Kerne; bei meiner jetzigen Methode drängen sie sich förmlich dem Auge auf. Ich suche und finde die Theilungen damit, auch im kleinkernigen Gewebe des Säugethieres, leicht schon bei 150 facher Vergrösserung, imd zwar auch in dickeren Schnitten, welche 3 bis mehr Zellen mächtig sind; letzteres gewährt die grosse Bequemlichkeit und Zeitersparniss, dass man an einem einzigen Schnitt gleich ebensoviel Substauzmasse durchsuchen kann, als au mehreren dünneren. Die Nucleolen sind, wie erwähnt, in gleicher Farbenstärke I, 3. Flemming: Mittlieilungen zur Färbetechnik. 353 hervorgehoben wie die Mitosen ; es eignet sich das Verfahren darum besonders gut, um die vorhandene Menge der kleineren Kernkörperchen festzustellen, und die feineren Formverhältnisse der grösseren zu studi- ren. Die Probe darauf lässt sich sehr schlagend z. B. an den Kernen von Ovarialeiern machen, wenn man ungefärbte Schnitte mit solchen .vergleicht, die nach dieser Methode gefärbt sind: im letzteren Fall wird man schon beim ersten Blick eine viel grössere Anzahl von kleinen Nebennucleolen in den Kerngerüststrängen sehen, als man ohne Tinc- tiou auch bei sorgfältigem Suchen ermittelt hat. Ich habe früher mitgetheilt", dass die Osmiumsäure ein specifisches Mittel ist, um besonders scharf die wahren Nucleolen gegenüber der sonstigen chromatinhaltigen Structur des Zellkerns deutlich zu machen; offenbar ist es bei der hier beschriebenen Methode denn auch die Mit- wirkung dieser Säure, die bei der Markirung der Nucleolen wesentlich mitspielt, denn an Präparaten aus Alkohol, Chromsäure oder Pikrin- säure, die in gleicher Weise gefärbt und extrahirt siud, findet man die Kernkörperchen keineswegs so scharf hervorgehoben. Die Erhaltung der Gewebstheile, auch der feineren Zell- und Kernstructuren, in dem starken Chrom-Essig- Osmiumgemisch ist eben so gut wie in den bisher gebrauchten schwächeren, d. h. so gut, wie sie bis jetzt überhaupt irgend ein gut erhärtendes Reagens bei Ge- weben leistet ^. Das muss man allerdings hinnehmen, dass bei sehr kleinkernigen Geweben die Kerntheilungsfiguren oft etwas geschrumpft und conglutinirt werden, wie dies bei allen bisher gebrauchten Fixir- ') Zellsubstanz, Kern und Zelltheilung p. 140. 141, 155. *) Wenn die Osmiumgemiscbe und die Osmiumsäurc bei Wirkung auf Protozoen, auf freilebende Zellen und eventuell auch auf Gewebszellen auch gewiss den gesafümten Naturzustand nicht absolut treu conserviren, wie dies Brass (diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 39 ff. und Biologisclie Studien) nach genauer und gewiss richtiger Beobachtung betont, so kommt das hier nicht in Bctx'acht. Alle unsere Härtungsmittel, was man in meinen früheren Arbeiten hinreichend gewürdigt finden kann, leiden ebenso sehr oder mehr an dem- selben Uebelstand; auch die Chromsäui'e, die ich ja zwar immer besonders empfohlen hatte, und die auch Bkass jetzt bevorzugt. Man wird nie den Grundsatz umgehen dürfen, den ich von Anfang an befolgt habe, dass man auf eine Structur mit Sicherheit nur unter Vergleich dos lebenden Objects schliesseri darf. — Wo es sich aber, wie hier, nothwendig darum handelt, zu- nächst die Gewebe gut zu härten und zu schneiden, und wo es auf sonstige Structurverhältnisso der Zellsubstanz nicht ankommt, verdienen die Osmiumge- mische unter die besten, härtenden und zugleich conservirenden, Mittel gestellt zu werden. \ 354 Flemming: Mittheilungen zur Färbcteclinik. I, 3. mittelu (Chromsäure, Pikrinsäure, Essigsäure, Salpetersäure u. A.) in gleicher Weise vorkommt. Diese Verzerrung geht aber nicht so weit, dass man nicht doch die Mitosen als solche diagnosticiren könnte; meistens lässt sich selbst die Phase der Theilung leicht bestimmen. Die Conglutination wird nur dadurch prädisponirt, dass die Figuren sehr klein sind und also ihre Fäden sehr nahe benachbart liegen. Bei grossen und sperrigen Figuren, wie die von Amphibien und Pflanzen sind, ist dagegen die Conservation durch das Osmiumgemisch so schön und der lebenden Form so gleich, wie es nur die glücklichst-gelungenen Chromsäurepräparate leisten. Die Schnitt fähigkeit der Präparate ist eine vorzügliche; Schnitte von 10 |x und darunter sind auch feucht unter Alkohol leicht herzustellen, sie haben nicht die mindeste Tendenz sich zu falten, und so viel Festigkeit, dass man auch mit den feinsten ohne grosse Vorsicht umgehen kann, wenn das Gewebe nicht ein sehr weiches war. Es ist endlich zu bemerken, dass in dem Chrom-Essig-Osmiumge- misch auch bei längerer Einwirkung keineswegs die tiefe uud vielfach störende Duukelung eintritt, die bei Härtung in reiner Osmiumsäure und Nachbewahruug solcher Präparate in Alkohol ^ sich auf Grund von Metallreduction einstellt. Schwarz werden nur die Substanzen, an denen die Osmiumsäure ein specifisches Dunkelungsvermögen äussert, also Fett, Myelin, Lecithin imd verwandte Substanzen, Aussenglieder der Retinastäbchen; übrigens behalten alle Gewebstheile eine blass gelb- braune Färbung. Dieser Ausschluss der Nachdunkelung muss durch die Chromsäure bedingt sein, denn Präparate in blosser Essig-Osmiumsäure werden dunkler. In Stücke, die dicker sind als etwa 0"3 — 0*5 cm, besonders von festeren Geweben, dringt das Gemisch allerdings nicht sofort in toto bis zur Tiefe ein, diese wird dann zunächst nur von, der Essigsäure, dann von der Chromsäure , später erst und oft ungenügend von der Osmiumsäure erreicht. Man thut also gut, solche grössere Stücke noch einige Male einzuschneiden. Das Eindringen erfolgt übrigens viel besser, wenn man die Flüssigkeit möglichst viel in Bewegung setzt. Ich bediene mich dazu, auch bei anderen Reagentien, oft mit Vortheil des Aufhängeus der Gläser an langen Fäden, an denen man sie in Pendelbewegung bringt; diese hält lauge vor und man spart das öftere Umschütteln. ") Nicht so sehr in Kali bichromicum , das ich deshalb früher dafür empfohlen habe (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. VI); es ist nach solcher Aufbe- wahrung auch Hämatoxylinfarbuug noch ausführbar (s. ebenda). I. 3. Flemming: Mittheilungen zur Färbetechnik. 355 Das Gleiclic kann man auch beim Färben von Präparaten benutzen, um es abzukürzen. Wer in seinem Institut über einen Motor verfügt, würde sich leicht eine vollkommenere Schüttelvorrichtung construiren können. Ein Nachtheil der Methode kann darin gefunden werden , dass sie das Gesammt-Durchfärben und Durchschmelzen dickerer und festerer Stücke nicht gut gestattet. Diesen Nachtheil halte ich nicht für wesent- lich; denn so vorzüglich und unentbehrlich das Durchschmelzungsver- ftihren auch ist, wo es sieh um Herstellung von Serienschnitten von grosser und gleicher Feinheit handelt, so entbehrlich und selbst nach- theilig ist es für andere Zwecke. Wo ich an Härtungs- und Schnitt- präparaten möglichst naturtreue Erhaltung von Zell- und Kernstructuren imd dabei gleichmässige scharfe Färbungen haben wollte, habe ich das Durchfärben und Durchschmelzen überhaupt niemals angewendet, denn es ist dafür keine durchweg sichere Methode. Ich weiss zwar aus reichlicher Erfalirung, dass man damit bei sehr sorgfältigem Verfahren und bei geeigneten Objecten ganz ebenso gute Erfolge haben kann, als anderweitig, man ist dessen aber nicht ganz sicher, und kann bei ganz gleichem Verfahren im einen Falle Verzerrungen durch die Paraffindurch- schmelzung (oder Celloidindurchtränkung) und durch die Wiedererstar- rung erhalten, während im anderen Alles tadellos conservirt sein kann. Was ferner das Durchfärben der ganzen Stücke betrifft, so dringen manche Mittel, z. B. Pikrocarmin und Hämatoxylin, in dickere und feste Ge- websstücke namentlich nach Chrombehandlung bekanntlich nur langsam bis zur Tiefe ein, und man ist dabei, wenn man nicht sehr lange warten will, keiner gleichmässigeu Tinction sicher. Für Alaun- und Boraxcarmin und ähnliche gilt dies zwar weniger, man kann sich aber doch nicht bloss mit dieser einen Art von Tinctionen begnügen. Wo ich also keine ganz gleichmässigeu Schnittserien zu machen habe, und die Schnitte nicht unter 10 bis 15 [x Feinheit zu haben brauchen , bette ich auch bei allen anderen Vorbehandlungen meine Präparate stets noch in Durchträukung mit Alkohol in Paraffin von möglichst geringem Wärmegrad, oder auch in Hollundermark, oder mit Hülfe von Celloidin ein, schneide sie unter Alkoholbenetzung imd ftirbe die Schnitte; das macht nicht grössere, eher geringere Mühe als das Durchschmetzungsverfahren, wenn dieses ganz sorgfältig gehandhabt sein soll , und gestattet, was ausser der sicheren Conservation eine Hauptsache ist, viel freieren Spielraum im Tingiren und in der sonstigen Behandlung * ". '") Da Friedländer (Mikroskopische Technik p. 34) das Verfahren des 356 Flemming: Mittheilungen zur Färbeteclinik. I, 3. Zu bemerken ist noch, dass die Ausziebimg mit saurem Alkohol bei dem hier empfohlenen Verfahren durchaus nicht die unangenehme Nebenwirkung hat, die bei Alkoholpräparaten mit Recht beklagt wird • ', störende Aufquellung der Biudegewebsfibrillen , des Fibrins und der Zellkörper zu bedingen. Diese Dinge sind ja hier durch die Vorherwir- kung des Osmiumgemisches unveränderlich in der Form fixirt und der histologische Situs treu bewahrt. Die Mitwirkung der Essigsäure in dem Gemisch bedingt zwar eine Aufhellung der Fibrillenbüudel, die gerade angenehm sein kann, aber keine in Betracht kommende Quelhmg, und es zeigen auch die feinsten Schnitte keinerlei Neigung zur Kräuselung. Zum Beleg für die Brauchbarkeit der Methode gebe ich kurz Einiges an, was sie mir gleich bei den ersten Versuclien geleistet hat. Ich probirte sie bisher bei erw^achsenen Säugethiereu : am Ovarium (Kaninchen, mehrere Thiere), der Haut (Meerschwein, Kaninchen), der Mundschleimhaut und dem Hoden (ebeuda) ; bei Amphibien : an ver- schiedenen Geweben des Salamanders 5 bei Pflanzen: an Knospen von Hyacinthen •^. üeberall zeigten die Präparate die gleichen, oben be- schriebenen Eigenschaften trotz verschieden langer Einwirkungsdauer des Gemisches. Bei allen diesen Objecten fand ich gleich in den ersten Präparaten, und stets in deu weiteren, vielfache Zelltheilungen ; besonders reichlich in den Keimschichten des Hautepithels, des Mnnd- epithels, der Haare (wo sie bis jetzt vergeblich gesucht wurden); im Follikelepithel der Ovarien jüngerer wie älterer Thiere (ebenso); im spermabildenden Epithel; verschiedentlich im Bindegewebe; sowie im Eichen und den sonstigen Knospentheilen der Hyaciuthe'^. totalen Durchfärbens geradezu „die Methode der Normal- Anatomie" nennen konnte, so hielt ich die obigen Bemerkungen für nicht überflüssig, um darzu- thun, dass wir doch nicht Alle Sclaven dieser Methode geworden sind; ich freue mich mit Friedländek selbst (a. a. 0.) und Brass (diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 49) darin übereinzustimmen, dass man jenes Verfahren nur dort anwenden soll, wo es nöthig oder nützlich ist, und dass man es möglichst zu vermeiden hat, wo es auf Conservirung feinster Structurverhältnisse ankommt. Ich habe die Methode des Feucht-Schncidens auch für histologische Curse stets als die wesentliche in Gebrauch behalten und kann dies nur empfehlen, da die Studirenden mehr lernen, wenn sie ihre Schnitte selbst behandeln können, als wenn man ihnen die Präparate fertig giebt. •') Fkiedländer a. a. 0., p. 42. ") Pflanzentheile smd vor dem Einlegen durch- oder anzuschneiden. 13) Auch hier ist die Erhaltung der Kernfiguren gut, ich fand z. B. die Längsspaltung der chromatischen Fäden bei Hyacinthus schon mit Zeiss, D ganz deutlich. I, 3. Flemming: Mittbeilungen zur Färbetechnik. 357 Von den sonstigen Metboden, welche im Eingang angemerkt sind, können für den hier ins Auge gefassten Hauptzweck — Suchen nach Theilungen — meines Erachtens nur zwei mit dem mitgetheilten Verfahren eiuigermassen concurriren: die Chromsäure- Safraninbehandhmg nach meiner Angabe (oben Anm. 1), und die von Altmann empfohlene Salpetersäure -Hämatoxylinbehandhmg. Ich habe hier noch anzugeben, warum ich beide doch diesem Verfahren nach- stellen muss. Die Chromsäure dringt langsamer ein, härtet weniger gut, braucht dazu längere Zeit und liefert weniger schön schneidbare Präparate als das Osmiumgemisch. Die Salpetersäure in der von Altmann gebrauch- ten Verdünnung härtet so gut wie gar nicht, und es müssen solche Prä- parate also für das Schneiden stets durchschmolzen, oder innerlich mit Celloidin 0. a. durchtränkt werden, was ich nach dem oben Ge- sagten doch als einen Nachtheil ansehen muss. Ferner fehlt beiden Methoden die scharfe Mithervorhebung der Nucleolen , die bei den Osmiumgemischen einen Nebenvortheil bildet ; und endlich ist bei beiden der Farbenabstich der Kerntheilungsfiguren gegenüber den ruhenden Kernen zwar recht schön, aber bei weitem nicht so auffallend, wie er sich an Präparaten der hier beschriebenen Art darstellt. Nach längerer Erfahrung im Suchen nach Mitosen kann ich ver- sichern, dass die Methode dasselbe ganz ungemein erleichtert und ihr Erfolg mir selbst höchst überraschend war. Ich möchte mich an- heischig machen, damit in jedem Gewebe, das nicht kleinzelliger ist als das des Säugethieres, nicht nur das Vorkommen der Karyokinese überall zu demonstriren, wo es vorliegt; sondern auch eine annähernd richtige Schätzung über die locale Menge und Häufung der Zelltheilun- gen zu geben, und zwar dies durchschnittlich mit dem vierten Theil der Mühe und Zeit, die ich mit den anderen bisher gebrauchten Arbeits- weisen aufwenden würde. Da diese Postulate namentlich in der pathologischen Anatomie und Embryologie ja vielfach auftreten, so glaube ich, dass das Verfahren sich dort alsbald praktisch nützlich zeigen wird. II. Zur Tinotion der inneren Wurzelseheide des Haares. Es ist schon bekannt, dass diese Schicht specifisches Färbungs- vermögeh hat. Unna** fand und empfahl für diesen Zweck das Jod- **) Unna, Arcb. f. mikrosk. Anat. Bd. XII, p. 735. 358 Flemming: Mittlieilimgen zur Färbetechnik. I, 3. methyla nilin, das an Alkoholpräparaten angewendet, beim Aus- ziehen durch Alkohol an den verhornten Zellen der Wurzelscheide in tiefblauer Farbe haften bleibt und nach Pikrocarmiuwirkung schöne Doppeltinctionen zeigt. Seitdem habe ich gelegentlich oft bemerkt, und es wird auch wohl Anderen nicht entgangen sein, dass auch viele sonstige Anilin- und AzofarbstofFe ähnliche Wirkung haben: beispielsweise zeigt Sa- franin, an Chrom- oder Chromosmiumpräparaten applicirt, nach der Ausziehung mit Alkohol bei sonstiger Kernfärbung die verhornte Wurzelscheide prachtvoll roth, und diese Färbung haftet sehr fest, lieber die Wirkung des von Gkiesbach '•'* in die Technik eingeführten und von F'lesch*^ benutzten Jod grün auf die Wurzelscheide habe ich anderen Orts '"'' kurz berichtet. Hier will ich aber ein noch einfacher anzuwendendes Mittel no- tiren, mit dem sich Doppeltinctionen der Haarwurzelschnitte herstellen lassen, wie man sie farbenschöner gewiss nicht wünschen kann. Am besten eignen sich dazu Präparate, die in Kalibichromicum vorgehärtet und in Alkohol nachgehärtet sind; doch auch reine Alkoholpräparate (nur dass an letzteren die Färbung der inneren Wurzelscheide weniger hell und leuchtend, mehr stahl- oder violettblau ausfällt). Die Schnitte werden einige Stunden bis einen Tag lang in mittel- starkem Pikrocarrain, darauf einige Stunden in mittelstarkem Gee- NACHER'schem Hämatoxj'lin'^ gefjirbt , und nach Waschung in Wasser nach Belieben in Balsam oder in Glycerin eingelegt. Die Fi- brillen des Bindegewebes sind dann rosa bis roth, Muskeln gelbröthlich, sämmtliche Zellkörper ähnlich, Zellkerne dunkelpurpurn bis violett, die hornige Substanz des Haares selbst pikringelb (an alten Chrompräpa- raten grünlich), die eben verhornenden Zellen der Haarmatrix bräim- lich; die inn ere Wurzelscheide aber, soweit sie verhornt ist, von einem brillanten Lichtblau, das sie auch in ihrem tiefsten dünnsten Theil scharf markirt. Die Färbung hat sich seit einem Viertel- jahr völlig unverändert gehalten, was bei Jodgrünpräparaten von Haarschnitten nicht der Fall ist. Die Jodmethylviolettfärbung nach Unna ist haltbar und leistet für die innere Wurzelscheide jedenfalls das >5) Gkiesbach. Zool. Anz. Bd. V, 1882, No. 117 p. 406. 16) Flesch, Ebenda Bd. V, 1882, No. 123 p. bU. '■) Fi.EMMixG, Monatshefte f. prakt. Dermatologie Bd. II, No. 6. **) Bereitung s. in: Flemming, Zellsubstanz, Kern und Zelltheilung 1882, 383. I, 3. Flemming: Mittheilungen zur Färbeteclinik. 359 Gleiche wie die oben erwähnte Hämatoxyliufärbung, letztere ist aber bequemer, da sie kein Wiederextrahiren der Farbe verlangt. Es wäre seltsam, wenn ein so naheliegendes Verfahren, wie die Doppeltinction mit Pikrocarmin und Hämatoxyliu, die ich schon lange für Demonstrationspräparate verschiedentlich brauche, nicht schon von Anderen auf Haardurchschnitte angewendet sein sollte ; bis jetzt habe ich in den Angaben der technischen Handbücher u. a. , wo sie über Doppelfärbuugen mit Carmin, Pikrinsäure, Hämatoxylin u. a. handeln*^, keine Aeusserung über die betreffende Blaufärbung der inneren Wurzel- scheide gefunden, ohne Garantie übrigens, dass mir etwas entgangen sein könnte. Jedenfalls ist sonach das einfache Verfahren nicht allge- meiner bekannt. Einzig in Klein's Atlas of Histology 1880 finde ich an den Zeichnungen von Haarquerschnitten Figur 15 und 16 PL 42, "offenbar nach Hämatoxylinpräparaten, die innere Scheide bläulich dar- gestellt, allerdings in einem viel helleren Ton, wie sie ihn an meinen Präparaten zeigt. In Klein's Text habe ich nichts Bezügliches ge- funden. Vielleicht wird es ferner schon Manchem bekannt sein, dass an Präparaten von behaarter Haut, die sehr lange in Chromsalzlösungen oder Chromsäure gehärtet waren, nach Färbung der Schnitte in Pikro- carmin eine schöne Hellgrünfärbung des Haares selbst sowie der inneren Wurzelgebilde auftritt, die im Contrast mit der Carminfärbung der übrigen Theile sehr elegant wirkt und sich dauez-nd hält. Uebrigens bezweckt diese Mittheilung weniger der Verschönerung von Haarpräparaten zu dienen, die sich ja auch ohne Doppelfärbuugen hübsch und instructiv genug ausnehmen; sie wird vielmehr gemacht, weil Alles, was über Färbungsreactionen der inneren Wurzelscheide sich finden lässt, vielleicht für die Chemie des Verhornungsprocesses einmal brauchbar werden kann. Es sei noch bemerkt, dass die Doppelfärbung an Präparaten, die sehr lange Zeit in Kali bichromicum gelegen haben, nicht mehr so gut gelingt. ") C. V. Thanhoffer, Das Mikroskop und seine Anwendung 1880, p. 134 ff., Frey, Das Mikroskop 7. Aufl., 1881, p. 104 ff., Ranvier, Traite d'histologie, Ex- NER, Leitfaden 1878, Orth, Cursus der normalen Histologie 1884; Walueter's Atlas der Haare 1884; Arbeiten über das Haar von Unna, v. Ebner, Schulin, WAtDESTER. Zeitschr. f. wiss, Mikroskopie. I, 3. 24 360 Flemming: Mittheilungen zur Färbeteclinik. I, 3. III. KTacliträgliclie Pikrinfärbung anderweitig behandelter Präparate für Demonstrationszwecke. Die folgende Mittheihmg hat durchaus nicht den Anspruch, dass ihr Princip ein neues wäre ; dasselbe ist für eine Anzahl einzelner Ge- webe und einzelner Behandlungsweiseu schon benutzt und empfohlen worden, v. Thanhoffee^o giebt bereits an, dass man die Pikrin- Carmiudoppelfärbung nicht bloss durch Pikrocarmin, sondern auch er- zielen kann, indem man Carminschnitte nachträglich in alkoholischer Pikrinsäure liegen lässt. Kutschin hat successive Anwendung von Hämatoxylin und Pikrinsäure zur Doppelfärbuug von Knochen benutzt, Geelach dieselben in anderer Form für Blutgefässschuitte gebraucht, eine ähnliche Combination liegt auch der ursprünglichen, allerdings sehr umständlichen Carmin-Pikrindoppelfärbung vonE. Schwaez zu Grunde *' ; und es wird vielleicht seit Neumanij's Mittheilung über die Pikrocarmin- färbung ^^ schon mehrfach geübt werden , was auf dem hiesigen patho- logischen Institut Prof, Hellee's in Gebrauch ist: Piki'ocarminschnitte, die man in Alkohol entwässern, und in denen man dabei die Gelbfär- bung der Zellkörper, Muskeln etc. conserviren will, durch pikrinsäure- haltigen Alkohol statt durch reinen zu übertragen. Ich bezwecke deshalb hier nur, auf etwas aufmerksam zu machen, woran wohl noch nicht Jeder gedacht hat : dass nämlich dies Verfahren sich in noch viel ausgedehnterem Maasse anwenden und nutzbar machen lässt. Mau kann nach Vorbehandlung der verschiedensten Art: an Präparaten aus Alkohol, Chromkali, Chromsäure, Pikrinsäure, auch Osmiumsäure, an denen durch Hämatoxylin, Alauncarmin oder andere Carmintincturen Kernfärbungen hergestellt sind, und die man dann in Lack oder Balsam schliessen will, in einfachster Weise gelbe Mit- färbung der Zellsubstanz und anderer Theile erzielen, wenn man sie behufs der Aufhellung in eine alkoholische Pikrinsäurelösung, statt in reinen Alkohol bringt, und aus jener auf Nelkenöl überträgt. Man hat dabei nicht mehr Mühe als sonst und behält es ganz in der Hand, den Pikrinsäuregehalt, und damit die Nuance der Gelbfärbung vom Zarten bis zum Kräftigen abzustufen. Ich benutze diese Gelbfärbung seit längerer Zeit viel und glaube, dass Jeder, der in anatomischen und histologischen Vorlesungen viel mikroskopisch demonstrirt, sie dafür 2») V. Thanhoffer, Das Mikroskop 1880, p. 130. 2») Näheres über diese Methoden enthalten die technischen Handbücher. ") Neumann, Arch. f. mikrosk. Anat. 1880, p. 130. 1,3. Marti notti: SuU'uso deU'allume di cromo nella tecnica microscopica. 361 sehr vortheilhaft finden wird. Ein aufgehelltes Kerntinctionspräparat ist Anfängern oft nicht hinreichend verständlich, da es ihnen die Zell- körper nicht deutlich zeigt ; dem wird durch die Pikrinsäure vollkommen abgeholfen, nebenbei die Eleganz der Präparate erheblich vermehrt, und, wenn man den Pikrinsäuregehalt nicht zu gross nimmt, auch die Durch- sichtigkeit der Objecte nicht vermindert, während sie dabei so zu sagen mehr Körper erhalten. Vorherige Carminfärbung der Kerne wird da- bei in keiner Weise verändert; an Hämatoxylinpräparaten entsteht in Folge der Pikrinsäurewirkung eine leichte Abänderung der blauen oder violetten Kernfarbe ins Purpurne, die aber weder der Schönheit noch der Deutlichkeit Eintrag thut. SiiH'uso (leirallume di cromo nella tecnica microscopica per il Dott"^. (x. Martinotti, Settore nel Museo Anatomo-Patologico Riberi (Torino). Ai giorni nostri si 6 molto rimproverato agli istologi di avere introdotto nel loro gabinetto da lavoro troppi reagenti, e specialmente nella tecnica delle colorazioni si e detto e ripetuto che spesso i micro- grafi hanno tolto dall'arte tintoria una sostanza colorante qualunque e l'hanno portata nella tecnica istologica senza sapere nemmeno essi quello che potevano aspettarsi dall'uso della medesima, II rimprovero e giusto ed 11 male, in parte, esiste realmente; ma a voler considerare esattamente la questione bisogna confessare che questo male, allo stato attuale delle cose, e fino ad un certo punto inevitabile. Attualmente noi sappiamo ancora troppo poco intorno al modo con cui le materie colo- ranti agiscono sui tessuti e sugli elementi del corpo umano per potere procedere in queste ricerche con criterii esatti e con induzioni scienti- ficamente logiche. Che piü? Le stesse spiegazioni scientifiche che si sono Volute dare del modo di agire di certe sostanze coloranti, che l'esperienza ha dimostrato essere fra le piü preziose che noi posse- diamo, non sono immuni da critica. lo alludo qui all'ipotesi che si e postainnanzi dell'affinitä, speciale che i colori di anilina 6as^c^ avrebbero per certe forme di schizomiceti, e ricordo pure che l'azione sui tessuti 24* 362 Martin otti: Suiruso deirallume di cromo nella tecnica microscopica. I, 3 animali della soluzione ammoniacale di carmiuio (questo reagente cosi spesso adoperato e che dovrebbe essere conosciiito in tiitti i suoi minimi particolari) nou e stata finora bastantemente spiegata. Fino a tanto dimque clie uoi uon saremo meglio edotti sul processo iutimo secondo cui si effettua la colorazioue dei tessiiti animali, fino a tanto anzi clie nou ci sarä meglio uota la costituzione cliimica e molecolare di questi stessi tessuti, non e lecito fare grave rimprovero allo studioso il quäle, mettendo in opera il celebre motto dell'Accademia del Cimento, cioe provando e rij)rovando l'azione dei diversi reagenti, cerca o di couquis- tare alla scienza una qualche nuova veritä o di porre a disposizione dello scienziato qualche nuovo o piü facile mezzo di investigazione. Persuaso di questo concetto, io sto da qualche tempo sperimentando diverse sostanze che mi paiono promettere buoni frutti sotto questo punto di vista e nel comunicare qui parte dei risultati che ho otte- nuto io avverto espressameute che nou iutendo tanto di segnalare fatti nuovi od eccezionalmente importanti quauto di accennare ad una via in cui potrebbero, a quello che mi pare, mettersi con profitto gli osser- vatori. E noto che l'allume di potassio e uuo dei reageuti piü spesso adoperati nella tecnica microscopica; anzi eutra nella costituzione di alcune sostauze coloranti che sono di uso giornaliero per l'istologo. II carminio che cosi spesso adoperiamo in soluzione ammoniacale si ottiene appunto trattando colFallume la cocciniglia in determinate condizioni di temperatura. Un altro metodo di colorazione, pure iraportantissimo, quello coirematossilina, esige l'intervento dell'allume. In questi Ultimi anni poi l'introduzione nella tecnica microscopica del carmiuio allumi- nato (Gkenacher) e della cocciniglia alluminata (Czokor), due metodi quasi insuperabili per la comoditä della loro applicazione, ha reso il reagente in discorso parte iutegraute della massima parte, si puö dire, delle uostre mauipolazioni micrografiche. Ma l'allume di potassio e il solo a cui compete questa proprietä? La chimica ci offre pure altri sali omologhi ad esso, e fra questi l'allume ammoniacale e l'allume di cromo; ed e naturale la domanda se noi nou potremmo con profitto sostituire al primo qualcuno degli altri due. Io ho appunto fatto ricerche in questa direzione ed ecco quanto ho trovato. Coll'allume ammoniacale si puö otteuere un carminio che si scioglie nell'ammoniaca come il carminio ordinario e che da ad un dipresso la stessa colorazioue; e si puö pure ottenere una cocciniglia ed un carminio alluminati che non mostrano sensibili difi'erenze da quelli otte- 1,3. Martinotti: SuH'uso deirallume di cromo nella tecnica microscopica. 363 miti coll'allume potassico. — La sostitiizione perö nou offre vantaggi speciali ed io, a quello che ho visto, non sarei disposto a consigliarla. Pill uotevoli invece sono i risultati che mi ha dato l'allume di cromo dei ciii caratteri chimici sara bene che io premetta im cenno perche iion mi pare che finora sia stato iisato nella tecnica microscopica. — L'allume di cromo o solfato doppio di potassio e di cromo (S02)3] S02] ^ '^ I 06 I "^ I r)2 1 94.H20 ^^ j ^ K2 j ^ ^ "^ ^ ^ e un sale isomorfo coll'allume di potassio (SOm S02] e cristallizza sotto forma di ottaedri di colore viola-ciipo, soliibili facil- mente nell'acqua ma insolubili nell'alcool, Se si riscalda la soluzione acquosa di allume violaceo al disopra di 80° C, essa acquista un bei colorito verde che mantiene anche dopo che sia stata raflfreddata. E singolare che questa soluzione verde di allume di cromo, per quanto la si concentri non lascia mai depositare dei cristalli, cioe non e piü capace di cristallizzare, salvoche non la si lasci a se per lungo tempo. In allora si riproduce iina modificazione molecolare e l'allume verde ritorna allo stato di allume violetto cristallizzabile. Ricordero di passaggio che l'allume di cromo e molto usato come mordente nell'arte tintoria per la söliäitä che comunica alle tinte. — Avverto subito che con esso io ho ottenuto risultati negativi nella colo- razione coHematossiliua ; ciö che mi ha tanto piü stupito iuquantoche non mi e ignoto che l'ematossilina ha la proprietä di ridurre istautanea- mente l'acido cromico ed i bicromati alcalini, formando coU'ossido di cromo che se ne precipita iina lacca di colorito nero intenso. Ma puö darsi che i risultati negativi provengano da circostanze che mi sono sfuggite. — Negli altri sperimenti invece ho ottenuto risultati piü soddisfacenti. Preparando il carminio come si fa nelle Industrie, cioe facendo boUire 10 p. di cocciuiglia in 500 p. di acqua, aggiungendo 1 p. di allume di cromo, filtrando a caldo e lasciando riposare, ho ottenuto un carminio cromato che, lavato accuratamente ed essiccato a temperatura non su- periore ai 30°, si scioglie benissimo nell'ammoniaca e possiede tutte le proprietä dei carminio ordinario salvo il colore che k. viola-ciipo. Con esso pero io non ho fatto molti tentativi e, tranne la diflferenza di colore che in qualche caso forse puo tornare utile, non ho trovato, fino ad ora, nessuna particolaritä degna di speciale raccomandazione. 364 Martinotti: Siill'uso deiralliime di cromo nella tecnica microscopica. 1,3. Ho pure sostituito all'allume di potassio l'allume di cromo uelle formole date dallo Czokor e dal Gbenacher per preparare la cocciniglia allumiuata ed il carmiaio alluminato ed ho ottenuto dne liquidi che io per brevitä chiamo cocciniglia e carminio allumino-cromati, che mi pare meritino l'atteuzione degli istologi. Uua precauzioue che si deve osser- vare iu queste preparazioni e quella di nou raggiungere la temperatura di 80** C. Altrimenti, per le ragioni dette poco sopra, non e piü rallume violaceo ma l'allume verde che entra in combinazione ed il liquido che allora se ne ottieue da una colorazione verdognola, secondo il mio avviso meno conveniente. II metodo che ho trovato migliore e quelle di mescolare i differenti ingredienti uelle proporzioni indicate dallo Czokor e dal Gkenacher per la preparazione della cocciniglia e del carminio alluminato (cioe sostituendo semplicemente l'allume di cromo all'allume di potassio) e di lasciare, per 24 — 48 ore od anche piü, la miscela in una stufa alla temperatura costante di circa 70" C. — La combinazione si elFettua completamente e non si ha piü che da filtrare il liquido depo il raffreddamento. Tanto l'uno quanto l'altro hanuo un colorito violaceo ed entrambi impartono questo loro colore ai nuclei agendo perfettamente come i liquidi proposti dallo Czokor e dal Grenacher: la cocciniglia allumino-cromata mi pare perö preferibile al carminio allumino-cromato. Cou essi si puö ottenere ima colorazione limitata ai nuclei anche quando i preparati siano lasciati per piü di 24 ore nella soluzione colorante, e questo anzi il metodo che io seguo abitualmente e mai mi avvenne di ottenere una colorazione diffusa. Bisogna perö avere l'awertenza di lavare accuratamente nell'acqua i preparati da conservarsi nelle sostanze resinose perche altrimenti l'allume di cromo, insolubile nell'alcool, si precipita sotto forma di aghi brunastri alla superficie delle preparazioni guastandole piü o meno. Intanto noto un primo vantaggio. La soluzione di cocciniglia allu- minata (Czokor) difficilmente si conserva per piü di qualche mese anche quando si abbia la precauzioue di aggiungere ad essa dell'acido fenico od altro liquido conservatore. — Cosi non va, a quello che finora ho visto, colla cocciniglia allumino-cromata. — Jo conservo da quasi un anno (epoca da cui datano le mie prime ricerche su questo punto, State interrotte poi per circostanze particolari) una soluzione di cocci- niglia allumino-cromata la quäle si e mantenuta perfettamente limpida scn^a Vaggiunta di neppure una traccia di liquido conservatore. Non ho bisogno di soggiungere che le preparazioni cosi colorate si conservano, per Io meno quanto le altre, nelle sostanze resinose. E leeito anzi sperare che sotto questo aspetto esse superino anche le 1,3. Martinotti: SuU'uso deirallume di cromo nella tecnica microscopica. 365 altre, sapendo che l'allume di cromo, allorcli^ viene adoperato nell'arte tintoria come mordente, impartisce alle tinte ima notevole solidüä. Un altro vantaggio sta nel colore particolare che se ne ottieue. I nuclei, come ho detto, assumono un colore violaceo simile, fino ad im certo punto, a quelle che impartisce loro l'ematossilina, senza perö rag- giungerne l'eleganza. Nelle colorazioui doppie si puö adunque sostituire all'ematossiliua la cocciniglia alumino-cromata che e assai piii comoda ad adoperarsi; ed io l'ho difatti usata spesso e con ottimo successo in combinazione col carminio ammoniacale o coll'eosina per fare spiccare maggiormente i nuclei. — Per quanto l'ematossilina sia un reagente prezioso e quasi indispeusabile, bisogna convenire che il suo uso e abbastanza malagevole. Le soluzioni coloranti preparate coll'ematossilina si guastano con estrema facilita e per mio conto depo avere esperimen- tato quasi tutte le formole proposte ho finito col ritornare al metodo primitive del Böhmer. Io tengo cioe in serbo una soluzione alcoolica di ematossilina ed una acquosa di allume ed allorche si presenta l'occa- sione di farne uso, aggiungo alla seconda tante gocce della prima fino ad ottenere un liquide colorato leggermente in violaceo. In esso lascio i preparati per brevissimo tempo si che estraendoli appaiono appena colorati : durante l'azione successiva dell'alcool e delle sostanze rischia- ranti esse aquistano perö un colorito violaceo non troppo intenso ma piü che sufficiente. Ma quäle differenza fra questo metodo e quelle colla cocciniglia e col carminio allumiuo-cromato ! La soluzione di cocciniglia allumino- cromata si puö conservare inalterata per dei mesi 5 quella di ematossilina e di allume invece si altera dopo poche settimane. I preparati si possono lasciare nella cocciniglia allumino-cromata per piü di 24 ore senza che la colorazione si faccia diffusa: nell'ematossilina invece pochi secondi di piü bastano per guastare un preparato che sotto altri aspetti puö essere molto prezioso. Lo ripeto, questo metodo di colorazione non puö competere ne per eleganza ne per altri aspetti con quelle che da l'ema- tossilina, ma i vantaggi che esso offre da un altro lato sono tali , mi pare, da meritargli posto fra i metodi usuali della tecnica micro- scopica. E nondimeno questi vantaggi sono a parer mio ancora pochi ed io avrei esitato a renderli di pubblica ragione se non avessi motivo di credere che all'allume di cromo ö riservato forse un avvenire nella tec- nica microscopica sotto un altro punto di vista. E noto che all'acido cromico, per tanti rispetti giä cosi prezioso per la tecnica istologica, e State in questi lütimi tempi riconosciuta un'altra proprieta importan- 366 Marti 11 otti: SuH'uso deirallume di cromo nella tecnica microscopica. I, 3. tissima, qnella di fissare le cosidette figure dei nnclei in evoluzione, cioe di avere ima speciale affiuitä per certe parti costituenti i niiclei stessi. lo so bene che qnesta proprietä dell'acido cromico non compete in egiial modo a tiitti i composti del cromo e che per es. al bicromato di potassa la proprietä in discorso e stata dal Flemming assolntamente negata, ma non e nemmeno impossibile che essa possa appartenere anche all'allume di cromo che non e stato finora, per qnello che io ne so, esperimentato sotto qnesto aspetto. — Ora, sebhene io non abbia ancora fatio sufß- cienti indagini in proposito e non possa quindi presentare al ri- güardo affermazioni recise, tuttavia le poche osservazioni che finora ho fatte mi lasciano sperare che usato in questa direzione il reagente possa portare buoni frutti. — Da quello che io ho visto anche per i preparati non sottoposti all'azione dei cromati, cioe fissati con soluzioni di acido picrico, la cocciniglia allumino-cromata meriterebbe di essere esperimentata. In conclusione adimqiie io credo di aver trovato im metodo di co- lorazione che in certi casi puö sostituire utilmente l'ematossilina (io non dico che valga altrettanto, ed in questo desidero che le mie parole siano ben comprese) e che inoltre promette di dare risultati egualmente buoni, forse migliori, uello studio della costituzioue molecolare e dei fiuissimi cambiamenti che avvengono nei processi evolutivi degli elementi organici. Ho quindi creduto non inutile di far conoscere il metodo agli istologi colla fiducia che esso possa dare uelle mani di quelli che parti- colarraente si occupauo di questi argomenti risultati anche migliori di quelli che il tempo ed i mezzi di cui disponevo hanno permesso a me di ottenere. Aggiunta. Ulteriori esperimenti, fatti quando era giä in corso di stampa il presente lavoro, mi hanno permesso di ottenere anche la combinazione dell'ematossilina coll'allume di cromo. Ecco il metodo seguito. Dap- prima ho sciolto 1 g di ematossilina nella minore possibile quantitä di alcool assoluto, poi ho aggiunto questa soluzione alcoolica ad una solu- zione acquosa di allume di cromo all' 1 % ed ho esposto la miscela in una stufa alla temperatura costante di 40" C. Dopo 12 a 24 ore la combinazione si e fatta. E singolare che contro la mia aspettativa, non si e formato nel liquido che un precipitato insignificante. Le poche esperienze che finora ho fatto con questo liquido mi .hanno perö dato risultati assai iusoddisfacenti. I, 3. Baum gar teil; Unterscheidung v. Lepra- u. Tuberkelbacillen. 367 lieber Untersiicliung'smetlioden zur Untersclieidung" von Lepra- und Tuberkelbacillen. Von Prof. Dr. med. P. Baumgarten in Königsberg i. Pr. Durch den Aufenthalt mehrerer Leprakranker in den hiesigen Universitäts- resp. Privat-Kliuiken bin ich in den Stand gesetzt ge- wesen, vergleichende Untersuchungen über Lepra- und Tuberkelbacillen anzustellen, deren hauptsächlichste Resultate ich mir hier, soweit sie in diebacterioskopische Technik einschlagen, niederzulegen erlauben möchte. Bekanntlich hatte Koch * gemeint, dass die Leprabacillen, welche den Tuberkelbacillen morphologisch bis zur ünunterscheidbarkeit ähn- lich sind, dadurch leicht von letzteren zu differenziren seien, dass sie gleich allen übrigen bekannten Bacterien (mit Ausnahme der Tuberkel- bacillen) schon durch die einfachen Anilinfärbungeu , die Tuberkel- bacillen dagegen einzig und allein mit Hülfe eines ganz bestimmten, von ihm entdeckten, später von Ehrlich zweckmässig modificirten Fär- bungs- und Entfärbungsverfahrens (auf welches die Leprabacillen aller- dings ebenfalls, im Gegensatz zu sämmtlichen übrigen bekannten Bac- terienspecies, in positiver Weise reagirten) zu tiugiren und farbig dar- zustellen seien. Indessen hat sich später gezeigt, dass dieser vermeint- liche specifische Unterschied zwischen Lepra- und Tuberkelbacillen nicht besteht, sondern dass auch die Tuberkelbacillen mittels der gewöhn- lichen Anilinfärbung deutlich zu färben und sichtbar zu machen sind '^. Ferner hatte Babes ^ die Ansicht ausgesprochen, dass es einzelne Anilin- farbstotfe gäbe, welche, in einfacher wässeriger oder alkoholischer Lösung zwar den Leprabacillus, nicht aber den Tuberkelbacillus färben; als 1) Koch, Aetiologie der Tuberculose (BerUner klin. Wochenschr., 1882, No. 15). ^) Vergl. hierüber des Verf.'s Mittheilung, Beiträge zur Darstellungs- methode der Tuberkelbacillen (diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 51) und die Ab- handlimg von B. Fkänkel, Ueber die Färbung des Kocn'schen Bacillus etc. (Berliner klin. Wochenschr., 1884, No. 13 ; cfr. auch das Referat in diesem Heft). 3) Babes, £tude comparative des bacteries de la lepre et de la tubercu- lose (Comptes rendus de l'Academie des sciences 1883, 23. Avril). 368 Baumgarten: Unterscheidung v. Lepra- u. Tuberkelbacillen. I, 3. solche Farbstoffe bezeichnet Babes das Fuchsin, das Methylenblau und das Eosin. Was den erstgenannten Farbstoff betrifft, so kann es keinem Zweifel unterliegen, dass er, auch ohne Anilinöl- oder dergleichen Zusätze, auch die Tuberkelbacillen kräftig zu färben im Stande ist ' ; was aber das Methylenblau und das Eosin anlangt, so haben mir meine Tinctions- versuche in Bestätigung der bezüglichen früheren Angaben von Neisser ^ ergeben, dass diese Farbstoffe, und zwar selbst in concentrirter wässeriger resp. alkoholischer Lösung und nach bis 24stündiger Einwirkung weder die Leprabacillen, noch die Tuberkelbacillen deutlich zu färben ver- mögen. — Danach könnte es scheinen, als ob es auf tinctoriellem Wege nicht möglich sein werde, eine sichere Differenzirung zwischen Tuber- kel- und Leprabacillen zu bewirken. Dem ist jedoch nicht so. Existiren auch keine principiellen Färbungsdifferenzen zwischen beiden Ba- cillusarten, so sind doch recht erhebliche graduelle Unterschiede in der Färbbarkeit resp. Entfärbbarkeit derselben vorhanden , deren richtige Verwerthung es ermöglicht, eine richtige Unterscheidung zwischen ihnen zu treffen. Bereitet man sich eine verdünnte alkoholische Fuchsinlösung (her- gestellt durch Eingiessen von 5 bis 6 Tropfen der gesättigten alkoho- lischen Lösung in ein kleines Uhrschälchen von Aq. destill.) und lässt die frisch ^ angefertigten Deckgläschentrockenpräparate 6 bis 7 Minuten ') Vergl. die Nachweise hierüber in den citirten Aufsätzen des Verf. und B. Fränkel's. 2) Neisser, Weitere Beiträge ziu: Aetiologie der Lepra (Vikchow's Arch. Bd. LXXXIV p. 525). 3) Koch hat (Mitth. a. d. Kaiserl. Gesundheitsamte Bd. I, p. 10) ange- geben, dass sich die Leprabacillen nur ganz frisch am Deckgläschen ange- trocknet daselbst anfärben, schon ganz kurze Zeit nach der Eintrocknung da- gegen die Tinctionsfähigkeit einbüssen. Ich habe jedoch noch an bis 40 Tage alten Deckgläschentrockenpräparaten in einfachen Fuchsinlösungen sehr gute Färbungen der Leprabacillen erhalten ; allerdings bekam ich dabei den Eindruck einer gewissen Verrin ge rang des Färbungsvermögens diu-ch die Dauer der Ein- trocknung. — Neisser hat (1. c. p. 527) hervorgehoben, dass die am Deckglas ein- getrockneten Leprabacillen nur nach Alk oho lentfärbung der Deckgläschen im gefärbten Zustande sichtbar zu machen seien, nicht dagegen nach dem blossen Abspülen des überschüssigen Farbstoffes mit Wasser, wonach sie ungefärbt erschienen ; ich kann diese Beobachtung Neissee's insofern bestätigen, als nach sehr kurz dauernder Anfärbuug die Alkoholbehandlung bereits deutliche Bilder giebt, während das Wasserverfahren noch keine deutlichen farbigen Stäb- chen erkennen lässt. möchte aber diese Differenz weniger auf eine durch den Alkohol bewirkte „Inversion" der Färbung (Neisser), als vielmehr auf die durch den Alkohol zu Stande gebrachte Entfärbimg des Untergrundes beziehen, 1,3. Baumgarten: Unterscheidung v. Lepra- u. Tuberkelbacillen. 369 auf dieser Färblösung schwimmen, entfärbt sie danach y4 Minute in mit reiner Salpetersäure versetztem Alkohol absol. (1 Th. Säure auf 10 Th. Alkohol), bringt sie, behufs Entfernung der Säure, in destillirtes Wasser, benetzt sie hierauf mit wässeriger Methyleublaulösung und untersucht sie — und zwar ohne Verzug — in dieser Flüssigkeit mittels homogener Immersion Zeiss Yia resp. Yig bei offenem AsBE'schen Condensor, so zeigen sich die Leprabacillen als feine deutlich roth gefärbte Stäb- ehen, während die Tuberkelbacillen keine Färbung aufweisen. Auch an Schnitt präparaten lässt sich mittels der einfachen Anilinfärbungen eine Unterscheidung von Lepra- und Tuberkelbacillen bewerkstelligen. Bringt man die Schnitte 12 bis höchstens 15 Minuten in die soeben beschriebene Fuchsinlösimg, entfärbt danach Va IVIinute in der erwähnten Mischung von Salpetersäure und Alkohol, wäscht in Aq. destill, aus und untersucht nach 3- bis 4minuteulanger Entwässerung in absolutem Alkohol, in Bergamottöl (Damsch '), mit Zeiss homogener Immersion und offenem AßBE'schen Condensor, so erkennt man die Leprabacillen sehr deutlich als allerdings sehr feine, leuchtend rothe Stäbchen auf blauem Gewebsgrunde , während von den Tuberkelbacillen bei ganz gleicher Behaudluugsweise auch an den bacillenreichsten, frisch ge- härteten Präparaten nichts zu sehen ist 2. — Aber auch mit Hülfe der wodurch die vorhandene schwache Bacillenfärbung sichtlicher hervortritt; wenigstens spricht für letztere Interpretation der Umstand, dass ich zuweilen bei Nachfärbung der einfach in Wasser abgespülten Präparate mit Methylenblau resp. Bismarckbraun die Leprabacillen als feine, schwachrothe resp. blaue Stäbchen sehen konnte, während mir dies vor der Contrastfärbung des Untergrundes an denselben Präparaten nicht möglich war. Nach längerer Dauer der Färbung, besonders mit in Anilinwasser gelösten Farbstoffen treten beide Unterschiede, sowohl der zwischen frischen und älteren Deckgläschen- präparaten, als auch der zwischen dem Alkohol- und Wasserverfahren gänz- lich zurück. ') Dam.sch in ViRCHow's Archiv. Bd. LXXXII, p. 28; Nelkenöl extrahirt die durch einfache kurzdauernde Anilinfärbimg gewonnene Bacillenfarbe ausser- ordentlich schnell (vergl. hierzu des Verf. Angaben 1. c. p. 53) während das von Damsch empfohlene Bergamottöl sie weit länger intact lässt. 2) Babes giebt (1. c.) an, das gleiche Resultat der Differenzirung nach 24stündiger Fuchsinfärbung erreicht zu haben; ich gebe zu, dass ein be- deutender Unterschied in der Färbung zwischen Lepra- und Tuberkelbacillen auch auf so lange Zeit der Tingii-ung unterworfenen Schnitti:)räparaten sich geltend macht ; es rührt dies nicht daher, dass, wie Babes meint, die Tuberkel- bacillen in einfachen Fuchsinlösungen überhaupt nicht zu färben seien (vergl. oben p. 368), sondern daher, dass, wie ich dies in meiner eingangs citii'ten Mittheiluug ausgeführt, der Alkohol den in einfacher Fuchsinlösung gefärbten 370 Baumgarten: Unterscheidung v. Lepra- u. Tuberkelbacillen. 1,3. complicirten Färbimgsmethoclen gelingt es, eine Unterscheidimg von Lepra- und Tuberkelbacillen zu Wege zu bringen. Legt man die Schnitte (für Deckgläschenpräparate ist es mir nicht möglich ge- wesen, hierbei die geeigneten, eine sichere Differentialdiagnose garanti- renden. Zeitgrenzen aufzufinden) 2 bis 3 Minuten in eine EHELicn'sche Fuchsinlösung (11 Theile der concentrirten alkoholischen Fuchsinsolu- tion auf 100 Theile Anilinwasser [Weigert]), entfärbt danach Ya bis 1 Minute in der angegebenen Salpetersäure-Alkoholmischung, überträgt sodann die Schnitte 2 bis 3 Minuten in concentrirte wässerige Methylen- blaulösung, entwässert 3 bis 4 Minuten in Alcoh. absol., und untersucht bei homogener Immersion und offenem ABBE'schen Condensor in Berga- mottöl, so erhält man das nämliche Resultat wie bei der einfachen Fuchsinfärbung: die Leprabacillen erscheinen deutlich roth gefärbt, die Tuberkelbacillen dagegen markiren sich nicht. Auch mittels des von mir für Deckgläschentrockenpräparate ange- gebenen combiuirten Kaliverfahrens * ist es möglich, eine Differenzirung beider Bacillenspecies zu erzielen. Benutzt man hierbei als Färbungs- flüssigkeit dieselbe, oder eine ein wenig stärkere Fuchsinlösung '^ als die zu obigen Versuchen verwendete, so erlangen auf dem damit be- netzten eingetrockneten Kalipräparate die Leprabacillen binnen 2 bis 3 Minuten einen deutlich rothen Farbton, während die Tuberkelbacillen höchstens nach 10 Minuten einen leichten Schimmer röthlicher Färbung zu bekommen anfangen. Ob sich Lepra- und Tuberkelbacillen auch durch die Verschieden- heit ihrer Wachsthumserscheinungen auf künstlichen Cultursubstraten von einander sicher unterscheiden lassen, vermag ich aus eigner Anscliauung nicht anzugeben. Die einzigen etwas aus- führlicheren Angaben über Leprabacillusculturen auf erstarrtem Blut- Tuberkelbacillen die Farbe sehr schnell entzieht, während dies, wie eben der Versuch lehrt, bei den Leprabacillen weitaus nicht in gleichem Maasse der Fall ist; indessen habe ich doch, nach erheblich längerer Einwirkimg der Fuchsinlösung, als es oben angegeben, häufig auch auf den Tuberkel schnitten eine Anzahl gutgefärbter Bacillen hervoi'treten sehen, so dass ich zu differential- diagnostischen Zwecken nur das obige Verfahren empfehlen kann. •) Baumgaeten in Centralbl. f. d. med. Wiss. 1882, No. 25. ^) Eine analog bereitete Methylviolettlösung leistet hier fast das Gleiche ; indessen ist das Fuchsin auch bei diesem Versuche, wie bei allen übrigen, die Differenzii'ung von Lepra- und Tuberkelbacillen bezweckenden Methoden, dem Methylviolett vorzuziehen, weil es, wie schon Neisser richtig erkannt, das souveränste Färbungsmittel für die Leprabacillen ist,' während als Tinctions- stoff für Tuberkelbacillen das Methylviolett obenan steht. 1,3. Baum garten: Unterscheidung v. Lepi-a- u. Tuberkelbacillen. 371 serum rühren bekanntlich von Hansen * her; wenn sich diese Angaben bestätigen, so würde allerdings dnrch Cultivirungsversuche auf coagu- lirtem Serum eine Differenzirung beider Baciilusarten leicht mög- lich sein. Als das untrüglichste Verfahren, beide in Rede stehenden Bacterien- species von einander zu unterscheiden, muss unzweifelhaft das Cohn- HEiM'sche Vorderkammerexperiment angesehen werden, Ueberträgt man lebenskräftige Tuberkelbacillen in die vordere Augenkammer von Kaninchen, so entwickelt sich danach mit unfehlbarer Constanz eine typische Ocular- mit nachfolgender Allgemeintuberculose, während nach Uebertragung selbst grösster Mengen lebensfrischer L e p r a bacillen in die vordere Augenkammer meist gar keine specifischen pathologischen Erscheinungen ^, oder doch nur locale Processe auftreten, welche sich sowohl makroskopisch als auch mikroskopisch derart verschieden von dem Process der ocularen Impftuberculose verhalten, dass eine Ver- wechslung beider Vorgänge vollständig ausgeschlossen erscheint. *) Hansen in Virchow's Archiv Bd. XC p. 547. 2) Vergl. die vollständig negativen Uebertragungsversuche von Köbner, Virchow's Archiv Bd. LXXXVIII; auch unsere Uebertragungsversuche hier mit Leprabacillen sind erfolglos gewesen. 372 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 3. Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. Von Professor Dr. Haiis Gierke in Breslau. (Fortsetzung). VII. Die Anilin-Farben. 71) Beneke. Correspbl. d. Vereins f. gemeinschaftl. Ar- beiten, 1862, No. 59 p. 980. 72) Waldeyer. Siehe No. 36. Unter- suchungen u. s. w. in Henle u. Pfeüfer's Zeitschr. 3. Reihe Bd. XX p. 200. 73) Onimus. De l'emploi de la fuchsine dans l'etude des elements anato- miques. (Journ. de l'Anat. 1865 No. V p. 569). 74) Frey. Siehe No. 38. Die Hämatoxylinfärbung (Arch. mikrosk. Anat. Bd. IV p. 345). B. empfiehlt eine mit käuflicher Lila- Anilin-Farbe gefärbte Essigsäure. Der Farb- stoff löst sich klar in der Säure auf. W. berichtet über eine Reihe von Färbe- versuchen, die er mit verschiedenen, aus dem Anilin bereiteten Farben, besonders mit Ros- anilin [Anilin-Roth], Anilein [Anilin- Violett] und Pariser-Blau [Anilin-Blau] angestellt hat. Ganz besonders empfiehlt er AniKn-Roth in zwei verschiedenen Verdünnungen mit Wasser. Die stärkere Lösung enthält 15 Tropfen des käuflichen AniUn-Roths auf 50, die schwächere auf 300 bis 400 g Wasser. Die schnelle Wir- kung stellt diesen Farbstoff über das carmin- saure Ammoniak. [Man kann im Augenblick unter dem Deckglas färben]. Doch ist dafür die Haltbarkeit der Präparate geringer. Be- sonders dunkeln sie nach. Kerne und Kern- körper färben sich schneller als das Zellproto- plasma, der Axencylinder der Nervenfaser schneller als das Mark. 0. empfiehlt das Fuchsin als histologisches Tinctionsmittel. F. empfiehlt Parme soluble 1 Th. auf 1000 Th. 1862 1863 1865 1868 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 373 Dahlia. Eosin. 75) V. Ebener. Ueber den Bau der Aortenwandung, be- sonders der Muskel- haut derselben. (Rollet's Unters, a. d. Inst. f. Phys. u. Hist. in Graz. Leip- zig 1870 p. 32). 76) Merkel. Zur Kenntniss der Stäbchenschicht der Retina. (Arcb. f. Anat. u. Phys. 1870, p. 642). 77) Zuppinger. Eine Methode Axen- cylinderfortsätze der Ganglienzellen des Rückenmarks zu de- nionstriren (Arch. f. path. Anat. Bd. X p. 255 ff.). 78) W. Hatchelt Jackson. On staining sections with Magenta. (Quart, lourn. micr. sei. 1874 p. 139). 79) Huguenln. in Correspbl. f. Schweizer Aerzte 1874 No. 10. 80) Fischer. Eosin als Tüictions- mittel f. mikroskopi- sche Präparate. (Arch. f. mikr. Anat. Bd. XII p. 349). V. E. empfiehlt zur Tinction der Gefäss- wandungen das AniUnroth. Besonders färbt das elastische Gewebe sich sehr schön. M. empfiehlt ebenfalls das Anilinroth und zwar im besondern für die Darstellung der structurlosen Häute der Retina. Das Mittel ist auch nach Behandlung mit Ueberosmium- säure noch sehr wirksam. Z. empfiehlt Rückenmarksquerschnitte in dem in Wasser löslichen schwach durch Essig- oder Salzsäure angesäuerten Anilin-Blau zu tingiren. 1870 J. empfiehlt für Dauerpräparate folgende Tinctionsflüssigkeit. Zu einer dünnen wässeri- gen Lösung des Rosanilin wird starke Gerb- säurelösung tropfenweise hinzugefügt , so dass ziemlich alles Rosanilin gefällt wiixl [doch soll ein Rest in der Flüssigkeit bleiben]. Das Präcipitat wird gewaschen, getrocknet und mit einem Tropfen Essigsäure versetzt in Alkohol gelöst. Diese rosenrothe Flüssigkeit färbt sehr schnell und schön. Die Präparate sollen aber weder in Balsam noch in Glycerin, sondern in Zuckersyrup [dem, während er noch heiss ist, 3 bis 4 "/o Chlornatrium oder Chlorcalcium zu- gesetzt werden] eingeschlossen werden. H. wendet Dahlia an, um den Axencylin- der der Nervenfaser zu färben. Er empfiehlt das Mittel auf das Wärmste ohne aber eine nähere Vorschrift zu geben. F. wendet das Eosin (Kalisalz des Tetra- bromfluorescei'n) entweder einfach in wässeriger Lösung an. Dieselbe sieht roth aus, mit grüner Fluorescenz und färbt die Schnitte in etwa 10 bis 12 Stunden. Oder aber [und dies empfiehlt er weit mehr] er benutzt den freien Eosinfarbstoff", den er durch Ausfällen mit Säuren aus der Lösung erhält und nach dem Abfiltriren in Alkohol [1:20 bis 30] löst. Mit dieser Lösung färbt er Präparate ausMüi.LER- scher Flüssigkeit und frische Objecte. Sie er- härtet letztere und färbt sie zu gleicher Zeit. Sehr stark werden Epithelien, Muskelfasern, 1870 1873 1874 1874 1875 374 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 3. Verdam- mung der Anilin- farben. Leon- hardi'sche Tinte. Jodviolett. Anilin- blau für Knochen. 81) Lawsoii Tait. Ou tlie freezing jjro- cess for section cutt- ing and on various methods of staining and mounting sect- ions. (Journ. of Anat. and Phys. vol. IX p. 250—258). 82) Heschl. Eine hübsche ä vista Reaction auf amy- loid-degenerirte Ge- webe. (Wiener med. Wochenschr. No. 32 p. 714). 83) R. Jürgens. Eine neue Reaction auf Aniyloidkörper. (ViRCHow's Arch. Bd. LXV p. 189—195). 84) Ranvier. Des preparations du tissu osseux avec le bleu d'aniline inso- luble dans l'eau et soluble dans l'alcool. (Arch. des Physiol. 1875, p. 16—21). Axencylinder gefärbt, ebenso auch noch Blut- gefässe und zwar schön roth. Weniger färbt sich das Bindegewebe, gar nicht die Mark- scheide der Nervenfasern. Sehr blass auch bleiben die Nervenzellen. Die amyloide Sub- stanz roth. in entarteten Organen wird schön hell- L. T. verdammt die Anilinfarben gänzlich, ähnlich wie Carmin. [Siehe No. 60]. H. empfiehlt eine neue Farbenreaction der amyloiden Substanz. Die LEoxHARDi'sche vio- lette Tinte, die nichts weiter als eine Mischung von Anilinroth und Anilinblau ist, tingii't amyloid-degenerirte Theile schön rosenroth, alles Uebrige blau. J. dagegen empfiehlt für den gleichen Zweck Jodviolett, das er in wässeriger Lösung anwendet Die amyloid-degenerirten Theile färben sich leuchtend roth, während die ge- sunden Theile mehr blauviolett aussehen. Um die Reaction möglichst deutlich zu bekommen, muss man etwas warten. Die Intensität der Färbung nimmt einige Zeit hindurch zu. R. färbt Knochenschliffe in Anilinblau, das im Alkohol löslich, in Wasser dagegen unlös- lich ist. Zu dem Zwecke bringt er Knochen- schliffe, die er mit einem ScalpeU etwas abge- schabt hat, für eine bis zwei Stunden in eine warme concentrirte alkoholische Lösung des Anilinblau und lässt dies so lange auf dem Wasserbad, bis sie fast ganz ausgetrocknet ist. Dann wird das Präparat aufs Neue auf einem feinen Stein, der mit einer 2procentigen Koch- salzlösung benetzt ist, geschliffen, dann in dieser Lösung gut gewaschen und zuletzt dauernd eingeschlossen in einer Mischung der- selben mit einer gleich grossen Quantität Glycerin. 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 375 Violettes Metliijl- anilin. Auch als Meaction auf amy- loide Sub- stanzen. lieber fär- bung mit nachfol- fiendem Ausziehen in Alkohol. 85) Cornil. Sur la dissociation du violet de metliyl- aniline et sa Separa- tion en deux cou- leurs sous l'influence de certains tissus normaux et patho- logiques en particu- lier par les tissus en degenerescence amyloule. fComptes rendus 27. Mai 1875). 86) Hermann. Ueber eine neue Tinctionsmethode (Tagebl. d. 48. Na- turfvers. Graz 1875 p. 105). C. empfieblt eine wässerige Lösung des violetten Methylanilins als mikroskopisches Färbemittel. Als Vortheil hebt er hervor, dass dasselbe sich bei der Färbung vieler Ge- webe in eine roth- und blauviolette Nüanci- rung trenne, so dass sehr schöne Diiferenzi- rungen der Gewebe eintreten. Der hyaline Knorpel z. B. tingirt sich so, dass die Grund- substauz röthlich, die Zellen und ihre Kapseln violett gefärbt werden. Bindegewebsfibrillen und elastische Fasern färben sich violett, ebenso Zellen und Fasern des elastischen Knorpels. Ein Nachtheil des Tinctionsmittels ist die geringe Haltbarkeit. In den gewöhn- lichen Einschlussmitteln, wie Glycerin, Canada- balsam, dann in Terpentin, Nelkenöl und Al- kohol wird der Farbstoff sehr schnell aus den Präparaten ausgezogen. Besser hält sich die Tinction amyloid-degenerirter Theile mit vio- lettem Methylanilin. Dieselben sehen roth- violett aus, während die gesunden Gewebsele- mente sich blau färben. In Glycerin zu con- serviren. Bei Behandlung mit Essigsäure ver- schwindet die rothe Farbe der degenerirten Substanzen viel langsamer als die blaue der gesunden. H. empfiehlt sehr, die in Anilinroth (Fuchsin) gefärbten Schnitte in Alkohol so lange zu extrahiren, bis sich kein Farbstoff mehr ausziehen lässt. Dann haben nur noch die Kerne den Farbstoff zurückgehalten. Die diffuse Färbung hat sich in eine schön diffe- rente umgewandelt. H. verwendet nur in Al- kohol lösliche, aus Rosanilin dargestellte Anilin- farben, am liebsten das Fuchsin, welches unter der Bezeichnung Rubinroth im Handel vor- kommt. Im Wasser lösliche Anilinfarben sind für die erwähnte Methode unbrauchbar. Die Präparate müssen in Alkohol gehärtet sein. Haben sie zuerst einige Zeit in Chromsäure gelegen, so ist das gut. — Obgleich Tinctions- flüssigkeiten von der verschiedensten Concen- tration gute Präparate liefern, empfiehlt er doch 0-25 g Rubinfuchsin in 20 cc Alkohol von 96 7o gelöst und etwa 20 cc Wasser zu- gesetzt als besonders vortheilhaft. Die Auf- bewahrung der Schnitte geschieht nach den ge- bräuchlichen Methoden. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 3. 25 376 Gicrke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 1,3. Eosin mit Alaun als Reagenz auf Hä- moglobin. Eosin in ammonia- Tcaliselier Lösung. Eosin in wässeriger Lösung. JSIachheri- ges Aus- tvasclien in saurem Wasser. 87) Wissowzky. Ueber das Eosin als Reagenz auf Hämo- globin und die Bil- dung von Blutge- fässen und Blut- körperchen bei Säuge thier- und Hüh- nerembryonen. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XHI p. 479—96). 88) Lavclowsky. Zur feineren Anato- mie und Physiologie der Speicheldrüsen insbesondere der Or- bitaldrüsen. (Arch. mikrosk. Anat. Bd. XHI p. 359—362). 89) Dre Sehfeld. Ueber eine neue Tinctionsflüssigkeit für histologische Zwecke. (Med. Cen- tralbl. 1876 No. 40), Dei'selbe, On a new staining fluid (Journ. Anat. and Physiol. vol. XI p. 181—182). W. empfiehlt das Eosin, das er mit einer gleich grossen Menge Alaun in Alkohol [Eosin, Alaun je 1 Th., Alkohol 200 Th.] löst, als gutes Reagenz auf Hämoglobin, da es in den rothen Blutkörperchen stets nur hämoglobin- haltige Theile färbt und zwar rosa-orange. Die Kerne und das Stroma der des Hämoglobins beraubten Blutkörperchen färbt dieses Tinc- tionsmittel eben so wenig wie weisse Blut- körperchen. L. empfiehlt ebenfalls Eosin als Tinctions- mittel. Jedoch zieht er eine einfache ammo- niakalische Lösung der wässerigen oder alko- holischen Lösung vor, da diese letzteren zu diffus färben. Die Lösung muss ganz schwach^ ammoniakalisch oder gar neutral sein und so verdünnt, dass sie auf weissem Grunde kaum gefärbt erscheint. Er bringt die Schnitte für 24 Stunden hinein und setzt sie dabei der Einwirkung essigsaurer Dämpfe aus. Während in dieser Lösung die Belegzellen der Lab- drüsen schön rosa, die Hauptzellen aber gar nicht gefärbt werden, tingiren sich in den Speicheldrüsen sowohl die Halbmonde, als auch die Schleimzellen und die membrana propria in gleich starker Weise. L. benutzt auch eine Mischung der Pikrin- säure mit Eosin. Er setzt einer ammoniaka- lischen Lösung von Eosin, die an der Luft gestanden hat, Pikrinsäure bis zur Neutrali- sation hinzu. Das erhaltene Tinctionsmittel nennt er Piki'oeosin. Auch D. empfiehlt Eosin als Tinctions- mittel. Er nun freüich wieder in wässeriger Lösung (1:1000—1500 aq. dest.). Am besten färben sich Schnitte von erhärtetem Material, während es aus den frischen Schnitten beim Entwässern im absoluten Alkohol wieder aus- gezogen wii'd. Die Schnitte werden nur für 1 bis l'/2 Minuten in obige Lösung gelegt und kommen dann für einige Secunden in leicht mit Essigsäure angesäuertes Wasser. Beson- ders zu empfehlen ist das Eosin für die Unter- suchung des Nervengewebes, da Kerne und Kernkörperchen der Ganglienzellen, und ebenso die Axencylinder der Nervenfasern sich schön roth tingiren , die Markscheiden ungefärbt bleiben und das Bindegewebe eine viel dunk- lere Färbung annimmt. 1876 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 377 90) Treitel. Eine neue Reaction der markhaltiaen Nervenfasern. (Med. Centralbl. 187G No. 9 p. 147). 91) Baiim^-arten. Knorpel, Knochen und Anilinfarbstoffe. (Med. Centralbl. 1876, No. 37 p. 657). Dalilia u. andere Anilinfar- ben für die Tinction der Plas- mazellen. 92) Ehrlich, P. Beiträge zur Kennt- niss der AniUnfär- bungen und ihrer Verwendung in der mikroskopischen Technik. (Arch. mikrosk. Anat. Bd. XllI p. 263—77). T. hat Versuche mit einigen Anilinfarb- stoffen, besonders mit Jod violett [ausserdem mit Fuchsin und mit in Alkohol löslichem Anilinblau] gemacht. Er findet, dass durch diese Tinctionsmittel cUe normale markhaltige Nervensubstanz sehr stark gefärbt wird, wäh- rend sich die degenerirten Nerven viel schwächer und das Bindegewebe gar nicht färben. Selbst Präparate, welche in Müi.i.ER'scher Flüssig- keit lagen, tingiren sich noch gut. Die Schnitte kommen für 1 Minute in eine sehr verdünnte Lösung (1 Tropfen einer Iprocentigen Lösung auf je 1 CO Aq. dest.). Bei dieser Methode bleiben die Kerne ungefärbt, die ScHWANN'sche Scheide glcicLfalls ; die Axencylinder werden ganz schwach tingirt. Nach längerer Einwir- kung concentrirter Lösungen färbt sich Alles. B. bedient sich zur Tinction der Leon- iiARDi'schen Tinte, welche nichts weiter als eine Lösung von Anilinviolett ist. Er unter- sucht besonders die Differenzirungen des lüiorjiels an der Ossificationsgrenze, indem er Holzessig-Präparate von der Epiphysengrenze der Diaphyse jugendlicher Knochen in jener Tinte färbt. Die Schnitte kommen für 2 bis 10 Minuten in dieselbe, dann so lange in an- gesäuertes Wasser (2 bis 3 Tropfen auf ein Uhrschälchen aq. dest.), bis der blaue Farben- ton deutlich sich in einen violetten verwandelt hat. Nun wird noch tüchtig ausgewaschen in aq. dest. Der Knorpel ist jetzt schwach blau bis lila, die verkalkte Knorpelgrundsubstanz violett bis rosig, der Knochen röthlich (oft sehr hell oder gar entfärbt), das Markgewebe hellblau. Aehnliche Resultate erhält B. durch Behand- lung der Präparate mit Fuchsin und nach- herigem Auswaschen in Salzsäure. [Nur darf hier nicht in Wasser, sondern in Glycerin oder in Alkohol absolut, ausgewaschen werden]. Die Farbennüancen sind dann: Der Knorpel röthlich-blau, die verkalkte Knorpelgrundsub- stanz tief himmelblau, der Knochen roth oder entfärbt und alle Kerne carminroth. E. hat besonders mit Dahlia experimentirt. Es ist dies chemisch Monophenylrosanilin und schliesst sich eng an das Parmeblea, Diphenyl- rosanilin und das Anilinblau, Triphenylrosanilin an. Die m Spiritus lösliche Form ist die ge- wöhnliche, aber auch eme in Wasser lösliche ist zu finden. Die röthliche Nuance empfiehlt sich am meisten. Die im AVasser lösliche Dahlia färbt in neutraler Lösung die meisten thierischen Gewebe sehr intensiv [z. B. die amyloide Substanz roth, das Protoplasma blau- violett]. Die Kerne aber werden fast gar nicht oder nur sehr blass gefärbt. Die Fär- bungen erinnern sehr an die in Glycerin ent- färbten Chinoinblau-Bilder. Behandelt man I 25* 378 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I. 3. aber die Schnitte mit essigsam-em Wasser, so entfärbt sicli Protoplasma und Bindegewebe theilweise und die Kerne werden blauviolett. Auch Wa i-devek's P 1 a s m a z e 1 1 e n färben sich und werden nicht wieder entfärbt; auch nicht nach stundenlangem Liegen in absolutem Al- kohol. Will man nur die Plasmazellen färben, so mlissen die Organe in starkem Alkohol gehärtet sein, nach [nicht in chromsauren Salzen] Die Färbeflüssigkeit wird am besten folgendem Recept angefertigt : Alcoh. abs. 50 cc Aq. dest. 100 Acid. acet. glac. 12 V2 „ Hierzu Dahlia bis fast zur Sättigung. Die Präparate kommen für mindestens 12 Stunden Linein und werden nach der Entwässerung in verharztem Terpentin eingeschlossen. Manchmal färben sich ausser den Plasma- zellen auch Becher-(]Mucin-) Zellen und der Inhalt (also das Fett) der Fettzellen. Die Fettfärbung ist aber sehr selten. Es giebt noch einige andere Anilinfarben, welche die Plasmazellen distinct färben. Alle sind in Wasser löslich. Sie wurden alle in Lösungen angewandt, welche T'/z cc Eisessig, 150 cc Alkohol ä tiers und den Farbstoff bis enthielten. Von sehr \äelen in zur Sättigung Anwendung gezogenen Anilinfarben waren es folgende : 1) Primula 2) Jodviolett 3) Methylviolett. 4) Eine unter dem Namen Purpurin käufliche rothe Anilinfarbe 5) Safranin 6) Fuchsin. Dahlia und die Farben 1 bis 4 (incl.) tingiren nur die Plasmazellen , alles Uebrige bleibt imgefärbt, während 5 und 6 die Plasma- zellen niu: stärker (dunkler) färben. Ra.nviek's Chinolinblau und schwache alkoholische Cyanin- lösung zeigen auch nach Behandlung mit alka- lischem Glycerin schön rothe Plasmazellen, während das Protoplasma sich blau, das Fett sich bläulich färbt. Die Intensität der Färbung beruht auf Körnchen, welche dem Protoplasma eingelagert sind. Die Kerne der Plasmazellen bleiben stets ungefärbt. Die Körnungen sind sicher nicht moleculares Fett. Sie bestehen aus einem Stoff, der folgende Eigenschaften hat: In Wasser, Alkohol und Aether ist er imlös- lich. Alkalien scheinen ihn nicht anzugreifen, auch der Fäulniss widersteht er gut. Im übrigen ist er noch unbekannt. I, 3. üierkc: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 379 Änilin- schivarz {Aniline blue- blacJc). Dasselbe. Colin- sclies Schioars. 3Iethyl- grün und Indulin. 93) Sankey. On a new Solution for staining sections of hardened animal tissues. (Quart. Journ. microsc. sei. 1876 p. 35). 94) Bevan Lewis. Preparation of sect- ions of cerebral and cerebellar cortex for microscopic examin- ation. (Quart. Journ. microsc. sei. 1876, p. 69; Med. timcs and gaz. 1876, March 4). 95) Liiys. Emploi d'une nou- velle maticre noire derivee de l'aniline (noir Colin) pour les preparations histologiques et les reproductions photo- graphiques. (Gaz. med. de Paris 1876 No. 29 p. 346). 96) Calberla. Ein Beitrag zur mi- kroskopischen Tech- nik. (Morphol. Jahr- buch Bd. UI p. 625). S. empfiehlt einen in England im Handel vorkommenden blauschwarzen Anilinfarbstoff „Anilineblue-black", der in Wasser leicht, in Alkohol schwer löslich ist. Er nimmt 0'5 g des Farbstoffes auf 1 — 2 cc aq. dest. und setzt 99 cc Alkohol hinzu. Die Flüssigkeit färbt sehr schnell (in wenigen Minuten) und lässt die Kerne viel besser als Carmin hervortreten. Am meisten zu empfehlen für das Central- nervensystem. B. L. empfiehlt das eben erwähnte AuiUne blue-black von Saxkey für Untersuchungen des Centralnervensystems auf das Wärmste. Er zieht es dem Carmin entschieden vor. Er be- nutzt eine wässerige Lösung von '/z — 1 "/o- Sehr vortheilhaft, um die Ausläufer der Zellen deutlich zu machen, ist es, die Schnitte nach der Färbung auszuwaschen und dann 20 bis 30 Minuten lang mit einer Lösung von Chloral- hydrat zu behandeln. (Das Gelingen der Tinction mit Anilin- schwarz hängt offenbar sehr von der Güte des Farbstoffes ab. Ich konnte mit den in Deutsch- land käuflichen Präparaten niemals günstige Resultate für das Centralnervensystem er- halten. Die Behandlung mit Chloralhydrat macht die Schnitte ungeeignet zum Aufbe- wahren). L. führt eine andere schwarze (schwarz- blaue) Anilinfarbe, das im Handel sogenannte CoLiN'sche Schwarz , in die mikroskopische Technik ein. Material, das in Chromsäure und in chromsauren Salzen erhärtet war , muss lange und sorgsam ausgewaschen werden vor der Färbung. Er benutzt eine Lösung von Vio "/n und lässt die Schnitte 3 bis 4 Minuten in derselben. Die Schnitte können nach der gewöhnlichen Methode (Alkohol, Terpentin, Balsam) in Canadabalsam eingeschlossen wer- den. Ein besonderer Vorzug der so gefärbten Präparate ist, dass sie sich ausserordentlich für die photographische Aufnahme eignen. C. führt das Methylgrün und das Indulin in die mila'oskopische Technik ein. Das erstere in wässeriger Lösung bringt sehr schöne Differenzirungen der Gewebselemente hervor. So werden die Kerne der Zellen des Unter- hautbindegewebes, die Kerne der Gefässe und Nervenscheiden rosa roth, die Zellen des Coriums mit den Kernen rothviolett, die Zellen des Bete Malpighii grünblau gefärbt. — Sehr empfehlenswerth ist nach C. eine Combination von Methylgrün mit Eosin. (Siehe Doppel- färbungen). Das Indulin ist im warmen Wasser und in verdünntem Alkohol löslich. Am besten eine wässerige Lösung, die dunkelblau ist. Die 380 Gicrke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 3. Eosin nach Ueber- osmium- säure. Eosin. 97) V. Thanhoffer. Ueber die Entzün- dung nebst einigen Bemerkungen über die Structur 'der Hornbaut und über die Eosin-Reaction. (Centralbl. d. med. Wiss. 1877 No. 49 p. 881). 98) Cech, C. O. Eosin als Tinctions- mittel. (Zeitschr. f. Mikrosk. I. Jabrg. Heft 3 p. 65—73). 99) Renaiit. Applications des pro- prietes electives de reosine soluble dans l'eau ä l'etude du tissu coujonctiv. (Arch. de Pbysiol. 1877, 2. Serie t. IV p. 211—243). concentrirte wässerige Lösung wird mit dem sechsfachen Volumen Wasser verdünnt. In dieser Flüssigkeit bleiben die Schnitte 5 bis 20 Minuten. Sie können in Glycerin oder Nelkenöl aufgehellt werden. Das Indulin färbt nur den ZeUinhalt und besonders gern die Intercellularsubstanz, aber niemals die Kerne der Zellen. V. T. hat sich bei seinen Untersuchungen des Eosins bedient, um Blutkörperchen und mit ihnen die Blutgefässe nachzuweisen. (Siehe WissowzKY No. 87. Eosin als Reagenz auf Hämoglobin). Haltbarer und markanter wird das Präparat, wenn es zuerst für einige Se- cunden bis Minuten in eine einprocentige Lösung von Ueberosmiumsäure und dann in Eosin kommt. (In der That ist die v. THA.NuoFFEii'sche Modificatioii der WissowzKv'schen Reaction auf Hämoglobin sehr zu empfehlen. Ich fand am günstigsten, das Präparat 3 Minuten in VaPi'ocentige Lösung der Osmiumsäure zu bringen, dann gut auszuwaschen und endlich in W. Eosin- Alaun-Alkohol (No. 85) zu legen). C. empfiehlt das Eosra ebenfalls als Tinc- tionsmittel. R. hat umfangreiche Studien in Bezug der Tinctionswirkung des Eosin angestellt. Er benutzt eine wässerige Lösung oder setzt dieser noch '3 Alkohol hinzu. Die Schnitte werden nur für '/., bis 1 ^Minute der Wirkung des Farbstoffes ausgesetzt, dann in dest. Wasser gewaschen und in neutralem Glycerin aufgehoben. Doch muss diesem etwas Chlor- natrium [auf 99 Th. Glycerin 1 Th. Na Gl] zugesetzt werden, um die Löslichkeit des Eosin in Glycerin aufzuheben. — Es färben sich be- sondei's die protoplasmatischen Theile und treten scharf hervor. Zur Untersuchung des Unterbautbindegewebes macht R. Einstichs- injectionen mit einer Lösung von 1 Eosin auf 500 Wasser. Hier bleiben Fibrillenbündel und umspinnende Fasern farblos, die elastischen Fasern dagegen färben sich kräftig, die fixen Zellen zeigen sich als schwach rosa gefärbte, granulirte Protoplasmaplatten mit intensiv roth gefärbtem Kern. Bei den Sehnenzellen färbt sich* der letztere nicht stärker als das Proto- plasma. Ebenso in den Knorpelzellen , doch sind in den Kernen derselben dunkel gefärbte Körnchen zu sehen. Die Grundsubstanz des Knorpels bleibt ungefärbt. "Ausser den Kernen j in den Zellen des Unterhautbindegewebes ' färben sich noch die Kerne der Endothelien, 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 381 Methyl- anilin- Grün. Bis- marck- braun. 100) Erlicki. Sur les moyens Je durcir et de colorer les tissus de centres nerveiix. (Progres medic. 1877 29. Sept. ; Revue des sc. med. t. XI, 1 p. 13; War- schauer med. Zeit- schrift Bd. XXIII No. 15 imd 18). 