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I
Zeitschrift
ffir
Immunitatsforschung
und experimentelle Therapie
I. Teil: Originate
unter Mitwirkung von
H. Apolant, Frankfurt a. M., M. AscoU, Catania, V. Babes, Bukarest, 0. Ball, Prag,
E. F. Bashford, London, E. v. Behring, Marburg, 6. Belfanti, Mailand, A. Besredka,
Paris, J. Bordet, Brussel, A. Brelnl, Liverpool, L. Briefer, Berlin, A. Calmette, Lille,
A. Dieudonng, Miinchen, R. Doerr, Wien, M. Dorset, Washington, E. v. Dungern,
Heidelberg, P. Ehrlich, Frankfurt a. M., S. Flexner, New York, U. Frledemann,
Berlin, P. Frosch, Berlin, 6 . Gaflky, Berlin, M. von Gruber, Miinchen, M. Hahn,
KOnigsberg i. Pr., A. Heffter, Berlin, L. Hektoen, Chicago, M. Jacoby, Berlin, C. 0. '
Jensen, Kopenhagen, S. Kitasato, Tokio, W. Kolle, Bern, W. Erase, Bonn, K. Land*
steiner, Wien, C. Levaditi, Paris, L. von Liebermann, Budapest, F. Loefller, Greifs-
wald, Th. Madsen, Kopenhagen, C. J. Martin, London, E. Metschnlkoff, Paris, L.
Michaelis, Berlin, E. Muir, Glasgow, C. Moreschi, Pavia, P. Th. Miilier, Graz,
M. Neisser, Frankfurt a. M., F. Ncnfeld, Berlin, F. Nuttall, Cambrigde, B. Oster*
tag, Berlin, R. Paltauf, Wien, A. Pettersson, Stockholm, R. Pfeiffer, Breslau, E. P.
Piek, Wien, P. Rbmer, Marburg, C. J. Salomonsen, Kopenhagen, A. Schattenfroh,
Wien, Cl. Schilling, Berlin, Th. Smith, Boston, G. Sobernbeim, Berlin, V. C. Yaughan, •
Ann Arbor, A. v. Wassermann, Berlin, W. Weichardt, Erlangen, A. Wladimiroff,
St. Petersburg, A. E. Wright, London, D. Zabolotny, St Petersburg
herausgegeben von
E. FRIEDBERGER R. KRAUS H. SACHS P. UHLENHUTH
(Berlin,) (Wien.) (Frankfurt a. M.) (StraBburg i. E.)
Yierzehnter Band.
Mit 19 Figuren und 84 Kurven im Text.
Jena
Verlag von Gustav Fischer
1912
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Alle Rechte vorbehalten.
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Inhaltsverzeichnis
Heft 1 . (Ausgegeben am 30. Juli 1912.)
Seite
Stutter, Hermann, und Rosenthal, Eugen, Versuche, Antigen- und
Antikorperbeeinflussungen sichtbar zu machen. Experimentelle
Studien mit der Epiphaninreaktion. II. Mitteilung. [Aus der
Bakteriologischen Untersuchungsanstalt Erlangen (Prof. Dr. W.
Weichardt) nnd dem Chemisch-biologischen Laboratorium der
IV. Abteilung des St. Rochus-Spitals der Haupt- und Residenz-
stadt Budapest (Prof. Dr. Stephan v. T6th.)] Mit 20 Kurven
im Text. 1
Landsteiner, K., und Roek, Hans, Untersuchungen fiber Komplement-
wirkung. Hiimolyse durch Kieselsiiure und Komplement. [Aus
dem Pathologisch-anatomischen Institute und der Prosektur des
Wilhelminenspitales in Wien]. 14
Oalli-Talerio, B., et Bornand, M., Sur quelques applications des
lacto- et ovosera. [Institut d’Hygfene et de Parasitologie de l’Uni-
vereit6 de Lausanne.] Avec 1 figure. 32
Friedemann, Ulrich, und Rozenblat, Henryka, Ueber die Beziehungen
zwischen den Seifen des Serums und den antikomplementaren
Eigenschaften der Serumglobuline. [Aus dem Medizinisch-poli-
klinischen Institut der Universitat Berlin (Direktor: Geh. Med.-
Rat Prof. Dr. Goldscheider)]. 42
Rozenblat, Henryka, Untersuchungen fiber die Verteilung der Seifen
im Serum. [Aus dem Medizinisch - poliklinischen Institut der
Universitat Berlin (Direktor: Geh. Med.-Rat Prof. Dr. Gold¬
scheider)] . 62
Guerrini, Guido, Beitrag zum Studium der Anaphylaxie. Ueber
Anaphylaxie durch Gewebe- und Bakterienproteide. [Aus dem
Pathologischen Institute der koniglichen tierarztlichen Hochschule
in Mailand] .. 70
Karsner, Howard T., The Lungs of the Guinea Pig in Anaphylaxis
produced by Toxic Sera. 81
Seitz, A., Ueber Bakterienanaphylaxie. II. Mitteilung. [Aus dem
Hygienischen Institut der Universitat Bonn a. Rh. (Direktor:
Prof. Dr. Kruse)]. 91
. ■
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IV
Inhaltsverzeichnis.
Ditthorn, Fritz, und Schultz, Werner, Biologische Versuche iiber
Metallfallungen mit Eiweililfisungen und Gonokokkenextrakten.
[Aus dem Untersuchungsamt der Stadt Berlin (Direktor: Geh.
Reg.-Rat Prof. Proskauer) und dem stadtischen Krankenhause
Charlottenburg-Westend (Dirig. Arzt: Prof. Dr. Umber)] . . .
Frelfeld, Ji, Ueber die Spezifitat der Agglutinationsreaktion bei der
Diagnose der Cholera- und choleraartigen Vibrionen. [Aus dem
Bakteriologischen lnstitut von Dr. Diatroptoff, Moskau] . .
Boehncke, K. E., und Bierbaum, IL, Ueber den Einflufi der Kalte
und iiber die Erschopfung des Antigens bei der Darstellung des
Anaphylatoxins. [Aus dem Konigl. lnstitut fur experimentelle
Therapie zu Frankfurt a. M. (Direktor: Wirkl. Geh. Rat Prof.
Dr. P. Ehrlich)].
McIntosh, James, Fildes, Paul, and Bearden, H., Reply to the
remarks of H. Freund upon our article: Salt Fever and the
treatment of Syphilis by “606”. [From the Bacteriological La¬
boratory of the London Hospital (Dr. William Bulloch)] . .
Bold und Ogata, Nachtrag zu der Arbeit: Weitere Studien iiber die
wiisserigen Organextraktgifte. (Diese Zeitschrift, Bd. 13, Heft 6,
p. 667 ff.) .... ..
Heft 2. (Ausgegeben am 7. August 1912.)
Coca, Arthur F., and L’Esperance, Ellse S., A Modification of the
Technic of the Wassermann Reaction. [From the Departments of
Pathology and Experimental Pathology in the Medical College
of Cornell University, New York] . ..
Rosenthal, Eugen, Versuche, Antigen- und Amtikorperbeeinflussungen
sichtbar zu machen. Experimentelle Studien mit der Epiphanin-
reaktion. III. Mitteilung: Streptokokken, Staphylokokken und
Gonokokken. [Aus dem Hygienisch-bakteriologischen lnstitut der
Universitiit Erlangen, exp.-biologische Abteilung (Prof. Dr. Wolf¬
gang Weichardt), und "aus dem chemisch-biologischen Labo-
ratoriura der IV. Abteilung des St. Rochus-Spitales der Haupt-
und Residenzstadt Budapest (Prof. Dr. Stephan v. T6th).]
Mit 20 Kurven im Text.
Michaells, Leonor, und Marcora, Ferruccio, Die Saureproduktivitat
des Bacterium coli. [Aus dem biologischen Laboratorium des
stiidtischen Krankenhauses Am Urban, Berlin].
Rosenthal, Eugen, Ueber den biologischen Parallelismus der fotalen
und Krebszellen nebst Beziehungen ihrer EiweiBe. [Aus dem
chemisch-biologischen Laboratorium der IV. Abteilung des St.
Rochus-Spitales der Haupt- und Residenzstadt Budapest (Ober-
arzt: Prof. Dr. Stephan v. T6th).] Mit 6 Kurven im Text .
GWizony, Ludwig, 1st die normale Serumbakterizidie komplex? [Aus
dem Bakteriologischen lnstitut der Universitat in Budapest
(Direktor: Prof. Dr. HugoPreisz)].
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Inhaltsverzeichnis. V
Seite
Thomsen, Oluf, Experimentelle Untersuchungen fiber die Poliomyelitis.
Zweite Mitteilung. [Aus Statens Seruminstitut Kopenhagen
(Direktor: Dr. Th. Madsen).] Mit 1 Figur im Text.198
Popoff, Method!, Ueber hamolysehemmende Erscheinungen bei lueti-
schen Seren und iiber die Moglichkeit ihrer diagnostischen Ver-
wertung.218
Heft 3. (Ausgegeben am 28. August 1912.)
Bergel, 8., Experimentelle Untersuchungen iiber Wesen und Ur-
sprung der Hamagglutination. Mit 10 Figuren im Text . . . 255
Knmagai, T., Zur Frage der Hitzebestiindigkeit der gebundenen Anti-
korper. [Aus dem Pharmakologischen Institut der Universitiit
Berlin; Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung
fiir Immunitiitsforschung und experimentelle Therapie; Leiter:
Prof. Dr. E. Friedberger)] .. 269
Joaehimoglu, Georg, Ueber Anaphylaxie. XXVIII. Mitteilung.
Weiteres iiber Anaphylatoxinbildung aus Bakterien von pepton-
freien Xahrboden, zugleieh ein Beitrag zur Frage der quanti-
tativen Verhaltnisse bei der Giftbildung. [Aus dem Pharma-
kologischen Institut der Universitiit Berlin; Direktor: Geheimrat
Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung fiir Immunitiitsforschung und
experimentelle Therapie; Leiter: Prof. Dr. E. Friedber ger)] . 280
Browning, Carl IL, Crnickshank, John, and Gilmonr, Walter, The
Lecithin Fractions of Various Organ Extracts: their Action as
Syphilitic Antigens and as Cobra-Venom Haemolysins in Relation
to their Iodine Values. [From the Pathological Laboratories of
the University and Western Infirmary, Glasgow, and of Gart-
loch Asylum].284
Kllng, Carl, Wemstedt, Wilhelm, et Petterason, Alfred, Recherches
sur le mode de propagation de la paralysie infantile dpidemique
(maladie de Heine -Medin). Troisieme memoire. [Travail du
laboratoire bact^riologique de l’lnstitut medical de l’Etat a Stock¬
holm.] Avec 5 figures.303
Meyer, Kurt, Ueber die Spezifitiit der Komplementbindungsreaktionen
mit alkoholischen Parasitenextrakten. IV. Mitteilung. Ueber anti-
gene Eigenschaften von Lipoiden. [Aus dem Serobakteriologischen
Laboratorium des Stadtkrankenhauses in Stettin].355
Meyer, Kart, Ueber die komplementbindenden Bestandteile des
Tuberkelbacillus. V. Mitteilung. Ueber antigene Eigenschaften
von Lipoiden. [Aus dem Serobakteriologischen Laboratorium des
Stadtkrankenhauses in Stettin].359
Lark, Bemerkungen zu der Arbeit von A. Seitz fiber Bakterien -
anaphylaxie.368
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VI
Inhal ts verzeichn is.
Heft 4. (Ausgegeben am 7. September 1912.)
Friedberger, E., Szymanowski, Z , Kumagai, T., und Odaira,
Lurk, A., Die Spezifizitiit der Antianaphylaxie und ihre Be-
ziehungen zur Resistenz bei einigen der Anaphylaxie ahnlichen
Vergiftungen. Ueber Anaphylaxie. XXIX. Mitteilung. [Aus dem
Pharmakologischen Institut der Universitiit Berlin; Direktor:
Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung fiir Immunitats-
forschung und experimentelle Therapie; Leiter: Prof. Dr. E. F r i ed-
berger.)] — A. Einleitung. Von E. Friedberger. — B. Die
Spezifizitiit der aktiven Antianaphylaxie. Von Z. Szyma¬
nowski. — C. Die Spezifizitiit der passiven Antianaphylaxie und
die Beziehungen der Antianaphylaxie zum Peptonschutz. Von
T. Kumagai und Odaira. — D. Die Beziehungen der Anti¬
anaphylaxie zum Anaphylatoxinschutz und zur Vergiftung durch
£-Imidazolylathylamin. Von A. Lurii . ..