101) Weigert. Bismarckbraun als Färbemittel. (Arch. mikr. Anat. Bd. XV p. 258—60). die zwischen den RANviER'schen Schnürringen befindlichen Kerne und die der REMAK'schen Fasern besonders intensiv und dunkler als ihre Umgebung. E. hat für Untersuchungen des Central- nervensj'stems Grün-Methylaniün angewandt. Er bedient sich einer 2Vjprocentigen wässerigen Lösung und lässt die Schnitte 24 Stimden darin. Die Kerne der Neuroglia nehmen eine grüne Farbe an, während Axencylinder und Ganglienzellen ungefärbt bleiben. (Der von mir angewandte Farbstoff mit obiger Bezeichnung hatte keineswegs eine so differenzirende Wirkung). W. empfiehlt in Avarmer Weise das Bis- marckbraun, einen neuen im Handel vorkom- menden Aiiiünfarbstoti' für mikroskopische Tinctionen, und zieht ihm dem Carmin, Piki'o- carmin und Eosin weit vor. Nach Weigert's Ansicht muss ein guter Farbstoff folgende Be- dingungen ei-füllen : 1) Er muss absolut sicher färben, 2) Die Färbung muss schnell erfolgen, 3) Eine Ueberfärbung darf nicht leicht ein- treten, 4) Umgekehrt muss man, wenn es nöthig ist, beliebig lange auswaschen können, ohne dass der Farbstoff verschwindet, 5) Die Präparate müssen auch in weniger stark licht- brechenden Medien angesehen und aufbewahrt werden können, 6) Die Färbung muss haltbar sein. Diesen Bedingungen entsprechen die sonst gebräuchlichen Farbstoffe nicht, wohl aber das Bismarckbraun, ein neuer Anilinfarbstoff, den W. von der „Berliner ActiengeseUschaft für Anüinfarbenfabrication" bezogen hat. Er be- nutzt eine concentrirte wässerige Lösung oder auch eine schwach alkoholische. — Die erstere wird hergestellt, indem der Farbstoff in destillirtem Wasser gekocht, die Lösung filtrii't wird. Das Filtriren ist von Zeit zu Zeit zu wie- derholen. In Alkohol oder Chromsäure er- härtetes Material tingirt sich gleich gut. Nach der Färbung, die in wenigen Minuten erreicht ist [es schadet aber auch nicht, wenn die Schnitte lange Zeit in der Flüssigkeit liegen] werden die Präparate einige Minuten hindurch in absolutem Alkohol ausgewaschen und inl Canadabalsam oder Glycerin aufbewahrt. Im ! letzteren Fall ist es gut, sie noch vorher in destillirtem Wasser gut abzuspülen. — Die Kerne färben sich am intensivsten, viele Proto- plasmen und Bindegewebsmassen leicht gelb- lich, Amyloid wird nicht deutlich differenzirt, wohl aber Plasmazellen und manche Bacterien- formen. Mikrokokkencolonien werden am dunkelsten gefärbt. Die Tinction macht die Präpai-ate besonders geeignet, photographirt zu werden. 382 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 1,3. Saure und basische Farb- stoffe und ihre, diffe- rente Tinction der Gra- nulatio- nen der Leuko- cythen. 102) Ehrlich. a) Ueber die speci- fiscben Granulatio- nen des Blutes. (Ver- handl. d. Berl. JPhys. Gesellsch. 16. Mai 1879). b) Arch. f. Anat. u. Phys. 1879. Phys. Abth. p. 571—579. c) Methodologisclie Beiträge zur Physio- logie und Patholo- gie der verschiede- nen Formen der Leukocythen. (Zeit- schr. kliii. Med. Berl. Bd. I Heft 3). (Obgleich der hohe Werth dieses Tinc- tionsmittels nicht angefochten werden soll, kann ihm doch nicht die extraordinäre Stellung eingeräumt werden, welche W. ihm giebt. Es hat für manche Tinction seine Vorzüge, be- sitzt aber nicht die allgemeine Verwendbar- keit, die am Carmin zu rühmen ist). E. hat in einigen Anilinfarben Mittel ent- deckt, um gleich erscheinende und bisher mor- phologisch nicht getrennte Zellen in Unter- gruppen zu theilen. Jene Farben heben näm- lich den körnigen Inhalt der Zellen scharf her- vor und es zeigt sich, dass er sehr verschieden- artig und für die bestimmten Zellen typisch ist. Diese „specifischen Granulationen" werden deutlich, wenn das Blut oder das Parenchym der zu untersuchenden Organe (Milz, Knochen- mark) auf Deckgläsern in möglichst dünner Schicht ausgebreitet und dann in der Wärme getrocknet werden. Die so behandelten Deck- gläschen werden gefärbt. Auf diese Weise erhielt er fünf verschiedene typische Körnungen in den Blutkörperchen, die er als a, ß, y, S, s- Granulationen bezeichnet. Ausser durch die verschiedene Färbung sind diese Zellen auch durch andere Eigenschaften unterschieden. Die Färbung der Granula ist ein chemischer, der Doppelsalzbildung analoger Process. E. lässt die Anilinfarben iu zwei chemisch und histolo- gisch geschiedene Grupjjen zerfallen. I. Ba- sische Anilinfarben, welche durch Zu- sammentritt einer Farbbase und einer indiffe- renten Säure entstanden sind. Hierzu gehören Fuchsin und dessen Derivate, Bismarckbraun, Safranin und viele andere. — II. Saure Anilin-Farbstoffe. Verbindimgen, in denen eine Säure das färbende Princip darstellt. — Die a- Granulationen nun oder die eosinophilen [sogenannt, weil sie eme besondere Verwandt- schaft zu dem Eosin zeigen] färben sich in allen sauren Anilinfarben. E. hat deren dreissig in Anwendung gezogen. Die y-Granu- lationcn oder Mastzellenkörnung umgekehrt in den basischen Farben. E. färbte nun auch mit neutralen Stoffen, die durch den Zusam- mentritt eines sauren und eines basischen Farbstoffes entstehen. Diese sind in Wasser unlöslich, lösen sich aber im Ueberschuss des sauren Farbstoffs. Z. B. mischte er eine starke Lösung von Methylblau d. h. dem saksauren Salz einer schwefelhaltigen Farbbase mit einer concentrirten Lösung von Säure-Fuchsin d. h. dem Natronsalz der Rosanilinmonosulfosäure. Zu 5 Voll. Säurefuchsin in gesättigter Lösung werden allmählig unter Schütteln 1 Vol. Methyl- blaulösung und dann 5 Voll. Wasser gesetzt, stehen gelassen und filtrirt. 'in dieser Flüssig- keit färben sich rothe Blutkörperchen intensiv 1879 I, 3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 383 Methyl- grün, ein Reagens auf aniy- loide Sub- stanzen. Safranin als Rea- genz auf amyloide Substan- zen. Beactio- nen auf amyloide Substan- zen. 103) Cnrscliniann. Ueber das Verhalten des Methylgrün zu amyloid-degenerir- ten Geweben. (Ärch. pathol. Anat. und Phys. Bd. LXXIX p. 556). 104) Test for Amy- loid Substance. (Journ. R. Microsc. Soc. 1880 p. 500. Entnommen dem Referat im Zool. Jahresber. v. Cauus für 1880, p. 45). 105) Kyber. Weitere Untersu- chungen über die amyloide Reaction. (Arch. pathol. Anat. u. Phys. Bd. LXXXI p. 1-6). roth. Die Leukocythen zeigen dichtgedrängte violette Körnung, die neutrophile s-Kör- nung. Dieselben sind sehr klein und ent- sprechen weder einem der bekannten Eiweiss- körper, noch dem molecularen Fett. Die a- Granulationen färben sich in starkem Eosin- Glycerin; in mit Indulin gesättigtem Glycerin; in einer concentrirten wässerigen Lösung von Orange. Für die ß-Granulationen ist Eosin- Indulin-Glycerin charakteristisch. C. empfiehlt das Methylgrün als Reagenz auf Amyloidsubstanzen. Es übertreffe noch das Methylviolett und färbe die amyloid-dege- nerirten Substanzen violett, die normalen grün. Frische, in Alkohol oder Chromsäure gehärtete Organe eignen sich. Die Schnitte kommen in eine Iprocentige oder, was noch besser, in eine noch schwächere Lösung Glycerin oder Le- vulose zum Einschluss. Canadabalsam ist hier nicht zu brauchen, da der Alkohol die Farbe auszieht. Die schönsten Resultate erhielt C. bei der Tinction amyloid-degenerirter Nieren. Hier färbten sich die hyalinen Harncylüider ultramarinblau, die amyloiden Substanzen vio- lett, die normalen grün. Das Präjiarat, welches C. zu seinen Versuchen benutzte, hatte er aus der Anilinfarbenfabrik von Meister, Lucius & Brüning in Höchst a. M. bezogen. Es war als Grünpulver M bezeichnet. Für die Tinction amyloider Substanzen wird das Safranin empfohlen, das dieselben in wässeriger und alkoholischer Lösung orange- gelb färbt, die übrigen Gewebe rosa. Chrom- säure-Präi)arate nicht zu verwenden. Essigsäure hebt die Difierenzirmig der Substanzen auf, indem sie die verschiedenen Farben in ein gleichmässig Roth umwandelt. (Safranin steht als Reagenz auf Amyloid dem Jodviolett, Methylgrün und der von Heschl empfohlenen LKoxHARDi'schen Tinte (No. 80) weit nach und kann in dieser Hinsicht durch- aus nicht empfohlen werden). K. bestreitet, dass die früher genannten Anilinfarben: LEo.NHARDi'sche Tinte (No. 80), Methylgrün (No. 100), Jodviolett (No. 81) und Methylviolett (No. 83) gute Reagentien für die Amyloidsubstanz seien. Sie seien zwar schöne Tinctionsmittel im Allgemeinen, leisteten aber für den Nachweis der amyloiden Degeneration zu wenig und ständen der ViRciiow'schen Jod- Schwefelsäiure-Reaction weit nach. 1880 384 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 3. Safranin, das beste Kernfär- hemittel. 106) Loomis. | L. wendet das Anilin-Rotli (1 : 300) zur A siiui)le and speedy i Tinction an und liebt die Präparate in essig- method of staining ' saurem Kali (2 : 1 Wasser) auf. Sie erblassen in Warnung vor Täu- schungen. Bismarck- iraun zur Tinction lebender Organis- men. animal and vegetable sections. (Amer. Montldy Microsc. Journ. vol I p. 143). 107) Pfitzner. Die Epidermis der Amphibien. (Morph. Jahrb. Bd. VI p. 479 flf). einiger Zeit. 108) Wolff. Zur Bacterienlehre bei accidentellcn Wundkraukheiten. (Arch. pathol. Anat. u. Phys. Bd. LXXXI p. 139). 109) Brandt, K. Färbung lebender einzelliger Organis- men. (Biol. Cen- tralbl., 1881, No. 7 p. 202—5). Cyanine und Bleu de Quino- leine zur Tinction lebender Organis- men. 110) Certes. Sur un procede de coloration des infu- ! soires et des ele- ments anatomiques pendant lavie. (Zool. Anz., 1881, No. 81 p. 208—212. Comp- tes rend. t. XCII No. 8 p. 424—26). Derselbe. Dosage de la Solu- tion de Cyanine pour la coloration des in- fusoires. (Zool. Anz.. 1881. No. 84 p. 287 bis 288). Pf. empfiehlt als das entschieden beste Kernfärbemittel das Safranin. Am schönsten zu verwenden bei Chromsäurepräparaten, et- was weniger bei Pikrinsäurepräparaten. Er benutzt folgende Lösung: Safranin 1 Th., Al- coh. absol. lOOTh., Aq. dest. 200 Th. Schnitte kommen, nachdem sie gewaschen, für einige ISIinuten in diese Lösung und dann in abso- luten Alkohol. In Dammarharz sind sie sehr haltbar, dagegen entfärben sie sich ganz in Glycerin und Wasser. AV. warnt vor möglichen Täuschungen bei dem Gebrauch der Anilinfarben als Reagentien auf Mikroorganismen, da durch alkalisch rea- girende Gewebsflüssigkeiten, wie Blut, feine Niederschläge entstehen können. Nachträgliche Behandlung mit Spuren von Essig- oder Salz- säure entscheidet die Bedeutung der Bilder, indem die Säuren lösen. B. benutzt neben dem Hämatoxylin das 1 1881 Bismarckbraun zur Färbung lebender niederer Organismen, wie der Amöben, Heliozoen, Fla- gellaten etc. Es muss aber in der Flüssigkeit gelöst werden, in welcher der betreffende Or- ganismus lebt; und zwar 1 Th. Farbstoff zu 3—5000 Th. Flüssigkeit. Das Bismarckbraun färbt dann nur die Fettkörner und eine den Protozoen eigenthümliche celluloseartige Schleimsubstanz und lässt Kerne und Proto- plasma, welche Elemente es im abgestorbenen Organismus so lebhaft färbt, unverändert. etwaige Niederschläge auf- C. hat ebenso wie Brandt (No. 109) lebende einzellige Organismen zu färben gesucht. Er benutzte Cyanine oder Bleu de Quinoleine in ganz verdünnter wässeriger Lösung, 1 : 100000 bis 1 : 500000. Zur Lösung dient bei Färbung von Infusorien gewöhnliches, nicht destillirtes Wasser, für die Färbung von weissem Blut [und von Lymphkörperchen] Serum. Die Lö- sungen sind im Dunkeln aufzuheben. Auch mit diesem Farbstoff tingiren sich nur die in den Organismen und Zellen enthaltenen Fettkörn- chen, während die Kerne, das Protoplasma, die Wimpern, Cuticula und Vacuolen ganz ungefärbt bleiben. 1880 1881 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 385 Färben mit ver- schiede- nen Ani- linfarben nach der Hermann- schen Me- thode. 111) Flemming. Ueber das Hekmann- sche Kerufärbungs- verfahren (Arch. mikrosk. Anat. Bd. XIX p. 317—330). Derselbe. Notiz zur Gescliichte der Anilinfärbun- gen. (1. c. p. 742 — 743). Safranin. 112) Pfltzner. Ueber den feineren Bau der bei der Zell- theilung auftreten- den fadenförmigen Differenzirungen des Zellkerns. (Morpbol. Jahrbuch Bd. VII p. 289). F. hat sich der HEUMANN'schen Methode, die Kerne zu tingiren, vielfach bedient und sie weiter ausgebildet. Während Hermann (No. 86) niu' Fuchsintinctionen vornahm, hat F. das Verfahren auf die verschiedensten Anilinfarb- stoffe angewandt. Er fand , dass sich eine grosse Reihe letzterer für dasselbe nicht eignen, während eine andere Reihe vorzügliche Prä- parate liefert. Zu der ersteren gehören be- sonders Eosin, Ponceau, Orange. Diese geben keine distincten Kernfilrbungen. Ebenfalls nicht sehr zu empfehlen als kernfärbende Stoffe sind Mauvein, Rouge fluorescent imd Fuchsin. Handelt es sich um Chromsäurepräparate, so ist auch Bismarckbraun kein vorzügliches Kern- färbemittel. Sehr brauchbar dagegen und ganz besonders für Ckromsäurepräparate, ohne Nach- härtimg in Alkohol, sind: Magdalaroth, Dahlia und vor allen Dingen Safranin. Auch Solidgrün giebt schöne, wenn auch etwas blassere Kern- färbimgen. Neben den Chromsäiu-epräparaten benutzte F. auch in Osmiumsäure und in der FLEscu'schen Osmiumsäure erhärtete Präparate, zieht die ersteren aber vor. Die Schnitte werden in Wasser sorgfältig gewaschen und kommen für 12 — 24 Stunden in eine Lösung des Farbstoffes (also z. B. des Safranins) in absolutem Alkohol, die halb mit Aq dest. ver- dünnt ist. Herausgenommen werden sie in Wasser abgespült und in ein weisses Schälchen mit absolutem Alkohol gebracht. Hier bleiben sie nun ungefähr eine halbe Minute, bis sie ein durchscheinendes Aussehen erhalten haben, dann wird rasch in Nelkenöl, das auch noch etwas Farbe auszieht, aufgehellt und in Dam- marlack eingeschlossen. Hierin sind sie haltbar. P. wiederholt einige schon im vorigen Bande des Jahrbuchs (cfr. No. 107) gemachten Angaben hinsichtlich der Safraninfärbung und betont in Beantwortung vieler eingelaufener Klagen über missliuigene Safranintinctionen, dass durchaus nicht jeder käufliche, Safranin genannte Farbstoff für eine gute Kernfärbmig tauglich sei. Er habe einen sehr guten Farb- stoff von der Chemicalienhandlung Fiuedhich Schäfer in Darmstadt erhalten. (Jetzt ist ein gut färbendes Safranin, ebenso wie die meisten anderen in der Tinctions- technik verwandten Anilinfarbstoffe, an ver- schiedenen Stellen zu haben. Sehr zu em- pfehlen z. B. ist Dr. Georg Grübler Chemi- sches Laboratorium, Leipzig, Dufourstrasse 17). 1881 386 Gierke: Färberei zu raikroskopisclieii Zwecken. I, 3. Methylen- blau. Jodgrün und Methylen- grün. Jodgrün und Methylen- grün. 113) Ehrlich. lieber das Methylen- blau und seine kli- nisch -bacterioskopi- sche Verwerthung. (Zeitschr. Min. Med. Bd. II Heft 3, 1881, p. 710). 114) Griesbach. Ein neues Tinctions- mittel für mensch- liche und thierische Gewebe. (Zool. Anz., 1882, No. 119 p. 406). 115) Flesch. Kleine Mittheilun- gen zur histologi- schenTechnik. (Zool. Anz., 1882, No. 123 p. 554). Zur Bacterienuntersuchimg eignen nach E. sich nur basische Farbkörper. Die gewöhn- lich gebrauchten Farben aber, wie Bismarck- braun, Fuchsin, Methyl- und Gentianaviolett färben ihm zu intensiv; einige bilden auch leicht körnige Niederschläge, welche natürlich arg täuschen können. Von diesen Uebelständen frei und viel sicherer wirkend nennt E. das Methylenblau. Er empfiehlt eine gesättigte wässerige Lösung und lässt in dieser die Prä- parate [die nach bekannter Methode getrocknet sind] beliebig lange , '/a ~ 24 Stunden. Sie werden nach der Herausnahme abgespült, ge- trocknet und in Canadabalsam eingeschlossen. E. bezog sein Methylenblau bei Hestekberg, Berlin NW., Louisenstrasse 39. G. hat nach vielen Versuchen in dem Jodgrün eine Anilinfarbe gefunden, welche fast allen Ansprüchen an einen guten Farb- stoff genügt und in mehrfacher Hinsicht ent- schieden mehr leistet als alle übrigen in der mikroskopischen Technik bekannteren Anilin- farben. Er glaubt einen bisher in der mikro- skopischen Tinction ganz unbekannten Farb- stoff als neu zu empfehlen. G. wendet das Jodgrün in wässeriger Lösung Ol auf 35'0 dest. AVasser am liebsten an, doch giebt eine alkoholische Lösung auch gute Resultate. Die Tinction ist eine momentane. Die Präparate lassen sich nach gewöhnlicher Methode in Balsam einschliessen. Da das Jodgrün nicht mehr im Grossen fabricirt wird, da sein Preis zu hoch ist, mid es daher nicht überall zu haben ist, kann man auch Methylgrün anwen- den. Dasselbe ist zwar durchaus nicht im Stande, das Jodgrün zu ersetzen, liefert aber doch auch leidliche Präparate. Man wendet es wie das erstere an. F. weist nach, dass das Jodgrün und ebenso das Methylgrüu von Gkiesbach nicht als neu in die histologische Technik eingeführt sind, sondern schon anderweitig und zwar besonders in England für Doppelfärbungen empfohlen sind. (Siehe dort. Ebenso Cueschmank No. 103). (Ich selbst habe 1881 Jodgrün schon häufig angewandt). F. empfiehlt die grünen Anilinfarben zur Combination mit rothen. I, 3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 387 Säure- fuchsin für die Tinction des Cen- tralncr- vensy- stems. 116) AVeigert. üeber eine neue Untersucliungsme- tliode des Central- nervensystems. (Centralbl. f. d. med. Wiss., 1882, No. 42 p. 753 u. No. 43 p. 772). In dem Säurefucbsin bat W. ein Tinctions- mittel gefunden, das im Centrahiervensystem Färbungen hervorruft, die mit den bisherigen Mitteln nicht geleistet wurden. Er fertigt eine conc. Lösung des Säurefuchsin an (Fuchsin cfr. No. 130 Badische Anilin-Sodafabrik. In kleinen Quantitäten bei Dr. H. Gküiü.ku, Leipzig Dufourstrasse 17 zu beziehen). — Ein# zweite Flüssigkeit bereitet W. in folgender Weise: In verschlossener Flasche werden auf 1 g Kali caustic. 100 cc absoluter Alkohol gegossen und 24 Stunden stehen gelassen. Hierauf [es löst sich nun nichts mehr vom Kali caust. auf] wird filtrirt und diese „Stamm flüssigkeit" aufbewahrt. Von ihr nimmt er unmittelbar vor dem Gebrauch 10 cc und verdünnt sie mit 100 cc Alkohol. Zum Entwässern wird mit Kochsalz gesättigter Alkohol gebraucht. Werden Schnitte vom (Jentralnervensystem einfach in Säurefuchsin gefärbt, so entstehen keine schöne Bilder; die Differenzirung ist eine schwache. Wird aber nach der Färbung im alkalischen Alkohol ausgewaschen und der Farbstoff stark ausgezogen , so tritt nun eine schöne Diiferenzirung ein, indem jener hauptsächlich am Nervenmark haften bleibt. W. vorfährt zu dem Zweck in folgender Weise: Schnitte von Centralorganen, welche in chromsauren Salzen erhärtet werden, kommen für etwa 1 Stunde in die obige Lösung des Farbstoffes; dann in eine Schale mit Wasser zum Abwaschen; aus diesem in den alkalischen verdünnten Alkohol. In ihm bleiben sie, bis man erkennt, dass die graue Substanz beginnt, sich zu differenziren. Dies tritt sehr bald ein und muss man sehr scharf aufpassen, um den rechten Augenblick nicht zu verfehlen. Aus diesem Alkohol kommt der Schnitt in eine neue Schale mit destillirtem Wasser und aus ihr, da das Wasser sich bald röthet, noch in eine andere mit Wasser. Der Schnitt darf keine Farbe mehr verlieren, und soU das Präpai'at gelingen, so muss jetzt die graue Substanz heller erscheinen als die weisse, der Schnitt aber dabei noch roth sein. Ist er zu sehr abgeblasst, so muss er noch -einmal in die Farbflüssigkeit zurück, ist die graue Substanz nicht hell differenzirt, so muss er noch einmal in den alkalischen Alkohol. Sind die Schnitte gut gefärbt, so werden sie in dem Salzalkohol entwässert imd nach gewöhnlicher Methode in Balsam eingeschlossen. — Nach W. übertreffen die so erhaltenen Präparate alle anderen Färbungen der Centralorgane, da sie feinere Details klar machen. Eigentlich gefärbt wird übrigens nur das Nervenmark und sogar nur ein Theil desselben, den W. die erythrophile (rothliebende) Substanz nennt. Da aber die Marksubstanz in zartesten Lagen noch die feinsten Nervenfibrillen überzieht, 388 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken, 1,3. Schnell- hürtung für Säure- fucJisin- fürbung. Violett B. 117) Weigert. Ueber Schnellbär- tung der nervösen Centralorgane zum Zwecke der Säure- fuchsinfärbung. (Centralbl. f. d. med. Wiss., 1882, No. 4ß p. 819). 118) Mayer, S. Beitrag zur histolo- gischen Technik. (Sitzber. d. Wien. Acad. Bd. LXXXV Abth. III Februar- heft). und also eine viel weitere Verbreitung hat, als man gewöhnlich annimmt, so werden die wich- tigen Fibrillennetze ungemein deutlich. (So werthvoll diese neue Methode auch für die Untersuchung der Centralorgane ist, so kann sie doch nicht so hoch über die ältei'cn gestellt werden, wie W. will, oder wie es gar nach den Lobpreisungen mancher Anderer sein soll, die, wie ich mehrfach hörte, die Ent- deckung dieser Methode als die Morgenröthe der Erforschung der Centralorgane ansehen. Für die Verfolgung der feinen Nervenübrillen ist die Methode sehr schön und wird in Hin- sicht auf normale und pathologische Verhält- nisse die Untersuchung sehr unterstützen. Da sie aber die Nervenzellen mit ihren Ausläufern und die wichtige Glia gar nicht tingirt, kann sie nur neben anderen Tinctionsmethoden gebraucht werden, z. B. neben der viel ge- schmähten und doch gerade hier so unent- behrlichen und unübertrefflichen Carminfärbung. Ein grosser Fehler der W.'schen Methode ist noch ihre ausserordentliche und zeitraubende Umständlichkeit. Ehe der vielgcplagte Schnitt zur dauernden Ruhe in den Canadabalsam ge- langt, wird er im günstigsten FaU siebenmal von Schale zu Schale, von Flüssigkeit zu Flüssigkeit transportirt. Dabei kann man zu gleicher Zeit nur je einen Schnitt behandeln. Ganze Reihen von Präparaten, wie es doch so nothwendig ist, kann man da kaum anfertigen). W. empfiehlt, um das Material möglichst schnell für die Färbung vorzubereiten, das zu behandelnde Centralorgan in MüLLEn'scher Flüssigkeit, aber im Brütofen bei 30 — 40" C. zu erhärten. In 8 — 10 Tagen ist es schnittfähig. Oder man soll sich der EKi.icKi'schen Flüssig- keit (2'/2 Procent Kali bichrom^ '/z Procent Cuprum sulphuric). bedienen das Material dann schon Anwendung der Wärme in 8- fähig. M. Im Brütofen wird in 4 Tagen, ohne -10 Tagen schnitt- führt wieder einen neuen Anilinfarb- stoff in die histologische Technik ein: Vio- lettB, von der Anilinfabrik von Bind.schedler & Busch in Basel in den Handel gebracht. Es hat den Vorzug ganz frische oder mit 1 Procent NaCl abgespülte Präparate sehr discret zu färben. Der Farbstoff wird selbst in V2Procen- tiger NaCl-Lösung (1 : 30) gelöst. Nach secundenlanger Einwirkung (höchstens bis zu 1 Minute) ist die Färbung gelungen und die Präparate werden in obiger Kochsalzlösung untersucht. Die feinen Gefässe werden sehr deutlich, dann das Fettgewebe, die Substanz und die Kerne der fixen Bindegewebszellen. Die elastischen Fasern färben sich ultramarin- blau in der violetten Umgebung. Die Züge 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 389 Meihyl- u. Gentia- na-Violett f. d. Tinc- tion d. Blut- plättchen. Eosin- Glyeerin m. Alaun. Nigrosin. Jodgrün. Methyl- grün. 119) Bizzozero. lieber einen neuen Formbestandtheil des Blutes und dessen Rolle bei der Thrombose und Blut- gerinnung. (Arch. pathol. Anat. u. Phys.). 120) Eloui. Recliercbes histolo- giques sur le tissu connectiv de la cor- nee, Paris 1881. 121) Errera. La nigrosine comme reactif colorant pour les noyaux. (Proces verb. See. Beige de microsc, 1881, p. 134). 122) Le Vert de Jade. Nouveau reactif co- lorant. (Journ. de Microgr. t. VI No. 9 p. 470. 123) Strasburger. Ueber den Thei- lungsvorgang der Zellkerne und das Verhältniss der Kerntheilung zur Zelltbeilung. (Arch. mikrosk. Anat. Bd. XXI p. 476), Zell- bildung und Zell- tbeilung 3. Aufl. p. 141. glatter Muskelfasern und die marklosen Nerven- fasern werden sehr deutlich hervorgehoben. Leider sind die Präparate nicht dauerhaft. Zur Noth gelingt es, sie in essigsaurem Kali oder nach vorherigem Eintrocknen in Dammar- firniss zu conserviren. Sie sind aber sehr un- vollkommen. (Es scheint schwer zu sein, ein gutes Präparat dieses Violett zu kaufen. Zwei aus verschiedener Quelle bezogene standen anderen violetten Anilinfarben sehr nach). B. färbt die sogenannten Blutplättchen mit Methylviolett. 1 Th. conc. wässerige Lösung des Farbstoffes auf 5000 Th. 0-75procentiger Kochsalzlösung. Er bedient sich auch des Gen- tianaviolett 1 : 3000. E. löst das Eosin in reinem Glycerin. Um den Farbstoff in den Präparaten zu öxiren, fügt er dem Glycerin Alaun bis zur Sättigung hinzu. (Alaun kann überhaupt mit Vortheil ver- wendet werden, um verschiedene Anilinfarben, welche an und für sich nicht haltbar sind, zu fixiren). E. empfiehlt das in Wasser lösliche Nigrosin [er bezog das seinige von Kahi>baum in Berlin] '. als schönes Kernfärbemittel. Die Präparate ' sind haltbar in Glycerin und Harzen. L. V. empfiehlt angelegentlich das Jod- grün (cfr. 110 etc.). St. bedient sich zum Fixiren der Kern- theilungsfiguren einer Iprocentigen Essigsäure, der ein wenig Methylgrün zugesetzt ist. Die Präparate werden so zu gleicher Zeit gefärbt, sie lassen sich aber nicht aufbewahren. Auch löste er den Farbstoff in verdünntem Glycerin, um Alkoholpräparate und solche, die in 50- procentiger Salpetersäure fixirt waren, zu tin- giren. Die grosse Schnelligkeit der Färbung und das scharfe Hervortreten der Spindelfasern bildet Vortheile, denen aber die geringe Halt- barkeit der Präparate gegenüber steht. 1882 390 Gierke: Färberei zu mikroskopisclieii Zwecken. I, 3. Anilin- Magdala- Koth. Cyanin etc. f. Färbung leb ender Organis- men. 124) Nörner. Beitrag ziir Behand- lung mikroskopi- scher Präparate. (Arch. mikrosk.Anat. Bd. XXI p. 351). N. empfiehlt das von R. Siebert, Wkin- ziEKi.'s Nachfolger, Wien VIII, Alsenstrasse 19. 1 gekaufte Magdala-Roth-Anilin als ein sehr brauchbares Tinctionsniittel. Es färbt sehr schnell, intensiv und differenzirt sehr gut. Es ist auf Alkohol- und Chromsäurepräparate an- wendbar. Ausser für thierische Gewebe ist es besonders für pflanzliche Präparate zu em- pfehlen. Sehr schön färben sich die niederen Pilze. Die Präparate lassen sich aufbewahren, doch fehlt es N. noch an Erfahrung hinsicht- lich der Haltbarkeit. C. giebt noch einmal (cfr. No. 110) eine Methode an, lebende einzellige Organismen zu färben. Er bringt einen Tropfen der alkoho- lischen Lösung des Farbstoffes (Cyanin, Bls- marckbraun etc.) auf den Objectträger und breitet ihn mit dem Glasstab aus. Dann lässt er den Alkohol verdampfen und bringt nun den zu untersuchenden Wassertropfen mit den Infusorien herauf. Die Färbung erfolgt schnell und ohne Schwierigkeit. 125) Certes. On the processes of coloring living micro- scopic organisms. (Amer. microsc. Journ.volIIIp.224). Sur les procedes de coloration des orga- nismes microsco- piques vivants. Note complementaire. (Bull. Soc. Zool. France, 1881, p. 21, 226). Ans der Mikrokokken-Bacillen-Literatur seien mir angeführt: Tuberkel- bacillen. Ersatz der Kalilauge KocKs durch Anilin. 126) Weigert. ■ Zur Technik der mikroskopischen Bacterienuntcrsu- chung. (AiT.h. path. Anat. u. Phys. Bd. LXXXIV p. 275). 127) Koch. Die Aetiologie der Tuberculose. (Berl. khnische Wochen- schrift, 1882, No. 15). Derselbe. Mittheilungen des Kaiserl. Gesund- heitamtes. 128) Friedländer. Mikroskopische Technik etc. Kassel u. Berl. 1882. Die beste zusammenfassende Darstellung der Verwendung der Anilinfarben bei patho- logischen Untersuchungen und ganz besonders der Untersuchungen von Geweben und Flüssig- keiten auf Mikroorganismen ist in Fuied- LÄNDEii's kleinem Buch gegeben. Für die Darstellung der Tuberkelbacillen gab Koch zuerst folgende Anleitung. Der Schnitt oder das Trockenpräparat kommt für 24 Stunden in eine Mischung von dest. Wasser 200-0, conc. alkoholische Methylenblaulösung lO'O. lOprocentige Kalilauge 02. Aus dieser Flüssigkeit kommt das dunkelblau gefärbte Präparat für 15 Minuten in eine concentrirte wässerige Lösung von Vesnvin. In Wasser ab- gespült, in Alkohol entwässert und in Nelkenöl aufgehellt. Die Kerne und die meisten Arten der Mikrokokken sind dann braun, die Tuberkel- bacillen intensiv blau gefärbt. 129) Ehrlich. i Die von E. eingeführte und jetzt allge- Börner's dtsch. med. i mein gebräuchliche Modification der Kocn'schen Wochenschr. 1882 Methode beruht hauptsächlich auf der Er- No. 19. Setzung der Kalilauge durch Anilin, eme schwach gelblich gefärbte", ölartige Flüssigkeit, dessen gesättigte wässerige Lösung viel mehr 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 391 Tuherkel- bacillen. 130) Baiimgarten. Ueber ein bequemes Verfahren, Tuber- kelbacillen in Sputis nachzuweisen. (Cen- tralbl. f. d. med. Wiss. 1882 No. 25). Farbstoff auflöst als die verdünnte Kalilösung. Ferner benutzt er zum Entfärben starke Mi- neralsäuren. Seine Idee dabei ist, dass die Tuberkelbacillen von einer Hülle umgeben sind, welche nur für alkalische, nicht für saure oder neutrale Flüssigkeiten durchgängig ist. Hat man daher mit alkalischer Färbeflüssigkeit gefärbt, so wii'd diuxh Säuren entfärbt. Da diese die angewandten Farbstoffe lösen, nehmen sie den übrigen Bestandtheilen des Präparats dieselben fort, entfärben sie, niu" in das Innere der Tuberkelbacillen können sie nicht ein- dringen ; dieselben bleiben also gefärbt. — E's Recept ist dieses : Durch Schütteln von Anilin in Wasser wird eine etwa 3procentige Anilin- lösung hergestellt, dieselbe wird filtrirt. In diese wird nun eine conc. alkoholische Lösung eines basischen Anilinfarbstoffes (am besten Gentianaviolett oder Fuchsin) gegossen, bis ein Niederschlag entsteht. Jetzt wird filtrirt und die filtrirte Flüssigkeit zum Färben be- nutzt. In ihr bleiben die Präparate im Kalten 24 Stunden hindurch, im Wärmeschrank bei 50" nur etwa 1 Stunde. Die gefärbten Schnitte kommen in ein mit 30procentiger Salzsäure gefülltes Schälchen, bis sie entfärbt erscheinen, was sehr schnell in 1 — 3 Minuten geschieht, werden dann in absolutem Alkohol entwässert und in Nelkenöl aufgehellt. Nachträglich kann man das Gewebe noch mit anderen Farben färben. B. modificirt die von Koch und Ehrlich (No. 127 und 129) gegebenen Vorschriften. Er fertigt nach gewöhnlicher Methode Trocken- präparate von den Sputis und benetzt dieselben mit sehr verdünnter Kalilauge (1 — 2 Tropfen der 33procentigen Kalilauge auf ein kleines Uhrschälchen dest. Wassers). Die Tuberkel- bacillen sind dann bei 400 - öOOfacher Ver- grösserimg gut zu erkennen. Um aber Ver- wechselungen zu vermeiden, wird das Deck- gläschen wieder getrocknet, dann 2 — 3mal durch eine Gasflamme gezogen und nun ein Tropfen einer diliürten, aber nicht zu hellen wässerigen Lösung des Anilinviolett (oder an- derer kernfärbender Anilinfarbstoffe) auf das Präparat gebracht. Jetzt erscheinen alle Fäul- nissbacterien intensiv blau, die Tuberkelbacillen aber sind farblos geblieben. Die zahlreichen hierhergehörigen Arbeiten des Jahres 1883 konnten noch nicht zusammengestellt werden. Ans den Handbüchern der mikroskopischen Technik führe ich noch an: Zßitschr. f. wiss. Mikroskopie. I, 3. 26 392 Grierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 1,3. In Eng- land ge- bräuch- liche Änilin- färbung. In Wasser lösliches Anilin- blau. 131) Beale. How to work with tlie microscope 5. Aufl. 1880 p. 127. 132) Frey. Das Mikroskop und die mikroskopische Technik 7. Aufl. Leipz..l881 p. 101. B. giebt an , dass in England die als Solferino und Magenta (beides ältere Bezeich- nungen für unser Fuchsin) bekannten Anilin- farben viel für mikroskopische Zwecke ge- braucht werden. Er kocht die Lösung des Farbstoffs in Wasser, dem etwas Alkohol zu- gesetzt ist. 10 — 15 Tropfen Alkohol auf eine Unze Wasser, 1 Körnchen Farbstoif. Magenta sei 1868 von Dr. Roberts empfohlen worden: „On peculiar appearances exhibited by blood corpuscles under the inüuence of Solutions of magenta and tannin. (Proceed. R. Soc. vol. XIV No. 53 p. 481 April 1863). F. hat unter den bekannten Vorschriften noch diese eigene für Anilinblau : Das in Wasser unlösliche, in Alkohol lösliche Anilinblau wird durch Behandlung mit Schwefelsäure löslich in Wasser und kann einfach in wässeriger Lösung angewandt werden oder in folgender Lösung: Lösliches Anilinblau 2 cg., dest. Wasser 25 cc, Alkohol 20—25 Tropfen. Diese Flüssigkeit ist besonders für Schnellfärbung des in Alkohol erhärteten Materials zu empfehlen. VIII. Differenzirung der Gewebselemente durch Reduction von Silbersalzen, besonders des salpetersauren Silberoxyds. Aus der ungemeiu grossen Zahl von Angaben hinsichtlich dieser Methode sind nur diejenigen aufgeführt, welche technisch wichtig oder in Bezug auf die geschichtliclie Entwicklung derselben von Interesse sind. F. hat zuerst gesehen, dass nach Aetzung mit Höllenstein Niederschläge zwischen den Zellen der Cornea entstehen. (Nach V. Recklinghausen [cfr. No. 138]. Ich konnte mir diese Dissertation nicht ver- schaffen). ErsteVer- j 133) Flinzer. suche. De argenti nitrici usu et effectu prae- sertim in oculorum morbis sanandis Diss. 1854 bei Coc- CIU.S gearbeitet. 134) His. j H. zeigt, dass bei Behandlung der Cornea Beiträge zur nor- ! mit Höllenstein Niederschläge körniger Ai't malen und patholo- j bald in den Kanälchen, bald in der Grund- gischen Histologie Substanz entstehen. Er bezeichnet die ersteren der Cornea. Basel i als intercellulär, die letzteren als extracellulär. 1856. Er äzt die Cornea mit dem Stift. 1854 1856 I, 3. üierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 393 Erste An- wendung der Ver- silberung als Me- thode der mikrosko- pischen Technik. Fortge- setzte Ver- suche. Deutung des Processes. 135) V. Reckling- liausen. Eine Methode mi- kroskopische hohle und solide Gebilde von einander zu scheiden. (Archiv pathol. Anat. u. Phys. Bd. XIX p. 451). 136) V. Reckling- haiisen. Die Lymphgefässe und ihre Beziehung zum Bindegewebe. Berlin 1862 p. 5. 137) Hls. Ueber die Einwir- kung des salpeter- sauren Silberoxyds auf die Hornhaut. (Schweizer Zeitschr. f. Heilk. Bd. II Heft I p. 1). V. R. bringt frische oder getrocknete thierische Theile in schwache Höllenstein- lösungen, dann in ebenfalls sehr verdünnte Kochsalzlösung, um sie hiernach der Wirkung des Lichts auszusetzen. Es bildet sich so ein feiner dichter, schwarzer Silberniederschlag in denjenigen Theilen, welche viel Wasser ent- halten, während solidere Substanzen bei schwa- cher Einwirkung des Höllensteins ganz unver- ändert bleiben und bei stärkerer nur zer- streute Körner oder eine diffuse Färbung zeigen. (Die beste Methode der Versilberung ist, cUe Gewebstheilchen oder Schnitte in einer 1/4 — VaPi'ocentigen Lösung des Sübersalzes für 20 — 40 Secunden mit der Pincette hin und her zu bewegen, wobei sehr darauf zu achten ist, dass die dümien Schnitte und Häutchen sich nicht zusammenlegen. Dann kommen sie sofort in eine Kochsalzlösung von 0,75 "/o und werden auch in ihr tüchtig bewegt. Hierauf werden sie dem Licht ausgesetzt). V. R. beschreibt die Resultate fortgesetzter Versuche mit salpetersaurem Silberoxyd. Die Grenzlinien der EpitheUen färben sich schwarz. In den bindegewebigen Substanzen scheidet der Höllenstein sich in den feinen Kanälchen, welche die Anfänge des Lymphgefässsystems sind, aus, mid zwar als ein feiner, körniger, schwarzer Niederschlag. In der Cornea kann sich auch die Grundsubstanz färben, aber in gleichmässiger Weise gelb bis dunkelbraun. V. R. empfiehlt sehr schwache Lösungen 1 : 400—500. H., welcher früher angegeben hatte, dass schwache Lösungen die intracellulären, starke die extracellulären Ausscheidungen zur Folge hätten, ist hiervon zurückgekommen und glaubt jetzt, dass die Zeit, welche nach der Aetzung verstrichen ist, auf die Lage des Niederschlages Einfluss hat. Primär liege er stets in der Intercellularsubstanz der Cornea, löse sich aber dann wieder in den das Gewebe durchtränken- den Säften. So kann dann das wieder gelöste Salz in die Zellen eintreten, in denen es aufs Neue unter dem Einfluss des Lichts oder be- sonderer in denselben enthaltener Stoffe nieder- geschlagen wird. Die Methode ist noch immer Aetzung mit Höllenstein in Substanz. 1860 1862 1862 26* 394 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 3. Priori- täts- Streit. Andere Deutung . Bestäti- gung. Die Zeich- nungen für künst- liche Trug- bilder er- klärt. 138) V. Reckling-.^ hausen. Zur Geschichte der Versilberungs- methode. (Arch. pa- thol. Anat. u. Phys. Bd. XXVII p. 419). 139) His. Ueber das Epithel derLymphgefässwur- zeln und über die V. Recklinghausen- schen Saftkanälchen . (Zeitschr. wiss. Zool. Bd. XIII p. 455). . 140) Adler. Vorläufige Mitthei- lung über eine mit Silberirabibition ge- machte Beobachtung (Zeitschr. f. rat. Med. 3. Reihe Bd. XXI p. 160). 141) Broueff und Eberth. Zur Kcnntniss der Epithelien (Würzb. naturwiss. Zeitschr. Bd. V p. 34). 142) Harpeck. Ueber die Bedeutung der nach Silberim- prägnation auftre- tenden weissen lücken- und spalt- ähnlichen Figuren in der Cornea. (Arch. f. Anat. 1864 Heft 2 p. 222) und 143) Hartmann. Ueber die durch den Gebrauch der Höllen- steinlösung künstlich dargestellten Lymphgefässan- hänge , Saftkanäl- chen und epithel- ähnlichen Bildungen (1. c. p. 235). Die beiden Autoren nehmen die Priorität der neuen Versilberungsmethode jeder für sich in Anspruch, v. R. nimmt mit Entschieden- heit das Verdienst, die Silberbehandlung als „anatomische Untersuch u n gsme- thode" gefunden zu haben, für sich in An- spruch. Zwar habe H. schon 1856 (No. 134) gezeigt, dass das Silber sich in der Cornea intra- und extra - cellulär ausscheide. Das aber habe auch schon Flinzek und Coccius (No. 133) 1854 behauptet. Nirgends aber wenden sie es zu weiteren Zwecken an, auch nicht mit der Absicht, die Hornhautköi'perchen sichtbar zu machen. A. hält die nach Behandlung mit Höllen- stein hervortretenden netzförmigen Figuren des Epithels für Fasernetze, die den elasti- schen verwandt sind. B. u. E. bestätigen die Resultate und die Deutung der v. RECKLiNGNAusEN'schen Silber- behandlung des Epithels. In der Kittsubstanz zwischen den Zellen wird das Silbei'salz nieder- geschlagen. Beide Autoren erklären die nach Silber- imprägnation auftretenden Zeichnungen in der Cornea, in dem Bindegewebe und in den epithelartigen Geweben für Trugbilder, für künstliche Zeichnungen, die nicht vorgebilde- ten Elementen entsprechen. Der erstere glaubt, dass in der Cornea künstliche Spalten bei der Behandlung sich bilden, die sich mit dem Silberniederschlag füllen. Der zweite hält die netzförmigen Linien zwischen den Endothel- zellen für eigenthümlich geformte Nieder- schläge, die aus der Verbindung des Silbers mit Bestandtheilen der organischen Gewebe, Chloralkalien und Albuminaten entstehen. I, 3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 395 Gegner. Ver- theidiger. Bedenken. 144) His. lieber ein perivascu- läres Kanalsystem in den nervösen Cen- tralorganen und über dessen Beziehungen zu dem Lymph- system. (Zeitschr. wiss. Zool. Bd. XV p. 127). 145) Auerbach. Tageblatt der 40. Versamml. deutsch. Naturf. u. Aerzte No. 6; Untersuchungen über Blut u. Lymph- gefässe. (Arch. f. path. Anat. u. Phys. Bd. XXIII p. 340). 146) Henle. Bericht über die Fortschritte der Ana- tomie im Jahre 18G6. (Zeitschr. f. rat. Med. 3. Reihe Bd. XXX Heft I p. 6). 147) Hüter. Zur Pathologie der Gelenkflächen und Gelenkkapseln mit einem kritischen Vorwort über die Versilberungs- methode. (Arch. path. Anat. u. Phys. Bd. XXXVI p. 25). 148) Schweigger- Seidel. Die Behandlung der thierischen Gewebe mit Argentum nitric. (Berichte der sächsi- schen Gesellschaft d. Wissensch. 1866 p. 329). 149) Federn. Untersuchungen über die Bedeutung der Silberzeich- nungen an den Ca- pillaren der Blutge- fässe. (Wiener Sitz- ber. d. Acad. Bd. LIII). H. hält an seinen früheren Angaben fest. A. glaubt nicht an v. Recklinghausen's Kittsubstanz, sondern meint, dass die schwarzen Linien dadurch entstehen, dass das Silbersalz sich mit eiweissartigen und kochsalzhaltigen Substanzen verbindet und in zufälligen Furchen der Epithelien ablagert. H. ist der Ansicht Auekbach's. H. und S.-S. bestätigen die Angaben V. Recklinghausen's und stimmen im Grossen und Ganzen auch hinsichtlich der Deutung der Silberniederschläge mit ihm überein. F. dagegen hat wieder seine grossen Be- denken in Bezug auf die Resultate der Silber- methode. 1865 1866 396 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 3. Jodsilber und Höllen- stein. Modifi- cirte Methode. Fixiren mit unter- schweflig- saurem Natron. Die schwarzen Linien sind die Bänder der Zellen. Die Silber- zeichnun- gen Nie- derschläge einer ei- weisshal- tigen Flüssig- keit. 150) Müller. Histologische Unter- suchungen über die Cornea. (Arch. pa- thol. Anat. u. Phys. Bd. XXXXI p. 110). 151) Ranvier. Journal de l'Anat. 1868 no. 2 p. 216. 152) Legros. Note sur l'epithelium des vaisseaux san- guins. (Journ. de l'Anatomie 1868 no. 3 p. 275). 153) Robinski. Recherches micro- scopiques sur l'epi- thele et sur les vais- seaux lymphatiques capUlaires. (Arch. de Physiol. 1869 p. 451). 154) Schwalbe. Untersuchungen über die Lymph- bahnen des Auges und ihre Begi'en- zungen. (Ai'ch. nii- krosk. Anat. Bd. VI p. 1). M. rühmt eine etwas complicirte Methode der Versüberimg, indem er ausser mit Höllen- stein auch mit Jodsilber behandelt. Das Prä- parat kommt im Dunkeln flu* 2 — 3 Minuten in eine Iprocentige Höllensteinlösimg. Dann giesst man der Lösung eine kleine Quantität Iprocentiger Jodsüberlösung, zu dessen Auf- lösung etwas Jodkalium nöthig ist, hinzu. Nachdem das Präparat dann einige Male um- hergeschwenkt ist, wird es in destillirtem Wasser gewaschen imd für 2 Tage in einer O'lpro- centigen Lösung des salpetersauren Silberoxyds dem Lichte ausgesetzt. Die Methode soU die Kerne unversehrt lassen. R. empfiehlt eine besondere Methode der Silberbehandlimg. Nachdem das Präparat aus der Süberlösung entfernt ist, wird es in dest. Wasser gut gewaschen und dem Sonnenlicht ausgesetzt. Dann kommt es in eine Ipro- centige Goldchloridlösung. Um die Kerne zu färben, bringt er das Präparat noch in eine Carminlösiing, in der das Ammoniak durch Oxalsäure neutralisirt ist. Aufbewahrt wird es in einer Mischung [zu gleichen Theüen] einer öprocentigen Oxalsäurelösimg und Glycerin. L. bringt, um Nachdunkeln zu vermeiden, das Präparat aus der Silberlösung für kurze Zeit in eine Lösung von unterschwef Ugsaurem Natron. R. verwendet die Silberlösung in einer Concentration von O'l — 0-2 "/„ und setzt das Gewebe 30 Secunden der . Einwirkimg dieser Lösung aus. Er glaubt, dass das Silber die Zellgrenzen der Membranen, nicht aber eine zwischen den Zellen liegende Kittsubstanz färbe. Er ist autorisirt, Hartmann's (No. 143) frühere Behauptung, dass die Süberzeichnungen reine Trugbilder seien, zurückzunehmen. S. glaubt, dass die Büder durch den Niederschlag einer im frischen Zustand die Oberfläche der Membranen überziehenden ei- weisshaltigen Flüssigkeit entständen. Wie Auerbach und Schweigger-Seidel (No. 145 u. 148). 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 397 Kunst- producte. Ziveifler. Verthei- dif/er. Injection der Silber- löswng in die Ge- fässe. Silber- methode für das Ceniral- nerven- system. Ebenso. 155) Eeltz. Recherches experi- mentales siir le pas- sage des leucocythes ä travers les parois vasculaires. (Journ. de l'Anat. 1870 p. 33). 156) Robinski. Die lüttsubstanz auf Reaction desArgent. nitric. (Archiv Anat. 1871 p. 184). 157) Severin. Beiträge zu der Lckre von den Ent- zündungen. Dorpat 1871. Diss. 158) Soboroff. Untersuchungen über den Bau nor- maler imd ekstati- scher Venen. (Arch. pathol. Anat. u. Physiol. Bd. LIV p. 137). 159) Reich. Mikroskopische Stu- dien mit Silbersal- peterlösung an den Gefässen des Auges und anderer Organe. (Sitzber. d. Wien. Acad. 1873 III. Abth. Aprilheft). 160) Golgi. Sulla struttura della sostanza grigia del cerveUo. Communi- cazione preventiva. (Gazz. med. Ital. Lomb. Ser. 4 t. VI). 161) Torquato Beisso. Dell midoUo spinale. Genova 1873 p. 4 f. F. erklärt alle Silberlinien für Kunstpro- ducte. Auf Häutchen von Eiweiss, CoUodium etc. entständen dieselben Netze bei Behandlung mit Silber. Ebenso auf photographischem [also mit Sübersalzen präparirtem] Papier, das dem Licht ausgesetzt wird. R. wiederholt die oben No. 153 gegebene Ansicht. S. warnt ebenfalls vor Trugschlüssen. Auch er erhielt schwarze Netze auf Flächen, die sicher kein Epithel tragen. S. ist wieder ein Anhänger der v. Reck- LiNGHAusEN'schen Lehre. R. bediente sich einer Methode zur Ver- silberimg der Gefässwände , die in der That sehr empfehlenswerth ist. Er macht zuerst eine reinigende Injection von dest. Wasser oder einer ganz schwachen Lösung von Sal- peter (Va — 74%) in die Gefässe ; dann spritzte er eine Vr — V4Pi'ocentige Lösung von Höllen- stein ein und endlich nach einigen Minuten eine filtrirte lauwarme Gelatinelösung. Die injicirten Theile werden in Alkohol gelegt, dem Licht ausgesetzt und zuletzt in Wasser oder Glycerin untersucht. In der Deutung der Bilder schliesst R. sich v. Recklinghau- sen an. G. empfiehlt die Versilberung für das centrale Nervensystem. Er unterwirft kleine Stückchen von Centralorganen, welche in dop- pelt chromsaiu'em Kali erhärtet waren , einer längeren Behandlung mit einer Höllenstein- lösung von ',2 — 1 'Vn- Die nervösen Elemente werden schwarz. B. verwendet eine ähnliche Methode ; nur benutzt er Schnitte vom Rückenmark, das in absolutem Alkohol erhärtet wurde, und taucht sie für 1 — 2 Minuten in eine alkoholische Lösung von Argentum nitricum. 1870 1871 1871 1873 $98 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 1,3. Modifi- cirte Me- thode. Silber mit organi- schen Säuren. Deu- tungen. Färbung der leben- den und todten Cornea Salpeter- saures Silber- Am- moniak. 162) Rouget. Memoire sur le de- veloppement , la structure et las pro- prietes physiolo- giques des capillaires sanguins et lympha- tiques. (Archives de Physiol. 1873 p. 603). 163) Alferow, Serge. Nouveaiix procedes pour les impregna- tions ä l'argent. (Arch. de Physiol. 1874 p. 694). 164) Skworzow. Zur Histologie des Herzens und seiner Hüllen. (Pflüger's Arch. Bd. VIII p. 611). 165) Adam- kiewicz. üeber die Behand- lung von Gefässen mit Silbernitratlö- sungen. (Berl. klin. Wochenschr. No. 29 p. 355). 166) Stricker. Untersuchungen über den Eiterungs- process. (Wiener med. Jahrb. 1874 p. 379—389). 167) Hoyer. Beiträge zur anato- mischen u. histologi- schen Technik. (Arch. mikr. Anat. Bd. XIII p. 649— 650). R. empfiehlt, um Zellgrenzen und Zell- substanz nach der Silberbehandlung gleich deutlich erscheinen zu lassen, die Gewebe für 3- — 5 Secunden in eine Höllensteinlösung von 1 : 750 — 1000 zu tauchen, dann abwech- selnd abzuwaschen und mit derselben Lösung zu begiessen, endlich in Glycerin dem Licht auszusetzen. Die Präparate kommen dann noch für 2 — 3 Stunden in ein Gemisch von Glycerin, Alkohol und Ammoniakcarmin. A. schlägt statt der gewöhnlichen Silber- imprägnation eine solche mit Verbindungen des Silbers und organischer Säm'en z. B. Pikrin- säure, Milch-, Essig- und Citronensäure vor. Gewöhnlich gebrauchte er eine Lösung des milchsauren Silbers , 1 : 800 aq. dest. , dem 10 — 15 Tropfen freier Säure zugesetzt werden. Dies letztere empfiehlt sich deshalb, weil da- durch alle Niederschläge mit Ausnahme des Silber- Albuminats und Silber-Chlorürs zerstört werden, das Präparat also viel klarer und schöner wird. Im übrigen verfährt man mit dem Silberlactat wie mit dem Silbernitrat. S. u. A. handeln über die Deutung der Silberbilder im Epithel und Endothel. S. hält die dunkeln nach Silberbehandlung zwischen den Zellen auftretenden Linien nicht durch eine Kittsubstanz, die er überhaupt anzweifelt, bedingt ; vielmehr stellen sie Abzugsrinnen für die seröse Flüssigkeit dar. Auch die v. Reck- r.iNGiiAusEN'schen Saftkanälchen sind nach ihm durch das Silber hervorgerufene Kunstpro- ducte. — A. dagegen glaubt, dass die dunklen Silberlinien der Gefässe einer Kittsubstanz ihre Entstehung verdanken, welche dicht unter dem Endothel liegt und dies mit der Media verbindet. Die Linien verhalten sich wie Silberalbuminate und sind gegen concentrirte Säiu-en resistent. S. giebt an, dass die Imi)rägnation der Hornhaut am lebenden Thier andere Bilder ergiebt als an der ausgeschnittenen todten Cornea. Bei der ersten Methode, die er durch Aufträufeln der Silbcrlösung ausführt, werden die Hornhautkörperchen mit ihren Ausläufern als feingranulirte Massen hervorgehoben. Bei der Färbung der todten Hornhaut aber heben sich nur die Saftkanälchen der diffus braun gefärbten Grundsubstanz hervor. H. empfiehlt anstatt der einfachen Höllen- steinlösung eine solche von salpetersaurem Silberammoniak. Einer Lösung von Höllen- stein bestimmter Concentration wird gerade so viel Liq. Amm. caust. zugesetzt, dass der ge- fällte Niederschlag eben wieder sich zu lösen beginnt. Dann wird die Lösung so verdünnt, dass sie 0-75— 05 "/o Höllenstem entspricht. 1874 1876 I, 3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 399 Combina- tion der Silber- und Gold- färbung. Versilbe- rung niederer Seethiere. Vorbe- handlung d. Präpa- rate mit doppelt Chroms. Kali und Osmium. 168) Hogffan, Geo.etFrs.Elizab. Etüde sur les lympha- tiques de La peau. (Journ. de l'Anat. et Phys. 1879 vol. XV No. 1 p. 54). lÖtude sur les lympha- tiques des muscles stries. (1. c. p. 588). 169) Hertwig, R, Ueber den Bau der Ctenoi^horen. (Jen. Zeitsch. f. Nat. Bd. XIV p. 313 u. 324). 170) Golgi. Sulla struttura delle fibi'e nervöse midol- late periferiche e centrali. (Arch. per le sc. med. 1880 vol. IV p. 221). Diese Lösung von Silberammoniak lässt die umliegenden Gewebe ungefärbt und hebt um so deutlicher die Endothelzeichnung hervor. Herr u. Frau H. combiniren für die histo- logische Untersuchung der Haut die Imprägna- tion mit Silber- und Goldsalzen. Zu dem Zweck empfehlen sie einen einfachen Apparat zu benutzen. Auf einen cylindrischen Kaut- schidiring wird das zu untersuchende Haiit- stück so gespannt, dass es die eine Oeflfnung des Ringes ganz verdeckt. In dieser Lage wird es durch einen zweiten gleich grossen Ring fixirt. Man giesst nun in die Ringhöh lung, welcher der Cutisfläche der Haut zuge- kehrt ist, zuerst die Silbernitratlösimg ['/^pro- contige Concentration], entfernt nach 30 Se- cunden dieselbe und bringt nun für die gleiche Zeit eine eben so starke Goldchloridlösung in die Höhlung. — Platte Muskelhäute werden ebenso aufgespannt und nacheinander mit einer Iprocentigen Silber- und VaProcentigen Gold- chlorid-Lösung benetzt. Nach der einige Se- cunden währenden Einwii'kung des Silbers wird etwa 10 Minuten lang dem Licht expo- nirt, dann eine Minute mit '/aP^centiger Gold- chloridlösung behandelt. In Glycerin zu unter- suchen. Da die Meeresthiere, welche an Chlor- verbindungen so reich sind, mit salpetersaurem Silberoxyd schwer gefärbt werden, empfiehlt H., die Thiere zuerst in verdünnter Ueber- osmiumsäure zu härten, dann in destillirtem Wasser so lange auszuwaschen, bis das Spül- wasser nur noch minimale Niederschläge mit Silberlösung giebt. Dann lässt man eine Ipro- centige Höllensteinlösung etwa 6 Minuten hin- durch einwirken. G. combinii't für die Untersuchung der Nervenfasern die Behandlung mit chromsauren Salzen, Osmiumsäure und Silberlösung. Ein frischer [dem eben getödteten Kaninchen ent- nommener] Nerv wird zuerst in eine Mischung i von 10 Th. einer 2procentigen Lösung von dop- pelt chromsaurem Kali und von 2 Th. einer Ipro- centigen Lösung von Ueberosmiumsäure gelegt. Nach Einwirkung von 1 Stimde wird der Nerv in Stückchen von Va bis 1 cm Länge zerschnitten und diese in jene Mischung zurückgebracht. Nach einigen Stunden kommen sie dann für mindestens 8 Stunden in eine 0'5procentige Lösung von salpetersaurem Silberoxyd. Die Präparate können in gewöhnlicher Weise in Harzen (Dammarharz) eingeschlossen werden. Auch bringt G. die Präparate allein in doppelt chromsaures Kali und zwar periphere Nerven nur einige [4 — 8] Stunden, centrale aber 10 — 15 Tage, und dann für 12 — 24 Stimden im 1879 1880 400 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 3. Dunkeln in die Silbernitratlösung. Erst im Dammarharz werden sie dem Licht ausgesetzt. Lapis- ' 171) Sattler. S. bestreicht mit dem Höllensteinstift die Stift Die Verwendung des Fläche, welche er imtersuchen wül, und setzt Lapisstiftes zur das Präparat in mit Essig- oder Ameisensäure Untersuchung der leicht angesäuertem Wasser dem Licht für Epithelien. (Arch. einige Mnuten aus. In Glycerin zu unter- mikrosk. Anat. Bd. suchen XXI p. 672—677). Aus den Handbücliern der mikroskopischen Technik: 172) Ranvier. Technisches Lehr- buch der Histologie 1877. 173)v.Thanhoffer. Das Mikroskop imd seine Anwendimg. Stuttg. 1880. R. empfiehlt, das zu imprägnirende Ge- webe, wenn es haut- oder membranförmig ist, über einer Schaale gut auszuspannen und mit emer Pipette destUl. Wasser zum Abspülen darüber laufen zu lassen, dann es ebenso mit der Süberlösung zu bespülen, und endlich nochmals mit Wasser gut abzuwaschen. Bei Schnitten lässt man ebenso die Flüssigkeiten über die Oberfläche fliessen. — Ist die Silber- lösung sehr schwach, 1 : 500 oder 1 : 1000, oder ist das Licht matt, so erhält man eine gleich- massige I'ärbung des Gewebes, die von der Imprägnation ganz verschieden ist. Hier sind die ZeUkerne am meisten gefärbt, dann das Protoplasma, am wenigsten die Intercellular- substanz. V. Th. legt das aus der Silberlösung ge- wonnene Gewebe in eine trockne Schaale, und tropft mit einem Pinsel fortwähi'end 2pro- centiges essigsaures Wasser auf dasselbe, es dabei dem Licht aussetzend. Sein Schüler Kk.vfss ersann eine eigene Versilberung. Er brachte nämlich die Prä- parate aus der Höllensteinlösung, nachdem es gewaschen wurde, in eine hellrothe Lösung von übermangansaurem Kalium. Die Reduc- tion tritt sehr schnell und zwar auch im Dun- keln ein. Die Präparate misslingen aber zu- weilen. Es ist auch möglich, die Flüssigkeiten zu mischen. Ein anderer Schüler, Cabl Opi'itz, stud. med., imprägnirte mit Höllenstein und Zinn- chlorid. Die in gewöhnlicher Weise mit Höllen- stein behandelten Präparate kommen für 2 bis 3 Minuten in eine '/4 — VaP^'ocentige Lösung von Zinnchlorid, in welcher sie vorsichtig ge- schüttelt oder hin und her bewegt werden. Die Reduction findet sehr schnell statt und das Silber wird sehr feinkörnig ausgeschieden. 1,3. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 401 IX. Imprägnation mit Goldchlorid oder Goldchloridkalium. Erste Empfeh- lung. Compli- cirte Me- thode zur Färbung von Nerven- zellen. 174) Cohnhelm. Ueber die Endigun- gen der sensiblen Nerven in der Horn- haut. (Ai'ch. pathol. Anat. u. Physiol. Bd. XXXVIII p. 343). 175) Arnold. Ein Beitrag zu der feineren Structur der Ganglienzellen. (Ai'ch. pathol. Anat. u. Phys. Bd. XXXXI p. 178). 176) Ciirvoisier. Ueber die spinalen und sympathischen Zellen des Frosches. (Centralbl. f. d. med. Wiss. 1867 No. 57). C. wendet das Goldchlorid an, wie das salpetersaure Süberoxyd schon einige Jahre hindurch in der mikroskopischen Technik ver- wandt wii'd. Es wird imter Einwirkung des Lichtes rasch diurch die organischen Gewebe reducirt. Diese werden dadurch gelb, dann roth und dunkeln noch etwas bläulich nach. C. taucht die Präparate in eine V^procentige Goldchloridlösung und bringt sie dann für einige Tage in mit etwas Essigsäiure ange- säuertes Wasser. Einschluss in Glycerin oder Balsam. Alle Zellen färben sich aber verschie- den schnell und intensiv. Sehr schnell werden die Drüsenzellen roth. Die Kerne bleiben viel- fach ungefärbt. Noch schneller als das Zell- protoplasma färbt sich das Nervengewebe, so- wohl Zellen als auch Fasern, Axencylinder und Markscheide besonders. Nicht gefärbt werden die EpithelzeUen , ebensowenig die Kittsubstanz. Dagegen werden die Capülaren roth. Zur Darstellimg sympathischer Ganglien- zellen und besonders der Spinalfasern derselben bedient A. sich folgender Goldmethode. Aus einer Iprocentigen Essigsäure und Goldchlorid- kalium bereitet man sich eine Mischung von 002— 0-05 7o und legt in 3—4 cc dieser Lö- sung das Präparat. Nach 3—4 Stunden, sobald die ersten Spuren violetter Färbung eintreten, kommt es in eine Iprocentige Essigsäure. In dieser verweilt es 3 — 5 Tage, bis es ziemlich intensiv gefärbt ist, und wird dann nach Ab- lösung des Bindegewebes von Zeit zu Zeit mit Glycerin, dem einige Tropfen concentrirter Essigsäure zugesetzt sind, befeuchtet und auf einem Objectträger mit weisser Unterlage dem Licht ausgesetzt. Schon am vierten bis fünften Tage ist die Substanz der Ganglienzelle ziem- lich intensiv, der Kern hell, das Kernkörper- chen schwach roth gefärbt; der Axencylinder und die dickeren Spiralfasern erscheinen in dieser Zeit hellroth, nach 8 — 10 Tagen erhalten auch die feineren Spiralfasern eine intensivere Färbimg. C. empfiehlt zu dem gleichen Zwecke eine etwas einfachere Methode. Er legt ein etwas zerzupftes sympathisches Ganglion V2 — 1 Tag hindurch in 02procentige Essigsäure, zerzupft auf einem Objectträger und setzt das Präparat nach Zusatz eines Tropfens Goldchloridlösimg (0-1 "/„) unter beständiger Erneuerung der ver- dunstenden Lösimg dem Licht aus. 1866 1867 402 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 3. Salzsäure zur Beduc- tion. Schwefel- saures Eisen- oxydul zur Meduc- tion. GoldcMo- ridkalium f. d. Cen- tralner- vensijstem. 177) Bastian. 178) Nathusius. Ueber die Marksub- stanz verscbiedener Horngebilde etc. (Arch. f. Anat. Jahrg. 1869 p. 69). 179) Gerlach. Artikel Kückenmark in Stricker's Hand- buch der Gewebe- lehre. 1871 p. 678. (Nimmt man die Färbung auf dem Object- träger in einer feuchten Kammer vor, so ist die ganze Procedur unendlich viel bequemer imd gelingt sicherer). B. giebt eine etwas modificirte Vorschrift für die Vergoldungsmethode. Er löst 1 Th. Goldchlorid in 2000 Th. dest. Wassers und säuert mit Salzsäure an [1 Tropfen auf 2'/2 Unzen = 75 g]. Zur Reduction kommt das Präparat in eine Mischung von gleichen Theilen Alkohol und Ameisensäure. Die Wirkung kann durch Wärme beschleimigt werden. — Er macht auch Doppelfärbungen mit Silber und Gold. N. benutzt Chlorgold in Lösung von 0005 pro 100 g Wasser. Die Schnitte werden zur schnellen Reduction mit einer Lösimg von schwefelsaurem Eisenoxydul behandelt. G. benutzt für die Untersuchung des Rückenmarks sehr gern das Goldchloridkalium. Die Schnitte von dem in doppeltchromsaurem Ammoniak erhärteten Organ kommen in eine Goldchloridlösung 1 : 10000, die ganz schwach mit Salzsäure angesäuert ist. Hierin bleiben sie, bis sie blasslila aussehend werden [etwa 10 12 Stunden], dann gewaschen in dest. Wasser, dem sehr wenig Salzsäure zugethan ist, 1 auf 2000 bis 3000 Th. Wasser. Dann in 60 '^'o Alkohol mit Salzsäure, 1 Th. Säure auf 1000 Th. Wasser. (Gerlach's goldgefärtte Rückenmarks- präparate sind in Bezug auf die feinen Nerven- fibrillen nie wieder erreicht und noch weniger übertroffen worden. Nur die WEiGERx'schen Säurefuchsinpräparate lassen die Nervenfibrillen in ähnlicher Schönheit hervortreten). 1868 1869 1871 1,3. Gicrke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 403 Acidum tartaric. zur Beduc- tion. Einige Verhal- tungs- maas sre- geln für GerlacWs Goldchlo- ridkalium- met liode. 180) Henocqiie. Du motle de distri- bution et de la ter- minaison des nerfs dans les muscles lisses. (Arch. de l'Anat. et Phys. 1870). 181) Klein. Beitrag zur Kennt- niss der peripheri- schen Verzweigung markloser Nerven- fasern. (Centralbl. f. d. med. Wiss. 1871 No. 38). Derselbe. On the peripheral distribution of non- medullated nerve- fibres. (Quart. Joiu-n. microsc. sei. vol. XI p. 40,5, vol. XII p. 21). 182) Chrchtscho- novitsch. Beiträge zur Kennt niss der feineren Nerven der Vaginal- schleimhaut. (Wiener acad. Sitz.- ber. 1871, Abth. II Februar p. 301). 183) Boll. Die Histologie und Histiogenese der nervösen Central- organe. (Arch. f. Psych, u. Nervenkr. Bd. IV p. 52). H., Kl. und dessen Schüler Ch. empfehlen alle drei für die Darstellung und Untersuchung der feinen Nervenfibrillen und deren Veräste- lungen eine besondere Methode der Vei'goldung. Die frisch herausgenommenen Stückchen des zu untersuchenden Organs kommen für 30 — 45 Minuten in eine V.^procentige Lösung des Chlor- golds, dann für 12 — 24 Stunden in destillirtes Wasser. Dann werden sie in eine fast gesät- tigte Lösung von Acid. tart. gebracht, welche .sich in einem gut verschlossenen Gefäss be- <^ findet. Nach K. und Ch. wird dies Fläschchen in ein Gefäss mit warmem Wasser von 50" C. gestellt und bleibt in diesem bis es erkaltet ist. H. erwärmt das Wasser sogar bis zum Kochen; nach den beiden anderen aber ist dieser hohe Wärmegrad den Pi äparaten schäd- lich ; die Epithclien leiden zu sehr. Von den so behandelten bräunlichen oder violetten Ge- websstückchen werden feine Schnittchen ge- macht, in denen dann die Nervenverzweigungen sehr deutlich zu sehen sind. B. giebt einige nähere Verhaltungsmaass- regeln bei Anwendung der GERi.Acu'schen Gold- chloridkaliummethode. Je kürzere Zeit die Centi'alorgane des Nervensystems in der Lösung des doppeltchromsauren Ammoniaks liegen, desto schöner wird die Goldfärbung. Nach 8 Tagen nimmt die Fähigkeit des Materials, distincte Goldfärbungen einzugehen, schon ab; nach 14 Tagen ist dieselbe fast geschwunden. Alkohol darf nicht zum Befeuchten der Rasir- messer benutzt werden; überhaupt dürfen die Schnitte nicht mit Alkohol in Berührung kommen, da sonst leicht Fällungen eintreten. Die angewandte Menge der Lösung (Concen- tration 1 : 10000) darf nicht zu gross sein. Die Schnitte sollen in ihnen nicht länger als 18 Stunden verbleiben. 12 Stunden ist die gün- stigste Dauer der Einwirkung. 1870 und 1871 1873 404 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 1,3. Goldchlo- rid und Schtoefel- ammo- niak. Gold- chlorid und Ameisen- säure. Injection von Gold- chlorid- lösung. Gold- chlorid und Natrium causti- cum. 184) Lawdowsky. Bemerkungen zur mikroskopischen Technik. (Med. Bote 1874, No. 37—39; Russisch). 185) Löwit. Die Nerven der glat- ten Musculatiu-. (Wiener Sitzber. Bd. LXXI Aprü 1875). 186) Fischer. Ueber die Endigim- gen der Nerven im quergestreiften Muskel der Wirbel- thiere. (Arch. mikrosk.Anat. Bd. XIII p. 356). 187) Thin. A contribution to the anatomy of the lens. (Journ. Anat. and Phys. vol. X part 2 p. 229). 188) Flechsig. Die Leitungsbahne im Gehirn und Rückenmark des Menschen. Lpz 1876. L. ist unzufrieden mit der gewöhnlichen Vergoldungsmethode. Er empfiehlt daher nach dem Vorgang von Nesteroffsky in Kiefi' zur Beförderung die Reduction des Schwefelammo- niaks. Zum fertigen Schnitt wird 1 Tropfen dieser Flüssigkeit gesetzt, aber sehr bald wieder mit Fliesspapier entfernt und durch reines Glycerin ersetzt. Die Präparate werden durch- sichtiger und reiner, da die metallischen Nieder- schläge gelöst werden. Die Präparate sind im Dunkeln aufzubewahren. Die Methode eignet sich besonders zur Darstellung der Nerven- geflechte in der Darmwand, der Nervenendigun- gen in den Muskelfasern und zu Untersuchungen des Centralnervensystems. L. empfiehlt folgende Methode der Ver- goldung für die Darstellung der Nervenenden in Muskeln : Man stelle sich eine Iprocentige Lö- sung von Goldchlorid und ein Gemisch von 1 Th. Ameisensäure und 2 Th. Aq. dest. her. Von dem letzteren gebe man einige cc in eine Uhi*- schale. Dann zerschneide man das zu unter- suchende Gewebe in kleine Stückchen von 1 — 2 mm Dicke und lege sie in das saure Wasser, bis sie [etwa '/a Minute] durchsichtig geworden sind. Hierauf bringe man dieselben in eine zweite Schale mit 1 — 2 cc der Gold- chloridlösung und lässt sie 10 — 15 Minuten darin, bis sie ganz gelb geworden sind. Dann kommen sie in verdünnter Ameisensäure für einige Zeit an einen dunklen Ort, danach nochmals 24 Stunden in reine Ameisensäure ebenfalls im Dunkeln. Jetzt endlich in destil- lirtes Wasser, in dem die Stückchen zerzupft werden, um in ihm oder in Glycerin unter- sucht zu werden. F. hat diese Methode, die als die Löwit- sche sehr bekannt geworden ist, zuerst auf die Untersuchung der Nervenendigungen in den .quergestreiften Muskeln angewandt. Th. empfiehlt eine '/jprocentige Goldchlorid- lösung in die Arterien einzuspritzen. die Gewebe mit der Lösung zu um so diuxh- tränken. Die Stücke kommen dann noch für eine kurze Zeit in eine Goldchloridlösung von gleicher Stärke und können zuletzt noch mit Hämatoxylin gefärbt werden. F. hat für seine Zwecke eine etwas modi- ficirte Vergoldungsmethode angewandt. Das zu untersuchende Organ (besonders die Central- organe des Nervensystems) kommen in eine Iprocentige Lösung von Ammonium bichromi- cum. Nachdem sie erhärtet und schnittfahig ge- worden, kommen sie nach vorherigem Abwaschen in eine O'öprocentige Lösung von Goldchlorid. Sie bleiben hierin V4 — 'A Stunde, werden dann wieder in dest. Wasser gewaschen und in eine 1,3. Gierke: Färberei zii mikroskopischen Zwecken. 405 Goldchlo- rid und Citronen- u. Amei- sensäure. Combina- tion von Höllen- stein und Gold- chlorid. Böhm- sche Methode. Gold- chlorid und 1) warme Oxal- säure; 2) arseni- ge Säv/re. 189) Ran vier. Legons sur l'histolo- gie du Systeme ner- veiix. Paris (2 voll.). 190) Hoggan, 191) Carriere. Kurze Mittheilungen zur Kenntniss der HERBST'schen und GRANDRv'sclien Kör- perclien in dem Schnabel der Ente. (Ai'ch. mikrosk.Anat. Bd. XXI p. 146— 164). 192) Marchi. üeber die Terminal- organe der Nerven in den Sehnen der Augenmuskeln. (Arch. f. Ophthalm. 28. Jahrg. Bd. I p. 202—21; auch Arch. per le Scienze med. vol. V). lOprocentige Lösung von Natr. caust. gelegt. Die Reduction erfolgt fast augenblicklich und wird die weisse Substanz dunkelviolett gefärbt, die graue bleibt scheinbar ungefärbt. Nach mehr- stündigem Aufenthalt in der Natriumlösung wer- den die Präparate gut gespült und auf gewöhn- liche Weise in Canadabalsam eingeschlossen. R. empfiehlt für die Goldbehandlung fol- gende Methoden: Um die Nerven der Cornea darzustellen, bringt er dieselbe für 5 Minuten in frischen, filtrirten Citronensaft, dann durch 15 — 20 Minuten üi 3 cc einer Iprocentigen Gold- chloridlösung imd zuletzt in 25 — 30 g Aq. dest., dem einige Tropfen Essigsäure zugesetzt sind. Nach 2 — 3 Tagen ist durch die Einwirkung des Sonnenlichtes und der Säure die Reduction erfolgt und die Nervenfibrillen sind sehr deut- lich geworden. Für die Nervenendigungen in den Sluskelfasern kann man die Methode in so weit ändern, dass man die Muskelstückchen aus der Goldlösung in eine 20procentige Amei- sensäure für 12 Stimden im Dunkeln bringt. Combination einer Behandlung mit Silber- nitrat und Goldchlorid (cfr. No. 168). C. hat für seine Untersuchungen eine Methode angewandt, die ihm von Böhm ange- geben wurde. Büum's Methode der Vergoldung ist folgende : Die Stücke werden in öOprocentige Ameisensäure gelegt, bis sie nach etwa 20 Mi- nuten diu'chscheinend geworden sind, dann ge- waschen und für 20 Minuten in eine kleine Menge Iprocentiger Goldchloridlösung gelegt, aufs neue abgespült und für 24 Stunden in eine grosse Schale mit Prichard 'scher Lösung [Amylalkohol 1, Ameisensäure 1, Wasser 98] gebracht, im Dunkeln stehen gelassen. M. empfiehlt für die Darstellung der Nerven- enden in den Sehnen das MANFREDi'sche Ver- goldungsverfahren. Nach demselben kommen die ganz frischen Gewebe auf ^j^ Stunde in Iprocentige Goldchloridlösung, dann in 0'5pro- centige auf 86" erwärmte Oxalsäurelösung, in der sie bis zur Abkühlung bleiben. Nach einer Methode Golgi's kommen die Muskeln, deren Nervenenden untersucht werden sollen, zunächst für 3 Tage in 2procentige Lösung von doppelt chromsaurem Kali, dann in Iprocentige Arsenigsäure oder Essigsäiu-e für etwa 30 INIinuten. Hierauf eine gleiche Zeit in Iprocentige Goldchloridlösung und nach gutem Abspülen zurück in die arsenige Säure, in der das Präparat dem Licht ausgesetzt wird. 1878 1879 1882 1882 406 Gierke: P'ärberei zu mikroskopischen Zwecken. 1,3. Modifiea- tion der Löivit- schen Me- thode. 193) Bremer. Ueber die Endigun- gen dermarkhaltigen und marklosen Ner- ven im quergestreif- ten Muskel. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXI p. 195). B. modificirt Löwit's Goldmethode ein wenig. Er legt zuerst in 25procentiger Amei- sensäure, bis die Muskeln durchsichtig sind, dann 15 — 20 Minuten in Iprocentige Gold- chloridlösung, darauf in eine 25procentige Ameisensäure im Dunkeln. Diese wird dann ersetzt durch eine Mischung von gleichen Theilen dest. Wassers in Ameisensäure, in welcher das Material ebenfalls 24 Stunden im Dunkeln verbleibt. Dann legt er es 2- 3 Wochen in 20procentiges ameisensaures Glycerin, bis es den nöthigen Grad der Entfärbung hatte und hochgradig macerirt war. 1882 X. Behandlung mit Ueberosmiumsäure. Erste Empfeh- lung. 194)MaxScIuiltze. Zur Kenntniss der Leuchtorgane von Lampyris splendidu- la. (Arch. mikrosk. Anat. Bd. I p. 132). M. Schultz e u. Rudneff, Weitere Mittheilun- gen über die Ein- wirkung der Ueber- osmiumsäure auf thierische Gewebe. (1. c. p. 300). S. berichtet in der ersten Arbeit über die Ergebnisse seiner Versuche mit einem neuen Reagens, der Osmiumsäure OsOj, die neuer- dings Ueberosmiumsäure genannt werde. Aus der wässerigen Lösung dieser Säure scheiden leicht oxydirbare Stoffe, so auch viele organi- sche Gewebe, einen schwarzen oder schwarz- blauen Körper ab, der eine niedrigere Oxyda- tionsstufe der Säure oder auch des Metalls selber darstelle. Franz Eilhardt Schulze in Rostock habe zuerst gefunden, dass die ver- schiedenen Gewebselemente verschieden redu- cirend auf die Osmiumsäure wirke; er habe ihm eine stark verdünnte Lösung zugesandt, mit der Bitte, sie weiter auf ihren Werth für die histologische Technik zu prüfen. S. hat nun die Osmiumsäure bei der Untersuchung der Leuchtorgane von Lampyris verwandt und ge- funden, dass sich die Tracheenzellen derselben viel schneller färben als die anderen Elemente. Sie sind schon tief schwarz, während das Uebrige noch ganz ungefärbt ist. Doch tritt die Schwärzung nur ein bei lebend und leuch- tend eingelegten Thieren und bleibt bei con- servirten ganz aus. Die Färbung beruht also sicher auf dem Sauerstoffverbrauch der Tracheen- zellen, denen die Säure durch die Tracheen und zwar in gasförmigem Zustand zugeführt wird. Auch in den übrigen Organen färben sich die Tracheenenden lebend eingelegter Thiere leicht schwarz. Unabhängig vom Leben ist die später auftretende Färbung des Fettes und der Eiweisstoffe. In der zweiten Arbeit berichten S. und R. über weitere Versuche mit der Osmiurasäure. 1865 I, 3. Giorke: Färberei zu mikroskopiscben Zwecken. 407 Osmia- mid. Essig- saures Kuli zum Ein- schluss der Osmi umpräpa- rate. Injection von Ueberos- mium. 195) Owsjanni- kow. Ueber die Wirkimg der Osmiamidverbiu- dungen Fremy's auf thieriscbe Gewebe. (Melanges biol. tires du Bull, de l'Acad. de St. Petersb. t. VII). 196) M. Schulze. Arck. mikrosk. Anat. Bd. VII p. 180. Sie bedienten sieb sehr scbwacber Lösungen von 1 : 100 bis 1 : 1000. Fette und Milcbkügel- chen färben sieb selbst in dünnen Lösungen scbnell scbwarz. Näcbst den Fetten ist es das Nervenmark, docb bescbränkt sieb die Wirkung, wie übrigens aucb bei den Fetten, auf die Oberfläcbe und dringt nur wenig in die Tiefe. Bei der Behandlung friseber Nerven mit Os- raiunisäure gerinnt das Mark nicht in der Weise wie sonst. Der Axeneylinder fäi'bt sieb gar nicht oder nur leicht gelblieb. J'ibrilläres Bindegewebe und Muskelsubstanz wird sehr langsam gefärbt und bei zeitiger Unterbrechung der Procedur gar nicht; dagegen wird das Protoplasma weicher Zellen dunkel. Grund- substanz des Knorpels, der Cornea und Aebn- liehes färbt sich sehr wenig, ebenso das spon- giöse Bindegewebe, wie die Stützfasern der Retina. Quergestreifte Muskelfasern werden nach längerer Einwirkung bräunlich, weisse Blut- körperchen tief schwarz; die rotben dagegen bleiben ganz unverändert. Am wichtigsten ist das neue Reagenz für die Untersuchung des Centralnervensystems, besonders bei einer Com- bination mit Carmin. In ptianzlicben Geweben werden neben den fetten Oelen besonders die Gerbstoffe ge- färbt. Langsamer dunkelt das Zellprotoplasma. Gar nicht färben sich Amylum, Zucker, Cellu- lose und Chlorophyll. 0. räth, die FREMv'scbe Osmiamidverbin- dung 1 : 1000 Aq. dest. anstatt der Ueber- osmiumsäure zu nehmen. Dieselbe habe die- selben Vortbeile wie die letztere, es fehlen ihr aber deren Naehtbeile. nämlich der üble Geruch und die schädliche Einwirkung auf die Schleimhäute. S. empfiehlt 197) Ranvier. Sur les Clements conjonetivs de la moelle epiniere. (Compt. rend. t. LXXVII No. 22 p. 1024 f.). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie, I, 3. Kali in concen- trirter Lösung zum Aufbewahren der mit Os- miumsäure gefärbten Präparate, dadas Glyce- rin selten chemisch ganz rein zu haben ist und, wenn Spuren von Blei in demselben enthalten sind, es sieh mit der Zeit schwärzt. Das essig- saure Kali wird wie Glycerin verwendet. Eine vollkommene Isolation der Rücken- markszellen gelingt, wenn man eine Lösung von Ueberosmiumsäure 1 : 300 durch Einstich in die Substanz treibt und nach einiger Zeit die- selbe zerzupft. 27 1870 1870 1873 408 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 3. Ueberos- mium- und Oxal- säure. Osmium und Alkohol. 198) Ponchet. De l'emploi des So- lutions concentrees d'acide osmique. (Robin 's Journ. de l'Anat. 1876, p. 525). 199) Broeslcke. Die Ueberosmium- säure in Verbindimg mit Oxalsäure als mikroskopisches Färbemittel. (Cen- tralbl. f. d. med. Wiss. 1878, No. 46 p. 833—836). 200) Parker. On some applications of osmic acid to microscopic pur- poses. (Journ. R. microsc. Soc. vol. II p. 381—383. Anwendung der Ueberosmiumsäure. Bringt nichts Neues. B. kann eine Behandlung der Osmium- präparate mit Oxalsäure empfehlen. Stückchen von frischen oder frisch getrockneten Präpara- ten werden für eine Stunde in eine Iprocentige Ueberosmiumsäure-Lösung gelegt, hierauf nach sorgfältigem Auswaschen in eine kalt gesättigte Oxalsäurelösimg (1:15) für 24 Stimden ge- bracht. Die Präparate können dann in Wasser oder Glycerin untersucht werden. Die beiden Stoffe zu mischen ist nicht empfehlenswerth. Die Gewebe färben sich nun bei dieser Be- handlung in verschiedener Intensität roth, einige bleiben imgefärbt. Zu diesen letzteren gehören : Mucin, CeUulose, Amylum, Bacterien, die Aussenschicht der Pilze, ScawANN'sche Scheide und die Axency linder , die Knochen fibrillen und die kalkhaltigen Knochen. Hell carmoisinroth färben sich Glaskörper, Dotter- haut, Corneagrundsubstanz, die Capillarwandung und verschiedene bindegewebige Intercellular- substanzen. Dunkler carmoisinroth färben sich Linsen- imd Muskelfasern, Sehnengewebe, Hyalinknorpel und die meisten eiweissreichen Elementartheile. Etwas heller oder dunkler burgunderroth werden das Nervenmark, die mei- sten Kerne und das Zellprotoplasma gefärbt. P. empfiehlt für die Untersuchung sehr zarter Objecte, z. B. für kleine Crustaceen, Insecten, zarte Pflanzentheile etc. Behandlung mit Ueberosmiumsäure und darauf folgende Alkoholeinwirkung. 1878 1879 (Schluss folgt in Heft 4). I, 3. Kleinere Mittheilungen. 