Noguchi, Hideyo, Kulturelle und immunisatorische Diflerenzierung
zwischen Spiroehaeta pallida, Spiroehaeta refringens, Spirochaeta
microdentium und Spiroehaeta macrodcntium. | Aus dem Labora-
torium des Rockefeller Institute for Medical Research, New York]
Seligmann, E., Beitriige zur Anaphylaxie-Forschung. [Aus dem Unter-
suchungsamt der Stadt Berlin (Geh. Rat Proskauer). Hygie-
nisch-bakteriologische Abteilung (Prof. Sobernheim)] . . . .
Miiller, Paul Tli., Quantitative Untersuchungen fiber Bakterien-
anaphylaxie. [Aus dem Hygien. Institut der Universitiit Graz] .
Izar, G., und Patan6, C., Zur Kenntnis der toxischen Wirkung
von Organextrakten. [Aus dem Institut ffir sj>ezielle Pathologie
innerer Krankheiten der k. Universitiit Catania (Vorstand: Prof.
M. Ascoli)] .
Hlrschfeld, Hanna, und Hlrschfeld, Ludwig, Ueber vasokonstrin-
• gierende Substanzen im anaphylaktisehen Shock und bei der
Anaphylatoxinvergiftung. [Aus der Kinderklinik (Direktor:
Prof. Feer) und dem Hygiene-Institut (Direktor: Prof. Silber-
schmidt) der Universitiit Zfirich.] Mit 27 Kurven im Text . .
Heft 6. (Ausgegeben am 21. September 1912.)
Oker-Blom, Max, Zum Mechanismus dor Bakterienverankerung an
das Leukocytenprotoplasma. [Aus dem Hygienischen Institut dcr
Universitiit Helsingfors].
Burckhardt, Jean Louis, Ueber das Blutbild bei Huhnertuberkulose
und dessen Beziehungen zur sogenannten Hfihnerleukamie nebst
Bemerkungen fiber das normale Hiihnerblut. [Aus dem Pharma¬
kologischen Institut der Universitiit Berlin; Direktor: Geheimrat
Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung fiir Immumtatsforsehung und
experimentelle Therapie; Leiter: Prof. Dr. E. Friedberger)] .
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Inhaltsverzeichnis.
VII
Heft 0 . (Ausgegeben am 30. September 1912.)
Seite
Bornstein, A., Ueber die Rolle der hypertonischen Kochsalzlosung bei
der Anaphylaxie. [Aus der Physiologischen Abteilung am All-
gemeinen Krankenhause St. Georg in Hamburg].605
Sehittenhelm, A., und Weichardt, Studien liber die biologische
Wirkung bestimmter parenteral einverleibter EiweiSspaltprodukte.
[Aub der Medizinischen Klinik und dem Hygienisch-bakterio-
logischen Institut der Universitat Erlangen].609
Friedberger, E., Ueber einen neuen, keimdichten VerschluU fur
Zentrifugenrohrchen und Kulturgefafie. [Aub dem Pharma-
kologischen Institute der Universitat Berlin; Direktor: Geheimrat
Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung fiir Immunitatsforschung und
experimentelle Therapie, Leiter: Prof. Dr. E. Fried berger).]
Mit 2 Figuren im Text. 637
Teodorascu, Untersuchungen liber das agglutinatorische Verhalten
von Paratyphus B- und Pestifer-Stammen. [Aub der Bakterio-
logisehen Abteilung des Kaiserlichen Gesundheitsamtes] .... 639
Kammann, 0., und Gaehtgens, W., Experimentelle Untersuchungen
uber die Bindung von Pollentoxin und Antitoxin. [Aus dem
Staatlichen Hygienischen Institut zu Hamburg (Direktor: Prof.
Dr. Dunbar).] Mit 2 Kurven im Text.646
Marxer, A,, Experimentelle Tuberkulosestudien. IV. Intravenose
Immunisierungsversuche an Meerschweinchen. [Aus der bakterio-
logischen Abteilung der chem. Fabrik auf Aktien (vorm.
E. Schering), Berlin].663
Wolfy Franz, Ueber den Verlauf der Antikorperkurve beim Kaninchen
nach intravenoser lnjektion. [Aus der Universitats-Kinderklinik
in Heidelberg (Direktor: Prof. Moro).] Mit 9 Kurven im Text 668
(J41, Felix, Untersuchungen liber das Virulenzproblem. [Aus dem
Bakteriologischen Institut der Universitat in Budapest (Direktor:
Prof. Dr. Hugo Preisz)].685
Schilling, Clans, und Friedrich, Ueber Immunitat bei Pirosoma canis.
[Aus dem Konigl. Institut flir Infektionskrankheiten „Bobert
Koch“; Direktor: Geh.Obermed.-Rat Prof. Dr. Gaffky. Leiter
des Tropenlaboratoriums: Prof. Dr. C. Schilling].706
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Autorenverzeiclmis.
Bergel, S. 255.
Boehncke mid Bierbaum 130.
Bernstein 605.
Browning, Cruickshank und Gilmour
284.
Burckhardt, J. L. 544.
Coca und L’Esperance 139.
Ditthorn und W. Schultz 103.
Dold und Ogata 138.
Freifeld 111.
Fried berger 371, 037.
Friedemann, U., und Rozenblat 42.
Gal, F. 685.
Galli-Valerio und Bornand 32.
G6zony 186.
Guerrini 70.
Hirschfeld, H., und Hirschfeld, L.
466.
Izar und Pa tan 6 448.
Joachinioglu 280.
Kammann und Gaehtgens 646.
Karsner, H. T. 81.
Kling, Wernstedt und Pettersson 304.
Kumagai 269.
Kumagai und Odaira 391.
Landstemer und Rock 14.
Lurk 368, 403.
Marxer 663.
McIntosh, Fildes und Dearden 137.
Meyer, K. 355, 359.
Michaelis, L., und Marcora 170.
Muller, P. Th. 426.
Noguchi 412.
Oker-Biom, M. 485.
Popoff 218.
Rosenthal, E. 159, 174.
Rozenblat 62.
Schilling, Cl., und Friedrich 706.
Schittenhelm und Weichardt 609.
Seitz, A. 91.
Seligmann 419.
Stotter und Rosenthal, E. 1.
Szymanowski 381.
Teodorascu 639.
Thomsen, O. 198.
Wolf, Franz 668.
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Zeitschrift £ Inmumitatsforscliiiiig. Originate. Bd.HTJo.1.
Nachdruck verboten.
[Aus der Bakteriologischen Untersuchungsanstalt Erlangen (Prof.
Dr. W. Weichardt) und dem Chemisch-biologischen Laboratorium
der IV. Abteilung des St. Rochus-Spitals der Haupt- und Residenz-
stadt Budapest (Prof. Dr. Stephan v. T6th).]
Versnche, Antigen- nnd AntikOrperbeeinflnssnngen
sichtbar zn machen.
Expert■eitelle Stadiea alt der Epiphaoinreaktion.
II. Mitteilung.
Von
Hermann Stdtter (Erlangen) und Eugen Rosenthal (Budapest).
Mit 20 Kurven im Text.
(Eingegangen bei der Redaktion am 3. April 1912.)
Wie in Mitteilung I ausgefflhrt wurde, haben Weichardt
und seine Mitarbeiter in einer Reihe von Versuchen fest-
gestellt, daB sich bei der Baryumsulfatbildung Verschiebungen
nach der sauren resp. basischen Seite ergeben, wenn Eiweifie
und Eiweifiderivate, Bakterienprodukte und andere Substanzen
einerseits und darauf reagierende Seren andererseits auf-
einander einwirken. Mit dieser Reaktion ist es nicbt nur
gelungen, den Verlauf der Antigen- und Antikdrperwirkungen
sichtbar zu machen, sondern es erscheint auch mbglich, durch
die GrdBe der Verschiebung in die Mengenverh<nisse der
reagierenden Stoffe Einblick zu erhalten.
Wir haben nun eine Reihe von Versuchen mit den ver-
schiedensten Antigenen und Antikdrpern angestellt, urn diese
Verhaltnisse zu kULren und strittige Punkte zu beseitigen.
Zu diesem Zwecke wurden vorwiegend Laboratorium stiere in
gesundem Zustande untersucht und sodann mit einer be-
stimmten Menge des Infektionserregers Oder geldsten Antigens
injiziert, urn die Serumver&nderung im Laufe der Behandlung
mit Hilfe der Epiphaninreaktion zu verfolgen.
Zdtsehr. f. lmmanlttUforechuDf. Drig. Bd. XIV. 1
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2 Hermann Stotter und Eugen Rosenthal,
L Bestimmimg des Versaohsfehlers.
ZunSchst suchten wir die Fehlergrenze unserer Methode
festzustellen, ein Vorgehen, das von jedem auf diesem Gebiete
Arbeitenden verlangt werden muB, da die Gr6Be des Versuchs-
fehlers fast ausschlieBlich vom Experimentator abh&ngig ist.
Erst wenn durch genfigende Uebung und Exaktheit des
Arbeitens der Versuchsfehler auf ein Minimum reduziert ist,
so daB er ftir die Bewertung der erhaltenen Ausschl&ge be-
langlos wird, sollte mit der Ausfilhrung wissenschaftlicher
Untersuchungen begonnen werden. Und auch dann empfiehlt
es sich, wie bereits in Mitteilung I ausgefiihrt wurde, bei den
ausschlaggebenden Werten Doppelbestimmungen vorzunehmen.
Diese Versuche, die aucb AufschluB geben sollen, ob sich
ein Unterschied im Versuchsfehler ergibt, wenn erst Baryt
und dann SchwefelsSure zugesetzt werden oder umgekehrt,
wurden in der gewOhnlichen Weise ausgefiihrt. Bei der Auf-
stellung der ersten Versuchsreihe wurden die 4 Glaser erst
mit je 3 ccm Barytlbsung, dann mit je 3 ccm der genau ein-
gestellten Schwefels&ure versetzt, die Inhalte der Glaser I
und IV und II und III vereinigt, sowie die entsprechenden
Spiilwasser zugegeben und dann noch je 0,1 ccm des Phenol-
phthalein-Indikators. Die Glaser sind nach Zusatz der Baryt-
lbsung sofort mit einer Glasplatte zuzudecken, die erst kurz
vor der Beschickung mit Schwefelsaure abgenommen werden
darf. Die Aufstellung der zweiten Versuchsreihe geschah in
gleicher Weise, nur erfolgte die Beschickung mit den System-
losungen in umgekehrter Reihenfolge.
Tabelle I.
Anzahl com n/ l000 H a S0 4
+ 0,4
S
1 -1.0
s.
+ 0,2
A
—1,4
L
±0
-1,1
:rt
+ 1.0
i 3
'0
-2,5
c
+ 0,8
±0
c Ti
! + 1,2
p
+ 0,7 1
id
c
+ 0.7
1
+ +2
V
j —1.9
w
5
1-0,6
U-
cc
1 +0,4
1 -6
'Si
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Antigen- und Antikorperbeeinflussungen sichtbar zu machen. 3
Diese Angaben beziehen sich auf die Mikrapipette. Aehn-
lich angeordnete Versuche warden mit der Spiralpipette aus-
gefflhrt und sind in der folgenden Tabelle festgelegt.
Tabelle II.
Anzahl ccm n/ 1000 H,S0 4
! +1,1
1
2
+ 0.9
i +2.0
;
+ 1,2
i -w _!
-1,7
1
1 - 0,6
3
.25
H-
o
o
1 -0,9
1 «
— 0,8
,
— 0,2
CQ
L
-1,4
1 +0,8
3
J2
-2,2
+ 0,6
+ 1,8
± 0,0
1
+ 0,9
Wie in der Tabelle I, lieBen sich auch bei Aufstellung
der Tabelle II einige verh<nism&Big grofie Fehler von un-
gefS.hr 2 ccm nicht vermeiden, die offenbar durch ein Versehen
des Experimentators bedingt waren, trotzdem die Versuche
mit groBter Aufmerksamkeit ausgefiihrt wurden. Es muB
daher an dem Grundsatz, die ausschlaggebenden Werte durch
Doppelbestimmungen zu fixieren, festgehalten werden.
Das Gesamtergebnis der beiden Reihen war sehr gttnstig
und ergab als raittleren Fehler ungefahr 1 ccm n/ 100 o H 2 S0 4 .