409 Kleinere Mittlieilung"eu. Eine neue Cönstruetion des Abbe'sehen Beleuehtungsapparates. Von Wilhelm Behrens in Göttingen. Hierzu 1 Holzschnitt. Die neue Cönstruetion, welche wir hier kurz beschreiben wollen, betrifft nicht den optischen, sondern den mechanischen Theil des ABBE'schen Beleuchtungsapparates. Mit Recht ist der von Abbe im Jahre 1872 zuerst beschriebene „Be- leuchtungsapparat" in der letzten Zeit immer mehr in Aufnahme ge- kommen, da er eine Art der Beleuchtung und eine Modification derselben in sehr weiten Grenzen ermöglicht, welche von den früher üblichen Cylinderblenden und Condensoreu bei weitem nicht erreicht wurden. Allein es lässt sich nicht läuguen, dass selbst die besten Constructionen des Apparates, auch die von Zeiss, Seibert u. A., durch die Art ihrer mechanischen Ausrüstung noch einige Inconveuienzen mit sich bringen, durch deren Elimination der Gebrauch des in Frage stehenden Appa- rates wesentlich erleichtert werden wird. Dass jede Erleichterung im Gebrauch des Apparates der Verbreitung desselben nur zu Gute kommen kann, liegt auf der Hand, und wir hoffen, denselben in Zukunft auch an den gewöhnlichen Arbeitsstativen mittlerer Grösse angebracht zu sehen. — Die hier zu beschreibende Cönstruetion, welche von Herrn R. Winkel in Göttingen ausgeführt wurde, dürfte sich in dem ange- gebenen Sinne zur Nachahmung empfehlen. Der AsBE'sche Beleuchtungsapparat soll bekanntlich drei verschie- dene Modificationen der Beleuchtung gestatten: 1) Die Anwendung von Beleuchtungskegeln verschiedener Diver- genz und verschiedener Einfallsrichtung (beide müssen in weiten Grenzen modificirbar sein). 2) Die Ausnutzung seiner ganzen (sehr grossen) numerischen Aper- tur (zur „Isoliruug des Farbenbildes" Koch). 3) Die Darstellung positiver Bilder auf dunklem Grunde durch Un- wirksammachen des mittleren Theiles des Beleuchtungskegels. 27* 410 Kleinere Mittlieilungen. I, 3. Das erste wird erreicht durch Anwendung von Blenden mit grösserer oder kleinerer Oeffnung, die unterhalb des Beleuchtungs- systemes (Coudensors) angebracht werden und in allen zur optischen Achse des Systemes verticalen Richtungen verschiebbar sind , das zweite durch Entfernung jeglicher Blende, das dritte durch Anwendung einer sogenannten Centralbleude. — Ausserdem wird für manche starken Vergrösserungen zur grösstmöglichen Ausnutzung des Licht- effectes des Beleuchtungssystemes gefordert, dass sich zwischen Con- densor und Objectträger ein Tropfen Wasser oder der Flüssigkeiten für homogene Immersion einschalten lässt (Immersionscondensor). Allen diesen Anforderungen wurde durch die früheren Construc- tionen Genüge geleistet, abgesehen davon, dass die Bewegung der Blenden nicht ohne Unbequemlichkeit w^ar und man hierbei, bei gewisser Stellung der Blendvorrichtung, dem Spiegel theilweise das Licht mo- mentan abschnitt. Dahingegen ermöglichten jene Constructionen nicht: 1) Den Focus des Beleuchtungssystemes beliebig weit unterhalb das Object zu verlegen, was bei vielen histologischen Untersuclmngen ent- schieden von Vortheil ist, 2) Das Beleuchtungssystem ganz auszuschalten und an seine Stelle eine gewöhnliche Cyliuderbleude zu setzen. Wollte man bei den früheren Constructionen mit gewöhnlicher Blende beobachten, so hatte man erst durcli Lösen einer Klemmschraube, Neigen des Stativs und Herausziehen den ganzen Apparat zu entfernen, an seine Stelle eine eigene Schlittenvorrichtung mit Spiegel zu bringen, und erst dann konnte die Beobachtung ihren Fortgang nehmen. Selbst das Wechseln der beiden, zu dem Apparate gehörigen Beleuchtungs- systeme war immerhin umständlich. Die umstehend abgebildete Construction (% der nat. Gr.) beseitigt, wie man sehen wird, die beregten Uebelstände: Die Theile sind, wie bei den früheren Constructionen, der Träger des Beleuchtungssystemes i, die Blendvorrichtung d und der Spiegel .) Sblenkä in: Zool. Anz. Bd. V. 1882 p. 169. 438 Referate und Besprechungen. I, 3. Wassers beseitigen, und ein schliessliches Ueberfirnisseu desselben ver- leibt dem Präparate ein gefälliges Ausseben. — Derartig hergestellte Glycerinleimpräparate eignen sich besonders gut zur Demonstration in entwicklungsgeschichtlichen Vorlesungen. Die Präparate liegen un- beweglich im erstarrenden Glycerinleim, ein Umstand, der Beschädigung durch zufällige Insulte beim Herumzeigen ausschliesst. Die Präparate sind ausserordentlich dauerhaft und in anatomischen und zoologischen Sammlungen allen Spirituspräparaten vorzuziehen, weil sie, wenn ein- mal genügend hergestellt, keinerlei Ueberwachung, wie jene sie be- dürfen, beanspruchen. Grieshach {Basel). Decker, F., Ein neuer Schnittstrecker. (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXIII p. 537—543). Der neue Schnittstrecker von Decker in Würzburg wurde im Sommer 1883 construirt und in ähnlicher Weise wie der von Andres, GiESBRECHT uud Mayer ausgeführt *. Da dieser Schnittstrecker etwas einfacher in der Construction ist, ferner für alle Messer anwendbar (d. h. für solche mit planen und concaveu Flächen) nicht ausschliesslich für eine Form, so möchte es angezeigt erscheinen, in Kürze die Haupt- unterschiede beider Apparate klar zu legen : Statt der hakenförmigen Klemmvorrichtung des Neapler Schnittstreckers finden wir bei dem Würzburger eine auf dem Querschnitt ösenförmig (yl. gekrümmte Feder von Stahl, welche auf das Messer geklemmt wird und durch eine an ihrem hinteren Theil befindliche Schraube von der Schneide entfernt oder derselben näher gerückt werden kann. Bezüglich der Einstellung gestaltet der Apparat gleich genaue Regulirung w^ie der in Neapel con- struirte. Einen entschiedenen Vorzug weist er aber vor letzterem auf, der darin besteht, dass der vor der Schneide über dem Präparate schwebende Draht eine Glasröhre trägt, welche sich leicht dreht, und welche je nach der Grösse der Schnitte gewechselt werden kann. Interessant ist noch in dem Aufsatz die Beschreibung der primi- tivsten Form, welche Decker durch auf das Messer geklebte Pferde- haare herstellte, ferner eine einfache Form von Schnittstrecker, die man leicht sich selbst anfertigen kann uud welche für gewöhnlichen Gebrauch ausreichend ist, wenn es sich nicht um Anfertigung ununterbrochener Serien handelt. Es ist bei diesem einfachen Apparat die Klemme mit ihrer Stellvorrichtung durch einen biegsamen Metallstreifen ersetzt, der dann entsprechend gebogen und aufs Messer geklemmt werden muss ^. Gottschau (Basel). 1) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 270. 2) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 539. I. 3. Referate und Besprecliungen. 439 B. JPräjmrntionsinetlioden. BergOiiziui, Suiruso del collodio e delfenolonella tec- nica microscopica [üeber die Anwendung des Collodiums niid des Phenols in der mikroskopi- schen Technik (Lo Spallanzani, Aprile 1883, p. 196). Was das Collodinm betrifft, so berichtet der Verf. (und gesteht es selbst ein) nichts Neues : es scheint im Gegentheil , als ob ihm die, seinem eigenen Verfahren weit überlegenen Methoden von Duval, so- wie die ebenfalls bessere von Schieffeedecker mit Celloidin nicht be- kannt seien. Betreffs des Phenols schlägt der Verf. vor, es für Terpentinöl und Nelkenöl zu substituiren, denen gegenüber es die folgenden Vor- theile haben würde : 1) Die Präparate in wenigen Minuten ausserordent- lich durchsichtig zu machen, ohne dass sie schrumpfen oder zerbrechlich werden, so dass man noch so zarte Schnitte mehrere Stunden lang in reiner Carbolsäure liegen lassen kann, ohne dass sie verderben. 2) Den Alkohol beim Einschliessen der Präparate entbehrlich zu macheu. Die Schnitte, welche man aus in Alkohol oder einem anderen Reagenz ge- härteten Präparate erhalten hat , gleichviel ob gefärbt oder nicht, können aus dem AVasser in das Phenol übertragen (wo sie trans- parent werden) und von hier ohne weiteres in harzige Substanzen ge- bracht und eingeschlossen werden, ohne dass man nöthig liätte, eine Wasserentziehung mittels Alkohol in Anwendung zu bringen, wie man es bei den anderen Methoden thut. Man kann die Wirkung des Phenols durch eine gelinde Erwärmung beschleunigen. Der Verf. wendet reines und krystallisirtes Phenol an, dem er kaum so viel Wasser zufügt , um es flüssig zu machen. Weniger empfiehlt es sich, Phenol und Alkohol zu gleichen Theilen zu ver- wenden. Kleinere Thiere, wie gewisse Insecten , kann man lebend in die Carbolsäure bringen, welche sie tödtet und völlig durchsichtig macht. Sogleich darauf überträgt man sie in die harzigen Einschlusssubstanzen, in denen sie sich beliebig lange Zeit conserviren. (Es ist möglich, dass dem Phenol, wenn auch vielleicht nicht in den vom Verf. bezeichneten Grenzen , die besprochene Eigenschaft zu- kommt, um so mehr, da das Kreosot, welches ebenfalls zu gleichem Zwecke vorgeschlagen und mit Erfolg angewandt wurde, Carbolsäure in grosser Menge enthält. Ref.), J. Martinoüi (Turin). Zeitsclir. f. wiss. Mikroskopie. I. 3. 29 440 Referate und BospreeLungcu. I, 3. Fraiicotte, P., Nouveaux reactifs colorants. (Bull. Soc. Beige de Microsc. t. IX. 1883—84, No. 5, p. 76). Verf. bedient sich seit einiger Zeit mit Erfolg einer Carmiulösung, die von Hoyer im Biol. Centralblatt (1882) angezeigt wurde. Man präparirt dieselbe durch Lösen von 1 g Carmin in 1 — 2 cc Ammoniak- flüssigkeit und Verdünnung mit 6 — 8 cc AVasser. Alsdann erwärmt mau auf dem Wasserbad, um das überschüssige Ammoniak zu verjagen. Wenn dasselbe so entfernt , dass keine Gasblasen mehr an der Ober- fläche der Flüssigkeit bemerkt werden , nimmt diese eine purpurrothe Farbe an. Dann lässt man erkalten und absetzen und filtrirt vom et- waigen noch ungelöst gebliebenen Carmin , der aufs Neue verwendet werden kann, ab. Zur neutralen Flüssigkeit fügt man Chloralhydrat. Während Hoyer über eine bestimmte Quantität des letzteren nichts mittheilt, fügt Francotte zu der mit 10 cc Wasser versetzten Carmin- solution 1 g Chloralhydrat. Man kann das Färbemittel auch in Fasta- oder Pulverform erhalten, wie schon Hoyer angiebt. Zu diesem Zwecke wird der Carmin, nachdem man filtrirt und ein wenig Chloral hinzu- gefügt, mit dem 4- bis 6 Wichen Volumen Alkohol gefällt. Der Nieder- schlag wird filtrirt und ausgewaschen. Nach dem Trocknen erhält man ein Pulver. Will man Pasta, so wird der getrockneten Masse Alkohol, Glycerin und Chloral zugesetzt, und zwar nimmt Francotte für 1 g Carmin, 2 cc Alkohol, 2 cc Glycerin und 1 g Chloral. Pasta wie Pulver halten sich nach Hoyer lange Zeit und beide lösen sich in de- stillirtem Wasser. Nach Francotte löst sich die Pasta besser und ihre Lösung lässt sich leichter filtriren als der gewöhnliche Carmin. Huyer empfiehlt auch eine Pikrocarminlösung und erhält dieselbe, indem er das Pulver in Ammoniumpikrat löst. Da man aber letzteres nicht immer zur Hand hat und Hoyer auch keine genauen Gewichtsmengen angab, so verfährt Francotte folgendermassen : 1 g Carmin wird in 5 — 7 cc concentrirter Ammoniakflüssigkeit, 1 — 2 g Pikrinsäure werden in 50 cc destillirtem Wasser gelöst, und beide Lösungen unter Wasserzusatz so zusammen gemischt, dass 100 cc Flüssigkeit ent- stehen. Dieser wird noch 1 g Chloral zugefügt. Ist noch freies Ammo- niak vorhanden, so erwärmt man gelinde auf dem Wasserbade, oder lässt dasselbe an der Luft verfliegen. — Die in dieser Weise bereitete Tinctionsflüssigkeit liefert für thierische und pflanzliche Gewebe schöne Bilder und hält sich ohne Veränderung lange Zeit. Grieshach (Basel). I, 3. Referate und Besprechungen. 441 4. Präparationsmethoden für specielle Zwecke, A, Protozoen, Cattaneo, Fissazioue, colorazioue econservazioneclegli infiisorii [Fixiriing, Färbung und Aufbewahrung der Infusorien]. (Bollettino scientifico, 1883, No. 3 e 4). Verf. theilt seine Arbeit in zwei Theile : im ersten setzt er die bis jetzt vorgeschlagenen Methoden auseinander, im zweiten theilt er die Resultate seiner Untersuchungen mit. Zweck derselben war, mit der grösstmöglichen Exactheit die Wirkung und die Wichtigkeit der haupt- sächlichen, bis jetzt gebräuchlichen Reagentien zu bestimmen und die Wirkung gewisser anderer Substanzen zu untersuchen, welche der Verf. als für jenen Zweck gleich günstig ansah. Er beschränkte jedoch seine Untersuchungen auf eine geringe Zalil bekannter Arten, um Anhalts- punkte für ihre Vergleichung zu erhalten. Vor Allem musste er sich überzeugen, wie wenig praktisch der so- genannte Isolirprocess, der von Landsberg eingeführt wurde, ist, um auf den Objectträger die zu präparirenden Infusorien zu übertragen, ein Process, welcher kaum angewandt werden konnte für die grösseren Infusorien und auch dann nicht, wenn sie nicht in bedeutender An- zahl vorhanden waren. Auch ist die von Landsberg vorgeschlagene Methode, welche voraussetzt, dass alle Reactionen und Färbungen in Uhrgläschen vorgenommen werden, die im Wasser die betreffenden Pro- tisten enthalten , nach dem Verf. nicht frei von Unbequemlichkeiten. Verf. giebt daher den Vorzug dem sogenannten Absorptionspro - cesse, welcher von Koechelt empfohlen wurde; dieser erfordert zwar grosse Geduld, aber er giebt auch äusserst befriedigende Resultate und schönere und zartere Präparate. Er hat ihn daher mit geringen Modificationen bei fast allen seinen Untersuchungen benutzt. Von den untersuchten, zurFixirung dienenden Stoffen, stellt der Verf. obenan das Palladiumchlorür in wässeriger Lösung (1 — 3 %), welches in wenigen Minuten die Protisten erhärtet, ohne im mindesten ihre Gestalt zu verändern oder sie zu schwärzen (wie es die anderen Stoffe zu thun pflegen), und welches die Granuliruug des Protoplasmas und der Zellkerne vortrefflich hervortreten lässt. Es bebt zwar die Zell- kerne nur mittelmässig hervor, allein dieselben können durch spätere Färbungen deutlich gemacht werden. Der Verf. glaubt, dass das Palladiumchlorür bestimmt sei, eine der ersten Stellen in der protisto- logischen Technik einzunehmen. 29* 442 Referate und Besprecliungen. I, 3. Aehnliche Effecte erhält er von dem Doppelchlorür des Gold und des Cadmiiim in Iprocentiger Lösung. Audi dieses Salz ist von sehr schneller und prächtiger Wirkung und deformirt den Organismus nicht, während es die verschiedenen Theile fixirt und deutlich macht. Bezüg- lich der protoplasmatischen Körnelungen ist das Reagenz weniger empfehlenswerth als das Palladiumchlorür, während es die Zellkerne viel besser hervorhebt. Weit weniger anwendbar ist das Chlornatrium in wässeriger Lösung von 20 bis 30 %, welche zum mindesten fähig ist, die Süsswasser- protisten zu conserviren, ohne sie zu deformiren. Ueber die marinen Protisten hat der Verf. keine Versuche gemacht. Beim Studium des Protoplasmanetzes ist das Kalium-Quecksilberjodid in einer 1- bis 2pro- centigen Lösung von Nutzen. Es färbt die Gramdirungen des Proto- plasmas schwarz und trennt auch deutlich die Körnelungen der Zellkerne, Schöne und sehr dauerhafte Präparatioueu erhält man mit Sublimat in öprocentiger Lösung. Dieses Reagenz tödtet die Protisten augen- blicklich und, in der richtigen Menge angewandt, macht es sie nicht merklich schrumpfen, fixirt aber mit Schnelligkeit alle anatomischen Eigenthümlichkeiten. Ueberdies ertheilt es dem Protoplasma eine solche Consistenz, dass die mit ihm hergestellten Präparationen für die com- plicirtesten Färbungsprocesse geeignet sind. Verf. untersuchte auch die Wirkung der Osraiumsäure in Ipro- centiger Lösung der der anderen Reagentien gegenüber. Er findet, dass sie stets ein schnelles und wirksames Fixirungsmittel ist, welches die Zellkerne und Körnelungen gut hervorhebt, und welches die Con- touren der Protisten nicht deformirt. Aber die Osmiumsäure-Präparate, mag man sie vor der Färbung auch noch so sorgfiiltig ausgewaschen haben, verlieren mit der Zeit ihre Durchsichtigkeit und werden in hohem Grade dunkel. Verf. stellt in die zweite Reihe als Fixirungsmittel die Chromsäure, die Pikrinsäure, die Pikrinschwefelsäure und das Kaliumbichromat. Die Pikrinsäure in concentrirter Lösung macht die Zellkerne und Kern- körperchen sehr deutlich, verändert die Contouren wenig und lässt auch die Körnelungen deutlich hervortreten, aber jedoch nicht so gut als das Kalium-Quecksilberjodid. Sie kann auch dem Protistenkörper eine dunkelgelbe Farbe ertheilen, welche spätere Färbungen erschwert. Die Pikrinschwefelsäure, welche für andere Organismen sehr brauchbar ist, ist für die Infusorien nur von seeundärer Wichtigkeit. Die Wirkung der Chromsäure ist in vielen Fällen ähnlich der der Pikrinsäure. Sie hebt die Zellkerne gut hervor, aber auch sie ertheilt dem ganzen Orga- Ij 3. Referate und Besprechungen. 443 nismus eine gelbliche Färbung, welche selbst durch wiederholtes Aus- waschen nicht fortgeschafft werden kann. Das Kaliumbichromat wirkt fast ganz ebenso wie die Chromsäure, aber es ist weniger energisch, und ebenso verhält sich die MtJLivER'sche Flüssigkeit. Auch sehr verdünnter Alkohol könnte zur Conservirung von Infu- sorien auf kurze Zeit dienen, allein er empfiehlt sich zu Studien über die Structur viel weniger. Auch die Citronensäure, entweder rein an- gewandt, oder wie sie sich im Citronensafte findet, conservirt die In fusorien nur sehr kurze Zeit, obgleich sie ein sehr schönes Fixirungs- mittel ist. Als Zwischenglied zwischen die Fixirungs-Reagentien und die Färbe- mittel stellt der Verf. das Silbernitrat. Er hat es in einer 1- bis %pro- centigeu Lösung angewandt, und wäscht später das Präparat sorgfältig mit einer Lösung von saurem Natriumsulfat aus. Das Reagenz ist beim anatomischen Studium der Protisten sehr anwendbar, und die Präpara- tioneu halten sich im Dunkeln aufbewahrt lange Zeit. Bezüglich der Färbe'mittel war Verf. wenig zufrieden mit dem Methylviolett, dem Gentianaviolett und dem Bleu de Lion, weil sie keine Differenzirungeu gaben. Besser sind Mageutaroth und Fuchsin, weil sie den Kern etwas intensiver färben als das Protoplasma; noch besser als diese sind das Nigrosin und das Hämatoxylin. Das Nigrosin muss sehr verdünnt sein und lange Zeit einwirken, das Hämatoxylin muss gleichfalls sehr verdünnt sein, langsam einwirken und nach der Vor- schrift von Kleixexbeeg frisch dargestellt sein. Als die vorzüglichsten Reagentien für die Färbung fand jedoch der Verf. stets das gebräuch- liche Carmin und das Pikrocarmin, sei es jedes für sich oder beide zu- sammen angewandt. Als Einschlussmittel zieht der Verf. das Glycerin und das Nelkenöl vor. Zweifellos haben ja die harzigen Einschlussmittel eine allen anderen Mitteln überlegene conservirende Wirkung, aber beim Hartwerden verändern sie stets mehr oder weniger die Contouren der Infusorien. Verf. schliesst seine schätzenswerthe Arbeit mit der Bemerkung, dass alle diese Processe der mikroskopischen Technik niemals ganz die directe mikroskopische Beobachtung substituiren können, sondern dass beide Methoden neben einander hergehen und sich wechselsweise unterstützen müssen, wenn man eine exacte imd genaue Kenutuiss über die feinere Structur der Infusorien erhalten will. J. Martinotü {Turin). 444 Referate und Besprechungen. 1, 3. LeTick, J., Exhibiting Volvox and Amoeba. (Jonrn. R. Mi- crosc. Soc. Ser. II vol. III, 1883, pl. 6, p. 928; cfr. Rep. and Transact. Birmingham nat. Hist. and Microsc. Soc. for 1882, p. XVII — Presidential address). Verf. beabsichtigte, recht übersichtlich und deutlich Volvox globator und Amoeba zu betrachten. Zuerst lenkte er seine Aufmerksamkeit darauf, sie in grossen Mengen zusammen zu heerden, sie aus trübem Wasser in klares zu bringen, und von anhaftenden Fremdkörpern zu befreien. Um sie in grösserer Menge bei einander zu haben, so dass sie das ganze mikroskopische Gesichtsfeld einnehmen, filtrirt der Verf. das Wasser, in welchem sie zahlreich vorhanden, durch sehr feine Draht- siebe (die einzelnen Maschen bis zu '/, oo Zoll eng). Ein derartiges Sieb wird dann in ein seichtes Thongefass gelegt und das die Organismen enthaltende Wasser nicht durch dasselbe, sondern neben ihm in das • Gefäss gegossen. Darauf wird mit Hülfe einer Spritze das Wasser durch das Sieb gezogen , und diese Manipulation so lange fortgesetzt , bis man am Grunde des Gefässes die Volvox dicht genug neben einander hat. Mit Hülfe der Spritze kann man sie alsdann in irgend welcher Menge und Dichtigkeit auf den Objectträger bringen, wobei darauf zu achten ist, dass zwischen Deckgläschen und Objectträger Raum genug für das freie Herumrollen im Wasser bleibt. Auch durch Anwendung von Hitze und Kälte hat Verf. das Sammeln dieser Organismen bewirkt. Man hat nur nöthig, die Temperatur des Wassers, in welchem sie zwar zahlreich vorhanden, aber überall vertheilt sind, durch Eis zu ernie- drigen, wodurch die meisten zu Boden sinken. Wenn sie anderseits, von Schmutz eingehüllt, sich auf dem Boden befinden, braucht man das Gefäss nur in die Nähe des Feuers zu stellen , wodurch sie, lebhaft durch einander wimmelnd, an die Oberfläche kommen 5 ein greller Licht- schein ist im Stande, sie zusammen nach einer Seite des Gefässes zu treiben. Es ist dem Verf ferner gelungen, die Cilien bei Volvox auf einfache Weise deutlich zu machen. Zu diesem Zwecke übt er auf die Volvoxkugeln mit Hülfe des Deckgläschens auf dem Objectträger einen schwachen Druck aus, ungefähr so, dass sich dieselben leicht abplatten. Man lässt alsdann von einer hellen Lichtquelle die Strahlen, namentlich auch die gelben, auf das Object fallen, wobei man die erforderliche Neigung durch ein Paraboloid oder anderweitige geeignete Apparate erzielt. Bei Anwendung der erforderlichen Vergrösserungen erkennt auch das ungeübte Auge sofort das Gewünschte. Auch Amöben bringt Verfasser in Menge zur Besichtigung. Diese Thiere, obgleich keine Schwimmer, besitzen doch die Kraft, im Wasser zu steigen und zu I, 3. Referate und Besprechungen. 445 follen imd sich au abgestorbenen Pflanzenresten anzuheften. Von der letzteren Eigenschaft kann man, um sie zusammen zu heerden, mit Vor- theil Gebrauch machen. Man füllt etwas von der vermoderten Substanz, in welcher sie massenhaft vorhanden, in einen engen gläsernen Trog. Denselben stellt man auf den Objecttisch des Mikroskopes und wartet eine Weile. Alsdann schöpft man vorsichtig auf dem einen Ende den Moder und das schmutzige Wasser aus dem Trog heraus, indem man klares Wasser auf dem anderen Ende einfüllt. Man findet alsdann die Amöben völlig sauber und klar an der Glaswand haften. Gerathen bei dieser Manipulation zufällig Amöben, vom Wasser nicht mehr bedeckt, an die Luft, so zerfallen sie in zahllose Körnchen. Griesbach (Bttsel). B, CoeJenteyateu, EclihiodermeUf Würniet'. Chadwick, H. C, On some experiments made with a view of killing hydroid Zoophytes and Polyzoa, with the tentacles extended. (Microsc. News vol III, 1883, Nr 36 p. 333; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II, vol. IV. 1884, pt. 1, p. 151). Auf die Mittheilung hin , dass marine Polyzoen sowohl, als auch Süsswasserformeu mit Hülfe von einprocentiger Osmiumsäure derartig getödtet würden, dass die Tentakeln völlig entfaltet erscheinen, beschloss der Verf. selbst darüber Untersuchungen anzustellen ; machte aber mit einigen dazu verwandten Exemplaren an Lophopus crystallinus gänzlich Fiasco. Bald darauf erhielt er ein Präparat vou Bugula plumosa zur Besichtigung. Das Thier war mit Osmiumsäure getödtet, die Tentakeln waren fast vollständig entfaltet; aber von dem Reagenz so stark ge- schwärtzt, dass eine Pikro-Carmintinction ganz wirkungslos erschien. Verf. verAvandte daher zu weiteren Experimenten mit derselben Species absoluten Alkohol statt der Osmiumsäure und konnte sich er- folgreicher Resultate erfreuen, dann wurde Lophopus crystallinus in derselben Weise und mit gleichem Erfolge untersucht,, doch schlugen weitere gleiche Versuche mit Bugula plumosa noch mehrfach fehl. Mit Bugula flabellata hatte er manche Schwierigkeiten, doch konnte er nach mehrfachen Versuchen ein gelungen gefärbtes und markirtes Präparat in der Octoberversammlung der „Manchester Microscopical Society" vorführen. — Die angewandte Methode ist folgende: Man bringe das zur Untersuchung gewählte Exemplar in einen kleinen Glas- becher oder in eine durchsichtige Glasflasche und lasse es darin mit Wasser mehrere Stunden. Alsdann nehme man eine mit Alkohol ge- 446 Referate und Besprechungen. I, 3. füllte recht fein ausgezogene Pipette und lasse den Alkohol aus der dicht über die Wasseroberfläche gehaltenen Pipette vorsichtig auströpfeln, nachdem man sich vorher mit einer Lupe versichert, dass sich die Thiere vollständig entfciltet. Der Erfolg des Experiments hängt von der Vorsicht ab, mit welcher die erste Quantität Alkohol in das Wasser gebracht wurde. Nach Verlauf einer Stunde, wenn die Polypen noch entfaltet, setzt man noch so viel Alkohol zu, dass die Flüssigkeit 60pro- centig wird. Man substituire dann diese durch 75 procentigen und endlich durch 90 procentigen Alkohol, um das Präparat zum Montiren geeignet zu erhalten. Bei Hydroidzoophyten erhielt Verf. mit Alkohol weniger günstige Resultate, doch gab dafür Kleinenbekg's Pikrin- schwefelsäure die vortrefflichsten Resultate. Man verfährt in folgender Weise: 100 Thl. einer mit destillirtem Wasser verfertigten kaltge- sättigten Pikriusäurelösung werden mit 2 Thl. concentrirter Schwefel- säure gemischt, filtrirt und mit dem dreifachen Quantum Wasser ver- dünnt. Die Anwendung dieses Reagenzes ist leichter, als die des ab- soluten Alkohols. Experimentirt man mit Aglaophenia pluma oder Plumularia setacea, so bedarf es zur völligen Entfaltung der Thiere einige Stunden. Man fügt dann die KLEiNENBERa'sche Masse ebenfalls durch eine der oben beschriebenen Pipetten hinzu, und zwar so lange, bis sich das Wasser goldgelb färbt. Nach Verf tritt momentan Tod ein. Man bringt darauf für mehrere Stunden erst in 60 procentigen, dann in 55 procentigen und zuletzt in 90 procentigen Alkohol. Die Pikrocarmiufärbung wird dann in wenig Minuten schon erreicht. Grieshach (Basel). Braun, M., Zur Entwicklungsgeschichte des breitenBand- wurms. (Bothriocephalus latus Brehms). Würz- burg, 1883. A. Stuber's Verlag 56 pp. 8«. m. 3 Tafeln. Bkaun's Studien über den Bothriocephalus latus, deren Ergebnisse bekanntlich in dem Nachweise gipfeln, dass die Uebertragung des Wurmes auf den Menschen durch Finnen, welche im Muskelfleische des Hechtes leben, erfolgt, sind in dem vorliegenden Buche ausführlich mit- getheilt. Wenn auch specielle technische Angaben darin nicht vor- liegen, so möge die nach Inhalt und Ausstattung gleich empfehlens- werthe Schrift hier doch Erwähnung finden, weil dieselbe geeignet ist, wegen der sorgfältigen Darstellung des Untersuchungsganges, für ähn- liche Versuchsreihen ein werthvolles Muster abzugeben. Flesch (Bern). I, 3. Referate und Besprechungen. 447 C, VerteJj raten, Rabl-ßückhard, Das Grosshirn der Knochenfische und seine Anhangsgebi Ide (Arch. f. Anat. ii. PhysioL, Anat. Abth. I, 1883, p. 279—322 [Technisches p. 282]). Rabl-Rückhakd färbt Schnitte von in Celloidin eingebetteten Prä- paraten des Nervensystems in Nigrosin, bezogen von Tkomsdokff in Erfurt. Die Lösung muss sehr schwach sein; die Schnitte müssen während der zwölfstündigen Einwirkung derselben gewendet werden, weil sie schlecht eindringt. Alkohol extrahirt die Farbe nicht. Diese Tinction ist vortheilhaft zur Verfolgung der ungefärbt bleibenden mark- haltigen Fasern in dem dunkelblauen Gewebe, insbesondere ist sie ferner gegenüber dem Carmin augenehm zu Untersuchungen bei Lampenlicht. (Der Aufsatz ist vor den in den früheren Heften ^ besprochenen Arbeiten Weigert's erschienen). Flescli (Bern). Yan Noordeu, C, Die Entwicklung des Labyrinthes bei Knochenfischen. (Arch. f. Anat. und PhysioL, Anat. Abthl. 1883, p. 235 — 264). Ein einfaches Verfahren zum Aufrollen und Aufkleben der Schnitte beschreibt van Noorden in folgender Weise. Die Schnitte in Paraffin eingebetteter Präparate Averden auf einen Objectträger geordnet, der vorher mit einer dünnen Schicht einer dünnflüssigen Lösung von reinem Gummi arabicum bedeckt ist ; danach wird der Objectträger ein- bis zweimal durch eine Flamme gezogen, wobei sich die Schnitte aufrollen ; es darf aber die Temperatur hierbei nicht so rasch steigen, dass das Paraffin schwindet, weil sonst eine Emulsion entsteht, die sich auch nach dem Trocknen in Terpentinöl nicht mehr auflöst. Man lässt nun die Lösung antrocknen , jedoch nicht zu lange , damit nicht Risse ent- stehen, zieht mit Terpentinöl das Paraffin aus und fügt Balsam hinzu u. s. w. Flesch (Bern). Ciaccio, G. V., Sur la terminaison des fibres nerveuses motricesdansles muscles stries de la Torpille. (Journ. de Micrographie. 7. annee, 1. fasc, p. 38 — 41). Zu Untersuchungen über die motorische Nervenendigung an den Niederziehern des Unterkiefers von Torpedo marmorata bediente sich Ciaccio einer Methode der Vergoldung, welche zwischen den gebräuch- lichen von LöwiT und Ranvier angegebenen eine Vermittlung darstellt. Plättchen des Muskels, aus dessen vorderem Drittel, 1 mm breit, werden 1) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 123 ff. p. 299 ff. 448 Referate und Besprechungen. I, 3. fünf Minuten lang mit filtrirtem Citronensaft durchtränkt, dann 30 Mi- nuten im Dunkeln in 4 cc einer Lösung, die je 1 Proc. Goldchlorid und Cadmiumchlorid enthält, eingelegt. Danach verweilen die Präpa- rate zuerst im Dunkeln , dann dem Licht ausgesetzt je 12 Stunden in einprocentiger Ameisensäure (50 cc); weiter im Dunkeln in einem kleinen Gläschen, worin sie eben mit Ameisensäure (wie stark?) über- deckt sind. Es folgt Auswaschen mit destillirtem Wasser, Untersuchung in Glyceriu. Flesch (Bern). Grriieuhageu , A., Die Nerven der Ciliar fortsätze des Kaninchens. (Arch, f. mikrosk. Anat. Bd. XXII, p. 369 — 373). Zur Darstellung feiner Nervennetze in den Ciliarfortsätzen des Auges , der Blase des Frosches, der Peritonealwand, der Cysterna magna u. a. m. empfiehlt Geuenhagen die vorher auf kurze Zeit (höchstens '/g Stunde) in verdünnter Essigsäure (12 Tropfen auf 100 H2 0) gequollenen Organe 24 Stunden mit concentrirter alauniger Hämatoxylinlösung (starker Druck des Holzes, Filtration, Zusatz eines gleichen Volumens kaltgesättigter Alaunlösung) zu behandeln. Unter- suchung an Zupfpräparaten ; Nachbehandlung bei Ueberfärbung mit Salzsäure. Glycerin nach Schweigger - Seidel, danach Auswaschen in sodahaltigera Wasser. — Goldpräparate von in derselben Essigsäure- lösung 2 bis 3 Stunden gequollenen Objecten gewinnt Gkuenhagen durch eiustündige Wirkung von '/gprocentiger Goldlösung mit Nach- behandlung — im Dunkeln — in Ameisensäure 1 : 4. Flesch {Bern). H.iiTis, V., On double staining nucleated blood corpus- cles with anilin dj'es (Quart Journ. Microsc. Sei., New Ser. vol. XC, April 1883, p. 292 — 301). Haeeis hat eine grosse Reihe von Combinationen verschiedener Anilinfarben (bezogen von Hopkins und Williams, Hatton Garden, W. C, London) auf ihre Verwendbarkeit zu Doppelfärbungen an kernhaltigen rothen Blutkörperchen geprüft. Die Versuche wurden an auf Deck- gläsern eingetrocknetem Blut von Fröschen und Eidechsen vorgenommen ; zwischen den beiden Färbungen musste das Präparat nach dem Aus- waschen der ersten Lösung nochmals eintrocknen. Folgende Combi- nationen wurden geprüft : I. Versvchsreihe : Grundfarbe Roth : Nebenfarbe : Fuchsin (Fuchsin-Lake). Gelb Anilingelb (Anilin-Primrose). Rosein-Carmoisin (Rosein-Crimson). Orange Tropäolin oder Aurin. Eosin-Rosa (Eosin-Pink). Grün Jodgrün. Blau Methylenblau. Violett HoFMANx's Violett. Braun Bismarck-Braun. I, 3. Referate und Besprechungen. 449 brauchbar: Rosein- Anilingrün; Fuchsin-Methylenblau ; Fuchsin-Bismarck- braun ; Eosin-Vesuvin, //. Versuchsreihe : Grundfarbe Grün : Nebenfarbe : Braun Bismarckbraun. Jodgrün. Roth Flamingo oder Ponceau. Malachit- Grün. Orange Anilin und Anilin-Orange. Gelb Anilingelb. Blau Lyoner-Blau. Violett Methylviolett. brauchbar : Jodgrün-Bismarckbraun, III. Verstechsreihe: Grundfarbe Violett: Nebenfarbe: Methylviolett. Braun Bismarckbraun. Gentiana-Violett. Roth Flamingo, Eosin, Anilin- Scharlach (Anilin-Scarlet). Hofmann 's Violett. Orange Tropäolin. Gelb Anilingelb. Grün Jodgrün. Blau Methylenblau. brauchbar: Hofmann's Violett — Bismarckbraun. Anilin-Violett — Me- thylenblau. Alle Combinationen , welche Grün enthalten, sind wenig haltbar; überall sind Dauer der Färbung, Frische der Lösung u. a. m. von grossem Einfluss. — Es liegt auf der Hand, dass viele der geprüften und selbst einige der empfohlenen Combinationen wegen der zu geringen Contrast- mischung der verwendeten Farben keine praktische Bedeutung haben können. Als nützlich für die Beurtheilung bei neuesten Versuchen möge noch die von Haeeis mitgetheilte Uebersicht der Löslichkeitsverhältnisse der Anilinfarben eine Stelle finden (cfr. p. 450) ; wegen aller Einzelan- gaben muss im übrigen auf das Original verwiesen werden. F/csch (Bern). Giacoiiiiiii, Modificazione al processo classico di indura- mento dei centri nervosi [Modification des klassi- schen Erhärtungsprocesses des centralen Ner- vensystems] (Fascia dentata del grande ippocampo nel cervello umano, Torino 1883, p. 66 — 67). Wenn man Studien über das Gehirn des Menschen anstellen will, so ist es immer schwer, Stücke von hinreichender Frische zu erhalten, welche die genauen mikroskopischen Untersuchungen erfordern. Sehr oft kann man über das Gehirn nicht eher als 36 bis 48 Stunden nach dem Tode und meist sogar erst noch später verfügen. Trotz der grössten Vorsicht, die man bei der Erhärtung nach der gewöhnlichen Methode anwendet, erhält man es kaum vollkommen, und man kann die Schnitte nicht eben sehr dünn anfertigen, oder sie sind an verschiedenen Stellen leicht dem Verderben ausgesetzt. Um dem Präparat eine 450 Referate und Besprechungen. 1,3. CO ^^ -• O p I-. "^ H-. cß a ^£"« _ td CD B CO 'S. C: O: 2 ff l-s B c p h-' O l-t- (^ tr' ' fD w ^ . CO o a CT'« o er ©: CO ►^ I-. CD 2 sLS- CD »!-••'— O 00 p p" I-. er -. p CD o cZ cr:r^ g ^ CD rt- r: »^ 2. CD_ ^ ^ 5^ p p ^ g;P B er; 3 3 CD P 2.cfo. ^1 o er o K= E s' S" ::: E " o K ."^ ►;. 1— • w s- K 3 H-.r er :^ q p 5 tr p.aq ^^ ^ CD (Tt- cr CO ö CD hL r- CD o :^ er p c^ er o P CO K- e* '' <^ e:' !» K" i^ er ^ p «= e;* «^ c-ctq CO 2^ P P ^ , C <* CD 3 er t-i i^ ^ ►J. CD '-^ tj. CO H^. CD "-S , e= <^ a r^ w ^ 5 O: es CO ►5* CD CO •-! CD CD erg CJ O tSCD CO ^ >-^ C er o 3 ,CD er , s« <» ^ CD CD ;^ 2.0-5='« g cS >= °!2. n:: S. ? |r- sr'g 1^ t= P p ^ § S- 2 2 ^- ^ ►i- c» tL 3 es CD CD I I er^^ I i_K -i" >r ^ es CO re ►-' p" ^ o tr o p es <-•■ 2 c/l P CD _■ CD CD B £ tZI CO 2 ^'^ ».5 p ii CO ^ CO rr CD Ü CD K Ter er c p] o -oe! '^ er« «^ es ^ > -• ^' 5- ^' ^ n =^ ■' o s tr CS CD ^ ^. B S • (K B '^ :?2. 2 ei s-=^ » es B- I I L ^ s c^ (Ti »-^ 2r Hj ^ I ►;• CD ?:. er s ►-; s 2 •—1-5 CD es^ ^. "^ M ST •* CS CD „ CD t±i C S G_ CO 2 2.-{l s- =« •* iS. O 00 O 03 ££^ CS I I I »-S I r^ ^ S: S c- '^ '^ P -/^ P ^ S: £= 2, c: ^ ^ i' -„. p: P er c?- » es CD B £, o CR CD 2, -. CD es o er td tö CO o er O ^( '—•^ ' — ^ *■" ^»J H- CT- — ^2. tö^ 2."- ^2. '-•5 O: o er. P ^ O P CD CK OCD er ■ a' td ? 5" p" CD P O 5£ er O: CS er P -. p'2. C: CD' O" CD , p er ;fS^ Hj K* - CD s c er CD O ' '^ I CS CS &er C P S 00 3 CO ■ CD 1-S — ^ o CD 3 P CO o; M rft ?7^ Cß O tö s s ^ s Ci tö a s h3 o I— ' I—' (D P- O 4 o O CD ) Hierzu erlaubt sich Ref. die Bemerkung, dass nach Härtung der Objecto in MüELER'scher Lösung (und nachträglich in absolutem Alkohol) eine minde- stens ebenso schöne und vollständige Tinction der Tuberkelbacillen zu erzielen ist, als nach einfacher Alkoholhärtung. 454 Referate und Besprechungen. I, 3. 12 Stunden in der Färbmigsflüssigkeit bleiben; die Färbung der Deck- gläschen kann jedoch durch Erhitzen der Farblüsung (bis zum be- ginnenden Blasenwerfeu) bis auf 10 Minuten abgekürzt werden; in allen schwierigen Fällen, wo es sich um den Nachweis vereinzelter Bacillen handelt, sollen aber auch die Deckgläschen 12 Stunden auf der Farbstoifmischung schwimmen. Die gefärbten Präparate werden nun einige Secunden, bis höchstens '^ Minute mit verdünnter Salpeter- säure (1 Theil Säure auf 3 bis 4 Theile destillirtes "Wasser) behandelt und kommen direct aus der Säure während einiger Minuten (für Deck- gläser genügt mehrmaliges Hin- und Herbewegen) in 60procentigen Alkohol, welcher, wie Koch gefunden, den nach der Säureentfärbung noch übrig bleibenden Farbstoff-Rest den Präparaten entzieht. Dann wird in verdünnter AA^ässeriger Vesuvin- (resp. Methylenblau-)LüSung — die Schnitte einige Minuten, die Deckgläser kürzere Zeit — nachgefärbt; letztere können sofort nach dem Abspülen der Vesuviulösung mit Wasser, in letzterem untersucht werden, oder man lässt sie nach der Abspülung eintrocknen und untersucht in Balsam. Für die Untersuchung des Sputum auf Tuberkelbacillen kann überhaupt die Nachfärbung in der Regel entbehrt werden. Schnitte werden nach der Nachfärbung noch- mals in GOproceutigem Alkohol gespült, sodann in absolutem Alkohol völlig entwässert und danach in Cederuöl, welches die Anilinfarben nicht aus den Präparaten auszieht, aufgehellt und darin untersucht; sollen sie conservirt werden, so legt man sie in Canadabalsam ein, der mit Terpentinöl verdünnt ist. Sehr dickflüssiger Balsam, welcher erwärmt werden muss, imi das Präparat einlegen zu können, darf nicht verwendet werden, weil beim Erwärmen die Tuberkelbacillen ge- wöhnlich schnell entfärbt werden. In Betreff des von Koch behufs Isolirung und Reincultur der Tuberkelbacillen eingeschlagenen Originalverfahrens enthält das aus- führliche Werk grösstentheils nur die detailirtere Schilderung dessen, was bereits in der allbekannten vorläufigen Mittheilung darüber ange- geben ist; ein besseres Referat über diesen Theil der Untersuchung als Koch's eigene kurze Zusammenfassung dürfte nicht möglich, zu einem vollständigeren aber der hier zu Gebote stehende Raum nicht ausreichend sein; wir müssen daher in dieser Hinsicht auf das Original verweisen, dessen genaue Kenntniss ohnedies für Jeden unent- behrlich ist, der sich für die moderne Bacterienforschung interessirt. Als eine n e u e T h a t s a c h e in Betreff der Züchtung des Tuberkelbacillus ist hervorzuheben, dass es Koch jetzt, nach früheren vergeblichen dies- bezüglichen Versuchen, gelungen ist, die Tuberkelbacillen auch iu I, 3. Referate und Besprechungen. 455 Flüssigkeiten, und zwar in ueutralisirter Fleischbrühe zu züchten ; nachdem er Stücke der auf dem coagulirten Serum gewachsenen Bacillen- schüppcheu fein zertheilt unter Schütteln dem Fleischinfus beigemischt hatte, bildete sich dann in der klar bleibenden Flüssigkeit im Laufe von 4 bis 5 Wochen ein sandartiger, weisser Bodensatz, dessen einzelne Körnchen ausschliesslich aus Tuberkelbacillen bestanden. (Die früheren Autoren über Reinculturen von Tuberkelorganismen in Flüssigkeiten hatten eine unter Trübung der letzteren schon in den ersten Tagen nach der Aussaat vor sich gehende Entwicklung angenommen, müssen es daher mit etwas Anderem zu thun gehabt haben, als mit Wucherungen von echten Tuberkelbacillen). Koch legt Gewicht darauf, dass die Culturen in flüssigen Nährsubstraten in EELENMEYEE'schen Kölbchen vorgenommen werden, deren Boden nur einen halben, bis höchstens ein Centimeter hoch mit der Culturflüssigkeit bedeckt ist. Bolliuger, 0., Zur Aetiologie der Tuberculose. München (Rieger'sche Universitäts-Buchhandlung) 1883. In dieser in pathologischer Hinsicht sehr bemerkenswerthen Schrift des rühmlichst bekannten Autors findet sich auch ein Abschnitt, in welchem die, in der im nächsten Heft zu referirenden Arbeit von Celli und GuARNiERi ebenfalls behandelte Frage nach „der Infectiosität der Luft in Räumen, welche von Pthisikern bewohnt werden", auf einem anderen, technisch noch einfacheren Wege zu entscheiden versucht worden ist. BoLLiNGER liess in Räumen, die von schwerkranken Schwindsüchtigen längere Zeit bewohnt waren, und die, wie z. B. bei armen Patienten der Poliklinik unreinlich gehalten wurden, sowie in Räumen des Münchener Zuchthauses, die mit tuberculosen Gefangenen belegt waren, mit reinstem Glycerin bestrichene Teller aufstellen, die alsbald einen reichlichen Nie- derschlag der, in der Krankenzimmerluft suspendirten, körperlichen Par- tikel zeigten. Das so verunreinigte Glycerin wurde 15 Versuchsthieren (Kaninchen und Meerschweinchen) intraperitonäal geimpft, ohne dass die geringste Tuberkelentwicklung danach auftrat *. Fräukel, B., lieber die Färbung des Koch'schen Bacillus ') Man könnte gegen die Beweiskraft dieser Untersuchungsmetliode ein- wenden, dass das Glycerin, bekannt als ein ,.Antisepticum", die Virulenz der aufgefangenen Tuberkelbacillen zerstört liabe. Indessen wird sich jedenfalls ein Forscher wie Bollinger zuvor durch Controlversuche gegen diesen Ein- wand geschützt haben. Da mich die Sache interessirte, habe ich selbst exquisit virulente Tuberkelbacillen längere Zeit der Einwii-kung des Glycerin unter- worfen, ohne Verlust oder auch nur Abschwächung der Infectionsfähigkeit der Bacillen danach eintreten zu sehen. Ref. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I, ,S. 30 456 Referate und Besin-ecbungen. I, 3, und seine seraiotisclie Bedeutung für die Krank- heiten der Respirationsorgane, (Berl. klin. Wochen- schr., 1884, No. 13). Der Verf. beschreibt in seiner verdienstlichen Mittheiluug sein Ver- faln-en zum Nachweise der Tuberkelbacilleu an Deckgläschentrocken- präparateu zu praktisch-diagnostischen Zwecken, welches den Grund- zügen nach das bekannte EHELicn'sche Verfahren, mit einer kleineu zweckmässigeu Modification desselben, darstellt. FeÄnkel bestätigt zu- nächst die namentlich durch die Untersuchungen des Referenten ' fest- gestellte Thatsache, dass alkoholische Lösungen von Methylviolett und Fuchsin, in Wasser eingetragen, die Tuberkelbacilleu schliesslich deut- lich förben. Da aber, nach dem Verf., die so erzielte Färbung, auch in der Wärme, weder so durchgreifend, noch so intensiv ist, als wenn der Färbeflüssigkeit Zusätze gemacht Averden, so verwendet Fkäxkel stets zu seiuen Färbungen Ehrlich's Auilinöl, Avelches er nach zahl- reichen ControUuntersuchungen als das wirksamste und zuverlässigte tinctorielle Adjuvans erkannt hat ^. (Nur das dem Anilin homologe (Ortho-) Toluidiu, welches in jedem käuflichen Anilin als Verunreini- gung euthalteu ist, selbst aber vollkommen rein im Handel vorkommt, leistet mindestens dasselbe, wie das Auilinöl). Löst man 3 cc Auilinöl in 7 cc (resp. 1*5 cc Toluidiu in 8*5 cc) Alkohol auf und setzt 90 cc destillirtes Wasser zu, so erhält man eine haltb are Lösung, die ausser- dem nicht, wie die einfach wässerigen Solutionen, des Filtrirt- werdens benöthigt. 100 Theilen dieses Anilinwassers werden nun (nach Wkigert) 11 Theile eiuer gesättigten alkoholischen Methylviolett- oder Fuchsinlösung hinzugesetzt. Zweckmässiger als das Vorräthig- halten fertiger Farbstofflösuugen erachtet es Feänkel, die Färbe- flüssigkeit jedesmal vor dem Gebrauche frisch zu bereiten, indem man von der in einem Glas mit Tropfenzähler aufbewahrten alkoholischen Farbstoifsolution soviel dem ebenfalls vorräthig zu haltenden alkoho- lischen er war m t eu Auilinwasser zuträufelt, bis mau eine opalisireude kräftige Farbe, jedoch keinen eigentlichen Niederschlag erhält. Die Erwärmung des Anilinwassers vollzieht Fkäxkel in der Weise, dass er ungefähr 5 cc Anilin- resp. Toluidinwasser in einem Reagenzgläschen bis zum Kochen erhitzt, und sie dann in ein L'hrschälchen giesst. Auf diesem heissen , mit dem Auilinfarbstoff in obiger Weise versetzten Anilinwasser schwimmend, färben sich die Deckgläscheu in zwei Minuten ') Cfr. diese Zeitsclir. Bd. I, 1884, p. 51. 2) Wie auch Ref. (1. c. p. 60). [Ref.]. I, 3. Referate und Besprecliungen. 457 an; „will mau ein Uebriges thun, so kann man sie 5 bis 10 Minuten schwimmen lassen". Auf die D o p p e 1 färbung der Präparate legt Fkänkel grosses Gewicht, weil sie die differenzirende Wirkung der Säure wesentlich unterstützt. Da Methylenblau die gewöhnlichen Spaltpilze besser färbt als braune Anilinfarbstoffe, so giebt er ersterem und damit der Fuchs in färbung der Bacillen den Vorzug. Er stellt sich nun — und hierin liegt das Eigeuthümliche seinesVer- fahrens — saure alkoholische Lösungen des zur Coutrastfärbung be- stimmten Farbstoffes her und zwar 1) für Blau: 50 Alkohol, 30 Wasser, 20 Salpetersäure; soviel Methylenblau, als sich nach wiederholtem Schütteln löst (zu filtriren) ; 2) für Braun : 70 Alkohol, 30 Salpeter- säure ; soviel Vesuviu, als sich löst (zu filtriren) ; 3) für Grün : 50 Al- kohol, 20 Wasser, 30 Essigsäure; soviel Malachit- oder Aethylgrün, als sich löst (zu filtriren). Legt man nun in eine solche Lösung (die sich conserviren, also vorräthig gehalten werden können), das gefärbte Deckgläschen hinein, so erscheint es in kurzer Zeit (nach 1 bis 2 Minuten) mit der zweiten Farbe gefärbt. Darauf wird das Deckgläschen in Wasser oder schwach saurem (1 Procent Essigsäure) 50procentigem Alkohol abgespült und gut getrocknet (erst zwischen Fliesspapier, dann noch einmal kurz Flamme). Man kann so in 4 Minuten bequem ein vollkommen brauchbares, doppelt gefärbtes Präparat herstellen. Erwähnenswerth ist noch das Urtheil, welches Feänkel hinsicht- lich der Verwerthbarkeit der neuen GiBBEs'scheu Methode der Tuberkel- bacillenfärbung ' gewonnen hat. Seine Resultate waren nicht so un- günstig, wie die des Referenten, indem Fkänkel sowohl mit der Gibbes- schen Originalflüssigkeit, als auch mit Mischungen von gleichen Theilen concentrirter alkoholischer Lösungen von Methylenblau und Fuchsin, die in EHRLicn'sches Anilinwasser eingegossen waren, Rotlifärbung der Tuberkelbacillen neben Blaufärbung der Fäulnissbacterien in der That erhalten hat; als zuverlässig hat aber auch Feänkel das Verfahren von GiBBES nicht gefunden, indem er nicht selten Tuberkelbacillen in der Farbe der Fäulnissbacterien, und umgekehrt Fäulnissbacterien in der Farbe der Tuberkelbacillen sich präsentiren sah 2. ') Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 292. 2) Damit fällt natürlich die diagnostische Verwerthbarkeit der Methode, wie dies auch Fränkel hervorhebt. In neuerer Zeit habe ich nach 24stündiger Einwirkung der GinBEs'sclien Flüssigkeit an Schnitten von gefaulter Perlsucht- lunge, die neben zahlreichen Tuberkelbacillen unzählige Massen der ver- schiedensten Fäulnissmikroorganismen beherbergten, neben Rothfärbung der 30* 458 Referate und Besprechungen. I, 3 Schill, E. inul Fischer, B., Ueber die Desinfection des Auswurfs der P li t h i s i k e r. (Mittlieil. a. d. Kaiserl. Ge- sundheitsamt, Bd. II p. 131 — 146). Die Desiufectionsversucbe erstreckten sicli sowohl auf einge- trocknetes, als auf feuchtes Sputum. Die Eintrocknung der Sputa (es wurden immer solche gewählt, die ganz besonders reich an Bacillen- sporcn waren) wurde auf Glasplatten bei Zimmertemperatur vor sich gehen gelassen; die eingetrockneten Massen wurden mit dem Messer abgeschabt und in einer mit Korkstöpsel verschlossenen Flasche ver- wahrt. Bei Verwendung flüssiger Desinfectionsmittel wurden in der Regel 2 bis 3 Bistouri-Messerspitzen des getrockneten, oder die ent- sprechende Menge des feuchten Sputums, in ein Glasnäpfchen gebracht, welches 6 bis 7 cc Flüssigkeit aufnehmen konnte; das Näpfchen wurde bis an den Ftand mit der desiuficirenden Flüssigkeit gefüllt und mit einer Glasplatte bedeckt. Das Sputum kam auf diese Weise etwa mit der 8- bis 12 fachen Menge des Desinficiens in Berührung. Die Dauer der Einwirkung erstreckte sich auf 1 % bis 24 Stunden. Wurden mehr oder weniger flüchtige Körper auf ihre Desinfectionskraft geprüft, so geschah dies in der Weise, dass mit der oben bezeichneten Sputum- menge versehene Uhrschälchen unter Glasglocken oder unter mit luft- dicht schliessenden Glasdeckeln bedeckten Glasgefässen den Dämpfen dieser Körper, welche vorher in kleinen Glasnäpfchen oder in Filtrir- papier eingesogen, in die Apparate eingeführt waren, bei Zimmer- temperatur exponirt wurden. Um die Einwirkung trockner Hitze auf das Sputum zu erproben, wurden mit letzterem gefüllte Uhrschälchen in den Trockenschrank und zwar unmittelbar neben die Kugel des die Temperatur des Schrankes anzeigenden Thermometers gesetzt. Bei Prüfung des desiuficirenden Einflusses des strömenden Wasser- dampfes von 100" C. beförderten die Verff". die sputumhaltigen Probirschälchen in den im Kaiserlichen Gesundheitsamte gebräuchlichen Dampfsterilisationsapparat*. Das Kochen des Sputum fand in einem Reagenzgläschen statt. Als Controlle für den etwaigen Erfolg der Des- Tuherkelbacillen allerdings die in Haufen liegenden IMikrokokken und auch einige Fäulnissstäbchen blau gefärbt gefunden; aber die weitaus grösste Mehr- zahl der letzteren hatten ihre Farbe bei dem wegen der starken üeberfärbung nothwendigen längeren Abspülen in Methjlalkohol an diesen abgegeben, so dass ich also leider auch jetzt nicht in der Lage bin, aus eigener Erfahrung Günstiges über die Methode berichten zu können. •) Beschrieben im L Bd. der Mittheilungcii des Kaiserl. Gesundheits- amtes p. 332 f. I, 3. Referate und Besprecliungen. 459 infectionen wurde die Impfung der dem Experiment unterworfenen Spntum- massen auf Meerschweinchen benutzt. Anfangs wurde zu den Ver- suchen aus bestimmten Gründen nur eingetrocknetes Sputum verwendet ; da sich jedoch herausstellte, dass nach längerer Dauer der Eintrocknung die Bacillen resp. deren Sporen ihre Virulenz allmälilig von selbst verlieren (schon nach sechsmonatlicher Trocknung fanden die Verff. das Sputum nicht mehr specifisch wirksam), so experimeutirten sie später nur mit ganz frischem oder nur 5 bis 14 Tage lang ge- trocknetem Sputum, von dessen ursprünglicher Infectionskraft sie sich durch Controllversuche überzeugten. Bei den Versuchen mit solchen Desinficientien, die auch für Desinfectionszwecke in der Praxis verwerth- bar erschienen (wie z. B. trockne und feuchte Hitze, Sublimatlösung, absoluter Alkohol, Carbolsäurelösung, gesättigtes Anilinwasser), waren die Verff. darauf bedacht, dieselben so anzustellen, dass aus ihnen wo- möglich sogleich ersehen werden konnte, unter welchen Bedingungen auch in der Praxis eine sichere Desinfection zu erwarten war. Von diesem Gesichtspunkt aus ordneten sie z. B. die Experimente über den Einfluss trockner und feuchter Hitze auf trocknes Sputum so an, dass sie soviel wie eine kleine Bohne von dem, 5 Tage auf einer Glasplatte getrockneten Sputum in eine Kapsel aus Filtrirpapier brachten, und diese letztere, ehe sie sie in den Trockenschrank resp. Dampfsterilisa- tionsapparat einführten, noch in ein Stück Leinwand derart einschlugen, dass sie von drei Lagen derselben umgeben war (dies Einwickeln in Leinwand geschah mit Rücksicht darauf, dass es sich beim Desinficireu von ganzen Kleidungsstücken, AVäschegegenständen etc. in praxi, wohl kaum würde vermeiden lassen, dass die mit den tuberkulösen Sputis befleckten Stellen von angrenzenden Theilen der Kleidung mehr oder weniger bedeckt und demzufolge der unmittelbaren Einwirkung der Hitze des Trockenofens resp. Dampfapparates entzogen wurden); das feuchte Sputum aber internirten sie, der Analogie mit den Spuckge- fässen der Phthisiker wegen, in Becher gläsern, welche mit 20 g desselben erfüllt waren, in den Dampfsterilisationsapparat. Ferner versuchten sie gleichfalls mit Rücksicht auf praktische Desinfections- zwecke, die zur Desinfection einer gegebenen, genau abgemessenen Sputumquantität ausreichende Menge und Concentration der flüssigen Desinfectionsmittel, sowie die hierzu nöthige Zeitdauer ihrer Einwirkung festzustellen; das letztere geschah auch bei den Versuchen über den Einfluss der trocknen, feuchten und Koch-Hitze. Ausser den bereits genannten Agentien prüften die Verff. noch folgende Substanzen auf iliren Werth als Desinfectionsmittel : Salmiakgeist, Natronlauge, Kali- 460 Referate und Besprechungen. I, 3. lauge, arsenigc Säure, Joclkaliumlösung, Jocloformdämpfe, Joddämpfe, Kreosot, Thymol, Naphtlialin, Bromkalium, Bromwasser, Jodoformwasser, Jodwasser, Jodoform in Oel, Jodoform in Terpentinöl, Salicylsäurelösung, Terpentinöldämpfe, Essigsäure, Kochsalzlösung, Auiliuöldämpfe. Als wirksam d. h. die specifisclie lufectiosität des tuberkulösen Sputums aufhebend erwiesen sich nach ihren Untersuchungen folgende Mittel : Alkohol, absolutus, gesättigte wässerige Salicylsäurelösung, Sproceutige Carbolsäurelösung, Slprocentige Essigsäure, gesättigtes Anilinwasser, Salmiakgeist (16-6 in 100), die bei Zimmertemperatur sich entwickeln- den Dämpfe von Anilinöl (sämmtlich bei 20stündiger Einwirkung), Wasserdämpfe von 100*^ C. (bei frischem Sputum nach 15 Minuten langer, bei getrocknetem nach 30 bis 60 Minuten langer EinAvirkung), und 10 bis 20 Minuten langes Kochen. Krause, F., Ueber einen bei der acuten infectiösen Osteo- myelitis des Menschen vorkommenden Mikrokok- kus. (Fortschr. d. Med., 1884, No. 7 u. 8 ; p. 221, p. 261). Zur Untersuchung wurde fast ausschliesslich nur solcher Knochen- eiter benutzt, welcher bisher nie mit der Luft in Berührung gestanden hatte. Der unter allen aseptischen Cautelen entleerte Eiter wurde in sterilisirten, mit Watte verschlossenen Reagenzgläsern aufgefangen, so- fort mikroskopisch untersucht und auf die betreffenden Cultursubstrate ausgesäet. Als solche wurden benutzt : sterilisirtes coagulirtes Hammel- blutserum, Fleischaufguss-Pepton-Gelatine imd Fleischaufguss-Pepton- Agar-Agar (in beiden Zusammensetzungen wurde Peptonum siccum 1 — 2 7o? Kochsalz 0-5 — 1 %, Natrum phosphor. bis zur Neutralisation, Gelatine 5 % oder au deren Stelle Agar-Agar 1 — 1'/^ % genommen). Die erste Aussaat des Eiters geschah in allen Fällen einerseits auf obige Agar-Agar-Mischung, welche in Form eines lauggezogenen Tropfens auf Objectträgern ausgebreitet wurde, andererseits auf Hammelblutserum, welches in den im Kaiserl. Gesundheitsamt zu Züchtungszwecken ge- bräuchlichen viereckigen Glasnäpfchen mit aufgeschliffenen Glasdeckeln starr gemacht worden war. Die inficirten Objectträger und Näpfchen wurden in der feuchten Kammer zum Theil der Brüttemperatur ausge- setzt, zum Theil bei Zimmertemperatur gehalten. Nach 24stündiger Einwirkung der Brutwärme ist auf beiderlei Apparaten eine üppige Bacterienentwicklung zu constatireu, und zwar markiren sich die Wachs- thumsproducte, in ihrer natürlichen Lage auf den Culturböden direct mikroskopisch bei schwacher Vergrösserung (Seibeet Obj. 1 Ocul. I) betrachtet, in Form kleiner, runder, g r a u g e 1 b 1 i c h e r Heerde, weiche aus den Impfstrichen emporgeschossen sind. Namentlich au den Stellen, I, 3. Referate uml Besprechungen. 401 an denen dem Eiter Blut beigemengt war, bieten die Bacteriencolo ieu schon in natürlicher Erscheinung durch ihre gelbe, in den späteren Tagen ins Orange übergehende Farbe ein hübsches und charakteristi- sches Bild dar. Die die Colonien zusammensetzenden Mikroorganismen erweisen sich ausschliesslich als Mikrokokken, die weder durch ihre Form, Grösse oder Anordnung zu Ketten oder dgl. Unterscheidungs- merkmale von andersartigen Kokkenarten an die Hand geben ; sie bilden gleichmässig dichte Basen. Es ist deswegen das Aussehen der Culturen im natürlichen Zustand oder bei schwacher Vergrösserung das einzige entscheidende morphologische Kriterium für diese „Osteomyelitis-Kok- ken". Von charakteristischer Bedeutung ist aber auch der Geruch nach „verdorbenem Kleister", welchen die in der feuchten Kammer ge- haltenen Culturen beim Gelbwerden entwickeln und der am intensivsten zu bemerken ist in dem Augenblick, wo man die Glocke der feuchten Kammer aufhebt. — Am zweiten bis dritten Tage wurden die Culturen auf neue Objectträger oder in Reagenzgläser, zur weiteren Fortzüchtung auf den besprochenen Nährsubstanzen, übertragen, ohne dadurch in den neu entstehenden Colonien ihre Form und charakteristische Farbe zu ändern. In den Gelatineculturen, die natürlich nur bei Zimmertemperatur angestellt werden konnten, war die Entwicklung der Bacterienvegeta- tionen, wie auch auf den in Zimmertemperatur gehaltenen Agar-Agar- und Serumculturen, eine geringere; ausserdem verflüssigte sich die Gelatine meist oberflächlich, wobei sich die Mikrokokken als orange- farbener Bodensatz au der Grenze von festem nnd flüssigem Theile des Cultursubstrates ablagerten. — Auch auf Kartofl'elscheiben ist es Kkause gelungen, Reinculturen der Kokken des osteomyelitischen Eiters zu erzielen. Nach diesen Resultaten seiner Culturversuche hält es Verf. für sicher, dass er es mit demselben Mikrokokkus zu thun gehabt hat, wie Dr. Becker, welcher die ersten Angaben über Reinculturen specifi- sclier Osteomyelitiskokken gemacht hat \ Bemerkenswerth ist noch, dass Krause constatirte, dass die Milch unter dem Einfluss des Lebens- processes der Osteomyelitiskokken die saure Gährung erleidet. Die ganz frische Milch wurde in EELESMEYER'scbe Kölbchen und in Reagenz- gläser gefüllt, und im Dampfsterilisirungsapparate drei Tage hinterein- ander jeden Tag eine Stunde lang im strömenden Wasserdampf auf 100" C. erhitzt. Impft man nun die sterilisirte Milch aus einer Rein- cultur in der üblichen Weise mit einem geglühten Flatindraht, so ge- ') Becker in Deutsche med. Wochenschr., 1883, No. 46. 462 Referate und Besprecliungen. I, 3. rinnt dieselbe vollständig zu einem dicken zusammenhängenden Klumpen und reagirt dabei sehr deutlich sauer. Die reincultivirten Mikrokokken wurden nun in Aufschwemmungen, welche durch Verflüssigen der Gelatiueculturen bei 30" C. gewonnen waren, mittels der im Kaiserl. Gesuudheitsamte gebräuchlichen leicht sterilisirba- reu. Spritzen von Metall imdGlas auf verschiedene Thierspecies übertragen und es wurde bei diesen eine pyämieartige Erkrankung mit Muskel- und Gelenkabscessen, und auch Osteomyelitis suppui*ativa in zuvor fracturirten Knochen erzeugt, ein Erfolg, welcher den pathogenen Charakter der cultivirten Kokken sicherstellt, obwohl das erhaltene Krankheitsbild der typischen acuten infectiösen Osteomyelitis der Menschen nicht völlig entspricht. Uebrigeus hat Kbause denselben Kokkus wie bei Osteo- myelitis, auch in gewöhnlichen Carbunkeln gefunden. Bei der mikro- skopischen Untersuchung der Gewebe der Versuchsthiere auf die darin vorhandenen Kokken bediente sich Verf. mit vielem Vortheil des soeben reproducirten GRAai'scheu Verfahrens (cfr. p. 451). -E7. Botanisches. Strasburger, Er., Zur Entwicklungsgeschichte der Spor- angien von Trichia fallax (Botan. Zeitg. 1884. p. 305 ff., 321 flf.). Auf einer Reise in der hohen Tatra fand Verf. die faulenden Baumstümpfe eines üppigen Fichtenwaldes reichlich mit Myxomyceten besetzt, unter denen die corallenrothen Sporangienanlagen von Trichia fallax schon von Aveitem in die Augen fielen. Da sie so reichlich vorhanden waren, Hessen sich leicht alle Entwicklungszustände von der ersten Anlage bis zum fertigen Zustande ausfindig machen. Weil nun aber eine Unter- suchung an Ort uud Stelle nicht ausführbar, die Lösung der zu stellen- den Frage auch nur an gehärtetem Material zu entscheiden war, wurde reichliches Material gesammelt und conservirt. Sporangien aller Ent- wicklungszustände wurden sammt Theilen des Substrates in Iprocen- tige Chromessigsäure (0*7 Chromsäure, 0*3 Essigsäure), concentrirte Pikrinsäure und absoluten Alkohol eingelegt; auch Iprocentige Os- miumsäurc kam zur Verwendung, erwies sich aber als wenig brauchbar. In der Chrom- und Pikrinsäure verweilten die Objecte 24 Stunden, um dann in ausgekochtes Brunnenwasser übertragen zu werden. Dieses wurde so lange gewechselt, als noch Spuren von Färbung auftraten. Nachdem die Objecte etwa 24 Stunden in Brunnenwasser zugebracht hatten, gelangten sie in 20procentigen Alkohol, der nach einigen Tagen I. 3. Referate und Besprechungen. 463 durch SOprocentigen ersetzt wurde. In absolutem Alkohol und der Iproceutigeu Chromessigsäure entfärbten sich die Sporaugienanlagen sehr bald, in Pikrinsäure behielten sie aber Rosafärbung. — Bei der mehrere Wochen nach dem Sammeln des Materials vorgenommenen Untersuchung Hessen sich von den gehärteten Objecten zwischen Hollundermark die feinsten Schnitte anfertigen, die theilweise unmittelbar, theilweise nach vorhergegangener Tinction mit Hämatoxylin untersucht wurden. Am brauchbarsten zeigte sich das Pikrinsäurematerial, doch stand das Chromessigsäure- und Alkohohnaterial nur wenig nach. Am besten tingirten alte Hämatoxylinlösungen, welche mit sehr viel destillir- tem Wasser verdünnt zur Anwendung kamen (dieselben werden überhaupt als ein Mittel empfohlen, durch welches in sehr einfacher Weise gute Färbungen zu erzielen seien) ; für ein mit destillirtem Wasser angefülltes Uhrglas waren nur wenige Tropfen der Hämatoxylinlösung nöthig, und die Färbung vollzog sich in wenigen Stunden. Ueberfärbte Präparate gaben bei längerem Liegen in destillirtem Wasser den Ueberschuss wieder an Wasser ab. Um rascher zum Ziele zu kommen, wurde auch wässerige Alaunlösung gebraucht (Eisenalaun wirkte am energischsten). Dr. 0. E. B. Zimmermann {Chemnitz). Rosollj A., Beiträge zur Histochemie derPflanze. (Sitzungs- ber. d. k. Acad. d. Wiss. Wien. Bd. LXXXIX, 1. Abth., 1884. p. 137—150; cfr. Monatsh. f. Chem. Bd. V. H. 2, 3. p. 94 ff.). Die Arbeit enthält nebst der Charakteristik zweier neu aufgefun- dener Pigmente (Hell chry sin und Peziziu) auch zwei mikro- chemische Abhandlungen, über welche hier referirt werden soll. Ueber den directenNachweis desSaponin imGewebe der Pflanzen. In trockenen saponiuhaltigen Drogen erscheint das Glycosid in Form homogener weisslichgrauer Klumpen, die sich in Wasser und verdünntem Alkohol lösen, durch absoluten Alkohol und Aether jedoch nicht gelöst werden. Bei Berührung mit reiner concen- trirter Schwefelsäure färben sich die Klumpen gelb und lösen sich nur allmählich auf. Die Färbung geht rasch in lebhaftes Roth und später in Blauviolett über. Dass hier nicht etwa eine Verwechslung mit der RASPAiL'schen Eiweiss-Zucker-Reaction vorliege, schliesst Verf. einer- seits aus der Art der Farbenwandlung ^— Raspail's Reaction beginnt und schliesst mit Roth — anderseits aus dem Umstände, dass nach längerem Kochen saponinhaltiger Schnitte in Wasser, wobei das Saponin in Lösung gegangen ist, durch die RASPAiL'sche Reaction (Zucker und Schwefel- säure) Protoplasma nur in der Cambialzone und in höchst geringer Menge hie und da im übrigen Zellgewebe nachweisbar ist. Die Saponin- 464: Eeferate und Besprechungen. I, 3. reaction mit Scliwefelsäiire hält Verf. für sehr charakteristisch und em- pfindlich, ihre Präcision hänge von dem Conceutrationsgrade der Säure ab, so zwar, dass bei Anwendung verdünnter Säuren die Farbentöne langsamer und weniger intensiv erscheinen. Mittels dieser Reaction wurde das Saponin im Inhalte aller Zellen des Parenchyms der Mittel- rinde, der Markstrahlen und des Holzparenchyms der Wurzeln und Sto- lonen von S a p o n a r i a o f f i c i n a 1 i s L. und G y p s o p h i 1 a S t r u t h i u m L., sowie im Pareuchym der Mittelrinde von Quillaja Saponaria nachgewiesen. In den lebenden Pflanzen kommt das Saponin im Zell- safte gelöst vor. Ueber den Sitz und den mikrochemischen Nachweis des Strychnin in den Samen von Strychnos Nux vomicaL. und St. potatorum S. Der Inhalt der Endospermzellen von Strychnos- Samen besteht aus Eiweiss, Zucker und fettem Oel. Legt mau mikro- skopische Schnitte in concentrirte Schwefelsäure, so färbt sich der In- halt anfangs gelb, dann rasch rosen- oder zwiebelroth, nur die Oel- tröpfchen bleiben farblos. Fügt man ein sehr kleines Stückchen Kalium- bichromat hinzu, so färben sich sämmtliche Oeltröpfchen schön violett. Bei nur geringem Zusatz von Osmiurasäure werden die Oeltröpfchen braun. Die Zellmembranen lösen sich alhnählicli spurlos ohne die ge- ringste Farbenreaction. Aus diesem Verhalten schliesst Rosoll, dass das Strychnin in dem fetten Oele der Samen aufgelöst vorkomme'. J. Moeller. Gardilier, W., T h e determination of Tannin in vegetable cells. (The Pharm. Jouru. and Transactions, No. 709, 1884, p. 588). Verf. verwirft die bisher gebräuchlichen mikrochemischen Gerbstotf- reactionen. Eisensulfat findet er entsprechend , wenn die Producta blau, nicht, wenn sie grün sind. Er zieht eine Lösung von molybdän- saurem Ammon in concentrirtem Chlorammonium Aor, welche mit Gerb- stoffen einen reichlichen gelben Niederschlag giebt. Bei Anwesenheit von Digallussäure bringt sie rothe Färbung hervor. Die Verbindung mit Gallussäure ist in Chlorammonium löslich, jene mit Tannin nicht. Die Tanninbestimmung in Alkohol-Präparaten ist dadurch erleichtert, dass todtes Protoplasma mit Gerbstoffen einen bleibenden Niederschlag gibt. J. Moeller. ') Zu gerade entgegengesetzten Folgerungen gelangte Lindt (diese Zeitschr. Bd. 1, 1884, p. 237). Dieser hält die Zellmembranen für den Sitz des Alka- loides, weil sie sicli in einer Lösung von schwefelsaurem Ceroxyd in Schwefel- säure violettblau färben, und verwirft die Schwefelsäure principiell als Reagens I, 3. Referate und Besprechungen. 465 F, Minef'alogiseJi-Geolot/isches, Eeferent: Prof. Dr. Ärth. Wichmann in UtrccJd. Haushof er, K. , Beiträge zur mikroskopischen Analyse. (Sitzber, d. bayr. Akad. d. Wiss. zu München 1884, p. 436— 448). In den vorstehenden Beiträgen theilt der Verf. Metlioden mit, be- hufs mikroskopischer Bestimmung von Cer- Thor- und Yttriumverbin- dungen, sowie einiger Verbindungen der Niob- und Tantalsäure. Werden ceriumhaltige Mineralien mit concentrirter Schwefelsäure behandelt, so bilden sich nach dem Abrauchen der letzteren, Behand- lung des Rückstandes mit einer unzulänglichen Menge Wasser und wenig Schwefelsäure beim Verdunsten Kryställchen des monoklinen Salzes von der wahrscheinlichen Zusammensetzung Ce-S^O'^-)- 8 H^O. Löst man diese Krystalle in einer grösseren Menge W^asser wieder auf, so scheiden sich beim Verdunsten hexagonale Krystalle von der Zu- sammensetzung Ce^S^O''^ -j- OtPO ab. Beide Salze sind mikrosko- pisch gut charakterisirt, doch können sie leider nicht von den ent- sprechenden und ihnen völlig isomorphen des Lanthans und Didyms unterschieden werden. Charakteristische Formen liefert ebenfalls das monokline Sulfat des Yttriums Y^S^O'^ -j- 8H^0. Thoriumhaltige Mineralien hefern bei Behandlung mit Schwefel- säure das Salz ThS^O**-]- 8H-0 und erst nach wiederholtem üm- krystallisiren stellen sich neben diesem noch die monoklinen Gestalten von ThS-'O« 4- 9H2 0 ein. bei Anwesenheit von fetten Oelen, weil sie auf diese farbeverändernd ein- wirkt. Er hält auch die Anwendung von Kaliumbichromat als mikrochemisches Reagens für unzuverlässig, weil „die charakteristische Violettfärbung nur in un- mittelbarer Berührung mit dem Krystall vor sich geht und die Lösung des Strychnins in Schwefelsäure so rasch aus dem Präjiarate austritt, dass eine nachträgliche Färbung durch das Kaliumbichromat keinerlei Aufschluss mehr zu geben vermag über die ursprüngliche Lagerung des Alkaloides". Lindt hatte allerdings vor Anwendung seines Reagens das fette Oel extrahirt, sodass die Möglichkeit oifen bleibt, das Oel sei vorher der Träger des Alkaloides ge- wesen. Daraus Hesse sich vielleicht der „bläulich opalisirende Ton" der Eiweiss- ablagerungen besser erklären, als „durch zurückgelassene Spuren von Zucker". Es wäre auch zum Verwundern, wenn das Oel einen Theil des Strychnin nicht aufgelöst enthielte. Bezüglich der Zellmembranen scheint mir das positive Resultat Lindt's mehi- Vertrauen zu verdienen als das negative Rosoll's. Ref. 466 . ■ Referate und Besprechungen. I, 3. Als besonders geeignet für den mikroskopischen Nachweis der er- wähnten Erden empfiehlt Verf. die Oxalate derselben, deren charakteri- stische Formen des Näheren beschrieben und durch Abbildungen er- läutert werden. Ceriumlösungen liefern durch Behandlung mit Oxalsäure oder Ammoniumoxalat Niederschläge, die zwei verschiedeneu Formenreiheu angehören, dieselben sind wahrscheinlich ident und stimmen hinsicht- lich ihrer Zusammensetzung vielleicht mit dem bekannten Salze Ce^ C^ 0 "- -]-- 24IPO überein. In den Krystallformen, welche das Yttriumoxalat bei einer Fällung durch Oxalsäure aus neutralen oder schwach sauren Yttriumlösungen bildet, lassen sich niclit weniger als fünf verschiedene Typen unter- scheiden. Die entsprechenden Erbiumverbindungen sind denen des Yttrium völlig isomorph. Den Nachweis des Niob und des Tantal liefert der Verf. auf folgende Weise: Das feine Pulver von natürlichen Niob- und Tantal- verbindungen wird in geschmolzenes, bis zur Rothgluth erhitztes Natron eingetragen. Beim Auflösen der Schmelzmasse in wenig Wasser bilden sich wasserhaltige Salze der Niob- und Tantalsäure von noch zu be- stimmender Zusammensetzung. Dieselben sind stets krystallisirt, und gehören die mikroskopisch kleinen Prismen wahrscheinlich dem rhom- bischen System an. In kaltem Wasser, in siedendem noch leichter lös- lich , bilden sich nach dem Verdunsten oder Erkalten zwei Salze : 1) Natriumtantalat in scharf ausgebildeten hexagonalen Täfelchen und 2) ein Salz in Formen, die vollständig mit den zuvor erwähnten pris- matischen übereinstimmen, die ferner in um so grösserer Menge sich einstellen , je niobreicher das Mineral ist und daher vom Verf. als Natriumniobet angesehen werden. — Bezüglich weiterer Details ist auf die Abhandlung selbst zu verweisen. Linck, G., Ein neues Reagenz zur Unterscheidung von Calcit und Dolomit in Dünnschliffen, (Bericht über die XVI. Versammlung des Oberrhein, geol. Vereins. Stuttgart 1883). Verf. glaubt in einer Lösung, welche gleichzeitig Ammoniumphos- phat und verdünnte Essigsäure enthält, ein Mittel gefunden zu haben, um Kalkspath und Dolomit in Dünnschliffen von einander unterscheiden zu können. In Folge der Bildung von Ammonium-Magnesium-Phosphat soll der Dolomit gegen die weitere Einwirkung- der Essigsäure unan- greifbar gemacht werden, während der Kalkspath in Lösung geht. Ref. bezweifelt, dass die angegebene Methode befriedigende Resultate I, 3. Referate und Besprecbungen. 467 zu liefern im Stande ist, docli bescheidet er sieb gern, bis der Verf. die in Aussiebt gestellten umfassenderen Untersuclmugen angestellt und aucb über das erforderlicbe Miscbungsverbältniss für die vorgeschlagene Lösung genauere Angaben geliefert hat. Tschermak, Cr., Die miskroskopische Beschaffenheit der Metoriten erläutert durch photographische Ab- bildungen. Die Aufnahmen von J. Geimm in OfTenburg. (I. Lief, mit 8 photogr. Tafeln), Stuttgart. (Schweizerbart) 1883. Der Verf. hat sich mit der Herausgabe des vorliegenden Werkes ein grosses Verdienst erworben. Neben einer Fülle neuer Thatsachen wird uns zum ersten Male eine zusammenhängende Darstellung der mikroskopischen Verhältnisse dieser merkwürdigen Himmelskörper geboten. Von den in Aussicht gestellten drei Lieferungen enthält die bis jetzt erschienene erste zunächst einen Abschnitt: „Allgemeines über die Beschaffenheit der Meteoriten", in welchem die äussere Form, das Gefüge, die Gemengtheile besprochen und daran anschliessend eine neue systematische Eintheilung der Meteoriten gegeben wird. — In dem speciellen Theile gelangen die wichtigsten Vertreter der Eukrite, Howar- dite, Bustite, Diogenite, Amphoterite, Chassignite, sowie die Chondrite, mit denen die Lief, abbricht , zur Beschreibung. Die den Text beglei- tenden 8 Tafeln illustriren die erörterten Verhältnisse und sind von der Firma J. Gkimm in OfFenburg sehr schön ausgeführt worden. Lohmaiill, P., Neue Beiträge zur Kenntniss des Eklogits vom m i k r 0 s k 0 p i s c h - m i n e r a 1 0 g i s c h e n und archaeologis eben Standpunkte. (Neues Jahrb. f. Mi- neral. 1884. Bd. L p. 83—115). Nach einer Darstellung der bisher über den Eklogit veröffent- lichten Studien theilt der Verf. die Resultate einer mikroskopischen Untersuchung von einigen bisher noch nicht beschriebenen Vorkommnissen mit. Aus den Eklogiten vom Saasthal giebt der Verf. Glaukophan mit Auslöschungsschiefen von 24 — 26", aus einem solchen von Zermatt gar von 41° an. Dies ist ein Irrthum. Die echten Glaukophane sind durch sehr geringe Auslöschungsschiefen (meist 4**) charakterisirt. Die mikroskopische Untersuchung von 17 prähistorischen Eklogit- Beilen lieferte das bemerkenswerthe Resultat, dass mit einer oder viel- leicht zwei Ausnahmen keines derselben von irgendwelchem heute im Rohzustande bekannten Eklogit herstammt. Zwei ansführliche Uebersichtstabellen beschliessen die Abhandlung. 468 Referate und Besprechungen. I, 3. Merian, A. , Beobachtungen am Tridymit. (Neues Jahrb. für Mineral. 1884. Bd. 1. p. 193—195). Die wichtigen Untersuchungen von Mallakd und Klein über den Einfluss der Wärme auf den Boracit veranhassten den Verf., auch andere mimetische Mineralien in gleicher Weise zu studiren. Beim Tridymit konnte mit Hülfe des üblichen Erwärmuugstisches keine Aenderung der optischen Orieutirung wahrgenommen werden. Behufs Beobachtung des Verhaltens in noch höherer Temperatur wurde folgende Einrichtung getroffen : Ein Mikroskop wurde horizontal in ei- nem Kasten so befestigt, dass das Tageslicht durch einen Planspiegel und eine schwach convexe Linse auf das Nicol im Objecttisch fallen konnte. Ein genügend grosser Raum gestattete Präparat und Erhitzungs- apparat hier einzuführen. Das Mineralblättchen wurde von einer auf einem Stativ befestigten Pincette mit Piatinaspitzen gehalten und so bei schwacher Vergrösserung in den Focus des Objectivs eingestellt. Mit- tels eines kleinen Gasgebläses konnte das Mineral in kürzester Zeit bis zur Weissgluth erhizt werden. Der Versuch am Tridymit ergab, dass bereits bei massigem Erhitzen die Blättchen völlig isotrop wurden. Beim Abkühlen traten dieselben Elasticitätsunterschiede zu Tage, wie vor dem Versuch. Hieraus geht mit grösster Wahrscheinlichkeit hervor, dass der Tridymit bei seiner Krystallisation hexogonal war. Der geo- metrische Charakter wurde bei der Abkühlung nicht gestört wohl aber der optische, denn wie Schuster und von Lasaulx gezeigt haben, ist der Tridymit seinen optischen Eigenschaften zufolge triklin. Durch Erhitzung kann der ursprüngliche Charakter wieder hergestellt werden. Die in gleicher Weise am Leucit und Mikroklin angestellten Ver- suche gaben ein negatives Resultat. Beim Analcim konnte das Gebläse nicht angewandt werden. Im Paraffinbad erwärmt zeigte derselbe wohl starke Veränderung der optischen Elasticitätsverhältnisse, aber eine vollkommene Isotropie wurde nicht beobachtet. 1, 3. Neue Literatur. 469 Neue Literatur. 1. Lehr- und Handbücher. Carnoy, J. B., La biologie cellulaire. Fase. 1. Tecbnique iQicroscoi)ique. Notions generales sur la cellule. Biologie statique: le noyau. 270 pp. 8", 141 figg. Lierre (van Inn et Co.). 12 fr. Friedlaender, C, Mikroslfopisclie Technik zum Gebraucli bei niedicinischen und pathoIogiscb-anatomiscLen Untersuchungen. 2. Aufl. Berlin (Fischer) 1884. 5 M. [Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1854, p. 423]. Laiidois, L. , Lehrbuch der Physiologie des Menschen einschliesslich der Histologie und mikroskopischen Anatomie. 4. Aufl. 1. Abth. Wien (Urban u. Schwarzenberg) 1883. 8". 5 M. Peragallo, H., Histoire sommaire du microscope compose et de ses recents perfectionnements. Toulouse 1883. 8". Purser, J. 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Eine nähere Betrachtung des Strahlenganges für den Fall einer Doppelkugel oder eines Hohlcylinders ist jedoch nicht nur von Bedeutung, weil sie diesen Fall selbst klar legt, sondern auch, weil sie Anhaltspunkte verschafft über Fälle, die sich nicht direct in mathematischer Form ausarbeiten lassen: nämlich die- jenigen, bei denen man mit mehr weniger unregelmässigen Körpern mit Hohlräumen zu thun hat. Im Nachfolgenden halten wir uns an den theoretischen Fall einer Hohlkugel oder eines Hohlcylinders, und zwar, weil bei beiden die Sache sich wesentlich gleich verhält, wird immer nur von einer Hohl- kugel die Rede sein. Als exquisites praktisches Beispiel stelle man sich hierbei eine nahezu kugelförmige Saccharomyces-Zelle mit coucen- trischer kugelförmiger Vacuole vor. Wenn ein geübter Mikroskopiker ein solches Gebilde zu Gesicht bekommt, wird er sofort, bei Einstellung für das Centrum der Zelle, an Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 4. 32 480 Giltay: lieber die Lage des Brennpunktes der Doppelkugel. I. 4. den Farbenverbältnissen allein schon den wahren Sachverhalt erkennen. Der Anfänger kann sich diese Fertigkeit auch zueigen machen, erstens allmählig durcli Uebung, zweitens dadurch, dass er einsehen lernt, wes- halb bei einer Zelle mit Vacuole das Bild so sein muss, wie er es wahr- nimmt. Wenn er diesen zweiten, besseren Weg einschlägt, so ist es aber wüuscheuswerth, dass er nicht nur über die Ursachen, welche die bekannten Farbeverhältnisse bei centraler Einstellung bedingen, ins Klare kommt, sondern auch, dass er das Bild bei veränderter Einstellung begreifen lernt ; namentlich muss er einsehen, welche Factoren die Lage des Brennpunktes beeinflussen, und in welcher Weise sie dies thun. Es haben nun Nägeli und Schwendener in ihrem Buch „Das Mikroskop" für eine Anzahl Fälle die Lage der Breunlinie bei einem Hohlcylinder berechnet , und die Resultate tabellarisch zusammen- gestellt ^ Es schien mir jedoch erwünscht, die Lage des Brennpunktes in einer einzigen Formel auszudrücken, wenn auch von vorn herein zu- gegeben werden muss, dass die durch Rechnung gefundenen Daten nicht genau die wahre Lage des Brennpunktes angeben. Es müssen ja, wie gewöhnlich in solchen Fällen, Formeln gebraucht werden, die nur ganz richtig sind in der Voraussetzung, dass die einfallenden Strahlen einen ganz kleinen Winkel mit der Achse bilden, was in der Praxis gewöhnlich nicht zutrifft. Für den allgemeinen Gang der Ver- schiebung des Brennpunktes sind die gewöhnlichen Formeln jedoch immerhin genügend; die genaue Lage desselben braucht man ja meistens gar nicht zu wissen. Bei einer Doppelkugel hat man bekanntlich mit zwei Brennpunkten zu thun; der eine, der eigentliche Brennpunkt der Doppelkugel, wird gebildet von denjenigen Strahlen, welche beide Kugeln durchsetzt haben, der andere wird nur durch die äussere Kugel gebildet. Berechnen wir zuerst die Lage des ersteren Brennpunktes. Der zu befolgende Weg ergiebt sich von selbst. Sei bei einer Doppelkugel der grössere Radius i?, der kleinere r; nennen wir die Brechungsindices des umgebenden Mediums , der äusseren und der inneren Kugel successive Wj, W2 und ri^. Man nehme dann einen Licht- punkt in der Entfernung l von der ersten Kugelfläche und berechne für diese erste Trennungsfläche die Lage des dazu gehörigen Bild- punktes; man nehme weiter diesen als Leuchtpunkt für die zweite Trennungsfläche, berechne wieder die Entfernung hz des Bildpunktes ») Nägeli und Schwendener, Das Mikroskop, 2. Aufl. 1877, p. 221. I, 4. Giltay: Ueber die Lage des Brennpunktes der Doppelkugel. 481 von dieser u. s. w. In dieser Weise findet man zuletzt für b^ die Ent- fernung des Brennpunktes des ganzen Systemes von der letzten Tren- nungsfläche. Wie man bald sehen wird, stellt sich diese Formel für &4, wenn man den Hauptbrennpunkt berechnet, als eine sehr einfache und symmetrische heraus. Wenn zwei Medien von den Brechungsindices m und n mittels einer Kugelfläche von dem Radius p an einander grenzen, dann gilt zwischen diesen Constanten und den Entfernungen l und b zur Trennungs- fläche zweier zu einander gehöriger Leucht- und Bildpunkte die Gleichung : m j^ n n — m T^ b ~ ~~Y~ oder , npl b = —^ ^^^ (1) nl — ml — mp ^ ^ Wir berechnen nun nach einander die Werthe von b an den vier Kugelflächen, und knüpfen unsere Berechnungen an den concret ge- zeichneten Fall (siehe nebenstehende Figur) an. Erste Grenzfläclie. Unsere Hauptformel (1) würde hier schon direct den &( für die erste Trennungsfläche ergeben. Wir können uns jedoch die Sache noch etwas vereinfachen. Dividiren wir Zähler und Nenner von (1) durch l dann ist deutlich , dass in allen strahlend vorkommenden Fällen y V gegen n — m verschwindend klein sein wird, und also vernachlässigt werden darf. Wir berechnen also auf diese Weise die Hauptbrenn- punkte, und finden für die Lage des Hauptbrennpunktes für die erste Trennungsfläche : 6,=^»-^ (2) Wg — »?•! 32" 482 Giltay: Ueber die Lage des Brennpunktes der Doppelkugel. 1. 4. Zweite Ch^enzfläche, Es wird jetzt: m = «2 n = n, p = r h= — [,-^— — (^ — »')] = Wi JRg -|- Wo r — Wi r ^2 — Wi Nach Substitution dieser Werthe iu die Foraiel (1) erhalten wir nach einigen Vereinfachungen: &2 = StT- -^ W^ .... (3) Dritte Ch^enzfläche, Hier wird: wi = «3 w = Mg p = — ** 2r = 2 r niU^r^ — nzn^r^ — w, «3 i2r ^ Lwi W2 jR -f- «1 1«3 >" — «1 >?3 -R — M2 ^3 r 2 «1 712 Er -\- '^1 W3 »"^ — j?! «3 7? r — «2 ^3 *' Wi «j i2 4" *'i ''3 *■ — *^ ^'3 -^ — "2 ih >' Nach Substitution wie oben bekommen wir: 2n,n2^Rr -\- »ii «2 ^3 »"'^ — ninzn^JRr — Ui'^n^r'^ ^ 2 «1 »I2 ^ -ß + ^1 ^^2 **3 *■ — 2 «, «2 ^3 -ß — **2 '^ % *" wofür wir zur Abkürzung auch schreiben werden : — ^. Vierte Ch^enzfläche, Nun wird: m ^= n-i 71 =^ Hl p z= — B ?4 =r — -(- 7? — r = 2 «, «2 w, JRr + 2 n, n^'^R'^ — 2 w, 9?2 W3 J?^ _ n^^^i^ Ri- 2 w, ^2 ^R -\- ih «2 »^3 *■ — 2 )2, ??2 W3 jR — j?2 '^ "3 »■ Nach Eintragung dieser Werthe in (1) bekommen wir zuletzt: ' ~ 2%2w22i?2 + 2«, 2^2 % Rr — 2 7^y^ii2-nsW — 2 Wj «2 2 «3 Er wofür wir in etwas übersichtlicher Form schreiben : I, 4. Giltay; Ueber die Lage des Brennpimktes der Doppelkugel. 483 j _ _ 22 n^n^Rr * 2[«i J? (%—%) — W3r(j?2—«,)] • ' • ^ ^ Diese Formel giebt also die Lage des Hauptbrennpunktes des ganzen Systemes (der Doppelkiigel) an und zwar seine Entfernung zur letzten Trennungsfläche. Der Schnittpunkt dieser Fläche mit der Achse bildet den Anfangspunkt der Zählung, die Richtung von der Lichtquelle ab die positive Richtung (in unserer Figur Ri . . . -\- oo), die Richtung nach der Lichtquelle zu die negative Richtung (in der Figur R2 . . . — 00). Berechnen wir nun in derselben Weise die Lage des Hauptbrenn- punktes für diejenigen Strahlen, welche nur die grössere Kugel durch- liefen. An der ersten Grenzfläche wird dann wieder: m = «, , n = n2 p = R, 1, =00 und man erhält &, = «2 R % — Hl An der zweiten hat man «2 ^^^^ *'^) *h für >h — -^ f^^" P ^^^^ { n^R „ -r,\ tuR — 2 w, R „.. , ^ , , — 1 2 ii I = für l zu setzen, so dass her- yiii — Wi / W2 — ni auskommt : _R{2 n, — iio) r.. ^'- 2(ii2-n.) ^^ Kehren wir zur Formel (4) zurück. Man sieht sofort ein, dass, wenn der Nenner des Bruches positiv ist, der Brennpunkt zwischen 0 und — 00 liegen muss, während für einen negativen Nenner derselbe zwischen 0 und -j- 00 sich befinden wird. Ginge also in der Praxis in einem bestimmten Falle die Ein- stellungsebene durch den Mittelpunkt zweier concentrischer Kugeln, und müsste der Tubus gesenkt werden, um den Brennpunkt zu Gesicht zu bekommen, dann würde dies darauf hindeuten, dass : R{ni 1X2 — j?] %) >r(»3W2 — w, Wg) (6) Müsste dagegen der Tubus gehoben werden, dann wäre: 7?(«j 112 — «1 »3) <.r{n^n2 — w, «3) (7) Obgleich sich auch die anderen Fälle leicht ableiten lassen, be- trachten wir bloss den praktisch wichtigsten, dass % der grösste Brechungsindex ist. Dann gilt für w, > Wg immer (6). Befindet sich also bei einem Hohlcylinder mit stärker brechender Wandung innen wie aussen dasselbe Medium, dann wird die Focalfläche des ganzen Systemes unter der Cylinderachse liegen. Ist dagegen Ui %), dann hängt es von der relativen Grösse von i? und r ab, ob der Brennpunkt über oder unter dem Mittelpunkte einer Doppelkugel liegen wird. Wenn z. B. n^ = 1-3, n.i = 1*5, n^ = 1-4 ist, dann wird für i^ = 6, r = 2 der Brennpunkt unter, aber für i? = 6, r ^ 4 über dem Mittelpunkte sich befinden. Obgleich praktisch von weniger Bedeutung, wollen wir doch zu- letzt der Vollständigkeit wegen die Lage der Brennpunkte auch noch mit Bezug auf die Schnittpunkte i?2 "ii^ I^i der grösseren Kugel mit der Achse präcisiren. Wie leicht aus (4) ersichtlich, geschieht dies für den eigentlichen Brennpunkt der Doppelkugel durch die folgenden Bedingungen: I. w, 72 (% — »3) > %*"(% — '>^i)- Der Brennpunkt ist virtuell und liegt zwischen 0 und — 00. a) 2 W| (^2 — ^3) R _ 2 (wa — »1 ) ^ ^ ^2 n^ r Mg Der Brennpunkt liegt zwischen 0 und JR 2- b) ^ ^ 2 Hl (Mg — na) B _ 2 (»2 — ni) ^ ^ tu W3 r Wg Der Brennpimkt Hegt zwischen i?2 und — 00. II. Wj R{n2 — n-i) <; n^riri^ — w,). Der Brennpunkt liegt zwischen 0 und -f- 00. a) ^ ^ 2(^2 — ^^1) _ 2 ?^, (»?2 — n^) R ^ ^ ^2 ''^2 W3 r Der Brennpunkt ist reell und liegt zwischen -)- 00 und 2?, . b) 2(i?2 — ^^i) _ 2 ^1 (% — M3) i^ ^ ??2 »«2 *?3 *" Der Brennpunkt ist virtuell und liegt zwischen i2, und 0. Nehmen wir nun r unendlich klein, dann verschwindet die innere Kugel, und die Ungleichheiten werden dann die Lage des Brennpunktes bei einer einfachen Kugel, resp. die Lage des Brennpunktes geliefert durch diejenigen Strahlen, welche nur die äussere Kugel einer Doppel- kugel durchsetzten, näher bestimmen. Für r = 0 erhalten wir aus I a und b, II a" und b resp. die folgen- den Bedingungen: I, 4. Dippel: Endomersions-Objective. 485 Lage des Brennpunktes. Der Brennpunkt ist ; 2 ^2 < g- Wl Zwischen 0 und Xi2 virtuell. 2 - «, < «2 < «1 T) ilg „ OO virtuell. *ii < «2 <: 2«, V oo „ A', reell. 2 Hl < ^2 75 -^1 55 0 virtuell. Diese Bedingungen erhält man auch leicht direct aus (5). Nimmt man endlich r =^ B und «, = 7^,, dann wird in (4) die Bruchzahl = oo. Nun liegt also der Brennpunkt in unendlicher Ent- fernung, mit anderen Worten, parallel einfallende Strahlen gehen unge- brochen durch. Dass dies auch so sein muss, ist an und für sich klar, denn die beiden Kugeln fallen nun genau zusammen und der Brechungs- index ihrer Substanz ist demjenigen des umgebenden Mediums gleich. Als brechender Apparat sind sie also von diesem letzteren nicht mehr verschieden. Endomersions-Objective. Von Prof. Dr. Leopold Dippel in Darmstadt. Hierzu 2 Holzschnitte. Schon gegen Ende des vorigen Jahrhunderts benutzte Blair drei verschieden brechende Medien: Kronglas, Terpentinöl und Naphtha, um vermöge deren wechselnder Dispersion die chromatische Abweichung bei den Fernrohrobjectiven zu beseitigen. Später, in den zwanziger Jahren des gegenwärtigen Jahrhunderts baute Baelow nach dem dia- lytischen Principe ein Fernrohrobjectiv aus einer biconvexen Kronglas- 486 Dippel: Endomersions-Objective. I, 4. linse und einer biconcaven mit Schwefelkohlenstoff gefüllten Linse, ohne dass es ihm jedoch gelungen wäre, vollkommnen Achromatismus zu er- reichen. Diese Versuche blieben für die Verbesserung der Mikroskop- objective zunächst ganz und gar ohne Einfluss. Nur Bruno Hasert hat in den fünfziger und Anfang der sechziger Jahre Mikroskop objective construirt, von denen vielseitig — und wohl mit Recht — vermuthet wurde, dass dabei die Anwendung einer — stark gelb gefärbten — Flüssigkeit in Anwendung gekommen sei, um das secundäre Spectrum möglichst zu beseitigen. Aber diese Objective (Trockensysteme), welche allerdings die Bilder der Probeobjecte ohne die gewohnte starke Fär- bung zeigten, kamen mit Ausnahme einer numerischen Apertur von 0-90 bis 0-98 (145" — 155 " Oeflfuungswinkel), also eines ziemlich hohen Auflösungsvermögens für die Systeme von unter 3 mm Brennweite in ihren sonstigen Leistungen zum mindesten nicht über die besseren Trockensysteme der damaligen Zeit hinaus, ja blieben in mancher Be- ziehung hinter denselben zurück ', Der Grund für die Nichtbeachtung der gedachten Versuche lag wohl darin, dass man sich auf die Verwen- dung der Flüssigkeitslinsen nur mit Rücksicht auf die Dispersion be- schränkte und die Erfolge insofern nur getheilte bleiben konnten, als man eine Farbenerscheinung noch nicht näher erkannt und unberücksichtigt gelassen hatte, welche, da sie bei den uns zur Zeit für optische Zwecke zur Verfügung stehenden Glassorteu nicht gehoben werden kann, eines der gewichtigsten Hindernisse für die Vervollkommnung unserer Objec- tivsysteme bildet. Dies ist der von Prof Abbe als chromatische Differenz der sphärischen Abweichung bezeichnete, der sphärischen Abweichung angehörige Rest der Farbeuabweichung, welcher bewirkt, dass ein Objectivsystem, welches für gerades (centrales) Licht die günstigste "Wirkung in Bezug auf Bildschärfe und Farbenfreiheit gewährt, für schiefes Licht wenig brauchbar erscheint und umgekehrt, und der damit die Leistungsfähigkeit der mittelstarken Objectivsysteme von 6 mm bis 3 mm Brennweite weit imter diejenige Höhe hinabdrückt, welche dieselben bei sonstiger Vollkommenheit der Constructiou, als Verbesserung der chromatischen Aberration, der sphärischen Abweichung auf der Achse u. s. w. erreichen könnten 2. Die Schwierigkeiten, welche in Folge dieses Mangels der Ver- besserung unserer Objectivsysteme entgegentreten, können nach den einschlägigen Untersuchungen von Prof Abbe nur durch die unab- 0 Cfr. mein Werk: „Das Mikroskop" 1. Aufl. p. 168. 2) Cfr, mein Handbuch der Mikroskopie 2. Aufl. p. 224 l I, 4. D i p p e 1 : Endomersions-Objective. 487 häng igen Correctioneu von chromatischer und sphärischer Abweichung beseitigt werden, welche aber zum mindesten zwei Arten von optischem Glase erfordern , deren optische Eigenschaften gegenüber von denen der gegenwärtig im Gebrauch befindlichen Gläsern in der Art ab- weichen, dass entweder geringes Brechungsvermögen mit starker Farben- zerstreuung oder hohes Brechungsvermögen mit geringer Farbenzer- streuung verbunden erscheint. Die Erwägung, dass es nicht wohl er- reichbar sei, die Fabricanten optischer Gläser zu den entsprechenden Versuchen und Neugestaltungen zu bewegen, veranlassten Prof. Abbe, die Verwendung von Flüssigkeitslinsen ins Auge zu fassen, welche es ermöglichten, den gedachten Weg der unabhängigen Correctioneu einzuschlagen und damit eine Verfeinerung der beiden Correctioneu her- beizuführen, wie sie in anderer Weise zur Zeit nicht möglich erschien. Das Wesentliche der Methode von Prof. Abbe, über welche der- selbe schon in dem Jahre 1879 ausführlich berichtete ', besteht in Folgendem: Eine Flüssigkeit von sehr hoher Dispersion und dem entsprechend stark gedehntem Blau, aber von verhältniss- mässig niedrigem Bre chungsindex, Ug = 1*58 — 1*62, wird in der in Figur 1 dargestellten Weise als Sammellinse, d. h. als 1. Ersatz für das gewöhuliche Kronglas in Form eines concaven Me- niscus [Fl) zwischen zwei Linsen aus dem gebräuchlichen Kronglas (Kr) und Flint von n„ = 1'73 (F) eingeschlossen und derart eine dreifache Combination hergestellt, in welcher die sphärische Trennungsfläche (x) zwischen Flüssigkeit und Flintglas in Bezug auf die Farbenzerstreuung ge- rade die entgegengesetzte Wirkung äussert, wie die entsprechende Fläche einer aus Flint- und Kronglas zusammengesetzten „achromatischen" Linse, während dieselbe in Bezug auf die sphärische Abweichung gleich- artig mit einer solchen wirkt. Demgemäss wird in einem derartigen Linsensystem erstens die Aufhebung der secundären Farbeuabweichung erreicht, indem die — im Sinne der Dehnung des Blau — über- 1) Abbe, On new methods for improving siAaerical correction etc. (Journ. R. Microsc. Soc. London 1879, p. 812 ff.). 488 Dippel: Endotnersions-Objective. I, 4. starke secundäre Abweicliung der Flüssigkeitslinse die im Vergleiche zum Flintglase zu geringe Dehnung des Blau in der Kronglaslinse ergänzt und zweitens die chromatische Differenz der sphärischen Ab- weichung beseitigt. Zwei nach der beschriebenen Methode in der ZEiss'schen Werk- stätte ausgeführte Versuchsobjective habe ich Gelegenheit gehabt, schon vor mehreren Jahren genauer anzusehen. Dieselben gewährten von den gewohnten Probeobjecten, wie von histologischen Präparaten bei jeder Art der Beleuchtung fast vollständig farblose Bilder von ganz vorzüg- lich scharfer und klarer Zeichmmg (die Schalenstructur von Pleurosigma angulatum z. B. erschien wie eine schwarze Zeichnung auf hellem Grunde) und lieferten damit den Beweis von ihrer Ueberlegenheit über die besten Objectiv'e der gebräuchlichen Art. Das eine dieser Objective aus dem Jahre 1873, ein vierfaches Trockensystem von 6 mm Brennweite mit einer numerischen Apertur von 0*80 (106" OefFnungswinkel) besitzt drei den gebräuchlichen Combinationen ähnliche Vorderlinsen, während die Hinterlinse eine dreifache Combiuation mit einer Flüssigkeitslinse aus einer Mischung von Cassiaöl und Anisöl »?„ = 1'58 darstellt. Das zweite, im Jahre 1876 angefertigte, mit einer Brennweite von 3 mm, ist für Wasserimmersion bestimmt und besitzt eine numerische Apertur von 1*15 (119° OefFnungswinkel im Wasser). Dasselbe besitzt eine „Duplex Front", während die Flüssigkeitslinse der hintersten Combi- nation aus Zimmt-Aldehyd (Cinnamyl-Wasserstoff) besteht. Der gewichtigen Unzuträglichkeiten halber, welche mit Objectiv- systemen der gedachten Art verbunden sind und deren weiterer Ver- breitung hindernd im Wege stehen, ist die praktische Verwerthuug der AsBE'schen Methode nicht weiter von der Jenaer Werkstätte verfolgt worden, und man hat von Seiten Prof. Arbe's wie Dr. C. Zeiss's den mühevollen und kostspieligen Versuch mehr als eine Sache von theore- tischem Interesse, als einen Ausblick auf das Mikroskop der Zukunft betrachtet. Neuerdings ist durch die Versuche von Prof. Zengee, die voll- kommene Correction der Farbenabweichung herbeizuführen ', die Auf- merksamkeit wieder auf die „Endomersion" — so bezeichnet der Autor der „dioptrischen Studien" die Verfahruugsweise — gelenkt worden. Prof. Zengek greift, nachdem die AsBE'sche Methode das einzig ') Zenger, Dioptrische Studien. Prag. Verlag .der Königl. Böhmischen Gesellschaft der Wissenschaften 1882. (Centralzeit. f. Optik u. Mechanik Bd. IV, 1883, p. 254; Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II, vol. IV, 1884, p. 616 ff.). I, 4. Dippel: Endomersions-Objective. 489 Vernünftige und für den Erfolg Ausschlag Gebende, was das Princip in sich fasst, vorweggenommen hat, wieder auf die Methode von Blair zurück, indem er die Flintglasliuse unserer Objective durch eine plan- concave Linse aus einer gallertartigen Substanz ersetzt. Diese letztere wird durch Mischung aromatischer und fetter Verbindungen von mög- lichster Unveränderlichkeit und Farblosigkeit dargestellt, und es soll möglich sein, durch Auflösungen von Stearinöl- und Palmitinsäuren Salzen, Benzol, Anethol, Ricinus- und Mohnöl, sowie andere flüchtige und fette Oele in eiue amorphe, dem Glase ähnliche, gleichartige, wasser- helle, nicht mehr fliessende Gallerte umzuwandeln, welche — durch aus- reichend luftdichten Einschluss vor Verdampfung und chemischer Um- wandlung geschützt — ein vollständig verlässliches Material bilde. Die optischen Sondereigenschaften der verwendeten Verbindungen, sowie die Art der Mischung von zwei bis. mehreren derselben giebt dabei das Mittel an die Hand, um die optischen Verhältnisse, insbesondere aber die Dispersion dieser Gallerten so zu regeln, dass die Verbindung einer biconcaven Kronglaslinse {Kr Figur 2) mit einer nach der anderen Seite durch eine planparallele Glasplatte (P) abgeschlossene Flüssigkeitsliuse Fl (Gallertlinse) Combinationen liefert, in denen alle Strahlengattungen des Spectrums vereinigt werden und damit vollständiger Achromatismus hergestellt erscheint. Die von Prof. Zenger hergestellten Mikroskopobjective haben die planconcave Gallertlinse dem Objecte zugekehrt. Ihre Leistungen sollen vorzügliche sein, indem dieselben nach Maassgabe der ihnen gegebenen Oeff'nung nicht nur die entsprechenden Probeobjecte für das Unter- scheidungsvermögen lösen, sondern auch bei sehr starker Angularver- grösserung durch bis 36- und 72mal vergrössernde achromatische Oculare noch farblose und scharf gezeichnete Bilder dieser Objecte geben. Von einem Mikroskopobjective, welches bei 8 mm Brennweite eine numeri- sche Apertur von 0-47 (56" Oeffnungswinkel) besitzt, also annähernd dem C von Dr. Zeiss gleichkommt, wird berichtet, dass bei grader Be- leuchtung u. a. die Streifung von Achnanthes subsessilis und Rhabdonema adriaticum (etwa 11 bis 12 auf 10 [x), bei schiefer, diejenige von Navicula minor und divergens, nicht aber von Grammatophora marina (16 Streifen auf 10 |ji, welche eine numerische Apertur von 0-45 er- fordern) sichtbar gemacht werden konnte, und dass die Probe mittels der AsBE'schen Silberplatte bei intensivem Lampen- wie bei Sonnenlicht keine Spur von Farbe ergeben habe. Von einem zweiten '/g " sagt J. May all *, dass die Correction der sphärischen Abweichimg unvollkommen sei. ') Mayall in Journ. R Microsc. See. ser. II, vol. IV, 1884, p. 660. 490 Dii^pel: Endomersions-Objective. 1,4. Ein grosser Vortheil der Endomersionsobjective wird darin erblickt, dass in Folge des Zusammeufallens von optischem und chemischem Focus keinerlei besondere Vorrichtungen nothwendig werden, um scharfe Photogramme mikroskopischer Objecte zu erlangen, sondern dass man ganz einfach die photographische Camera mit dem ganzen optischen Systeme des Mikroskopes (Objectiv und Ocular) verbinden könne, ohne gefärbtes oder gedämpftes Licht anwenden zu müssen. Ob die Bedenken, welche Prof. Abbe von der weiteren Verfolgung seiner Versuche abgehalten haben, durch diejenigen von Prof. Zexgek beseitigt seien, erscheint mir trotz gegentheiliger Versicherung ^ immer- hin noch fraglich, solange die betreffenden Objective nicht für längere Zeit Stand gehalten haben. Ausserdem geht aus den mir zu Gebote stehenden Darstellungen (die Endomersioussysteme zu prüfen hatte ich leider noch keine Gelegenheit) in keiner Weise hervor, ob bei der frag- lichen Construction die Beseitigung der für die Verbesserung der Mikro- skopobjective bedeutungsvollsten und praktisch wichtigsten Fehlerquelle, d. h. der chromatischen Differenz der sphärischen Ab- weichung ins Auge gefasst und erreicht, oder doch als erreichbar nachgewiesen ist. Sollte dies nicht der Fall sein — und die Aeusserung Mayall's lässt dies vermutheu — so ist der ganze Versuch — für das Mikroskop wenigstens — als ein verfehlter zu bezeichnen, und wir wer- den nach dieser Seite hin kaum auf einen wirklich fördernden Fort- schritt hoffen dürfen, indem dieser doch wohl, wie schon mehrseitig ausgesprochen worden ist, au die Auffindung und Herstellung von ge- eigneten Glassorten gebunden bleibt. In dieser Beziehung sind denn auch die Aussichten nicht mehr so ungünstig, wie sie noch vor kurzer Zeit zu sein schienen. Ich weiss bestimmt, dass zur Zeit schon ge- gründete Aussichten vorhanden sind, optisches Glas von solcher Art zu erhalten, dass die Verbesserung des Mikroskopes für die Folge nicht mehr von der Benützung solcher ausnahmsweisen, für den praktischen Erfolg immer mehr oder weniger fraglichen Hilfsmittel wie Flüssigkeits- linsen u. dergl. abhängig sein wird. ') Cfr. Centralzeitg. für Optik und Mechanik, Bd. IV, 1883, p. 267. I, 4. Henking: Neuer Objecthalter am Schlittenmikrotom. 491 Neue Constriiction des Objectlialters am Schlittenmikrotom, eine genaue Einstellung^ des Objectes bezweckend. Von Dr. phil. Herniann Henking Assistent am zoologisch-zootomischen Institute zu Güttingen. Hierzu 2 Holzschnitte. Bei Benutzung und Betrachtung der jetzt am meisten gebräuch- lichen Mikrotome ist dem Verfasser stets als grösste Unbequemlichkeit aufgefallen, dass verhältnissmässig wenig Werth auf eine möglichst sichere Einstellung des zu schneidenden Objectes gelegt ist. Und doch ist dieser Umstand, für einen Zoologen wenigstens, von hervorragender AVichtigkeit. Will man z. B. irgend ein kleineres Thier in eine Reihe von Schnitten zerlegen, so bekommt man die klarsten Bilder, wenn die Schnittebene symmetrisch zu einer der Hauptachsenebenen des Thier- körpers gelagert ist, dagegen einen sehr verwirrenden Anblick, sobald die Schnitte in irgend einer Richtung schräg durch das Thier gehen. Mit den bisher an den Objectschlitten angebrachten Vorrichtungen ist es aber kaum möglich, eine hinlänglich genaue Einstellung des Objectes zu erzielen. Bei den SpEXGEL'scheu Mikrotomen * wird diese Einstellung mit Hülfe der freien Hand bewerkstelligt. Das giebt aber zu grossen Ungenauigkeiten Veranlassung; denn löst man eine der beiden zur Fixirung der Lage des Objectes dienenden Schrauben, so wird durch das Gewicht der Klammer sofort eine Aenderung der anfänglichen Stellung hervorgerufen, eine Aenderung, welche die stützende Hand vergeblich zu verhindern sich bemüht. Dass aber eine feinere Ein- stellung völlig illusorisch ist, wenn schon die Anfangslage verloren ging, ist unzweifelhaft. Einen bedeutenden Fortschritt zeigen da schon die verschiedenen Objecthalter der von R. Juxg in Heidelberg gefertigten Mikrotome 2, Bei ihnen wird die Lageänderung des Objectes durch Schrauben er- ') Cfr. DippEL, Handbuch 2. Aufl. p. 676. 2) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 340 f. 492 Henkln g: Neuer Objectlialter am Schlittenmikrotom. I. 4. möglicht; aber eine feine Einstellung dürfte bei dem groben Getriebe, welches gleich einen bedeutenden Ausschlag giebt, schwer zu er- zielen sein. Wenn daher der Verfasser im Folgenden eine neue Construction des Objecthalters zur möglichst genauen Einstellung des Objectes be- kannt giebt, so geschieht das in der Hoffnung, damit vielleicht auch 1. weiteren Kreisen nützlich sein zu können. Besonders schien es aber geboten, sollte die Construction überhaupt praktischen Wertli haben, dieselbe so einzurichten, dass sie den Preis des Mikrotomes nicht eben vertheuerte. Nun wird ein Mikrotom mit der im Folgenden zu be- schreibenden Einrichtung sich im Preise nur wenige Mark höher stellen als ein SPENOEL'sches Mikrotom. Das zu schneidende Object wird in der Klammer Figur 1 und 2 a durch die Schraube h festgeklemmt. Die beiden mit Zahnfurchen ver- sehenen Backen der Klammer sind im Gegensatz zu dem SpENGEL'schen I, 4. Henking: Neuer Objecthalter am Schlittenmikrotom. 493 Mikrotom eben und gestatten dalier nicht nur ein aufrechtes, sondern auch ein stark nach rechts oder links geneigtes Einfügen des Gegen- standes. Denn will man ein stumpf- oder rechtwinklig gebogenes Object, z. B. einen Wirbelthierembryo, ein Insectenbein oder dergl. der Reihe nach in Querschnitte zerlegen, so muss eine Umlagerung stattfinden, da sonst hinter dem Scheitel des Winkels der Gegenstand der Länge nach oder wenigstens in einer schrägen Richtung geschnitten werden würde. Ferner sind die Backen der Klammer nach oben bogenförmig er- höht, damit auch bei geneigter Stellung derselben das Messer nirgend an eine Ecke stossen könne und andererseits in jeder Lage eine feste Sicherung des Objectes möglich sei. Die feine Einstellung erfolgt mit Hülfe der beiden Schraubenmuttern Figur 1 c und d. Beide sind mit dem Schlitten fest verbunden, dabei nach rechts und links um ihre Längsachse drehbar. Erfolgt eine solche Drehung der Schraubenmuttern, so überträgt sich die Bewegung auf die beiden Schrauben /"und e, und diese werden entweder gehoben oder gesenkt. Auf jeder Schraubenmutter befindet sich ein Doppelpfeil, der nach den eingravirteu Buchstaben o resp. u hinzeigt. Dreht man die Schraubenmutter nach o {= oben) zu, so bewegt sich die Schraube aufwärts, dreht man sie nach u {=^ unten), so erfolgt eine Abwärts- bewegung der Schraube. Was geschieht nun aber gleichzeitig mit der Klammer, die ja doch mit jenen Schrauben in fester Verbindung steht? — Betrachten wir zunächst die Schraube e Figur 1. Wird sie aufwärts oder abwärts ge- zogen, so setzt sich die Bewegung durch den Stahlcylinder g fort auf den Arm der Klammer h, und dadurch wird die Klammer um die Achse A Ä Figur 2 gedreht. Diese Achse wird markirt durch das Kugel- gelenk ku Figur 2 einerseits, anderseits durch den genau gearbeiteten Stahlcylinder ?', welcher in dem genau ausgebohrten Loche l Figur 2 der Klammerwandung etwa zur Hälfte steckt und sich darin leicht, aber doch ohne seitliche Excursionen, bewegen muss. Der Stahlcylinder g ist genau in der gleichen Weise gearbeitet wie der eben genannte und bewegt sich auch ganz ebenso in dem ihn ebenfalls etwa zur Hälfte aufnehmenden Loche l' Figur 2 des Klammerarmes /?. Letzterer ist an jener Stelle entsprechend breiter gearbeitet, damit die Führung des Cylinders mit möglichster Sicherheit geschehe. Von besonderer Wichtig- keit ist, dass sowohl Cylinder g als Cylinder i genau in der Verlänge- rung von Radien des Kugelgelenkes hu der Länge nach situirt sein müssen. — Jeder Cylinder kann in seinem Loche nun zweierlei Be- wegungen vollführen: Erstens kann er um seine Längsachse gedreht 494 Henking: Neuer Objecthalter am Schlittenmikrotom. I. 4. werden (resp. die Klammer kann um seine Längsachse gedreht werden, wenn der Cylinder fixirt wird), zweitens kann er nach innen oder aussen bewegt werden. Beiderlei Bewegungsarten kommen in Benutzung. Wird die Schraube e Figur 1 aufwärts oder abwärts geschroben, so dreht sich die Klammer a um die Längsachse des Stahlcylinders «, und gleich- zeitig wird der Cylinder g weiter hervorgezogen oder mehr zurückge- schoben, je nachdem Cylinder g und Schraube e sich von der gemein- schaftlichen Bildung eines rechten Winkels (dessen Schenkel sie sind) entfernen oder sich derselben annähern. Mit anderen Worten : Betrachten wir als Anfangsstellung diejenige, in der die Klammer a genau aufrecht steht und also der Schraube e parallel ist, so wird, mögen wir aufwärts oder abwärts schrauben, der Cylinder^ langsam hervorgezogen werden müssen, da sich in beiden Richtungen das Ende der Schraube e Figur 1 von dem Klammerarme langsam entfernt. Ein Zurückschieben des Cylinders findet natürlich statt, sobald wir umgekehrt nach jener an- fänglichen Stellung zurückschrauben. Somit steht der Drehung der Klammer um die Achse A A nirgends Etwas entgegen, zumal da das genau gearbeitete Scharnier m die Bil- dung eines beliebigen Winkels zwischen der Scliraube e und dem Cy- linder g ermöglicht. Die Schraube e Figur 1 befindet sich ausserhalb der Gleitfläche des Objectschlittens und kann von beträchtlicher Länge I, 4. Henking: Neuer Objectbalter am Schlittenmikrotom. 495 sein; bei meinem Mikrotome ist ihr Gewinde 44-5 mm lang, und ver- mag man daher mit ihrer Hülfe einen bedeutenden Ausschlag zu er- zielen. Weniger ergiebig ist der Ausschlag mit Hülfe der Schraube f (Figur 1) ; aber in dieser Richtung ist dafür der freihändigen Einstellung um so bedeutenderer Spielraum gegeben, während die Schraube f völlig ausreicht, dann noch bleibende grössere Ungeuauigkeiten fortzuräumen. Es befindet sich nämlich diese Schraube über der Gleitfläche des Object- schlittens und kann daher abwärts nur bis zur Annäherung an die schräg stehende Metallplatte M Figur 1 geschroben werden. Es ist das jedoch völlig genügend, und dürfte es kaum nöthig sein, jene schräge Metall- platte mit einem zum Durchlassen der Schraube dienenden Ausschnitte durch ihre ganze Länge zu versehen. — Die hohe Schraubenmutter c Figur 1 gestattet ferner ein reichliches Aufwärtsschraubeu. Wird die Schraube f in Bewegung gesetzt, deren Gewinde bei meinem Mikrotome 25*5 mm lang ist, so erfolgt von ihrer Seite aus eine Hebung oder Senkung der Klammer in einer auf der oben be- schriebenen senkrecht stehenden Richtung. Hierbei ist die Drehungs- achse gegeben in der Linie BB Figur 2, und zwar findet die Drehung statt einerseits um das luigelgelenk ku^ andererseits um den Cylinder^/, während diesesmal der Cylinder i sich in seiner Höhlung nach innen oder aussen bewegt und Cylinder i und Schraube f Figur 1 mit Hülfe des Scharnieres n bald einen rechten, bald einen stumpfen oder spitzen Winkel eiuschliessen. Eine längliche, durch die Wandung der das Kugelgelenk umfassenden Metallhülle gehende Oeffnuug 0 Figur 1 ge- stattet das Aufwärts- resp. Abwärtsschweben des Verbindungsstückes p zwischen Kugelgelenk imd Klammer. Was nun die mit Hülfe der beschriebenen Vorrichtung erreichbare Feinheit der Einstellung betrifft, so sei zuerst bemerkt, dass die Ober- fläche jeder Schraubenmutter (Figur 1 c und d) in acht gleiche Theile getheilt ist, sodass man die anfängliche Stellung derselben bemerken und die Grösse der Umdrehung controliren kann. Nun kommen bei Schraube e mid f auf eine Schraubenlänge von 10 mm fünfzehn Um- läufe, und folglich findet bei einer Achtel-Umdrehung der Schrauben- mutter eine Hebung der Schraube um 0*0833 . . . mm statt. Bedenkt man nun, dass ein Theil dieser Hebung verloren geht durch die Be- wegung der Cylinder g und i in ihren Höhlungen, dass ferner das Schnittobject den Drehungsachsen viel näher liegt als jene Endpunkte der Schrauben c und f bei den Scharnieren m und n und daher auch eine geringere Hebung erfährt als diese, dass endlich die Schrauben- Zeitsohr. f. wiss. Mikroskopie. I. 4. 33 496 Henking: Neuer Objecthalter am Schlittenmikrotom. I, 4. muttern um viel weniger als ein Achtel ihres Umfauges gedreht zu wer- den brauchen — und es leuchtet ein, dass selbst eine höchst gering- fügige und dabei stets controlirbare Veränderung in der Lage des Schnittobjectes mit Leichtigkeit erzielt werden kann. Hat man die gewünschte Lage des Objectes gefunden, so kann man durch Anziehen der Schraube r den Apparat ganz fest stellen und völlig unbeweglicli machen ; es wird nämlich durch jene Schraube das etwas bewegliche Stück s der Hülle des Kugelgelenkes fest gegen letzteres angepresst. Die Hülle für das Kugelgelenk trägt auf ihrer Oberfläche den Nonius n o Figur 1 zum Messen der Dicke der Schnitte. Hebt sich das Object bei einer Verschiebung des Objectschlittens von 1 mm um y4(, mm, so kann man schon bei freihändiger Verschiebung des Schlittens ausser- ordentlich feine Schnitte erzielen, ohne Hülfsapparate nöthig zu haben. Hauptbedingung ist ein gutes Messer. Dasselbe muss sehr scharf sein ; die Schneide darf sich aber nicht biegen, wenn man mit einem Finger- nagel der Länge nach darunter hinstreicht, da sie sonst leicht vor dem Object ausweichen würde. Zweckmässig ist es, wenn der Messerhalter auf Elfenbein läuft (nach Prof. Thoma), da dadurch eine gleichmässigere und leichtere Be- wegung desselben bewirkt wird. An den betreffenden Stellen einge- schrobene und aussen abgeschliffene Elfenbeinstücke dürften hinreichend und dabei wenig kostspielig sein. Elfenbein unter dem Objectschlitten möchte dagegen weniger empfehlenswerth sich erweisen, da etwa vor- handene Unregelmässigkeiten der Schlittenbahn durch das Elfenbein kaum ausgeglichen werden dürften und auch bei der geringfügigen Be- wegung des Schlittens wenig ins Gewicht fallen möchten, während der Schlitten ohne Elfenbein entschieden fester steht und so dem Drucke des schneidenden Messers nachzugeben weniger leicht genöthigt ist. Anm. — Figur 1 zeigt den Objecthalter verkleinert, Figur 2 in natürlicher Grösse. 1,4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 497 Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. Von Professor Dr. Haus Gierke in Breslau. (Schluss). XI. Andere Metallsalze. Schwefel- metaile. Eisen- chlorid und Gerb- säure. Chlorpal- ladium . Palla- diiim und Säuren. 201) Landois. Die Imprägnation der Gewebe mit Schwefelmetallen. (Centralbl. f. d. med. Wiss. 1865, No. 55). , 202) Polaillon. i^tudes sur la texture des ganglions ner- veux peripheriques. (Journ. de l'Anat. et Phys. 1866, vol. III p. 43). 203) Fr. Eilh. Schulze. Eine neue Methode der Erhärtung und Färbung thierischer Gewebe. (Centralbl. f. d. med. Wiss. 1867 No. 13). 204) Bastian. L. legt die Gewebe zuerst in Lösungen von Metallsalzen und dann, wenn sie sich mit diesen gehörig durchtränkt haben, erzeugt er durch Schwefelwasserstoff oder Schwefelammo- nium Niederschläge. Zu dem Zweck wäscht er die Präparate zuerst in dest. Wasser ab und bringt sie dann in eine verdünnte Lösung von Schwefelammonium oder in schwaches Schwefel- wasserstoffwasser. Blei, Eisen, Kupfer, Platin und Quecksüber sind am besten [in ihren Sal- zen] zu verwenden. P. führt das Eisenchlorid in die mikrosko- pische Technik ein. Die Organe werden in einer Lösung von Eisenchlorid gehärtet. Die von diesen gefertigten Schnitte werden zuerst tüchtig gewaschen und dann so lange in eine dünne Gerbsäurelösung gebracht, bis sie sich schwärzen. Auf die Ganglien angewandt, ergiebt die Methode eine Färbung der nervösen Ele- mente, während die bindegewebigen ungefärbt bleiben. S. rühmt als vorzügliches Erhärtungs- und Färbemittel das Chlorpalladium; ganz be- sonders für das Muskelgewebe; ebenso aber auch für die an körnigem Protoplasma reichen zelligen Elemente der Drüsen und Epithelien ; während alles Bindegewebe, Fett etc. unge- färbt bleibt. Kleine, etwa bohnengrosse Stück- chen der Organe kommen in Va — 1 Unze einer Lösimg von 1 : 800 bis 1:1500; am günstigsten ist die Concentration 1 : 1000. Nach 24 Stunden sind die Stücke schnittfähig und gelb gefärbt. Man kann die Schnitte dann noch mit ammo- niakalischem Carmin roth färben. Der Engländer Bastian empfiehlt gleich- falls Palladium , das er nach der oben gege- benen (No. 117) Vorschrift für die Vergoldung gebraucht. 33* 1865 1866 1867 1869 498 G-ierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. Eisen- oxydul und an- dere Me- tallsalze. 205) Leber. Ziu' Kenntniss der Imprägnationsme- thoclen der Hornhaut und ähnlicher Ge- webe. (Arch. f. Oph- thalm. Bd. XIV p. p. 300). Chlorpal- ladium u. Carmin. Palla- diumcJilo- rür zur Darstel- lung der Cornea- \nerven. Suhlimat für Central- nerven- System. 206) Henle und Merkel in Heki.e's Hand- buch der Nerven- lehre des Menschen. Brschwg. 1871. 207) V. Than- hoflPer. Das Mikroskop und seine Anwendung. 1880 p. 143. 208) Golgi. Un nuovo processo di tecnica microsco- pica. (Rendic. R. istituto Lombardo. vol. Xn. 5 p. 20G— 210). L. hat für die Untersuchung der Hornhaut anstatt der Versilberung vei'schiedene andere Metallbehandlungen probirt. Als ganz vorzüg- lich empfiehlt er das Eisenoxydulsalz und das Ferridcyankalium. Er legt die'frische Hornhaut (des Frosches) in eine V2— Ipi'ocentige Lösung eines Eisenoxydulsalzes, entfernt vorsichtig das Epithel und lässt sie etwa 5 Mnuten in der Lösimg, dann spült er schnell in Wasser ab und bringt die Cornea sofort in eine Iprocen- tige Lösung von Ferridcyankalium, in der sie hin und her bewegt wird, bis sie intensiv blau ist. Dieselben Resultate erhält man durch Fäl- lung einer 2procentigen Lösung von schwefel- saurem Kupferoxydammoniak, welche einen geringen Ueberschuss an Ammoniak enthält, durch öprocentige Lösimg von Kaliumeisen- cyanür. Das Verhalten ist dasselbe. Zur gelben Färbung dienen schwache Lösimgen von Blei- zucker und chromsaurem Kali. H. und M. legen Schnitte des Central- nervensystems in eine Lösung von Palladinm- chlorid 1 : 300 bis 1 : 600, bis sie eine strohgelbe Färbung bekommen, was etwa 1 — 2 Mnuten dauert. Dann kommen sie in Ammonlakcarmin. v. Th. empfiehlt das Palladiumchlorür zum Färben der Nerven der Cornea. 1868 G. hat seiner Silberbchandlung der Schnitte vom Centralnervensystem eine neue Methode angereiht, welche äbnliche Resultate ergiebt. Die Stücke der Centralorgane von etwa 1—2 cm Durchmesser werden in Müi.i.KR'scher Flüssig- keit oder doppeltchromsaurem Kali erhärtet. Nach 15-20 Tagen kommen sie in 0-25- bis 0-50procentige Sublimatlösung. Erst nach 8 bis 10 Tagen, während welcher die Flüssigkeit täglich erneuert werden muss, ist dieReaction vollbracht. Die Stücke entfärben sich und ge- winnen das Aussehen frischer Hii'nsubstanz. Die angefertigten Schnitte müssen sehr gut gewaschen werden und können dann in Gly- cerin. aber auch in Balsam auf bewahrt werden. DieReaction betrifft die Ganglienzellen mit ihren Fortsätzen, ferner die glatten JMuskelfasern der Gefässe. Diese Elemente sind bei auffal- lendem Licht weiss, bei durchgehendem schwarz. Die besten Resultate hatte G. an der Gross- hirnrinde, wenig gute -am Kleinhirn und gar keine am Rückenmark. 1871 1880 1879 I, 4. Gierke: Färberei zu nükroskopisclien Zwecken. 499 Xn. Combinirte Tinctions- und Imprägnationsmethoden. A. Färbungen^ in denen die Carmintindion mit anderen verbunden ist. Carmin und Osmium. Carmin u. Chlor- palladium. Pikrin- säure und Carmin. Pikro- Carmin. 209) M. Schnitze 1 Die durch Osmium gefärbten Präparate uml Riidiieff. können noch im Carminammoniak tingii-t wer- Carmin und Hä^ matoxylin für Ent- loicklung des Kno- chengeioe- bes. (cfr. 194). 210) Fr. Eilh. Scliiilze. (cfr. 203). 211) Henle und Merkel. (Cfr. 206). 212) Schwarz. üeber eine Methode doppelter Färbung mikroskopischer Ob- jecte und ihre An- wendung etc. (Sitz- ber. d. k. Acad. d. Wiss. Wien Bd. LV). 213) Ranvier. Technique micro- scopique. (Ai'ch. de Phys. 1868 No. 2 p. 319, No. 5 p. 666). 214) Strelzoff. Zur Lehre der Knochenentwick- lung. (Central bl. f. d. med. Wiss. 1873, No. 18 p. 277—78). Derselhe. Ueber die Histoge- nese des Knochens. (Unters, a. d. pathol. Inst. Zürich 1873, p, 1—94). den. Ebenso werden die mit Chlorpalladium gelbgefärbten Präparate noch mit Carmin tin- girt. Das Gleiche geben H. u. M. an für Schnitte des Centralnervensystems. Aus dem Palladium- chlorid kommen dieselben, nachdem sie gut gewaschen, für ganz kurze Zeit (kaum ^Minuten) in eine stärkere Lösung des ammoniakaUschen Carmins. Die Axencylinder lebhaft roth, das Nervenmark gelb gefärbt. S. führt zuerst die Pikrocarminfärbung ein, indem er die Präparate erst in Carmin, dann in Pikrinsäure tingirt. Das Material wii-d zunächst in einer Mischung von 1 Th. Kreosot, 10 Th. Essig und 20 Th.Wasser 1 Minute lang gekocht und nach völliger Austrocknung in feine Scheiben geschnitten, dann diese 1 Stunde hindurch in verdünnter Essigsäure macerirt. Hierauf werden die Präparate in destillirtem Wasser gewaschen und 24 Stunden in ganz hell rosa aussehender Carminlösung tingirt, wieder gut gewaschen und 2 Stunden in einer Lösimg von 0066 g Pikrinsäure auf 400 cc Wasser gelassen. Endlich in Dammar eingeschlossen. Die Muskelfasern, Drüsen- inhalt, Gefässe und Nerven werden gelb, das Bindegewebe und alle Kerne roth. R. benutzt eine Mischung von conc. Pikrin- säurelösung und ammoniakaUschem Carmin zum Tingiren. Er rühmt dies neue Mittel als kostbar („precieux") imd empfiehlt es auf das angelegentlichste. Die Mischung soll derartig gemacht sein, dass sie das Aussehen der „jus de groseille" hat. Da sich in ihr leicht Pilze bilden, räth er, sie in einer verkorkten Flasche aufzubewahren und den Kork mit Kampfer- spiritus zu befeuchten. S. verbindet für die Untersuchimgen der Entwicklung des lüiochengewebes die Färbung mit neutralem Carmin und Hämatoxylin. Es färbt sich dann die verkalkte Grundsubstanz blau, die neugebiklete Knochensubstanz roth. (Leider sind diese schönen Präparate nicht haltbar. Die Hämatoxylinfärbung verblasst im Lauf der Jahre). 1865 1867 1871 1867 1868 1873 500 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 1,4. Carmin und Sil- ierlösung. Carmin undlndig- carmin. PiJcro- carmin. Carmin und in Alkohol lösliches Anilin- blau. Borax- Carmin und Borax- Indig- earmin. 215) Rouget. (cfr. No. 162). 216) Merkel. Technische Notiz. (Unters, a. cl. anat. Allst. Rostock 1874 p. 98 f.). 217) Baber. E. Cresswell. Note 011 picrocar- minate of Ammouia. (Quart. Journ. microsc. sei. 1874, p. 251-53). 218) Duval. Procede de colora- tion des coupes du Systeme nerveux. (Journ. de l'Anat. 1876, p. 111—112). Die mit Silberlösung behandelten [siehe oben] Präparate kommen noch für 2 — 3 Stun- den in eine Mischimg von Carmin-Ammoniak, Glycerin und Alkohol. M. verbindet die Tinction mit Carmin und Indigcarmin, namentlich für Gehirn und Rückenmark. Er mischt beide Stoffe zu einer violetten Flüssigkeit und färbt in ihr die Präparate. Das Nervenmark himmelblau, rothe Blutkörperchen grün, das Uebrige roth. An Knochen, die in MüLLEn'scher Flüssigkeit und Salzsäiu-e entkalkt waren, färbt sich nur die fertige lüiochensubstanz blau, alles Uebrige roth. 1873 B. handelt ausfühi-Uch über das Pikro- carmiii imd seiue Anwendung, wiederholt aber nur, was Schwakz undRANviEu angegeben haben. 219) Norris and Shakspeare. A new method of double staining. (Amer. Journ. med. sei. 1877 January) imd 220) Merbel. Double staining with a Single fluid. (Monthly microsc. Journ. 1877 Nov. and Dec. p. 242). Die Schnitte werden wie gewöhnlich in Carmin gefärbt mid in Alkohol gebracht, dann für 10 — 12 Minuten in eine schwache Lösung von Anilinblau (10 Tropfen einer gesättigten Lösung auf 10 g Alkoh. abs.) gebracht und in Balsam eingeschlossen. Nervenzellen und Axencylinder sind röthlich-violett, die Gefässe dagegen blau- violett. Das Bindegewebe, die Pia Mater und ihre Fortsätze sind nur blau gefärbt. N. u. S. und ebenso M. empfehlen als eine neue Tinctionsmethode die Färbimg in einer ]\Iischimg von Carmin und Indigcarmin. Sie machen zwei Lösimgen: 1) Carmin 2 g, Borax 8 g, Aq. dest. 130 g; 2) Indigcarmin 8 g, Borax 8 g, Aq. dest. 130 g. Die Flüssigkeiten gut im Mörser verrieben und filtrirt. Zur Slischung von jeder Flüssigkeit gleich viel zu nehmen. Die Schnitte kommen zimächst einige Minuten in Alkohol, dann 15 — 20 Minuten in jene JVIischung imd ebenso lange in eine ge- sättigte Oxalsäurelösung. Hierauf gewaschen und in gewöhnlicher Weise in Balsam einge- schlossen. Die Grimdsubstanz des Bindege- webes, des Knorpels und des Knochens werden blau, die Zellen roth gefärbt. Die GangUen- zeUen tingiren sich piu'purfarbig, ihre Kerne roth imd die Kernkörperchen blau; die Mark- scheide der Nervenfasern blau oder grün, die Axencylinder grün. 1,4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 501 Pikrocar- minsuures Natron und Pal- ladium- chlorür. Gute Me- thode, Pi- kroearmin anzu- fertigen. 221) Schieffer- tlecker. Kleinere histologi- sche Mttheilungen. IL Ueber eine neue Färbungsmethode des Centralnerven- systems. (Arch. mi- krosk. Anat. Bd. XV p. 38 f. Pikrocar- min und Eosin. 222) Klemensie- wicz. Beiträge ziu-Keunt- niss des Farben- wechsels der Cepha- lopoden. (Sitzber. d. Acad. d. Wiss. Wien Bd. LXXVIII, 1878, III. Abth. Juni). Borax- Carmin undlndig- carmin. 223) Lang. Eine neue Tinctions- methode. (Zool. Anz. Bd. II, 1879, No. 19 p. 45). 224) Seiler. Practical hints on preparing and mounting animal tissues. (Amer. microsc. Joum. vol. I No. 3 p. 220). S. modificirt die von Heni.e und Merkel in dem Handbuch der Anatomie des ersteren publicirte Methode der Doppelfärbung mit PaUadiumchlorür und Ammonikcarmin, indem er das letztere durch pikrocarminsaiu:es Natron [von Dr. Wii-le in Rostock hergestellt] ersetzt. Aus der Lösung des Chlorpalladiums, in der ilie Schnitte 1 — 2 Minuten bleiben, kommen sie in eine kalt gesättigte Lösimg des piki-o- carminsauren Natrons für 8 — 10 Minuten. In Lack oder Balsam einzuschüessen. Die Prä- parate dunkeln häufig etwas nach. Das pikro- carminsaiu-e Natron ist ohne Combination mit PaUadiumchlorür auch gut zur Tinction isolir- ter Ganglienzellen zu verwenden. K. fertigt sein Pikrocarmin so an, dass er zuerst 1 g Carmin mit 30 Tropfen conc. Am- moniakflüssigkeit verreibt und die Masse dann mit 200 cc Wasser verdünnt. Von dieser Carminlösung werden 2 Th. mit 1 Th. kalt gesättigter Pikrinsäurelösung gemischt und auf dem Wasserbade 8 — 10 Stimden gekocht. An- fänglich wird die verdampfende Flüssigkeit noch durch verdünnte Ammoniaklösung ersetzt, dann aber auf 3/4 ^is Vj Vol. eingedampft. Beim Abkühlen soU kein oder nur sehr ge- ringer Niederschlag ausfallen. Die vollkommen klare Flüssigheit ist in dicken Schichten dunkelschwarzroth, in ganz dünnen zeigt sie einen Stich ins Gelbe. L. rühmt die Doppeltinction mit Eosin und Pikrocarmin, da dieselbe sehr gut ganze , Thiere durchfärbt und nicht nur die Kerne und Kernkörper, sondern auch das Protoplasma der Ganglienzellen und die Nervenfasern düfe- renzirt. Eine Iprocentige Pikrocarmin- imd eine 2procentige wässerige Eosüilösung werden gemischt. In dieser Mschung bleiben die Objecte [ganze Thiere, z. B. Planarien] V2 — 4 Tage hindurch, dann in 70pro centigen, später in 90procentigen Alkohol, bis kein Farbstoff mehr ausgezogen wii-d. S. verbindet die Tinction mit einem be- sondern Borax- Carmin imd Indigcarmin. Er benutzt: a) Carmin 10 g, Borax 3-5 g, Aq. dest. 150-0 g, 95procentigen Alkohol 330-0 g ; b) Salz- säiu-e 1-0 g, Alkohol 40g; c) Lösung von indig- schwefelsaiu-em Natron 2 Tropfen, 95 " ,, Al- kohol 300 g. — Das üidigschwefelsaure Natron bereitet S. selbst, indem er besten Bengal- indigo mit rauchender Schwefelsäure digerirt, die überschüssige Säure auswäscht, luid mit Kochsalz fällt. Das gut ausgewaschene Prä- cipitat wird in warmem destillii'ten Wasser bis zur Sättigung gelöst. Zum Aufhellen der Präparate wird Benzol, zum Einschluss in 1878 1878 1879 ! 1879 502 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. PiJcro- carmin. 225) Gage. Preparation of Ran- viEii's Picrocarmine. (Amor, monthly mi- crosc. Joiu-n. vol. I p. 22). 226) Mayer, P. (cfr, No. 28). Säurebe- handlung der Pikro- carmin- Präpa- rate. Carmin, Pikrin- säure und Krapp. Pikrocar- min und Häma- toxylinmit Säurebe- handlung. Borax- Gar min und In- digcar- min. 227) Neuniann. Die Pikrocarmiiifär- bung und ihre An- wendimg auf die Entwicklungslehre. (Arch. mikrosk.Anat. Bd. XVm p. 130— 161). warmem absoluten Alkohol gelöster Canada- balsam verwandt. Eine bestimmte Quantität Carmin wird in der öOfachen Menge starken Ammoniaks, und eine gleich grosse Menge Pikrinsäure in dem lOOfachen Volumen Wasser gelöst. Beide Lösungen gemischt und bei 45" C. auf V4 Vol. eingedampft, dann durch eine doppelte Schicht Filtrirpapier filtrirt und endlich zur Trockne eingedampft [bei 40"]. Eine Lösung des Pul- vers von 1 : 100 muss klar sein. Ist sie es nach mehrmaligem Filtriren nicht, auch nicht nachdem man mehrere Tage hat absetzen lassen und dann nochmals filtrirte, so muss man noch einmal die ursprüngliche Menge Ammoniak zusetzen und wieder eindampfen. Ist die Lösung aber klar, so setzt man zu 100 cc derselben 25 cc reines Glycerin und 10 cc 95procentigen Alkohol. Diese Lösimg ist sehr haltbar. M. empfiehlt für manche Zwecke das Pikrocarmin, das manchmal präciser wirkt als alle anderen Farbstoffe. Er empfiehlt eine ammoniakalische Carminlösimg (2 : 25) mit conc. wässeriger Pikrinsäure zu versetzen [un- gefähr mit 4 Voll.] so lange kein Niederschlag entsteht. Um das öfter vorkommende Misslingen der Pikrocarminfärbung zu vermeiden, empfiehlt N. die in dem RANviEii'schen Pikrocarmin ge- färbten Schnitte zunächst in mit Salzsäure gesäuertes Glycerin (1 Th. Säure : 200 Th. Glycerin) zu bringen und unter dem Mikroskop die richtige Dauer der Einwirkung zu con- trolliren. Dann werden die Präparate in reines Glycerin gebracht. 228) Richardson. R. färbt mit einer Combination von Carmin, Section of larynx of Pikrinsäiu-e und Krapp, human foetus. (Quart, Journ. Microsc. p. 113). 1880 229) Gibbes. On the double and treble staining of animal tissues. (Journ. R. Microsc. Soc. vol. III p. 390—93). a) G. empfiehlt zur Tinction Pikrocarmin- I Hämatoxylin. Die Präparate werden aus der Pikrocarminlösung für 1 Stunde in mit etwas ■ Pikrin- oder Essigsäure angesäuertes Wasser I gebracht, dann in die Hämatoxylinlösung. Für ! ZeUtheilung, für Epithel- imd Spermatozoen- Entwicklung sehr zu empfehlen. b) G. wendet auch wie Seiler (No. 224) Carmin-Indigcarmin an. Das Carmin ist wie dort Boraxcarmin: Carmin 20 g, Borax 80 g, Wasser 300 g. In diese Lösung kommen die Schnitte für einige Minut.en, dann in mit Salz- säiu'e angesäuerten absoluten Alkohol (1 Säure : 20 Alkohol). Sind sie in diesem wieder hell- rosa geworden, so werden sie in Methylalkohol 1880 1880 1880 1880 1880 1,4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 503 Pikrocar- min - Ani- lin-Fär- bungen. Osmium u. Pikro- carmin. Pikrin- säure und Pikro- earmin. Pikro- carniin u. Häma- toxijlin. Pikro- carmin u. Jodgrün. Pikrocar- min-Be- reitung. 230) Stirllng. On double and treble staiuing of microsc. specimens. (Journ. Anat. a. Phys. vol. XV p. 349—354). gewaschen und nun in Indigcarmin gefärbt bis sie deutlich blau sind. [Gesättigte wässerige Indigcarminlösung wird zu Methylalkohol hin- zugegossen, bis dieser tief blau erscheint. Ein etwaiger Niederschlag ist abzuliltrirenj. c) G. fertigt auch Pikrocarmin- Anilinprä- parate an. Die Schnitte zuerst in eine Lösung von Pikrocarmin (10 Tropfen auf ein ührglas Wasser), dann in eine Anilinfarbe. 1881 231) AVeigert. Zur Technik der mi- kroskojmchen Bac- terienuntersuchimg. (Arch. pathol. Anat. u.Phys.Bd.LXXXIV p. 275, 315). St. empfiehlt eine Reihe von doppelten und dreifachen Färbungen, besonders für mikroskopische Curse. Einmal wendet er sehr gern das Pikrocarmin an, z. B. für Blut- körperchen und Epithelien nach Ueberosmium- behandlung. Ferner fixirt er zuerst in Pikrin- säure und färbt dann in Pikrocarmin. Diese Methode ist gut für Blutkörperchen, dann für elastisches Gewebe und elastischen Knorpel, da die elastischen Elemente sich gelb, die binde- gewebigen sich roth färben. Bei foetalen, in Pikrinsäure entkalkten Knochen färbt Pikro- carmin Bindegewebe und Knochenkörperchen roth, die Knochengrundsubstanz aber gelb. Bei grösseren Arterien wird das Bindegewebe roth, elastisches Gewebe gelb, platte Muskel- fasern gelbbraun. Die combinirte Anwendung von Häraa- toxylin und Pikrocarmin ist für Haut, Knochen - entwicklung und für glatte Muskeln zu empfehlen. Pikrocarmin giebt auch sehr gute Resultate in Verbindung mit Anilinfarben, z. B. Jodgrün. W. bereitet Pikrocarmin in folgender 1881 Weise: 2 g Carmin werden mit 4 g Ammo- niak Übergossen und 24 Stunden an einen vor Verdunstung geschützten Ort gestellt. Dann werden 200 g conc. Lösimg Pikrinsäure zugesetzt, nach anderen 24 Stunden geringe Mengen Essigsäure, bis ein stärkerer Nieder- schlag zu bemerken ist. Man setzt nun in 24stimdigen Pausen tropfenweise Ammoniak hinzu bis endlich die Lösung klar ist. Färbt diese Lösung zu roth, so setzt man noch ein wenig Ammoniak hinzu, färbt sie zu gelb, so kommt ein wenig Essigsäure hinzu. 504 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 1,4. Pikrocar- min und grüne Anilin- farben. Carmin und pi- krinsaures Ammo- niak. Borax- Carmin u. Borax- Indig- carmin. 232) Richardson. Multiple staining of animal tissues with picrocarminejodine- and malacliit-green dyes and of vegetable tissues with atlas- scarlet, soluble blue etc. (Journ. R. Mi- crosc. Sog. vol. I p. 868—872). 233) Hoyer. (Cfr. No."30). 284) Boniiet. Zur mikroskopischen Technik. (Dtsch. Zeitsch. f. Thiermed. Bd. VII p. 301— 303). R., der schon früher (cfr. No. 228) eine Doppelfärbung durch Mischung von Carmin, Pikrinsäure und Krapp empfahl, giebt jetzt Combinationen des Pikrocarmin mit Anilin- farben an, die ihm gute Dienste für thierische Gewebe leisteten. Es sind: a) Pikrocarmin und eine dünne durchscheinende Lösung von gleichen Theilen Jod- und Malachitgrün; b) Pikrocarmin und eine Mischung (ebenfalls transparente) der beiden grünen Farben, in der aber Malachitgrün überwiegt; c) Pikro- carmin und Malachitgrün. H. giebt eine Anweisung, um ein con- stantes Pikrocarmin herzustellen. Sein Carmin - pulver (cfr. No. 30) wird in einer conc. Lösung von neutralem pikrinsauren Ammoniak gelöst. B. empfiehlt für viele Gewebstinctionen die in den No. 219 u. 220 angegebenen Vor- schriften von NoKRis u. Shakespeare und von Merbel. 1881 1882 1882 B. Hämatoxylin comhinirt mit anderen Farbstoffen [ausgenommen dem Carmin'] und Mctallsalsen, Combina- tion von Häma- toxylin u. Pikrin- säure. Silber und Häma- toxylin. Häma- toxylin u. Anilin- blau. 235) Gerlach. Structur der Gefäss- häute. (Sitzber. d. phys. med. Soc. Er- langen. 29. Juli 1872). I G. bringt transversale Schnitte getrocknc- ! ter Gefässe in eine schwache Hämatoxylin- ' lösung, der ein wenig Alaun zugesetzt ist, legt sie dann, wenn sie blau gefärbt sind, für einige wenige Minuten in reine Essigsäure und endlich ebenso lange in ziemlich verdünnte Pikrinsäurelösung. Hierauf werden sie abge- waschen und in Glycerin oder Canadabalsam eingeschlossen. Die glatten Muskelfasern und besonders die Kerne sind violett, das Binde- gewebe rothbraun und die elastischen Fasern und Platten strohgelb tingirt. 236) Eberth. Experimentelle Un- tersuchungen über die Entzündung der Hornhaut. (Unters. d. pathol. Inst. Zü- rich p. 1—58 Hft. II 1874). 237) Toole. A double staining with Hämatoxylin and Anilin. (Quart. Journ. microsc. sei. 1875, p. 375). Untersuchung der die com- E. empfiehlt für die normalen und entzündeten Cornea binirte Behandlung mit Silber und Hämatoxy lin. Zu dem Zweck kommt die Cornea zuerst in eine V2 — Iprocentige Lösung von Höllen- stein, dann nach gehörigem Auswaschen in aq. dest., für 1 — 3 Stunden in eine Hämatoxy lin- lösung. T. empfiehlt für Gehirnschnitte eine Doppelfärbung mit Hämatoxylin und Anilin- blau. Die Schnitte kommen zuerst für 24 Stun- den in Hämatoxylin, dann werden sie mit Al- kohol und Wasser gewaschen und endlich für '/.j — 3/4 Minute in die Anilinblaulösung ge- bracht. Nach abermaligem Waschen in Alkohol 1872 1874 1875 1,4. Gierke: Färberei zu mitroskopischen Zwecken. 505 Häma ■ toxylin u. Anilin- schivarz. Häma- toxylin u. Eosin. Eosine- hema- toxylique. 238) Bevan Lewis. (Cfr. No. 94). 239) Busch. Die Doppelfärbung des Ossiticationsran- des mit Eosin und Hämatoxylin (Ver- handl. d. Berl. Phys. Ges. 1877 No. 14). Häma- toxylin u. Bis- marck- hraun. 240) Renaut. Sur l'eosine - hema- toxylique et sur son emploi en histologie. (Compt. rend. t. LXXXVIII p. 1039 — 1042). 241) Brandt. Färbung lebender einzelliger Organis- men. (Biol. Central- bl. 1881 No. 7 p. 202). können sie dann in Balsam eingeschlossen werden. Die Kerne und Zellkörper färben sich verschieden. B. L. hat für die Tinction von Gehirn- schnitten neben andern Methoden eine Doppel- färbung gefunden, die sehr schöne Präparate ergiebt. Die Schnitte kommen erst in Häma- toxylin, dann in Anilinschwarz (das SANKEv'sche Aniline blue-black No. 93). Ziu- combinirten Tinction des Verknöche- rungsrandes empfiehlt B. Eosin und Häma- toxylin. Zunächst kommen die Schnitte ent- kalkter Knochen für einige Tage in eine V2- procentige Chromsäurelösung oder Iprocentige Lösung von doppeltcbromsaurem Kali, dann werden sie tüchtig ausgewaschen und in wässe- rige Eosinlösung gebracht. Sind sie hierin gefärbt, so werden sie noch in die gewöhn- liche Hämatoxylinlösung gebracht. Die Knorpel- Grundsubstanz erscheint an der Verkuöche- rungsgrenze dieser Präparate rein blau, die Kerne der dem Knochenrande benachbarten Knorpelzellen roth, der Inhalt der Markräume auch rein roth, während die schon gebildeten KnochenbäUtchen eine Mischfarbe zwischen blau und roth annehmen. Man mische gleiche Theile neutralen Gly- cerins und einer gesättigten alkoholischen oder wässerigen Eosinlösung, füge dann tropfen- weise von der nach Böhmer (No. 37) bereiteten Hämatoxylinlösung, bis die grüne Fluorescenz kaum noch zu bemerken ist. Die mit diesem „Rosine -hematoxylique" tingirten Prä- parate werden in salzhaltigem Glycerin (1 : 100) oder in Canadabalsam eingeschlossen. Im letzteren Fall aber müssen sie mit eosin- haltigem absoluten Alkohol und mit eosin- haltigem Nelkenöl behandelt werden. Die Tinction giebt gute Resultate an Material, das in Alkohol, Chromsäure, Osmium conservirt, resp. erhärtet wurde. Die Kerne färben sich violett, Bindegewebe perlgrau ; elastische Fasern und Blutkörperchen dunkelroth; das Proto- plasma der Zellen und die Axencylinder rosa. In den Speicheldrüsen färben die schleimbe- reitenden Zellen sich blau, ihre Kerne violett, die GiANUzzi'schen Halbmonde intensiv rosa. B. combinirt für die Färbung einzelliger Organismen die auch einzeln angewandten Farbstoffe, Hämatoxylin und Bismarckbraun mit Glück. 1877 1879 1881 506 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. Eosine hema- toxylique. Häma- toxylin u. Anilin- farben. 242) Renaiit. Siir lemode de pre- paration et l'emploi de l'eosine et de la glycerine hematoxy- lique en histologie. (Arcli. de Phys. 1881 No. 4 p. 640). 243) Stirliiiff. (Cfr. No. 230). R. (cfr. No. 240) giebt noch wieder eine andere Bereitungsweise des „Rosine hematoxy- lique" an. Er löst zunächst Eosin bis zur Sättigung in kochsalzhaltigem Glycerin und mischt dies mit einem Glycerin, in dem Kali- alaun bis zur Sättigiuig gelöst ist. Dann filtrirt er und setzt alkoholische Hämatoxylintinctur zu. Sollen die Präparate in Canadabalsam ein- geschlossen werden, so müssen sie (wie oben No. 240) mit eosinhaltigem Alkohol und Nelkenöl behandelt werden; sie können aber besser in der Färbeäüssigkeit selbst eingeschlossen werden. St. empfiehlt die combinii-te Anwendung von Hämatoxylin und Jodgrün, oder dem ersteren und Eosin. 1881 Ü. Comhination verschiedener Anilinfarben und solcher mit MetallsaUcn. Da fast alle Anilinfarben gemischt worden sind, werden im Folgenden nur die wichtigeren Angaben aufgeführt. Pikro- Eosin. Eosin und Methyl- grün. 244) Lawdowsky. (Cfr. No. 88). 245) Calberla. (Cfr. No. 96). Eosin und Silber. 246) Renaut. (Cfr. No. 99). L. empfiehlt, Pikrinsäure zu einer an freier Luft abgestandenen aramoniakalischen Eosin- lösung bis zur Neutralisation hinzuzusetzen. Diese Mischung, Pikro-Eosin, sei ein gutes Färbemittel. C. benutzt die von ihm für isolirte Tinc- tionen empfohlenen Farbstoffe (No. 96) auch in combinirtcr Anwendung. 1 Th. Eosin Avird zusammen mit 60 Th. Methylgrün in warmem Alkohol von 30 ",,i gelöst. In dieser Lösung werden die Schnitte gefärbt. Es würden die Cuticularbildungen grasgrün, Lymphzellen blau bis blaugrün ; quergestreifte Muskelfasern roth, ihre Kerne grün; glatte Muskelfasern grün und ihi'e Intercellularsubstanz roth. In den Speicheldrüsen färben sich die Zellen der Aus- führungsgänge blau, die Drüsenzellen roth, die Zellen des Bindegewebes grün bis grünblau. In den Sehnen werden die die Bündel umspinnen- den Bindegewebsfasern schwach grün, ihre Kerne intensiv grün, die RAxviEK'schen Zellen einfach grün und das Stroma der Sehnenbün- del rosenroth. R. combinirt bei der Untersuchung der Sehnenzellcn seine Eosinfärbung mit der Ver- silberung. Zu dem Zweck versilbert er die Schwänze von jungen Ratten imd Mäusen nach gewöhnlicher Methode und tingirt sie dann in Eosin-Lösung. 1876 1877 1877 I. 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 507 Eosin u. andere Anilin- farhen. In Wasser lösliches Anilin- hlau und PiJcrin- säure. VcrscJiie dene Ani- linfarben. Anilin- blau und Fuchsin {Ma- genta). Gold- Anilin- Prä- j)arate. 247) SchiefFer- decker. Kleinere histologi- sche Mittheilungen. (Arch. mikr. Anat. Bd. XV p. 30—40). 248) Tafani. Nouveaii procede de coloration des pre- parations microsco- piques avec une So- lution picro-aniliqne. (Journ. de Microgr. 1878 p. 127—130). 249) Ehrlich. (Cfr. No. 102). 250) Barrett. Staining fluids for vegetable tissues. (Journ. R. Soc. vol. 11 No. 7 p. 942). 251) Glbbes. (Cfr. No. 229). S. verwendet schon seit 1876 zur Doppel- färbung einen rothen Farbstoff, das Eosin, nnd mehrere blaue oder grüne Anilinfarben : z. B. Dahlia, Methyl violett und Anilingrün [das letztere sei aber nicht identisch mit dem von Calberla empfohlenen Methylgrün (No. 96 u. 114). Eine andere grüne Anilinfarbe, Smaragd- grün, sei ebenfalls von seinem Grün ver- schieden nnd für die Tinction werthlos]. S. fertigt von Eosin eine alkoholische Lösung, von den 3 anderen Farben eine wässerige von 1 "/i,. Die Schnitte kommen nun zuerst in Alkohol, dem einige Tropfen Eosin zugesetzt sind. Nach- dem sie gefärbt [die Zeitdauer je nach den Präparaten sehr verschieden] werden sie kurz in Wasser, das etwas Farbe auszieht, ge- waschen und in eine Lösung eines der anderen Farbstoffe gebracht. Nachdem sie hierin ganz intensiv, fast schwarz gefärbt sind, werden sie in Wasser gewaschen und in Alkohol gelegt. Dieser zieht beide Farbstoffe wieder heraus, und muss man nun also sehr genau aufpassen, um das richtige Moment der schönsten Fär- bung abzuwarten. Bestimmte Zeitdauer lässt sich natürlich nicht angeben. Das zum Auf- hellen benutzte Nelkenöl greift das Eosin nicht mehr an, die anderen Stoffe werden aber noch etwas ausgezogen. Es muss daher das Nelkenöl vor dem Einschluss in Canadabalsam auf das Sorgfältigste entfernt werden. — S. bespricht dann in sehr ausführlicher Weise die Wii'kung dieser Doppelfärbungen auf die einzelnen Organe. T. mischt Pikrinsäure und Anilinblau und erhält ein schönes Kernfärbemittel. Zu 100 Th. einer gesättigten wässerigen Pikrinsäure-Lö- sung kommen 3 — 4 Th. einer gesättigten 1878 Lösung von Anilinblau. Auch kann Färbeflüssigkeiten nach einander man beide benutzen. E. combinirt für die Färbung der Granu- lationen der Leukocythen die verschiedenen Anilinfarben. B. bringt pflanzliche Gewebe zunächst in eine Lösung von „Craw-shaw's aniline blue dye", dann in starke Essigsäure und von da in eine schwache Lösung von Magenta (Jitdson's dye). Jetzt wieder in Essigsäure, und in Glyceringelatine eingeschlossen. G. vergoldet die Präparate zuerst und färbt sie dann in Anilinfarben. 1878 1879 1880 508 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 1,4. Goldbe- Jtandlimg mit Anilin- tinction. Atlas- scarlet {Schar- lach) und Anilin- blau. Scharlach, lösliches Blau, Jod- u. Mala- chitgrün. Gentiana- violett und Eosin. Färbung der Blut- körper mit Eosin u. Methyl- anilin- grün. 252) Stirling. (Cfr. No. 230). 253) Richardson. On a blue and scar- let double stain etc. (Journ. R. Microsc. Soc. vol. I p. 573— 574 und p. 868—872 Titel cfr. oben No. 232). 254) Johne. Zur mikroskopischen Technik(Dtsch. Zeit- schr. f. Thiermed. u. vergl. Pathol. Bd. II p. 401—403). 255) Moore. Double staining of nucleated blood cor- puscles (Micr. 1882, Bd. II p. 73—76). und 256) Stowell. Coloration diflferen- tielle des globules nuclees du sang (The Microscope and its relations to Med. and Pharmacy 1882).^ St. empfiehlt warm die von Gibbes (cfr. No. 251) vorgeschlagene Vergoldung mit nach- träglicher Anilinfärbung. Er benutzt hierzu Anilinblau, Jodgrün und Rosein. R. empfiehlt folgende Doppelfärbung. Die Schnitte [er spricht zunächst von Rücken- markspräparaten, empfiehlt aber die Methode auch für andere Organe] kommen zuerst in eine wässerige Lösung von Atlasscarlet [der Farbstoff wird in Glycerin, dem ein wenig Alkohol zugesetzt ist, gelöst, dann dest. Wasser hinzugefügt]. Nach sehr lange dauernder Ein- wirkung kommen die Schnitte in eine Lösung von in Wasser löslichem Anilinblau [dieselbe wird bereitet, indem einige Tropfen einer conc. Lösung des Farbstoffes in Glycerin mit viel dest. Wasser verdünnt werden. Nach ge- nügender Färbung legt man die Schnitte in Wasser, dem einige Zeit nachher Eisessig hin- zugefügt wird. Dann Einschluss in Balsam. Die Farben bezog R. von Brook, Limpson und SriLLEK, Old Bond Street, London. Die Arbeit entbehrt aUer Zahlenangaben, ist daher schwer zu prüfen. In dem zweiten No. 232 angeführten Auf- satz empfiehlt R. für die Tinction von pflanz- lichen Geweben Combinationen von Scharlach (Atlasscarlet), löslichem Blau, Jod- und Mala- chit-Grün. J. färbt doppelt mit Gentianaviolett [an- statt dessen auch wohl Hämatoxylin] und Eosin [anstatt dessen auch Pikrinsäure]. Die beiden letzten Stoffe setzt er dem zum Aufhellen des mit den erstgenannten Farben tingirten Schnit- tes gebrauchten Nelkenöl hinzu. M. und St. färben die rothen Blutkörper- chen so, dass sie das Blut auf dem Object- träger auftrocknen lassen, dann nacheinander Eosin (1 : 50 Wasser und 50 Alkohol) und Methylanilingrün (1 : 100 Wasser) einwirken lassen. Doch muss die zuerst aufgetragene Lösung wieder eingetrocknet sein, ehe mit der zweiten benetzt wird. Nachdem auch diese getrocknet, wird in Balsam eingeschlossen, 1,4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 509 D. Cornbination der Gold- und SilhermetJioden. Silber und Gold. Silier und Gold. Silber und Gold. Gold und Silber. 257) Ranvier. (Cfr. No. 151). 258) Hansen. Wiener med. Jahrb. 1871. 259) Lawdowsky. (Cfr. No. 184). 260) Hoggan. Joiirn. de l'Anat. et Phys. 1879 p. 54, 588. R. räth, die Versilberung und Vergoldung zu combiniren. H. ebenso. L. ist gleichfalls und unabhängig von Hansen u. Ranvier auf diese Combination ge- kommen. Er bringt die Präparate, nachdem sie die Silberbehandlung durchgemacht und dimkel geworden sind, in die Goldlösung. Die Concentration der beiden Lösungen muss für jeden besonderen Zweck ausprobirt werden. H. fertigt nach der oben beschriebenen Methode nicht nur Versilberungen, sondern combinirt auch die Silber- und Gold-Methode. 1868 1871 1874 1879 Indigcar- min u. Pikrin- säure. E. Indigcarmin und Pikrinsäure. 261) Jullien. Sur une nouvelle methode de colora- tion des dlements histologiques (Lyon med. 1872 No. 17). J. empfiehlt ein Gemisch von Indigcarmin und concentrirter Pikrinsäure. Dasselbe hat eine schöne grüne Färbung. Es färbt binde- gewebige Theile blau, epitheliale gelb. Die Tinction erhält sich in Glycerin. 1872 Orseille. 262) Wedl Ueber Orseille als Tinctionsmittel für Gewebe. (Arch. f. pathol. Anat. Bd. LXXIV, p. 143). Nachtrag. W. empfiehlt den aus Roccella tinctoria und !' 1878 andern Flechten gewonnene Farbstoff" Orseille für die Tinctionstechnik. Einzelne wenig beachtete Versuche, das salpetersaure Silber- oxyd für mikroskopische Untersuchungen zu verwenden, sind schon vor langen Jahren angestellt worden. So giebt Krause * an, dass sein Vater schon im Jahre 1844 bei der Durchforschung der Epidermis diese Substanz verwandt habe, um die Grenzen der Zellen deutlich zu machen. Später, im Jahre 1854, wurde von Flinzek (133)2 bei dem Ophthalmo- logen Coccius eine Dissertation gearbeitet, welche die Anwendung des Höllensteins als eines therapeutischen Mittels bei Augenkrankheiten zum ') Handbuch der menschlichen Anatomie 3. Aufl. 1876, Bd. I, p. 104. ^) Die in Klammern hier und in der Folge beigefügten Zahlen beziehen sich auf die Nummern der Tabellen. 510 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. Thema hatte. In dieser wurde des mikroskopischen Befundes an der herausgeschnittenen Cornea gedacht und auf die Niederschläge zwischen den Zellen derselben aufmerksam gemacht. His untersuchte diese Wir- kung des Silbersalzes auf die gesunde und kranke Cornea genauer und gab 1856 in einer kleinen Schrift einen Bericht über seine Beobach- tungen (134). Trotz dieser Erfahrungen aber und trotz dieser Publica- tionen war in dem Höllenstein noch nicht ein neues Hülfsmittel der mikroskopischen Technik gefunden worden. Um es dazu zu machen, mussten erst die schönen Resultate der Carmiufärbung bekannt werden. Wie in Folge dieser schnell sich Anerkennung verschaffenden Methode mikroskopischer Forschung allerhand verschiedene Farbstoffe durch- probirt wurden, so benutzte auch v. Recklinghausen (135, 136) das durch die publicirten Thatsachen sich sehr empfehlende salpetersaure Silberoxyd zu ähnlichem Zwecke. Er studirte die Wirkung desselben auf alle Gewebe des Körpers und empfahl es 1860 als eine neue Methode der mikroskopischen Forschung. Im Jahre 1862 gab er dann die be- kannten und anfänglich viel bestrittenen Deutungen der bei der Silber- behandlung entstehenden Zeichnungen (136). Er zeigte, dass sich die Kittsubstanz zwischen den Epithelzellen ganz besonders gierig mit diesem Metallsalz verbindet, und dass so die zierlichen, von zarten, unregel- mässig verlaufenden schwarzen Linien begrenzten Felder entstehen. Ebenso behauptete er, dass das gelöste Silbersalz sich bei ganz schwacher Ein- wirkung auf ein Gewebe zuerst in den feinen, Flüssigkeit enthaltenden Räumen und Spalten desselben niederschlage und sich erst nach längerer und intensiverer Einwirkung mit den solideren Theilen verbinde. In dieser Weise fand er die Anfänge des Lymphgefässsystems. So war die mikroskopische Technik um ein werthvolles Hülfsmittel der Unter- suchung bereichert. Neben der Tinction mit gelösten Farbstoffen stand dem Histologen die Imprägnation mit löslichen Metallsalzen zu Gebote. Und unzweifelhaft muss das Verdienst, diese Methode in die mikro- skopische Technik eingeführt zu haben, von Recklinghausen zuerkannt werden. Es erhob sich bald ein kleiner Prioritätsstreit zwischen ihm und His (138, 139), aber mit Recht hebt der erstere hervor, dass Flinzer-Coccius und His zwar die Wirkung des salpetersauren Silbers auf die Cornea beobachtet und beschrieben hätten, dass er aber allein diese Silberbehandlung zu dem Werth „einer anatomischen Unter- suchungsmethode" erhoben hätte. Von dem weit zurückliegenden Versuch aber des älteren Krause wusste man damals nichts, wie er ja überhaupt unbekannt geblieben ist. Trotzdem nun aber die Silber- imprägnation bald nach der Carmintinction gefunden und lebhaft I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 5ll empfohlen wurde; trotzdem dass man ihr die Auffindung so äusserst interessanter und damals so grosses Aufsehen erregender Thatsacheu verdankte, gewann sie doch nicht dieselbe Bedeutung wie jene, da ein- mal ihre Anwendungsweise doch nur eine beschränkte ist, und da zweitens sehr bald eine Reihe von Forschern als eifrige Gegner der- selben auftraten. Sie erklärten die entstehenden Zeichnungen für Kuust- jiroducte, für zufällige Niederschläge des Silbersalzes, welche durchaus nicht vorgebildeten Elementen der Gewebe entsprächen. Man warnte energisch vor Trugbildern und Trugschlüssen und suchte in der ver- schiedenartigsten, oft sehr gezwungenen Weise die zierlichen Silber- linien der Präparate zu deuten. Alles Mögliche sollten sie vorstellen, nur nicht natürliche, durch das sich schwärzende Metallsalz hervorge- hobene Zeichnungen der Gewebe, welche der Structur derselben ent- sprechen. Ein heftiger Streit erhob sich und förderte eine umfangreiche Literatur zu Tage, die heute nur noch ein historisches Interesse hat (140 — 149 und 153 — 158). Wirft man einen etwas genaueren Blick auf die Geschichte dieses Streites und die Entwicklung der Versilbe- rungsmethode, so erkennt man deutlich, wie der heftige Kampf und die zahlreichen gegen die Zuverlässigkeit derselben ausgesprochenen Bedenken ihre Weiterausbildung verhinderten. Es kam zunächst nur darauf an, festzustellen, ob sie ein brauchbares Hülfsmittel der mikro- skopischen Forschung sei, geeignet, bisher dunkle Punkte der Gewebe- lehre zu beleuchten und zu erhellen, oder ein Irrlicht, das den Forscher in die Sümpfe der Täuschung verlockt. Das war also keine Zeit, um viel mit ihr zu experimentiren, sie zu verbessern und weiter auszubilden. Einen längeren Zeitraum hindurch, bis 1867, ist keine Arbeit und nicht einmal irgend eine Notiz zu finden, welche in Bezug auf die Versilbe- rung technisch Neues gebracht hätte, während in diesen Jahren eine grosse Anzahl von Streitschriften erschienen, welche diese Methode an- griffen oder vertheidigten. 