Die Versuche haben zweifellos ergeben, daB kein wesentlicher
Unterschied vorhanden ist, wenn die Systemlosungen in der
einen Oder anderen Reihenfolge zugefiigt werden, und daB
wir bei unseren Versuchen mit einem Fehler von ungefahr
1 ccm n/ 1000 H 2 S0 4 zu rechnen haben, was einer Menge von
0,049 mg H 2 S0 4 entspricht. Unsere Versuchsweise ist also
eine sehr genaue.
2. Tuberkulose.
Zu den ersten Versuchen auf diesem Gebiete dienten uns
als Antigen und Antiserum das Kochsche Tuberkulin und
Hochster Trockenserum. Wahrend wir bei den Untersuchungen,
die in Abschnitt 3 festgelegt sind, mit FabrikprSparaten sofort
deutlich positive AusschlSge erhalten konnten, trat hier ent-
l*
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Hermann Btdtter und Eugen Rosenthal,
weder keine Beeinflussung ein oder die Ausschl&ge waren zu
unbestimmt, um eine klare Deutung zuzulassen.
Nach unserer Erfahrung aus den sp&ter angestellten Ver-
suchen scheint das Kochsche Tnberkulin als Antigen fftr die
Epiphaninreaktion ungeeignet zu sein. Auch das getrocknete
Serum H6chst wird besser vermieden, wie iiberhaupt Trocken-
sera nicht empfehlenswert ffir die Epiphaninreaktion sind.
Ganz andere Ergebnisse erhielten wir bei Verwendung
des albumosefreien Tuberkulins der Farbwerke H8chst Gerade
diese Versuche haben uns aufs neue gezeigt, von welcher Be-
deutung filr das Gelingen der Epiphaninreaktion die Wahl
des Antigens ist. Selbst mit dem wenig geeigneten Trocken-
sernm erhielten wir (Kurve 1) eine schwache positive Kurve,
w&hrend die mit dem flflssigen Tuberkuloseserum erhaltene
einen deutlich positiven Verlauf zeigt (Kurve 2).
Kurve 1. Kurve 2.
Das albumosefreie Tuberkulin Hbchst zeigt die Eigen-
schaft, die ein fQr die Epiphaninreaktion brauchbares Antigen
aufweisen soli, es gibt, wie aus Kurve 4—10 ersichtlich, mit
dem Serum normaler, in keiner Weise vorbehandelter Tiere
keine oder nur geringe Ausschl&ge.
Besonders hervorheben mbchten wir ferner, daB bei den
Versuchen der bereits in Mitteilung I besprochene Antikeno-
toxinzusatz nicht unterbleiben soil, da anderenfalls oft so
stSrende Verschiebungen der einzelnen Werte auftreten kdnnen,
daB eine richtige Deutung unmdglich wird. Die Kurven 3
und 4, die mit dem gleichen normalen Meerschweinchenserum
und albumosefreien Tuberkulin mit und ohne Antikenotoxin-
zusatz erhalten wurden, geben hierfur ein Beispiel.
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Antigen- und Antikdrperbeeinflussungen sichtbar zu machen. 5
Kurve 3. Kurve 4.
Ohne Antikenotoxinzusatz. Mit Antikenotoxinzusatz.
Es 8cheinen, soweit unsere Erfahrung reicht, durch
den Antikenotoxinzusatz Stoffe, die die Epiphaninreaktion im
positiven Sinne beeinflussen, gebunden und so far die Reaktion
unwirksam gemacbt zu werden.
Die nun folgenden Versucbe wurden ausgefOhrt, um die
Gr&fie und Art des Unterschiedes festzustellen, der durch die
Epiphaninreaktion zum Ausdruck gebracht wird, wenn wir bei
ein und demselben Tiere unter sonst gleichen Versuchs-
bedingungen zuerst Normalserum und dann nach erfolgter
Infektion Immunserum untersuchen, und ob sich eine ge-
nOgende Abweichung im Bilde der so erhaltenen Kurven er-
gibt, um aus ihnen die Erkrankung festzustellen.
Die Versuche wurden in der Weise angestellt, dafi einem
Meerschweinchen Blut entnommen und mit dem so gewonnenen
Normalserum in bestimmten Verdttnnungen eine Epiphanin¬
reaktion ausgefahrt wurde. Sobald das Tier starke Gewichts-
abnahme zeigte, wurde es getOtet und mit dem erhaltenen
Immunserum in den gleichen VerdQnnungen wie zuvor die
Epiphaninreaktion bestimmt. GemfiB den in Mitteilung I ge-
machten Ausftthrungen wurden Normal- resp. Immunserum
vor der Untersuchung je 2mal 24 Stunden mit etwas Karbol-
zusatz in dem Eisschrank stehen gelassen. Als Antigen kam
das albumosefreie Tuberkulin Hochst in Verdttnnung 10 -8 unter
Zusatz von Antikenotoxin zur Verwendung. In jedem einzelnen
Falle wurde durch Sektion des Tieres der anatomische Befund
festgestellt Von den zwei in jeder Figur ausgezogenen
Kurven gibt die punktierte den mit dem Normalserum
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Hermann Stotter und Eugen Rosenthal,
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erhaltenen Ausschlag an, die schwarz gezeichnete wurde mit
dem Immunserum bestimmt. Die Zahlen auf der Abszisse
entsprechen den Serumverdttnnungen.
I. Fall.
Bint entnommen am 10. XII. und Kurve mit dem
Normalserum bestimmt am 12. XII. Die am 10. XII.
vorgenommene Infektion erfolgte durch intraperitoneale In-
jektion von Tuberkelbacillen. Die Blutentnahme von dem
stark abgemagerten Tier wurde am 30. XII. vorgenommen.
Die Gewichtsabnahme des Tieres betrug 40 g bei einem an-
fanglichen Korpergewicht von 370 g. Bei der Sektion fand
sich ausgesprochene Tuberkulose insbesondere der Lunge,
Leber, Milz und Mesenterialdrttsen.
Die Bestimmung der Epiphanin-
reaktion mit dem Serum des infizierten
Tieres wurde am 4. I. ausgefiihrt und
zeigte mit dem anatomischen Befund
vollkommene Uebereinstimmung, indem
wir eine typisch positiv verlaufende
Kurve mit dem ganz bedeutenden Aus¬
schlag von 14 ccm n/ 1000 H 2 S0 4 fest-
stellen konnten.
Kurve 5.
Albumosefreies Tuberkulin Hochst.
• Serum des infizierten Meerschweinchens.
Serum desselben Tieres vor der Infektion.
II. Fall (nicht tuberkulbses Tier).
Blut entnommen am 10. XII. und Kurve mit dem Serum
bestimmt am 12. XII. Eine zweite Blutentnahme erfolgte am
30. XII. Die Sektion ergab keine An-
zeichen von Tuberkulose. Selbst in den
Driisen lieBen sich keine s&urefesten
Bacillen nachweisen. Das Gewicht des
Kurve 6.
Albumosefreies Tuberkulin Hochst.
- Serum eines normalen Meerschweinchens.
Serum von der zweiten Blutentnahme.
Gck igle
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Antigen- und Antikdrperbeein flussungen sichtbar zu machen.
7
Tieses war ann&hernd konstant geblieben and betrug 390 g.
Die am 4. I. mit diesem Seram vorgenommene Epiphanin-
reaktion verlief negativ; die erbaltene Kurve zeigt nur eine
geringe Abweichung von der ersten Kurve, die mit dem Serum
vom 12. XII. erhalten worden war.
III. Fall.
Zu einem weiteren Versucbe hatten wir am 12. XII. ein
Meerschweinchen mit einem tuberkuloseverd&chtigen Ham-
sediment intraperitoneal geimpft. Von einer Blutentnahme
zur Bestimmung der Epiphaninreaktion mit Normalserum war
in diesem Falle abgesehen worden. Nachdem das Tier stark
abgemagert war, wurde es am 18. I. entblutet. Die Sektion
ergab eine Tuberkulose in den Lungen- und Retrojugular-
drflsen. Ferner waren in der Leber, in den Retroperitoneal-
drflsen und auch im Peritoneum
Tuberkeln zu linden. Wie aus Kurve 7
ersichtlich, reagierte die Epiphanin¬
reaktion in Uebereinstimmung mit
dem anatomischen Befund positiv.
Kurve 7.
Albumosefreies Tuberkulin Hochst.
— Serum des mit tuberkulosem Material
geimpften Meerschweinchen s No. 56.
Untersuchungen dariiber, in welchem Stadium der Tuberkulose bereits
eine positive Epiphaninreaktion erhalten wird und wie sich das Fort-
schreiten der Erkrankung im Kurvenbild ausdriickt, haben wir bis jetzt
noch nicht ausgefiihrt.
IV. Fall.
In dem in Kurve 8 angefflhrten Ver-
such wurde wiederum das Serum des
Tieres vor der Impfung untersucht und
nach etwa 3 Wochen das Serum des
entbluteten Tieres. Auch hier ergab
Kurve 8.
Albumosefreies Tuberkulin Hochst.
■ — Serum eines mit Tuberkelbacillen infizierten
Meerschweinchen s.
Serum desselben Tieres vor der Impfung.
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8
Hermann Stdtter und Eugen Rosenthal,
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die Epiphaninreaktion in Uebereinstimmung mit den vorber-
gegangenen Versuchen den nicht zu miBdeutenden, charak-
teristischen Ausfall gegentiber der mit dem Normalserum
bestimmten Knrve.
V. Fall.
Blut entnommen am 11. II. und die Epiphaninreaktion
ausgeftihrt mit dem Normalserum am 13. II. Das tuberkuldse
Tier wurde am 22. II. entblutet, da es nicht mehr lebensf&hig
war. Das Ktirpergewicht war von 320 auf 260 g zurtick-
gegangen. Die Epiphaninreaktion mit dem Immunserum wurde
am 24. II. bestimmt.
Der Verlauf der Reaktion war wieder ein ausgesprochen
positiver. Die mit dem Normalserum erhaltene Kurve weicht
von der meist erhaltenen Form etwas ab,
und wir trugen uns daher mit dem Ge-
danken, das Tier zu tdten, um den ana-
tomischen Befund festzustellen, bevor
derselbe durch die Infektion beeintrfichtigt
wurde. Da aber diese Versuche aus-
Kurve 9.
Albumosefreies Tuberkulin Hochst.
■ Serum eines mit TuberkelbaciUen infizierten
Meerschweinchena.
Serum desselben Tieres vor der Impfung.
schlieBlich zur Kenntnis der Epiphaninreaktion bei Tuberkulose
dienen sollten, lieBen wir davon ab. Die nachtrtiglich vor-
genommene Sektion ergab auBer hochgradiger Tuberkulose
' ein groBes Exsudat in der Bauchhohle.
VI. Fall.
Blut entnommen am 6. II. und Epiphaninreaktion aus¬
geftihrt mit Normalserum am 8. II. Nachdem das K6rper-
gewicht von 300 auf 250 g zurtickgegangen war, wurde das
Tier am 19. II. entblutet und die Epiphaninreaktion mit dem
Immunserum am 21. II. ausgeftihrt; der anatomische Befund
ergab vorgeschrittene Tuberkulose.
Auch hier war wiederum der Ausfall der Epiphaninreaktion
deutlich positiv. Der Verlauf der mit dem Normalserum er-
Gck igle
Original from
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Antigen- und Antikdrperbeeinflussungen richtbar zu machen. 9
haltenen Kurve zeigte in diesem speziellen Falle den Typus
einer nach der negativen Seite hin verschobenen positiven
Kurve. Ob wir aber diese Kurve
als ein Kennzeichen vorhandener ge-
ringer tuberkulOser Affektion ansehen
dflrfen, darflber fehlt uns noch die ♦
Erfahrung. Auf alle Falle zeigt die
Kurve 10.
Albumosefreies Tuberkulin Hochst.
- Serum eines mit Tuberkelbacillen in-
fizierten Meerschweinchens.
Serum desselben Tieres vor der Im-
pfung.
mit dem Immunserum erhaltene Kurve gegenfiber der erst-
bestimmten deutlich positiven Ausfall.
3. Beeinfluasung der Epiphaninreaktion durch Antigene und
Sera unter versohiedenen Bedingungen.
Um den Einflufi der Aufbewahrung der Sera und der
verwendeten Toxine auf die Epiphaninreaktion naher zu
studieren, haben wir eine Reihe Untersuchungen von Diphtherie-
toxinen verschiedenster Provenienz und Diphtherieseren, die
in verschiedenster Weise konserviert waren, angestellt.
Als Antigen wurden verwendet die Diphtherietoxine Hochst
(5-fach), Ruete-Enoch (let. Dos. 0,005 in 2 Tagen), Amerika I
(let. Dos. 0,006 in 2 Tagen) und Mac Farland II (let. Dos. 0,03
in 2 Tagen) in Verdfinnung 10 -2 , als Sera die HOchster
Diphtherieseren Op.-No. 1587 und Op.-No. 1582 (400-fach),
sowie Diphtherieserum aus Dresden (500-fach).
Bei unseren Untersuchungen priiften wir:
1) Sera mit verschiedenen Toxinen,
2) ein Toxin mit verschiedenen Seren und
3) ein und dasselbe Serum und Toxin zu verschiedenen
Zeiten und unter verschiedenen Bedingungen.
Die erhaltenen Ergebnisse sind in den folgenden Kurven
festgelegt. Die Zahlen auf der Ordinate geben, wie in alien
Kurven, die Titerwerte, die auf der Abszisse die Serum-
verdfinnungen an.
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10
Hermann Stotter und Eugen Rosenthal,
Die Kurve hat alle Eigenschaften
einer stark positiven. Sie verlauft cha-
rakteristisch, hat eine entsprechende
absolute H6he und es besteht zwischen
dem positiven und negativen Ausschlag
eine ziemliche Differenz.
Kurve 11.
Diphtherietoxin Ruete-Enoch (10— 2 ).
Diphtherieheilserum Hochst.
Die beiden Bestimmungen zeigen, daC in unserem Sinne
positive Kurven nur mit geeigneten Antigenen erhalten werden.
DaB der negative Ausfall der Reaktion nicht von dem Serum
Kurve 12. Kurve 13.
Kurve 12. Hochster Diphtherieserum Op.-No. 1587 und Diphtherie¬
toxin Hochst.
Kurve 13. Hochster Diphtherieserum Op.-No. 1587 und Diphtherie¬
toxin Me. Farland II.
bestimmt war, ergibt sich ferner aus dem nachstfolgenden
Versuch mit demselben Serum und einem anderen Diphtherie¬
toxin, dem Diphtherietoxin Ruete-Enoch. In diesem Falle
erhielten wir bei einem Versuche, der fiinf Monate spater als
die vorhergehenden angestellt wurde, noch einen allerdings
abgeschw&chten positiven Ausschlag.
Der Verlauf der Kurve 15 zeigt, dafi die HSchster
Diphtherieseren Op.-No. 1582 und 1587 sich gegeniiber dem
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Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Antigen* und Antikorperbeeinflussungen sichtbar zu machen. XI
Kurve 14. Kurve 15.
Kurve 14. Hochster Diphtherieserum Op.-No. 1587 und Diphtherie¬
toxin Ruete-Enoch.
Kurve 15. Hochster Diphtherieserum Op.-No. 1585 und Hochster
Diphtherietoxin.
HOchster Diphtherietoxin ganz ahnlich verhalten. (Siehe
Kurve 12.)
Die folgenden Kurven 16—20 wurden mit ein und dem-
selben Serum und Antigen zu verschiedenen Zeiten bestimmt.
Als Serum diente ein Dresdener Diphtherieserum (400-fach),
als Antigen das Diphtherietoxin Amerika I l ). Das Diphtherie¬
serum war uns auf Ersuchen ohne Zusatz eines Konser-
vierungsmittels zugestellt worden und wurde in diesem Zu-
stande ftir die Bestimmung der Kurven 16 und 17 verwendet.
Kurve 16 wurde am 21. X. bestimmt und der grOCere Teil
des Serums an diesem Tag in zwei Fl&schchen tibergefflllt,
von denen das eine mit etwas Thymol, das andere mit Karbol
beschickt war. Die Bestimmung der Kurve 17 wurde am
25. X. vorgenommen.
Der Teil des Diphtherieserums, der nach dem Oeffnen der
Originalflasche sich selbst (iberlassen worden war, und in dem
Bakterien und ihre Stoffwechselprodukte sich entwickeln konnten,
zeigte zwar noch den gleichen Kurventypus, insbesondere ist
die absolute H6he die gleicbe geblieben, aber es waren zweifel-
los in dem Serum Substanzen entstanden, durch welche die
Kurve in toto nach unten gedrttckt wurde. (Kurve 16 und 17.)
1) Herm Professor Kraus (Wien), der Direktion der Hochster Farb-
werke und der Sachsischen Serumwerke sind wir fur Ueberlassung von ver¬
schiedenen Antigenen und Seren sehr zu Dank verpflichtet.
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12
Hermann 6tdtter und Eugen Rosenthal,
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Kurve 16.
Zur Bestimmung der Kurve 18 kam das unter Thymol-
zusatz konservierte Serum zur Verwendung, fflr Kurve 19 das
unter Karbolzusatz konservierte. Die Kurven zeigen, daC Sera,
welche mit Konservierungsmitteln versetzt sind, so daB Bakterien
Kurve 18. Kurve 19.
darin nicht wuchern konnen, weiterhin den fur die Epiphanin-
reaktion positiven Charakter aufweisen. Beide Kurven ver-
laufen typisch positiv und zeigen fast vollkommene Ueber-
einstimmung (absolute H5he 15 resp. 19).
Go i igle
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Antigen- und AnUkorperbeeinfluseungen aichtbar zu m&chen. 13
Infolge dieser und anderer Erfahrung mit verschieden-
artigen Toxinen und Antikdpern halten wir es daber fflr das
beste, frisch entnommene Sera mit etwas Karbol zu versetzen
und erst nach ein oder zwei Tagen zu untersuchen. Man er-
zielt dann gleichwertigere Ausschl&ge.
Wir hatten ursprtlnglich die Ab- Kurve 20.
sicbt gehabt, sowobl das nicht kon-
servierte wie die beiden verschieden
konservierten Seren spiiter weiter zu
untersuchen. Es erwies sich jedoch nur
das durch Karbolzusatz konservierte
Serum noch nach lfingerer Zeit wirk-
sam. Die Bestimmung der Kurve 20
wurde ungefShr zwei Monate sp&ter
als die von Kurven 18 und 19 vor-
genommen. Sie zeigt groBe Aehnlich-
keit in ibrem Verlauf, wobei die Fein-
heit der Reaktion noch dadurch zum
Ausdruck kommt, dafi sie nach zwei Monaten einen weniger
starken Ausschlag gibt.
Aufierdem liegen noch zwei weitere Diphtheriekurven vor,
welcbe in der Mitteilung I bei der Besprechung der Spiral-
pipette angeftihrt sind. Da diese Kurven dasselbe zeigen wie
die Kurven 11—20, wollen wir nur kurz auf jene verweisen.
Zusammenfassung.
I. Bei normalen Meerschweinchen, deren Serum eine posi¬
tive Epiphaninreaktion nicht gibt, tritt nach Infektion durch
Tuberkelbacillen eine mittels der Epiphaninreaktion nach-
weisbare Ver&nderuug im Organismus ein. Das Serum des
tuberkuldsen Tieres reagiert dann positiv.
II. Die Untersuchung der Seren zu verschiedenen Zeiten
hat ergeben, daB bei l&ngerer Aufbewahrung der Seren die
E.R. Eigenschaften abgeschwficht werden.
III. Nach unseren Versuchen ist die Epiphaninreaktion
das feinste Reagens, daB wir zur Zeit besitzen, urn Beziehungen
zwischen EiweiBen und zugehdrigen Seren sichtbar zu machen.
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14
K. Landsteiner und Hans Bock,
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Nachdruck verboten.
[Aus dem Pathologisch-an&tomischen Institute nnd der Prosektur
des Wilhelminenspitales in Wien.]
Untersuchungen fiber Komplementwlrknng.
Hfimolyse durch Klesels&nre and Komplement.
Von K. Landsteiner and Hans Book.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 11. April 1912.)
Vor langerer Zeit von uns begonnene Untersuchungen
fiber Komplement beschfiftigten sich zunfichst mit den von
Ferrata beschriebenen Bestandteilen des Komplementes.
Wir variierten die quantitativen Verhaltnisse der Globulin-
und Albuminfraktion, urn nachzusehen, ob sich hierbei An-
haltspunkte fur Oder gcgen die Anschanung ergeben wflrden,
dafi die wirksamen Bestandteile der Globulin- und Albumin¬
fraktion entsprechend der auf diesen Fall flbertragenen Ambo-
zeptortheorie zu einer bestimmten Verbindung zusammen-
treten. Es wurde nicht, wie man danach vermuten sollte, ein
Maximum der Wirkung bei einem ganz bestimmten Mengen-
verh<nis der Komponenten gefunden, sondern von Hemmungen
durch Ueberschtisse des Globulins abgeseken [vgl. Fraenkel 1 ),
Braun 2 3 * )], war eine Verstfirkung der Wirkung zu erzielen,
wenn man von einer bestimmten Relation ausgehend, die
Menge des einen oder des anderen Teiles vermehrte oder zu
unverandertem Serum Globulin oder Albumin zusetzte.
Wir haben fiber diese Verhaltnisse schon kurz berichtet 8 )
und auch andere Untersucher sind seither zu dem Ergebnis
gelangt, daB innerhalb gewisser Grenzen einer der beiden
Bestandteile durch den anderen ersetzt werden kann. [Lief-
1) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 8, 1911, p. 781.
2) Ebenda, Bd. 9, 1911, p. 665.
3) Freie Vereinigung fiir Mikrobiologie, 1910. Centralbl. f. Bakt.,
Ref., Bd. 47, 1910, Beiheft, p. 88.
Gck igle
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Untersuchungen iiber Komplementwirkung.
15
mann and Cohn 1 ), Fraenkel, Braun 1 3 ); vgl. Marks 8 ),
G u ggenheimer 4 ).]
Wir haben es als zweckmaBig gefunden, die Ausfallung des Serums
durch Verdiinnen mit H,0 auf das 10-fache Volumen und Einleiten von
CO, vorzunehmen, ein Verfahren, das zuerst von Lieimann verdffentlicht
wurde. Das Sediment wurde mit CO,-Wasser gewaschen, die daraus her-
gestellte Losung (in 1 - proz. NaCl) zentrifugiert. MS = Sediment aus
Meerschweinchenserum, MA = Abgufi, K = Komplement, J = l / IOO Ver-
dunnung eines Hammelbluthamolysins vom Kaninchen, HB1 = 5-proz.
gewaschene Hammelblutaufschwemmung.
NaCl
1 Proz.
E
10
K
K
MS
MA
J
HB1
Hamolyse nach
20
40
30 Min.
60 Min.
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fast komplett fast komplett
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1) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 6, 1910, p. 562.
2) Bioch. Zeitschr., Bd. 31, 1911, p. 65 u. 1. c.
3) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 8, 1911, p. 508.
4) Ebenda, Bd. 8, 1911, p. 295.
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16
K. Landsteiner und Hans Rock,
Versuche, wie der angeftthrte, lassen sich ohne Schwierig-
keit reproduzieren, wenn auch bekanntlich die Wirkungsweise
der Komplementkomponenten manchen Schwankungen unter-
liegt und aus diesem Grunde die beschriebeuen Verstlrkungs-
oder Beschleunigungsphfinomene nicht ganz regelmlBig ver-
laufen. So kann es z. B. vorkommen, daB das Sediment nur
eine geringe Wirkung hat.
Im Prinzip 18Bt sich gegen diesen und manche Shnliche
Versuche der Einwand erheben, daB AbguB und Sediment
an sich eine gewisse hamolytische Wirkung haben kbnnen, die
erst bei lingerer Versuchsdauer erkennbar wird. Es ist aber
ungewiB, ob dieser Umstand ausreicht, um die quantitativen
VerhUtnisse zu erkl8ren.
Nimmt man wie die genannten Autoren an, dafi wirklich
die beiden Eomponenten in verschiedenen quantitativen Ver-
hflltnissen zusammenwirken, so ist wohl der SchluB zu ziehen,
dafi sie entweder miteinander eine vOllig dissoziable Ver-
bindung bilden, oder, was nach unserer Meinung aus all-
gemeinen Grtinden viel wahrscheinlicher ist, dafi auch in
diesem Falle variable Adsorptionsverbindungen der kolloiden
Substanzen sich bilden. Dieselbe Auffassung ergibt sich auch
ffir die Erscheinung bei der Reaktion zwischen Globulin
und Albumin, die Friedemann 1 ) als „Verdtinnungs-
ph8nomen“ bezeichnet hat. Die von Hecker gemachte Be-
obachtung, dafi der hamolytische Effekt dadurch beeinfluBt
werden kann, in welcher Reihenfolge sensibilisiertes Blut,
Globulin- und Albuminfraktion zusammengebracht werden,
ist hier anzureihen und auch die zu Hemmungswirkungen
fiihrende Verfinderung der Globulinlbsungen und mit H 2 0 ver-
diinnten Komplementes bei lingerer Aufbewahrung (Brand,
Sachs und Teruuchi) wird sich wohl am leichtesten durch
Aenderungen des Kolloidzustandes des Globulins, vielleicht
eine TeilchenvergroBerung, erkllren lassen [vgl. das Auftreten
positiver Wassermannscher Reaktion bei der Aufbewahrung
von normalen Seren 2 )].