1867 schien sie zu ihrem Recht gekommen und allgemein anerkannt zu sein. Jetzt warf man sich aufs Neue aufs Experimentiren, suchte sie weiter zu entwickeln und durch verschiedene Mittel zu verbessern. So veränderte Müller (150) die v. Reckling- HAusEN'sche Methode, indem er die Präparate nach der Behandlung mit Höllenstein in Jodsilberlösung brachte, Ranviee, (151), indem er sie aus der Lösung des ersteren Salzes in eine solche von Goldchlorid legte; Legros (152) endlich wandte zur Nachbeliandlung unterschwefligsaures Natron an. Nach kurzer Pause nun aber begannen im Jahre 1869 mit einer Arbeit von Robinski wieder die polemischen Schriften, der Kampf um die Bedeutung der Silberlinien entbrannte aufs Neue, imd wiederum Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I, 1. 34 512 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 4. wagte Niemand während dieser Periode der tlieoretischen Discussion sich mit Versuchen zur Verbesserung der Technik der Methode abzu- geben. Während der nächsten Jahre wird nichts hierauf Bezügliches publicirt, dagegen ist abermals eine ganze Reihe von Schriften zu ver- zeichnen, welche v. Recklikghausen's Deutung der Silberlinien auf das Heftigste angreifen oder dieselbe vertheidigen. Endlich mit dem Beginn der siebziger Jahre hört die Polemik auf; die Silbermethode hat sich eine feste und gesicherte Stellung in der mikroskopischen Technik er- worben, die von nun an nur noch ganz vereinzelte Anfechtungen erfahren sollte. Bei den vielen und energisch ausgesprochenen Zweifeln der ersten Hälfte der sechziger Jahre, ob man durch die Behaudlung mit Höllen- stein überhaupt brauchbare, zu Schlüssen in Hinsicht der Structur sich eignende Präparate erhalte, konnte sich nicht nur diese Methode selbst nicht weiter entwickeln, sondern man fand auch nicht den Muth, Ver- suche mit anderen Metallsalzen anzustellen und so ähnliche Methoden zu finden. Nur in dieser Weise lässt es sich erklären, dass, obgleich V. Recklinghausen schon 1860 das Silbersalz als Hülfsmittel der mikro- skopischen Technik empfahl, und obgleich ja seine Methode durch die lebhaft geführte Polemik hinreichend bekannt wurde, doch erst in den Jahren 1865 und 1866 andere ähnliche Stoffe zur mikroskopischen Untersuchung herangezogen und empfohlen wurden ; während man doch nach dem Bekanntwerden der Carminfärbung alle möglichen Farbstoffe durchprobirte, um andere mikroskopische Tinctionsmittel von gleichem Werthe zu erhalten. In den erwähnten Jahren dann freilich wurden der histologischen Technik zwei Methoden gewonnen, welche entschieden die wichtigsten dieses Jahrzehnts sind und überhaupt zu den vornehm- sten Hülfsmitteln der mikroskopischen Forschung gehören. Ich meine die Behandlung der Präparate mit Ueberosmium und mit Goldchlorid (oder Goldchlorid-Natrium resp. Kalium). Zwei Forscher allerersten Ranges haben uns mit ihnen beschenkt und sich selbst auch in diesem Zweig der praktischen Mikroskopie ein unvergängliches Denkmal gesetzt, wie ja ihre Namen überhaupt tief in die ehernen Geschichtstafeln der Natur- wissenschaft und der Medicin eingegraben sind, so dass auch die läng- sten Zeiträume sie in ihnen nicht verwischen oder verlöschen werden. Max Schultze und Cohnheim, beides Namen, bei deren Nennung Einen der wehmüthige Gedanke beschleicht: „Was hätten diese Männer der Wissenschaft noch leisten können, wenn nicht ein grausames, der For- schung feindliches Schicksal sie in der Blüte ihrer Jahre allzufrüh ab- berufen hätte". Während aber bereits ein Jahrzehnt nach dem Tode I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 513 öes ersteren verflossen, hat sich über die sterblichen Reste des letzteren kaum erst der Grabhügel gewölbt *. Immer wieder aufs Neue ergreift uns die Trauer, wenn wir diesen theuern Namen hören oder schreiben, immer wieder werden wir schmerzlich an den gewaltigen Verlust er- innert, den die Wissenschaft durch sein allzufrühes Hinscheiden erlitten hat. Stand er ja doch in den besten Arbeitsjahren eines Mannes und gehörte noch zu den Jüngeren. Welch ein reiches Dasein hat mit ihm geendet! reich an Schätzen des Gemüthes, des Wissens und des Ver- standes. Was für einen Forscher und Lehrer hat Deutschland und die gesammte Wissenschaft an ihm verloren! Wie war er bis zuletzt mit Leib und Seele der Belehrer und Berather der jungen Forscher, welche sein weithin berühmter Name aus allen Welttheilen herbeigezogen hatte, und welche mit Begeisterung seinen Worten lauschten. Und als sein furchtbar tückisches Leiden, mit dem er lange Jahre hindurch einen tapfern Kampf gekämpft hat, ihn immer wieder auf das Lager warf, das so oft schon sein Sterbebett zu sein schien, raffte er sich doch stets wieder aufs Neue auf und trat wieder und wieder unter seine ihn be- glückt empfangenden Schüler, um ihnen seine mehr und mehr erlöschende Kraft bis zum letzten Athemzuge zu widmen. Die Leistungen dieser beiden Männer, welche wir hier zu ver- zeichnen haben, sind klein im Vergleich mit anderen ihrer ruhmreichen wissenschaftlichen Laufbahn, aber doch auch von ausserordentlichem Werth in ihren Folgen. Jeder Histologe und Zoologe weiss ja, wie unent- behrlich die Osmiumsäure und das Goldchlorid für ihre Forschungen sind. Viele histologische Thatsachen können wir uns nur im Zusammenhang mit diesen Hülfsmitteln der Untersuchung vorstellen, und ist es sehr zweifelhaft, ob sie ohne dieselben schon in der Weise uns bekannt wären, wie sie es jetzt sind. Ich erinnere ganz besonders an die erstaunlichen Resultate, welche die Untersuchung des centralen und peripherischen Nervensystems grade durch Verwendung dieser Stoffe bei der Zuberei- tung der Präparate gewann. Ihr Gebrauch ist daher auch von Jahr zu Jahr allgemeiner geworden, und man kann sich den Arbeitstisch eines Histologen nicht gut mehr ohne Lösungen dieser Substanzen denken. Sie gehören zu seinem allernothweudigsteu Arbeitsmaterial. Die Osmium säure oder, wie auch wohl häufig geschrieben wird, die Ueberosmiumsäure (OSO4) wurde im Jahre 1865 von Max 1) Julius Cohnheim, Professor der pathologisclien Anatomie an der Uni- versität Leipzig starb in der Nacht vom 14. zum 15. August dieses Jahres, in einem Alter von nur 45 Jahren. 34* 514 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. ScHüLTZE in die mikroskopische Technik eingeführt (194) *. So recht eigentlich den Entdecker dieser Substanz als mikroskopisches Reagenz kann man aber unseren berühmten Histologen nicht nennen ; als solcher muss sein noch lebender Namensvetter, der Zoologe Franz Eilhaedt ScHULTZB augeführt werden. Denn dieser war zuerst dahinter ge- kommen, dass die Osmiumsäure in verschieden starker Weise von den Geweben reducirt wird. Da er aber selbst aus irgend einem Grunde mit ihr keine umfangreichen Experimente anstellen wollte, schickte er eine Flasche mit sehr verdünnter Lösung an seinen Namensvetter, ihn bittend, mit ihr die nöthigen Versuche zu machen und sie weiter auf ihren Werth für die histologische Technik zu prüfen. Der berühmte Histologe und erftihreue Techniker erkannte bald die ausserordentliche Bedeutung des neuen Mittels als Reagenz auf gewisse Gewebselemente. Zunächst wandte er, da er sich beim Empfang der interessanten Flasche grade mit der Untersuchung der Leuchtorgane von Lampyris beschäftigte, ihren Inhalt bei dieser an und fand, dass die Gewebe je nach ihrem Functionszustande verschieden reducirend auf die Osmiumsäure wirken. Im Besondern zeigte sich, dass diejenigen Zellen, welche einen leb- hafteren Sauerstoffverbrauch haben als andere, oder denen dieser mög- lichst unmittelbar mit der durch die Tracheen eingeathmeten atmosphä- rischen Luft zugeführt wird, auch jene Säure stärker und schneller reduciren und sich mit und durch diese intensiver schwarz färben als die anderen in dieser Hinsicht weniger bevorzugten Gewebselemente. Angeregt durch diese interessante Beobachtung unterwarf dann M. ScHULTZB zusammen mit seinem Schüler Rudxeff alle Gewebe des Menschen und der höheren Thiere einer Behandlung mit sehr ver- dünnten Lösungen von Osmiumsäure, die er sich mittlerweile zu ver- schaffen gewusst hatte. Er stellte bei diesen sehr umfangreichen imd exacten Untersuchungen die wesentlichsten Eigenschaften und charakte- ristischen Verwandtschaften der Säure zu den verschiedenen Geweben, welche dieselbe für die histologische Technik so ungemein werthvoll machen, fest. Auch erkannte er schon ihre zweite höchst wichtige Eigenschaft, die Gewebe zu erhärten und zu couserviren, wenn sie auch freilich in dieser Hinsicht später, namentlich in der Embryologie und Zoologie noch viel mehr gewürdigt werden sollte. 1) Der Literaturangabe in der Tabelle unter 194 hätte ich noch hinzu- fügen können, dass von M. Schultze auch der ziemlich ausführliche, die Osmium- säure behandelnde Abschnitt in Frey 's „Das Mikroskop und die mikroskopische Technik" 7. Aufl. p. 107 herstammt, wie der Verf. in einer Anmerkung mittheilt. I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 515 Man wird nach dem Vorhergehenden der Geschichte Recht geben, wenn sie dem verstorbenen Max Schultze das Verdienst zuschreibt, die histologische Technik nm die nns jetzt unentbehrlich gewordene Osmiumsäure bereichert zu haben, obgleich die erste Anregung dazu von einem Anderen ausging. Die Gerechtigkeit der historischen Dar- stellung aber, welche stets das Wort „Suum cuique" zum Motto wählen sollte, erfordert es auch, das Verdienst des berühmten Zoologen Feanz EiLHAEDT Schultze hinsichtlich der Entdeckung der Osmiumsäure als mikroskopisches Reagenz hier hervorzuheben. Uebrigens blieb zunächst in den sechziger Jahren die Verwendung derselben trotz der warmen Empfehlung von Max Schultze eine beschränkte. Grund hierfür war einmal, dass sie nicht leicht und nur für einen ungemein hohen Preis zu haben war \ während die sonst gebrauchten mikroskopischen Tinc- tions- und Impräguations-Mittel wie z. B. Carmin und Höllenstein über- all und für wenig Geld käuflich waren. Dann schreckten auch wohl Viele — und zwar nicht ganz ohne Grund — vor dem sehr unange- nehmen und schädlichen Einfluss des sich leicht verflüchtigenden Stoffes auf die Schleimhäute zurück. Denn zuerst, als man mit dieser Unart desselben noch nicht recht vertraut war, und daher sich nicht besonders gegen sie zu schützen suchte, trugen die eifrigen, gar nichts Böses ahnenden Forscher vielfach recht unerfreuliche Katarrhe der Conjuuctiva, der Nasen- und Rachen-Schleimhaut davon. Erst im nächsten Decennium wurde ihre Verbreitung eine allgemeine und lernte ein jeder Zoologe und Histologe sie als jenes schätzbare Hülfsmittel mikroskopischer For- schung kennen, das ich soeben mit warmem Lobe gepriesen habe. So wurden auch die von Max Schultze gemachten technischen Angaben in den sechziger Jahren nicht erweitert, die Methode machte bis 1870 keine Fortschritte. 1) So viel icli weiss, wurde damals und bis in die siebziger Jahre hinein die Osmiumsäure nur von Merk in Darmstadt hergestellt. In der ersten Hälfte der siebziger Jahre kostete sie noch immer 7 — 8 Mark das Gramm, während jetzt der Preis fast auf 5 Mark gesunken ist, und der Stoff in verschiedenen chemischen Fabriken gefertigt wii-d. Nur einen kleinen Beweis, wie wenig be- kannt die Osmiumsäi;re noch vor 12 Jahren war, will ich hier anführen: Ein bekannter Zoologe und Mikroskopiker, bei dem ich 1872 arbeitete, bat mich bei einer beabsichtigten Bestellung für ihn ein Pfund Osmiumsäure mitkommen zu lassen. Eine solche Quantität gab es natitrlich überhaupt nicht und würde, wenn vorhanden, weit über 1000 Thaler gekostet haben. Jener Forscher aber hätte von dieser Masse selbst nach dem stärksten Verbrauch für sich und seine Schüler noch immer schöne Mengen an seine Kinder und Kindeskinder ver- erben können. 516 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. Auf die Idee, mikroskopische Präparate mit Goldchlorid in ähnlicher Weise zu behandeln, wie mit salpetersaurem Silberoxyd, kam CoHNHEiM im Jahre 1866 bei seinen Untersuchungen über die sensiblen Nerven der Hornhaut. Er hatte beobachtet, dass jener Stoff ebenso wie der Höllenstein durch die thierischen Gewebe unter Einwirkung des Lichtes reducirt wird und dadurch eine graublaue, rothe oder violette und zuletzt nach intensiver Behandlung schwarze Farbe annimmt. Auch bemerkte er bald, dass das Verhalten der verschiedenen Gewebe gegen dasselbe ein sehr mannigfaches aber regelmässiges ist, und die erzielte Färbung der Präparate so eine schöne Differenzirung der Elemente be- wirkt. Er stellte eine grosse Reihe von Experimenten an und unterzog alle Gewebe der Behandlung mit dem Gold. Er stellte in dem Aufsatz, welcher die Resultate dieser Untersuchungen veröffentlichte (174) schon fest, dass ganz besonders das Nervengewebe, und zwar ebensosehr die Zellen wie die faserigen Elemente, eine besondere Verwandtschaft zu demselben haben und sich mit ihm sehr intensiv färben. So empfiehlt er es eben ganz besonders für alle Untersuchungen im Gebiete des centralen und peripherischen Nervensystems. Und in der That hat auch grade in dieser Hinsicht seine Goldmethode die allergrössten Triumphe gefeiert. Welche schönen Entdeckungen hat man ihr in diesem Gebiet zu danken. Ich erinnere nur an die Eudigungen der sensiblen und motorischen Nerven, welche zum grössten Theil allein mittels ihrer darzustellen sind, und an die ausgezeichneten Dienste, welche sie bei den Untersuchungen des Gehirns und besonders des Rückenmarks ge- leistet hat. Bei vielen Untersuchungen nimmt das Goldchlorid durch- aus die erste Stelle als mikroskopisches Reagenz ein und kann durch keine andere Substanz ersetzt werden. Es gehört daher ohne jede Frage zu den allernothwendigsten und vornehmsten Forschungsmitteln des Histologen. Wenn nun aber die neue CoHNHEiM'sche Methode auch so- gleich mit grosser Freude aufgenommen wurde und allgemeine Aner- kennung fand, so erreichte doch auch sie wie die soeben besprochene Osmiumsäure-Behandlung ihre eigentliche Blüte erst im nächsten De- ceunium. In den sechziger Jahren blieb ihre Anwendung doch immer noch auf begrenzte Kreise beschränkt, während sie später Allgemeingut der Histologen aller Länder und Nationen wurde. So wurden ihr auch in den nächsten Jahren nicht allzu wesentliche Verbesserungen zu Theil. Doch haben einige technische Angaben der folgenden Zeit einigen Werth. So z. B. wählt Arnold (175) anstatt des Goldchlörids Goldchlorid- kalium, das auch nach meiner Erfahrung ebenso wie das Gold- chloridnatrium dem ersteren vorzuziehen ist, weil es eine etwas I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskoi)isclien Zwecken. 517 grössere Sicherheit gewährt. Ferner muss als eine nicht geringe Ver- besserung die Anwendung stark verdünnter Lösungen des Salzes ange- sehen werden. Cohnheim hatte in Nachahmung der Silbermethode eine Goldlösung von y, Procent benutzt, Aenold aber empfahl eine solche von 0'02 — 0"05 Procent. Noch stärkere Verdünnungen verwendeten Nathusius (178) und Geelach (179), indem sie sich einer Lösung von 0*01 und 0"005 Procent bedienten. In solchen stark verdünnten Lösungen pflegen die DifFerenzirungen besser zu gerathen. Natürlich müssen die Präparate um so länger in ihnen bleiben, je schwächer sie sind. Eine dritte Veränderung und Verbesserung der CoHNHEiM'scheu Methode wurde durch die Ersetzung der zur Herbeiführung der Reduc- tion ursprünglich empfohlenen Essigsäure durch Salzsäure und Ameisensäure (Bastian 177) erzielt. Besonders die letztere und ebenso die von Klein und anderen Forschern (180 — 182) später empfohlene Weinsäure leistet bei der Reductiou des in die Gewebs- elemente eingedrungenen Goldes jedenfalls bessere Dienste als die Essig- säure. Es ist begreiflich, dass die mikroskopischen Forscher für die Tech- nik nicht allein von den Edelmetallen, von Gold und Silber, Heil er- warteten, sondern dass sie, nachdem die Silbermethode einigermassen Anerkennung gefunden hatte, auch mit anderen weniger kostbaren Me- tallen Versuche machten. Doch aber zeigte sich bald, dass auch in der histologischen Technik ausserordentlich viel mehr mit Silber und be- sonders mit Gold auszurichten ist als mit Kupfer, Zinn, Eisen und anderen solchen billigen Metallen, gradeso wie im gewöhnlichen Leben. Aus all den Experimenten mit den letzteren hat sich keine irgendwelche besondere Vortheile gewährende Methode ergeben. Zwar sind noch einige solcher Metallsalze als werthvolle mikroskopische Reagentien empfohlen worden, aber wie das in so vielen Fällen zu beobachten ist, ausser den Empfehlenden selbst hat sich Niemand weiter für sie er- wärmen können. Der Enthusiasmus für dieselben blieb ein gar zu ein- seitiger. Eine Ausnahme hiervon bildet nur das Palladiumchlorid (oder auch das Chlorür), das nun freilich auch durchaus nicht zu den billigen Stoffen gehört. Dies ist von verschiedenen Forschern als ein recht gutes Hülfsmittel bei manchen Untersuchungen empfohlen worden und hat eine allgemeinere Anerkennung gefunden, wenn auch freiUch seine Verwendung nur eine beschränkte und nicht allzu bekannte ist. Bei Untersuchungen der Centralorgane des Nervensystems leistet es in der That recht gute Dienste, wenn man seine Anwendung mit anderen Tinctionsmethoden , besonders mit der Carminfärbung verbindet. Ich 518 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. selber habe es in dieser combinirten Verwendung ziemlich oft und mit nicht geringem Erfolg benutzt. Feanz Eilhaedt ScHuiiTZE, dem ja, wie oben berichtet wurde, auch ein so wesentlicher Antheil an der Ent- deckung der Osmiumsäure als mikroskopisches Hülfsmittel zugeschrieben werden muss, hat das Verdienst, das Palladiumchlorid in die histolo- gische Technik eingeführt zu haben. Er empfahl es im Jahre 1867 in einer kurzen Mittheilung im Centralblatt für die medicinischen Wissen- schaften (203) als ein vortreffliches Mittel, um kleinere (etwa bohnen- grosse) Stücke von Organen zu erhärten und zu gleicher Zeit zu färben. Und zwar räth auch er schon, diese Färbung nur als eine Grundirung anzusehen und in ihr durch Carmin weitere Differenzirung hervorzu- rufen. Doch ergaben seine Versuche, dass sich die Gewebe bei der Be- handlung mit Chlorpalladium durchaus nicht gleichartig färben, sondern dass z. B. Fett und alle Bindegewebsarten ganz ungefärbt bleiben, während das Muskelgewebe, die Epithelien und die Drüsenzellen eine intensiv gelbe Farbe annehmen. Nach Fe. Eilh. Schultze hat der Engländer Bastian (204) das Palladiumchlorid sehr gerühmt und da- durch ist es, wie ich aus verschiedenen mündlichen Mittheilungen eng- lischer Forscher annehmen muss, in England viel beliebter geworden als bei uns, wo es, wie schon erwähnt wurde, eigentlich nur für die Untersuchung des Centralnervensystems allgemeinere Anerkennung ge- funden hat. Diese Verwendung verdanken wir Hexle und Meekel (206), welche bei der Anfertigung von Schnitten durch Gehirn und Rückenmark für die Untersuchungen zu Henle's Handbuch der Anatomie sich jenes Stoffes bedienten, um eine gelbe Grundfarbe der Präparate zu erhalten, in der sie durch Carmin weitere Differenzirungen bewirkten. Viel später hat dann von Thanhoffee (207) das P alladi um chlor ür zum Färben der Nerven der Cornea empfohlen; doch hat es durchaus keine Aussichten, das in dieser Beziehung so sehr viel wirksamere und allgemein beliebte Goldchlorid zu verdrängen. Mit verschiedenen anderen Metallsalzen operirte Landois 1865 (201) ohne sonderlichen Erfolg; wenigstens vermochte sich die von ihm empfohlene Methode keine Anerkennung zu verschaffen und fand keine Nachahmung. Von den vielen von ihm in Anwendung gezogenen Metallsalzen rühmt er verschiedene Salze von Blei, Eisen, Kupfer, Platin und Quecksilber am meisten. Er folgte aber bei dem Ge- brauch derselben nicht dem bei den Gold- und Silbersalzen zur Ver- wendung gekommenen Princip der Reduction derselben durch die Ge- webe unter Einwirkung des Lichtes, sondern bewirkte Niederschläge der von den Geweben aufgenommenen Salze durch Schwefelwasser- I, 4. Gierke: Färberei zu miki-oskopisclien Zwecken. 519 Stoff oder Schwefelammonium. Eine Differenzirung tritt dann auch hier wie bei den meisten Methoden mikroskopischer Färbung da- durch ein, dass die Gewebselemente von den in Lösung befindlichen Metallsalzen sehr verschiedene Quantitäten aufzunehmen und festzuhalten im Stande sind. Einige Jahre später (1868) hat unabhängig von Lan- Dois der Ophthalmologe Leber (205) die Versilberung der Hornhaut durch Imprägnationen derselben mit anderen Metallsalzen, die dann in dem Gewebe selbst gefällt wurden, zu ersetzen gesucht. Aber so sehr er auch die Resultate seiner Experimente rühmt, so ist es seinen warmen Lobpreisungen der neuen Methode doch nicht gelungen, ihr einen grösseren Kreis von Verehrern zu verschaffen oder sie gar an Stelle der Versilberung oder Vergoldung der Cornea zu setzen. Und in der That kommt sie nach meinen eigenen Erfahrungen diesen Methoden weder in der Bequemlichkeit der Präparation noch in der Deutlichkeit und Schön- heit der entstehenden Bilder gleich. Zwar scheint sie hinsichtlich der Sicherheit des Gelingens etwas grössere Garantien zu gewähren als die leider zuweilen verunglückende Goldmethode, aber dieser Vorzug ge- nügt nicht, um diese, die im übrigen so viel vortheilhafter ist, zu ver- drängen. Von allen Metallsalzen, mit denen Leber Versuche angestellt hat, rühmt er als ganz besonders vorzüglich für die Darstellung der Corneakörperchen die Eisenoxyd ulsalze^ in Verbindung mit Ferridcyankalium (rothes Blutlaugensalz). Das Gewebe wird nach- einander mit den Lösungen dieser Salze behandelt, so dass sie dasselbe vollkommen durchtränkend sich in ihm mit einander zu einer blauen Verbindung vereinigen. Ferner empfiehlt er zu gleichem Zweck s c h we - fels au res Kupferoxydammoniak und Kaliumeis encyanür^. Oder sollte man zur farbigen Abwechslung seiner Sammlung gelbe Prä- parate wünschen, so kann man nach demselben Autor Lösungen von Bleizucker ^ und chromsaurem Kali verwenden. Auch ein Franzose Polaillon (202) hatte im Jahre 1866 das Eisenchlorid für die Zwecke der histologischen Differenzirung her- angezogen, indem er die bekannte Eigenschaft der Eisensalze, durch Gerbsäure geschwärzt zu werden, benutzte. Er hatte diese Methode zwar experimentell auf alle Gewebe des Körpers — wie er berichtet — mit Erfolg angewandt, von ihr aber doch ganz besonders bei einer 1) Schwefelsaures Eisenoxydul oder Eisenvitriol und kohlensaures Eisen- oxydvd. 2) Fei-ridcyaneisen oder Turnbüll's Blau. 3) Essigsaures Bleioxyd. 520 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. Untersuchung der periplierischeu Ganglienknoten Gebraucli gemacht. Hier — und dies kann ich nach den von mir mehrere Male angestellten Controlversuchen durchaus bestätigen — ist sie dadurch von bedeuten- dem Nutzen, dass sie nur die nervösen Elemente, gar nicht die binde- gewebigen färbt. Auch diese Methode hat sich trotz der grossen Be- quemlichkeit ihrer Anwendung und trotzdem, dass sie mindestens in einigen Organen hübsche Differenzirungen der Gewebselemente bewirkt, keinen grösseren Freundeskreis erwerben können ; weder in des Autors Vaterlande noch bei uns in Deutschland. Ich will gleich hier den letzten Versuch, Metallsalze für unseren Zweck zu verwenden, anfügen, obgleich er sehr viel später, d. h. im Jahr 1879 angestellt oder wenigstens publicirt wurde. Es handelt sich diesmal um das bisher in unserem Gebiet nicht zu Ehren gekommene Quecksilber und zwar das Sublimat (Quecksilberchlorid), um ein Salz also, das schon in weit zurückgelegenen Zeiten ganz besonders aber wieder in den allerletzten Jahren eine ausserordentliche Rolle bei der Vorbereitung und Conservirung des mikroskopischen Materials ge- spielt hat. Der Italiener Golgi, als Histologe ja hinlänglich bekannt, hat diesem Quecksilbersalz eine Stelle unter den Imprägnationsmitteln verschafft, die man bisher eine sehr bescheidene nennen muss und die nach meiner Ansicht auch in Zukunft keine hervorragendere sein wird, weil sie äusserst umständlich und sehr unsicher ist und wenn auch ge- lungen nicht die geringsten Vortheile anderen Methoden gegenüber dar- bietet. Bei uns in Deutschland ist sie wohl ganz unbekannt geblieben, bei einigen gelehrten Landsleuten ihres Entdeckers sah ich einige mittels ihrer hergestellte Präparate, die aber keineswegs als Empfeh- lungen für sie dienen konnten und mit den von mir probeweise ge- fertigten ungefähr auf der gleichen Stufe von Mittelmässigkeit standen. Die von Golgi selbst hergestellten Präparate habe ich leider nicht zu Gesicht bekommen. Er wendet übrigens diese Methode nur für die Untersuchung des centralen Nervensystems au und gesteht sogar zu, dass nur die von der Grosshirnrinde gefertigten Präparate gut seien *. Das folgende Decennium, der Zeitraum der siebziger Jahre, wird in Hinsicht auf die mikroskopische Technik ganz besonders durch das ausserordentlich starke Heranziehen der Anilinfarben und durch die combinirte Anwendung mehrerer Farbstoffe, besonders dm-ch das Doppel färben charakterisirt. Kein anderer Stoff von ii'gend welcher grösseren Bedeutung wird der histologischen Färberei in diesem Zeit- *) Die Methode ist unter No. 208 der Tabelle näher angegeben. I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 521 räum gewonnen. Die bereits bekannten Methoden werden zwar noch etwas weiter ausgebildet, und manche recht werthvolle Verbesserung derselben wird gefunden und publicirt, aber es bleibt doch nur bei einer Weiterentwicklung des bereits Gesicherten, von irgend einer eingreifen- den Neuerung ist nicht die Rede. Mit keiner einzigen neuen wirklich originellen und in irgend einer Beziehung epochemachenden Tinctions- Methode, welche werthvolle histologische Entdeckungen zur Folge ge- habt hätte, hat uns dies Decennium beschenkt, wenn wir eben von den Anilinfarben absehen. Und es ist nicht möglich, sich über diese That- sache zu wundern, sie ist gar zu sehr in der Natur der Verhältnisse begründet. Die Erfolge der Carminfärbung und später der Silberbe- handlung hatte die Forscher derartig angeregt, dass sie in den sechziger Jahren alle Farbstoffe, die sie kannten und alle Metallsalze in Hinsicht ihrer Wirkung auf die Gewebe durchprobirten. Es entstand, wie ein Blick auf die dieser Abhandlung augefügten Tabellen zeigt, ein förm- licher Wettkampf unter den Histologen und Zoologen. Ein Jeder hatte den dringenden Wunsch, auch seinerseits die Reihe der Tinctions- und Imprägnationsstoffe um einen neuen zu vermehren oder wenigstens neue Methoden zu entdecken, welche die Verwendung der bereits bekannten mikroskopischen Reagentien erweiterten oder nutzbringender machten. So wurde so viel tiugirt, impräguirt und experimentirt, dass beinahe Alles, was überhaupt gefunden werden konnte, gefunden wurde und so der späteren Zeit fast die Möglichkeit geraubt wäre, auf diesem Gebiet noch Grosses zu leisten, wenn sich nicht zum Glück die Basis dieser Versuche in ganz ausserordentlicher Weise erweitert hätte, mit anderen Worten, wenn nicht eine grosse Zahl von Farbstoffen neu entdeckt und fabricirt worden wären, die sich für die mikroskopischen Zwecke ebenso bequem verwendbar und grösste Erfolge versprechend erwiesen, wie sie sich für andere technische Zwecke von äusserstem Nutzen bewährten. Kein Wunder, dass sich jetzt alle Forscher, die überhaupt Sinn für die mikroskopische Technik und zumal für die Färberei haben, diesen neuen Farbstoffen, den sogenannten Anilin- oder Azofarben ' zuwandten und ihre Verwendbarkeit als histologische Differenzirungsmittel zu erproben suchten. Ja es konnte, so wie wir Menschen einmal sind, nicht aus- bleiben, dass auch auf diesem Gebiet bald recht grosse Uebertreibuugen zu Tage traten. Ich will hiermit nicht sagen, dass zu viel experimentirt wurde. Durchaus nicht. In dieser Beziehung konnte gar nicht genug und noch weniger zu viel geschehen. Es war sehr richtig, dass, nach- *) Auf die Benemiung dieser Farbstoffe komme ich später zurück. 522 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. dem einmal die grosse Verwendbarkeit einiger Anilinfarben für histolo- gische Zwecke sich ergeben hatte, alle neuen Fabricate durchprobirt wurden, und dass diejenigen Forscher, welche irgend eine Verbindung mit einer der grossen Anilin- oder Farbstoff-Fabriken hatten, mit Pein- lichkeit alle in diesen erzeugten Producte, wenn sie auch nicht weiter in den Handel kamen, auf ihre Brauchbarkeit für die mikroskopische Technik prüften. Aber meiner Meinung nach ist in dieser Hinsicht viel zu viel gedruckt worden und leider ist die Epidemie, neue Anilinfarb- stoffe mit grösster Wärme als alle bisher in Gebrauch gezogenen bei weitem an Güte und Brauchbarkeit übertreffend anzupreisen noch nicht erloschen. Studirt man die einschlägige Literatur mit einiger Aufmerk- samkeit durch, so fühlt man gewiss einige Heiterkeit, die sich aber bald mit Aerger mischt. Es fühlt sich eben offenbar ein Jeder, der mit diesen Stoffen experimentirt hat, verpflichtet, die Resultate seiner Ver- suche, auch wenn sie ganz und gar nichts Neues enthalten, seinen durch- aus nicht so ungemein neugierigen Mitforschern kund zu thun. Und ebenso scheint es eine gewisse Naturnothwendigkeit zu sein, dass ein solcher Experimentator sich für einen Anilinfarbstoff auf das Höchste begeistert und in seinem Enthusiasmus ihn weit höher stellt als alle übrigen, die sich in Bezug auf die Fähigkeit zu differenziren und ver- schiedene andere Eigenschaften ganz und gar nicht mit ihm messen können. Leider kommt es bei der grossen Zahl dieser begeisterten Publicationen und den so mannigfachen Namen ein imd desselben Pro- ductes vor, dass ein Farbstoff in dieser Weise auf das Wärmste ge- priesen und als neu für die mikroskopische Technik gewonnen hinge- stellt wird, während ihm schon einmal oder gar mehrere Male dasselbe Loblied gesungen wurde. Ein anderes unangenehmes Vorkommniss ist, dass Niemand weiter die ausgezeichneten Eigenschaften der empfohlenen Farbe erkennen kann als der, welcher sie zuerst entdeckte. Schuld dieser merkwürdigen Differenz kann einmal die glühende Vorliebe mancher Forscher für die eigenen Versuche sein, die häufig zu beob- achtende Thatsache, dass man die Resultate derselben mit ganz anderen, d. h. viel wohlwollenderen Augen betrachtet als jene fremden Experi- mente. Dann aber ist es auch mehrfach vorgekommen, dass eine von dieser oder jener Fabrik gelieferte Farbstoffprobe zu den Versuchen diente, welche in gleich guter Qualität später weder von derselben noch von einer anderen Fabrik hergestellt wurde. Ueberhaupt hat sich bei der mikroskopischen Verwerthung der Anilinfarben als ein grosser Uebelstand herausgestellt, dass die gleich bezeichneten und scheinbar auch durch nichts unterschiedenen Fabricate verschiedener Fabriken I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 523 hiusichtlicli ihrer Lösliclikeit, Tiuctiousfähigkeit, Haltbarkeit und anderer wichtiger Eigenschaften ausserordentlich ungleich sind, so dass mau allerdings die Angaben eines Forschers über die Resultate einer be- stimmten Anilinfärbung nur dann mit Recht kritisiren kann, wenn man sich desselben aus gleicher Fabrik stammenden Productes zu Controll- versucheu bedient hat. Etwas Aehnliches kommt sonst in der mikro- skopischen Färbetechnik nur noch hinsichtlich des Carmius vor, welches auch in der Qualität ausserordentlich wechselt. Doch sind bei ihm die Verschiedenheiten leichter zu erkennen und schon durch die Marke an- gedeutet, so dass, wenn man sich die Mühe geben würde, nur mit der besten Sorte zu arbeiten — was allerdings meistens nicht geschieht — die Resultate gleichmässig sein würden. Anders aber ist es bei den AnilinfarbstofFen. Vielfach gelingt es nicht, den empfohlenen Stoff oder einen gleich guten zu erlangen, oft auch versäumt der Empfehlende den Ursprung derselben anzugeben, oder kennt ihn gar nicht einmal. Bedenken wir das, was in dem Vorhergehenden angedeutet wurde, so werden wir weniger über die ausserordentlich grosse, die Anilin- farben betreffende Literatur und besonders nicht über die zahlreichen in ihr enthaltenen Widersprüche erstaunt sein. Einige Farbstoffe, wie z. B. das Eosin, sind immer wieder aufs Neue mit grösstem Enthusias- mus empfohlen worden, obgleich ihr grosser Werth bereits allgemein anerkannt war, so dass eine umfangreiche den einzigen Stoff betreffende Literatur existirt, welche fast immer wieder dieselben Angaben enthält. So z. B. sind in einem Zeitraum von weniger als drei Jahren acht Auf- sätze erschienen, welche nur über das Eosin als mikroskopisches Tinc- tionsmittel handeln. Dasselbe hat keinen Gegner. Jeder erkennt seine Vortheile an. Auch sind in jenen Abhandlungen nicht besonders wichtige neue Methoden beschrieben. So ist es auch mit anderen ähn- lichen Farbstoffen, und man kann wirklich sagen, dass ein grosser Theil der zahlreichen diese in ihrer Beziehung zur histologischen Technik behandelnden Schriften vollkommen überflüssig ist. Doch lässt sich diese geistige Ueberproduction nur zu gut durch die ausserordentliche Theilnahme erklären, welche die mikroskopischen Forscher naturgemäss der neuen glänzenden Erscheinung in dem Reich der Farben-Producte zuwandten. Man setzte die lebhaftesten Hoffnungen auf den von Jahr zu Jahr sich mehrenden Schatz glänzender Farben und erwartete von ihnen die allerwichtigsten Resultate, Aufschlüsse über histologische Ver- hältnisse, die noch in tiefstes Dunkel gehüllt waren. Und in That — wenn auch wohl hier und da die Erwartungen zu hoch gespannt waren, hat uns die Technik der Anilinfärbungen Grosses geleistet. Welch eine 524 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. Reihe von Entdeckungen allerersten Ranges haben wir ihr zu verdanken. Ich brauche ja nur an die Darstellung der Kernfiguren und an die Bacterien-Studien zu erinnern, um mir weitere Beweise für diese Be- hauptung ersparen zu können. Und mit grosser Sicherheit dürfen wir uns doch der Hofiiiung hingeben, dass die ausserordentlich grossen Dienste, welche die Anilinfarben uns schon geleistet haben, in Zukunft noch von anderen mindestens gleich wichtigen gefolgt sein werden. Grade in Hinsicht auf die nachher noch zu besprechende Entwicklung der Tinctionstechnik mit Anilinfarben können wir mit grösstem Recht an- nehmen, dass die Epoche bedeutender Erfolge durch dieselbe nicht zum Abschluss gekommen ist, sondern recht im Gegentheil ihrer grössten Blüte noch entgegengeht, unter diesen so glücklichen Umständen können wir nun auch wohl mit etlichen überflüssigen Publicationeu Vorlieb nehmen. lu diesem Fall ist etwas zu viel jedenfalls besser als zu wenig. Uebrigens ist die Begeisterung für die Anilinfarben als histologische Reagentien in anderen Ländern lauge nicht so gross gewesen, wie grade bei uns in Deutschland. Ebenso wie die Fabrication dieser Farbstoffe im Deutschen Reich einen grösseren Umfang angenommen hat als im Auslande und selbst in England, ist auch ihre Verwendung bei den deutschen mikroskopischen Forschern eine viel mehr beliebte und ver- breitete als bei jenen anderer Nationen. Vor wenigen Jahren noch (etwa 1880) fand ich in dem Schatz von Tinctionsmitteln einer Reihe von englischen, französischen und americanischen Zoologen und Histo- logen, mit denen ich auf meinen Reisen zu verkehren oder gar zusammen zu arbeiten Gelegenheit hatte, höchstens ein Anilin-Roth und -Blau. Und — vorausgesetzt, dass meine mehrfach bei ausländischen Gelehrten eingezogenen Erkundigungen richtig sind — auch heute ist die Ver- wendung der in unseren mikroskopischen Laboratorien so ungemein be- liebten zahlreichen Anilinfarbstoffe eine äusserst beschränkte. Ja selbst so grosse Meister histologischer Technik wie Ranviee haben sich für dieselben nicht sonderlich begeistern können. Dennoch muss gleich hier hinzugefügt werden, dass er sowohl wie andere französische und englische Mikroskopiker manche werthvolle Beiträge zur Ausbildung der Methode der Anilinfärbungen geliefert haben. Etwas näher auf die Entwicklung dieses Zweiges histologischer Tinctionsmethode eingehend, muss ich zunächst darauf aufmerksam machen, wie wenig von dieser im Beginne der siebziger Jahre bekannt war und geübt wurde, obgleich doch in dem vorhergehenden Decennium die Fabrication der Anilinfarbstoffe schon eine ausserordentliche Blüte erreicht hatte, und grade die meisten derjenigen, welche später in der I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 525 Mikroskopie so sehr beliebt wurden, sclion entdeckt waren und in vielen Fabriken hergestellt wurden. Ich erinnere mich, dass fast nirgends in den mikroskopischen Laboratorien Anilinfarben zu finden waren. Ganz schüchtern und ohne besonderes Vertrauen auf grosse Erfolge wandte man Fuchsin und Anilin -Blau an. Das erstere war damals für die Tinction structurloser Häute und elastischer Fasern empfohlen (75, 76). Die blaue Farbe (Pariser Blau und Parme soluble) war von Waldeyee (72) und Frey (74) empfohlen worden, vermochte sich aber auch nicht rechten Eingang zu verschaffen. Von Schweigger- Seidel war ich schon früh auf die Verwendbar- keit des in Wasser löslichen Anilinbl aus für Präparate des centralen Nervensystems aufmerksam gemacht und gebrauchte es gern und nicht ohne Erfolg für diesen Zweck. Später, im Jahre 1873, empfahl es dann auch ZuppEixGER für Rückenmarks-Querschnitte (77). Derartige dürftige Versuche und einzelne sehr wenige zerstreute Publicationen über die- selben zeigen uns zur Genüge, dass die Zeit für die Verwendung der Anilinfarben zur mikroskopischen Tinction noch nicht gekommen war. Es ist mir nicht möglich gewesen, den Grund hierfür festzustellen und die auffallende Thatsache zu erklären, dass die histologischen Forscher, welche doch alle übrigen Farbstoffe wieder und wieder durchprobirt hatten, so lange zögerten, sich dieser neuesten Producte der praktischen Chemie, welche doch so allgemeines Aufsehen erregten und von denen so viel gesprochen wurde, zu bemächtigen. Zum Beweis, dass die meisten der später so vielfach zu mikroskopischen Zwecken gebrauchten Farben schon ziemlich lauge vor der Blütezeit der histologischen Anilin- farbe-Methode d. h. vor 1875 und 1876 entdeckt waren, lasse ich hier eine Tabelle der wichtigsten hierher gehörigen Daten folgen und bitte dieselben mit der am Schluss folgenden Tabelle der Empfehlungen der aufgeführten Farben für mikroskopische Zwecke zu vergleichen. Doch bemerke ich noch, dass diese nicht etwa allein im wissenschaftlichen Laboratorium probeweise hergestellt waren, sondern dass sie, wie die Preiscourante einiger damals schon bestehenden grossen Fabriken er- geben, bereits in grossen Mengen fabrikmässig producirt wurden und im Handel überall leicht zu erhalten waren. Des grossen Interesses wegen, das diese Farbstoffe für uns haben, stelle ich, soweit es mir mög- lich ist, den Namen des chemischen Entdeckers in Klammern neben die Bezeichnung jener *. Die durch den Druck hervorgehobenen Stoffe wurden für die histologische Tinction empfohlen. ») Ich habe diese Daten mit emiger Kürzung und Fortlassung des weniger 526 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 1. 4. 1856. Mauvein (Peekin), Fuchsin (Nataxsox). 1858. Fuchsin (Hofmann). 1859. Technische Darstellimg des Fuchsins (Veegdik); Corallin (Kolbe und Schmitt). 1860. Technische Darstellung des Fuchsins mit Arsensäure (Medlock, Nicholson) oder QuecksUbersalzen (Durand); Anilinblau (Gieaed und de Laiee). 1861. Methylviolett (Lautii). Einführung des Corallins. Cyanin. 1862. Aldehydgrün (Cheepin). Nicholson's Blau. 1863. Anilingelb (Simpson, Maule und Nicholson). Anilin schwarz (Ligthfoot). Chrysalin. Hofmann's Violett. 1864. Indulin. 1866. Vesuvin. Jodgrün. Fuchsin mit Nitrobenzol (Coupier). Diphenylaminblau (Giraed und de Laiee). 1867. Einführmig des Methylvioletts. 1868. Safranin. Benzylviolett. 1869. Magdalaroth. Palatinorange. Künstliches Ali zarin (Geäbe und Liebermann). 1870. Indigo aus Isatin (Baeyer). 1871. F luorescein (Baeter). 1873. Methylgrün (Lauth und Baubignt). 1874. Aurantia (Gnehm). 1875. Eos in (Card). 1876. Alizarinorange. Gallein und Coerulem. 1877. Methylenblau (Caeo). Fuchsin S. (Säurefuchsin). Echtgelb. 1878. Orange IH. Tropaeolin 00. Tropeolin R. Malachitgrün. Mizavinblau S. Echtroth. Wichtigen dem ausgezeichneten Werk von Dr. Gustav Schultz: „Die Chemie des Steinkohlentheers mit besonderer Berücksichtigung der künstlichen organi- schen Farbstoffe" (Braunschweig 1882) entnommen. Die sonst noch von mir für die chemischen und technologischen Verhältnisse der Anilinfarben benutzte Literatur führe ich später an. I, 4. Gierke: Färberei zu miki'oskopischeu Zwecken. 527 PoAceau G. Coccinin. 1879. Naphthagelb S. Biebricher Scharlach. Helvetiagrün. 1880. ludigblau aus Nitrophenylpropriolsäure. Li cht grün S. 1881. Indophenole. Croce'inscharlacL So also blieb die Entwicklung dieser Tinctiousmethode im Yerliält- niss zu der grossen Anzahl sieb vortrefflich für dieselbe eignenden neu- entdeckten Farbstoffe bis zur Mitte der siebziger Jahre eine auffallend dürftige. Nur hier und da wurden die allergewöhnlichsten und ältesten einem sehr beschränkten Gebrauch unterzogen; im allgemeinen wusste man von ihnen als histologischen Reagentien so gut wie nichts, und sehr selten waren sie in der Rüstkammer der Forscher neben Carmin, Hämatoxylin und anderen Tinctionsmitteln zu finden. Da aber mit einem Mal — auch für diese merkwürdige Erscheinung ist durchaus kein Grund zu ermitteln, sie hat den Charakter eines Naturereignisses — ist die richtige Zeit auch für diese Methode mikroskopischer Färbung gekommen. In einer ausserordentlich kurzen Periode, in wenigen Monaten hat sie sich überall und zwar am meisten in Deutschland An- erkennung erworben. Es ist fast, als wären den Forschern plötzlich die Schuppen von den Augen gefallen, die sie lange Zeit hindurch die Vor- theile der Auilinfärbuug nicht erkennen Hessen. Jetzt will nun aber auch ein Jeder etwas zur Weiterbildung derselben beitragen und der oben geschilderte Wettkampf beginnt. Während von der ersten schüch- ternen Empfehlung einer Anilinfarbe für histologische Tinctionen im Jahre 1862 bis 1874, also in 13 Jahren nur 9 und zwar theilweise recht unbedeutende Arbeiten ähnliche Zwecke verfolgten , wurden in den nächsten drei Jahren, 1875, 1876 und 1877, nicht weniger als 24 längere oder kürzere Abhandlungen veröffentlicht, welche sich nur mit der Empfehlung von Auilinfarbstoffen als für die histologische Tinction ganz besonders gut sich eignend, und mit der Besprechung der ange- wandten Methoden sich beschäftigen. Wahrlich der Frühling dieser jüngsten Art mikroskopischer Färberei ist mit einer ganz ausserordent- lichen Macht angebrochen und dieselbe hat schnell eine bis dahin kaum geahnte Blüte erreicht. Fast komisch klingt in Mitte all der enthusia- stischen Lobpreisungen der verschiedenen Farbstoffe ein von England herübertönender Unkenruf, welcher das Färben mit Anilinfarben gänz- lich verurtheilt und als durchaus erfolglos hinstellt. Es ist Lawson Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. i. 35 528 Grierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. Tait (60), welcher so gegen die starke Strömung der Zeit zu schwim- men versucht, derselbe Forscher, welcher auch das Carmin verdammt und an Stelle dieser Tinctionsmittel Lakmus und den alkoholischen Extract des Rothkohls als wunderbar für das mikroskopische Färben geeignete Stoffe anpreist. Doch vermochte er nicht die immer lebhafter sich entwickelnde neue Tinctionsmethode erfolgreich zu bekämpfen, er machte ihr wohl kaum Jemand abspenstig, und ebenso blieb der nach seiner Empfehlung scheinbar drohende Kampf zwischen den Köchinnen und den mikroskopischen Forschern wegen des Kohlgemüses aus, da die letzteren es neidlos der Küche überliessen, in der richtigen Erkennt- niss, dass die Wissenschaft sich vor Kohl so viel als möglich zu hüten habe. Nachdem, wie wir oben sahen, schon vorher die am meisten ver- breiteten Anilinfarben wie Rosanilin, Anilein, Pariser Blau, Fuchsin und P a r m e s o 1 u b 1 e für die histologische Technik verwandt worden waren, wurden dieser von dem Jahr 1874 an in rascher Folge eine grosse Reihe von neuen Farbstoffen gewonnen. So, um nur die wichtigsten hier zu nennen, Dahlia, Eosin, Methylanilinviolett, Primula, Purpurin, Safraniu, Jod grün, Chinolinblau, mehrere schwarze Farben wie Sankey's Anilin eblue-black und das CoLiN'sche Schwarz, Methylgrün, Indulin, Bismarckbraun, Bordeaux, Ponceau, Methylenblau, Solidgrün, Säure- fuchsin, Violett B, Ni grosin, HuGUENiN (79) empfahl 1874 zum ersten Mal Dahlia als werth- volles Mittel, um den Axencyliuder in der sonst farblos bleibenden Nervenfaser zu färben. Es ist dann später auch für andere Zwecke verwandt worden, konnte sich aber nicht dieselbe BeUebtheit erwerben, wie manche andere Anilinfarben, bis Ehelich 1876 es aufs Neue bei seinen bekannten Untersuchungen über die Tinction der Plasmazellen (92) in Verwendung zog und zu hohen Ehren brachte. Er stellte aus- gedehnte Experimente mit diesem Farbstoff an und erkannte, dass es in bestimmter Verwenduugsweise eine hohe Differenzirungsfähigkeit besitzt. Nach diesem wurde das Eosin in die mikroskopische Technik einge- führt. Die äusserst wichtige Stellung, welche es in dieser einnimmt, lässt sich schon aus der ungemein umfangreichen dasselbe betreffenden Literatur erkennen. Das Verdienst, es für die histologischen Zwecke gewonnen zu haben, kommt Fischer (80) zu, welcher es 1875 empfahl, und zwar besonders für die Tinction der Epithelien, Muskelfasern, Axen- cylinder und Blutgefässe. Er verwandte entweder eine einfache wässe- rige Lösung oder eine nach complicirter Methode (siehe Tabelle No. 80) I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskoplsclieu Zwecken. 529 augefertigte alkoholische. Später wurde besonders die wässerige Lösung, vielleicht mit Zusatz vou etwas Alkohol empfohlen. So von Deesch- FELD (89) und Renaut (99). Lavdowsky (88) dagegen zog eine aiumo- niakalische Lösung vor. Wissowzky (87) und nach ihm von Than- HOFFER machten vou eiuer mit eiuer gleichen Menge Alaun versetzten alkoholischen Eosiulösuug eine specifische Anwendung, indem sie diese Flüssigkeit als eiu äusserst empfindliches und sehr zweckmässiges Rea- genz auf Hämoglobin verwandten. Der letztere Forscher legt die Präparate zuvor noch eine kurze Zeit in eine Lösung von Osmiumsäure. Nach Fischer hat jedenfalls Renaut, ein französischer Forscher, das grösste Verdienst hinsichtlich der Ausbildung der Eosintinction. Er hat sehr sorgsame Untersuchungen über die Wirkung dieses Farbstoffes an- gestellt uud sich eine Reihe von Jahren hindurch bemüht, die Methode dieser Färbung mehr uud mehr zu verbessern. Wir werden weiter unten noch sehen, dass er danu auch versuchte, ihre Wirkung durch Verbindung mit Hämatoxylin zu erliöhen. Wie früher schon die rothe Carmin-Tinte für die mikroskopische Technik herangezogen wurde, so mussten auch jetzt im Handel vorkommende Anilin-Tinten der Wissen- schaft in einer anderen Weise dienen, als ihre Fabricanten beabsichtigt hatten. Käufliche Anilin-Tinten sind einfache wässerige Lösungen von Indulin, Eosin oder Fuchsin, dann auch vou schwarzen Anilinfarben. Früher war die LEONHAEDi'sche violette Tinte, eine Mischung von Anilin-Roth und -Blau, sehr beliebt und weit verbreitet. Ihr wurde auch zweimal die Ehre zu Theil, von histologischen Forschern als vor- treffliches Reagenz empfohlen zu werden. Einmal hat Baumgarten (91) sie für die Differenzirung des Knorpels an der Ossificationsgrenze sich bildender Knochen verwandt und warm gepriesen, dann auch hat Heschl (82) sie als vorzügliches Reagenz auf amyloide Substanz ge- lobt. Zu gleichem Zweck d. h. also zur Untersuchung amyloid degene- rirter Gewebe empfahlen fast gleichzeitig mit dem eben genannten Forscher der Kliniker JtjRGENS das Jodviolett und der bekannte französische Forscher Cornil (85) das violette Methylanilin, das er überhaupt erst in die histologische Technik einführte. Später im Jahre 1880 dann pries Curschmann (103) für diese Reaction das Me- thyl grün am höchsten und zog es den genannten Farbstoffen weit vor, und in demselben Jahre wird wieder in einer englischen Zeitschrift (104) das Safranin als alle anderen Stoffe für diese Reaction über- treffend hingestellt. Welcher dieser Autoren Recht hat, ist schwer zu sagen. Nach Kyber (105) haben sie alle Unrecht, denn die genannten Anilinfarben, die er im übrigen als Tinctionsmittel recht schätzt, hätten 530 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 4. für den Nachweis der amyloiden Substanz alle zusammen einen ganz geringen Werth und könnten auch nicht im entferntesten mit der Vik- CHOw'schen Jod- Schwefelsäure -Reaction concurriren. Man sieht, nicht der Geschmack allein der Menschen ist sehr verschieden, sondern auch der Gesichtssinn. Und das ist sehr gut, denn wie sollte sonst das gewaltige Material für die ungeheuer grosse Zahl von wissen- schaftlichen Zeitschriften geschaffen werden ? So ziemlich waren nun alle Farbennüancen der mikroskopischen Technik dienstbar gemacht worden, doch machte sich offenbar das Fehlen der schwarzen Farbe in stören- der Weise bemerkbar, denn zu gleicher Zeit wurden in England und in Frankreich zwei solche Farbstoffe für die Histologie eifrig empfohlen, um dem bisherigen Maugel abzuhelfen. Sänket (93) und Bevan Lewis (94) preisen besonders für die Tiuction von Präparaten des centralen Nervensystems das in England leicht käuflich zu habende A nilin e- blue-black*. Der französische Forscher Luys empfiehlt einen schwarzen Anilinfarbstoff, den er CoLiN'sches Schwarz (noir Colin) nennt. Er rühmt an ihm besonders, dass es die Präparate sehr zum Photograpbireu geeignet macht, und wollen wir nach dem von ihm her- ausgegebenen prachtvollen Atlas photographischer Abbildungen des Ge- hirns, die zum Theil nach so gefärbten Präparaten gefertigt sind, urtheilen, so müssen wir ihm zustimmen. Ein sehr dunkles, in Schwarz übergehendes Blau liefert die wässerige Lösung des Indulin, das Calbebla (96) im nächsten Jahre, 1877, in die mikroskopische Technik einführte. Später kam zu diesen blauschwarzen Farbstoffen das mit dem Indulin chemisch sehr nahe verwandte grauschwarze Ni gros in (121). Oben schon wurde erwähnt, dass das Safranin als Reagenz auf amyloide Substanz empfohlen worden sei; es war aber schon vorher als histologisches Tinctionsmittel bekannt. So viel ich weiss, hat Ehe- lich (92) es 1876 zuerst eingeführt. Es wurde dann bald einer der beliebtesten mikroskopischen Farbstoffe, und zwar ganz besonders nach- dem es von PriTZNER (107 und 112) und Flemming (111) auf das wärmste als Kernfärbemittel empfohlen wurde. Es nimmt in der That unter den Farbstoffen, welche für die Darstellung der Kernfiguren ver- wandt werden, eine der allerersten Stellen ein, zumal wenn man sich des gleich zu besprechenden HEEMANN'schen Verfahrens bedient ^. Den genannten Farben reihte dann 1878 Weigert (101) einen braunen Stoff 1) Es ist dies offenbar das von dem Chemiker John Lightfoot 1863 her- gestellte schöne Blauschwarz. *) Es ist aber durchaus nothwendig, das Safranin aus sicherer Quelle zu I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 531 an, der schon seit 1866 als Phenylenblau, Manchesterbrauu oder Vesuvin in den Handel kam und neuerdings unter der Marke Bismarckbraun ausgegeben worden ist. Nach Weigekt's Vor- schrift verwendet, liefert dieser Farbstoff sehr gute Tinctionen, besonders färben sich die Kerne sehr intensiv. Trotzdem aber konnte und kann man auch heute noch nicht ihn als den Messias unter den mikroskopi- schen Tinctionsmitteln ansehen, von dem allein das Heil für die For- schung zu erboffen ist, wie Weigert es in seiner kleinen Abhandlung über diesen Gegenstand that. Er stellte nämlich eine Reihe von An- forderungen an einen wirklich guten histologischen Farbstoff; leider aber erfüllte nach seinem ürtheil kein einziges jener Mittel, mit denen man bisher sich ganz zufrieden gefühlt hatte, diese Bedingungen. Wohl aber ist dies mit dem Bismarckbraun der Fall, so dass es als das Muster aller Tinctiousmittel hingestellt werden muss. Merkwürdiger Weise aber begnügte sich doch Weigert selber, der ohne jede Frage zu unseren vortrefflichsten und glücklichsten Experimentatoren im Gebiet der Tinctionsmethoden gehört, nicht mit diesem Musterfarbstoff, sondern suchte mit einem von den schönsten Erfolgen gekrönten Eifer nach neuen Mitteln und neuen Methoden. Eine interessante Verwendung des Bismarckbrauns fand Karl Brandt, indem er lebende niedere Organis- men, wie Amöben, Flagellaten u. s. w. mit ihm färbte. Zu dem gleichen Zweck verwandte der französische Zoologe Certes (110 und 125) das von Ranvier in die mikroskopische Technik eingeführte Cyanin (Chinolinblau). Eine sehr geschätzte Gruppe der Anilinfarben, welche einen wich- tigen Antheil an den werthvoUsten Entdeckungen der neueren Medicin haben, gehört den sogenannten methylirten und äthylirten Rosanilinenan. Dieselben sind zum allergrössten Theil schon in den sechsziger Jahren entdeckt worden und in den Handel gekommen, und auch die mikroskopische Technik hat sich verhältnissmässig bald ihrer bemächtigt. Hierher gehörten von den bekanntesten Farbstoffen das Jod- Violett (oder Hofmann's Violett) und das Jod- Grün und die diesen analogen Stoffe Methyl- Violett und Methyl-Grün. Die ersteren beiden waren früher allein im Handel, wurden jedoch nach der Entdeckung der letzteren durch diese, welche für die Technik ebenso gut aber viel billiger sind, vollkommen verdrängt, so dass man sie jetzt nicht mehr so leicht erhalten kann. Dies ist insofern für die mikro- bezielien, da man sonst selir leicht ein Präparat erhält, das gänzlich im Stich lässt. 532 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I. 4. skopisclie Tinction beclauernswerth, als die Jod-Farben für ihre Zwecke schönere nnd sichere Wirkungen haben als die Methyl-Farben, zum mindesten ist dies hinsichtlich des Jod-Grüns unzweifelhaft. Jükgens (83) führte das Jod- Violett in die histologische Technik ein, nach ihm wurde es noch besonders von Teeitel (90) und Ehelich (92) empfohlen. Das Methyl-Violett verdanken wir dem Franzosen CoBNTL (85). Das Jod- Grün scheint in England zuerst für die histo- logische Technik verwerthet worden zu sein imd zwar in Gemischen mit Pikro-Carmin zum Doppeltfärben. Stieling (230) und Richaedson (231) empfehlen es hierzu im Jahr 1881. Im folgenden Jahr dann entdeckt es Geiesbach (114; man vergleiche auch die Notiz von Flesch 115) anfs Neue und preist es mit rühmenden Worten als jenen nns schon bekannten Muster - Farbstoff , der alle bisher angewandten Tinctionsmittel weit in den Schatten stellt. Das Methyl-Grün end- lich ist von Calbekla (96) im Jahre 1877 zusammen mit dem Indulin in die histologische Technik eingeführt worden, nachher aber noch von verschiedenen Mikroskopikern sehr angelegentlich empfohlen worden. So von Eelicki, Cüeschmann, Geiesbach, Steasbüegee und Anderen. Zu den eben genannten Farbstoffen ist noch das Methylen -Blau zu stellen, obgleich es chemisch nicht zu ihnen gehört. Es wurde erst im Jahr 1877 von Caeo dargestellt. In die mikroskopische Technik ist es durch Ehelich (102 und 113) 1879 eingeführt worden. Be- sonders warm empfahl er es für die Bacterienuntersuchung. Für gleiche Zwecke äusserst empfehlenswerth, aber auch sonst von hohem Werth für die Tinction ist das Gentiana- Violett (Ehelich 1881 [113]), das sich in den letzten Jahren einer grossen Beliebtheit erfreute. Dies sind die wichtigsten der in den siebziger Jahren für die Mikroskopie gewonnenen Anilinfarbstoffe. Durchprobirt wurden wohl alle im Handel zu erhaltenden, doch eignen sich von den übrigen nur noch wenige für die histologische Tinction und auch diese stehen in den wesentlichsten Eigenschaften den angeführten weit nach, so dass der Mikroskopiker ihrer durchaus nicht bedarf, obgleich freilich noch etliche von ihnen empfohlen werden'. Auf die Methoden der Verwendung der genannten Farben will ich, ') Ich habe im vorigen Jahr, als ich diese Abhandlung projectirte, alle mir zugänglichen in England, Frankreich und Deutschland im Handel ver- breiteten AnilLnfarben — es waren über 50 verschiedene Marken — auf ihren Werth als histologische Tinctionsmittel geprüft. Das Resultat M-ar die Ueber- zeugung, dass alle diese Stoffe auch schon von anderen Forschern durchprobirt waren, und dass die oben aufgezählten sich aus der ganzen Reihe als die bei I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopisclieii Zwecken. 533 um Wiederholungen zu vermeiden, hier nicht näher eingx'hen, da ich auf diesen Punkt zurückkomme. Die Stoffe wurden entweder in Wasser oder Alkohol gelöst angewandt ; verschiedene Zusätze wie Alaun, Chlor- natrium, Essigsäure u. a. m. wurden empfohlen, um ihre Wirkung zu erhöhen. Neuerdings ist viel von dem HEEMANN'schen Verfahren bei den Anilin-Tinctionen die Rede. Dasselbe wurde schon 1875 auf der Grazer Naturforscherversammlung von Heemann besprochen und in dem Tageblatt derselben veröffentlicht. Doch blieb es fast ganz unbekannt, bis Flemming (111) 1881 diese Methode aufs neue angelegentlich em- pfahl und weiter ausbildete. Nun wurde sie sehr beliebt imd wird vielfach und zwar ganz besonders für Kernfärbungen gern verwandt. Dies Verfahren besteht darin, dass man die Präparate in alkoholischen Lösungen des Farbstoffes sehr stark tingirt (überfärbt), und dann in reinem Alkohol auszieht. Dann schwindet die Farbe aus dem Leib der Zellen, bleibt aber in den Kernen haften und die zuerst diffuse Färbung der Präparate macht nun einer schönen Diflferenziruug Platz. Heemann hatte diese Methode nur für Tinctionsfärbung verwandt, Fleiiming aber empfahl sie für verschiedene Anilinfarben, besonders für Dahlia, Magdalaroth, Solidgrün und vor allen Dingen für Safranin. Es war sehr natürlich, dass man, nachdem sich der Schatz von Tinctionsmitteln so ausserordentlich vermehrt hatte, und besonders nachdem man in den Besitz in allen ihren Eigenschaften und in ihren Wirkungen so verschiedener Stoffe gelangt war, die schon in den sechziger Jahren in schüchterner Weise geübte Doppelfärbung weiter ausbildete. Auch in dieser Beziehung ist in dem siebenten Decennium viel übertrieben worden; es entstand eine wahre Mischwuth und alle möglichen Stoffe wurden in den verschiedensten Verhältnissen durch- einander gerührt und mit diesen oft wunderbar bunt glänzenden Mischungen die Präparate gefärbt. Mancher Forscher trug die Spuren dieser Experimente gar zu deutlich mit sich herum und war an Klei- dern imd Händen selbst eine prachtvoll in allen Farben erglänzende Probe derselben. Auch hier lag übrigens das zu Viel nicht in den zahlreichen Versuchen, die ja nur wünschenswerth sein konnten, sondern in der allzu grossen und allzu schnellen Begeisterung für irgend eine Combination, die, obgleich sie in Wirklichkeit entweder nur sehr massige Resultate gewährte oder doch w^enigstens andere Tinctionsmethoden weitem für die mikroskopische Tinction geeignesten ergeben hatten, denn unter den übrigen fand ich nicht eine, welche ich — wenigstens bei der Ver- wendung nach den bisherigen Methoden — ihnen noch anreihen mochte. 534 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. nicht übertraf, mit übermässigem Lobe der wissenschaftlichen ]\litwelt augepriesen wurde, als müsste durch ihre Verwendung eine neue Epoche der histologischen Forschung beginnen. Wie dem aber auch sei, aus der grossen Zahl von combinirten Tinctionsmethoden geringeren Werths sondern sich doch etliche ab, welche von äusserster Brauchbarkeit sind und denen wir sehr hübsche Resultate verdanken. So müssen A\dr schon dieser vortrefflichen Methoden wegen die grosse Anzahl derjenigen mit in den Kauf nehmen, welche besser nicht publicirt worden wären. Auffallend viel ist in England mit combinirten Methoden gearbeitet. Besonders hat man die Anilinfarben, deren Technik, wie wir schon sahen, im übrigen gar nicht so sehr dort entwickelt war, recht viel zusammengemischt und zwar zum grossen Theil, wie ich behaupten muss, recht systemlos. Die durch diese gemischten Farbflüssigkeiten tingirten Präparate sind auch ohne Zweifel sehr bunt, aber durchaus nicht immer sehr lehrreich. Es ist schon früher erwähnt worden, dass die Methode, verschiedene Tinctions- imd Imprägnationsstoffe zu combiniren, in der Mitte der sechziger Jahre zuerst aufkam, ohne sich aber eine besondere Beliebt- heit zu erwerben. Sie war zuerst im Jahre 1865, wie wir schon sahen, empfohlen für die Osmium- und etwas später für die Chlorpalladium- Präparate, die beide nachträglich noch mit Ammoniakcarmin gefärbt werden sollten. Wichtiger war die zuerst von Schwakz (212) 1867 eingeführte und im folgenden Jahr von Ranvtee auf das wärmste empfohlene und etwas veränderte Methode, Carmin und Pikrinsäure zu combiniren. Die Pikrocarmintinction erlangte in dem folgenden De- cennium eine ganz ausserordentliche Beliebtheit und wurde in allen Ländern sehr vielfach geübt. In der That leistet sie bei richtiger Zu- sammensetzung und guter Qualität des Carmins (worauf viel mehr an- kommt als man gewöhnlich meint) für zahlreiche Untersuchungen un- gemein viel und verdient ihre Beliebtheit vollkommen. Es kann uns daher auch nicht in Erstaunen versetzen, dass in den siebziger Jahren eine ziemlich bedeutende Literatur über diese Tinctionsmethode ent- stand, die freilich im allgemeinen nicht viel von Bedeutung enthält. Verschiedene Vorschriften, ein gutes Pikrocarmin zu bereiten, wurden von Klemensiewicz (222), Gage (225), Matee (226) und Weigert (231) angegeben und sind in den Tabellen zu finden. Dieser an sich schon zusammengesetzte Farbstoff eignet sich nun ausserordentlich gut für weitere Combinationen mit anderen Tinctions- und Imprägnations- mitteln, ganz besonders könnte er mit den meisten eine andere Nuance besitzenden Anilinfarben zusammen gebraucht werden. In der That I, 4. Grierkc: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 535 sind auch mehrfach EmpfehUingen solcher Combinationen, zu denen man aber mit gleichem Recht noch andere hinzufügen könnte, in der Literatur zu finden. Ich erwähne nur die von Lang (223) gerühmte Verbindung von Pikrocarmin und Eosin, die Verbindung des ersteren mit Krapp (Richaedson 228), mit Hämatoxylin (Gibbes 229 und Stirling 230) und mit Jod-Grün (Stieling). Gewöhnlich wird "das Pikrocarmin in wässeriger Lösung verwandt und eignet sich für die Färbung des in der verschiedensten Weise conservirten und gehärteten Materials. Die Vorausbehandlung mit Osmiumsäure und Pikrinsäure wird von Stieling als besonders günstig empfohlen. Die Vortheile einer Nachbehandlung mit Säuren wird ebenfalls recht gerühmt, so von Neumann (227) mit Salzsäure in Glycerin und von Gibbes (229) mit Essigsäure oder Pikrinsäure (in Wasser). Anstatt des einfachen Pikro- carmins empfahl Schieffeedeckee 1878 (221) pikrocarminsaures Natron. Ausser mit der Pikrinsäure wurde Carmin noch besonders mit Indig- carmin und Hämatoxylin combinirt. Mit dem ersteren zusammen wurde es von Meekel (216) 1874 für Präparate des centralen Nervensystems verwandt und als sehr differenzirend empfohlen , indem es das Nerven- mark himmelblau, die Blutkörperchen grün und das Uebrige roth färbe. Von England aus wurden mehrfach die grossen Vortheile einer Mischung dieser beiden Farbstoffe, welche mit Borax versetzt wird, gerühmt. Recepte für die Anfertigung der Tinctionsflüssigkeit und Vorschriften für die Behandlung der Präparate wurden 1877 von Noeeis u. Shak- SPEAEE (219) und von Meekel (220) 1879 von Seiler (224) und 1881 von Gibbes (229) veröffentlicht. Von der etwas grossen Umständhch- keit der Methode abgesehen, ist diese Tinction wirklich recht hübsch und liefert vorzügliche Demonstrationsbilder. Besonders differenzirt sie Kern und Kernkörper sehr schön in dem gleichfalls gefärbten Zell- protoplasma imd hebt diese wieder sehr klar aus etwaiger Grundsubstanz hervor. Zu den ältesten, bequemsten und erfolgreichsten Doppelfärbungen gehört die nochmalige Tinction carmingefärbter Präparate mit Häma- toxylin. Beide Farbflüssigkeiten zu mischen ist nicht zu rathen, man muss durchaus die Präparate zuerst mit Carmin und dann mit Hämatoxylin färben. Geübt wurde diese Doppelfärbung schon von diesem und jenem am Ausgang der sechziger Jahre, in der Literatur empfohlen wurde sie, so viel ich weiss, zum ersten Mal 1873 von Steelzoff (214), der sie für seine Studien der Knochenentwicklung mit grossem Erfolg benutzte. Und allerdings konnte man nicht leicht Präparate finden, welche so deutlich den Nutzen einer guten Doppeltinction bewiesen wie diese, und besonders, wenn sie von einem in Chromsäure entkalkten und durch 536 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. sie schon grün gefärbten Material genommen waren. Später 1880 und 1881 wurde dann von den Engländern Gibbes und Stielixg die com- binirte Färbung von Pikrocarmin und Hämatoxylin warm gerühmt, doch ist diese nach meiner Erfahrung nur für die Haut der Verbindung des einfachen Carmin mit Hämatoxylin vorzuziehen. Jene Autoren da- gegen empfahlen sie auch für Zelltheiluug und das Studium der Ent- wicklung verschiedener Gewebe. Von Combinationeu des Carmin mit Anilinfarben hebe ich als in der Literatur sehr gerühmt hervor, die- jenige mit dem in Alkohol löslichen Anilinblau [Duval 1876 (218)] mit Eosin [Laxg 1879 (223)], mit Jodgrün [Stikling 1881 (230)] und ebenfalls in verschiedenen Mischungsverhältnissen mit Jod- und Malachitgrün [Richaedson 1881 (232)]. Das Hämatoxylin, dessen Verbindung mit Carmin schon besprochen wurde, eignet sich auch sehr zu anderen Doppelfärbungen und wurde daher ausser mit diesem auch sonst vielfach zu combinirten Methoden verwandt. Die erste derselben ist neben Steelzoff's Carmin-Häma- toxylinfärbung die hübscheste und nützlichste. Es ist die von Geelach 1872 angegebene Doppelfärbung getrockneter Blutgefässe mit Häma- toxylin, Essigsäure und Pikrinsäure (235). Die einzelnen Schichten der Gefässwandung und die verschiedenen Gewebselemente werden in selten schöner Weise differenzirt ; doch -erfordert freilich die Methode einige Uebung und grosse Aufmerksamkeit, um wirklich schöne Prä- parate zu ergeben, und leider halten sich diese nicht gut. Zur Ver- bindung der Imprägnation mit Silber und nachheriger Färbung mit Hämatoxylin rieth Ebeeth 1874 (236) für Untersuchungen der Cornea. Ferner haben sich einige Engländer wieder bemüht, brauchbare Com- binationeu des Hämatoxylins mit Anilinfarben herauszufinden. So preist TooLE (237) die Verbindung desselben mit Anilinblau ; Bevan Lewis (238) mit Anilinschwarz (mit dem früher erwähnten Auiline blue-black von Sänket); Stielixg (243) mit Jodgrün oder mit Eosin. Diese letztere Combination hatte schon früher ein deutscher Forscher, Busch (239) im Jahr 1877 (Stieling's Empfehlung flillt erst ins Jahr 1881) für das Studium der Verknöcherung empfohlen. Er legte die Schnitte entkalkter Knochen noch vor der Doppeltinction in eine Yoprocentige Chromsäurelösung oder Iprocentige Lösung von chromsaurem Kali. Sehr viel experimentirt mit dieser Combination von Hämatoxylin und Eosin hat der französische Forscher Renaut, welcher, wie wir oben schon sahen, dem Eosin ein förmliches Specialstudium widmete uud es auf mannigfache Weise zu verwerthen suchte. Er stellte sich nach be- stimmten Verhältnissen (das Nähere 240) eine Lösung beider Farbstoffe I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 537 in Glj^cerin her, welche er als äusserst differenzireiid rühmt. Doch war er mit diesem „Eosiue hematoxylique" noch nicht ganz zufrieden, — obgleich es nach meinen Erfahrungen sehr hübsch ditferenzirte Präparate giebt , sondern suchte noch fortwährend nach einer Verbesse- rung desselben. Im Jahre 1881 publicirte er dann nun auch wirklich eine neue Art, dasselbe zu bereiten, die sich von der ersten durch Zu- satz von Kochsalz und Alaun zum Glycerin unterscheidet (242). Ich habe vergeblich versucht, die Vortheile dieser zweiten Methode der ersteren gegenüber zu finden, da mir die Tinction mit dieser immer besser gelang als mit jener. Endlich erwähne ich noch, dass Brandt bei der oben schon erwähnten Färbung lebender einzelliger Organismen ausser dem Bismarckbraun auch eine Mischung derselben mit Häma- toxylin verwendet (241). Aus Indigcarmin und concentrirter Pikrinsäurelösung machte der Franzose Jullien (261) ein Tinctionsgemisch, das bindegewebige Ele- mente blau, epitheliale gelb färben soll. Dass die Anilinfarben auf das Fleissigste mit einander gemischt und so zu corabinirten Färbungen verwandt wurden, ist schon erwähnt. Man hat da eine möglichst grosse Auswahl von Färbungen, welche in solchen Präparaten, die aus vielen verschiedenen Gewebsarten zu- sammengesetzt sind, so z. B. in solchen von der Haut, höchste Mannig- faltigkeit und bunteste Abwechslung der Farben hervorrufen, so dass diese häufig eine gewisse Aehnlichkeit mit den alten bunten Landkarten des vergangeneu und vergessenen deutschen Reiches haben. Die Em- pfehlungen solcher Mischungen stammen 'besonders aus den letzten Jahren; früher, d. h. etwa vor 1877, w\ar die Zahl von dazu brauch- baren Anilinfarbstofi'en noch nicht gross genug. Der grösste Färbe- meister in dieser Hinsicht ist Ehelich, er hat die Anilinfarben alle durch einander gemengt, diese Mischerei aber in ein bestimmtes System gebracht. Neben ihm muss Schieffeedeckee (247) genannt werden. Auch er nahm sich die Reihe der ihm bekannten Anilinfarbstotfe vor, um sie zu combiniren. So verwendet er besonders als rothen Farbstotf die Gombinatiou Eosin ; mit ihm werden blaue oder grüne Stoflfe wie Dahlia, Methylviolett und ein Anilingrün, das er nicht näher bezeichnet, gemischt. Ausserdem haben sich wieder besonders englische Forscher mit der Mischung von Anilinfarben untereinander und mit der Empfeh- lung dieser Gombinationen abgegeben. Wir begegnen da den schon mehrfach erwähnten Namen Giebes, Stielixg und Richaedson, dann Baeeett (250), MooBE (255) und Stowell (256). Die von ihnen combinirten Farbstoffe sind Anilinblau (Craw-schaw's, auiline-blue-dye) 538 Gierkc: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. mit Magenta, Scharlach und Auilinblau, Scharlach und Jod- oder Malachit-Grün, Eosin und Methylanilingrün. Die letzte Combination hatte übrigens Calbeela schon fünf Jahre vor den Engländern Stowell und MooEE (256 u. 256 im Jahr 1882) in Deutschland für eine Reihe von Geweben als sehr differenzirend erprobt imd mit warmem Lobe empfohlen (1877; 245). Das Eosin eignet sich in der That am meisten von allen Anilinfarben zu solchen Combinationen. So führe ich noch die Empfehlung Johne's (254) an, dasselbe mit Gentianaviolett zu mischen. Aber nicht allein mit anderen Anilinfarben lässt es sich gut combinireu, sondern auch mit sonstigen Farben. Wir sahen ja schon, dass Rexaut, dessen Vorliebe für das Eosin zu zahlreichen Experimen- ten hinsichtlich seiner besten Verwerthung führte, es mit Hämatoxylin vermischte. Zum Zweck der Untersuchung von Sehnen verband er es mit der Versilberung, indem er die Sehnen zuerst nach gewöhnlicher Methode mit salpetersaurem Silberoxyd behandelte imd dann mit Eosin tingirte (246). Diese letzte Combination führt mich dazu, am Schluss dieses Abschnittes noch zu erwähnen, dass auch mehrfach die Methoden der Vergoldung und Versilberung verbunden wurden. Zuerst hat Rat^tier (257) 1868 dies empfohlen. Später dann haben Hansen (258), Lavdowsky (259) und das Ehepaar Hoggan (260) diese Combination von neuem empfohlen, ohne doch irgend etwas anderes der Methode hinzuzufügen. Man erkennt aus dem, was ich auseinandergesetzt habe und aus den angeführten Schriften wohl deutlich genug, dass die Tinction mit Anilinfarben und die combinirten Färbemethoden das Decennium be- herrschen und die Kraft derjenigen Forscher, welche sich besonders mit der Entdeckung neuer Methoden und mit Experimenten zu ihrer Prüfung abgeben, fast vollständig in Anspruch nehmen. Dennoch wurden auch noch einige wenige Stoffe anderer Art für die histologische Tinction gewonnen, freilich ohne eine besondere Bedeutung für dieselbe zu erlangen. Sehr viel wichtiger war die weitere Ausbildung der schon vorhandenen Färbemethoden, welche zwar durchaus nicht durch wesent- liche und originelle Entdeckungen bereichert wurden, aber theilweise doch recht hübsche Fortschritte aufweisen können, so dass ihre An- wendung theils bequemer, theils auch erfolgreicher geworden ist. Neben den erwähnten Anilinfarben wurden noch folgende Stoffe wäh- rend der siebziger Jahre neu in die Färbetechnik eingeführt : Molybdän- saures Ammoniak, das natürliche Alizariu uutl Purpurin, Lackmus, Orseille und der Rothkohl. Von diesen allen hat sich keins irgend eine grössere Beliebtheit erwerben können. Am meisten Eingang in die Ij 4. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 539 histologische Technik hatte zuerst wohl noch das Purpurin gefunden, doch wurde es gar bald durch die Anilinfarben vollkommen verdrängt und ist jetzt auf dem Arbeitstisch der Mikroskopiker wohl ebenso wenig zu finden, wie die anderen genannten Stoffe. Sie sind auch in der That vollkommen entbehrlich und haben für keine einzige Tinctionsmethode und für kein Gewebe vor den beliebteren Färbemitteln irgend welche Vorzüge. Sie haben also eigentlich nur noch historischen Werth und kommen wohl nur dann noch zur Verwendung, wenn es an anderen besseren Farbstoifen fehlt. So z. B. wüsste ich wirklich nicht, zu welchem Zweck man das molybdänsaure Ammoniak noch für die Fär- bung der Centralorgane des Nervensystems, für die es Merkel 1871 (49) mit Limatura ferri und Salzsäure versetzt empfahl, gebrauchen sollte, da eine grosse Reihe von anderen Farbstofi'en viel bessere Prä- parate erzielen und noch dazu eine bedeutend bequemere Verwendung gestatten. Krause (50) jedoch rühmt die Vorzüge des molybdänsauren Ammoniaks zur Tinction von Nervenapparaten, Drüsen und Flimmer- zellen. Er behandelt die tief blau gefärbten Präparate noch mit Lösun- gen von Gerb- oder Pyrogallus-Säure, wodurch sie sich braun färben. Ich muss gestehen, dass ich auch von der Anwendung dieser umständ- lichen Methode nicht die geringsten Vortheile anderen Tinctionen gegen- über herausfinden konnte. Doch, wie wir schon oft sahen, Geschmack und Liebhaberei spielen in der histologischen Tinctionstechnik eine ganz ausserordentlich wichtige Ptolle. Ebensowenig wie dieser an- organische Stoff konnten sich die Alkanna und der Lackmus ausser den Forschern, welche sie empfahlen. Freunde gewinnen. Der Farb- stoff der Alkannawurzel in wässeriger Lösung oder auch mit Terpentin vermischt wurde schon früh (1863 ; 58) von Waldeyer für die isolirte Tinction der Axencylinder empfohlen und ist auch wirklich für diesen Zweck ganz brauchbar. Der Botaniker Dippel (59) rühmt einen wein- geistigen Auszug der Alkannawurzel ausserordentlich als Tinctions- mittel der Pflanzenhistologie. Lackmus gehört zu den allerältesten in der mikroskopischen Technik verwandten Stoffen, da Hartig (2) es 1854 schon gebraucht hatte. Im Jahr 1875 empfahl es der schon er- wähnte englische Forscher Lawson Tait (60) sehr angelegentlich, fand aber durchaus kein Gehör. Von seinem gleichfalls vollkommen misslungenen Versuch, die histologische Tinctionstechnik dadurch zu reformiren, dass er die bisher für sie gebrauchten Farbstoffe ausser durch Lackmus noch durch rothen Kohl-Extract ersetzen wollte, sprachen wir schon oben. Eine weit grössere Bedeutung für die histo- logische Forschung als alle diese Stoffe hat der Farbstoff der Krapp- 540 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 4. pflanze gewonnen, und zwar weniger als Tinctionsmittel, sondern durch die geniale von Liebbrkühn (51) zuerst geübte Methode, lebende Thiere mit demselben zu füttern, um das Knochenwachsthum zu studiren, da sich die neu bildende Knochensubstanz mit ihm roth färbt und so von der schon vor der Krappfütterung gebildeten unterschieden werden kann. Wenn nun auch freilich Liebekicühn schon im Jahr 1864 diese Methode erfand und der Oeffentlichkeit übergab, so kam sie doch in den siebziger Jahren erst recht zu Ehren als jener lebhaft geführte Streit hinsichtlich der Knochenentwicklung entbrannte, der im Anfang der siebziger Jahre eine reiche Literatur hervorrief. Köllikee (52) und sein Gegner, der in Zürich arbeitende russische Forscher Stkelzoef (54) benutzten beide die Methode der Krappfütterung für ihre Zwecke in ausgiebigster Weise. Liebekkühn (53) ersann jetzt noch eine etwas modificirte Methode, die sich bildende Kuochensubstauz zu färben, indem er Alizarinnatrium ins Blut der jungen Thiere spritzte. Bedeutend ge- ringer sind die Leistungen der aus dem Krapp dargestellten Farben Alizarin und Purpurin als eigentliche histologische Tinctionsmittel. Das erstere fand einen Lobredner in von Thanhofeek (55), nach welchem die von Benczur für das Centralnervensystem angegebene Färbung als sehr differenzirend wirkt. Das letztere ist 1874 von Ranvier (56) in die mikroskopische Technik eingeführt worden. Er löste es in kochender Alaunlösung und empfahl es zur Tinction der verschiedensten Gewebe, ganz besonders für das Rückenmark, um Bindegewebe und nervöse Elemente zu imterscheiden. Das warme Lob, welches der berühmte französische Histologe und ausgezeichnete Techniker dem Purpurin spendete , vermochte doch zunächst viele Forscher, es ebenfalls zu probiren. In Deutschland schob man die geringen Erfolge zuerst auf die mangelhafte Qualität des käuflichen Farbstoffes. Da aber auch die auf verschiedenen Wegen aus Paris von Ranviee selbst bezogenen Präparate des Purpurins keine besseren Resultate ergaben, so verschwand dasselbe gar bald wieder aus der Reihe mikroskopischer Reagentien, und zwar besonders auch deshalb, weil in kurzer Zeit darauf die Blüte der Anilinfarben eintrat, welche viel mehr zur Prüfung der vielen neuen wirksameren Farbstoffe einlud als zu Experimenten mit dem zwar ganz nützlichen aber in Beiner differenzirenden Wirkung doch nur unbedeutenden Purpuriu. Es ist dann später auch nur noch von Grenacher (57) wieder hervorgeholt worden, der die RANviER'sche Vorschrift insofern verändert, als er der mit Alaun versetzten wässerigen Lösung des Farbstoffes keinen Alkohol, sondern statt seiner Glycerin zusetzt. Viel wirksamer scheint mir aber I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 541 dieses Präparat auch nicht zu sein. Uebrigens sind neuerdings die natürlichen Krappfarben aus dem Handel fast ganz verdrängt worden durch das schon 1868 aus dem Anthracen des Steinkohlentheers künst- lich hergestellte nnd jetzt in Masse fabrikmässig pi'oducirte Alizarin und das aus diesem gewonnene künstliche Purpurin. Ich habe nun noch kurzen Bericht zu erstatten über die nur sehr theilweise bedeutenden und hübsche Erfolge gewährenden Fortschritte der früher bereits besprochenen Tinctions- und Imprägnations-Methoden in den siebziger Jahren und dem Beginn unseres Decenniums. Was zunächst die Carmintiuction angeht, so sind die Zubereitungen dieses Farbstoffes mit Essigsäure für manche Zwecke recht empfehleuswerth, da sie viele Gewebe mehr differenziren als die ammoniakalische Form. Dennoch ist diese, in richtiger Weise ' verwandt, dem essigsauren Car- miu im allgemeinen vorzuziehen. Der letztere ist von Schweiggee- Seidel schon am Ende der sechziger Jahre empfohlen worden, aber doch in den siebziger erst so recht allgemein geworden. In neuester Zeit wird die ScHNEiDEß'sche Vorschrift (27), in kochender Essigsäure von 45 Procent so viel Carmin als möglich zu lösen, viel befolgt und besonders bei zoologischen Untersuchungen sehr gelobt. Eine andere Modification der ScHWEiGGEn-SEiDEL'schen Methode gab Grenacher (25) 1879 an; er kocht nämlich den Carmin zuerst in einer schwachen Boraxlösung und versetzt diese Flüssigkeit dann mit Essigsäure. Mit dem bekannten in England alle anderen Carminpräparate an Beliebt- heit übertreffenden, aber auch bei uns sehr gern verwandten BEALE'schen Carmin (cfr. 12) hat der Warschauer Histologe Hoyer, welcher um die histologische Technik ausserordentliche Verdienste hat, viel experi- mentirt. Er erstattete 1876 (21) über diese Versuche Bericht und be- hauptet, dass in dem BEALE'schen Präparat das Glycerin nicht nur unnütz, sondern sogar schädlich sei. Seinen Erfolg verdanke dies nur dem Zusatz von Alkohol, welcher das carminsaure Ammoniak ausser- ordentlich viel wirksamer mache. Ich gebe Hoyee Recht, für den Fall, dass es sich um die Tinctiou von feineu Schnitten handelt; will mau aber grössere Stücke mit Carmin durchfärben, um sie dann erst zu schneiden, so halte ich den Zusatz von Glycerin entschieden für ebenso vortheilhaft, womöglich noch für nützlicher als den von Alkohol, der aber im Verein mit Glycerin auch recht gut wirkt. Ich habe eine grosse Reihe von Versuchen in Bezug auf dieses Durchfärben mit Ammoniak- Carmin angestellt, und kam zu der Ueberzeugung , dass der Zusatz ») Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 76. 542 Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 4. von Glyceriu die gleicbmässige Tiuction aller Partien im Innern sehr befördert, während der Alkohol eine Zersetzung und ein Weichwerden der Präparate verhindert, üebrigens empfiehlt sich für dieses Durch- färben ganzer Stücke, die erst nachträglich geschnitten werden sollen, das carminsaure Ammoniak nur für einige Präparate z. B. vom Central- nervensystem mehr als eine andere Carmiubereitimg, deren Empfehlung überhaupt der grösste Fortschritt der Carmintinction in den siebziger Jahren ist. Ich meine die zuerst von Geexachee 1879 (24) eingeführte Präparation (Kochen) des Carmin mit Alaun. Dieser Alauncarmin hat sehr schnell eine ausserordentliche Beliebtheit erlangt und gehört in der That zu den allerbesten schnell und sicher wirkenden Kern- färbemittelu. Da es eigentlich nur diese tiugirt, ist seine Anwendung natürlich füi' bestimmte Zwecke beschränkt, aber wo es sich um die DiflFereuzirung der Zellkerne handelt, ist es ohne Zweifel ganz vorzüg- lich und ist besonders dem Oxalsäuren und dem Borax-Carmin von Thieesh (11) sehr vorzuziehen. Ein gewisser Yortheil des Alaun- Carmins liegt auch in dem Umstand begründet, dass die Qualität des angewendeten Carmius für dieses Präparat nicht in Betracht kommt, was bei der schon erwähnten Schwierigkeit, heute sehr guten Carmin zu bekommen, von Wichtigkeit ist. Ja es lässt sich eben so gut, fast scheint es, noch besser, die in jeder Drogueuhaudlung käufliche Cochenille selber zu diesem Zweck verwenden. Die nach dem CzoKOK'schen Reeept (29) bereitete Alaun- Cochenille ist in der That neben dem Ammoniak-Carmiu das werthvoUste Tinctionsmittel für all- gemeine Zwecke. Beide ergänzen sich, indem das erstere die Kerne, der zweite das Protoplasma der Zellen, die Grundsubstanzen etc. färbt, aber nicht in gleichmässiger, sondern in ditferenzirender Weise. Ich habe in neuerer Zeit auch vielfach und zwar mit grossem Erfolg Schnitt- präparate besonders vom Centraluervensystem und von drüsigen Organen nach einander in Ammoniak-Carmin und Alaun-Cochenille gefärbt. Man muss allerdings, um sehr gelungene Tinctionen zu erhalten, ungemein aufpassen, um den richtigen Grad der Färbung zu gewinnen ; ferner ist es uöthig, dass der Ammoniak-Carmin so verdünnt ist, dass das Präparat mindestens 24 Stunden in der Flüssigkeit zu liegen hat, um den noth- wendigen Färbungsgrad zu erlangen. Dann aber wird man Tinctionen von einer Zartheit und einer Differenzirung erhalten, die alle in anderer Weise gewonnenen Präparate übertreffen. Ich ziehe auch ohne jede Frage diese Methode für allgemeine Zwecke, wenn ich keine bestimmte specifische Reaction bewirken will, jeder anderen vor und möchte auch keine von den Tinctionen mit Anilinfarben, so schätzenswerth sie auch I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 543 sein mag, ihr gleich stellen. Man kann auf diese Weise auch ganze Stücke durchfärben, ohne jedoch so gelungene und besonders zarte Präparate zu bekommen. Aus der Cochenille bereitete P. Mayee, die Hauptstütze der histologischen Technik der in dieser Beziehung so aus- gezeichneten „Zoologischen Station" in Neapel, durch Infusion mit Alkohol eine Tinctur (23 u. 28), deren discrete Färbung er rühmend hervorhebt. Ich kann dieselbe lange nicht so hoch stellen wie die Alaun-Cochenille oder das Alaun-Carmin. Als sonstige Angaben ge- ringerer Bedeutung hebe ich noch den Piath von Betz (17) hervor, das Carmiu-Ammoniak ausfaulen zu lassen, um es haltbarer zu machen, und den von Obeesteiner (22), die Carminfärbung in der Wärme vorzu- nehmen, um den Process zu beschleunigen. Sehr viel wichtiger sind die in die letzten Jahre (1882 und 1883) fallenden Bestrebungen, das carminsaure Ammoniak oder anstatt dessen das carminsaure Natron in trockner Pulverform herzustellen. Unabhängig von einander haben HoYEK in Warschau und Apotheker Maschke in Breslau derartige Präparate angefertigt. Der erstere carminsaures Ammoniak als Pulver oder Paste, der letztere carminsaures Natron. Beides scheinen Tinctions- mittel von ausserordentlichem Werth zu sein ; wenigstens lieferte eine von Hoter selbst gefertigte Probe ausgezeichnete Färbungen. Im Handel bezogene Präparate freilich, welche nach seiner Vorschrift her- gestellt sein sollten, ergaben nur ganz mangelhafte Resultate ; eine Er- fahrung, welche uns wieder zeigt, wie vorsichtig man mit der abfälligen Kritik eines Tinctionsmittels sein muss, wenn man dasselbe aus anderer Quelle als der Empfehlende bezieht. Durchgängig befriedigt bin ich bei dem äusserst ausgedehnten Gebrauch, den ich nun schon zwei Jahre hindurch von Maschke's carminsaurem Natron entweder allein oder mit Pikrinsäure mache. Ich kann dieses Präparat recht sehr weiteren Kreisen zum Gebrauch empfehlen ', bemerke aber ausdrücklich, dass man der Lösung, die man recht schwach, d. h. ganz leicht rosaroth wählen mag, ein wenig kohlensaures Ammoniak (auf 20 cc Farblösung 2 bis 4 Tropfen concentrirter Lösung des Salzes) hinzusetzen muss. Ich will nicht behaupten, dass dieses Carminpräparat ein gutes lange stehendes Carmin-Ammoniak an Leistungsfähigkeit übertrifft, aber es liegt ja auf der Hand, wie ungemein gross die Vortheile eines trocknen nicht verderbenden Pulvers sein müssen, das sich in jedem Augenblick ohne Schwierigkeit in jeglichem gewünschten Yerhältniss lösen lässt. ') Herr Apotheker Maschke Breslau, Neumarkt, giebt auf Bestellung käuflich von dem Präparat ab. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 4. 36 544 Gierke: Färberei zu inikroskopisclien Zwecken. I, 4. Sehen wir so, dass sich die Carmiufärbuug trotz ihres Alters noch recht hübsch weiter entwickelt hat und bis in die neueste Zeit hinein sehr wesentliche Fortschritte aufzuweisen hat, so können wir eigentlich von der wichtigen Hämatoxylin-Tinction nicht so sehr dasselbe sagen, wenn wir wenigstens von der schon besprochenen Benutzung dieses Farbstoffes zu combinirten Methoden absehen. Trotz der ausserordent- lichen Bedeutung dieser Tinction und trotzdem sie so sehr vielfach ver- wandt und ungemein viel mit ihr experimentirt wurde, ist in den sieb- ziger Jahren und bis in die letzte Zeit hinein nach meiner Ansicht in der ziemlich umfangreichen Literatur über dieselbe nur eine einzige Angabe enthalten, die einen wirklich wesentlichen Fortschritt der Methode darstellt. Es ist dies der von dem weit nach dem Süden Europas, nach Messina verschlagenen deutschen Zoologen Kleinenbbrg ^ gerathene Zusatz von Chlorcalium zu der alkoholischen Lösung von Hämatoxylin, der auch in gewöhnlicher Weise Alaun zugesetzt wird. Die etwas complicirte Vorschrift (42) wurde von Kleixenberg 1876 in seiner deutschen Uebersetzung der „Grundzüge der Entmcklungsge- schichte der Tliiere" von Foster und Balfour gegeben. Aber trotz der ziemlich umständlichen Darstellungsweise ist sie für embryologische Untersuchungen, für welche sie auch nui* empfohlen wurde, von höchstem Werth und gewährt für diesen Zweck viel grössere Vortheile als die einfache alkoholische Hämatoxylinlösung mit Alaun. Paul Mayer modificirte KLErxEXBERG's Vorschrift zur Anfertigung dieses Chlor- kalium-Hämatoxylius ein wenig, er machte sie etwas bequemer, ohne dass die Wirkung darunter leidet (44). Auch Dippel (46) suchte die gar zu mühsame Anfertigung des Ki,EiNENBERG'schen Hämatoxylins zu vereinfachen, übrigens setzte er an Stelle des Chlorkaliums Chlor- aluminum. In England scheint das krystallinische Hämatoxylin sich nicht recht Eingang verschafft zu haben, da einige Mikroskopiker 1873 und gar noch 1879 (Arnold; 40) und Alleyre Cook (43) den Extract des Campecheholzes, das viel weniger sicher wirkt und in seiner Ver- wendung unbequemer ist als der krystallisirte Farbstoff, brauchen. Der letztgenannte Forscher rühmt die Verbindung des Extractes mit Alaun und Kupfervitriol. Die Bereitungsweise seiner Tinctionsflüssigkeit ist aber zu umständlich und — wie ich nach meinen Controllversuchen behaupten darf — ohne jeglichen Vortheil der Böhjvier' sehen Lösung der Hämatoxyliukrystalle gegenüber, so dass sie sich bei uns in Deutsch- land keine Verehrer erwerben konnte. Von sonstigen das Hämatoxylin ') Klei.nenbeeg ist Professor der Zoologie an der Universität Messina. I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 545 betreffeudea Angaben hebe ich nur noch den in neuerer Zeit 1881 und 1882 von Renaut und Fbiedländee empfohlenen Zusatz von Glyceriu zu dem Alaun-Hämatoxyliu hervor. Renaut (45), der, wie wir schon mehrfach sahen, das Eosin zu seinem Lieblingsfarbstoff erhob und seinen Tinctionswirkuugen ein wahres Specialstudium zuwandte, hielt das Hämatoxylin für werth, in Gemeinschaft mit seiner hochgepriesenen Anilinfarbe zu treten, um Doppeltinctionen zu bewirken. Und da er diese beiden Farbstoffe in einem mit Alkohol oder Wasser versetzten Glycerin löste (im Jahr 1879), kam er darauf, auch das Hämatoxylin allein mit Glycerin zu vermischen und so zu verwenden. Besonderen Vortheil gewährt diese Methode nach meiner Ansicht nicht. Fried- LÄNDEK aber (47) ist anderer Ansicht, empfiehlt eine solche Häma- toxyliuflüssigkeit als sehr dauerhaft und giebt in seinem kleinen Leit- faden der histologischen Technik ganz genaue Zahlenverhältnisse für die Mischung an. Wenn nun, wie wir sehen, die Methode der Hämatoxylintinction so ziemlich auf derselben Stufe lauge Jahre hindurch stehen geblieben ist und keine einen wesentlichen P'ortschritt begründende Veränderung erfuhr, so ist ihr eine solche in diesem Jahr in sehr auffallender Weise zu Theil geworden. Ja unser Farbstoff ist für Methoden von solcher Bedeutung und so interessanten Resultaten verwendet worden, dass ich nicht zu viel zu sagen glaube, wenn ich behaupte, dass für ihn eine neue wesentlich glanzvollere Epoche begonnen hat. Die Gefahr, welche ihm in den letzten Jahren drohte, mehr und mehr von ähnlich wirken- den aber dauerhaftere Tiuctionen liefernden Anilinfarben und von dem Alaun-Carmin verdrängt zu werden, ist nun sicher abgewendet. Die erste dieser Methoden ist einfach, bequem zu gebrauchen und für alle Gewebe verwendbar. Sie ist von Heidenhain, dem berühmten Physio- logen und Histologen, schon im vorigen Jahr gefunden, aber noch nicht beschrieben. Er färbt Schnitte oder ganze, später mit dem Mikrotom zu schneidende Stücke (aber zweckmässiger Weise nur von Material, das in Alkohol erhärtet wurde; solches, das in Chromsäure oder in chromsauren Salzen gehärtet worden ist, wird nie so brauchbar für diese Methode, kann aber doch verwendet werden, wenn alle freie Chromsäure oder chromsauren Salze ausgewaschen sind) in einer wässe- rigen einproceutigeu Lösung von Hämatoxylin ohne jeden Zusatz'. ') Die Hämatoxylinkrystalle lösen sich erst nach längerer Zeit in Wasser. Man nehme nur destillirtes Wasser ; anderes ist unbrauchbar. Die Stärke der Lösimgen kann je nach dem Material etwas modificirt werden, bei Schnitten, besonders bei zarteren Objecten, nehme ich beide Lösimgen nur halbprocentig. 36* 54G Grierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. Je nach der Grösse oder Dicke des Präparates bleibt es 24 Stunden oder länger in dieser und wird dann in Wasser gut abgewaschen und für eine gleich lange Zeit in eine ebenfalls einprocentige Lösung von doppelt chromsaurem Kali gelegt. Darauf können die Präparate in der gewöhnlichen Weise weiter behandelt, d, h. eingeschlossen, oder, wenn es sich um Stücke handelt, eingebettet und geschnitten werden. Wie man ja schon lange weiss, wird der Farbstoff des Campecheholzes durch das doppelt chromsaure Kali in Schwarz umgewandelt. Die Tiuten- fabrication hatte sich dieser Thatsache bemächtigt, die histologische Technik sie aber noch nicht benutzt und jetzt zum ersten Mal in Ver- wendung gezogen. Die entstehende grauschwarze bis schwarze Tiuction lässt die Präparate zunächst sehr unansehnlich erscheinen, bewirkt aber eine so discrete, zarte und dabei deutliche Differenzirung der Gewebe, dass sie unzweifelhaft an Werth keiner anderen Methode nachsteht, die meisten aber, und besonders die bisher geübte Ilämatoxylintinction nach Böhmer weit übertrifft. Sie scheint auch durchaus haltbar zu sein und eignet sich für alle Organe und Gewebsarten in gleich guter Weise \ Ganz besonders ist sie für den Zweck des Durchfärbens grösserer, in Alkohol gehärteter Stücke zu empfehlen und steht in dieser Beziehung unmittelbar neben der Ammoniak- und Alaun-Carminfärbung. Die neue WEiGERT'sche Methode ist nur für das Ceutralnerven- system und auch in diesem nur für die Tinction des Nervenmarks be- stimmt. Sie soll in dieser Beziehung die von demselben Autor erdachte Säurefuchsin-Behandlung ersetzen. Nach Weigeet's eigenen Präpa- raten und nach den von mir angestellten Controllversuchen liefert aller- dings diese neue Methode noch bessere Resultate als jene, welche doch schon so allgemeines Aufsehen erregte. Sie hat vor ihr auch den Vor- zug, dass sie ein klein wenig einfacher ist, obgleich sie immerhin noch recht complicirt genannt werden darf, und dieser Umstand ihrer Ver- wendung noch hinderlich sein wird. Da sie nur die markhaltigen Nervenfasern, freilich diese bis zu den allerfeinsten, tingirt und die Nervenzellen, Neuroglia und Gefässe gänzlich ungefärbt lässt, so kann *) Für entwicklungsgeschichtliclie Präparate habe ich die Methode bisher noch nicht geprüft, empfehle sie aber ganz besonders für das CentralnerVen- system, alle Drüsen ohne Ausnahme, für die Schleimhäute und die Haut, für alle epithelialen Gebilde. Vom Magen und dem Darmkanal erhält man Präpa- rate, die ohne jede Frage alle nach anderen bisher -bekannten Methoden ge- fertigten weit übertrifft. Die Färbung ist nur grau bis grau-schwarz; die Ver- schiedenheit der Farbennüancen ist durchaus keine sehr grosse, die Differen- zirung aber trotzdem eine ungemein scharfe. I, 4. Gicrkc: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 547 uatürlich ihre Auwendung uur eiue beschränkte sein. Dennoch ist sie ebenso wohl für das Studium der normalen Verhältnisse des Nerven- systems als auch ganz besonders für die Feststellung und Aufklärung gewisser pathologischer Veränderungen desselben von hoher Bedeutung. Weigeet veröffentlichte diese Färbemethode in diesem Jahre in dem Fortschr. d. Med. Bd. II p. 190. Sie ist auch schon in der ganz kürz- lich erschienenen zweiten Auflage der Mikroskopischen Technik von Fbiedländeb wiedergegeben. Der Vollständigkeit halber lasse ich Weigekt's Vorschrift hier folgen '. Die Partie der zu bearbeitenden Centralorgane werden in Mliller- seher oder EBLicKi'scher (117) Flüssigkeit gehärtet, dann ohne vorher- gehende Auswässerung in Alkohol gebracht; auch die Schnitte dürfen vor der Färbung nur in Alkohol liegen. Diese kommen dann zur Fär- bung in folgende Tinctionsflüssigkeit : 1 Th. Hämatoxylin, 10 Th. Alkohol, 90 Th. Wasser werden zusammen gekocht und einige Tage stehen gelassen. Am besten nimmt man die Tinction im Brütofen bei ungefähr 40" C. vor; 1 — 2 Stunden genügen dann. Herausgenommen werden die Schnitte in Wasser abgespült und in eine Mischung von Ferridcyankalium 2-5 g, Borax 2 g, Aq. dest. 100 cc gebracht. In ihr entfärben sich die dunkelschwarzen , stark überfärbten Schnitte während einer halben bis ganzen Stunde derartig, dass die graue Sub- stanz gelblich wird, die weisse aber schwarz tingirt bleibt. Hierauf müssen dann die Präparate sehr sorgsam in Wasser ausgewaschen wer- den, um das freie Ferridcyankalium gänzlich zu entfernen, da dies durch Alkohol gefällt werden würde. Der Einschluss geschieht auf ge- wöhnliche Weise. Zur Aufhellung diene Xylol. Trotzdem dass diese Methode sehr schöne Bilder liefert, hat der unermüdliche Weigert sie noch weiter auszubilden und zu verbessern gesucht. Und in der That ist es ihm gelungen, sie noch in irgend einer Weise, die er vorläufig seinen Mitforschern noch vorenthält, zu verändern und vollkommener zu machen. Die Präparate, welche er mir gütiger Weise überliess, und in denen die markhaltigen Nervenfasern in geradezu wunderbarer Schärfe tingirt sind, liefern die besten Beweise der Vorzüglichkeit der neuen Methode; sie sind von geradezu überraschender Schönheit. In Bezug auf die Imprägnationsmethoden lässt sich aus den letzten anderthalb Jahrzehnten nicht viel Interessantes mittheilen. Sie wurden in den letzten 12 bis 15 Jahren um keine einzige wirklich 1) Da die oben erwähnte Zeitschrift mit Weigeet's Original -Artikel mir im Augenblicke nicht zugänglich ist, entnehme ich obige Vorschrift dem kleinen FRiEDLÄNDKR'schen Leitfaden. 548 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. epochemachende und originelle Entdeckung bereichert. Kein neuer werthvoller Stoff wird dem bisherigen Schatz an Imprägnatlonsmitteln hinzugefügt, und die in den sechziger Jahren bereits gefundenen und viel geübten Methoden erfahren im folgenden Decennium nur unwesent- liche Veränderungen und Verbesserungen, obgleich ihre Verwendung von Jahr zu Jahr allgemeiner und beliebter wird. Die Literatur dieser Methoden ist freilich auch während der angegebenen Zeit umfangreich genug; es fehlt keineswegs an neuen Vorschriften und Angaben aller Art, und manche von ihnen sind ja auch recht werthvoU, aber wirklich bedeutende Fortschritte unserer Technik werden durch sie keineswegs erzielt, abgesehen vielleicht von der schon erwähnten Combination der Imprägnationsmethoden mit den Tinctionen, die aber der Hauptsache nach auch schon in den sechziger Jahren vorgeschlagen war. Um auf das Einzelne einzugehen, so ist zunächst hervorzuheben, dass die Gegner der Silbermethode noch immer nicht ganz bekehrt waren, sondern dass auch in den siebziger Jahren noch einzelne Stimmen gegen ihre Verwendung und gegen die Deutung der auftretenden Zeich- nungen ertönten, doch konnten sie unmöglich der jetzt fest begründeten und allgemein anerkannten Methode noch Abbruch thun. Von den Vor- schlägen für ihre Verbesserung ist nur Weniges hervorzuheben. Reich (159) rieth 1873 zur Versilberung des Gefässendothels die Silberlösung direct in die Gefässe einzuspritzen. Die in der Tabelle genauer ange- gebene Methode ist durchaus als praktisch und erfolgreich zu empfehlen. Sie liefert gute Präparate. Eigenartig, aber nach den zahlreich von mir angestellten Experimenten sehr unsicher und in keiner Beziehung die Carmintinction ersetzend, ist die von Italien aus in demselben Jahre vor- geschlagene Versilberung des centralen Nervensystems. Golgi (160) und Torquato Beisso (161) empfehlen beide diese Methode, der erstere für Material, das in doppeltchromsaurem Kali erhärtet war, der andere für das in absolutem Alkohol gehärtete. Später, im Jahre 1880 hat dann Golgi für die Versilberung von peripherischen Nervenfasern eine andere Methode angegeben, welche ich mehr empfehlen kann, da sie recht gute Dienste leistet. Er legt die möglichst frisch dem eben ge- tödteten Thier entnommenen Nerven zuerst in eine Mischung von doppelt chromsaurem Kali und Osmiumsäure und dann in Höllenstein- lösung (170). Andere, von dem HoGGAN'schen Ehepaar (168), von Ranviee (172) und v. Tha>"hoffer (173) gemachte Angaben, die in der Tabelle nachzusehen sind, beziehen sich auf Vorschriften, in welcher Weise man die Versilberung am besten technisch auszuführen habe. Während man gewöhnlich mit einer schwachen Lösung des salpeter- I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 549 sauren Silberoxyds gearbeitet hat, rieth Sattlee (171) die Verwendung des Lapisstiftes als sicher und bequem. Für die Versilberung der Cornea hatte ja auch His ursprünglich den Stift gebraucht. -Interessanter als diese Angaben, aber leider ohne Erfolge zu erzielen, sind die Vor- schläge, das bisher stets in Anwendung gezogene salpetersaure Silber- oxyd durch andere Silbersalze zu ersetzen. Schon 1874 hatte der Franzose Alf^ieow Seege (163) zu diesem Zweck Verbindungen des Silbers mit organischen Säuren als pikrinsaures, milch-, essig- und citronensaures Silber empfohlen, besonders rühmt er das Silberlactat, das milchsaure Silber. Die Verwenduugsweise ist dieselbe wie die des Höllensteins. Hoyee (167) schlug 1876 das salpetersaure Silber- ammoniak vor, das er durch Hinzufügen von Liq. amm. caust. zu einer Höllensteinlösuug erhielt. Er zieht es deshalb der letzteren vor, weil es nur die Grenzen der Endothelzellen färbe, die umliegenden Gewebs- elemente aber ungefärbt lasse. Eine weitere Verbreitung haben diese Methoden nicht gefunden. Ich bin auch nicht im Stande sie als be- sonders vortheilliaft der gewöhnlichen Versilberung gegenüber zu empfehlen. Man kann sie ja mit ganz gutem Erfolg verwenden, aber irgend welchen Vorzug vor der letzteren haben sie keineswegs. Hier sind endlich noch die von v. Thanhoffee (173) angeführten Reductions- methoden anzureihen. In seinem Laboratorium bewirkte einer seiner Schüler eine sehr schnelle und selbst im Dunkeln stattfindende Reduc- tion des in die Gewebe gedrungenen Silbersalzes durch eine sehr ver- dünnte Lösung von übermangansaurem Kali; ein anderer Schüler pro- birte sich eine ebenfalls sehr schnell wirkende Reduction des Silbers durch Behandlung mit Zinnchloridlösung von ^/i bis '/a Procent aus. Der Gedanke, die Reduction des Silbers nicht allein dem Licht zu über- lassen, sondern wie beim Gold durch Reagentien zu erzielen, ist durch- aus zu loben, doch bin ich der Ansicht, dass die erwähnten Mittel noch nicht die richtigen sind. Sie erzielen zwar oft gute Resultate, aber eben so oft hatte ich bei meinen Versuchen Misserfolge, da das Silber sich zu grob niederschlug. Es mögen aber die Experimente in dem Pesther Laboratorium die Veranlassung sein, in dieser Beziehung weitere Ver- suche anzustellen, da ein in jeder Hinsicht sicher imd schnell wirken- des Reductionsmittel des Silbers, das im übrigen auf die Gewebe gar keinen Einfluss hat, eine schöne Bereicherung des Chemikalienschatzes der histologischen Technik wäre. Für die Goldmethode waren solche Reductionsmittel schon während der sechziger Jahre von Bastian und Nathusius in der Salzsäure und dem schwefelsauren Eisenoxydul empfohlen worden. In dem folgenden 550 üierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. I, 4 Decennium und bis heute erkannten die mit diesem so überaus wichtigen Imprägnatiousmittel arbeitenden Forscher als ihre vornehmste Aufgabe, noch andere besser wirkende Reductionsmittel aufzufinden. Die ganze nicht geringe Literatur der Goldmethode von 1870 an bezieht sich fast einzig und allein auf diesen Punkt, wenn wir von den schon besprochenen Combinationen mit anderen Methoden absehen. Auch für die nächste Zukunft werden Fortschritte der Vergoldungstechnik hauptsächlich nach dieser Richtung hin zu erstreben sein. Verschiedene Forscher, H^inocqüe, Klein und dessen Schüler Cheetschonovitsch empfehlen fast gleich- zeitig in den Jahren 1870 und 71 (180, 181 u. 182) das Acidum tar- taricum als solches Reductionsmittel, und zwar verwenden sie es in concentrirter und warmer (Henocque sogar in siedender, die beiden anderen nur in 50" C. warmer) Lösung. Lavdowsky (184) rühmt zur Beförderung der Reduction des Goldes Schwefelammoniak, von dem er einen Tropfen für kurze Zeit auf den vergoldeten Schnitt bringt. Der Vortheil dieses Mittels liegt offenbar weniger in seiner Reductions- kraft als in seiner Fähigkeit, die metallischen Niederschläge, die bei Anwendung der Goldmethode ja so oft störend wirken, aufzulösen. LöwiT (185) und nach ihm Fischer (186) haben 1875 resp. 1876 für die Darstellung der Nervenenden in den Muskeln die Ameisensäure empfohlen. Die stark zerkleinerten Muskelmassen kommen vor imd nach der Behandlung mit der Goldchloridlösvmg in diese Säure. Ranvier (189) erkennt die Vortheile dieser Behandlung gleichfalls an, rühmt aber neben der Ameisensäure zu gleichem Zweck ungemein die Citronen- säure, in der Form des frisch aus der Frucht gepressten Saftes. Diese beiden Methoden, die Löwix'sche und RANviEE'sche, haben eine ausser- ordentliche Beliebtheit erlangt und übertreffen in Bezug auf Sicherheit und Schönheit des Erfolges ohne Frage alle übrigen bekannten. Für seine besonderen Zwecke, d. h. für die Untersuchung der Leitungs- bahnen des centralen Nervensystems wählte Flechsig (188) 1876 das Natrium causticum zur Reduction des Goldchlorids. Maechi endlich (192) hat ganz neuerdings (1882) für die Darstellung der Nervenenden in den Muskeln warme Oxalsäurelösung und arsenige Säure verwandt imd dringend empfohlen. Die letztere wird nach Marchi's Angabe von GoLGi, der so viele eigene Imprägnationsmethoden ersonnen hat, ange- wandt und zwar nach einer dreitägigen Vorbehandlung der Muskeln in 2procentiger Lösung von doppelt chromsaurem Kali. Die arsenige Säure muss vor und nach der Goldbehandlung auf die Muskelstücko ein- wirken. Von anderen, die Goldmethode betreffenden Angaben sei hier nur noch der Vorschhig von dem Engländer Thin (187) erwähnt, die I, -4. Gicrkc: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 551 Goldcliloridlösimg iu die Arterien der zu uütersuclieudeu Orgaue einzu- spritzen. Es ist dies da, wo es sich machen lässt, und das wird wohl nicht oft der Fall sein, ganz nützlich und empfehlenswerth. In manchen Fällen, so z. B. bei den Untersuchungen der Nervenenden in den Zungenmuskeln, kann man sich begnügen, die Goldchloridlösung mit der PEAVATz'schen Spritze zwischen die Muskelbündel zu spritzen ; frei- lich muss dann die zerkleinerte Zunge hinterher noch in der Goldlösung wie gewöhnlich liegen. Noch geringer ist die Ausbeute, wenn wir nach Verbesserungen der Osmiumsäurebehandlung in den siebziger Jahren suchen. Dieselbe ver- breitete sich ja, wie ich oben schon erwähnte, in dieser Zeit ganz ausser- ordentlich und fand besonders immer mehr und mehr Verwendung als Conservatious- und Erhärtungsmittel zarter Objecto. Sehen wir aber von diesem letzteren Gebrauch, den wir hier nicht besprechen können, ab, da wir an dieser Stelle die Osmiumsäure doch nur als Färbemittel betrachten können, so haben wir nur von einer einzigen wichtigen Ver- ändfiung der ursprünglich von Max Schultze angewandten Methode in diesem Zeitraum zu berichten. Es ist der Vorschlag Bkoesicke's im Jahre 1878, die Osmiumpräparate noch mit Oxalsäurelösung zu be- handeln. Es tritt nach dieser Behandlung, wie ich nach meinen Con- trollversuchen bestätigen kann, allerdings eine sehr lebhafte Färbung der Präparate auf, die eine gute Differenzirung der Gewebselemente verursacht. Diese sind zum Theil farblos, zum Theil sind sie in ver- schiedenen Nüancirungen des Roth gefärbt. So hat, wie wir gesehen haben, ein jedes der drei ersten De- cennien der mikroskopischen Färbetechnik seine Eigenthümlichkeiten, sein charakteristisches Aussehen. Das erste war natürlich durch die Begründung der ganzen Technik ausgezeichnet. Einige wenige in ihren Studien vollkommen von einander unabhängige Forscher ver- suchten, durch zufällige Beobachtungen angeregt, Carmin und andere organische Farbstoffe zum Färben, und besonders zu einem die Gewebe dilFerenzirenden Färben zu benutzen. Dem zweiten Decennium , den sechziger Jahren, wurde dann dadurch ein charakteristisches Gepräge gegeben, dass fast alle histologischen Forscher, durch die ausserordent- lichen Erfolge der Carmintinction angetrieben, die nur irgend erreich- baren Farbstoffe für den gleichen Zweck durchprobirten und auch einige als hierfür ganz besonders geeignet empfahlen. Ja nicht allein die bunten Farbstoffe mussten unserer Technik dienen, sondern auch jene unscheinbaren aber meistens kostbaren Stoffe, welche bei einer be- sonderen Behandlung durch Ausscheiden des in ihnen gebundenen Metalls 552 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. 1, 4. sich und damit auch die GcAvebe, in die sie eingedrungen sind, schwärzen oder färben. So liess die Fülle neuerfundener Methoden die Färbe- technik bald zur hohen Blüte gelangen und mit kurzen Worten kann man als das Charakteristische derselben in dem zweiten Decennium ihres Bestehens bezeichnen : Die meisten histologischen Forscher suchen sie durch Experimente zu erweitern und zu bereichern und fast alle be- kannten und für die Tinction verwendbaren Farbstoffe ebenso wie die für die Imprägnation sich eignenden Metallverbindungen werden ihr dienstbar gemacht. So wären für das folgende Decennium , für die siebziger Jahre, weitere Fortschritte wohl schwierig gewesen und die Entwicklung der Methode hätte gewiss einen Stillstand bekommen, wenn nicht der ausserordentliche Aufschwung, welchen die Fabrication der neu entdeckten Anilinfarben in den sechziger Jahren gewonnen hatte, einen reichen Schatz neuer Farbstoffe geschaffen hätte, welche nun für die Zwecke der mikroskopischen Technik nutzbar gemacht wurden. Die so in unerwarteter Weise ausserordentlich angewachsene Fülle von brauchbaren histologischen Tinctionsmitteln regte dann natnrgemäss dazu an, diese untereinander und mit den Metallsalzen zu mischen und sie so in combinirter Methode zu verwenden. Das Charakteristische also der Färbetechnik in diesem Jahrzehnt liegt in dem ungemein starken Heranziehen der Anilinfarben und in der ausserordentlichen Entwick- lung der ja schon früher in geringer Weise geübten combinirten Me- thoden. Was nun aber, so wird sich wohl manch' Einer beim Lesen dieser Zeilen fragen, ist das Eigenthümliche unserer Technik in dem Jahrzehnt, in welchem wir jetzt stehen? Haben die Entdeckungen, welche in den wenigen schon abgelaufenen Jahren desselben gemacht wurden, haben die während ihrer angestellten Experimente oder die publicirten Arbeiten dieser Forschungsmethode ein neues charakteristi- sches Gepräge bereits gegeben, oder ist es wenigstens zu erwarten, dass die nächsten Jahre ihr ein solches aufdrücken werden ? Es ist nicht sehr wahrscheinlich, dass in nächster Zeit noch viele Farbstoffe gefunden werden, welche ihr nutzbar gemacht werden können. Und wenn auch wohl ohne Frage die Fabrication der Anilinfarben noch manche wichtige Fortschritte machen und schöne neue Farben in den Handel bringen kann, so ist doch nicht glaublich , dass diese einen wesentlich umgestaltenden Einfluss auf die bisherigen Methoden ge- winnen werden. Dennoch aber brauchen wir nach den in den letzten Jahren gemachten Erfahrungen durchaus nicht zu fürchten, dass für die Technik der mikroskopischen Färberei eine weitere Entwicklung nicht mehr zu erwarten, und sie zu einem Höhepunkt gelangt sei, von dem I, 4. Gierke: Färberei zu mikroskopisclien Zwecken. 553 aus wesentliche neue Fortschritte nicht mehr möglich sind. Im Gegen- theil scheint für sie eine neue, gewiss äusserst fruchtbringende Epoche anzubrechen, welche ich ganz kurz, vielleicht freilich etwas sanguinisch dadurch charakterisiren möchte, dass ich sage: Die Tinctionstechnik bildet sich zu einer Wissenschaft der mikroskopischen Färberei aus. Denn wenn wir recht offen sein wollen , so müssen wir doch eingestehen, dass die Methoden, die mikroskopischen Präparate in irgend einer Weise durch Färben oder Imprägniren mit Metallverbindungen zu differenziren, obgleich sie zum grossen Theil von unseren vornehmsten Forschern entwickelt und von allen Zoologen und Histologen so viel- fach geübt worden sind, durchaus handwerksmässig behandelt wurden. Es war eben eine Technik, welche die wissenschaftlichen Forschungen wohl unterstützen sollte aber doch nicht für werth erachtet wurde, selbst auf die Höhe einer Wissenschaft gehoben zu werden. Man probirte eigentlich immer aufs Gerathewohl hin. Ergab ein Farbstoff oder ein Metallsalz günstige Resultate, wirkten sie differenzirend auf die Gewebe und stellten sich andere Hindernisse ihrer Verwendung nicht entgegen, so wurden sie dringend empfohlen. Ich will natürlich gern zugeben, dass auch hier und da nach wissenschaftliclien Grundsätzen vorge- gangen wurde, und dass diese oder jene Färbemethode Product der- artiger üeberlegungen gewesen ist. Aber dies würde eben nur eine Ausnahme sein, welche die Eegel nur bestätigte. Nun aber scheint wirklich die Zeit gekommen zu sein, in welcher wenigstens einige unserer erfahrensten und glücklichsten Bearbeiter dieses Gebietes — und mit grosser Genugthuuug sehen wir auch hier wieder die deutschen Forscher vorangehen — in rationeller Weise neue Methoden erdenken, indem sie {kie chemisch-physikalischen Eigenschaften der Stoffe in Betracht ziehen und das ihnen bekannte Verhalten bei Zusatz anderer Agentien mög- lichst benutzen. Ohne vieles Probiren geht es dabei natürlich auch nicht ab, aber doch bildet ein bestimmter wissenschaftlicher Gedanke das leitende Princip bei diesen Versuchen. Die Entwicklungsperioden der Wissenschaft binden sich nicht an bestimmte Abschnitte unserer Zeitberechnuug, so dass meine Einthei- lung der verschiedenen Phasen der mikroskopischen Färberei nach Decennien ein wenig willkürlich ist, und diese in Wirklichkeit nicht scharf begrenzt werden dürfen. So auch reichen die ersten Arbeiten, welche die neue soeben charakterisirte Epoche begründen, noch in die letzten Jahre des vergangenen Decenniums hinein. Drei Namen möchte ich an dieser Stelle ganz besonders rühmend hervorheben, es sind Flemming, Ehelich und Weigert. Den treflflichen in unser Gebiet 554 Gierke: Färberei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. fallenden neueren Arbeiten dieser Forscher sielit man es sofort an, dass dieselben ihre Erfolge nicht dem blinden Zufall durch zielloses Herum- probiren, sondern einem rationellen, bestimmte Pläne verfolgenden Vor- gehen verdanken. Man wird verstehen, was ich meine und wird mir Recht geben, wenn man z. B. die unter No. 102 in der Tabelle aufge- führten und auszugsweise wiedergegebenen Aufsätze Ehklich's über die „specifischen Granulationen des Blutes" und deren Tinctioueu liest. Hier ist zum ersten Mal der Versuch gemacht worden, die bis dahin in ganz empirischer Weise verwendeten Anilinfarben nach ihren chemi- schen Eigenschaften in Gruppen zu sondern und andererseits Gewebs- elemente, hier die Granulationen der weissen Blutkörperchen, nur nach ihrem Verhalten zu diesen chemisch verschiedenartigen Farbstoffen zu unterscheiden. Flemming habe ich genannt, weil ich in seinem mehr- jährigen Bestreben, die Methoden zur Färbung der Zellkerne und der Kerufiguren fort und fort nach einem bestimmten energisch verfolgten Plan zu verbessern, einen Versuch ei'kenne, den oben angedeuteten rationellen Weg einzuschlagen *. Weigert, den ich als dritten diesen beiden angereiht habe, hatte schon 1878 in seiner Arbeit über Bismarek- braun (101) insofern einen neuen Weg betreten, als er bei seinem Suchen nach einem neuen zweckmässigen Tinctionsmittel nicht einfach umherprobirte, sondern zunächst die Eigenschaften festzustellen suchte, welche einen Farbstoff für die Histologie werthvoll machen, und dann nachforschte, welcher unter den zugänglichen Tinctionsstoffen diesem Ideal am nächsten kommt. Freilich musste ich oben dem Ergebniss dieser Untersuchung ein klein Wenig entgegentreten. Ganz unzweifel- haft aber muss man die mühsamen doch von schönstem Erfolg gekrön- ten Bestrebungen Weigert's die markhaltigen Nervenfasern in den Gen- tralorganen isolirt zu färben als Versuche, neue rationelle und auf wissen- schaftlichen Principien basirende Bahnen zu beschreiten, bezeichnen '^. Dies sind sehr erfreuliche Anfänge einer neuen Epoche der Färbe- technik, aber es sind nur Anfänge. Es ist durchaus nothwendig, dass den genannten Pfadfindern in dem Reich der Farben und der histologi- schen Färbemethoden auch andere Forscher nachfolgen, und ebenfalls neue rationelle Wege eröffnen, anstatt auf den alten, zwar bequemen ») Die zahlreichen Arbeiten Flemming's, in denen kleinere technische Notizen zerstreut hier und da vorkommen, sind in seinem Buch: Zellsubstanz, Kern und Zelltheilung. Leipzig 1882 zusainmengestellt. Die durchaus wich- tigsten Aufsätze in Bezug auf die Färbung der Kernfiguren sind in der Tabelle No. 111 angegeben. 2) Siehe Tabelle No. 116 u. p. 546. I, 4. Gierke: P'ärberei zu mikroskopischen Zwecken. 555 aber bereits allzu ausgetretenen Strassen weiter zu wandeln. Meiner Meinung nacli ist ein Bedürfniss nach neuen Tinctionsmitteln besonders nach Anilinfarben, welche zwar in den mikroskopischen Präparaten andere Farbeunüancen als die bisher angewandten bewirken, sich prin- cipiell aber von ihnen nicht unterscheiden, durchaus nicht mehr vor- handen. Man suche daher nicht nach solchen, man möge überhaupt etwas weniger den Färbemeister spielen, sondern studire in möglichst gründ- licher Weise die chemisch-physikalischen Eigenschaften der zu ver- wendenden Stoife und nicht minder der zu färbenden Gewebe und suche die eintretenden Wirkungen der erstereu auf die letzteren in exacter Weise zu erklären. Dann werden wir sicher weiter kommen und die Färbetechnik wird sich in jetzt noch ungeahnter Weise entwickeln. Ich glaube, gar viele der histologischen Forscher werden sich meiner dringenden Bitte an die „Entdecker", nicht mehr so viele neue Farb- stoffe aufzustöbern und ihrer Mitwelt „warm zu empfehlen" anschliessen. Sie mögen die bisher hierfür gebrauchte Zeit und Mühe von nun au auf das Ersinnen von Methoden, welche den eben erwähnten Grundsätzen entsprechen, verwenden. Das bringt mehr Nutzen. Leichter freilich ist das Erstere, da es nur Glück, aber weniger Wissen und geringere Arbeit erfordert als das letztere. Dass wir bis jetzt, obgleich eine neue Epoche begonnen hat, noch nicht den alten Standpunkt überwunden haben, beweisen uns die stets aufs neue wieder erscheinenden Publicationen, welche neue, an und für sich nicht schlechte aber auch in keiner Weise die älteren übertreffende Farbstoffe dringend anpreisen. Um nur ein Beispiel aus der neuesten Literatur anzuführen, wähle ich die letzte Empfehlung der Art, welche im Juni dieses Jahres an die Oeffentlichkeit trat ^ Es handelt sich um einen Stoff, dessen intensiv färbende Kraft wir alle schon häufig und vielfach ohne allzu grosse Freude bewundert haben. Wer hat nicht schon beim frohen Familienmahl die Mundwinkel und die Hände der Kinder im tiefsten Blau erblühen sehen, wenn diese sich am Heidelbeer- ») Myrtillus, ein neues Tinctionsmittel für tMerische und pflanzliche Ge- webe. Von Dr. M. Lavuowsky in St. Petersburg. (Arch. nükrosk. Anat. Bd. XXIII Heft 4, p. 506). — Die Vorschrift für Bereitung des Tinctions- mittels und für die Färbung mit ihm ist folgende: Der ausgepresste Saft frischer Beeren wird mit 2 Voll, destill. Wassers und einigen cc 90procentigen Alko- hols vermischt. Man lässt kurze Zeit kochen und filtrirt warm. Kalt lässt sich der Saft sehr schwer filtriren. Beim Gebrauch kann man ihn noch mit Wasser verdünnen. Zwei Farbennüancen sind bei der Tinction zu erreichen, einmal eine der Carminfärbung ähnliche rothe, dann eine Lilafärbung, die dem 556 Gierke: Färbez'ei zu mikroskopischen Zwecken. I, 4. compott erfreuten ; und wer erinnert sich nicht der verzweiflungsvolleu Blicke, welche bei solcher Gelegenheit die Hausfrau auf das mit dem gleichen Stoff gar zu intensiv tingirte feine Dammasttischtuch warf. Es haben ja auch die Weinhändler und Weinfabricauten diese stark färbende Eigenschaft des noch dazu gut schmeckenden und der Gesund- heit zuträglichen Heidelbeersaftes schon seit langer Zeit fleissigst be- nutzt. Und jetzt werden so grosse Quantitäten desselben in Rothwein verwandelt, dass die Beeren zu einem wichtigen Exportartikel mancher Hafenstädte Norddeutschlands geworden sind, und viele Tausende von Frauen und Kindern finden während der Sommermonate ein einträg- liches Gewerbe in dem Einsammeln derselben. Trotzdem kam bisher keiner der histologischen Forscher auf den Gedanken, diese so häufig beobachtete Tinctionswirkung der blauen Beeren für seine Wissenschaft zu benutzen, wenigstens wurde nie etwas darauf Bezügliches veröffent- licht. Dies scheint Lavdowsky als eine grosse Lücke in der Tinc- tionstechnik angesehen zu haben, denn er empfiehlt den Saft der Blau-, auch Schwarz- oder Heidelbeeren auf das Angelegentlichste für diesen Zweck; freilich unter dem stolzeren und mehr poetischen Namen „Myr- tillus" (von der botanischen Bezeichnung Vaccinium myrtillus). Er schliesst seine Anpreisung unter anderen mit diesen Worten: „Für rasche und sichere Färbungen thierischer und pflanzlicher Gewebe dürfte es kaum ein empfehlenswertheres Medium geben". Lesen wir aber seine genauere Beschreibung und prüfen wir seine Angaben durch eigene Versuche, so kommen wir zu dem Schluss, dass der genannte Farbstoff ebenso wie viele andere wirkt, ohne jedoch irgend einen Vorzug vor diesen zu besitzen. Denn der einzige, den Lavdowsky anzuführen weiss, die grosse Billigkeit, kommt wirklich bei dem ausserordentlich Hämatoxylinton verwandt ist. Die erstere ergiebt sich bei der Färbung frischer, neutral reagü'ender Objecte mit der frischen sauren Myrtillusfiüssigkeit ; auch in Chromsäure oder ihren Salzen erhärtete Objecte lassen sich so färben. Doch sind die rothen Präparate nicht haltbar. Bessere Dauerpräparate ergiebt nach Lavdowskt die Lilafärbung, welche man durch Behandlung der gefärbten Prä- parate mit essigsaurem Blei erhält. Auf weisser Unterlage stellt man drei Uhrschalen , eine mit frischer, saurer, gut filtrirter Myrtillusflüssigkeit, die zweite mit ebenfalls filtrirter, einprocentiger Bleizuckerlösung und die dritte mit dest. Wasser. Die Präparate kommen 1 — 2 IVIinuten in die färbende Flüssigkeit, werden gewaschen und dann in die Bleizuckerlösung gebracht. Nachdem sie in dieser lila geworden, was sehr schn.ell geschieht, werden sie wiederum gewaschen und in Glycerin, dem etwas Bleizuckerlösung zugesetzt ist, oder nach gewöhnlicher Methode in Canadabalsam eingeschlossen. Eine Verbindung der Myrtillus- mit Eosin-Färbung sei zu empfehlen. I, 4 Gierke: Färberei zu mikroskopischeu Zwecken. 557 geringen Preis der meisten Tiuctionsmittel und dem sehr kleinen Ver- brauch derselben selbst für Unterrichtszwecke in Cursen nicht in Be- tracht. Im übrigen aber ist zu sagen, dass die Bereitung der färben- den Flüssigkeit sehr viel umständlicher und schwieriger ist, als die der meisten anderen ähnlich wirkenden Tinctionsmitteln, besonders als der Anilinfarben. Aufbewahrt verdirbt es leicht. Luftdicht verschlossen hält sich ein mit Alkohol versetzter Saft wohl ein Jahr. Ist die Flasche aber einmal im Gebrauch, so zersetzt sich der Inhalt oder schimmelt. Dann sind die Präparate, wie Lavdowsky selbst zugiebt, nicht alle halt- bar. Die rothe Tinctionen ergebende Methode nennt es selbst wenig dauernd, aber selbst die von ihm für Dauerpräparate empfohlene Lila- färbung erzielt meiner Ueberzeugung nach nur ganz kurzlebige Prä- parate. Die Behandlung mit Bleizucker, welche von Lavdowsky ange- geben wird, lässt die Farbe bald verblassen. Die Anwendung des Mittels ist noch dazu eine beschränkte. Gewebe, die in Alkohol ge- härtet waren, färben sich nicht. Nun frage ich: Was sollen wir mit diesem Farbstoff anfangen? Warum sollen wir ihn, der unsicher ist, denen, die wir als sicher und vorzüglich ausprobirt haben, vorziehen ? Warum wird von uns verlangt, dass wir den schon allzu grossen Schatz von Tinctionsmitteln, unter denen wir uns kaum noch zurechtfinden können, wieder um eins vermehren, dessen Bereitung uns ziemlich grosse Mühe macht und auf dessen Conservirung wir dauernde Sorgfalt ver- wenden müssen, während die in ihrer Wirkung es weit übertreffenden Stoffe, an die wir seit langer Zeit gewöhnt sind, in jeder Beziehung bequemer zu bereiten und zu handhaben sind? Wenn sich wenigstens noch sagen Hesse, es sei leichter zu erhalten als andere Tiuctionsmittel, aber ganz im Gegentheil. Ja, wenn wir stets im grünen, kühlen Wald mikroskopiren könnten und nur nach rechts und links zu greifen hätten, um das Mittel, unsere Präparate zu färben, zu erhaschen. So aber muss sich der Mikroskopiker während einiger Augustwochen seinen Vor- rath an Myrtillus einkochen, wie die Hausfrau es zli anderem und wirk- lich besserem Zweck thut. Ich für meine Person werde nach den Er- fahrungen meiner Controllversuche Myrtillus zwar noch weiter benutzen, aber nur in der Form des Heidelbeercompottes ; und ich kann auch anderen Forschern das Gleiche rathen. [Es war wegen Raummangel leider unmöglich, den Schluss der Arbeit in diesem Heft zum Abdruck gelangen zu lassen ; der zweite Theil, der die natürlichen, besonders die chemischen Eigenschaften der Farbstoffe und die theoretische Betrachtung der Vorgänge beim Färben enthält, wird in dem zweiten Jahrgang dieser Zeitschrift erscheinen]. 558 Kleinere Mittheilungen. I, 4. Kleinere Mittlieilung^en. Die Vergrösserung der dioptrisehen Apparate. Von Dr. Victor Chiusoli in Bologna '). Uebersetzt und mit einem Nachtrage vermehrt von G. Fischer in Tölz. Der letzte Artikel Gakiel's 2, der eine Fortsetzung ist zu dem Artikel Gu:ßBHAKD's „lieber die Kraft und die Vergrösserung der dioptri- schen Apparate" ^, ruft mir einige erläuternde Figuren ins Gedächtniss zu- rück, die den von Gaeiel publicirten ähnlich sind, und ebenso eine sehr einfache Erfahrung, welche die Schlüsse GufiBHAKü's bestätigt, und die im Interesse vorwüi'figer Frage bekannt zu geben vielleicht von Nutzen ist. Ich habe mich eines Mikroskops mit dem stärksten Ocular und dem möglichst schwächsten Objectiv bedient und eines beliebigen Präparates mit grobem Detail und sehr scharfen Umrissen wie z. B. Haare, Fäden etc. sind, und ich habe in üblicher Weise einen Theil des Prä- parats eingestellt. Nach den Schlüssen GuifeBHARD's befindet sich alsdann das vom Oculare gelieferte, virtuelle Bild im Fernpunkte des Auges, Deshalb habe ich gedacht, dass, wenn ich das optische System dem Präparate näherte, ich zu gleicher Zeit das virtuelle Bild dem Auge nähern würde, und dass dieses Bild, nach einer kleinen Accommodations-Anstrengung gleichfalls werde gesehen werden können, woferne es nur nicht über den Nahepunkt hinausgerückt wäre. Dies habe ich jn der That constatirt, indem ich den Tubus des Mikroskopes mittels der Mikrometerschraube rasch um etliche Millimeter- bruchtheile dem Präparate näherte. Ganz anfangs sah ich den be- trachteten Theil confus; aber nach kurzer Anstrengung, um deutlich zu sehen, und nach einer etwas längeren oder kürzeren Zeit, doch nicht über den Bruchtheil einer Minute hinaus, gelang es mir , das Detail ebenso klar zu unterscheiden wie vorher. ») Revue scientifique 4. anuee, 1884, no. 2 p. 62. 2) 1. c. 3. annee 1883, 22. Dec. p. 789. ^) 1. c. 3. annee, 1883, 30. Juni p. 804. I, 4. Kleinere Mittheil ungeii. 569 Bei etwaiger Wiederholung des Versuchs mag man einige Vor- sichtsmaassregelu anwenden. Vor allem darf man den Mikroskop- tubus nur um einige Millimeterbruchtheile annähern ; denn eine wenn auch unbedeutende Ortsveränderung des Objectivs bringt eine sehr grosse Ortsveränderung des vom letzteren gelieferten reellen Bildes hervor, und eine noch grössere Ortsveränderung in dem vom Auge auf- gefassten virtuellen Bilde; aus demselben Grunde, wie zugleich auch, um den Versuch zu erleichtern, muss man einem sehr schwachen Ob- jective den Vorzug geben; und überdies wird man sehr gut daran thun, nur einen Theil des Präparates zu fixiren, der einestheils kein gar zu feines Structurdetail zeigt, und der anderutheils sehr reine und scharfe Umrisse hat. Mau erhält noch einen anderen, einfacheren Beweis für die Richtig- keit der Schlüsse Gu^bhard's, wenn man ein Präparat beobachtet ohne Verschiebung des mikroskopischen Tubus. Die verschiedenen Theile eines und desselben Präparates sind niemals genau auf derselben Focal- ebene befindlich ; betrachtet man nun gleichwohl, ohne die Mikrometer- schraube umzudrehen, zwei Theile eines Präparates, die auf merklich verschiedener Focalebene sich befinden und richtet seine Aufmerksam- keit bald auf den einen, bald auf den anderen Theil, so wird die Accommodations-Anstrengung des Auges in der That nothwendig sehr fühlbar. Diese Thatsache erklärt vielleicht auch die Erscheinung, die oft statthat, wenn man die Einzelheiten eines Präparates mit Aufmerksam- keit betrachtet, nämlich, dass sie abwechselnd sichtbar oder unsichtbar werden, wahrscheinlich je nach der Accommodation des Auges. Der beschriebene Versuch beweist, wie ich glaube, die Richtigkeit der theoretischen Schlüsse Guöbhaed's und zugleich die Unrichtigkeit der allgemeinen physiologischen Sinnesempfindung, nach welcher das virtuelle Bild des Mikroskops immer in der „deutliche Sehweite" ge- nannten Entfernung wäre, nahezu auf der Mikroskopplatte. Hier waltet wahrscheinlich der Irrthum ob, die Gesichtswahruehmungen zu locali- siren, wohl deshalb, weil ein Vergleich mit anderen Wahrnehmungen hier mangelt. * * * Ich kann nicht umhin, diesen Erörterungen die Bemerkung anzu- reihen, dass die hier besprochene Frage mit aller nur wünschenswerthen Klarheit und mathematischen Schärfe in dem (wie es scheint, auswärts Zeitschr. f. wis3. Mikroskopie. I, 4. 37 560 Kleinere Mittheilungen. I, 4. noch wenig stuclirten) klassischen Werke Dippel's: „Das Mikroskop" * abgehandelt ist. In dem Paragraphen: „Sehtiefe, Penetration" zeigt DippEL, dass die Sehtiefe, d. h. die Fähigkeit, die in verschiedener Tiefe gelegenen Theile eines Objects noch dentlich zur Anschauung zu bringen, gleich ist der Summe 5j -j- 2 S, d. h. sich aus zwei , theore- tisch und numerisch genau bestimmbaren ungleichen Factoren zusammen- setzt 1) der Accommodations- und 2) der Focus-Tiefe. „Erstere bezeiclmet denjenigen Objectraum, den das freie Auge kraft der Accommodationsfähigkeit mit vollkommener Bildschärfe zu durehmessen vermag, wähi'end letztere diesen Raum an seinen Grenzen nach unten und oben hin um denBetrag erweitert, bei welchem noch ein deutliches Sehen ohne volle Bildschärfe möglich ist". — „Es ist nämlich Thatsache, dass das Auge gegen kleine Fehler der Strahlenvereinigung in dem mikroskopischen Bilde, d. h. gegen kleine Undeutlichkeitskreise in dem schüesslichen Netzhaut- bildchen, unempfindlich ist, und dass es ausserdem die Fähigkeit besitzt, durch bewusste oder unbewusste Accommodation sich auf virtuelle Bilder in grösserer oder kleinerer Sehweite einzustellen, und so nach und nach verschiedene Ebenen mit vollkommener BUdschärfe auf der Netzhaut zur Abbildung zu bringen". — „Aus der ersteren Eigenschaft erklärt sich die Erscheinimg, dass bei einer bestimmten Einstellung des Mikroskops und bei einem bestimmten Accommodationszustande des beobachtenden Auges Querschnitte eines Objects, welche um ein gewisses Maass von der genauen Einstellungsebene nach oben oder unten abstehen, noch ohne merkliche oder schädliche Undeutüchkeit wahrgenommen werden können. Das Maass des auf diese Weise erlangten Spielraumes deutlicher Wahrnehmung wird als Focus tiefe des jSIikroskopes bezeichnet und kann ziflfermässig bestimmt werden". — „Sie steht zu dem Brechungs-Index des Objectmediums in geradem, zu der numerischen Apertur und der Vergrösserung dagegen in umgekehrtem Verhältidsse, und kann des- halb bestimmt werden, wenn die bezeichneten Grössen gegeben, und ferner die Sehweite, sowie der Spielraum in der angularen Grösse (Sehwinkel) der Undeutlichkeitskreise für ein bestimmtes Auge bekannt sind. Die Accommo- dationstiefe aber, d. h. die Fähigkeit des Auges, sich verschiedenen Entfer- nungen anzubequemen, ist „vollständig bestimmt dm-ch die sog. Accommoda- tionsbreite des beobachtenden Auges, deren Grenzen die grösste und kleinste Entfernung des deutlichen Sehens bilden, und findet ihr genaues in Zahlen ausdrückbares Maass in dem Unterschiede der reciprokeu Werthe dieser beiden äussersten Entfernungen". Die weitere Ausführung über die Bestimmung und Berechnung der beiden Tiefen und ihres Verhältnisses zur Sehtiefe mag an Ort und Stelle selber nachgelesen werden, da es mir genügt, sowohl der Prioritäts- Ansprüche halber als zum Zwecke tieferen Erfassens der Frage auf DipPEii's gründliche Ausführungen aufmerksam gemacht zu haben. ») 2. Aufl. p. 202 S. I, 4. Kleinere Mittheilungert. 561 Ueber einige Versuche mit elektrischem Glüh- und Bogen-Licht. Von Dr. Max Flesch in Liern. Durch freundliches Entgegenkommen des Directors des hiesigen Physikalischen Institutes, Herrn Professor Dr. Forster, war es mir er- möglicht, gemeinsam mit Hrn. Prof. Langhans einige Beleuchtungsver- suche mit elektrischem Bogen- imd Glüh -Licht anzustellen. Die erforder- lichen Ströme erzeugten eine grosse und eine kleine Dynamomaschine des Physikalischen Institutes ; erstere von einem Gas-Motor, letztere von einem Wasser-Motor getrieben. Das Bogenlicht wurde von einer DüBosQ'schen Lampe geliefert; die Glühlampen waren eine EüisoN'sche Lampe älterer Construction von 16 Kerzenstärken (Papierbügel) eine ebeiisolche neuerer Construction, ferner eine solche von 8 Kerzenstärken, endlich eine SwAN-Lampe von l^j^ Kerzen. Die Handhabung der elek- trischen Apparate hatte Hr. Professor Forster freundlichst übernommen. Das zu den Versuchen benutzte Mikroskop war ein SEiBERT'sches In- strument mit AßBE'schem Condensor; die nöthige Abbleudung zu inten- siven Lichtes wurde durch Auflegen von Rauchglasplatten auf die Blend- scheibe des Condensors erzielt; zur Monochromatisirung des Lichtes diente eine mit Kupfersulfatlösung gefüllte Schusterkugel, ferner eine dem physikalischen Institute gehörige Sammlung farbiger Glasplatten. Als Beobachtungsobjecte wurden verwendet: zur Prüfung der Farben- unterschiede ein mit Carmin und Jodgrün tingirtes Präparat der mit Berlinerblau injicirten Schleimhaut der Mundhöhle des Hundes; zur Prüfung des Auflösungsvermögens stärkerer Linsen (Seibert, homogene Immersion '/ig) Sujirella gemma und Nitzschia sigmoidea der Möller- schen Probeplatte. 1) Versuche mit Bogenlicht. Das Mikroskop steht etwa ein Meter von der Lampe entfernt; a) schwache Vergrösserung (Seiteet, System I. III. V), zur Abbiendung werden zwei Rauchglasplatten, die eine von der dunkelsten, zu Brillen in Anwendung kommenden Färbung, die andere von mitteldunkeler Farbe benutzt. Die Farben an dem Tinctionspräparat sind in unvergleichlich schöner Weise differenzirt ; die graublaue Färbung der Drüsenläppchen sticht aufs schärfste von dem reinen Blau der Injectionsmasse ab ; die rothen Zellkerne, in den grau- blauen Drüsenzellen bei Tageslicht kaum zu erkennen, sind aufs 37* 56ä Kleinere Mittlieilungen. I, 4. schärfste in ihrer Eigeufarbe abgegrenzt. — b) starke Vergrösseruug (Seibekt, homog. Immers. '/lo), Abblenduug durch eine Rauchglasplatte dunkelster Färbung; engste Blendungsöffnung. Die Probeobjecte wer- den bei der ersten Einstellung sofort gelöst, leichter als selbst bei Tageslicht. Die Rauchglasplatte wird entfernt. Es werden farbige Glasplatten zwischen die Lampe und den Spiegel, etwa 10 cm vor dem letzteren gehalten. Die Lösung der Probeobjecte wird anscheinend noch verbessert bei Einschaltung einer „blaugrünen", dagegen ver- schlechtert bei Anwendung rother und oraugegelber Platten; weniger günstig als die blaugrüne Platte wirkt eine „blaue" aus Kobaltglas (vermuthlich weil letzteres viele rothe Strahlen passiren lässt). 2. Versuche mit Glühlicht. Bei denselben werden zunächst die grösseren Lampen vor den Spiegel des Mikroskopes in annähernd gleicher Höhe mit demselben in einer Entfernung von 30 — 40 cm auf- gestellt; später wird die kleinste der benutzten Lampen dicht vor den Spiegel gehalten. In Folge der Anwendung sehr starker Ströme (um möglichst helles Weissglühen zu erzielen) ist leider nach kurzer Ver- suchsdauer der Bügel der älteren grossen und der kleineren Edison- Lampe zerstört. Das Licht erweist sich durch wohlthuende Ruhe und durch reine helle Färbung des Gesichtsfeldes jeder anderen künstlichen Lichtquelle überlegen; bezüglich der Ergebnisse lässt sich im übrigen alles, was über das Bogenlicht gesagt ist, wiederholen; Reinheit der Farben und Lösuugsvermögen sind in jeder Hinsicht gegenüber anderen Lichtquellen begünstigt. Die vorstehenden Versuche, deren Anordnung im Vergleiche zu anderen schon veröffentlichten jedenfalls manches zu wünschen übrig lässt, wurden hauptsächlich angestellt, um die aus theoretischen Gründen zu erwai'tenden optischen Leistungen des elektrischen Lichtes zu er- proben. Trotz der UnvoUkommeuheit des Verfahrens haben dieselben ein entschieden günstiges Resultat ergeben. Einen Anlass, meine in einem früheren Aufsatz ' ausgesprochene Ansicht, dass die Einrichtung zur elektrischen Beleuchtung bei mikroskopischen Arbeiten als Neben- apparat zu behandeln sei, zu ändern, habe ich aus den Versuchen nicht gewonnen. Prof. van Heukck, der die Güte hatte, mir brieflich einiges aus seinen neueren Erfahrungen mitzutheilen, spricht sich gleichfalls gegen die S'rEAEN'sche Verbindung der Lampe mit dem Stativ aus, hebt jedoch hervor, dass die Ergebnisse weit günstiger sich gestalten, wenn die Lampe direct unter dem Condensor ihren Platz finde, als wenn das «) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 175 ff. I, 4. Kleinere Mi ttli eilungen. 563 von dem Spiegel reflectirte Licht verwendet werde. In Ermangelung eigener Erfahrungen ist es mir nicht möglich, zu entscheiden, in wie weit für die Untersuchung organischer Objecte, bei welchen im allge- meinen der Beleuchtungseinrichtung wegen der seltenen Anwendung sehr schiefen Lichtes nicht die Bedeutung zukommt, wie bei Diatomeenproben, ein fernerer Gewinn zu erwarten ist. Was die STEiN'schen Apparate ' betrifft, — durch freundliches Entgegenkommen des Hrn. Dr. Stein hatte ich Gelegenheit, einige derselben zu sehen — so werden dieselben sicher für die Zwecke des Mikroskopikers schon aus äusseren Gründen nicht zur Einführung kommen, da sich wohl Niemand dazu verstehen wird (wie bei dem in dieser Zeitschrift abgebildeten Apparate) auf das Auflegen der Hände neben dem Objecttische zu Gunsten der Kurbeln des Rheostaten u. s. f. zu verzichten. Anders wird es sich vielleicht mit der Verwendung zu mikrophotographischen Arbeiten verhalten. Die mir von Dr. Stein vorgelegten Photogramme waren zum Theil vorzüglich schön. Auch hier fehlen mir eigene Erfahrungen. Dr. Stein's feste Verbindung des Beleuchtungsapparates mit dem Mikroskop steht in directem Gegensatz zu der Anordnung, mittels deren Prof. Fol in Genf zu embryologischen Zwecken bei Tageslicht die vorzüglichsten Ergebnisse erzielt ; dort sind Beleuchtungsspiegel und Präparat einerseits , Objectiv und Camera andererseits sogar an getrennten schweren Stativen angebracht. Das grösste Hinderniss für die praktische Anwendung des Glüh- lichtes dürfte jedenfalls der Mangel geeigneter Elektricitätsquellen sein; nach den Mittheilungen van Heukck's scheint es jedoch, dass auch diese Schwierigkeit durch LECLANCHfi'sche Elemente neuerer Construc- tion überwunden ist. Gelingt es den Technikern eine constant wirkende Batterie, leicht zu handhabende Rheostaten und Lampen zu massigen Preisen zugänglich zu machen, dann dürfte sicher in kürzester Zeit das Glühlicht den anderen Mikroskopirlampen wesentliche Concurrenz machen oder dieselben geradezu verdrängen ; an den Mikroskopikern wird es dann, wie van Heukck's Versuche zeigen, nicht fehlen, die speciellen Einrichtungen so zu erstellen, dass sie für das Bedürfniss der Praxis geeignete Formen gewinnen. 1) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 161 flf. 564 lüeinere Mittheilungcn. I, 4. Zur Weigerfsclien Hämatoxylinfärbung des centralen Nerven-Systems. Von Prof. Dr. Max Flesch in Berti. Untersuchungen am Gehirn und Rückenmark, welche theils unter meiner Leitimg von Studirenden, theils von mir selbst ausgeführt wer- den, haben mir reichliche Gelegenheit zur Prüfung der verschiedenen von Weigert * und Sahli ^ neu eingeführten Tinctionsmethoden ge- boten. Einige Bemerkungen über meine Erfahrungen hier mitzutheilen, veranlassen mich die günstigen Erfolge, welche, vor allem nach einer an sich unbedeutenden Modification der ersten WEiGERT'schen Vor- schrift, erzielt wurden. Bei den Versuchen selbst hatte ich mich der Unterstützung des Herrn stud. med. Ebeling zu erfreuen. Das Material, welches anfangs zur Verarbeitung kam, war leider schon vor Erscheinen des WEiGEEx'schen Aufsatzes in MtiLLEK'scher Lösung gehärtet und nach der sonst allgemein üblichen und sicher für andere Zwecke besten Methode vor dem Einlegen in Alkohol sorgfältig ausgewässert worden; es entsprach daher nicht der Vorschrift, wonach die Objecte vor der Tinction nicht mit Wasser in Berührung kommen dürfen. Weigert räth, derartige Präparate durch erneutes Einlegen in MtJiiiiER'sche Flüssigkeit wieder zu verbessern. Dies war mir entgangen ; auch hatten frühere Versuche an dem Rückenmarke von Kindern (in 3 verschiedenen Präparaten, welche bereits mehrere (l'/j bis 2y2) Jahre in Alkohol lagen) trotz ungenügender Vorbereitung gute Bilder ge- liefert. Nach mehreren Fehlversuchen kam ich darauf, die Schnitte selbst vor der Tinction mit schwachen Lösungen von Chromsäure zu behandeln; die Erfolge, die so erzielt wurden, waren ganz vorzügliche. Wir verfuhren von da an so, dass die Schnitte — aus Celloidinpräpa- raten — aus dem zum Schneiden benutzten Alkohol zuerst in y2pro- centige Chromsäurelösung übertragen wurden ; es genügt, sie darin einige Minuten liegen zu lassen ; doch scheint längere Imbibition günstig zu wirken; dann werden sie auf dem Spatel in W^asser übertragen, ober- ») Cfr. die Berichte von Dr. Edinger in dieser. Zeitschrift Bd. I, 1884, p. 123, p. 290. 2) Sahli, Neue Doppelfärbung des centralen Nervensystems. (Correspon- denzblatt für Schweizer Aerzte. XIV. Jahrgang No. 6, p. 144). I, 4. Kleinere IVIittlieilungen. 565 flächlich abgespült und sofort, ohne vom Spatel entfernt zu sein, in die Farbe abgeschwemmt. Ueberschüssige Chromsäure darf nicht anhaften, sie erzeugt leicht Niederschläge. In der Farbe nehmen die Schnitte fast momentan einen dunkelen, selbst schwarzen Ton an; schon zehn Minuten genügen, um eine zwar blasse, aber ausreichende Färbung der feiuen Fasern zu erhalten ; besser ist es allerdings, längere Zeit bis zur weiteren Behandlung mit alkalischer Eisenlösung zu warten. Letztere haben wir ganz nach Weigeet ausgeführt. Die schönsten Präparate haben wir im allgemeinen dann erhalten, wenn die Schnitte sehr lange in Wasser verblieben waren. Als Aufhellungsmittel müssen wir unbe- dingt das Kreosot vor dem Xylol bevorzugen. Auch bei minder gut entwässerten Schnitten ist im Kreosot Schrumpfung nicht zu befürchten. Der höhere Preis des reinen Buchenholzkreosots wird dadurch ausge- glichen, dass man dasselbe Quantum der Flüssigkeit fast unbegrenzt lange benutzen kann. Ich bewahre die Flüssigkeit seit langem in Gläsern, auf welche statt des Korkes ein Trichter mit Filter aufgesetzt ist ; auf letzteres wird das gebrauchte Kreosot gegossen, um nach dem Filtriren wieder verwendet zu werden; selbst die denkbar schlechteste Behandlung, z. B. durch Studirende in Cursen, vermag nicht, das Rea- genz zu ruiniren. Den wesentlichen Vorzug unserer Anwendungsweise der Weigekt- schen Färbung sehe ich darin, dass der Brütofen, beziehungsweise Wärmekasten überflüssig wird, ohne dass grösserer Zeitaufwand (24 Stunden, Edingek) nöthig ist. Nicht als ob, wo ein solcher im Ge- brauch ist, der Wärmekasten unbequem zu handhaben wäre; ich nehme zur Zeit fast alle anderen Tinctiouen im Brütofen vor und sehe darin eine grosse Erleichterung und Zeitersparniss. Aber gerade die Weigeet- sche Häraatoxylin-Lösung übt, ganz besonders auf sehr dünne Schnitte, an sich leicht einen zerstörenden Einfluss aus, der durch die Brütwärme noch erhöht wird. Die Schnitte werden brüchig, schwer transportabel. Schnitte des gleichen Materials von gleicher Feinheit etc. liefern ent- schieden vollkommenere Präparate, wenn bei gewöhnlicher Temperatur gefärbt wird. Bei besonders zarten Objecten kann obendrein nach der Imprägnation mit Chromsäure die WEiGEET'sche Lösung stark verdünnt werden, ohne dass, falls man auf ganz dunkle Töne verzichtet, die Differenzirung leidet. Ausser auf das Rückenmark und das Gehirn habe ich das Ver- fahren auf Spinalganglien, auf das Ganglion Gasseri, die Hypophysis cerebri und die Netzhaut angewendet. Ueberall hat es nicht nur schöne Bilder, sondern auch wissenschaftlich verwerthbare Ergebnisse geliefert. 566 Kleinere Mittheilungen. I, 4. In den Ganglien zeigt es uns verschiedenartige Färbung der Nerven- zellen, die auf noch unbekannte Structurverschiedenheiten zurückgeführt werden müssen. In der Netzhaut ist mir bis jetzt die Darstellung feiner Fasern noch nicht in der gewünschten Weise gelungen ; dagegen erhält man ein höchst elegantes Bild der Stäbchenschicht, deren Aussenglieder eine tief dunkelviolette Farbe annehmen. In der Hypophysis differenzirt die Lösung, namentlich wenn nachträglich Carmintinction folgt, gewisse Zellen des epithelialen Theiles in ganz eigenartiger Weise; man erhält ein Bild, das fast an die Haupt- und Belegzellen haltenden Drüsen des Magens erinnert. Alles spricht dafür, die neue Färbung in ausgedehnte- ster Weise allerwärts zu versuchen. Selbstverständlich — darin stimme ich mit GiERKE* überein, darf die einfache Carmintinction auch am centralen Nervensystem nicht in Vergessenheit gerathen ; ebenso un- zweifelhaft muss aber der neuen WEioEET'schen Färbung ein Platz unter den vorzüglichsten Tinctionsmittelu zugewiesen bleiben. Neben der Hämatoxylinfärbung haben wir auch die Säurefuchsin- Färbung Weigeet's und die combinirte Färbung mit Methylenblau und Säurefuchsin nach Sahli mit Erfolg an mit Chromsäure imprägnirten Schnitten ausgeführt, auch dies an Objecten, an welchen dieselben Tinctionen früher nicht geglückt waren. Schliesslich möchte ich nicht unterlassen, noch der vorzüglich schönen Bilder zu gedenken, welche die MEßKEL'sche ^ Doppelfärbung mit Indigcarmin und Carmin uns geliefert hat. Das Verfahren ist so einfach, die mittels desselben erzielten Präparate sind so prägnant, namentlich für das Studium der Neurogliakerne einerseits, der Nerven- zellen andererseits, dass sie in dieser Hinsicht kaum übertrofFen werden können. Untersucht man an Objecten, deren Gefässe noch mit Blut er- füllt sind, so erhält man obendrein die von Bayekl mit so gutem Erfolg zu anderen Zwecken benützte grüne Färbung der Blutkörperchen, so dass eine Injection überhaupt nicht nöthig ist. Parallelpräparate, die einen mittels der WEiGEKT'schen, die anderen mittels der MsRKEL'schen Hüssigkeit dargestellt, dürften ein vorzügliches Hülfsmittel zur histo- logischen Untersuchung des Nervensystemes abgeben. 0 Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 387. ^) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 289 und Mkkkel, Untersuchungen aus dem anatomischen Institut zu Rostock. Leipzig 1874, p. 98. I, 4. Refei-ate und Besprechungen. 