1) Zeitschr. f. Hyg., Bd. 67, 1910, p. 279.
2) Siehe die Erkliirung von Schmidt, Zeitschr. f. Kolloidchem.,
Bd. 10, 1912, Heft 1; Zeitschr. f. Hyg., Bd. 69, 1911, p. 518.
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Untersuchungen liber Komplementwirkung.
17
Wir haben, fihnlich wie L i e f m a n n und Cohn 1 2 3 ),
die kombinierte Wirknng von Sediment und Abgufi ver-
schiedenartiger Seren untersucht *) und gefunden, dafi die
Globuline dee Eaninchenserums zusammen mit dem Abgufi
von Meerschweinchenserum gute Komplementwirknng bei der
Hftmolyse von Hammelblut durch Kaninchenimmunsernm
zeigten, w&hrend die nmgekehrte Kombination und Kaninchen-
serum selbst nicht Oder nur wenig wirksam waren. Aehnliche
Resnltate hatten Liefmann und Cohn and Stutzer 8 ),
Marks, Fraenkel 4 5 ), Guggenheimer 6 ). In Anbetracht
dieses Verhaltens kann daran gedacht werden (cf. Fraenkel),
dafi der Albnminteil das spezifische und wesentliche Substrat
der Eomplementwirkung enthfilt, w&hrend die Globulinfraktion
nur eine Verst&rkung der Reaktion bewirkt, wie auch noch
festzustellen fst, ob man ttberhaupt Abgiisse herstellen kann,
die in genQgender Menge auch bei hohen Dosen von h&mo-
lytischen Immunkdrpern als solche gar keine hamolytische
Wirkung besitzen (vgl. Fraenkel, Guggenheimer). Zur
StQtze einer solchen Vermutung ist vielleicht die reaktions-
verstftrkende Wirkung der Globuline heranzuziehen, die
Bordet und Gengou 6 ) bei der als Eonglutination be-
zeichneten Ausflockung verschiedenartiger Suspensionen be-
obachteten.
(Siehe die Tabelle auf p. 18.)
Einige von uns ausgefflhrte Versuche besch&ftigten sich
mit der H&molyse durch Ealtblflterserum. Friedberger
und Seelig 7 ) vermnteten, dafi dieser Vorgang den Toxin-
wirkungen anzureihen sei, da es nicht gelang, das Froschlysin
analog dem der Warmblflter in Eomplement und h&molytischen
Immunkorper zu zerlegen [siehe dagegen Lazar 8 )] und sie
1) Centralbl. f. Bakt., Bef., Bd. 47, 1910, Beiheft p. 87.
2) 1. c.
3) L c. und Centralbl. f. Bakt., Bd. 56, 1910, p. 526; Zeitschr. f.
Immunitatsf., Bd. 6, 1910, p. 88.
4) L c. und Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 10, 1911, p. 388.
5) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 8, 1911, p. 295,
6) S. Gengou, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 11, 1911, p. 725.
7) Centralbl. f. Bakt., Bd. 46, 1908, p. 421.
8) Wien. klin. Wochenschr., 1904.
Zeitschr. f. ImmunittUfortchung. Orig. Bd. X111. 2
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Goi igle
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18
K. Landsteiner und Hans Rock,
MS, MA, HB1 wie oben, KS = Kaninchensediment, KA = Kaninchen-
abguS, MK = Meerschweinchen kom piemen t, KK = Kaninchenkomplement,
J = V 10 o Verdiinnung eines HnmmelblutMmolysins vom Kaninchen, HB1
= 5-proz. gewaschene Hammelblutaufschwemmung.
NaCl
1 Proz.
MK
MK
20
MK
40
KK
MS
MA
KS
KA
J
HBl
Hiimolyse nach
10
10
30 Min.
60 Min.
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koniplett
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0
auf Grund von Versuchen annahmen, daB sich durch Ira-
munisierung mit Froschlysin ein echtes Antitoxin erzeugen
lasse. Hiermit ware ein fur die Auffassung des Wesens der
Komplemente wichtiger Uebergang zwischen diesen und
Toxinen hergestellt, um so mehr als man mit Froschserum
selbst Immunhamolysine von Warmblutern aktivieren kann
(Landsteiner und Furth).
Nachdem wir einige Untersuchungen angestellt hatten,
die eher gegen diese Betrachtungsweise sprechen, erschienen
Mitteilungen iiber den Gegenstand von Fraenkel 1 ), Lief-
m a n n und A n d r e e w 2 ).
1) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 10, 1911, p. 388.
2) Berl. klin. Wochenschr., 1911, No. 37; Zeitschr. f. Immunitatsf.,
Bd. 11, 1911, p. 707; vgl. Noguchi.
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Untersuchungen iiber Komplementwirkung.
19
Die Antoren verraochten das Lysin des Frosch- und Aal-
serums in Komponenten zu zerlegen und schlieBen aus diesem
und anderen Grfinden, daB die Kaltbltttersera wirkliche Korn-
plemente enthalten.
Wir selbst unterzogen die Wirkung der nach Immuni-
sierung mit Froschserum entstehenden Antilysine einer Unter-
suchung. Nach mehreren intravenosen Injektionen von Ka-
ninchen mit Froschserum erhielten wir Immunsera, die deut-
liche antilytische Wirkung besaBen.
Die Immunsera wirkten auBerdem pr&zipitierend auf
Froschserum und zeigten mit verdiinntem (inaktivem) Frosch¬
serum zusammengebracht intensive Komplementbindungsreak-
tion im System: Hammelimmunh&molysin von Kaninchen,
Meerschweinchenkomplement, Hammelblut.
Die Immunsera hatten auBerdem eine stark hemmende
Wirkung auf die Aktivierung von Hammelimmunh&molysin des
Kaninchens durch aktives Froschserum, reagierten demnach
wie Antikomplemente.
Ft -■ Froschserum, NS = normale Kaninchensera, AS = Antifrosch-
sera von Kaninchen, J = */ 100 inaktivea Hammelimmunhamolysin vom
Kaninchen, HBl = 5-proz. gewaschene Hammelblutaufschwemmung. Frosch¬
serum und Antiserum bleiben vor Zugabe des Blutes 15 Minuten im Brut-
ofen in Kontakt.
Fr
20
Fr
80
Fr
160
NS I
NS 11
AS I
AS II
J
HBl
Hamolyse nach
15 Min.
60 Min.
0,5
.
0,5
0,1
komplett
komplett
0,5
,
11
0
stark
0.5
.
#
11
0
0
0.5
0,1
.
11
komplett
komplett
0.5
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°’ 1
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11
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stark
0,5
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11
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0.5
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0.5
#
0,025
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0,5
.
0,1
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0
0
0.5
0,05
1 „
V
0
0
0,5
I • i
.
.
0,015
! n
! ii
1 0
0
Um nun zu prflfen, ob die hier beobachtete antikomple-
mentfire Wirkung der gewbhnlichen Komplementbindung ent-
spricht, wie dies offenbar bei der oben erw&hnten Hemmung
der Meerschweinchenkomplementwirkung (durch Antifrosch-
sera + Froschserum) der Fall ist, Oder ob sie im Sinne
2 *
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20 K. Landsteiner und Hans Bock,
von Friedberger und Seelig als antitoxische Wirkung
anzusehen ist, haben wir Prazipitate, die bei der Einwirkung
der Antifroschsera auf Froschserum entstanden, gewascben,
aufgeschwemmt und auf das System: Hammelserumhamolysin
vom Kaninchen, Meerschweinchenkomplement, Hammelblut,
und auf das zweite System: Hammelimmunh&molysm vom
Kaninchen, aktives Froschserum, Hammelblut einwirken lassen
und in beiden Fallen ausgesprochene Hemmungen erzielt.
4 ccm Froschserum + 4 ccm Antifroschserum, 1 Stunde Zimmer-
temperatur, bis zum nachsten Tag Eiskasten, Prazipitat zentrifugiert, mit
10 ccm 1-proz. NaCl-Losung gewaschen, in 2 ccm NaCl-Losung aufge¬
schwemmt = P, W = Waschfliissigkeit des Prazipitates, Fr =-■ Froschserum,
J = l / l00 inaktiviertes Hammelblutimmunhamolysin vom Kaninchen, HB1
= 5-proz. gewaschenes Hammelblut. Froschserum und Prazipitate bleiben
vor dem Blutzusatz 15 Minuten im Brutofen in Kontakt.
KB1 = 5-proz. gewaschenes Kaninchenblut.
NaCl
IProz.
Fr
10
Fr
20
Fr
40
Fr
80
P
p
5
p
10
w
J
HBl
Hamolyse nach
20 Min.
50 Min.
0,1
0,5
0,5
0,2
komplett
komplett
0,5
.
0,1
•
.
yy
»
0
0
.
0,5
.
0,1
.
,
yy
yy
0
sehr stark
.
0,5
.
,
0,1
>>
yy
deutlich
f. kompl.
.
0,5
.
.
.
0,1
yy
stark
komplett
0,1
0,5
.
.
.
,
yy
yy
f. kompL
yy
.
0,5
0,1
,
.
,
yy
yy
0
0
,
0,5
0,1
. 1
yy
yy
0
0
.
0,5
.
0.1
yy
yy
0
stark
#
0,5
.
,
0,1
schwach
f. kompl.
0,1
,
0,5
.
#
yy
yy i
deutlich
0,1
•
•
0,5
•
•
•
•
yy
yy
o
0
Geringer, aber immer noch deutlich erkennbar war die
Wirkung der Prazipitate auf die Hamolyse von Kaninchenblut
durch aktives Froschserum.
NaCl
1 Proz.
Fr
10
Fr
20
P
W
KB1
Hamolyse nach
25 Min.
40 Min.
0,25
0,5
0,2
komplett
komplett
.
0,5
.
0,25
.
yy
schwach
.
0,5
•
.
0,25
yy
fast komplett
yy
0,25
.
0,5
.
yy
0
fast komplett
,
.
0,5
0,25
!
yy
0
deutlich
•
•
0.5
•
0,25
yy
0
fast komplett
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Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
llntersuchungen fiber Eomplementwirkung.
21
Es ergibt sich demnach, daB die geprtiften Antifroschsera
jedenfalls Bestandteile enthalten, die auf Froschserum nach
Art der Bordet-Gengouschen Komplementbindnng wirken.
Die Annahme, daB in den Seren Stoffe mit Antitoxinwirkung
vorhanden sind, ist in Anbetracht dieses Umstandes und der
oben zitierten Ergebnisse anderer Untersucher wohl nicht ge-
nfigend gesichert, nnd damit dfirfte die Anssicht auf Grund
des Verhaltens der Kaltblfltersera, Komplemente und Toxine
in direkte Beziehung zu setzen, stark vermindert sein.
H&molyse duroh Eieselsaore und Komplement.
Wir haben frflher mitgeteilt, daB Blutkbrperchen durch
die kombinierte Wirknng von KieseMure und aktivem Serum
aufgeldst werden 1 ). Seither haben sich mit dieser Reaktion
nur v. Dungern und Coca*) beschftftigt, und ebenso wie
wir eine weitgehende Analogic mit Immunkbrperreaktionen
bemerkt Wir haben die Untersuchung nochmals aufgenommen,
um womdglich mit grOBerer Sicherheit als vorher festzustellen,
ob hier wirklich ein Fall von richtiger Komplement-
hSmolyse vorliegt. Die Entscheidnng dieser Frage scheint
uns von prinzipieller Bedeutung zu sein. Im Falle sie bejaht
werden kann, ist dadnrch eine Aufkl&rung der sogenannten
Ambozeptorwirkung insoweit gegeben, als man in dem h&mo-
lytischen System den ImmunkOrper — abgesehen von der
Spezifizitftt seiner Wirknng — vollkommen dnrch eine Sub-
st&nz bekannter chemischer Beschaffenheit er-
setzen kann 3 ). Beztlglich der Eomplementwirkung ergibt
sich daraus eine Stfitze far die Auffassung dieses Frozesses
als eines die Kolloidkomplexe der Zellen verfindernden Ein-
griffes 4 ) im Gegensatz zu der Hypothese einer weitgehenden
chemischen Zersetzung, etwa einer fermentativen EiweiB-
spaltung.
1) Landsteiner und Jagic, Wien. klin. Wochenschr., 1904, No. 3;
Munch, med. Wochenschr., 1904, No. 27. (Es sei nebenbei erwahnt, da6
Eieselsaure unter Umstanden auch Hamotropinwirkungen zeigt.)
2) fieri, klin. Wochenschr., 1908, p. 348.
3) VgL unsere frfiheren Arbeiten, z. B. Wien. klin. Wochenschr., 1909,
No. 47; Oppenheimers Handb. d. Bioch., Bd. 2, p. 396, 444.
4) Landsteiner, Oppenheimers Handb. d. Bioch., Bd. 2, p. 525;
Wien. klin. Wochenschr., 1909, No. 47.
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22
K. Landsteiner und Hans Bock,
Bisher machten sich bei der Untersuchung der Kiesel-
saure-Komplementhamolyse gewisse Schwierigkeiten geltend.
Sie bestanden darin, daB zur Aktivierung der verwendeten
Kieselsaurelosungen ofters ziemlich groBe Serumkonzentra-
tionen erforderlich waren, wodurch die nahere Analyse des
Vorganges erschwert wurde, und daB die Losungen meistens
starke Agglutination des Blutes hervorriefen. Durch diesen
Umstand kann es aber zu einer, allerdings meist ganz gering-
fttgigen, von der Komplementwirkung unabbangigen Hamolyse
kommen, die die Pragnanz der Resultate beeintrachtigt.
Durch geringe Aenderungen bei der Herstellung der
Kieselsaureldsungen lieBen sich diese Uebelstande beseitigen,
so daB regelmaBig starke hamolytische Wirkungen auch bei
niedrigen Serumkonzentrationen erzielt wurden und die von
Agglutination des Blutes herriihrende Hamolyse vflllig aus-
geschaltet war.
Wir verwendeten zur Herstellung der Kieselsaure wieder
Kieselsaureathylester und erhitzten 2 g des Esters mit 100 ccm
Wasser 3 Stunden lang zum Sieden (in einem Kolben aus
Jenaer Glas mit eingeschliffenem RUckfluBkflhler). Die opali-
sierende Flflssigkeit wurde von etwas ausgeschiedener Kiesel¬
saure abfiltriert und erst unmittelbar vor dem Gebrauch durch
Zusatz einer entsprechenden Menge 10-proz. NaCl-Losung auf
einen Gehalt von 0,8 Proz. NaCl gebracht. (Die geringe Menge
Alkohol durch Kochen zu entfernen, ist nicht notwendig.) Die
so bereiteten Losungen wirkten im Gegensatz zu langere Zeit
(z. B. 8 Stunden lang) gekochten nur sehr wenig Oder gar nicht
agglutinierend, wahrend sie in Kombination mit Komplement
in der Regel kraftig listen. Es zeigen also verschiedene
Losungen kolloider Kieselsaure auffallende Unterschiede in
ihren Reaktionen J ) 1 2 ).
(Bei zu kurzem Kochen konnen, wohl infolge der Anwesenheit unzer-
setzter organischer Sub6tanzen, die KieselsaureloBungen als solche schwach
1) Als Ursache der Verschiedenheiten kommen Differenzen des
Kolloidzustandes, vielleicht aber auch die Art und Menge der beigemengten
Kristalloide in Betracht (vgl. die Arbeiten von Jordis).
2) Siehe Do err, Wiener klin. Wocheuschr., 1912, No. 9 ; ferner
Mylius und Groschuff, Ber. der deutschen chem. Gesellsch., Bd. 39,
1906, p. 116.
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Untersuchungen iiber Komplementwirkung.
23
hamolytisch wirken.) Die Darstellung der zu unseren VerBUchen benutzten
Kieselsaurelosungen wurde mit gleichen Ergebnissen mit mehreren Pra-
paraten des Kieselsiiureesters (Kahlbaum, Schuchardt) vorgenommen.
Auch die bei fraktionierter Destination des Esters bei dem richtigen
Siedepunkt von 164—165° iibergehende Fraktion lieferte gut wirkende
Losungen. Ein neues untersuchtes Praparat des Esters ergab uns aber
auffallenderweise wenig wirksame Lbsungen. Bei der niiheren Unter-
suchung der Erscheinung zeigte es sich, daft gerade dieses Praparat sehr
rein zu sein schien, sowohl nach dem Ergebnis der £raktionierten Destil-
lation als weil die daraus bereiteten SiO,-Losungen neutral reagierten,
wahrend die wirksamen Losungen aus anderen Esterpraparaten schwach
sauer waren und mit AgNO ( nachweisbare Spuren von HC1 enthielten.
Es war daher zu vermuten, daft fiir das Entstehen wirksamer SiO, die
Anwesenheit geringer Men gen von Sauren notwendig sei. In der An-
nahme, daft die Verunreinigung des Esters auf der Beimengung von SiCl 4
beruhe, versetzten wir den fiir uns unbrauchbaren reinen Ester mit einer
kleinen Menge Siliciumchlorid und verseiften wie sonst. Wirklich erhielten
wir wieder gut wirksame SiO,-Praparate.
Fiir die Hamolyse selbst ist die Anwesenheit der kleinen Spuren HC1
bei an glos, da sie, ohne die Reaktion zu beeintrachtigen, durch Dialyse
oder Neutralisation entfernt werden konnen.
Auch aus SiCl* konnten wir durch Kochen mit Wasser (z. B. 0,5
SiCl 4 in kleinen Tropfen unter Umschiitteln in 100 ccm Wasser einge-
gebracht, 1 Stunde am Riickflufikiihler gekocht) und Dialyse gegen Wasser
zur Entfemung der Salzsaure fiir die Komplementhiimolyse geeignete
Losungen gewinnen 1 ).
Als Beispiele von H&molyseversuchen seien die folgenden
angeftthrt.
In jedes Rohrchen kommt 1 ccm 5-proz. gewaschenes, in 0,8-proz.
NaCl-Losung aufgeschwemmtes Kaninchenblut, dazu unter Umschiitteln
die angegebene Menge auf 0,8 Proz. NaCl gebrachte Kieselsaurelosung,
zuletzt frisches Kaninchenserum. Wir verwendeten immer Serum und
Blut vom gleichen Tiere. Ablesung nach 2 Stunden 87°, bis zum niichsten
Tag Eiskasten.
Kieselsaure¬
losung
I Kaninchenserum
0,4
0,2
0,1
0,05
0,2
komplett
fast komplett
0
0
0,1
stark
t> 71
komplett
stark
0,05
stark
stark
komplett
Die Hamolyse verhait sich in diesem Versuche, wie wir
es Offers mehr Oder minder deutlich sahen, so, daft mit ab-
1) Siehe Ehler und Feliner, Ber. der deutschen chem. Gesellsch.,
Bd. 44, p. 1915.
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24
EL Land*teiner und Han* Bock,
steigender SiO,-Menge ein Maximum der Ldsung bei ge-
ringeren Serummengen auftritt In anderen Versuchen liegen
die Verhfiltnisse komplizierter, so wie in den v. Dun gem
und Coca beschriebenen Versuchen. Die Autoren gaben die
plausible Erklarung, daft die Erscheinung von der Einwirkung
der SiO, nicht nur auf das Blut, sondern auch auf das Serum
abh&ngig ist und stellten Versuche an, die diese Annahme
stfltzen.
Vereuch wie oben; Inaktivierung dee Serums durch 7 t -stundige Er-
hitzung auf 55°.
Kiesel-
Kaninchenserum
saure-
akt.
I inakt. |
akt
inakt.
akt
inakt.
akt
inakt
I6sung
0,4
0,4
0,2
0,2
0,1 |
0,05
0,05
0,05
0,2
komplett
0
komplett
0
deutlich
0
0
0
0,1
f. kompl.
0
stark
0
komplett
0
stark
0
0,05
komplett
0
komplett
0
sehr stark
0
f. kompl.
0
0,01
sehr stark
0
sehr stark
0
stark
0
deutlich
0
0,005
deutlich
0
deutlich
0
Spur
0
0
0
Gegen Erhitzen ist die aktivierende Wirkung des Serums
recht empfindlich, wie es der folgende Versuch zeigt.
1 ccm 5-proz. Kaninchenblut, 0,05 Kiesels&ureldsung; Erwarmung des
Kanincheneerums auf 53°.
Dauer der
Erwarmung
Kaninchenserum
0,2
0,1
0,05
0
kompl.
stark
sehr stark
5'
stark
Spur
deutlich
10'
Spur?
0
15'
0
0
0
30'
0
0
0
Bei 15 Minuten langer Erhitzung des Serums auf 50 0 trat
eine Schw&chung, aber keine Aufhebung der aktivierenden
Serumwirkung ein.
Die aktivierende Wirkung desselben Kaninchenserums fur das System:
Hammelblut + Immunhamolysin vom Kaninchen wurde erst nach 30 Minuten
langer Erwarmung auf 53° vollstandig aufgehoben.
Die Inaktivierung des Serums verhSlt sich demnach bei
der Kiesels&ureh&molyse fthnlich wie bei anderen Komplement-
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UntersuchuDgen iiber Komplementwirkung.
25
wirkungen. DaB die Komplemente in den einzelnen Fallen
in ihrer Resistenz betrachtlich variieren, wurde ofters be-
obachtet*).
In unserer frflheren Arbeit haben wir aufier der Hitze-
inaktiviernng andere Eigenschaften angefflhrt, die der Kiesel-
sSure aktivierende Sernmstoff mit den Komplementen gemein-
sam hat. So fanden wir, dafi die Wirkung durch Bebandeln
mit Hefe Oder Eokkenkulturen, durch Zuftigung von Papain,
durch Erhdhung der Salzkonzentration aufgehoben wird.
v. Dungern und Coca fanden aufierdem eine Ueberein-
stimmung in bezug auf die Beeinflussung durch verschieden-
artige Salze, besonders die Hemmung durch Salze alkalischer
Erden.
Um den Vergleich weiterzuftihren, haben wir einige neue
Versuche angestellt:
Behandlungdes Serums mit Cholesterin. 25ccm
auf das 10-fache mit 0,8-proz. NaCl-Lbsung verdilnntes Kanin-
chenserum wurde mit 0,25 zerriebenem Cholesterin versetzt,
15 Minuten spfiter nochmals mit einer gleichen Menge. Nach
weiteren 15 Minuten wurde durch Papier filtriert. Als Kontrolle
diente ein Papierfiltrat 10-fach verdttnnten Serums.
£8 wird 5-proz. Kaninchenblutaufschwemmung im Verhaltnis 10:1
mit KieselsaurelOeung versetzt. Von dieser Mischung zu jeder Probe 1 ccm,
dann Serum.
Menge des 4 /io Serums
2,0
1,0
0,5
0,25
0,1
KontroUserum
deutlich
fast
stark
0
0
Mit Cholesterin behan-
deltes Serum
0
komplett
stark
Spur
0
0
Einwirkung von Aether. Kaninchenserum wurde mit
Aether y 2 Stunde lang geschflttelt, dann auf das 5-fache ver-
dftnnt und zur Aktivierung von SiO* verwendet. Die HSmo-
lyse war dann zwar verzdgert, aber zum Schlufi nicht sehr
betrachtlich vermindert, wfihrend bei der gleichen Behandlung
die aktivierende Wirkung fflr Hammelblut-Immunhamolysin
schon vollstfindig aufgehoben war.
1) 8. Oppenheimers Handb. der Bioch., Bd. 2, p. 482, 485, 501.
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26
K. Landsteiner und Hans Bock,
Das Komplement fflr Si0 2 erwies sich demnach als relativ
resistent, fthnlich wie nach 0 ttolen ghi und Mori 1 ) bakteri-
zide Komplemente. Als wir nun ebenso vorgingen, wie 0tto¬
len ghi und Mori bei der Zerstbrung des bakteriziden Komple-
mentes und die Dauer der Aethereinwirkung verl&ngerten,
wurde das Aktivierungsvermogen vollstandig aufgehoben *).
Das frische Kaninchenserum wurde mit der doppelten Menge Aether
5 Minuten lang im Scheidetrichter geschiittelt, dann unter Aether iil>er
Nacht im Eiskasten aufbewahrt Nachher Verdiinnung des Serums mit
0,8-proz. NaCl auf das 5-fache.