567 Referate und Besprecliung'en. 1. Lehr- und Fandbücher. Bonnet, K., Knrzgefasste Anleitung zur mikroskopischen Untersuchung thierischer Gewebe für Anfänger in der hi stologischen Technik. 61 pp. 8". München, (Rieger) 1884. Verf. hatte seine Anleitung ursprünglich namentlich dem Bedarfe der Veterinäreleven und Thierärzte angepasst, in vorliegender Form aber glaubt er sie auch dem angehenden Mediciner empfehlen zu dürfen. — Das Werkchen beginnt mit einer üebersicht der zum Mikroskopiren erforderlichen Instrumente und Utensilien und bespricht dann, ohne sich in Details über die optischen Einrichtungen einzulassen, die Einrichtung des Mikroskopes, die Einstellung, die Beleuchtung und die Betrachtung der Präparate. — Hinsichtlich der Untersuchung von Geweben bemerkt der Verf., dass es nur wenige giebt, welche der mikroskopischen Unter- suchung direct zugänglich sind, während die meisten einer besonderen Zubereitung bedürfen, um den gewünschten Erfolg zu gewährleisten. Von den indifferenten Zusatzflüssigkeiten hebt Verf. namentlich eine 0-75procentige Kochsalzlösung hervor. — Bei der Untersuchung der Gewebe wird zuerst das Blut herangezogen. Wegen der Grösse der Blutscheiben beginne man mit Frosch- oder Fischblut und untersuche dann Vogel- und Säugethierblut. Verf. macht auf das verschiedene mikroskopische Verhalten der rothen Blutkörperchen bei den genannten Thierklassen aufmerksam und bespricht den Zusatz von Reagentien zu den Präparaten. Die so charakteristische Geldrolleubildung der rothen Blutkörperchen der Säuger tritt bei den übrigeu Wirbelthierklassen deswegen nicht ein, weil der nabelartig prominirende Kern das Neben- einanderlagern verhindert. — Zur Untersuchung der Lebenseigenschaften weisser Blutkörperchen macht Verf. besonders darauf aufmerksam, dass 568 Referate und Besprechungen. I, 4. der Druck des Deckgläscheus durch Unterlegen einiger feiner Härchen oder eines Papierdiaphragmas zu verhindern sei. Die Essigsäure als kernkennzeichnendes Reagenz wird besonders empfohlen. Um die Hämoglobinkrystalle auf einfache Art darzustellen, empfiehlt der Verf. das Eintrockmmgsverfahren einiger Bluttropfen kleiner mit Aether ge- tödteter Nagethiere. Das Anschlössen der TEiCHMANN'schen Krystalle an einem Haar oder Baumwollenfaden wird ebenfalls erwähnt. — Den Abschluss bei der Blutuutersuchung bildet die Betrachtung des Kreis- laufes am lebenden Tliiere. Hieran schliesst sich die Untersuchung von Milch, wobei auf die Colostrumkörperchen und die BKOw^N'sche Molecularbewegung aufmerksam gemacht wird, Lymphe und Chylus. Im nächsten Abschnitte bringt das Werkchen Epithel und Endothel. Bei dieser Gelegenheit berücksichtigt der Verf. auch die Speichel- körpercheu, welche mit der Molecularbewegung in ihrem Protoplasma ein Testobject für die Güte des verwandten Mikroskopes bilden. Auch die in der Mundhöhle vegetirenden Spaltpilze werden erwähnt. Ferner finden sich hier Stachel- oder Riffzellen, verhornte Epidermiszellen, Cylinderepithel, die durch Ranviek's Alkoholmischung schön isolirbaren Becher- und Flimmerzelleu, sowie pigmentirtes Epithel besprochen. Den Abschluss bildet die Behandlung der Endothelien und ihre Demonstration mit Hülfe der Silbermethode. Es folgt als neuer Abschnitt die Untersuchung der Bindesubstanzen: fibrilläres Bindegewebe, areoläres Bindegewebe, elastische Fasern, Gallertgewebe, Fettgewebe. Hinsichtlich der Besprechung des reticu- lirten Bindegewebes wird auf die Untersuchung der Lymphdrüsen verwiesen. Der nächste Abschnitt behandelt die Knorpel, den Verkuöcherungs- process, die fertigen Knochen und die Zähne. Hyalinen Knorpel unter- sucht man am besten, indem man mit einem Rasirmesser einem frischen Gelenk- oder Rippenknorpel feine Schnitte entnimmt. In sehr feinen Schnitten sieht man leere Knorpelkapseln, aus denen die Zelle heraus- gefallen. Zur distincten Darstellung der Knorpelkapseln und Zellkerne färbt man unter dem Deckgläschen mit einer Lösung (dest. Wasser 50*0) von Jod (l'O) in Jodkalium (2"1), wodurch die ersteren gelb, die letzteren braun erscheinen. Zum Studium des Verknöcherungsprocesses entnimmt man mit scharfem Scalpell einem jungen entkalkten, in Leber einge- zwängten Knochen an der Grenze von Epi- und Diophyse Quer- und Längsschnitte. — Um den fertigen Knochen- der mikroskopischen Analyse zugänglich zu machen, wird derselbe in Salzsäure völlig ent- kalkt und dann geschnitten. Auch die Dünnschliffmethode ist zur I, 4. Referate und Besprecliungen. 569 näheren Keuutniss der Kuocbenstructur auszuführen. Auch Zähne wer- den wie die Knochen entkalkt oder geschliffen. Die Zahnpulpa macht man sich durch Sprengen eines frischen Zahnes zugänglich. Der nächste Abschnitt des Werkchens bespricht das Härten, Schneiden, Einbetten, Färben und Conserviren. Bei der Alkoholhärtung ist vor allem darauf zu achten, dass man kleine Stückchen möglichst frischer Gewebe benutze. Verf. hebt geschickt hervor, dass das zu härtende Object an einem Korkstückchen befestigt in die Härtungs- flüssigkeit eintauchen, oder vom Boden des Gefässes durch Baumwolle getrennt werden müsse. „Legte man ein Gewebsstückchen einfach auf den Grund des Gefässes, so würde es nach kurzer Zeit durch das aus ihm ausgezogene Wasser in einer verdünnten Alkoholschicht liegen und viel langsamer erhärten. Ja ein grosses Stückchen, das den Alkohol nicht gut durchlässt, könnte sogar bei langsamer äusserlicher Härtung innerlich so maceriren, dass es ganz vmbrauchbar würde". Häutige und flächenartig ausgebreitete Gewebe werden mit Igelstacheln auf ein flaches Korkscheibchen befestigt, welches man dann mit dem Präparat nach unten in Alkohol legt. Für die Tinction erwähnt der Verf., die Präparate nicht zu lange im Alkohol liegen zu lassen. Manche Gewebe erscheinen bei Alkoholhärtung geschrumpft und gezerrt, so namentlich Nervensystem und Epithelien, daher benutzt man zum Härten dieser besser MüLLEE'sche Flüssigkeit. Das Einlassen der Präparate in die- selbe geschieht wie beim Alkohol, je frischer das Gewebe, desto besser die spätere Härtung. Diese nimmt auf kaltem Wege 4 bis 6 Wochen, bei einer constauten Temperatur von 30 bis 40" C. 8 bis 10 Tage in Anspruch. Etwaige Schimmelbildung ist durch Zusatz von Campher zu umgehen. Bevor man zur weiteren Behandlung der Präparate schreitet, sind diese sorgfältig mit Wasser abzuspülen, um die gänzliche Entfernung der chromsauren Salze zu bewerkstelligen und in Alkohol zu übertragen. Auch der Härtungsflüssigkeit von Eelicki (wässerige Lösung von 2% Procent chroms. Kali und Ya Procent Kupfervitriol mit späterer Uebertraguug in Alkohol) gedenkt der Verf. und empfiehlt sie angelegentlich für Centralnervensystem und Netzhaut. Verf geht zur Schneidetechnik über und bespricht zunächst die mit nasser Klinge zu bewerkstelligende Anfertigung von Schnitten an Präparaten, welche entweder mit freier Hand oder mit Hülfe von Hol- lundermark oder Speckleber gehalten werden. Zartere, voi-her mit Pikrocarmin oder Alauncarmin in toto gefärbte Objecte, sind der Ein- bettungsmethode zu unterwerfen. Verf. empfiehlt neben dem Paraffin eine Mischung von 4 Th. Spermaceti und 1 Th. Ricinusöl und bespricht 570 Referate und Besprecliungen. I, 4. äie Behandlung der Schnitte nach Gaule. Zur Anfertigung der Schnitte dürfte dem Anfänger das Haudmikrotom von Katsch (München) ge- nügen. Als kernfärbende Tinktionsflüssigkeit bediene sich der Anfänger des Bismarckbraims oder des GBENACHER'schen Alauncarmins, zur Färbung ganzer Gewebsstücke dürfte er mit Vortheil den BKowis^'schen Pikro- carmiu verwenden. Die Reihenfolge der mit den gefärbten Schnitten vorzunehmenden Manipulationen wird vom Verf. übersichtlich zusammen- gestellt. Nach diesen rein technischen Bemerkungen bringt der Verf. die Untersuchung des Muskel- und Nervengewebes, Es folgt dann das Studium der Organe, Apparate und Systeme. Um alle Arten von Gefässen übersichtlich darzustellen, wählt man zur Untersuchung ein Stückchen Pia mater. Die gefensterten Membranen grösserer Arterien werden passend an einem Stück Lungenarterie oder Aorta, welches einige Tage in RAxviEK'schem Alkohol lag, studirt. Hinsichtlich der Injectionstechnik giebt der Verf einige praktische Handgriffe und verweist im übrigen auf die einschlägigen Lehrbücher. Den Inhalt des nächsten Abschnittes bildet die Haut mit ihren Drüsen, Haaren und deren Papillen. Die Gefässvertheilung in der Haut wird am besten an Injectionspräparaten oder an Stückchen, die in Müllek- scher Flüssigkeit gehärtet wurden, studirt. Die Nerven der Haut, dem Anfänger schwer zugänglich, untersucht man an Goldchlorid- präparaten. Der Aufbau von Hufen, Klauen, Krallen, Nägeln und Hörnern bildet den Schluss des Abschnittes. Des weiteren folgt der Verdauungscanal mit seinen Anhangsgebilden : Zunge, Mandeln, Schlund, Magen, Dünndarm mit Liebekkühn' sehen Krypten und PEYER'schen Follikel und Dickdarm werden der Reihe nach abgehandelt. Bei den Anhangsgebilden bespricht der Verf. zuerst diejenigen mit Ausfiihrungs- gang : Speicheldrüsen, Leber, und lässt als Drüse ohne Ausführungsgang die Schilddrüse folgen. Auch werden an dieser Stelle die Nebennieren Tmd die Zirbeldrüse erwähnt. Angereiht wird noch die Untersuchung der Lymphdrüsen: Thymus, Milz und andere lymphoide Organe. Verf. ertheilt den praktischen Wink, zur befriedigenden Untersuchung hin- sichtlich dieser Gebilde nur junge Thiere zu verwenden, da die be- sagten Organe im Alter bekanntlich theils schwinden, theils nur rudi- mentär nachweisbar sind.- Im nächsten Abschnitt werden die Respira- tionsorgane: Kehlkopf, Trachea und Lunge besprochen. Es folgen „Harnapparat", „Männliche" und „Weibliche. Geschlechtsorgane". Alsdann geht Verf. zur Untersuchung der Centralorgane des Nerven- systems: Gehirn und Rückenmark über. Um Totalschnitte durch ganze I, 4. Referate und Besprechungen, 571 Gehirne von grossen Thiereu (Pferd, Rind) zu erhalten, bediene man sich des GuDDEN'schen Mikrotoms. Den Abschluss der Untersuchung der Organe bilden die Sinneswerkzeuge. Bei der Untersuchung des Auges versäume man nicht, die Hornhautnerveu mit Hülfe der Ver- goldungsmethode zu studireu. Als Härtungsflüssigkeiteu kommen MtTLLER'sche und EiiLicKi'sche Lösung, als Tinctionsmittel namentlich BKowK'scher Pikrocarmiu in Anwendung. Gehör- , Geschmacks- und Geruchsorgan werden ebenfalls besprochen. Den Abschluss des Werkchens bildet die mikroskopische Unter- suchung einer Heuinfusion, in welcher sich bei Anwendung eines ge- stützten Deckglases reichliche Gelegenheit bietet, an Amöben und Infusorien die Lebenseigenschaften des Protoplasmas zu studiren. In den vorhandenen Diatomeen findet mau herrliche Testobjecte für die Güte des zur Untersuchung gewählten Instrumentes. Grieshach {Basel). 2. Präparationsmethoden im Allgemeinen. A» lliki'otonie und Mn^'votonitechnik, Fraiicotte, P., Microtomes et methodes d'inclusion. (Bull. Soc. Beige de Microsc. t. X, 1883—84, no. 3, p. 55). Nachdem Verf. eine Art RivEx'sches Mikrotom beschrieben und die Bemerkung gemacht, dass alle derartigen Instrumente noch so viele UnvoUkommenheiten besitzen, dass Viele es vorziehen, aus freier Hand zu schneiden, versichert er, dass er sich fünf Jahre lang mit Vortheil eines Mikrotomes von Dr. Lang in Breslau bedient habe. Aber auch dieses, obgleich das beste, was ihm bekannt, versagte von Zeit zu Zeit, indem plötzlich, trotz der angewandten Sorgfalt, der Schnitt entweder sehr dick ausfiel, oder überhaupt nicht entstand. Woher nun diese Un Vollkommenheit? — Weil man die Ebenen, auf denen die Schlitten gleiten, nicht so plan schleifen kann, dass jedwede Unregelmässigkeit im Gange beseitigt wird. Verf. macht dann auf die von Thoma er- sonnene, und von Jung in Heidelberg ausgeführte bekannte Abänderung aufmerksam * , dass die Schlitten nur mit einzelnen (5) Punkten auf der betreffenden Ebene gleiten. Des weiteren giebt der Verf. zu, dass die Verbesserung am THOMA'schen Mikrotom, den Objectschlitten mit ») Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 350 f. 572 Referate und Besprecliungen. I, 4. Hülfe einer Mikrometerschraube zu bewegen, ein Fortschritt sei, indessen muss er doch hervorheben, dass der Blick sehr leicht bei der fort- währenden Controlle der Einstellung ermüdet. Die standfeste Be- schaffenheit des Schlittens wird allerdings durch die Mikrometerschraube besser gesichert. — Die betreffende Mikrometerschraube dreht sich in zwei Lagern eines Rahmens, welcher mit Hülfe einer Pressschraube an seinen Träger ganz fest geheftet ist. Der Eahmen kann wie ein Schlitten auf der schiefen Ebene fortbewegt werden, und die Spitze der Mikrometerschraube wirkt gegen ein polirtes Achatplättchen, welches am Objectschlitten befestigt ist. Die Mikrometerschraube ist mit einer Trommel, welche auf ihrer Peripherie 25 Theilstriche trägt, versehen. Jeder Theilstrich entspricht einer Schnittdicke von 0*001 mm. Die Mikrometerschraube ist noch vervollkommt worden : Man braucht nicht mehr die Schnittstärke auf der Scala abzulesen, sondern das Ein- schnappen einer Schnellfeder theilt dem Ohre die Anzahl der Theil- striche mit; will man diese Vorrichtung dagegen nicht, so braucht man nur die Stellung eines Hebels zu verändern. — Der Verf. bespricht als- dann die am Object zu erzielende verschiedene Schnittstärke, die Object- klemmen in ihrer älteren und neueren Form, und die Messer. Doch erscheint es überflüssig, weil die Verhältnisse bekannt, darauf hier näher einzugehen. In Betreff der zur Verwendung kommenden Schuitt- strecker muss bemerkt werden, dass der Verf. einen von ihm selbst construirten derartigen Apparat seiner Einfachheit wegen, und weil er dieselbe Leistungsfähigkeit besitzt, wie alle anderen complicirteren Apparate, diesen vorzieht. Jedermann kann sich denselben selbst an- fertigen : Man biege einen Eisendraht von 1 mm Dicke, oder eine ge- wöhnliche, vorher geglühte Stricknadel zweimal im rechten Winkel. Die Biegungen sind 7 bis 8 cm (!) von einander entfernt. Die beiden freien Enden des zweifach gebogenen Drahtes formt man zu Haken, vermittels derer der ganze Draht am Rücken des Messers befestigt wird. Die Länge der beiden durch die Biegung erzeugten Arme ist so einzurichten, dass der zu den beiden Armen senkrecht stehende Hauptabschnitt des Drahtes V'io oder ^lo mm in der senkrechten Richtung zum Messer- rücken hinter der Schneide zu liegen kommt. Beim Schneiden rollen sich die Schnitte im allgemeinen nicht. Sollte das Einrollen dennoch in geringer Weise stattfinden, so ist es leicht, den Schnitten auf dem Objectträger eine plane Oberfläche zu ertheilen. — Was die Behand- lung des JuNo'schen Mikrotoms anbelangt, so sqrge man dafür, dass es nicht einstäubt, und dass die Gleitflächen und die Mikrometerschraube nicht rostet. I, 4. Referate tuul Besprecliungen. 573 Darauf bespricht der Verf. die Anfertigung der Schnitte : Will man das durch Härtung gut vorbereitete Präparat nicht einbetten, so klebt man es entweder (wobei zu beachten, dass es nicht dicker als 3 — 5 mm ist) mit Gummi arabicum auf einen recht flach geschnittenen Kork oder zwischen zwei Stücke von Hollundermark oder gehärteter Leber. Bringt man dann das Ganze in Alkohol, so coagulirt und erhärtet das Gummi und heftet das Präparat sicher an das Befestiguugsmaterial. Darauf spannt mau dieses in die Klemme des Objectschlittens und entnimmt die Schnitte mit alkoholbefeuchteter Klinge. Will man aber die Einbettungsmethode in Paraffin verwenden, so bringt man das be- treffende Object, nachdem es je nach seiner Grösse längere oder kürzere Zeit in verschiedengradigen Alkoholen (40 ''j 70'^, 90") und zuletzt in absolutem Alkohol gelegen hat, successive in ein Gemisch von: 1 Vol. Terpentinöl und 2 Vol. Alkohol 1 Vol. Terpentinöl und 1 Vol. Alkohol 2 Vol. Terpertinöl und 1 Vol. Alkohol und zuletzt in reines Terpentinöl. Statt des Terpentinöls kann man Chloroform nehmen, der Verf. bedient sich seit einiger Zeit sogar mit Vortheil des Petroleums. Jetzt fügt man dem das Präparat beherbergen- den Terpentinöl, Chloroform oder Petroleum soviel Paraffin zu, als zur Sättigung erforderlich, und erwärmt auf dem Wasserbade bis 25", 30" (bei Anwendung von Petroleum) oder 50" (bei Anwendung von Terpen- tin oder Chloroform). Nach einiger Zeit bringt man das Präparat in reines Paraffin und erwärmt auf dem Wasserbade bis 60". Je nach der Grösse und der Structur des Präparates lässt man es mehr oder weniger lange Zeit (oft länger als eine Stunde) in dem reinen Paraffin. Hat man es mit einem kleineren flachen Object zu thun, so befestigt und überzieht man dasselbe mit Hülfe des Paraffins auf einem glatten Korkstückclien und lässt erkalten. Darauf umgiebt man es mit einer Papiereinfassuug in der Art, dass eine kleine Höhlung gebildet wird, richtet es in passender Weise und übergiesst es aufs Neue mit einer Lage Paraffin, dann lässt man wiederum während mehrerer Stunden erkalten. In anderen Fällen, namentlich bei grösseren Objecten, macht man ein Pappkästchen, in welches die Masse eingegossen wird und verfährt in der bekannten Weise. — Zum Schlüsse berührt der Verf. noch die Einbettungsmethode von Calbeela und Rüge in Hühnerei- weiss. Man zerreibt den ganzen Inhalt eines Eies in einem Porzellan- mörser und filtrirt durch Leinwand. Darauf befestigt man das einzu- schliessende Object mit Stecknadeln passend in einem Pappkästchen und übergiesst es mit der Eiermasse. Das Kästchen wird auf einer 574 Referate und Besprechungen. I, 4. durchlöclierteu Zinkplatte, welche gewissermasseu als Tisch dient, unter eine Glasglocke gestellt. Unter derselben befindet sich ferner ein Ge- fäss mit starkem Alkohol und ein flaches zur Hälfte mit Wasser ge- fülltes Gefäss aus Weissblech oder Kupfer, auf welches man als Deckel eine Metallscheibe legte. Das Wasser wird mit einer kleinen Flamme erwärmt. Die Glasglocke füllt sich mit Alkoholdämpfen und nach zwei bis drei Tagen ist die Eimasse im Kästchen coagulirt. Dann bringt man dieses iu Alkohol, in welchem die Einbettungsmasse vollständig er- härtet. Nach dem Einspannen schneidet man ebenfalls mit alkoholbe- feuchteter Klinge. Grieshach {Basel). (Retzius, (j.)f Employment ofthe freezing method inhisto- logy. (Retzius' Biol. Uutersuchg. II 1882 p. 150 bis 153. cfr. Journ. R. microsc. Soc. Ser. II vol. IV 1884. pt. 2. p. 316). Die sowohl in schwedischer als auch in deutscher Sprache publicirte Gefrierungsmethode von Key und Retzius besitzt manche Vortheile ; doch bedarf ihre Handhabung die grösste Vorsicht, weil sie manchmal in den Geweben Artefacte in Gestalt von Rissen, Spalten und communi- cirenden Lücken hervorbringt. Grieshach {Basel). Sollas, W. J., Improved method of using the freezing microtome. (Quart. Journ. Microsc. Sei. vol. XXIV (1884) p. 166 ; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. II vol. IV 1884, pt. 2, p. 316). Sollas sucht die Gefrierungsmethode dadurch zu verbessern, dass er die zu schneidenden Objecte nicht, wie es gewöhnlich geschieht, in Gummi, sondern in Gelatiueleim gefrieren lässt. Das zu schneidende Object ist direct aus Wasser in diesen einzutragen und so lange darin zu lassen, bis es völlig durchdrungen. Nach dem Gefrieren werden die Schnitte in bekannter Weise mit dem Ruthebford' sehen Mikrotom an- gefertigt und schnell nach einander auf den Objectträger übertragen. Alsdann lässt man auf jeden derselben einen Tropfen Glycerin fliessen, bedeckt alle mit einem Deckgläscheu und schliesst zur Fertigstellung des Präparates mit Zinkweiss oder einem anderen Cement ein. Das Glycerin durchdringt den Gelatineleim und verwandelt ihn in Glycerin- leim, diese Umwandlung lässt sich durch gleichmässiges Erwärmen (un- gefähr 20 bis 30" C.) beschleunigen. Die delicatesten und lockersten Objecte lassen sich mit dieser Methode passend behandeln. Grieshach (Basel). I, 4. Referate und Besprechungen. 575 jB, I*räparafionsmet7ioden. Stowell, C. H., Studies in histology, 11: Hardening, soften- ing, dissociating and normal fluid s. (The Microsc. vol. IV, 1884, Nr. 4, p. 80). Zum eingehenderen Studium der Gewebe und Organe des thieri- schen Organismus kommt das Härten, das Erweichen, sowie das Unter- suchen in normalen Flüssigkeiten wesentlich in Betracht. Verf. giebt zunächst Allgemeines über das Verhalten verschiedener Gewebe und Organe gegen Härtungsflüssigkeiten und bemerkt, dass das Wesen des Erhärtens auf der Coagulation des Albumins und der Extraction des Wassers beruhe. Härtend wirkende Reagentien sind: 1) Kai. bichrom. 2 Gewicbtsth. Natr. sulphur. 1 „ Wasser 100 Diese Flüssigkeit dringt vorzüglich ein und härtet und erhält fast alle thierischen Gewebe, ohne dass dieselben merklich schrumpfen oder ihre charakteristischen Eigenschaften einbüssen. Man lässt diese Flüssig- keit wenigstens 14 Tage einwirken und erneuert sie passend einige Male während dieser Zeit. Darauf wäscht man das Präparat so lange aus, bis das Waschwasser nicht mehr gefärbt erscheint und überträgt alsdann anfangs in schwachen, darauf in stärkeren und endlich in ab- soluten Alkohol. Die Flüssigkeit, in besagter Weise angewandt, ist nach Verf. das beste aller Härtungsmittel. — 2) MüLLBß'sche Flüssig- keit und Alkohol, besonders für Gehirn, Rückenmark und Retina ge- eignet, sollte beim Gebrauch jedesmal frisch bereitet und an einem dunklen Ort aufbewahrt werden. Nach der schon besprochenen öfteren Erneuerung wird die Härtung mit Alkohol beendet. — 3) MüLLEB'sche Flüssigkeit und 95procentiger Alkohol. Wurde schon von Seiler zur Härtung ganzer Organe (Nieren, Gehirne) empfohlen und härtet in ver- hältnissmässig kurzer Zeit. — 4) Alkohol. Man beginne mit schwachem Spiritus, nehme nach und nach stärkeren und verwende zuletzt absoluten Alkohol. Die zu härtenden Gewebe dürfen nur in kleinen Stücken ein- gelegt, ganze Organe müssen mit Alkohol injicirt werden. Zur Härtung von Drüsen (Pankreas, Speicheldrüsen) gebrauche man gleich absoluten Alkohol. — 5) KaUumbichromat , wird in 2procentiger Lösung von Vielen der Müller' sehen Lösung vorgezogen. — 6) Ammonium- bichromatlösung sehr schätzbar für Nervensubstanz. — 7) Ammonium- chromatlösung eignet sich für manche Gewebe, mit nachheriger Auf- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. I. 4. 38 576 Referate und Besprecliungen. I, 4. bewahrimg in Glycerinleim. — 8) Chromsäure. Man fertigt eine Iprocentige Lösung an, und verdünnt sie zum Gebrauch auf ^/^ oder 'ye Proceut. — 9) Chromsäure und Alkoliol, Ein Theil einer VeP^'o- centigen Chromsäurelösung wird mit 2 Th. Alkohol gemischt. Beim Gebrauch frisch anzufertigen. Härtungsdauer 8 bis 10 Tage. Erneue- rung am zweiten Tage. — 10) Pikrinsäure. Gesättigte Lösung härtet kleine Gewebe in 24 bis 48 Stunden. Besonders zum Studium von entkalkten foetalen Knochen und von Knorpel zu empfehlen. Die gelbe Farbe wird später mit Wasser ausgezogen. Passende Färbung der Schnitte : Pikrocarmin. — 11) Osmiumsäure. Gewöhnlich als '/jprocentige Lösung gebraucht, doch ist es auch gut, eine Iprocentige zur Hand zu haben, die man eventuell verdünnt. Zum feineren Studium des Nerven- systems unentbehrlich. Verf. bespricht alsdann einige Flüssigkeiten zum Entkalken und Erweichen von Knochen. Die erste, welche er empfiehlt, besteht aus: Acid. chrom. 1 g. Acid. nitr. conc. 2 cc. Aqua dest. 200 cc. Nach der Entkalkung wird der hiermit präparirte Knochen sorgfältig und vollständig ausgewaschen und in Alkohol gehärtet. — 2) Salzsäure von 12 Procent. — 3) Pikrinsäure. Gesättigte Lösung, die beim Ge- brauche mehrfach erneuert wird. Unter „dissociating fluids" versteht der Verf. solche Flüssigkeiten, welche gewisse Theile eines Gewebes lösen oder erweichen, während andere Partien intact bleiben und auf mechanischem Wege isolirt werden können. Hierher gehören : 1) Jodserum. Es löst die Kittsubstanzen zwischen den Zellen in 1 bis 2 Tagen. 2) Chromsäure nicht stärker als 0-2 Pro- cent, sehr brauchbar zur Isolirung von Muskelfibrillen und Nervenzellen. 3) Osmiumsäure wird bis zu Iprocentiger Lösung oft angewandt. 4) MüLLEK'sche Lösung für Magen und Niere brauchbar, 5) Schwefel- säure zur Isolirung verhornter Epithelien gebraucht, welche nach der Einwirkung mit schwachem Ammoniakwasser gewaschen werden. 6) Salzsäure wird öOprocentig zur Isolirung der Harncanälchen benutzt. Die Nierenschnitte werden hernach ebenfalls mit alkalisch gemachtem Wasser ausgewaschen. 7) Kalilauge wird 30proceutig für Muskel- und Nervengewebe gebraucht. Als normale indifferente Flüssigkeit werden vom Verf. schliesslich noch erwähnt: 1) Kochsalzlösung (7-5 g Na Cl auf 1000 cc destillirtes Wasser). 2) Blutserum. 3) Humor aqueus. 4) Jodserum. Griesbach (Basel). I, 4. Referate und Besprecliungen. 577 Kingsley, J. S., Rapid microscopic mounting (Amer. Monthly Microsc. Journ. Vol. V, Nr. 1, p. 1). Der Verf. empfiehlt seinen Landsleuten, die namentlich durch Caldwell (Cambridge, England) und Giesbkecht (Neapel) bekannt gewordenen Montirungsmethoden von Serienschuitten. Er weist noch- mals darauf hin , dass zum Einbetten der Präparate , denen mit dem Mikrotom Schnitte entnommen werden sollen, die auszuwählende Paraffiusorte sich hinsichtlich ihrer Härte nach der Temperatur der Jahreszeit zu richten hat. Die verschiedenen Methoden, welche zur völligen Durehtränkung der Objecte mit Paraffin zur Verwendung ge- kommen sind, werden ebenfalls vom Verf. kurz aber übersichtlich be- sprochen, ebenso die Schneidetechnik. Bei letzterer sind einige Be- merkungen des Verf. beachtenswerth : Nachdem man den, das Object tragenden, Paraffiublock gehörig zurecht geschnitten hat, bringt man ihn unter rechtem Winkel zur Schnittlinie in die Klemme des Mikrotoms. Auch das Messer wird in dieser Art gerichtet, so dass der Schnitt grade ausfällt. Besitzt das Paraffin die nöthige Consistenz und schneidet man mit trockener Klinge, so rollen sich die Schnitte nicht auf, haften auch nicht am Messer, haften aber mit ihren Rändern an einander und bilden ein Band. Nachdem man einige Zeit geschnitten, wird das Band ent- fernt, und bis zur weiteren Präparatiou mit einer Glasglocke bedeckt. Behufs Montirung werden dann die Objectträger in bekannter Weise mit Firniss überzogen. Alsdann werden die Schnittbänder in richtiger Aufeinanderfolge darauf gelegt, das Paraffin durch vorsichtiges Erwärmen geschmolzen und die Präparate in üblicher Weise fertig gestellt. Darauf geht der Verf. auf die Tinctionsmethode ein und hebt sowohl die Fär- bung in toto vor dem Schneiden, als auch die Färbung auf dem Object- träger hervor. In der ersteren Methode erblickt er einen Nachtheil. Bei dem Montiren der Schnitte auf dem Objectträger empfiehlt Verf. zur Bequemlichkeit und leichteren Prüfung dieselben derartig in Hori- zontalreihen anzuordnen, dass der erste Schnitt in der zweiten Reihe unter dem letzten in der ersten Reihe, der erste in der dritten Reihe unter dem letzten in der zweiten Reihe, und so fort, zu liegen kommt. Griesbach {.Basel). Lovett, E., Onan improved method ofpreparing embryol- ogical and other delicate organisms for micro- scopical examination (Journ. R. Microsc. Soc. Ser. H vol. HI, 1883, pt. 6, p. 785). Der Verf. verfertigte eine Kittsubstanz von 2 Th. Bleiweiss, 2 Th. Minium und 3 Th. Lithargyrum. Diese Substanzen werden sehr fein 38* 578 Referate und Besprecliungen. I, 4. gemahlen und gepulvert und innig gemischt. Zum Gebrauche wird ein wenig von diesem Pulver mit Goldgrund in einer kleinen Porzellanschale zur Consistenz der gewöhnlichen Anilinfarbe gemischt, wobei nochmals darauf zu achten ist, dass keine ungeriebenen Substanztheilchen mehr vorhanden sind. Mit dem so bereiteten Cement kittet man eine Zelle auf eine Glasplatte und lässt ungefähr 14 Tage lang trocknen. Die Kittmasse verschliesst dann derartig, dass die Zelle, wenn Flüssig- keit hineingegossen wird , keinen Leck zeigt und ist derartig er- härtet, dass man an der Zelle henimfeilen kann, ohne dass sie abbricht. Man reinigt alsdann durch Kratzen und Schaben mit einem scharfen Instrument das Innere der Zelle von übergelaufener Kittsubstanz und wischt mit einem trockenen Tuche nach. Derartige Zellen dienen zum Conserviren und Montiren zarter mariner Organismen und Eier in HAENTSCHE'scher Flüssigkeit. Diese besteht aus 3 Th. Alcohol. abs., 2 Th. reinem Glycerin und 1 Th. Aq. dest. Doch ist es nöthig, diese Gewichtstheile für verschiedene Objecte manchmal abzuändern. Für die verschiedenen Jugeudzustände von Crustaceen, für junge Fische, welche älter als 3 oder 4 Tage sind, für fast alle härteren Eier, für junge Echiuodermen, für die meisten Insecten und für gröbere Pflanzen- gewebe eignet sich die gewöhnliche Mischung recht gut; für andere Objecte, wie beispielsweise die zarten Eier einiger Fische, nudibran- chiater Mollusken etc. thut man gut, auf 3 Th. Aq. dest. nur 1 Th. Alcohol. absol. und 1 Th. Glycerin zu nehmen. Ist die Flüssigkeit zu concentrirt, so schrumpfen die Objecte leicht, ist sie dagegen zu ver- dünnt, so zerfallen die Objecte leicht. Der Verf. empfiehlt allen Zoo- logen, welche am Meere Untersuchungen machen, auf das Angelegent- lichste sich mit einem Vorrath kleiner mit Korkstöpsel verschliessbarer, nummerirter Glasröhrcheu zu versehen, dieselben werden alsdann mit der Conservirungsflüssigkeit gefüllt und die gefangenen Thiere noch lebend oder doch bald nach dem Tode hineingelegt. Es ist nicht zu rathen, den ganzen Fang in ein grösseres Gefäss zu thun, um ihn später zu Sortiren. Wenn sich die Flüssigkeit nach langer Zeit zu trüben beginnt, giesst man sie vorsichtig ab und füllt destillirtes Wasser in das betref- fende Gefäss, dieses giesst man ebenfalls so lange ab, als es sich noch färbt und ersetzt es zuletzt wieder durch frische Conservirungsflüssigkeit. Erst wenn nach Monaten oder Jahren keine Trübung in derselben mehr eintritt, kann man annehmen, dass sie immer klar bleibt. Alsdann kann man zum Montiren übergehen. Zu diesem Zwecke bestreicht man den freien Rand der Zelle mit Kittmasse und giesst, wenn dieser nahezu trocken, in die vorher beschriebene Zelle Conservirungsflüssigkeit, I, 4. Referate und Besprechimgen. 579 welche in den meisten Fällen von ausreichender Concentratiou ist, wenn man sie aus 6 Th. Aq. dest. 1 Th. Alcoh. absol. und 1 Glyceriu be- reitete. Man giesst, nachdem das betreffende Object hineingelegt, so voll, dass die Flüssigkeit einen Meniscus bildet. Dann drückt man ein gereinigtes Deckglas, dessen Fläche, welche mit der Flüssigkeit in Be- rührung kommen soll, man anhauchte, vorsichtig auf den mit Kitt be- strichenen freien Zelleurand, wobei darauf zu achten ist, dass sich keine Luftblasen einstellen. Nachdem die übergeflossene Flüssigkeit beseitigt und das Präparat abgetrocknet, stellt man eine innigere Verbindung der Deckplatte mit der Zelle dadurch her, dass man mit derselben Kitt- substauz nochmals Deckglas und Zellenrand bestreicht. Nach dem Trocknen verleiht man dem Ganzen durch irgend einen Firniss ein hübscheres Ansehen. Die Präparate bewähren sich wegen ihrer Dauer- haftigkeit ausgezeichnet. Grieshach {Basel). Francotte, P., Description des differentes methodes em- ployees pour ranger les coupes en series sur le port-objet. (Bull. Soc. Beige de Microsc. t. X, 1883 — 84 No. 2 p. 43). Verf. beschreibt zunächst die ältere MAYER'sche Methode zur Mon- tirung von Serienschnitten auf ein und demselben Objectträger; alsdann die Verbesserungen von Giesbrecht (welche in dieser Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 113 f. eingehend besprochen wurden) und fügt hinzu, dass des letzteren Methode sich ihm auch zur Montiruug von Diatomeen als sehr brauchbar erwiesen hätte. Dann bespricht er die bekannte Methode von ScHÄLLiBAüM (auch in dieser Zeitschr. 1. c. eingehend berücksiclitigt), bei welcher eine Tinction der Schnitte auf dem Objectträger möglich ist. Auch die ScHÄXLiBAUM'sche Methode findet der Verf. für die Montirung von Diatomeen sehr brauchbar. Grieshach (Basel). FraiiCOtte, P., Description des differentes methodes em- ployees pour ranger les coupes et les Diatomees en Serie sur le port-objet. (Bull. Soc. Beige de Microsc. t. X, 1883—84, no. 3 p. 63 ; cfr. Journ. R. Microsc. Soc. Ser. n vol. IV, 1884, pt. 1 p. 153). Den vorher beschriebenen Methoden von Mayee, Giesbebcht und ScHÄLLiBAUM fügt der Verf. noch die bekannte von Theelfall hinzu, bemerkt, dass sich dieselbe ebenfalls in ausgezeichneter Weise für Diatomeenpräparate eigne und vor der ScHÄiiLiBAUM' sehen folgende Vorzüge besitze: 1) Es ist nicht erforderlich, die Präparate besonders zu trocknen; sie können gleich ganz fertig gemacht werden. 2) Es ist viel leichter Schnitte und Diatomeen in Serien auf einer ganz trocknen 580 Referate iind Besprecliungen. I, 4, Oberfläche zu ordnen. 3) Petroleumätber löst Paraffin schneller und vollständiger. Griesbach (Basel). C Meactions- und TinctionsinetJioden. Oriesbach, H., Die Azofarbstoffe als Tinctionsmittel für menschliche und thierische Gewebe (Arch. mikrosk. Anat. Bd. XXI, 1883, p. 132 ; cfr. Microsc. News vol. III, 1883, no. 31 p. 209, Journ. R. Microsc. Soc, Ser. II vol. III, 1883, p. 446). Den Azofarben gemeinsam ist Löslichkeit im Wasser, den meisten ausserdem eine Resistenz gegen die Extractiou mit absolutem Alkohol, welche den Einschluss der Präparate in Balsam wesentlich erleichtert. Gbiesbach hat eine Reihe derselben geprüft; wir geben hier die Liste des Verf. mit Zufügung der von G. nicht mitgetheilten chemischen Formeln, deren Zusammenstellung wir dem Entgegenkommen eines Collegen ver- danken : 1) A n i 1 i n g e 1 b (Amidoazobenzol) N Cg H3 . N Cg H4 . N Hg 2) S ä ur e g e Ib (Amidoazobenzolsulfosäure) H S O3 . N Cg H4 . [Echtgelb] NC6H4NH2 3) C h r y s 0 i d i n (Diamidoazobenzol) 2 (N eJ) N Cg H3 N Cg H5 4)Phenylenbraun (Triamidoazobenzol) N Cg H3 . 2 (N Hg ) N Cg H4 [Vesusin, Bismarck- NHg braun] 5) Tropaeolin Y (Phenolazobenzolsulfosaures Natrium) (Y = yellow) NaSOa . Cg H4 N . Cg H4 N . OH 6) Tropaeolin 0 (Resorcinazobenzolsulfosaures Natrium) (0 = Orange) f Chrysein, Na S O3 . N Cg H4 . N Cg H3 2 (0 H) Chryseolin, Tropaeolin R.l (R = red) 7) Tropaeolin 00 Diphenylamidoazobenzolsulfosaures Kalium [Orange IV, Orange N]. Ka SO3.NCgH4.NCgH4NH.C6 Hg 8) Tropaeolin 000. a Naphtolazobenzolsulfosaures Kalium Nr. 1 [Orange I] Ka S O3 . Cg H4 N . N Cj g Hg 0 H (a) 9) Tropaeolin 000. ß Naphtholazobenzolsulfosaures Kalium Nr. 2 . [ Orange II Chrys- Ka S O3 . Cg H4 N . N C, « Hg 0 H (|3) aurein. ß Naphthol Orange] 1,4. Referate und Besprechungen. 581 10) Crocein ? Wahrscheinlich Gemisch verschiedener Stoffe, ähn- lich dem Biebricher Schar- lach (15) Azobenzolsiüfo- säureammoniiim- azoßnaphtol- snlfosaures Natrium ßNaphtolazonaphtalinsulfosäure HS03CioH6N.NC,oHfiOH(ß) Xylolazoßnaphtoldisnlfosäure 2(CH3)C6H3N.2(HS03)CioH4NOH(ß) Pseudocumolazoßnaphtholdisulfosäiire 2(CH3)C,H3NC6H2.2(S03H)NC,oH4 0H(ß) 11) Aechtroth [Roccellin, OrseillinNr.3 Riibidin ; Rauwariene] 12) Ponceau R [Xylidinponceau] Ponceau G 13) Ponceau RR. und Ponceau GG 14) B 0 r d e a u X R u n d Naphtalinazoßnaphtoldisulfosäure Bordeaux G 15) Biebricher Scharlach [Ponceau RRR] C,oH7N.NC,oH4 2(S03H)OH(ß) ß Naphtolazobenzolsulfosäure Natrium azobenzol- sulfosaures Natrium (Gemisch der Di- und Tri- sulfosäure eines Azokörpers der Formel a mit Amidobenzoldisulfosäure (b) a = C6H5N.NC6H4 .N.CioHßOH b = 2(HS03)C6H3 .NH., 16) Orange III Dimethylanilinazobenzolsulfosaures Ammonium [Helianthin, Gold-, N H4 S O3 Cg H^ N . N Cg H^ 2 (C H3) N Ho orange]. Von den geprüften Farbstoffen sind unbrauchbar Anilingelb und Chrysoidin ; für Chromsäurepräparate wenig geeignet , hingegen für Alkoholpräparate und frische Organe zu brauchen sind Säuregelb, Tropaeolin Y, Xylidinponceau, Ponceau RR undGG, Biebricher Schar- lach. Für frische Gewebe wenig geeignet sind Tropaeolin Y, Bordeaux R u. G. Speciell geeignet zu Kernfärbungen nach dem HEEMANx'schen Verfahren sind: Phenylenbraun, Trapaeolin 000 Nr. 1 und 2, Crocein, Bordeaux R und G. Die weiteren Einzelheiten würden den Rahmen des Referates überschreiten. Alle Färbungen bewegen sich in gelben bis rothen Farbentönen. Ueber die Verwendung zu Doppelfärbungen fehlen Verf. bis jetzt Erfahrungen. Die Präparate haben sich % Jahre lang gut gehalten; länger sind die Farben noch nicht erprobt. Um zarte gelbe Töne gut zu bewahren, ist statt Nelkenöles absolut farbloses Anisöl zu verwenden. Flesch (Bern). Johne, Zur mikroskopischen Technik. (Dtsch. Zeitschr. f. Thiermed. und vergl. Pathol. Bd. 11, p. 401 bis 403). 582 Keferate und Besprechungen. I, 4. Martinotti, G., Sulla colorazione doppia coU'Ematossi- lina e coU'Eosina. (Gazz. della Clin. Torino. 1883. No. 51). Reuaut, J., Sur le mode de preparation et l'emploi de l'eosine et de la glycerine hematoxyliques en histologie. (Arcli. de Physiol. norm, et pathol. Annee XIII. 1881. p. 640 bis 648). Stöhr, Ph., lieber Mandeln und Balgdrüsen. (Virchow's Arch. f. pathol. Anat. u. Physiol. Bd. XCVII, H. 2, p. 211). Doppelfärbungen mit Hämatoxylin und Eosin gehören zu der grossen Zahl von Tinctionen, bei welchen der eine der beiden zur An- wendung kommenden Stoffe wesentlich die Bedeutung hat, eine Grund- farbe in dem Präparat herzustellen, auf welcher sich die Kernfärbung durch den anderen Stoff in lebhaftem Coutrast abhebt. Am leichtesten und einfachsten ist die in Rede stehende Doppelfärbung an Balsam- präparaten zu erhalten: das in Hämatoxylin tingirte Präparat wird in Nelkenöl aufgehellt, in welchem mit Hülfe eines kleinen Zusatzes von absolutem Alkohol Eosin gelöst ist. (Johne). Weniger einfach ist ein vor mehreren Jahren von Renaut mitge- theiltes Verfahren; von dem Urheber insbesondere für Chromsäure- und Osmiumpräparate empfohlen. Renaut's Hämatoxylin-Lösung wird in der AVeise dargestellt, dass zunächst in Glyceriu von ca. 1 : 260 sp. G. Kali- Alaun bis zur Sättigung gelöst wird; hierzu wird unter Umrühren tropfenweise eine gesättigte alkoholische Hämatoxylin-Lösung hinzu- gefügt (ca. */, Vol. des Alaun- Glycerin), bis das Gemenge tiefviolett erscheint. Nachdem man diese Mischung bis zum Verdunsten des Alkohol einige Wochen in einem vor Staub geschützten Gefäss hat absetzen lassen, wird das Filtrat verwendet. Statt desselben kann man auch einfaches Alaun-Glycerin, gemischt mit ^j^ bis Ya BöHMEn'scber Häma- toxylin-Lösung benutzen. Zur Doppelfärbung wird Alaun-Glycerin mit einer Lösung von Eosin in Wasser oder salzhaltigem Glycerin gemischt, filtrirt und mit Hämatoxylin behandelt. Beide Flüssigkeiten können direct zum Einschluss der Präparate dienen; Ueberfärbung wird durch Ameisensäure und Glyceriu beseitigt. Maetinotti's Verfahren besteht in der Anwendung von in Alkohol löslichem Eosin zur Nachfärbuug der mit Hämatoxylin tingirten Schnitte ; dieselben bleiben 12 bis 24 Stunden in der verdünnten alkoholischen Eosin-Lösung; werden in absolutem Alkohol von der überschüssigen Farbe befreit und in gewöhnlicher Weise eingeschlossen. Ungeeignet ist die Methode für Präparate des centralen Nervensystems. I, 4. Referate und Besprechungen. 583 Stöhk hat ganz neuerdings gleichfalls die Doppelfärbung mit Hämatoxylin und Eosin zur Untersuchung des adenoiden Gewebes und der Veränderungen des Epitheles bei der Durchwindung der Leukocyten empfohlen ; das Eosin kommt in gesättigter Lösung in öOprocentigem Alkohol zur Anwendung, worin die mit Hämatoxylin vorgefärbten Schnitte bis zu einer Viertelstunde verweilen. Nachbehandlung der so gefärbten Schnitte mit Iproceutiger Osmiumsäure ('/j bis Y2 Stunde lang) giebt sehr scharfe Bilder. Wo nicht — wie bei dem zuletzt referirten Verfahren — die weitere Behandlung dies verbietet, möchte Ref. nach seinen Erfahrungen die- jenige Methode erreichen, die, in der Ausführung die einfachste, am besten die nachträgliche Extraction des Eosin ausschliesst, die Färbung mit einer Lösung des Eosin in Nelkenöl oder Kreosot ; dieselbe hat auch dann gute Resultate ergeben, wenn eine specifische Reaction etwa bei der Darstellung eosinophiler Granulationen in Zellen, in Betracht kam. ^ Flesch {Bern). Mitchell, C. L., Staining with Haematoi'ylon. (Proc. Acad. Nat. Sei. Philad. 1883 p. 297 bis 300. cfr. Journ. R. microsc. Soc. Ser. U vol. IV 1884. pt. 2. p. 311). Verf. beschreibt eine neue und einfache Methode zur Darstellung des Hämatoxylins. Es ist bekannt, dass das, nach früherer Methode aus Campecheholzextract oder der käuflichen Drogue angefertigte Hämatoxylin nach kurzer Zeit einer Veränderung unterliegt, trübe wird und einen Bodensatz zeigt, Umstände, die selbst durch wiederholtes Filtriren oft nicht gänzlich zu beseitigen sind. — Nach Verf. liegt die Umwandlung des fertigen Tinctionsmittels an dem Gehalt desselben, an Tannin, welches nach und nach immer mehr Sauerstoff aus der Luft aufnimmt, und sich in complicirte Verbindungen umsetzt. Verf. fasste daher den Gedanken, das Tannin aus der Lösung zu entfernen, imd folgendes Recept ist das Resultat seiner Erfindung: Mitschell's Hematin Staining Fluid. R. Ligni campech. pulv. 60 g (= 2 ounces) Aium. sulpli 270 g (= 9 ounces) Glycerini . . . . 120 g (= 4 fluidounces) Aq. dest (eine hinreichende Menge!) Man benetze das Campecheholzpulver mit so vielem kalten Wasser, dass es leicht durchfeuchtet ist, bringe es auf ein Colatorium und presse vorsichtig so lange Wasser hindurch, bis das Filtrat leicht gefärbt er- scheint. Nachdem das Wasser völlig durchgeseiht, nehme man den Rückstand ab und breite ihn auf Papier zum Trocknen aus. Als- t 584 Referate und Besprechungen. I, 4. dann wird der Alaun in 240 g (8 fluidounces) Wasser gelöst und mit einer genügenden Menge dieser Lösung das trockene Campecheliolz- pulver benetzt. Der Brei wird wieder auf ein Colatorium gebracht, und der Rest der Alaunlösung darüber gegossen. Sobald das Filtrat durchzutropfen beginnt, verschliesst man den das Colatorium tragenden Tricliter an seiner engen Oeffnung mit einem dichtschliessenden Kork und lässt den Inhalt 48 Stunden maceriren. Alsdann entferne man den Kork, lasse die Flüssigkeit ganz abfliessen und filtrire noch so viel Wasser nach, dass das ganze Filtrat 360 g (12 fluidounces) ausmacht. Dieses wird mit dem Glycerin gemischt, filtrirt und dann in gut schliessenden Gefässeu aufbewahrt. Die ausschliesslich conservirende Wirkung des Glycerins kann noch durch geringen Alkoholzusatz erhöht werden. Die so erhaltene Tinctionsflüssigkeit, aus der annähernd alles Tannin durch das Ausdrücken des Campecheholzpulvers mit kaltem Wasser entfernt ist, bildet eine klare schwere Flüssigkeit von tief purpurrother Farbe. Dieselbe verändert sich nicht in der Zeit, und Bodensatzbildung findet auch nicht statt. Verf. schliesst mit einigen Bemerkungen über die Schönheit der mit dem Präparate gefärbten Objecto, die ganz besonders dann hervortritt, wenn man die zu färben- den Objecto auf 12 Stunden in eine Mischung von 4 ctgrm warmen de- stillirten Wassers und 10 Tropfen der Farbstofflösung einlegt. Griesbach (Basel). Cole, A. C, Log wo od staining. (Journ. R. Microsc. Sog. Ser. II vol. IV 1884, pt. 2, p. 310). A. C. CoLE ertheilt dem Campecheholz vor allen anderen in der Mikroskopie zur Verwendung kommenden Farbstoffen die Palme. Ja, je mehr ein Histologe auf diesen Farbstoff Verzicht leistet, indem er andere anwendet, desto mangelhafter werden im grossen Ganzen seine Resultate ausfallen. Dem Campecheholz steht ammoniakalischer Pikro- carmin würdig zur Seite. Mit ersterem Farbstoff angefertigte Präparate sollten nur in Benzolbalsam und solche, die mit letzterem tingirt, nur in Glycerinleim aufbewahrt werden. Derartig bereitete Präparate wür- den nach tausend Jahren noch ebenso schön sein als am Tage der Anfertigung! Dammarfirniss eignet sich als Einschlussmittel für die in Rede stehenden Tinctionen durchaus nicht. Auf das ganze Heer von moderneu Anilinfarbstoffen ist der Verf , einige Spezialfälle ausgenom- men, schlecht zu sprechen, und, obgleich die Tinctionstechnik noch in ihrer Kindheit, verhält er sich als Histologe gegenüber dem Bestreben, neue Farbstoffe auf ihre Brauchbarkeit zu prüfen und eventuell in die Technik einzuführen, urconservativ. Gricshach (Basel). I, 4. Keferate und Besprecliungen. 585 3. Fräparationsmethoden für specielle Zwecke. A. ZoologiscJies, Action of Tannin on Infusoria. (Proc. Linn. Soc. N. S. Wales vol. Vm (1883) p. 383 bis 386; cfr. Journ. R. microsc. Soc. Ser. II vol. IV, 1884, pt. 2. p. 305). H. GiLLiATT hat die Versuche Waddington's über die Einwirkung von Tannin auf Infusorien,* an Paramecium Aurelia wiederholt. Sobald die Einwirkung begonnen, schössen die Thierchen mit grosser Ge- schwindigkeit hin und her und suchten sich unter irgendwelchen, im Objecto befindlichen Pflanzenstoffen zu verbergen. Nach und nach wurde ihre Bewegung langsamer und wälzend, dann folgte eine plötz- liche Contraction des Körpers. Je nach dem Concentrationsgrad der Lösung bot das Wimperkleid einen verschiedenen Anblick dar. Abge- trennte Cilien erschienen in den meisten Fällen stabförmig, nur einige waren spiralig aufgerollt. Verf. hat zahlreiche Versuche mit Tannin angestellt und kommt im Gegensatz zu Waddington zu dem Resultat, dass die eigentliche Wirkung des Tannins eher auf die „Trichocysten" von Paramecium Aureha als auf die Cilien gerichtet sei. Griesbach {Basel). Löwe, L., Beiträge zur Anatomie und Entwicklungsge- schichte des Nervensystems der Säugethiere und des Menschen. Bd. I, 1880, Bd. II, 1. Lief., 1883. Berlin (Denicke's Verlag). Die vorliegende, prachtvoll ausgestattete Monographie von Löwe enthält einleitend eine eingehende Darlegung der bei Herstellung von Schnittserien durch grosse Wirbelthierembryonen zweckmässig zu be- obachtenden Technik. Gleichzeitig ist das hier in der bildlichen Wieder- gabe solcher Schnitte Geleistete und die Art wie es geschah als muster- gültig zu bezeichnen. Das wird es rechtfertigen, wenn in dieser Zeit- schrift etwas näher auf diesen Theil des auch sonst durchaus verdienst- lichen Werkes eingegangen werden soll. Die Methode der Untersuchung, welche Löwe einschlägt, ist die folgende : Die Föten kommen je nach der Grösse und Zartheit in ein- procentige bis voll gesättigte Lösungen von Kali bichromicum, die sehr oft gewechselt werden. Darin bleiben sie monatelang, grössere 0 Cfr. diese Zeitsclirift Bd. I, 1884 p. 300. 586 Referate irnd Besprechungen. I, 4. Objecte sogar jahrelang, so z. B. neugeborene Kaninchen mindestens ein Jahr lang. Nur ganz unverletzte, unzerschnittene Thiere dürfen eingelegt werden. Durch die Veränderung der Blutvertheihuig beim Abtrennen einzelner Theile können leicht die bedenklichsten histologischen Miss- griffe in der Deutung der Objecte entstehen. Immer muss die Flüssig- keitsmenge sehr gross sein. Nachher wird so lange (wochenlang) unter der Wasserleitung ausgewässert, bis das Wasser vollkommen farblos abläuft. Die Embryonen kommen dann bis zur Durchfärbung („was wieder über Jahre sich ausdehnende Zeiträume in Anspruch nimmt") in einprocentigen Carmin, der, so oft er den Ammouiakgeruch verliert, erneuert wird. Ausspülen mit Wasser und Durchtränken der Stücke mit Leimglycerin im Brütofen (1 bis 4 Wochen Dauer) sind die nächsten Procedureo, die mit dem Objecte vorgenommen werden, das schliess- lich auf Eis erkaltet und dann in absolutem Alkohol erhärtet werden muss. • Die Technik des Schneidens so gehärteter Präparate giebt Verf. dann zur Besprechung der bislang gebräuchlichen Mikrotome Anlass. Die Anforderungen, welche bei so schwierigen Objecten, wie es knochen- haltige grosse Embryonen sind, an ein Instrument gestellt werden, sind am besten durch ein nach dem Priucip Bouviee-Gudden gebautes Mikrotom zu erfüllen, das durch eine Schraube an die Tischplatte be- festigt wird. Schneiden unter Wasser ist wegen der Leim-Einbettung nicht nöthig. Verf. bedient sich dabei ungeheurer schwerer doppelt- hohlgeschliffener Messer, zu denen es eines eigenen meterlangen Streich- riemens bedarf. In dem Mikrotom wird das leimdurchtränkte Stück mit Wachs und Oel eingebettet. „Man schrecke", schreibt der Verf., „durch die grossen Zeiträume, die die Härtung und das weiter ge- schilderte Verfahren in Anspruch nehmen, nicht ab. Die Sache geht zwar langsam, aber die Resultate sind ausserordentlich lohnend". Edinger {Fratikfiirt a. 31.). Stilling, J., Untersuchungen über den Bau der nervösen Central Organe I. Th. Kassel u. Berlin (Fischer), 1882 [Technisches]. Verf. hat wieder zu den alten Zerfaserungsmethoden des Gehirns gegriffen, die Dank der hervorragenden Arbeiten B. Stilling's durch die Methode der successiven Querschnitte fast ^anz verdrängt worden sind. Das Buch zeigt aber in seinem Reichthum neu entdeckter Faser- verhältnisse, wie viel noch auf dem alten Wege -geleistet werden kann, wenn die Methode durch chemische Proceduren etwas modificirt und I, 4. Keferate und Besprecliimgen. 587 von einem gesclückten Forscher ausgeübt wird. Die in Chromsalzen g-ebärteten Gehirnstücke kommen nach Auswässeruug in Holzessig, ent- weder rothen, oder rectificirteu weissen, oder endlich und hauptsäch- lich künstlichen Holzessig (Acid, acet. glaciale 100 g. Aqua comm. 800 g, Creosoti guttae 30). Darin quillt das Bindegewebe und wird schliesslich ganz macerirt, so dass die intact bleidenden Nervenfasern unter Wasser mit Pincette und Nadel unter der Lupe präparirt werden können. Etwas zu weich gerathene Stücke kann man durch mehrtägiges Einlegen in rohen Holzessig besser härten, gut gehärtete bringt man gleich in künstlichen Holzessig, und wenn sie darin durch Quellung er- weicht sind, auf mehrere Wochen in rectificirteu. Die Präparate können später mit Pikrocarmin gefärbt in Uhrschalen, die mit Canadabalsam gefüllt sind, conservirt werden. Edinger {Frankfurt a. 31.). Adamkiewicz , A., Neue Rückenmarkstinctionen. I. Er- gebnisse am normalen Gewebe. (Sitzungsber. der k. Acad. d. Wiss. Wien. Math.-naturw. Gl. Bd. LXXXIX 1884. HI. Abth. p. 245. m. 3 Tfln.) Bei bestimmter Anwendung von Safraninfärbung und von Färbung mit Methylenblau treten auf dem Rückenmarksquerschnitt einzelne Ab- schnitte, die man bislang dort nicht unterschied, deutlich durch Farb- unterschiede hervor. Diese vom Verf. chromoleptische Zonen genannten Stellen liegen im allgemeinen, der äusseren Contour des Rückenmarkes folgend, um die graue Substanz herum. Sie nehmen also den innersten Theil der Hinterstränge und beiderseits in den Seitensträngen keilförmige Stellen ein, welche etwa den Winkel zwischen Vorder- und Hinterhörnern ausfüllen. Die nicht chromoleptische Zone liegt wie ein annähernd überall gleich breiter Ring um die Peripherie des Markes. Ganz ähnliche Bilder, wie Verf. sie zeichnet, erhält man zuweilen auf dem Querschnitt von Rückenmark, das rasch wechselnde Härtungsproceduren durchgemacht hat, z, B. erst in Alkohol, dann in Chromsalz, oder erst in Chromsäure, dann in Kali bichromicum kam (Ref.). Die angewandte Technik ist die folgende: I. Safraninfärbung der Schnitte: a) Auswaschen in destil- lirtem Wasser, b) In destillirtem Wasser mit einigen Tropfen Salpeter- säure, c) In die Farbe, eine tief burgunderrothe Safraninlösung, d) Ab- spülen in Alkohol, e) Abspülen in Alkohol absol., f) Nelkenöl, so lange an dieses noch Farbe abgegeben wird. II. Färbung mit Methylenblau: Dasselbe Verfahren, nur bei b Ansäuern mit Essigsäure. Diese Färbungen gestalten sich je nach der Härtung des Rücken- 588 Keferate und Besprecliungen. I, 4. markes in Alkobol oder iu Pikrinscliwefelsänre verschieden. Nach Alkoholhärtung können durch verschieden langen Aufenthalt der Schnitte in der Farbe beträchtliche Variationen in dem erzielten Färbungsbild entstehen. Verf. hat alle so erzielbaren Bilder genau verfolgt und be- schrieben, und muss hier auf das Original verwiesen werden. Nach Härtung in Pikrinschwefelsäure tritt immer Doppelfärbung der Schnitte ein. Blau (Methylenblau) resp. orange (Safranin) werden die mark- haltigen Fasern und das Nervennetz der grauen Substanz, grün (Methylenblau) resp. roth (Safranin) wird das Bindegewebe, die Glia und die Ganglienzellen. An den Nerven localisirt sich die Farbe in den äusseren Partien der Markscheide. Edinger {Franhfurt a. M.). Freud, S., A new histological method for the study of nerve tracts in the brain and spinal cord. Brain 1884. (p. 86). Verf. verwendet die folgende Methode bei der Untersuchung des Rückenmarkes : 1) Härtung in Kali bichr. oder in EEMCKi'scher Flüssig- keit, später in Alkohol, 2) Schneiden und Auswaschen, 3) Einbringen in Goldchlorid 1 : 100 Wasser, welcher Lösung etwa 50 bis 100 cc starker Alkohol zugesetzt werden. Dann 4) Auswaschen in destillirtem Wasser (3 bis 5 Stunden). 5) 2 bis 3 Minuten in Kali caust. 1 : Wasser 5 bis 6. (Keinen Metallspatel anwenden !). 6) Einbringen in lOprocentige Jodkalilösung, wo die Schnitte rosa werden ; 5 bis 6 Minuten. 7) Ab- waschen in Wasser. (Alkohol — Nelkenöl — Balsam). Embryonales Mark muss auf dem Objectträger entwässert werden. Das Verfahren giebt die gleichen Resultate wie die WEiGERT'sche Hämatoxylinfärbung, erfordert aber mehr Sorgfalt und dauert viel länger. Ref. Edinger {FranJcfurt a. 31.). Laydowsliy, M., Mikroskopische Untersuchungen einiger Lebensvorgänge des Blutes. (Vikchow's Arch. f. pathol. Anat. Bd. LXXXVI p. 60 bis 100, m. Tfl. 4, 5, 6). Lavdgvtsky's Mittheilungeu über die Lebensvorgänge in den weissen Blutkörperchen beruhen zum grössten Theil auf Beobachtungen am überlebenden Object, mit Benutzung der RANviEß'schen Gaskammer. Folgende speciellen Untersuchungszwecken bestimmte technische An- gaben entnehmen wir der an interessanten Einzelheiten reichen Schrift, deren wichtigste Ergebnisse allerdings mehr den ungemein mühsamen und anstrengenden Beobachtungen, die unausgesetzt sich oft über viele Stunden erstrecken mussten, als technischen Neuerungen zu verdanken sind. Zum Nachweis der Kerne in den weissen Blutkörperchen — deren Existenz noch in jüngster Zeit Gegenstand der Discussion bildete I, 4. Referate und Besprecliungeii. 589 — dient Behandlung mit Osmiumsäure (Iprocentige Lösung), mit schwachen Lösungen von Pikrin- oder Chromsäure unter nachheriger Färbung mit Rosanilin, Safrauin, oder besser Methylgrün. Letzteres eignet sich auch gut zur Darstellung des Stromas und der Kerne der rothen Blutkörperchen. Zum Nachweise, dass solche nach dem Ab- sterben leicht kleben — es handelt sich um die kernhaltigen rothen Blutkörperchen von Amphibien, nicht um solche des Menschen, deren „GeldroUen-Auordnung" ohne jedes HiUfsmittel zu sehen ist — dient Mischung eines Bluttropfeus mit verdünntem Alkohol Ranvieb's [ca. 30 7o5 1 Th. Alkohol von ca. SO« Caktier = 84-46 % absoluter Alkohol mit 2 Th. H2O ; nach Feey, Ref.) unter Zusatz von etwas ge- pulvertem Methylgrün. Dass die weissen Blutkörperchen, entgegen anderen Angaben nicht klebrig sind, beweist L. durch Injection von wässerigen Lösungen von Indigoblau, Eosin oder auch destillirtem Wasser in das Blut, wonach sich die Plättchen zu grossen Haufen ballen, während die Leukocyten unverändert circuliren. FlescJi (Bern). Bizozzero, J. , et Torre, A., De l'origine des corpuscules sanguins rouges dans les differentes classes des Vertebres. (Arch. ital. de Biol. t. IV. Fase. 3), Zu Studien über die Kerne der rothen Blutkörperchen versetzen die Verfasser der genannten Arbeiten das Blut bezw. das in Theilung begriffene Blutzellen enthaltende Knochenmark mit Kochsalzlösungen von wechselnder Concentration — die von Fall zu Fall ausprobirt wer- den muss, bei Reptilien 0*55 bis 0*60 Procent, mit Zusatz von etwa Yio pro Mille Methyl- oder Gentianaviolett; die Farbe wird in der Weise beigemischt, dass 1 bis 3 Tropfen der gesättigten wässerigen Lösung zu der Salzlösung hinzugefügt werden. Keine andere Farbe färbt gleich schnell oder contrastirt in gleicher Schärfe mit der Grundfarbe des hämoglobinhaltigen Stromas, Bei Thieren mit sehr grossen Blut- körperchen muss nachträglich 0-5procentige Essigsäure hinzugefügt werden, um nach beendeter Tinction die Zellsubstanz transparent zu machen. Besonderes Gewicht für den Nachweis von Theilungsvorgängen in den Blutzellen legen 'die Verff. darauf, dass die Thiere vor der Untersuchung nicht gehungert haben. Zum Studium einiger Eigeu- thümlichkeiteu bei den Theilungsvorgängen im Blut von Auuren- Larven müssen diese letzteren lebend untersucht werden; zur Immo- bilisirung legt man sie vor der Beobachtung in 0*5procentige Curare- Lösuugen. — Bei Fischen, bei welchen die Theilungen sehr spärlich sind, kann man deren Zahl schnell vermehren durch wiederholte Blut- 590 Referate und Besprechungen. I, 4, entziehimgen , zu welchem Zweck man am besten in mehrtägigen Zwischenräumen die grossen Kiemengefässe anschneidet. Flesch {Bern). B, Bacterien. Referent: Prof. Dr. med. P. Baumgarten in Königsberg i. Pr. Celli, A. C, Cruarnieri, Gr., Intorno alla profilassi della tuberculosi [üeber die Prophylaxis der Tuber- culose]. (Arch. per le scienze med. 1883, Vol. VII p. 233). Die Verff. stellten sich in obiger Arbeit die Aufgabe, die für die Aetiologie und Prophylaxis der Tuberculose hochwichtige Fragen zu entscheiden, ob und — positiven Falls — unter welchen Umständen aus dem tuberkelkrauken Körper resp. dessen Producten virulente Tuberkel- bacillen an die umgebenden Luftschichten abgegeben werden. Zu diesem Zwecke untersuchten sie zunächst die Luft in Isolirsälen Schwindsüchtiger auf die in ihr vorhandenen Bacterienkeime und zwar auf folgende Weise: Sie leiteten eine Gasflamme in den unteren Theil eines grossen, oben offenen Hohlcylinders von Weissblech, welcher nach unten in eine kegelförmige Verengerung auslief, in deren untere Oeffnung ein kleiner gebogener Tubus eingefügt war, dessen freies Ende mit einem zweiten nach aussen weit geöffneten Hohlkegel von Weiss- blech in Verbindung gesetzt wurde, in dessen engsten Theil ein dritter, kleiner, kupferner, an der Spitze offener, concentrischer Hohlkegel hin- eingelegt war, welcher an seiner, zuvor durch Glühen desinficirter Innen- fläche eine Lage von KocH'scher Gelatine trug. Die Wärme der Gas- flamme erzeugte einen Luftstrom, welcher, über die Gelatineoberfläche hinweg, durch den gebogenen Verbindungstubus hindurch nach dem grossen Hohlcylinder hin abfliessen musste. Mittels dieses Apparates wurde nun die Luft der Isolirzimmer von Phthisikern, nachdem während der Versuche die gewöhnliche Ventilation in den betreffenden Zimmern ausgeschlossen wurde, zwölf Nächte hindurch, sowohl in gleicher Höhe mit dem Fussboden, als auch in mittlerer und höchster Höhe der Stube, auf die in ihr enthaltenen Bacterien oder Bacterienkeime geprüft. Die Gelatineschicht wurde sofort nach Beendigung des Versuches vor dem Hineinfallen anderer Keime geschützt und theils direct, theils nach einem mehr oder minder langen Aufenthalt im Brütofen bei 30 bis 40" C. sowohl (und zwar mit der EmiLicH'schen Methode) mikroskopisch unter- sucht, als auch zu Impfversuchen in die vordere Augenkammer, Unter- I, 4. Keferate und Besprechungen. 591 hautgewebe und Peritouäalhölile von Kaniuclieu und Meerschweinchen verwandt. In einer zweiten Reihe von Versuchen prüften die Verfasser die Exspirationsluft der Phthisiker auf deren etwaigen Gehalt an Tuberkelbacillen. Sie liessen zu diesem Behufe eine grössere Anzahl Schwindsüchtiger zu wiederholten Malen je 24 Stunden lang in Inter- vallen ausathmen theils 1) auf kleine Behälter von Holz mit concavem Boden, der mit KooH'scher Gelatine ausgekleidet war, und die in den Pausen des Versuchs mit Uhr§chälchen bedeckt wurden, theils 2) in mit Gelatine austapezirte, gut desinficirte Glasröhren, die nur während der Dauer des Versuchs geöffnet wurden, theils 3) in theilweise mit gekochtem destillirten Wasser gefüllte Glaskölbchen, welche durch ver- siegelte Korke, durch welche zwei kleine gebogene Glasröhrchen, deren eines kürzeres an seinem äusseren freien Ende mit sterilisirter Watte verstopft, während das andere längere, in welches hinein der Kranke ausathmete, in die Flüssigkeit eintauchte und an seinem anderen freien Ende mit einem, durch eine Sprungfeder mit Schraube verschliessbaren Gummirohr versehen war; theils schliesslich 4) in Eis eingebettete LiEBiö'sche Ventilatoren, deren Ein- und Ausgangsröhrchen in derselben Weise wie bei 3 armirt waren. Die Gelatineschichten wurden sowohl direct, . als auch nach vorheriger Incubation theils mit Ehklich's Methode bacterioskopisch geprüft, theils einer Anzahl von Kaninchen in die Augenkammer und Bauchhöhle gebracht; das mit der phthisischen Exspirationsluft getränkte Wasser (Apparat 3) wurde ebenfalls theils direct mikroskopisch auf Tuberkelbacillen untersucht, theils in einzelnen Tropfen auf Gelatineculturen, theils als Ganzes in demselben Instrument längere Zeit im Brütofen gehalten und sodann bacterioskopirt ; das Gleiche geschah mit dem im LiEBie'schen Ventilator gesammelten Con- densationswasser. In einer dritten Versuchsreihe experimentirten die Verff. mit den tuberculösen Sputis und stellten zunächst Verdampfungsver- suche damit an. Bacillenreiche dünnflüssige Sputa wurden in einer Retorte im Wasserbade bei 34 bis 40" C. gehalten ; der sich entwickelnde Wasserdampf wurde sechs Stunden lang in der mit Eis umgebenen Ampulle eines Glasrohres aufgefangen, welches dem Hals der Retorte hermetisch eingefügt war. Das Condensationswasser wurde theils direct mikroskopisch nach Ehklich's Methode (nach Eintrocknung von Tropfen desselben auf Deckgläschen), theils zur Cultur auf Kooh- scher Gelatine in den Brütofen gebracht. Da die Menge der ab- gedampften Flüssigkeit bei dieser Versuchsanordnung eine stets nur Zeitsclir. f. wiss. Mikroskopie. I. 4, 39 592 Referate und Besprechungen. I, 4. geringe war, so wurden die Verdampfuugsversuclie durch Aspiration imterstützt und zwar bedienten sich die Verff. hierbei des folgenden selbstconstruirten Apparates : derselbe beginnt mit einer (Fkesenius- schen) doppelschenkeligen Glasröhre, welche mit in reinster Schwefel- säure getränktem Bimstein und an den Enden mit Glaswatte gefüllt ist ; dieser folgt eine zweite, gleiche Vorrichtung, welche, mit der ersten hermetisch vereinigt, Natron-Kalk und hygroskopische Watte als Ein- lage trägt; nun kommt ein grösserer, leicht gebogener Glastubus mit stumpfer Ecke an die Reihe, welcher eine Lage sehr bacilleureichen phthisischeu Sputums enthält; aus diesem Tubus, welcher mit der vor- hergenaunten U-förmigen Röhre luftdicht verbunden ist, geht es durch einen ebenfalls luftdicht schliessenden Verbindungskanal in einen von Eis umgebenen, vor dem Versuch durch Erwärmung auf 150^ sterilisirten LiBBiG'schen Ventilator hinein, dessen Ausgaugsröhre zusammenhängt mit einer gewöhnlichen Wasserpumpe, welche eine Pression von 0*72 mm Quecksilberdruck ausüben kann. Beim Beginn des Versuchs wird der die Sputa tragende Theil des Apparates im Wasserbad auf 35 bis 40" C. erhitzt. Mit Hülfe dieser Einrichtung gelingt es, einen Luftstrom zu aspiriren, der getrocknet und sterilisirt ist, ehe er sich mit dem Pro- ducte der verdampfenden tuberkulösen Sputa beladet, und welches letztere er nachher schleunig in den von Eis umgebenen Ventilator deponirt. Nach einigen Stunden findet sich immer in dem Sammeltubus des letzte- ren ein wasserklares Flüssigkeitsvolumen angehäuft. Dasselbe wurde sowohl direct, als auch nach vorheriger Incubation auf Mikroorganismen untersucht und auch- zu Impfversuchen verwendet. Den Verdampfungsversuchen schlössen sich Experimente an, um zu prüfen, ob das einfache Darüberhinstreichen von Luft den Sputis Mikroorganismen zu entziehen vermag. Es wurde hierbei im wesentlichen der vorige Apparat benutzt, nur wurde die Röhre mit Natronkalk ausgeschaltet, und der Liebig' sehe Ventilator durch sterili- sirte, mit sterilisirten destillirten Wasser resp. hydropischer Flüssigkeit gefüllte, einfache oder U-förmige Eprouvetten ersetzt, in denen die über die Sputumschichteu hinweg gegangene sterilisirte Luft etwaige in ihr suspendirte Keime an die genannten Flüssigkeiten abgeben musste. Diese letzteren wurden dann ebenfalls entweder unmittelbar, oder nach vorherigem Aufenthalt im Brütofen bacterioskopisch investigirt und auch Inoculationsversuche damit angestellt. In weiteren Versuchen wurden Luftströmungen mitten durch tuberculöse Sputa geleitet. Auch hierzu diente im wesentlichen der gleiche Apparat wie vorhin, nur wurden die Sputa statt in die ge- 1, 4. Referate und Besprechungen. 593 bogene, liegende Glasröhre in ein aufrecht stehendes, unten ampuUen- förmig erweitertes Glasrohr deponirt, und zwar zwei Drittheile des Be- hälters erfüllend. Die aspirirte Luft steigt dabei in Form von Blasen aus der Sputummasse empor und wird dann in eine, mit gekochtem destillirten Wasser gefüllte Eprouvette übergeführt. Dieses Wasser wurde dann Kaninchen in die Bauchhöhle injicirt, auch Uebertragungen von Tropfen derselben auf KocH'sche Gelatine gemacht und bacterio- skopißch geprüft. Eine noch andere Versuchsweise bestand darin, die Luftstösse eines starken Blasebalges über die Sputaoberfläche hinwegzu- führen. Bei diesen Versuchen kamen die Sputa in einen sehr grossen und weiten, gebogenen Glastubus mit stumpfer Ecke, in deren Bereiche eine flache Lage bildend. An das Ende dieses Tubus war ein Glas- trichter festgelöthet, der innen mit einer Schicht KocH'scher Gelatine ausgekleidet war und seinerseits mittels einer feinen Verbindungsröhre in eine zu zwei Drittel mit sterilisirtem flüssigen Blutserum gefüllte Eprouvette die ventilirte Luft hineinführte, welche aus dieser Eprouvette, nach Durchsetzung der Blutserummasse, in Flüssigkeitsblasen einge- schlossen, in eine mehrfach in rechten Winkeln gebogene feine Glas- röhre kam, um den innigen Contact der ventilirten Luft mit der Prüfungs- flüssigkeit zu steigern, aus dieser in eine, am Boden mit Serum ver- sehene Eprouvette gelangte, um schliesslich durch das Ausgangsröhrchen derselben nach aussen zu entweichen. Das Experiment konnte ver- längert werden, indem man das Serum aus dem zweiten Probirgläschen in das erste zurückgehen Hess. Nach etwa achtstündiger Dauer der Ver- suche wurde sowohl die Gelatine, als auch das flüssige Serum bacterio- skopisch nach Ehelich' s Methode geprüft, sodann wurden Züchtungs- und Impfversuche mit denselben angestellt. In einer letzten Versuchsanordnung wurde das Princip der Venti- lation mit dem des Luftdurchleitens vereinigt, und zwar geschah dies in folgender Weise: Im wesentlichen wurde der vorige Apparat beibehalten, bis darauf, dass das System des Trichters, der zwei Probir- röhrchen mit dem verbindenden, vielfach rechtwinklig gebogenen Tubus, ersetzt wurde durch zwei grössere Glasröhren, von denen die erste, welche an ihrem unteren Ende ampullenförmig erweitert war, den Zweck hatte. Partikelchen der durch den starken Luftstrom fortgeschleuderten Sputummasse aufzuhalten, die zweite, U-förmig gebogene, etwa bis zur Hälfte mit destillirtem Wasser oder reiner seröser Flüssigkeit gefüllte und an beiden Enden in üblicherweise durch Korke mit ein- und ausführenden Glasröhrchen geschlossene, dazu bestimmt war, die über und mitten durch 39* 594 Referate und Besprechungen. I, 4. die Sputa gegangene Luft aufzufangen. Der lange und weite Glastubus wurde zu Beginn der Versuche im gebogenen Tlieile vollständig mit tuberkulösem Sputum gefüllt und die Luft des Blasebalges, einmal zehn Stunden lang, das andere Mal etwa zehn Tage hindurch täglich zwei Stunden hindurchgetrieben. Das Resultat aller dieser Versuche war, dass tu bereu löse Sputa, so lange sie noch feucht sind, weder beim Ver- dampfen, noch durch den, in irgend einer Art bewirkten Coutact mit Luftströmungen der verschiedensten Ge- schwindigkeiten, die Bacillen der Tuberculose, oder noch allgemeiner ausgedrückt, das Virus tuberculosum an die Luft übertragen. Auch in die Zimmerluft von mit Phthisikern belegten Räumen gehen, ihren Versuchen zufolge, virulente Tuberkelbacillen nicht über. Einige Male fanden sich in den Sammelapparaten anderweitige Bacterien ver- schiedener Art; in diesen Fällen konnten die Verff. aber fast stets eine mangelhafte Sterilisirung etc. von Theilen der Apparate nachweisen. Koch, Gaffky und Löffler, Experimentelle Studien über die künstliche Abschwächung der M ilzbran dbacillen und Milzbrandinfection durch Fütterung. (Mitth. a. d. Kaiserl. Gesundheitsamte Bd. IL, 1884, p. 147 ff.). Die Versuche, über deren hauptsächliche Ergebnisse Koch bereits in einer besonderen Schrift' berichtet hat, bezweckten die Controlle der bekannten Angaben Pasteuk's über die Abschwächung der Virulenz der Milzbrandbacillen und über die durch präventive Impfung mit solchen abgeschwächten Bacillen zu erreichende künstliche Immunität gegen virulenten Milzbrand. Frühere Versuche der Verif. ^ hatten zu keinem mit diesen Angaben übereinstimmenden Resultat geführt, die vorliegende, in grösserem Massstabe ausgeführte Untersuchung bestätigte dagegen obige Thesen Pasteuk's nach der principiellen Seite hin vollständig. Während bei der früheren Versuchsreihe das ToussAiNT'sche Verfaliren der Milzbrandabschwächung geübt worden war, hielten sich die VerflF. jetzt ausschliesslich an das von Pasteub selbst angegebene Verfahren der Abschwächung : Cultiviren der Milzbrandbacillen in neutraler Hühnerbouillon zwischen 42 — 43" C, und während früher nur mit kleineren Thieren experimentirt worden war, wurden jetzt auch Ham- *) E. Koch, Ueber die Milzbrandimpfung; eine Entgegnung auf den von Pasteuk in Genf gehaltenen Vortrag, Berlin 1882. 2) LöFFLER, Zur Immunitätsfrage (Mittheil. a. d. Kaiserl. Gesundheitsamt Bd. I, 1882). I, 4. Referate und Besprechungen. 595 mel, die Versuchsthiere Pasteue's, den Impfungen unterworfen. Da in den bezüglichen Publicatiouen Pastelte's nähere Angaben über verschie- dene wichtige Details der Versuchsanordnung, z. B. über die Apparate und über die Gefässe, in denen die Abschwächung vorgenommen wurde, und über die Menge der in jedem einzelnen Versuche verwendeten Culturflüssigkeit fehlten, so waren die Verff. genöthigt, vielfach ganz selbstständig bei ihren Untersuchungen vorzugehen. Als Brütapparat wählten sie den Thermostaten von d'Aesoa-val (bezogen von Wiesexegg in Paris, 64, rue Gay Lussac), dessen Regulationsvorrichtung nur Schwankungen um wenige Zehntel Grade gestattet. Als Züchtungsgefässe nahmen sie EßLENMEYEK'sche Kölbcheu, und zwar wurde jedes Kölbchen mit 20 cc einer mit kohlensaurem Natron neutralisirten Hühnerbouillon beschickt. In diese Züchtungsgefässe wurden geringe Mengen virulenter Milzbrandsubstanz unter allen Cautelen übertragen, die ersteren danach verschieden lange Zeit im D'AESoxvAi,'schen Apparate zwischen 42 — 43" C. gehalten und die etwaigen Veränderungen der Virulenz durch Entnahme von Proben aus den Culturgläsern, welche entweder direct oder nach vorheriger Reinzüchtung der Bacillen auf mit Fleischwasser- pepton - Gelatine beschickten Objectträgern auf die Versuchsthiere (Mäuse, Meerschweinchen, Kaninchen, Hammel), mittels Impfung oder Injection, übertragen wurden, geprüft. Auf die Verwendung wirklicher Reinculturen zu den Probeimpfungen legten die VeriF. grosses Gewicht, gegenüber Pasteiir, dessen vaccins sich vielfach verunreinigt mit an- deren Bacterien zeigten, und in diesem Zustande, wie die Verff. durch directe Versuche ermittelten, keine gauz sichere Wirkung auslösten. Um das Reinbleiben der dem Abschwächungsverfahren unterworfeneu Milzbrandculturen zu erreichen, verpflanzten sie, nach jedesmaliger Entnahme der Proben für die Präventivimpfungen, die betreffenden Culturen auf je zwei neue Kölbchen mit sterilisirter Hülmerbouillon, wodurch die Wahrscheinlichkeit sehr gross wurde, wenigstens in einem Gläschen eine nicht verunreinigte Cultur zu erhalten. In der That er- gab sich, dass bei diesem Verfahren unter 93 geimpften Gläschen nur in einigen wenigen eine Verunreinigung eingetreten war. Um die ver- schiedenen Abschwächungsstufen des Milzbrandes zu fixireu, wurden die betreffenden Gläschen etwa fünf Tage bei 37" C. zur Sporeubildung aufgestellt. Die abgeschwächten Milzbrandbacillen bewahrten auch in ihren Reinculturen auf Nähr-Gelatine bei Zimmertemperatur der Regel nach ihre physiologischen Eigenschaften dauernd ; nur in einigen Fällen trat spontane Abschwächung resp. Rückkehr zur Virulenz ein ; die Be- dingungen hierfür sind noch genauer zu erforschen. Mit Rücksicht auf eine 596 Referate und Besprechungen. I, 4. bezügliche Angabe Pasteuk's eultivirten die VerflF. durch 17 Generationen hindurch den gänzlich abgeschwächten Milzbrand im Körper der Maus, ohne dass sich hierbei die geringste Steigerung der Virulenz ergeben hätte. Nach Pasteur's Vorschrift war als vaccin I ein Milzbrand, welcher 24 Tage, als vaccin II ein Milzbrand, welcher 12 Tage lang bei 42° — 43° C. gehalten war, zu verwenden. Dem gegenüber stellten die Verff, durch genaue Temperaturmessungen bei ihren Culturversuchen -fest, dass schon Temperaturschwankungen um wenige Zehntel eines Grades erhebliche Differenzen des Virulenzgrades bedingen können, weswegen sie auch gegenüber Pasteuk, welcher den Luftsauerstoff für die Ursache der Abschwächung hält, in der Einwirkung der hohen Temperatur das wesentliche, die Abschwächung bedingende Moment er- blicken, sodass die Bestimmung der Vaccins nach der Zahl der Bruttage als eine unsichere erscheinen musste. Zuverlässiger erwies sich den Verff. ein physiologisches Kriterium. Im Verfolge ihrer äusserst zahlreichen und planvoll durchgeführten Abschwächungsversuche zeigte sich nämlich, dass es eine gewisse Abschwächungsstufe des Milzbrandes giebt (24tägiger Milzbrand ihrer ersten Versuchsreihe), welche zwar wederMeerschweinchen, Kaninchen oder Hammel, dagegen regelmässig Mäuse tödtet — sog. Mäusemilzbrand: dieser diente den Verff. als vaccin I. Als vaccin II benutzten sie eine Abschwächungsstufe, welche so geartet war, dass sie zwar sicher Mäuse und Meerschweinchen, aber nicht mehr sicher Ka- ninchen tödtete, und für Hammel ganz schadlos war (elftägiger Milz- brand ihrer dritten A^ersuchsreihe). Um ganz sicher zu gehen, d. h. um die das Ziel der Versuche bildende Iramunisirung der Hammel möglichst vollständig zu machen, verwendeten die Verff. noch einen III. und IV. Impfstoff (neuntägiger und fünftägiger Milzbrand der dritten Versuchsreihe), deren Einwirkung die Hammel ebenfalls ohne Scha'den vertrugen. Gleichwohl starben bei der Probeimpfung mit virulentem Milzbrand von fünf Hammeln noch zwei; Kaninchen und Meerschweinchen gelang es auch diesmal überhaupt nicht, immun zu machen. Die Verff. untersuchten nun noch weiterhin die praktisch ungemein wichtige Frage, wie sich die der Schutzimpfung unterworfenen Hammel der natürlichen Infection gegenüber verhalten würden. Pasteub hatte angenommen, dass die natürliche Infection hinsichtlich der tödt- lichen Wirkungen der künstlichen nachstehe. Die Verff. zeigten jedoch durch ihre Experimente, dass dies nicht der Fall ist. Die natürliche Infection erfolgt, wie die Verff. nachweisen, hauptsächlich auf dem Wege der Verschluckung von Milzbrandsporen. Der Fütterung mit viru- lenten Milzbrandsporen widerstanden nun aber selbst diejenigen Hammel, I, 4. Referate und Besprechungen. 