Zur Kontrolle gleich lange im Eiskasten gestandenes Serum. Sonst
Versuchsanordnung wie im vorhergehenden Versuche.
Menge des l 3 / 6 Serums
2,0
1,0
0,5
0,25
0,1
Kontrollserum
stark
komj>lett
sehr stark
0
0
Aetherserum
0
o
0
0
Einwirkungvon Wasser undKohlens&ure. Eine
Spaltung des Si0 2 aktivierenden Komplementes durch Ver-
diinnen mit H s O und Einleiten von C0 2 erfolgte in einigen Ver-
suchen nicht vollstandig, aber doch zum Teil. Es ist ttbrigens
daran zu erinnern, dafi auch die Spaltung gewohnlicher Kom¬
plemente ofters nicht nach dem typischen Schema verl&uft.
So gelang Liefmann und Stutzer 8 ) die Zerlegung des
bakteriolytischen Komplementes bei ihren ersten Versuchen
nicht, und Tsurusaki 4 ) und Braun 5 ) berichten, dafi ihnen
die Restitution des Komplementes aus den Spaltstiicken bei
Hunde-, Ziegen- und Kanincherserum nicht gltickte. Auch
beim Froschserum ist es nach Fraenkel 6 ) und Liefmann 7 )
schwierig, eine glatte Trennung der Komponenten zu erzielen,
und um aus dem Aalserum die Spaltstflcke herzustellen, muBten
1) Centralbl. fiir Bakt., Bd. 38, 1905, p. 338.
2) In einem gleichen Versuche mit Hammelbluthamolysin fanden wir,
dafi nach der Aethereinwirkung das Serum nicht nur nicht aktivierte,
sondern auch antilytisch wirkte.
3) Berl. khn. Wochenschr., 1910.
4) Bioch. Zeitschr., 1910.
5) Bioch. Zeitschr., Bd. 31, 1911, p. 87.
6 ) Zeitschr. f. Immunitatsf. Bd. 10, 1911, p. 415.
7) Berlin, klin. Wochenschr., 1911, No. 37.
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Untersuchungen iiber Komplementwirkung.
27
Liefmann und Andreew 1 ) nach der Ausf&llung mit CO,
noch eine weitere Reinigung des Abgusses mit Bariumsulfat
Oder kolloidem Eisenbydroxyd vornehmen.
Es ist demnach keio unbefriedigendes Ergebnis, wenn das
SiO,-KomplemeDt beim Versuche der Spaltung Erscheinungen
zeigt, die im Wesen doch der Zerlegung des Komplementes
nahe stehen.
Frisches Kaninchenserum wird mit HjO auf das 10-fache Volumen
verdiinnt, 10 Minuten lang CO, eingeleitet und sehr scharf abzentrifugiert,
der Abgufi auf 0,8 Proz. NaCl gebracht = A. Em Teil des Globulins mit
0,8-proz. NaCl-LQeung, auf das ureprungliche Volumen gebracht = B,,
Globulin auf das halbe Volumen gebracht = B,. Abgufi + der ent-
sprechenden Menge Globulin = A + B lf Abgufi + der doppelten Globulin-
menge = A + B„ 1 / l0 Serum = S.
Im ubrigen Versuchsanordnung wie im vorhergehenden Versuche.
Menge
der Ldsungen
2,0
1,0
0,5
0,25
S
A
Bj
A + B,
deutlich
schwach
0
0
deutlich
schwach
0
Spur
komplett
deutlich
0
sehr stark
Spur
0
sehr stark
Menge
der Ldsungen
2,0
1.0
0,5
0,25
0,1
i
s
deutlich
1
komplett
komplett
sehr stark
0
A
11
deutlich
Spur
0
0
B,
0
0
0
0
0
B,
0
0
0
0
0
A + B,
Spur
schwach
sehr stark
stark
0
A + B
11
11
stark
sehr stark
0
Menge
der Ldsungen
2,0
1,0
0,5
0,25
0,1
s
A
deutlich
Spur
komplett
deutlich
1
komplett
schwach
0
0
■ 0
1 0
B,
0
0
0
0
0
B,
0
0
0
0
0
A + B,
0
schwach
fast komplett
0
0
A + B,
schwach
deutlich
sehr stark
schwach
0
Diese vorl&ufigen Versuche zeigen, daB durch Abscheidung
des Globulins mit H,0 und CO, auch das SiO,-Komplement
11 Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 11, 1911, p. 707.
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28 K. Landsteiner nod Hana Bock,
stark abgeschwficht wird, da£ die GlobulinlOsung unwirksam
ist and trotzdem bei bestimmten Men gen verhaitnissen die
Wirkung des Abgusses betrftchtlich verstSrkt, bei anderen
Verhaitnissen aber — ebenso wie unter Umstfinden auch
sonst bei Komplementen — eine leichte hemmende Wirkung
besitzt. Bei den geringsten noch aktivierenden Mengen der
Losungen (0,5 und 0,25 ccm) ist die hamolytische Wirkung
von A + B flberall im Vergleich zu A sehr deutlich verstarkt.
Es ist wohl moglich, daJJ eine Modifikation der Methode die
aktivierende Wirkung hSherer Abgufidosen noch beseitigen
kOnnte.
Komplementbindungsversuche. Von besonderer
BedeutuDg f(lr die Beurteilung der Si0 2 aktivierenden Serum-
stoffe mufite die Beantwortung der Frage sein, ob mit Hilfe
des Systems Si0 2 + Serum -f Blut Reaktionen, die der Kom-
plementbindung entsprechen, ausgefflhrt werden konnen.
Um klare Ergebnisse zu erhalten, ist es notig, die Dauer
der Hamolyse entsprechend zu bemessen und in Vorversuchen
die ndtigen Mengen (gut wirksamer) Kieselsaure, der EiweiB-
Idsungen und der Prazipitinsera auszuwerten, da die Sera
in zu grofien Mengen unspezifische Bindungserscheinungen
bervorrufen Oder als solche antilytische Wirkungen ausflben
kOnnen. Wir haben zahlreiche Versuche dieser Art angestellt
und gefunden, dafi bei unserem System zwar eine grQBere
Tendenz zu unspezifischen Bindungsreaktionen besteht, als
bei den gewbhnlich verwendeten hamolytischen Systemen, daB
man aber bei ricbtiger Versuchsanordnung ganz beweisende
spezifische Bindungen erhait.
Das verdiinnte frische Kaninchenserum (in Reihe I 1 ccm, in Reihe
II, III, IV, V 0,5 ccm auf das 5-faehe verdiinntes Serum in jeder Probe)
wurde mit der entsprechenden Menge der EiweiBlosungen (Berumverdiin-
nungen) und stark wirkenden Prazipitinseren (vom Kaninchen) versetzt,
1 Stunde bei 37° gelassen, dann sofort in jedes Rohrchen 0,5 ccm gekieseltes
Blut (10-proz. Kaninchenblutaufschwemmung mit Kieselsaurelosung im Ver-
haltnis 5:1 in Reihe I, II und V, 10:1 in Reihe m, 20:1 in Reihe IV
versetzt und durchgeschiittelt) zugesetzt.
In den als Beispiel angefiihrten Versuchen wurde sowohl von den
200 -fach verdlinnten Normalseren wie von den (etwa gleich wirksamen)
Prazipitinseren je 1 Tropfen als Zusatz verwendet. Alle Losungen waren
auf 0,8 Proz. NaCl-Gehalt gebracht.
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Untersuchungen fiber Komplementwirkung.
29
Bezeichnungen: Normalaerum Pferd = NPf, Normalserum Mensch
= NM, Normalserum Hahn = NH, Normalserum Rind == NR, Pferde-
prazipitin = PrPf, Menschenprazipitin — PrM, Huhnprazipitin = PrH,
Rindprazipitin == PrR, Kaninchenserum ohne Zusatz = Serum, inaktives
Kaninchenserum == Serum inakt.
I
II
HI
IV
V
Serum
Serum inaktiv
kom^lett
komplett
fast kompl.
0
sehr stark
0
komplett
NPf
komplett
komplett
fast kompl.
sehr stark
fast kompl.
ISM
77
77
77
77
77
77 77
NH
71
77
77
77
77
77
PrPf
77
77
77
77
77
77
sehr stark
PrM
77
77
sehr stark
stark
stark
PrH
77
77
fast kompl.
sehr stark
NPf + PrPf
Spur
fast kompL
schwach
Spur
Spur
0
NPf + PrM
fast kompl.
deutlich
deutlich
stark
NPf + PrH
komplett
komplett
sehr stark
stark
.
NM + PrPf
fast kompL
77
„
„
77
fast kompl.
NM + PrM
Spur
schwach
0
0
0
NM -f PrH
komplett
komplett
fast kompL
sehr stark
.
NH + PrPf
77
77
„
„
„
.
NH + PrM
77
77
sehr stark
stark
NH + PrH
Spur
schwach
schwach
schwach
•
Anordnung wie im vorhergehenden Versuch; in Reihe I 1,0 ccm, in
Reihe II 0,5 ccm */ s Serum. 10 Proz. Blut im Verhaltnis 5:1 mit Kiesel-
saure versetzt.
I
ii
Serum
stark
komplett
Serum inaktiv
0
6
NPf
stark
komplett
NR
77
»»
PrPf
77
fast komplett
PrR
77
komplett
NPf + PrPf
0
0
NPf + PrR
stark
komplett
NR + PrPf
77
fast komplett
NR + PrR
schwach
Spur
Wassermannsche Reaktion. Nach den eben an-
gefuhrten Bindungsversuchen bei spezifischer Eiweififallung
konnte vermutet warden, daB mit dem System Si0 2 + Serum
Blut auch die Wassermannsche Reaktion ausftlhrbar sei.
Von jedem der untersuchten Menschenseren wurden in zwei Proben
je 0,5 einer x / 5 Verdunnung (0,8 Proz. NaCl) genommen. Eines der beiden
Rohrchen diente als Kontrolle, dem zweiten wurde 1 Tropfen alkoholischen
Herzextraktes [10 g mit Quarzsand zerriebenes Rinderherz: 100 Alkohol
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30
K. Landsteiner und Hans Rock,
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(95 Proz.). 2 Stunden bei 60° digeriert, filtriert] zugefiigt. Nachdem die
Proben 1 Stuncje bei 37° gestanden haben, setzt man 0,5 ccm gekieselte
5-proz. Blutaufschwemmnng zu (in unseren Versuchen 5 Proz. Blut + Kiesel-
Baurelosung im Verhaltnis 10:1; die notige Kieselsauremenge muB in Vor-
versuchen ausgewertet werden). Das Blut entstammte immer demselben
Individuum, dessen Serum untersucht wurde, um die Moglichkeit einer
von der Si0 2 unabhangigen (Iso-) Lyse vollstandig auszuschlieBen.
Das Ergebnis einer Reihe derartiger Versuche ist in der
folgenden Tabelle aufgezeichnet und zwar in der Rubrik K,
w&hrend in der Kolumne W zum Vergleich die nach der
Wassermannschen Methode (aber mit aktivera Serum) mit
Hammelblut - Immunh&molysin, Meerschweinchenkomplement
und Rinderextrakt erhaltenen Resultate angeftihrt sind.
Die Kontrollproben der Si0 9 -Versuche ergaben auBer bei den mit *
bezeiehneten Proben regelmiiBig komplette oder fast komplette Hiimolyse.
Die Intensitiit der Hemmung ist durch die Zahl der Kreuze angedeutet
( + + + + + = vollstandige Hemmung der Hamolyse, 0 = Hamolyse wie in
der Kontrollprobe).
Diagnose
K
W
Ulcus molle
Urethritis
I
»• '
Urethritis I
Lues latens?
Urethritis
Sek. Syphilis
>> j?