597 welche nicht nur die Schutzimpfungen, sondern auch die Probeimpfungen mit virulentem Milzbrand durchgemacht hatten, nicht sämmtlich: von zehn Thieren starben zwei. „Die bisher geübte Schutzimpfungsmethode ist daher für die Praxis nur als ein höchst zweifelhafter Gewinn zu be- zeichnen". Hesse, W., üeber quantitative Bestimmung der in der Luft enthaltenen Mikroorganismen, (Mittheil. a. d. Kaiserl. Gesundheitsamte Bd. U, 1884, p. 182 flp.). Koch hatte bereits die von ihm in die bacterioskopische Technik als Substrat für Bacterienzüchtungen eingeführte feste Nährgelatine auch als Mittel zur Untersuchung der Luft auf in ihr enthaltene Mikroorga- nismen benutzt ; eine quantitative Bestimmung der letzteren gestattete jedoch sein Apparat nicht. Einen hierfür geeigneten Apparat zu con- struiren, war die Aufgabe, die sich Verf. gestellt und mit Erfolg ge- löst hat. Seine Methode besteht im wesentlichen in der Durchleitung der Luft durch lange Glasröhren, deren Wandungen mit erstarrter Kocn'scher Nährgelatiue ausgekleidet sind. Mittels eines Aspirators wird der Luftstrom geregelt und zugleich gemessen. Aus der Zahl der auf der Gelatine auftretenden Colonien und der Menge der aspirirten Luft ergibt sich ein genauer ziffernmässiger Ausdruck für den Gehalt der Luft an Keimen (selbstverständlich nur solchen, welche mit dem Nährboden in Berührung und darauf zur Entwicklung kommen). Hesse's Apparat ^ setzt sich dementsprechend zusammen aus einer (in der Ptegel 70 cm langen und 3*5 cm weiten) Glasröhre, welche an ihrem einen Ende durch zwei Gummikappen geschlossen ist, deren nach innen gelegene in der Mitte einen, etwa 1 cm Durchmesser besitzenden, runden Aus- schnitt hat ; das andere Ende ist mit einem knapp anschliessenden 2 cm dicken Kautschukpfropf versehen, welcher in seiner centralen, etwa 1 cm weiten Durchbohrung ein mit zwei Wattepfropfen an beiden Enden verlegtes Glasröhrcheu trägt. Die Röhre und ihre Verschlüsse werden behufs Sterilisiruug 1 — 2 Stunden strömendem Wasserdampfe von lOO*^ C. ausgesetzt 2, und, nach dem Erstarren der Gelatine, (welches in der Weise zu Stande gebracht wurde, dass man die aus dem Sterili- sirungsapparate herausgenommene und etwas abgekühlte Röhre unter ') Derselbe ist mit Zubehör zu beziehen bei Emu. Keller in Schwarzenberg in Sachsen. 2) Der hierbei vom Verf. benutzte Dampfkessel ist für 20 Mark gleichfalls bei E. Eej^leh käuflich. 598 Referate und Besprechungen. I, 4. der Wasserleitung schnell in horizontaler Lage, sie fortwährend hin- und herschiebend und, bis zu fast völliger Erstarrung, sie gleichzeitig schnell um ihre Achse drehend, von da ab, bis zur völligen Erstar- rung, nur noch die horizontale Bewegung ausführend, sodass sich die Hauptmasse der Gelatine nach unten senken kann, abkühlt) noch eine bis zwei Minuten lang in einprocentige Sublimatlösung eingetaucht. Die Röhre wird hierauf in horizontaler Richtung auf ein Stativ, ähnlich den von Photographen benutzten, befestigt, und das im Kautschukpfropfeu steckende Glasröhrchen durch einen Gummischlauch mit einer zweck- mässig construirten Aspirationsvorrichtung ( — zwei durch Gummi- schlauch verbundene, mittels Haken am Stativ befestigte 1 Liter- Glas- kolben, der obere, als Aspirator wirkende, mit Wasser gefüllt, und mit Ansatzröhrchen versehen, deren Durchlasszeit für ein Liter Wasser zuvor empirisch festgestellt wurde - ) in Verbindung gesetzt. Bei Aus- führung der Versuche wird die äussere Gummikappe mit desiuficirten Händen weggenommen und der Aspirator in Gang gesetzt. Die in der aspirirten Luft ' enthaltenen Keime lassen sich jetzt auf der Gelatine, und zwar, wie die Versuche zeigten, stets auf der unteren Seite der Röhre nieder und kommen daselbst einzeln zur Entwicklung ; die Un- tersuchung lehrte, dass die auswachsenden Pilz- oder Bacteriencolonien stets vollkommene Rein culturen waren, und es konnte daher bequem eine Zählung der angesiedelten Keime vorgenommen werden. Ob wirklich sämmtliche der in dem abgemessenen aspirirten Luft- quantum enthaltenen Keime an die Gelatine abgegeben waren, wurde durch das Freibleiben des, in den Ausgangstheil der Röhre hineinra- genden Wattepfropfs von entwicklungsfähigen Keimen coutrollirt. Die Zahl der Colonien nimmt mit der Entfernung von der Eintrittsstelle des Luftstromes stetig ab, sodass die Deponirung der Keime in Form eines langgestreckten Dreiecks erfolgt, die Basis nach der Eingangs-, die Spitze nach der Ausgangsöffuung zu gerichtet; an der Basis der Dreiecks sammeln sich vorzugsweise die Bacterien keime, an der Spitze die Pilz keime an, woraus zu schliesseu war, dass die ersteren specifisch schwerer als die letzteren und demnach nicht als einzelne Individuen, wie die Pilz keime, sondern als Häufchen von Individuen, oder an Trägern haftend, vorhanden sein mussten. 0 Es wurde untersucht die Luft im Freien in und um Berlin, bei trock- ner und feuchter Witterung in Wohnzimmern in Berlin und Schwai'zenberg, in Schulzimmern, in Krankensälen, in Ställen, in einem Hadersortirsaal, Boden- luft, Luft, die durch keimreiche Flüssigkeiten durchgeleitet war, die Luft nach ihrem Durchgange durch verschiedene Baumaterialien etc. etc. I, 4. Keferate und Besprechungen. 599 Die Röhrenöffnung war nicht von erheblichem Einflnss auf die Zahl der abgelagerten Keime, dagegen zeigte sich die Wahl der* Stromstärke von Bedeutung,- indem bei sehr langsamem Ansaugen die schwereren Keime an der Eingangsöffnung zurückgehalten wurden. Wenn die Luft eine Röhre von 70 cm Länge mit einer Geschwindigkeit durchfliesst, dass auf 1 Liter Luft im Freien 2 — 3 Minuten, in bewohnten Räumen 3 — 4 Minuten gerechnet werden, so kann man unter gewöhn- lichen Verhältnissen annehmen, dass alle Keime in der Röhre aufge- fangen werden. Des Weiteren auf die für hygienische Fragen nicht unwichtigen Untersuchungs e r g e b n i s s e einzugehen, ist hier selbstver- ständlich nicht der Ort. Es sei nur noch bemerkt, dass die wichtigsten Untersuchungsergebnisse durch sehr schöne colorirte Abbildungen illu- strirt sind, und dass es gelungen ist, die Versuchsresultate dadurch auf dem Status quo zu fixiren, dass schweflige Säure durch die Röhre durchgeleitet wurde, welche die Colonien zum Absterben brachte, ohne ihr Aussehen etc. wesentlich zu verändern. rischei'j B. und Proskauer, B., lieber die Desinfection mit Chlor und Brom. (Mittheil. a. d. Kaiserl. Gesundheitsamte Bd. II, 1884, p. 228 flP.). Die Untersuchungsmethode, deren sich die Verflf. bei ihren für die Desinfectionslehre sehr interessanten und wichtigen Untersuchungen über die desinficirende Wirkung der Chlor- und Bromdämpfo auf pflanz- liche Mikroorganismen bedienten, bestand im wesentlichen darin, dass die Desinfectionsobjecte in siebartig durchlöcherten Paraffin näpfchen, welche an einem Glasstabe, der durch die Mitte ihres Bodens hindurch- ging, über einander befestigt waren, innerhalb einer durch eine Klappe mit vulcanisirtem Kautschuk gasdicht verschlossenen Glasflasche von bestimmtem Rauminhalt gehalten wurden , in welcher sie verschieden lange Zeit (bis zu 24 Stunden lang) der Einwirkung einer nach zweck- entsprechendem Verfahren entwickelten, genau messbaren und bezüglich ihres Verhaltens in der Flasche controUirbaren Chlor- resp. Brommenge, theils in trockner, theils in mehr oder minder feuchter Luft, aus- gesetzt waren. Als Desinfectionsobjecte kamen sowohl die aller- verschiedensteu Arten pathogener und nicht pathogener Bacterien, als auch Hefen, Schimmelpilze und Sarcine, theils in sporenfreiem Zustande, theils sporenhaltig zur Verwendung. Zu den meisten Versuchen wurden Seidenfäden, an denen auf Nährgelatine oder Kartoffeln gezüchtete Reinculturen der zu prüfenden Mikroorganismen angetrocknet waren, benutzt. Neben solchen Seidenfäden wurde aber auch die auf gekochten Kartoffeln gezüchtete, und au dünne Scheiben der letzteren angetrocknete 600 Keferate und Besprechungen. I, 4. Reincultur selbst verwendet. Ausser den Mikroorganismenreincnlturen 'wurde ferner auch (eingetrocknetes) tuberculöses Sputum und Gartenerde in Substanz geprüft. Die meisten Objecte kamen lufttrocken in den Versuch; bisweilen wurde ihnen jedoch durch einen Exsiccator noch weiter Feuchtigkeit entzogen, oder andererseits ihnen durch Verweilen unter einer feucht gehaltenen Glocke ein grösserer Feuchtigkeitsgehalt beigebracht. Die Gartenerde imd das tuberculöse Sputum kamen stets in Filtrirpapierkapseln eingewickelt zur Verwendung ; wiederholt wurden aber auch Seidenfädenpräparate in Filtrirpapierumhüllung der Chlor- resp. Bromeinwirkung ausgesetzt. Der Effect dieser letzteren wurde ganz allgemein theils durch Aussaat von Proben der Versuchsobjecte auf Fleischwasserpeptongelatine, theils durch Verimpfimg solcher Proben auf geeignete Versuchsthiere, bei stetiger Anstellung von Parallelversuchen mit den entsprechenden nicht gechlorten resp. gebromten Substanzen controUirt. Es wurde bei dieser Versuchsanordnung kein einziger Mi- kroorganismus gefunden, dessen Abtödtung durch Chlor resp. Brom nicht schliesslich geglückt wäre. Von bedeutendem Einflüsse ist bei der Desinfection durch die genannten Gase der Feuchtigkeitsgehalt sowohl der mit den Gasen geschwängerten Atmosphäre, als auch der- jenige der zu desinficirenden Objecte selbst. „Die Desinfection geht am leichtesten und sichersten von Statten, wenn das Chlor (resp. Brom) in einer mit Feuchtigkeit gesättigten Atmosphäre auf möglichst feuchte Objecte einwirkt. Bei einer mittleren Luftfeuchtigkeit kann durch ein Volumprocent Chlor innerhalb 24 Stunden eine Desinfection aller in lufttrockenem Zustande befindlichen Mikroorganismen erreicht werden". Für Brom genügte ceteris paribus schon ein weit geringerer Procent- gehalt. — Ausser den beschriebenen Versuchen in der Glasflasche stellten die Verff. entsprechende auch in geeigneten Kellerräumen an; der Erfolg derselben stand jedoch gegenüber dem bei den Glasflaschen- experimenten erzielten erheblich zurück, was darauf beruhte, dass sich die Gase nur sehr ungleichmässig in dem Kellerraume vertheilten und stets eine grosse Quantität derselben, wie die Berechnung ergab, ver- loren ging, sodass es nur mit grosser Mühe gelang, einen bestimmten Chlorgehalt (beim Brom glückte dies gar nicht) während einer be- stimmten Zeit festzuhalten. Immerhin war die Desinfectionsleistung besonders die des Chlor, verglichen mit derjenigen anderer gasförmigen Mittel, z. B. der schwefligen Säure, auch in den Kellerräumen eine recht erhebliche: von den oberflächlich gelegenen Infectionskeimen er- wies sich der weitaus grösste Theil vollständig desinficirt, während allerdings die versteckt liegenden, also dem Zutritt des Gases schwerer I, 4. Referate und Besprechungen. 601 zugänglichen Objecte, wenig oder gar nicht beeinflusst sich zeigten. Von einem näheren Eingehen auf die objectiven Resultate der Arbeit und auf die aus denselben für die Desinfectionspraxis sich ergebenden, von den VerfF. hervorgehobenen Schlussfolgerungen muss hier Abstand genommen werden. Loeffler, F., Untersuchungen über die Bedeutung der Mikroorganismen für die Entstehung der Diph- therie beim Menschen, bei der Taube" und beim Kalbe. (Mittheil. a. d. Kaiserl.GesundheitsamteBd.il, 1884, p. 421 ff.). Verf. bezweckte zunächst den Nachweis des constanten Vorkommens bestimmter Mikroorganismen bei dem diphtheritischen Processe. Zu diesem Behufe schien es vor allem nöthig, eine Färbemethode ausfindig zu machen, mit welcher womöglich alle bekannten Bacterien gefärbt werden könnten. Als eine solche erwies sich eine kalihaltige Methylen- blaulösung von folgender Zusammensetzung: 30 cc einer concentrirten alkoholischen Methylenblaulösung zu 100 cc einer Kalilösung von 1:10000 Wasser. Es genügt, die Schnitte nur wenige Minuten in dieser Lösung zu lassen, um die Mehrzahl aller bekannten Bacterien ganz intensiv zu färben. Nach der Färbung werden die Schnitte kurze Zeit in einer halbprocentigeu Essigsäurelösung einige Secunden hin und her bewegt, dann in absolutem Alkohol gut entwässert, darauf in Cedernöl gebracht und endlich in Canadabalsam eingelegt. Mit Hülfe dieser Methode wurden bei einem Untersuchungsmaterial von 27 Fällen in den diphtheritischen Membranen neben anderen ganz inconstanten Formen zwei häufig wiederkehrende Mikroorganismen- arten aufgefunden : erstens ein kettenbildender Mikrokokkus, und zwei- tens eine Bacillusspecies, die Verf als identisch ansieht mit den von Klebs zuerst bei dessen „bacillärer Diphtherie" entdeckten Stäbchen- bacterien. Von beiden Mikroorganismenformen ist es Verf. gelungen, nach den im Kaiserlichen Gesundheitsamt geübten und aus den voran- stehend referirten Arbeiten genügend bekannten Methoden der Cultivi- rung auf festem durchsichtigem Nährboden, Reinculturen darzustellen. Der kettenbildende Mikrokokkus wurde anfangs ausschliesslich auf Fleischwasserpeptongelatine reingezüchtet ; derselbe wächst aber auch, wie spätere Versuche erwiesen, auf erstarrtem Blutserum und gekochten Kartoffelscheiben, wenn auch weniger üppig; seine Vegetation findet sowohl bei Zimmer- als auch bei Brüttemperatur statt. Am dritten Tage nach der Aussaat bemerkt man bei centraler Beleuchtung in den Impfstrichen kleine wasserhelle Tropfen, welche einen leicht grauen 602 Referate und Besprechungen. I, 4. Farbeuton haben; liegt eine Colonie au der Oberfläche der Gelatine, so sieht man bei schwacher Vergrösserung eine rundliche, graue, fein punktirte Ausbreitung, welche am Rande sich in feine gekräuselte Linien auflöst, welche letzteren sich bei mikroskopischer Untersuchung als aus den Individuen des kettenbildenden Mikrokokkus zusammenge- setzt erweisen. Sowohl morphologisch als auch hinsichtlich seines Wachsthums in den Gelatineculturen hat dieser kettenbildende Mikro- kokkus die grösste Aehnlichkeit mit dem Erysipelmikrokokkus ' ; er verhält sich auch, wie Verf. ermittelte, hinsichtlich seiner Wirkungen auf Thiere ganz ähnlich, so dass eine nahe Verwandtschaft, wenn nicht Identität beider Mikrokokkusformen angenommen Averden muss. Jeden- falls hat der kettenbildende Mikrokokkus nach den Untersuchungsergeb- nissen des Verf. für die Diphtherie nur eine secundäre Bedeutung. Anders liegt die Sache bei den „IvLEBs'schen Stäbchen". Auf Fleisch- wasser-Pepton-Gelatine wuchsen diese nicht; dagegen gelang es ohne besondere Schwierigkeit, auf erstarrtem Blutserum ^ bei 37 ^ C. Rein- culturen derselben herzustellen. Dieselben bilden hierselbst schon nach 3 Tagen weissliche undurchsichtige Colonien, welche das Serum nicht verflüssigen. Das Wachsthum findet nicht unter 20 ^ C. statt ; daher auch das Ausbleiben der Vegetation auf der Gelatiue. Die Lebensdauer der cultivirten Bacillen scheint etwa 3 Monate zu betragen. Morpho- logisch und hinsichtlich der Färbungseigenschaften verhalten sich die reingezüchteten Bacillen ebenso wie die in dem Aussaatmaterial vor- handenen. Sie gleichen an Länge etwa den Tuberkelbacillen, sind aber etwa doppelt so dick wie diese ; an den Polen sind sie meist etwas dunkler gefärbt und leicht verdeckt. Sichere Sporeubildung wurde auch in den Culturen nicht beobachtet. Auf gekochten Kartoffeln wachsen die Stäbchen nicht. Mit den Reinculturen dieser Stäbchen wurde nun eine ausserordentlich grosse Zahl von Uebertragungsver- suchen auf die allerverschiedensten Thierspecies angestellt, und in der That bei einem Theil der letzteren pathologische Veränderungen er- halten, welche mit der Diphtherie des Menschen wenigstens hinsichtlich des localen Befundes an der Inoculationsstelle (Bildung derbfibrinöser Häute auf den geimpften Tracheal-, Conjunctival- und Vaginalschleim- häuten) ziemlich übereinstimmen. Eine ganz sichere Entscheidung ») Vergl. FicHLEisEx, die Aetiologie des Erysipels. Berlin, bei Th. Fischer, 1883. Ref. ') Am besten erwies sich eine Mischung von 3 Th. Kälber- resp. Hammel- blutserum und einem Theil neutralisirter Kalbfleischbouillon, welcher 1 "/o Pepton, 1 "/o Traubenzucker und '/a '-% Kochsalz zugesetzt war. Ij 4. Referate und Besprecliungen. 603 darüber, ob die IvLEBS-LoEFFLER'sclieu Bacillen das Contagium der menschlichen Diphtherie darstellen, ist jedoch, nach des Verf. eigner kritischer Würdigung seiner Untersuchungsergebnisse, noch nicht ge- wonnen. — Den Schluss der, trotz des nicht erreichten definitiven Ab- schlusses der Frage nach den Diphtheriebacterien, höchst verdienst- und werthvollen Arbeit bilden Untersuchungen über die spontane Diphtherie bei der Taube und beim Kalbe, welchen Krankheitsprocessen nach diesen Untersuchungen höchst wahrscheinlich je ein bestimmter, von dem menschlichen Diphtheriebacillus morphologisch und biologisch ver- schiedener Bacillus zu Grunde liegt ; der Bacillus der Taubendiphtherie Avurde von dem Verf. nach dem bekannten Verfahren auf Fleisch wasser- peptongelatine, auf Kartoffelscheibeu nnd Blutserum reingezüchtet und durch Uebertragung der reincultivirten Bacillen auf Tauben ein der spontanen Taubendiphtherie sehr ähnlicher Krankheitsprocess erzeugt. Auch andere Thiere, besonders Mäuse, erkranken durch diesen Bacillus in sehr charakteristischer Weise. Die Reinculturen des Bacillus der Kälberdiphtherie gelangen iudess zur Zeit noch nicht befriedigend. — Ausserdem lernte Loeffleb einen auf der Oberfläche breiter Condylome schmarotzenden Bacillus kennen, welcher sowohl morphologisch als bezüglich seiner pathogeuen Wirkung mit dem Bacillus der Kälber- diphtherie die grösste Aehnlichkeit besass und auch spontane diphtherie- artige Ansteckung bei Kaninchen (durch Ablecken) veranlasste. Diese Bacillen wuchsen einigermassen üppig nur in neutraler Kaninchen- bouillon, in der sich nach 3 Tagen um das hineingeworfene Partikel- chen ein nur aus den Bacillen bestehender weisser Flaum bildete. C. Botanisches. I Tschirch, A., Untersuchungen über das Chlorophyll. III. (Ber. Dtsch. Botan. Gesellsch. Bd. I, 1883, H. 3 p. 137—149). III Schluss (1. c. H. 4 p. 171 — 181). IV. Die Reindarstellung des Chlorophyllfarbstoffes (1. c. Generalversammlungsheft p. XVII— XII). V. (1. c. H. 9 p. 462—471). In diesen Arbeiten ^ finden wir einige, in der Mikrochemie viel- leicht anwendbare Methoden angegeben, diese wollen wir nun zusammen- stellen. (III.) Hypo chlorin. Das Hypochlorin (Hypochlorin und Chloro- phyllan werden als identisch mit einander gebraucht) besitzt in den ») Cfr. hierzu diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 302 ff. 604 Referate und Besprechungen. I, 4. ersten Krystallisationen (es wird nach Hoppe-Seyler's oder A. Meyer's Methode gewonnen), die noch durch andere Steife verunreinigt sind, die eigenthümlichen peitschenartigen Formen oder bildet Tropfen mit Kr3^stallaggregaten oder korkzieherartige Fäden. Lässt man aber die Lösungen langsam erkalten, so erhält man die mannichfachsten Formen. Birnförmige Körper, sehr lange, vielfach wie Pilzhyphen durcheinander und umeinander gewickelte Fäden , wellig gebogene Nadeln, flache Tafeln oder kuocheuförmige Bildungen wechseln mit einander, doch zeigt eine Krystallisation meist nur eine der genannten Formen. Erst beim Umkrystallisiren treten die Nadelbüschel oder sphärischen Aggre- gate um einen Punkt gestellter Nadeln auf. Aus sehr lange an einem ruhigen Orte der Verdunstung überlassener Graschlorophylllösung hat Verf. nach einigen Monaten grosse schöne Aggregate von rechtwinkligen Tafeln (quadratischen Systems?) erhalten, diese sowohl, wie die Roh- hypochlorin-Krystallisationen besitzen im durchfallenden Lichte einen olivengrüuen bis blaugrünen Farbenton, im auffallenden Lichte sind sie sammet-schwarz. In Folge ihrer tiefen Färbung zeigen sie bei gewöhn- lichem Tageslicht keine Polarisationserscheinuugen, wohl aber im directen Sonnenlicht ein herrliches Farbenspiel. Sie lösen sich in kaltem 96pro- centigem Alkohol langsam, leichter in heissem, sehr leicht in Aether und Benzin. Ln Spectrum der stark fluorescirenden Lösung liegt der positive Streifen (bei mittlerer Schichtendicke) zwischen X = 58 und 57. Charakteristisch für die Körper der Chlorophyllaugruppe ist das Band IV b. Es fehlt dem normalen Chlorophyllspectrum. Die Eigenthümlichkeiteu des Chlorophyllanspectrums, die dieses von dem normalen Chlorophyllspectrum unterscheiden , sind folgende : Band I ist beim Chlorophyllan etwas schmäler als in normalen Ghlorophyll- lösungen. Band II liegt beim Chlorophyll mehr gegen Roth (etwa von X = 62 bis 60), ebenso Band III, Band IV b ist beim Chlorophyllan neu hinzugetreten, die Eudabsorption ist coutiuuirlich ohne Bänder, die mittleren Streifen II und IV sind dunkler und breiter als in Chlorophyll- lösungen. Diese Umstände bedingen die gelbgrüne Farbe der Chloro- phyllanlösungen. Besonders in den Benzinlösuugen treten die Streifen scharf hervor. Streifen UI in alkoholischer Lösung kaum sichtbar, wird hier sehr deutlich. — Die Chlorophyllanlösungen fluoresciren ähn- lich der normalen Chlorophylllösuugen und zwar emittiren sie fast reines Roth. Das Spectrum des Fluorescenzlichtes beschränkt sich auf einen Streifen im Roth, der beim Chlorophyll zwischen X ^ 62 und X = 68, und beim Chlorophyllan zwischen X = 64 und X = 68 liegt, also bei letzteren schmäler ist. — Die Lösungen des Chlorophyllans sind sehr I, 4. Referate und Besprechungen. 605 beständig. Im diffusen Tageslicht können sie sehr lange (fast wochen- lang) unverändert aufbewahrt werden. — Das Chlorophyllan-Hypochlorin ist nach Verf. auch mit dem von Gautier beschriebenen krystallisirten Chlorophyll identisch. Es repräsentirt ein Oxydationsproduct des Chlorophyllfarbstoffes, was Verf. dadurch zu erweisen glaubt, dass man es mit Hilfe von nascirendem Wasserstoff etc. in Chlorophyll resp. in die Natriumverbindung der Chlorophyllinsäure zurückführen kann. In concentrirterSchwe feisäure lösst sichdasChloro- phyllan mit schön blau -grüner Farbe. Concentrirte Salzsäure löst selbst kochend nicht Alles; es findet da- bei eine Spaltung statt. Es entsteht ein blaues in con- centrirte r Salzsäure lösliches Chlorproduct (das von Feemy als ein Chlorophyllbestandtheil beschriebene Phyllocyanin der Autoren) und ein indieser unlöslicher, aber inAlkohol lös- licher brauner Körper. Das blaue Phyllocyanin ist in seiner Lösung in concentrirter Salzsäure auch gegen Licht sehr beständig, zersetzt sich jedoch mit Alkalien leicht. Das Phyllocyanin lässt sich unzersetzt aus der salzsauren Lösung nicht abscheiden. Durch Ein- dampfen, aber auch durch Verdünnen mit grossen Mengen Wasser scheidet sich aus der blauen Phyllocyaninlösung die Phy llocy anin- säure ab, und zwar mit Wasser behandelt in Form brauner Flocken, die sich wie der durch Eindampfen gewonnene Rückstand verhalten. Des Verf. Untersuchungen zeigen , dass genetische Beziehungen zwischen den gelben und rothen Farbstoffen vieler Blumenblätter und Fruchtschalen, ja selbst unterirdischen Organen und dem Chlorophyll be- stehen müssen. Nicht nur oberirdische Organe, sondern auch unter- irdische enthalten zuweilen Farbstoffe der Chlorophyllgruppe, z. B. die Radieschen enthalten in ihrer Schale einen solchen Stoff, der neben zwei Streifen im Gelb und Grün deutlich den Chlorophyllstreifen bei C zeigt. Noch näher dem Chlorophyll steht der schön krystallisirende Farbstoff der Mohrrüben, das Daucin '. Am auffallensten jedoch ist es, dass auch die Lösung des blau-grünen Farbstoffes des grün- faulen Holzes, welcher bekanntlich den Namen Xy lindein (Tylo- chlorsäiu'e) den Chlorophyllstreifen (I. II) zeigt. Erythrophyll (Bougaeel). Unter gewissen Bedingungen lassen sich an den Chlorophyllköruern selbst bei geringem Säurezusatz rothe Krystalle darstellen (beobachtet durch Frank), die niemals unter den gleichen Bedingungen in etiolirten Pflanzentheilen auftreten und in ihrer *) Cfr. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 306. 606 Referate und Besprechungen. I, 4. Menge contiuuirlich zunehmen, wenn mau die betreffenden Blätter lang- sam ergrünen lässt und alle Stunden eines derselben in verdünnte Säure legt. Da diese Krystalle aber identisch mit jenen uuter den gleichen Bedingungen in den Lösungen auftretenden zu sein scheinen, so ist Verf. namentlich auch im Hinblick auf sein spectroskopisches Verhalten geneigi, das Erythrophyll Bougakel's nicht als ein Begleiter des Chlorophylls, sondern als ein Spaltungsproduct desselben zu betrachten. Etiolin. Charakteristisch für das Etiolin ist die Lage des Ban- des II a, zwischen X = 63 bis X = 62, wodurch das Etiolin sicher von dem Xanthophyll, mit dem es G. Kraus identificirt, unterscheid bar. Die Etiolinkörner zeigen auch die Hypochlorinreaction, d. h. die Ab- scheidung gelbbrauner Tropfen unter dem Einflüsse von Säuren. Mikro- chemisch sind diese Ausscheidungen von dem Chlorophyllan nicht zu unterscheiden. Demnach werden sie sicher von einem anderen Körper gebildet, der, wenn schon dem Chlorophyllan verwandt, doch nicht mit diesem identisch ist. KyanophyU (G. Kraus). Verf. benutzt zur Darstellung des Kyanophjils die Eigenschaft des Chlorophylls in Salz- lösungen unlöslich zu sein. Setzt man nämlich zu einer con- centrirten, ganz frischen Chlorophylllösung eine conceutrirte neutrale Lösung von Baryumchlorid oder Kupfersulfat, so fällt das gesammte Chlorophyll (KyanophyU, G. Kraus) als flockiger Niederschlag über Nacht aus, lässt sich sammeln, mit verdünntem Alkohol waschen und durch wiederholtes Auflösen und Eindampfen von den noch anhängen- den Beimengungen trennen. Das so gewonnene Chlorophyll besitzt alle chemischen und spectroskopischen Eigenschaften des Kyanophylls. Als Reinchlorophyll bezeichnet Verf. das durch Reduction des Chlorophyllaus mittels Zinkstaub erhaltene Product. Verf benutzt zur Bezeichnung der charakteristischen Bänder des Spectrums der Chlorophyllgruppe zwei neue Ausdrücke. Und zwar da Band I bei allen von ihm untersuchten Körpern der Chlorophyllgruppe von allen Bändern das beständigste ist, während die Veränderungen des Spectrums bei chemischen Eingriffen sich vornehmlich an den Bändern 11 — IV vollziehen, hier aber, was lutensitäts- und Ortswechsel, sowie Neigung zu Spaltungen betrifft, eine geradezu ins Unendliche gehende Mannig- faltigkeit an den Tag tritt, so hat er den Chlorophyllstreifen I, das „stabile Band (bände specifique des Chantards), die anderen „labile Bänder" genannt. Während, nach geringen Modificationen, die sich nur durch Intensitäts- und Ortsänderungen der „labilen" Bänder manifestiren, unter Umständen eine Regeneration des Rein- I, 4. Referate und Besprechungen. 607 Chlorophylls möglich ist — z. B. durch Reduction des Chlorophyllaus — ist dem Verf. stets, weun das stahileBand alterirt war, eiue Regeuera- tion des Reincjilorophylls (s. oben) bisher uumöglich gewesen. Zur Methode der Spectralbeobachtung. Verf. erwähnt mit Nachdruck, dass Band IV bei Anwendung elektrischen Lichtes viel klarer hervortritt, als bei Sonnenlicht. Diese an blauen Strahlen so reiche Lichtquelle erscheint überhaupt zum Studium der Absorptionen in der brechbaren Spectrumshälfte, z. B. zur Untersuchung der gelben Farbstoffe, viel geeigneter als Sonnenlicht. Bei der Darstellung der Spectren bediente sich Verf. der combinirten Methode von Peixgsheim und Keaus. Er hat nämlich verschieden dicke Schichten des Spectrums neben einander dargestellt und auch die Abschattirung der einzelnen Bänder zum Ausdruck gebracht, da dies bei den difficilen spectroskopi- schen Unterschieden, die zwischen zahlreichen Körpern der Chlorophyll- gruppe bestehen, nicht ohne Werth zu sein scheinen. Schaarschmidt (Klausenhurcj). Kny, L., Das Wachsthum des Thallus von Coleochaete scutata in seinen Beziehungen zur Schwerkraft und zum Lichte (Ber. Dtsch. Botan. Gesellsch. Bd. II, 1884, Heft 2 p. 93—96). Knt experimentirte bei seinen Untersuchungen mit Glasplatten- Culturen; zu diesem Zwecke werden in Cylindergläser von etwas mehr als 4 1 Gehalt mit filtrirtem Leitungswasser gefüllt und je eine Glas- platte, welche nahezu die Breite des Innenraums besitzt, in verticaler Richtung darin befestigt. Demnächst wurden für wenige Tage Stücke frisch gesammelter Wasserpflanzen, auf dereu Oberfläche die Anwesen- heit der Algen resp. Coleochaete festgestellt war, in die Gefässe ge- bracht. Diese kurze Zeit genügte, um Schwärmsporen in hinreicbender Zahl zum Austreten zu bringen. Dieselben kamen auf der Innenwand des Gefässes und auf beiden Seiten der Glasplatte zur Ruhe und wuchsen nach einigen Monaten zu kräftigen, für das unbewaffnete Auge leicht kenntlichen Pflanzen aus. Dieses Verfahren verspricht auch für das Studium der Entwicklungsgeschichte vieler Algen manche Vortheile. Den Schwärmsporen lässt sich durch den Grad der Licht-Intensität be- kanntlich die Bewegungsrichtung und hiermit auch der Ort ihrer An- heftung anweisen. Sind dieselben auf Objectträgern, welche im Wasser in passender Stellung befestigt sind, zur Ruhe gelangt, so ist dem Be- obachter die Möglichkeit geboten, die verschiedensten Entwäcklungs- zustände ohne vorherige Abtrennung vom Substrat zu untersuchen. Schaarschmidt {Klauserihurg). Zeitscbr. f. wies. Mikroskopie. I. 4. 40 608 Referate und Besi3i'echungen. I, 4. Leitgel), H., lieber Bau und Entwicklung der Sporen- häute und deren Verhalten bei der Keimung. 112 pp. gr. 8". m. 3 Tflu. Graz (Leuschner u. Lubeusky) 1884. Die in voranstehend bezeichneter Arbeit niedergelegten ausge- dehnten und mühsamen Untersuchungen führten zu interessanten Resul- taten, welche zu weiterer und erneuter Bearbeitung der Membranen von Sporen- und Pollenkörnern Veranlassung geben dürften. Ein vom Verf. mit wesentlichem Vortheil angewendetes Reagenz (neben Chrom- säure, Chlorzinkjod und Kalilauge) ist die Chromschwefelsäure, d. i. ein Gemenge von Chrom- und Schwefelsäure. Das Reagenz wird am einfachsten durch Uebergiessen des sauren chromsauren Kali mit Schwefelsäure hergestellt, auch ist das zur Füllung der Chromsäure- batterien im Handel als „Chromsäure" vorkommende Präparat gut ver- wendbar. Die werthvolle Wirkung der „Chromschwefelsäure" liegt in der allmählichen Zerstörung der cutinisirten Sporenhäute (Perine, Exine) und in der zeitlichen Differenz zwischen der Lösung der verschiedenen Membranen oder Membranlamellen. Die Zerstörung cutinisirter Mem- branen erfolgt auch in jenen Fällen, wo Chromsäure allein nicht zum Ziele führt. — Aehnlich, aber zu energisch, wirkt Chromsalpeter- säure. Uebrigens ist die Widerstandsfähigkeit cutinisirter Membranen gegen Chromschwefelsäure je nach Anwendung von frischem oder von in Alkohol eingelegt gewesenem Material eine verschiedene; im ersteren Falle ist sie eine weit grössere als im letzteren. Verf. sucht diese Erscheinung durch die Annahme zu erklären , dass an den frischen Sporen ein die Membran durchtränkendes Fett den Angriff des Reagenz hemme. Heinricher. Lagerheim, 0., Eine Präparirmethode für trockene mi- kroskopische Pflanzen. (Bot. Centralbl. Bd. XVIII, 1884, p. 183). Um trockene Desmidiaceen, Oedogoniaceen und andere Algen zu präpariren, weicht man das betreffende Material in Wasser auf, bringt mittels der Pincette ein Pröbchen davon auf den Objectträger und lässt einen oder zwei Tropfen einer Flüssigkeit zufliessen, die man sich folgendermassen bereitet hat: In 5 Th. Wasser wird 1 Th. geschmol- zenes Kaliumhydrat gelöst und der Lösung werden 5*5 Th. Glycerin von Syrupdicke zugesetzt. Hat man die Algen in der Flüssigkeit gleich- massig ausgebreitet, werden sie über der Spiritusflamme ein wenig er- wärmt. Infolgedessen quellen sie auf und nehmen ihre natürliche Ge- stalt wieder an, so dass sie sich bequem untersuchen, zeichnen und messen lassen. Will man Präparate von einer allein aufzubewahrenden I, 4. Keferate und Besprechungen. 609 Art fertigen, nimmt man das Deckglas vorsichtig ab und suclit bei einer schwachen Yergrösserung mittels einer Nadelspitze oder einer Borste die betreffenden Individuen aufzufangen, um sie in Kaliumacetat oder Glycerin einzulegen ; will man dagegen das ganze Material prä- pariren, setzt man nach Emporheben des Deckglases ein wenig Essig- säure zu und schliesst es hierauf ein. So werden die Algen dann in Kaliumacetat und Glycerin conservirt, also in Flüssigkeiten, die für diese Organismen mit Recht als die vorzüglichsten gelten, Dr. 0. E. JR. Zimmermann. Prinz, W. et van Ermengem, E., Recherches sur la structure de quelques Diatomees contenues dans le „Ce- mentstein" du Jutland. (Ann. Soc. Beige de Microsc. t. VIII, 1883, p. 7—74 pl. I— IV). Zwei geschichtete Varietäten des Cementsteins von Jütland (von der Insel Für), nämlich eine braun-chocolatfarbige (brune Moleer Hei- beeg's) und eine hell-braune oder graue (hoide Moleer Heibekg's) wurden untersucht. — Die Schaalen liegen parallel den Schichten des Gesteines — wodurch die Orientirung der Schnitte sehr erleichtert wird — und sind mit Calcit vollständig ausgefüllt. Das Verfahren der Her- stellung von Schliffen ist das gewöhnliche, nur muss man darauf achten, dass die Oberfläche der Dünnschliffe gut abgeglättet sei, auch darf man die Schliffe nicht auf neuen Objectträgern einbetten. Es ist sehr empfehlenswerth, auch Schrägschliffe zu machen^ wo- durch man äusserst dünne und sehr verschiedene Schaalendurchschnitte erhält. Im allgemeinen müssen die Schaalendurchschnitte wenigstens 0*010 — 0'005 mm dünn sein, die Verff. erhielten aber auch solche, welche am Rande unter 3 \i dünn waren. — Man kann die Dünn- schliffe direct in Canadabalsam einbetten, oder die Schnitte werden erst aus dem Gesteine herauspräparirt. Zu diesem Zwecke werden die fertigen Dünnschliffe auf eine halbe Stunde in schwach angesäuertes Wasser (100 g Wasser und einige Tropfen Salzsäure) gelegt. Später concentrirt man allmählig die Flüssigkeit, indem man Salzsäure tropfen- weise hiuzugiebt — endlich wird noch ein wenig concentrirte Säure auf das Präparat gegossen. Die einfach getrockneten Schaalenschnitte können nun eingebettet werden. Die Verff. empfehlen in Aether ge- lösten Canadabalsam und noch mehr Phosphor, ferner Quecksilberbijodid oder Natriumjodid. Scliaarsclimidt (Klausenhimj). Kny, L., Die Beziehungen des Lichtes zur Zelltheilung bei Saccharomyces cerevisiae (Ber. Dtsch. Botan. Gesellsch. Bd. H, 1884, Heft 3 p. 129—144). 40* 6 10 Referate und Bfesprecliungen. I, 4. Wir finden hier eine Methode zum Zählen der Hefezellen be- schrieben. Aehulich ist sie dem von Malassez angegebenen Verfahren zum Zähleu der Blutkörperchen, welches von Rasivius Pedeksen zu- erst bei Hefezellen angewendet worden ist ^ Aus der reinen Presshefe wurde, nachdem sie einige Male in der von Hatduck angegebenen Nährlösung 2 umgezüchtet worden war, ein entsprechendes Quantum derselben in frischer Nährlösung so vertheilt, damit die Zählung in der Kammer leicht ausgeführt werden konnte. Die Kammer bestand aus einem Objectträger von Spiegelglas, welchem eine kleinere, in der Mitte von kreisförmiger Oeffnung durchbohrte Spiegelglasplatte von genau ^/g mm Dicke aufgekittet war. Am Grunde des hierdurch ge- bildeten Troges waren zwei rechtwinklig sich kreuzende Systeme unter einander paralleler Linien in 0'05 mm Abstand mit dem Diamanten ein- geritzt. Wurde nun die Hefe durch starkes Schütteln oder Umrühren in der Nährlösung möglichst gleichmässig vertheilt, ein Tropfen der- selben rasch in den Trog gebracht und ein genau ebeugeschliffenes Deckglas sofort darüber geschoben, so konnte durch Einstellung der Theilungen am Grunde des Troges leicht festgestellt werden, wie viele Hefezellen sich in der Maasseinheit der Nährlösung befanden. Erste Bedingung ist natürlich die gleichmässige Vertheilung der Hefecolonien in der Nährlösung, doch ist dieselbe nur annähernd zu erreichen, da in dem Tropfen, welchen man in den Trog bringt, sich die Zellen resp. Colonien sofort in etwas ungleicher Art vertheilen. Es ist deshalb, um vergleichbare Mittelwerthe zu erhalten, unbedingt nothwendig, dass man die Zählungen stets in denselben Quadraten des Liniennetzes aus- führt. Andere — ganz natürliche — Vorsichtsmaassregeln sind noch: dass mau beim Aufschieben des Deckglases dafür sorge, dass der Rand desselben fest an der Unterlage angesaugt sei, dass keine Luftblasen eingeschlossen werden, dass etwaige nebenschüssige Flüssigkeit rasch dm'ch Fliesspapier entfernt werde, und dass man vor Beginn der Zäh- lung einige Minuten wartet bis sämmtliche Hefezelleu auf den Boden des Troges herabgesunken sind. Solche Tröge sind durch R. KutJGEii- STEiN, Berlin, Leipzigerstrasse 130, zu beziehen. Scliaar Schmidt (Klausenburg). 1) Cfr. diese Zeitsclir. Bd. I, 1884. p. 191 ff. 2) 100 g Rolu'zucker, 2-5 g Asparagin, 20 cc Mineralsalzlösung (diese enthält in 1 1: 50 g saures phosphorsaures Kali KH.,P04, 17 g kiystallisirte schwefelsaure Magnesia MgSOi), ein Zusatz von Kalk -war nicht erforderlich, da solcher in dem zur Hefstellung der Lösung von Kny verwendeten Leitungs- wasser in genügender Menge enthalten war. I, 4. Keferate und Besprechungen. 611 2>. Mineralogisch-Geologisches, Beferent: Prof. Dr. Arthur Wichmann in Utrecht. Klein, C, lieber das Krystallsystem des Leucit und den Einfluss der Wärme auf seine optischen Eigen- schaften (Nachrichten von der Ges. d. Wiss. Göttingen 1884. p. 129—136). Die von Meeian versuchte Aenderung der optischen Verhältnisse des Leucits * hat auch Verf. dieser Abhandhing zum Gegenstand seiner Untersuchungen gemacht und zwar auch mit einem ähnlich einge- richteten Mikroskop. Auf einer Platte ist mittels eines verticalen Ständers der Tubus eines Mikroskopes so befestigt, dass er senkrecht zur Axe des Ständers, also in horizontaler Richtung angebracht ist. Gegen diesen Tubus wird in einer Führung ein anderer Ständer, der den unteren des Mikroskopes : Spiegel, Nicol und Condensorlinie trägt, bewegt. In einer zweiten Füh- rung lässt sich eine verstellbare, mit Platiuspitzen versehene Zange, in welche die zu untersuchende Krystallplatte eingeklemmt und vor das Objectiv des Mikroskops gebracht werden kann, verschieben. Verf. untersuchte nun verschieden orientirte Platten des Leucits, indem dieselben der Temperatur der Flamme eines Btinsen ' sehen Bren- ners bis zur beginnenden Rothgluth ausgesetzt wurden. Ausnahmslos zeigten sie dasselbe Phänomen, indem die Dunkelheit „wie ein sich aus- breitender Tintenfleck" über die Platte hinüberlief und alle Theile aus- löschten. Bei der Abkühlung kehrten die früheren Erscheinungen wie- der zurück. Hieraus geht hervor, dass der Leucit beim Erhitzen isotrop wird und der Verf. nimmt demzufolge, wohl mit Recht, einen Dimorphis- mus der Leucitsubstanz an, kraft welches der Leucit im Momente seiner Festwerdung als regulärer Körper in Erscheinung trat und die ein- wirkende Abkühlung eine Aenderung der Moleciüaranordnung ver- anlasste. Klein, W., Beiträge zur Kenntniss der optischen Aeude- rungen in Krystallen unter dem Einflüsse der Er- wärmung. (Zeitschr. f. Krystallog. und Mineral. Bd. IX, 1884, p. 38—72). In dem ersten Theil der vorliegenden Abhandlung hat der Verf. das Verhalten einiger ein- und zweiaxiger Krystalle untersucht, deren ') Cfr. diese Zeitschrift Bd. I, 1884, p. 468. 612 Referate und Besprechungen. I, 4. optische Eigenschaften durch eine ungleichmässige Erwärmung modificirt werden. Zur Beobachtung diente ein BERTKAND'sches Polari- sationsmikroskop, welches mit der v. LASAULx'schen Condensorlinse ver- sehen war. Die ungleichmässige Erwärmung geschah in der Weise, dass ein Plättchen von Rothkupfer, dessen Verlängerung mit einer Alkobolflamme erhitzt, an einer Seite der Krystallplatte auf dieselbe gelegt wurde. Um diese einseitige Wärmezufuhr zu beschleunigen, brachte Verf. noch eine andere Methode in Anwendung, die zugleich eine Drehung des Präparates bei der Erwärmung gestattete. Zu diesem Zwecke wurde eine Pincette von Kupfer mit einer Asbestunterlage auf einem Holzring so befestigt, dass die das Präparat fassenden Spitzen gerade in die Mitte des kreisförmigen Riugausschnittes zu liegen kamen. Um das Gleichgewicht mit der Pincette herzustellen, war der letzteren gegenüber auf dem Holzring ein Gegengewicht von Blei befestigt. Das Ganze wurde auf den Objecttisch gebracht und das überragende Ende der Pincette in einer Spiritusflamme erhitzt, deren Wärme sich dem in der Pincette geklemmten Krystall mittheilte. Da die Krystallplatte jetzt von zwei Seiten gefasst wurde, so fand eine Zuleitung der Wärme, so- wohl von oben, als von unten statt. Von einaxigen Krystallen gelangten zur Untersuchung : Apatit, Kalkspath, Quarz, Apophyllit und Zirkon. Bei sämmtlichen Krystall- platten wurde durch die ungleichmässige Erwärmung das dunkle Kreuz der Interferenzfigur in eine Hyperbel gespalten. Damit ist zugleich eine Aenderung der concentrischen farbigen Ringe verbunden und zwar der Art, dass die Ringtheile in den inneren Theilen der Hyperbel sich erweitern, in den beiden äusseren sich verengen. Bei Apatit und Kalk- spath (optisch-negativ) ist die Axe der gebildeten Hyperbeln senkrecht zur Richtung Wärmezufuhr, bei den übrigen oben genannten Mineralien, welche optisch-positiv sind, parallel. — Von zweiaxigen Krystallen ge- langten Cordierit (negativ) und Topas (positiv) zur Untersuchung. Die Ringtheile innerhalb des Axenwinkels verengen sich, während sie sich ausserhalb desselben erweitern, falls die erhitzte Eisenplatte auf die inneren Hyperbelräume gelegt wurde. Die Erscheinung wird umgekehrt, wenn man die erhitzte Platte auf die äusseren Hyperbelräume bringt. Das Verhalten des Topases ist dem des Cordierits gerade entgegen- gesetzt. — Alle diese Erscheinungen zeigen eine auffallende Ueberein- stimmung mit denjenigen, welche man erhält, wenn man bei der Beob- achtung Platten ein- oder zweiaxiger Krystalle, welche senkrecht zur optischen Axe oder der ersten Mittellinie geschnitten sind, im conver- genten Lichte eine Viertelundulations-Glimmerlamelle zwischen dem I, 4. Referate und Besprecliungen. 613 oberen Nicol und der Krystallplatte einschiebt. Sie resultiren, wie der Verf. des Näheren ausführt, aus denselben Ursachen. — In dem zweiten Theile der Abhandlung werden, im Anschluss an die Untersuchungen von Mallakd *, die Aenderung der optischen Eigen- schaften des Stilbits bei der Erwärmung näher behandelt. Spaltungs- blättchen des Minerals zeigten bei zunehmender Temperatur eine Ver- kleinerung ihres Axenwinkels, derselbe wird dann gleich Null und öffnet sich endlich in einer Ebene, welche senkrecht ist zu der ursprünglichen. Diese Erscheinungen stehen in Verband mit dem Verlust eines Theiles des Wassers. Bei der Abkühlung unter Zutritt der Luft tritt allmäh- lich ein rücklaufender Process ein, wobei Wasser wieder aufgenommen wird. — Der Brewsterit verhält sich beim Erwärmen auf 200" wie ein rhombisches Mineral, er zeigt im parallelen, polarisirten Licht gerade Auslöschung. Die Aenderung der optischen Eigenschaften beruhen hier, dem Verf. zufolge, nicht auf Wasserverlust, sondern auf Temperatur- änderung. Augenscheinlich liegen hier ganz analoge Verhältnisse vor, wie beim Boracit, Leucit etc., denn der Brewsterit ist seinen geo- metrischen Eigenschaften zufolge rhombisch. Bei dem Beaumontit wurde in Folge der Erwärmung wohl eine Verkleinerung des Axenwinkels er- reicht, aber selbst bei 300" war derselbe noch nicht auf 0" gebracht. Ausserdem hat die Steigerung der Temperatur (wie auch beim Brewsterit) eine Drehung der Axenebeue zur Folge. Wegen der Verschiedenheit hinsichtlich der optischen Eigenschaften zwischen Beaumontit und Stilbit, erscheint dem Verf. die vielfach vermuthete Verwandtschaft dieser bei- den Mineralien keine nahe. 1) Mallakb in Bull. soc. min. 1882, V p. 255. 614 Neue Literatur. I, 4. Neue Literatur. 1. Lehr- und Handbücher. Bonnet, R., Kurzgefasste Anleitung zur mikroskopischen Untersuchung thieri- scher Gewebe für Anfänger in der histologischen Technik. 61 pp. 8». München (Rieger) 1884. 1-5 M. Stein, S. Th., Das Licht im Dienste wissenschaftlicher Forschung. 2 Heft: Das Mikroskop und die mikrographische Technik zum Zwecke photogra- phischer Darstellung. 167 pp. 8". m. 4 photolithogr. Tfln. Halle (Knapp) 1884. 5 M. Vogel, J., Das Mikroskop und die wissenschaftlichen Methoden der mikro- skopischen Untersuchung in ihrer verschiedenen Anwendung. 4. Aufl. von 0. Zachaeias. Leipzig (Denicke) 1884. 8». Lieff. 4, 5, 6. ä 1 M. 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Bougarel 605. Brandt 384, 505. Brass 39. Braun 285, 446. Brefeld 295. Bremer 406. Broesicke 408. BroueflF 394. Busch 505. Busk 277. Calberla 379, 506. Calliano 433. Carriere 405. Cattaneo 441. Cech 380. CelU 590. Certes 384, 590. Chadwick 445. Cheshire 287. Chiusoli 558. Chrchtschono witsch 403. Chrzonszczewski 99. Ciaccio 447. Cohen 138. Cohn 70, 82. Cohnheim 401. Cole 584. Cornü 375. Cox 427. Cresswell 500. Curschmann 383. Curvoisier 401. Cybulsky 288. Czokor 89. Decker 438. Dimmock 286. Dippel 23, 95, 98, 103, 210, 251, 267, 268, 413, 485, 560. Dreschfeld 376. Duval 500. Ebener, von 373. Eberth 394. Edinger 250. Ehrenbaum 414. 628 Autoren -E egister. 384. 253, 386, 561, 564. Ehrlicli 377, 381, 386, 390, 507. Eloui 389. Enoelmann 257. ErÜcki 381. Ermengem, van 609. Errera 389. Federn 395. Feltz 397. Fischer 373, 404, 458, 558, 599. Flechsig 404. Flemming 349, Flesch 33. 175 Flinzer 392. Flögel 266. Fränkel 455. Francotte 440, 571, 579. Frenzel 113. Freud 588. Frey 91, 93, 372, 392. Friedländer 95, 390, 423. G^ärtner 263. Gafiky 594. Gage 280, 288, 502. Gardiner 464. Gerlach 68, 83, 100. 402, 436. Giacomini 427. 449. Gibbes 292, 502, 507. Gibelli 137. Gierke 62, 372, 497. Giesbrecht 113, 270. Giltay 1, 101, 135, 479. Goeppert 70, 82. Golgi 397. 399, 498. Gottschau 327. Graham 277. Gram 451. Grancher 86. Green 287. Grenacher 88, 98. Griesbach 386, 580. Gruenhagen 448. Guarnieri 590. Haberlandt 133. Hanausek 266. Hansen 191, 509. Harpeck 394. Harns 448. Hartig 70, 82, 83, 98. Hartmann 394. Hartwich 310. Haushofer 465. Hayem 191. Heidenhain 100. Henderson 295. Henking 491. Henle 395, 498. Henocque 403. Hermann 375. Hertwig 399. Heschl 374. Hesse 597. Heurck, van 419. Hülhouse 300. His 392, 393, 394, 395. Hitchcock 112. Hoehnel, von 234. Hoffmann 435. Hofmann 79. Hoggan 399, 405, 509. Holzner 254. Hoyer 87, 89, 398. Hüter 375. Huguenin 373. Israel 297. Jackson 373. Johne 508, 581. Johnson 111. Jürgens 374. JulUen 509. Kent 119. Kiaer 112. Kingsley 577. Kjaerskou 209. Klebs 120. Klein 403, 611. Kleinenberg 94. Klemensiewicz 501. Kny 607. 609. Koch 368. 390. 453, 594. Kdliker 97. Koestler 287. Kossmann 269. Krauss 606. Krause 96, 460. Kruess 259. Küttner 100. Kyber 383. Lagerheim 608. Landois 497. Lang 501. Latteux 423. Lavdowsky 376. 404, 506, 509^ 555 589. Lawson Tait 94, 99, 374. Leber 498. Legoff 87. Legros 396. Leitgeb 132. 608. Le Vert de Jade 389. Levick 444. Lieberkühn 87, 97. Autoren-Register. 629 Linck 466. Lindt 237. Lissauer 290. Löffler 594, 601. Löwe 585. Löwit 404. Lohmann 467. Loomis 384. Lowett 577. Ludwig 181. Luys 379. Malassez 191. Malcolm 295. Marchi 405. Marpmann 117. :Martinotti 361, 582. Maschke 71, 84, 90. Matthews 431. Mayer 88, 89. 95, 270, 388, 502. McLarens 429. Merhel 500. Merian 467. Merkel 94, 96, 373, 498, 500. Meyer 302, 309. Miliarakis 306. Miquel 197. Mitchell 583. Moeller 241, 412, 413. Molisch 134. Moore 508. Morris 295. Müller 299, 396. Nathusius 402. Neumann 502. Nörner 390. Noorden, van 447. Norris 500. Nykamp 100. Obersteiner 88. Olivier 137. Onimus 372. Osborne 83. Owsjannikow 407. Pasteur 594. Parker 408. Perls 91. Pfitzer 116. Pfitzner 384, 385. Plaut 293. Polaülon 497. Pouchet 87, 408. Pringsheim 133. Prinz 609. Proskauer 599. Rabl-Rückhard 447. Ranvier 91, 98, 374. 396, 400, 405, 407, 499, 509. Recklinghausen, von 393, 394. Reich 397. Renaut 95, 380, 505, 506, 574, 582. Richardson 87, .502. 508. Rindfleisch 96, 293.' Robinski 396. 397. Rolet 86, 91.' Rosoll 462. Rouget 398, 500. Rudneff 406, 499. Russow 301. Sankey 379. Sattler 400. Schaarschmidt 61, 122, 298, 301. Schälhbaum 113. Schieflferdecker 501, 507. SchiU 458. Schneider 88. Schnetzler 298. Schulgin 268. Schiütze 406, 407, 499. Schulze 497, 499. Schwalbe 396. Schwarz 136, 499. Schweigger-Seidel 86, 395. Scott 434. Seiler 501. Severm 397. Shakspeare 500. Skworzow 398. Soboroff 397. Sollas 574. Stearn 264. Stein 161, 265, 419. Stephenson 251. Stilling 586. Stirling 503, 506, 508. Stöhi- 582. Stowell 508, 575. Strasburger 389, 462. Strelzoff 97, 499. Streng 307, 308. Stricker 398. l^afani 507. Thanhoffer, 'von 380, 400, 498. Thiersch 84, 99. Thin 404. Thoma 100. Thoulet 308. Threlfall 113. Tiemann 141. Torre 589. Tschermak 467. Tschirch 603. 630 Autoren-Register. Treitel 377. Trutat 107. A'^oit, von 265. Waddington 283. Waldeyer 78, 93, 98, 372. Wedl 509. Weigert 117, 123, 127, 290, 381, 387, 388, 390, 503, 564. Welcker 70. White 111. Wichmann 417. WiUe 123. Wissowsky 376. Wolff 384. Woodward 86. Zeller 100. Zenger 488. Zeppelin, Graf 286. Zuppinger 378. Sach-Register. Abbe's Ansicht über Correction ho- mogener Immersion 31. — Beleuchtungsapparat 409. , Blenden für bestimmte Zwecke 41. — • — zur Untersuchung von Proto- zoen 41. — Camera lucida 2. — Probeplatte 32. Absorptionsprocess 441. Acidum tartaricum 403. Actinomyces 297. Aechtroth 581. Aeroskop 197. Aetherische Oele , mikrochemisches Verhalten 304. Aetiologie der Tuberculose 453, 455. Agaricus melleus 188. Alaun-Carmin 88. Alaun-Cochenille 89. Alcanna 98. Alcannawiu-zel , alkoholischer Auszug 98. Algen, Trockenpräparate 608. ■ — , Fixirung der 119. Alizarin 97. Alizarinlösung, alkoholische 97. Alkali zur Darstellung von Tuberkel- bacillen 54, 55. alkoholische Cochenületinctur 88, 89. Ameisensäure 404. Amidoazobenzol 580. Amidoazobenzolsulfosäure 580. Ammoniak, carminsaures 75, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89. — , — mit Alkohol 87. — , — mit Uransalzen 92. — , molybdänsaures 96. Ammoniumphosphat-Essigsäure 466. Amöben 40, 444. amyloide Substanzen 375, 383. Analyse, mikroskopische des Wassers 200. Anilinblau 450, 500, 504, 507, 508. — für Knochen 374. — , lösliches 392. Aniline blue black 379. Anilinfarben 79, 506. — , grüne 504. — zur Tinction 372. — von Spaltpilzen 118. Anilingelb 450, 580. Anilin-Magdalaroth 390. Anilmöl 390. Anilin-Orange 450. Anilinscarlet 450. Anilüischarlach 450. Anilinschwarz 379, 505. Anilintinction 508. Apparate, dioptrische, Vergrösserung der 558. Atlas-scarlet 508. Aufbewahrung von Infusorien 441. Augenflüssigkeit 45. Augit 139. Aiu-in 450. Austrittspupille 6 automatisches Mikrotom von Böcker244. — Reichert 241. Azofarbstoffe 580. Azobenzolsulfosäureammoniumazoß- naphtholsulfosaures Natrium 581. aNaphtholazobenzolsulfosaures Kalium 580. Bacillus subtilis, Cultur 119. Bacterien 292, 590. — , Desinfection 599. — in Luftstaub 198. — , Tinction 451. Band, labiles 606. — , stabiles 606. 632 Sach-Keorister. Bandwurm 446. Beck's Condensor 432. Beleuchtiingsapparat von Abbe 409. — — — , Blenden für bestimmte Zwecke 41. — — — zur Untersuchung von Pro- tozoen 41. Beleuchtungsvorriclitungen 266. Berberin , mikrocliemiscber Nacliweis 237. Biebricher Scharlach 581. Bienenrüssel 287. Bildpunkt 3. Bismarckbraun 53, 381, 384, 450, 505, 580. Blanc's Methode Protozoen zu färben 282. Blauschwarz 450. Bleu de Quinoleine 384. Blutkörperchen, Entstehung im Knor- pel 289. — , Färbung mit Anilinfarben 448,508. — , rothe 589. — , weisse 589. Blutplättchen, Tinction der 389. Böcker's automatisches Mikrotom 244. — neues grosses INIikrotom 267. Böttcher's feuchte Kammer 203. Bogenlicht, elektrisches 561. Boraxcarmin 85, 86, 500, 501, 502, 504. Boraxindigcarmin 500, 504. Bordeaux 581. Bothriocephalus latus 446. Brass' Conservirungsmittel für Proto- zoen 42. Brechungsexponent von Mineralien, Ermittelung des 308. Brefeld's Culturmethoden von Pilzen 128. Brennpunkt der Doppelkugel 479. — des Hohl c}' linders 479. Bresgen's Einbettungsmethode 223. Brom 599. Bronzit 139. Brucin , mikrochemischer Nachweis 237. ■ — zum Nachweis von Nitraten und Nitriten 135. Buchner's Reinculturen von Mikro- organismen 204. Buchweizenmehl 309. Bütschli's Einbettungsmethode 229. ßNaphtholazobenzolsulfosaures KaUum 580. ßNaphtholazonaphthalinsulfosäure 581. ßNaphtholorange 580. Calberla's Einbettungsmasse 223. Calcit auf Dünnschliffen 466. Calliano's Präparatrichter 433. Camera lucida 1, 108. — — , Gebrauch der 1. — — , Theorie der 1. — — von Abbe 2. — — von Grunow 108. — — von Nachet 11. — — von Schröder 259. — ■ — , Zeichnen mit der 16. Campescheholz 78. Campescheholzextract 93, 94. — mit Alaim und Kupfervitriol 94. Capsicum annuum 61, 62. Cai-min 70, 82, 498, 499, 500, 502, 504. — . Darstellung des Rohproductes 72. — , essigsaurer 75, 86, 88, 91. — , Geschichte des 72. — von Hoj'er 440. Carminborax 53. Carminlösung, saure 88. Carminroth 91. Carminsäure 74. — , Anwendung auf Protozoen 120. — zum Nachweis gummöser Substan- zen 136. carminsaures Ammoniak 75, 82. 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89. — — mit Alkohol 87. — — mit Draper's Tinte 87. — — mit Glycerin 85. — — mit Uransalzen 92. carminsaures Natron 90. Carotin 605. Carotinreaction 306. Carthamin 136. Celloidin zum Einbetten 225. CeUulinkörner 133. — bei Vaucheria und Chara 298. — . Reactionen 133. CeUulose 133. Cementstein 609. Centralnervensystem 123, 498. — , Goldchloridkalium für das 402. — , Härtungsprocess 449. • — , Präparate des 250. — ■ Silbermethode 397. — , Tinctionen 290, 564. — , Tinction mit Säurefiichsin 387. Ceroxyd, schwefelsaures, zum Nachweis von Strychnin 239. Cerverbindungen. mikroskopische Be- stimmung 465. Chara 298. Chinablau 450.. Chlor 599. Chlornatrium 442. Chlorophyll 302, 603. Chlorophyllan 303, 603. Chlorophyllgerüst 304. Sach-Kegister. 633 Chlorophyllki-ystalle 303. CKlorophyllspectrum 604. Chlorpalladiiim 497, 498, 499. Chromalaun 361. Chromessigsäure 462. chromoleptische Zonen 587. Chromoplasten 305. Chromsäiu-e 442. — , Einwirkung auf Euglena 121. Chromsäui'elösung 46. Chi'omsalpetersäure 608. Chromschwefelsäure 608. Chrysaurein 580. Chryseolin 580. Chrysoiclin 450, 580. Cilien, Tödtimg der 120. Citronensäure 443. Clark'sche Säulen 290. Coccus cacti 72. Cochenille 72, 82. Cochenillelaus 72. Cochenilletinctur 88, 89. Coleochaete scutata 607. Colin'sches Schwarz 379. Collodium 439. Colloidzellen, künstliche -299. Collybia tuberosa 189. Compressorium von Jung 248. Condensor von Beck 432. conjugirte Flächen 3. Conservirungsflüssigkeit für Protozoen 282. — — — von Brass 42. Cornea, Färbung mit Silber 398. Corneanerven 498. Correctionsfassung bei homogener Im- mersion 29. Crocein 5S1. Ctenodrüus monostylos 286. Cultur von Actinomyces 297. — von Euglenen 120, — von parasitischen Pilzen 295. — von Pilzen 128. — von Spaltpilzen 119. — von Trichophyton tonsiu'ans 295. Cyanin 384. 390. CyUndermikrotome 329. Cytoplasma von Euglena 122. Dahlia 373, 377. Darstellungsmethode der Tuberkelba- cillen 51. Daucin 605. Daucus Carota 306. V. Davidoffs u. Ruge's Einbettungs- methode 224. Dccker's Schnittstrecker 438. Deckgläschentrockenpräparate von Tu- berkelbacillen 54. Deeke's Mikrotom 127. Desinfection von Ki-ankheitsbacterien 599. Tuberkelbacülen 458. Diamidoazobenzol 580. Diatomeenschliffe 609. Diatomeenschnitte 579. Dimethylanilinazobenzolsulfosaiu-esNa- triiun 581. dioptrische Apparate , Vergrösserung der 558. Diphenylamin zum Nachweis von Ni- traten und Nitriten 134. Diphenylamidoazobenzolsulfosaures Ka- lium 580. Diphtherie 601. Dolomit in Dünnschliffen 466. Doppelkugel, Brennpunkt der 479. Dünnschliffe zoologischer Objecto 414. Dunkelkasten von Flögel 266. Duval's Einbettungsmethode 225. Echtgelb 580. Ehrlich's Methode. Spaltpilze zu fär- ben 118. Eimasse zum Einbetten 434. Einbetten in Celloidin 225. Collodium 225. — • — Glyceriugelatiiie 436. Glycerinleim 222. Gummi 221. Hollundermark 219. Hühnei'eiweiss 223. Paraffin 227, 270. ■ Transparentseife 232. Einbettungsapparat von Hofimann 435. Einbettungsmethoden 49, 218, 571. Einschlussmittel für thierische Präpa- rate 50. einzellige Organismen , Untersuchung der 40. Eisenchlorid 497. Eisenoxj'dul 498. — , schwefelsaures 402. Eiweiss zum Einbetten 223, Eizellen von Wirbelthieren , Unter- suchung 45. Eklogit 467. elektrisches Bogenlicht 561. — GlühUcht 161, 175, 419, 561. — Licht 262. Ellagensäure, Nachweis der 137. Embryograph 261. Embryologische Präparate 577. Endomersionsobjective 485. Entkalkungsflüssigkeit von Stowell 576. Eosin 373, 450, 501, 505, 506, 507, 508, 582. 634 Sach-Register. Eosin in ammoniakalischer Lösung 376. • — in wässeriger Lösung 376. — mit Alaun 376. — mit Osmiumsäure 380. — zum Studiren von Laubmoosen 133. — zur Tinction von Phycochroma- ceen 123. — Synedra 122. Eosinglycerin mit Alaun 389. Erlicki'sclie Flüssigkeit 127. ErythrophyU 605. Essigsäui'e , Einwirkung auf Phyco- chromaceen 123. essigsaurer Carmin 75, 86, 88, 91. Etiolin 606. Etiquetten für mikroskopische Präpa- rate 280. Euglena, Cultur 120. — , Cytoplasma 122. — , Membran 120. — , Paramylon 122. — , pulsirende Vacuolen 122. Färbemethoden 62. — in der Botanik 66. Färbetechnik, Mittheilimgen zur 349. Färbung von Infusorien 441. Farbstoffe der Chromoplasten, mikro- chemiscbes Verhaltf^n 305. Fearnley's Mikrotom <^_i. Festlegung von Schnitten 113. fette Oele, mikrochemisches Verhalten 305. feuchte Kammer von Böttcher 203. — Hansen 202. Fibrose 134. Fitz's Reinculturen von Mikroorganis- men 204. Fixinmg von Algen 119. — — Infusorien 119, 441. — Protozoen 44. Flächen, conjngirte 3. Flagellaten 120. Flamingo 450. Flemming's Einbettungsmethode 232. Flögel's Dunkelkasten 266. — Serienschnitte 274. Fluorescein 450. Francotte's Schnittstrecker 572. freie Zellen, Untersuchung 39, 45. Fuchsin 378, 443, 450, 507 Gage's u. Smith's Schnittstrecker 275. Gallen 310. Gang des Messers beim Mikrotom 332. Gefäss für Einbettungsmasse 276. Gefriermethode 574. Gehirn, üntersuchimg grosser Schnitte 427. Gehirnschnitte 127. Gentianaviolett 54, 389, 450, 508. — zur Färbung von Tuberkelbacillen 54. Gerbsäure 497. Gerbstoflfreactionen 464. Gesichtslinie 8. Gewebe, thierische, Untersuchung der 46. Gibbes' Methode, Spaltpüze zu fär- ben 118. Giesbrecht's Einbettungsmethode 229. Glasplattenculturen 607. GlüUampen 264. Glühlicht, elektrisches 161, 175, 419, 561. Glycerin als Einschlussmittel 50. Glyceringelatine von Kaiser 223. — zum Einbetten 436. Glycerin -Hämatoxylin 95. Glycerinleim ziun Einbetten 222. Goldanilinpräparate 507. Goldbehandlung 508. Gold-Cadmiumchlorür 442. Goldchlorid 401. ■ — und Ameisensäure 404, 405. — ■ — arsenige Säure 405. — — Citronensäure 405. — — Höllenstein 405. — — Natron 404. — — Oxalsäure 405. — — Schwefelammonium 404. Goldchloridkalium 401. Goldorange 581. Grammatophora marina 25, 26. — oceanica 25, 26. — , Probeobjecte 25. — subtilissima 27, 28. Granulationen der Leukocythen 382. Groves'-William's Mikrotom 434. Grunow's Camera lucida 108. Gummi zum Einbetten 221. — von Heidenhain 221. von R. Hertwig 222. Guttaperchalösung 114. Gypsophila Struthium 462. Haar, Tinction der inneren Wurzel- scheide 357. Hämatimeter 191. — von Zeiss 192. — zum Nachweis von Mehlverfäl- schung 208. Hämatoxylin 78, 93, 94, 358, 443, 499, 502, 503, 504, 505, 506, 582, 583, 584. Sacli-Register. 635 Hämatoxylin mit Alaun und Alkohol 93, 95. — Glycerin 95. — — Chloraluminium 95. — — Chlorcalcium und Alaun 94. 95. — — Salzsäure 94. — ohne Alaun 93. — , Verhalten gegen Pflanzenmem- branen 135. — von Mitchell 583. — zur Tinction von Phycochromaceen 123. — Spaltpilzen 118. — Synedra 122. Hämatoxylinfärbung von Weigert 564. Hämatoxyünglycerin 582. Hämoglobin 376. härtende Flüssigkeit von Stowell 575. Härtung 116. Hansen's feuchte Kammer 200. — Reinculturen von Mikroorganismen 206. Hartley's heizbarer Objecttisch 34. Hasert'sche Objective 486. Hauer's mikrophotographischer Appa- rat 110. Hefe 129, 609. Hefezellen, Zählen der 195. Heidenhain's Einbettungsmethode 221. — Hämatoxylintinction 545. heizbarer Objecttisch 33. — — von Flesch 33. Hartley 34. — Ranvier 34. Schulze 33. Stein 166. — Symons 35. Helianthin 581. Herrmann'sche Methode 384. Hertwig's Einbettungsmethode 222. Hesperidin 310. Heubacterie, Cultur 119. Hilfsapparate für Mikrotome 327. Hoffmann's Einbettungsapparat 435. Hofmann's Violett 450. Hohlcylinder, Brennpunkt des 479. Hollundermark zum Einbetten 219. homogene Immersion, Correctionsfas- sung 29. Hoyer's Carmin 87, 440. Hühnereiweiss zum Einbetten 223. Hypochlorin 302, 304, 603. — , Umkrystallisiren des 302, Imprägnation 81. Imprägnationsmethoden 499. Immersion, homogene, Correctionsfas- sung 29. Indigcarmin 79, 99, 500, 501, 502, 509. Indigcarmin, Einwirkung auf Euglena 121. — in Oxalsäurelösung 99. indigschwefelsaures Natron 99. Indulin 379. Infusorien 40. — , Aufbewahrung der 441. — , Färbung der 441. — , Fixirung der 119, 441. — , Verhalten gegen Schwefeldioxyd 285. — , Tannin 283, 585. Insecten 287. Insectenschuppen 286. Isolirprocess 441. Isolirung von Mineralien 417. Ivory drop black 277. Jodgrün 385, 389, 450, 503, 508. Jodlösung zur Fixirung von Algen und Infusorien 119. — zur Untersuchung von Pflanzen- fasern 141. Jodserum 45, 46. Jodsilber und Höllenstein 396. Jodviolett 374, 378. Jörgenson's Methode, Mehlverfälschung nachzuweisen 208. Jung's Compressorium 248. — IVIikrotom 340. — Zeichenapparat 261. Kadyi's Einbettungsmethode 232. Kaiser's Glyceringelatine 223. Kaliumbichromat 399, 442. Kaliumquecksilberjodid als Quellungs- mittel 251. Kammer, feuchte, von Böttcher 203. — , — , — Hansen 202. Kaninchen, Ciliarfortsätze 448. Kasten für mikroskopische Pi^äparate 281. — zum Einbetten in Celloidin 226. Paraffin 230. Kataloge von mikroskopischen Präpa- raten 280. Kautschuklösung 115. Kern, Nachweisung bei Protozoen 44. Kerntheilungsfigiu-en 415. Kerntinctionen 385, 415. Klammer am Mikrotom 343. Klebs' Einbettungsmethode 227. Knochenfische, Grosshirn der 447. — , Labyrinth der 447. Kjiochengewebe 499. V. Koch's Einbettungsmethode 233. Koch's Methode, Spaltpilze zu färben 118. 636 Sach-Register. Kochsalzlösung 45, 46. — als Einschlussmittel 50. Kolben für Reinculturen von Miquel 198. • Pasteur 205. Krapp 502. Krappfarben 97. Krappfütterung 97. Krystalle, Erwärmung 611. Kyanoi)hyll 606. Labiles Band 606. Lackmus 98. Lapisstift 400. Latteux's Einbettungsmethode für Haare 225. lebende Thiere, Untersuchung 40. Lelong's JVIikrotom 268. Leonhardi'sche Tinte 374. Leprabacillen 367. Leuchtpunkt 3. Leucit 611. Leukocythen, Granulationen der 382. Licht, elektrisches 262. Lycopersicum esculentum 61, 62. Lymphflüssigkeit 45, 46. Lyoner Blau 450. Magentaroth 443, 507. Maismehl, Unterscheidung von Buch- weizenmehl 309. Malachitgrün 450, 508. Mandragora officinalis 61, 62. Meblverfalschung, Nachweis 208. Membran von Pflanzen, Verhalten gegen Hämatoxylin 135. — von Wurzelhaaren 136. Menobranchus 288. Messer, Gang beim Mikrotom 332. — , Schärfen der 335. Messerschneide 334. Meteoriten, mikroskopische Beschaffen- heit 467. Methylanilin 375, 508. Methylenblau 385, 450. — zur Tinction des Rückenmarks 5S7. Methylengrün 385. Methylgrün 379, 381, 383, 389, 506. — , Einwirkung auf Phycocbromaceen 123. Methylviolett 378, 389, 450. — für Tuberkelbacillen 52, 54, 57. Micrococcus Pflügeri 190. Mikrokokken 390. — der Osteomyelitis 460. Mikrometerschraube von Swift 430. Mikroorganismen der Luft 200, 597. Mikroorganismen der Luft, quantitative Bestimmung 597. — im Wasser, Untersuchung 141. Mikrophotographie 109, 161. — mit elektrischem Licht 170. — von Gesteinschliffen 138. mikrophotographischer Apparat von Hauer 110. Smith 110. Walmsley 111. Mikroskopirlampe 266. — von Nelson 433. Mikrospectralphotometer 257. Mlkrospectroskop 183. Mikrotom 267, 327, 434, 571. — von Böcker 244, 267. Deeke 127. — — Lelong 268. — — Reichert 241. Thoma-Jung 271, 272, 340. Zeiss 268. Mikrotomklammer 343. Milzbrandbacillen 594. Mineralien, Isolirung der 308, 417. Miquel' s Aeroskop 197. — Kolben für Reinculturen 198. Mitchell's Hämatoxylin 583. Mittellamelle 211. Molybdänsaures Ammon 96. Monochromatisirung der Beleuchtung 178. MüUer'schc Flüssigkeit 443. Musaceen 305. Muskelfasern von Wasserkäfern als Testobjecte 107. Myrtillus 555. Nachet's Camera lucida 11. Nägeli's Reincidturen von Mikroorga- nismen 204. Nährflüssigkeit für Reinculturen 199. Nährgelatine 200. Natrium, mikrochemischer Nachweis 307. Natriumhydroxyd 404. Natron, carminsaures 90. Necturus 288. Nelson's Mikroskopirlampe 433. Nervensystem 585. Nervenzellen 401. Nigrosin 116, 389. — , Einwirkung auf Euglena 121. Niobsäureverbindungen , mikrochemi- scher Nachweis 465. Nitrate 134. Nitrite 134. Noir Colin 379. Nucleolen, Hervorhebung der 349. Sach-Begister. 637 Objecthalter 341. — am Schlittenmikrotom 491. Objectiv 112. Objective von Hasert 486. Objectivwechsler von Matthews 431. Objecttisch, heizbarer 33, 166. — , — , von Flesch 33. — , — , — Hartley 34. — , — , — Ranvier 34. — . — . — Schnitze 33. — , — , — Stein 166. — , ■ — , — Symons 35. Oele, mikroskopisches Verhalten 304. Oeltropfen der Musaceen 305. Orange 581. Organismen, einzellige, Untersuchung 40. — , lebende, Fixirung mit Bismarck- braun 384. — , — , Cyanin 384, 390. Orseille 509. Orseillin 581. Osmiumsäure 399, 406, 407, 442, 499, 503. — mit Eosin 380. — zur Injection 407. Osteomyelitis, Mikrokokkus der 460. oxalsaurer Carmin 84. Palladiumchlor ür 441, 497, 498, 501. Papierzellen 277. Paraffin zum Einbetten 229, 270. Paraffinmischung 114. Paramylon bei Euglena 122. parasitische Pilze, Cultur der 295. Pasteur's Kolben 205. — Reinculturen von Mikroorganismen 206. Pepsin, Einwirkung auf Euglena 122. Periplaneta orientaUs 287. Pfefferpulver, mikroskopische Unter- suchung 309. Pflanzenfasern, mikroskopische Merk- male der 140. Pflanzenmembranen, Verhalten gegen HämatoxyUn 135. Pflanzenpulver, mikrochemische Unter- suchung 309. Phenol 439. Phenolazobenzolsulfosaures Natrium 580. Phenylenbraun 580. Phosphin 450. Phosphorlösung für Probeobjecte 413. photogene Pilze, spectroskopische Un- tersuchung 181. Photographie 109. Phycochromaceen 123. PhyUocyanin 605. Phyllocyaninsäure 605. Phytelephas macrocarpa 216. Pigmentlösung 84. Pikrinalkohol 53. Pikrinfärbung, nachträgliche 360. Pikrinsäure 442. 499, 503, 504. 507, 509. Pikrinschwefelsäure 442, 446. ■ — für Protozoen 43. Pikrocarmm 80, 358, 499, 500, 501, 502, 503, 504. Pikrocarminborax 53. pikrocarminsaures Ammon 504. — Natrium 501. Pikroeosin 506. Pilze, Culturmethoden 128. — , parasitische, Culturmethoden 295. — , photogene, Untersuchung 181. Pinus silvestris, Zellmembran 213, 216. Plasmazellen 378. Plattenmodellirmethode 278. Polarisationserscheinungen 299. polarisirtes Licht in der Pflanzenhisto- logie 210. Polyzoen 445. Ponceau 450, 581. Pi'äparatenschieber 341. Präparationsmethoden 574. Präparatrichter von Calliano 433. Präparirmikroskop von Reichert 412. primäre Zellwand 211. Primula 378. Probeobjecte 25, 107. — in Phosphorlösung 413. Probeplatte von Abbe 32. Prophylaxis der Tuberculose 590. Protoplasma, Communication des 301. — , intercelluläres 301. Protoplasten, Zusammenhang der 300. Protozoen 40, 41. — , Blanc's Methode, dieselben zu fär- ben 282. — , Conservirungsmittel für 42. — , Nachweisung des Kerns 44. Pseudocumolazoßnaphtholdisulfosäure 581. pulsirende Vacuolen bei Euglena 122. Purpur, Spiller's 450. Purpurin 98, 378. — mit Glycerin 98. Quellungsmittel 251. Quillaja Saponaria 464. Ranvier's heizbarer Objecttisch 34. Rauvariene 581. Reactionsmethoden 101. 638 Sach-Register. Reflexillummator von Wenham 432. Reichert's Patent - Schlittenmikrotom 241. • — Präparirmikroskop 412. Rein Chlorophyll 606. Reinculturen, Miquel's Kolben 198. ■ — nach Buchner 204. Fitz 204. ■ — — Hansen 206. — — NägeU 204. Pasteur 206. — , Nährflüssigkeit 199. — von Mkroorganismen 204, 206. — von Spaltpilzen 119. Resorcinazobenzolsulfosaures Natrium 580. Ringwurmpilz 295. Roccellin 581. RosanUin 450. rothe Blutkörperchen 589. Rothkohlextract 99, 253. Rubidin 581. Rückenmarktinctionen 587. 588. Rüssel honigsaugender Insecten 287. Ruge's Einbettungsmethode 223. Saccharomyces 609. Säugethiereier 45. Säurefuchsin 387, 388. — zur Untersuchung des Centralner- vensystems 124. Säuregelb 580. Safranin 378, 383, 450. — zu Kerntinctionen 350. — — Rückenmarkstinctionen 587. Salpetersäure für Präparate des Cen- tralncrvensystems 250. — zum Nachweis von Solanin 61. salpetersaures Silberammoniak 398. — Silberoxyd 392. Salzsäure 402. Salzsäure-Glyceringemisch 53. Saponaria officinalis 462. Saponin , mikrochemischer Nachweis 463. saure Carminlösung 88. Scharlach 508. — , Biebricher 581. Schiefferdecker's Einbettungsmethode 225, 226. SchiessbaumwoUe, Lösung von 115. Schizomyceten, Tinction 451. Schliffpräparate, Herstellung 234. Schlittenmikrotom 328. — , Objecthalter des 491. — von Reichert 241. Schneide des Mikrotommessers 334. Schneidetechnik 270. Schnellhärtung 388. Schnitte, Fixirung auf dem Object- träger 113. — von thierischen Geweben 49. Schnittstrecker 341. — von Andres- Griesbrecht-Mayer 270. Decker 438. — — Francotte 572. — — Gage u. Smith 275. Schulze 273. ^ Schnurrhaare von Katzen als mikro- skopisches Präparat 65. Schröders Camera lucida 259. — Zeichenapparat 262. Schulze's heizbarer Objecttisch 33. — Schnittstrecker 273. Schuppen von Insecten 286. Schutzvorrichtung für Objective von Bausch u. Lomb 431. Schwefelammon 404. Schwefeldioxyd zur Untersuchung von Infusorien 285. SchwefelmetaUe 497. Schwefelsäure zum Nachweis von So- lanin 61. — zur Untersuchung von Pflanzen- fasern 141. schwefelsaures Ceroxyd zum Nachweis von Strychnin 239. — Eisenoxydul 402. schwefligsaures Natron für die Ver- sUberungsmethode 396. Seethiere, niedere, Versilberung 399. Seife zum Einbetten 232. Selenka's Einbettungsmethode 224. Selensäm'e zumNachweis vonßrucin 239. Serge-blue 450. Sei'ienpräparate 579. Serienschnitte 274, 275. Silberammoniak, salpetersaures 398. Silberlösung 500, 504, 506. — mit Goldlösung combinii't 399, 509. — — organischen Säuren 398. — zur Injection in Gefässe 397. Sübernitrat 392, 443. Silbersalze 392. Smith's mikrophotographischer Apparat 110. Solanin, miki'ochemischer Nachweis 61. Solanum Dulcamara 61, 62. — nigrum 61, 62. — tuberosum 61. Spaltpilze 117. — , Ciütur der 119. — , Ehrlich's Tinctionsmethode 118. — , Gibbes' Tinctionsmethode 118. — , Koch's Tinctionsmethode 118. Spectralbeobachtung 607. Spectralspalt 259. spectroskopische Untersuchung photo- gener Pilze 181. Sach-Register. 639 Spectrura des Chlorophylls 604. Spiller's Purpur 450. Spinnen 287. Sporangien von Trichia fallax 462. Sporen, Eau und Entwicklung 132. Sporenhäute 608. stabiles Band 606. Stein's heizbarer Objecttisch 166. Stowell's Entkalkungsfiüssigkeit 576. — härtende Flüssigkeit 575. Strasser's Einbettungsmethode 227. Streichriemen 335, 337. Strychnin, mikrochemischer Nachweis 237, 464. Strychnos Nux vomica 464. — potatorum 464. Sublimat 442, 498. Sublimatlösung zur Fixirung von Pro- tozoen 44. Substanzen, amyloide 383. Süsswasseralgen, Verhalten zu Tannin 298. Swann'sche Lampe 163. Swift's Miki'ometerschraube 430. Symons' heizbarer Objecttisch 35. Synedra Ulna 122. Tabes dorsalis 290. Tannin zur Untersuchung von Infuso- rien 283, 585. ■ — Süsswasseralgen 298. Tanninreactionen 464. Tantalsäure, mikroskopische Bestim- mung 465. Tentakeln von Zoophyten 445. Terpentinöl 49. Thiere, lebende, Untersuchung 40. thierische Gewebe, Untersuchung 46. — Zellen, Untersuchung 39. Thoma's Mikrotom 271, 272, 340. Thorverbindungen, mikroskopische Be- stimmung 465. Tinction von Schizomyceten 451. — — Tuberkelbacillen 455. Tinctionsbilder, Deutung der 47. Tinctionsmethoden 101, 499. Tinte, Leonhardi'sche 374. Topinambur 220. Torpedo, motorische Nervenendigun- gen 447. Trametes pini 187. Transparentseife zum Einbetten 232. Triamidoazobenzol 580. Trichia fallax 462. Trichophyton tonsurans 295. Tridymit 467. Tropäolin 450, 580. Tuberculose, Prophylaxis 590. TuberkelbaciUen 51, 367, 390, 391. ^easoiir. t. wisa. .MikroskoiJiB. 1. 4. Tuberkelbacillen. Reinculturen 454 — Tinction 292, 293, 455. Tylochlorsäure 605. Tyrian-Violett 450. Ueberosmiumsäure 406. — für Protozoen 43. — mit Oxalsäure 408. — zur Injection 407. Uransalze mit carminsaiirem Ammon 92. Vaccinium Myrtillus 555. Vacuolen, pulsirende, bei Euglena Vampyrella 44. Vaucheria 298. Vegetationskammer von Hansen 200. Veratrin, mikrochemischer Nachweis 237. Vergrösserung der dioptrischen Appa- rate 558. Verkieselung von Pflanzenzellen 306. Vesuvin 450, 580. Violett B 388. — von Hotmann 450. Volvox 444. V\' ärmekasten, Heidelberger, zum Ein- betten 229. Walmsley's mikrophotographischer Ap- parat 111. Wandporen von Phycochromaceen 123. Wasser, Untersuchung auf Mikroor- ganismen 141. Wasseranalyse, mikroskopische 200. Weigert's Methode, nervöse Central- organe zu härten 127. — — zur Untersuchung des Central- nervensystems 123. Weinsäure 403. weisse Blutkörperchen 589. Wenham's Reflex-Illuminator 432. Winkel's Beleuchtungsapparat nach Abbe 409. Wirbelthiere , Untersuchung von Ei- zellen der 45. Wurzelhaare 136. — , Membran der 136. Wurzelscheide des Haares, Tinction der 357. Xylaria Hypoxylon 189. Xylidinponceau 581. Xylindein 605. Xylolazoßnaphtholdisulfosäure 581. 42 640 Sacli-Register. Yttriumverbindungen, mikrochemische Bestimmung 465. Zählapparat von Zeiss 192. — zum Nachweis von Mehlverfäl- schung 208. Zählen mikroskopischer Gegenstände 191. — von Blutkörperchen 191.. Zählkammer 610. Zeichenapparat von Jung 261. — — Schröder 262. Zeichnen mit der Camera lucida 16. Zeiss' grosses Mikrotom 268. — mineralogisches Mikroskop 430. — Zählkammer 192. Zellen, freie, Untersuchung 39, 45. — ■, thierische, Untersuchung 39. — , Verkieselung 306. Zellhautverdickungen bei Yaucherien und Charen 298. Zellkern von Phycochromaceen 123. ■ — . Wirkung von Carmin 71. ZellstoftVand 213. Zelltheilungen, Aufsuchen der 349. Zonen, chromoleptische 587. Zöophj-ten 445. F Druck von M. liiiihn in linuinsclnveig. New York Botanical Garden Librar 3 5185 00258 2284