0
0
0
0
+ + +
0 | 0
++ + + ++++++
+ + + + 4* + + + + 4*
+ + + + + ■ + + + + +
Tert. Syph. , )' + + + + + i + + + + +
Sek. Syphilis H—I—I—|—h H—|- H—I—h"
UIcus molle 0 0
Tert. Syphilis + + + + + ! + + + + +
Sek. Syphilis, -|—|—1—|—1— H—|—1—
Ulcus molle 0 I 0
Sek. Syphilis + + + + | + + + +
Adenitis 0 0
Sek. Syphilis 4—|—J—f- | 4—h 4*
Ulcus molle ( 0 1 0
Urethritis 0 | 0
Adenitis 0 0
Sek. Syphilis 4 - 4-4-4“4- 4-4“4-4-4-
Diagnose | K
W
Sek. Syphilis|
Urticaria |
Ulcus molle \ v v
Sek. Syphilis 4 - 4-4-4" +4"4-4"4“
Lupus I 0 i 0
jy ! 4—I—h | 4-
Hamaturie 0 10
Sek. Syphilis 4-4-4- + 4-: + + + 4- +
Ekzem i 0 1 0
Lupus ( 0 j 0
Psoriasis I 0 , 0
Sek. Syphilis 4*4-4- + + + + +
„ » + + + + 4—h + + + +
v 1 ++ + + + + +
Dermatitis + j 0
Sek. Syphilis ++ , + + + + +
Ulc. traumat. 0 1 0
Sek. Syphilis + + + + + + + + + +
*Sek. Syph. 2 )+ + + + + + + + + +
Psoriasis ! 0 J 0
Sykosis I 0 | 0
Urethritis 0 0
*Sek. Syph. ? ) + + + + + + + + + +
1) Dieser Fall zeigte bei einer ersten Untersuchung negative Reaktion
mit Si0 2 (Versuchsfehler ?).
2) Hemmung durch das Serum allein ohne Extrakt bei bei den
Reaktionen.
Go^ 'gle
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Untersuchungen iiber Komplementwirkung.
31
Wie das Versuchsprotokoll zeigt, fanden wir einen ftir
uosere Fragestellung sehr befriedigenden Parallelismus zwischen
den Proben nach Wassermann nnd den mit Si0 2 ausge-
fuhrten Reaktionen in flber 40 Fallen. Zu nntersuchen, ob
die Probe praktisch verwertbar sei, Oder zu diesem Zweck
weiter ausgearbeitet werden kSnnte, haben wir, wie ausdrflck-
lich bemerkt sei, nicht beabsichtigt. Es kam uns bei den
Untersuchungen vielmehr nur darauf an, die weitgehende
prinzipielle Uebereinstimmung der Si0 2 -Komplemente mit
anderen Komplementen festzustellen und an unserem Ergeb-
nis wflrde demnach nichts geandert, wenn auch bei der Unter-
suchung zahlreicherer Faile Differenzen der beiden Reaktionen
haufiger als in unseren Versuchen auftreten und die Reaktion
mit Si0 2 sich z. B. als betrachtlich weniger spezifisch er-
weisen wflrde.
Zusammenfassung.
Untersuchungen ttber die quantitativen Beziehungen der
sogenannten Spaltstflcke des Eomplementes fflhren zu der An-
sicht, daB hier zu beobachtende Erscheinungen wahrscheinlich
auf der Bildung von Adsorptionsverbindungen dieser kol-
loidalen Substanzen beruhen (cf. die Untersuchungen flber
Konglutination von Bordet und Gengou).
Mit Rflcksicht auf die Wirksamkeit der Globulinfraktionen
an sich unwirksamer Sera in Kombination mit der sogenannten
Albuminfraktion andersartiger Sera scheint die spezifische
Komplementwirkung in erster Linie von den nach der Globulin-
fallung in Ldsung bleibenden Stoffen herzurflhren.
Das Verhalten der Antihamolysine des Froschserums weist
in Uebereinstimmung mit Ergebnissen von Frankel und
Liefmann darauf hin, die Hamolyse durch Kaltblflterserum
als Komplementwirkung anzusehen.
Aus einer Reihe von Untersuchungen flber die Hamolyse
durcb Kieselsflure -f- aktives Serum ist der SchluB zu
ziehen, daB in diesem Faile eine wirkliche Komplement-
reaktion vorliegt. Die prinzipielle Uebereinstimmung mit
Komplementen zeigt sich, abgesehen von den schon frflher
festgestellten Tatsachen (Inaktivierung durch geringe Er-
wflrmung, durch Behandeln mit Hefe oder Kokken, Beein-
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32 B. Galli-Valerio et M. Bornand,
flnssung durch Salze, Papain), auch bei der Einwirkung von
Cholesterin, von Aether, von Wasser + Kohlensfture. Am
flberzeugendsten ist das Auftreten von spezifischen Bin-
dungsreaktionen bei der Pr&zipitinreaktion und
die prinzipielle MQglichkeit, mit dem System Kieselsaure +
aktives Serum + Blut die Wassermannsche Reaktion an-
zustellen.
Aus der Feststellung, daJJ die KieseMure aktivierenden
Serumstoffe unter die Komplemente einzureihen sind, ergibt
sich mit Wahrscheinlichkeit die Annahme, dafl die cytolytische
Komplementwirkung in einer destruktiven Beeinflussung der
kolloidalen Zellstruktur und nicht in einer eingreifenden
Spaltung der Eiweifikdrper besteht.
Nachdruck verboten.
[Institut d’Hygi&ne et de Parasitologie de l’Universit^ de Lausanne ]
Sur quelques applications des lacto- et ovosera.
Par B. Galli-Valerio et M. Bornand.
Avec 1 figure.
(Eingegangen bei der Redaktion am 13. April 1912.)
Tandis que les s4rums pr6cipitants pour l’albumine du
sang et des viandes, ont re$u une tr&s grande application
pratique, ceux pour les albumines du lait et de l’oeuf, ont 6t6
beaucoup moins utilises.
On peut dire en effet que ces derniers, ont 6t6 surtout
6tudi6s au point de vue scientifique.
C’est pour cela que dans l’excellent guide de Uhlen-
huth et Weidanz 1 ), on ne parle des lacto- et ovosera que
dans l’introduction g6n6rale, sans leur d6dier un chapitre
special. II nous a paru utile d’attirer toujours plus l’attention
sur quelques applications pratiques des lacto- et ovosera, soit
1) Praktische Anleitung zur Ausfiihning des biologischen EiweiB-
differenzierungsverfahrens. Jena 1909.
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Goi igle
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Sur quelques applications des lacto- et ovosera. 33
au point de vue de la clinique, soit, surtout, an point de vue
du controle des denr6es alimentaires.
Pour pratiquer nos recherches, nous avons suivi en partie la technique
employee pour les pr^cipitines du miel l ); c’est a dire que nous avons utilise
les £prouvettes coniques, introduites par nous dans la pratique, £prouvettes
de 11 cm. de long et k diamktre superieur de 6 mm., interieur de 2 mm.
Ces 6prouvettes etaient places dans des supports ad hoc, trks simples et
qu’on peut fabriquer dans chaque laboratoire. II sont formas (fig. 1) par
une planchette en bois de 40 cm. de long sur 5 cm. de large; planchette
qui porte 3 tiges verticales en gros fil de fer de 7. cm de haut, terminfes
par une boucle. Ces tiges sont fix6es, une k chaque extr6mit6 et une au
Fig. 1.
milieu de la planchette. Un fil de cuivre, dans lequel on a pratiqu6 une
6 t*rie de douze boucles disposes parallMement a la planchette, relie les
extr£mit& des tiges m^talliques. Chaque £prouvette conique, est passSe a
travers une des boucles du fil de cuivre, et Pextr6mit6 inferieure vient
reposer dans un petit trou, percd dans la planchette de bois.
Ces supports tr&s simples et peu couteux, permettent
l’examen et le transport d’une grande s6rie de tubes; tubes
qui, a cause de leur forme, assurent un excellent controle de
la formation du pr6cipit6 et l’emploi d’une petite quantity de
materiel. Ces 6prouvettes peuvent en outre permettre, apr5s
centrifugation, de mesurer la quantity de pr6cipit6 form6.
1 ) Zeitschr. f. Immunitatsf., Orig., Bd. 7, 1910, p. 331.
Zeltschr. f. Immunitatsfortchung. Orig. Bd. XIV. 3
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34
B. Galli-Valerio et M. Bornand,
Dans chaque 6prouvette, on introduisait 3 /io de cm.® de
la solution & controler et on ajoutait Vio de cm.® du serum
precipitant.
On consid4rait comme positives, les reactions qui appa-
raissaient immediatement ou quelqnes instants aprfcs et qui
donnaient lieu & la formation de flocons de pr6cipite qui
s’accumulaient en couche plus au moins 4paisse au fond de
reprouvette. Dans chaque experience on faisait naturellement
des tubes de controle.
L Recherohes aveo le laotosdrum.
Nous avons pr6par6 un lapin de 2950 gr par des inocu¬
lations sous-cutanees espac6es entre elles de 3 jours. Comme
materiel d’inoculation, nous nous commes d’abord servis d’une
cas6ine du commerce, puis d’une cas6ine pr6par6e par nous,
en suivant la technique de Gen go u employee par Talbot 1 ):
Le lait 6tait dilu6 trois fois son volume et pr6cipit4 par
l’acide ac6tique faible k 3 %•
Le pr4cipite de cas4ine 6tait filtrd puis lav4 k fond & l’eau
distiliee, on lavait en suite & l’alcool et l’ether; on sfechait
pendant 12 h. k une temperature de 40—60°, et on broyait la
cas4ine en poudre aussi fine que possible, enlevant avec l’ether
la graisse dans un appareil k epuisement de Soxhlet; puis
on sfechait entre 40° et 60°.
Pour purifier encore plus la cas6ine, on la redissolvait
dans une solution d’ammoniaque 1:200 et on la precipitait
par l’acide ac6tique a 2 ou 3 %• Deux grammes de caseine,
se dissolvaient entierement dans 10—15 cm.® d’une solution
de soude caustique k 5 %o* Pour activer la dissolution on
chauffait k une temperature de 50—60° au bain-marie.
A chaque injection, le lapin recevait environ 1 gr. de
cas6ine. Le sang a 4t4 preleve k l’oreille du lapin, 8 jours
aprfcs la dernifere inoculation. Le serum etait actif k 1:100000.
Au lieu de tuer l’animal, nous avons essaye de le garder
vivant, en renouvellant les injections de cas4ine tous les 8 jours
et en faisant les prises de sang chaque fois 8 jours apr£s la
derni4re inoculation.
1) Jahrbuch f. Kinderheilk., Bd. 2:5, 1911, p. 159.
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Sur quelques applications dee lac to- et ovoeenu
35
Le pouvoir precipitant du s6rum s’est ainsi tr&s bien
maintenu, pendant environ deux mois; mais ayant suspendu
le8 injections de cas6ine pendant 20 jours, il est tomb£ k
1:20000. Nous avons alors repris les inoculations, et nous
avons pu ramener le pouvoir precipitant du serum de ce
lapin k 1:50 000 (trfcs faible k 1:100 000) et l’y maintenir
par des injections successives jusqu’& la fin de nos recherches,
c’est k dire pendant un mois.
Le lactoserum prepare par nous, donnait un fort precipite
en presence de lait de vache et de caseine extraite du lait
de vache; un precipite moins fort dans du lait de vache chauffe
une demi-heure, deux jours de suite, k 115° et dans la lacto-
albumine et lactoglobuline du lait de vache 1 ), tr£s faible et
non constant avec l’extrait de viande des bovides. Mais tandis
qu’il ne determinait aucun precipite dans le lait de femme,
ni dans la caseine vegetale 2 ), il donnait un faible precipite
dans le lait de ch6vre.
1 ) Void la technique suivie pour la preparation de la lactoglobuline
et de la lactoalbumine:
a) Lactoglobuline.
Le filtrat obtenu aprks precipitation de la caseine du lait par Pacide
aetique, etait additionne de sulfate de magnesium pulverulent en excks;
la lactoglobuline etait predpitee, recueillie sur un filtre et lavee k plusieurs
reprises avec une solution concentree de sulfate de magnesium. La lacto¬
globuline etait dissoute dans une solution de NaCl k 10 °/ 0 et dialysee pour
enlever le NaCl en exc^s; 1 c. c. de la solution obtenue etait dilue avec
9 c. c. de solution physiologique k 9 °/oo-
b) Lactoalbumine.
On saturait le lait de sulfate de magnesium pulverulent qui pred-
pitait la caseine et la lactoglobuline. On filtrait et au liquide on ajoutait
du sulfate d’ammonium pulverulent, qui predpitait la lactoalbumine. On
la lavait avec une solution du m^me sel, on la redissolvait dans environ
10 c. c. d’eau et on la soumettait k la dialyse. La lactoalbumine qui restait
dissoute, etait diluee avec la solution physiologique dans la proportion
d’l c. c. sur 9 c. c. de solution physiologique.
2) Void la technique suivie pour la preparation de la caseine vegetale :
On prenait 100 gr. de farine de ble; on la lavait 5—6 fois avec la
solution de NaCl k 10°/ol le residu etait traite par Palcool k 75 e / 0 , deux
ou trois fois et seche k une temperature de 60—70°. Le residu etait broye
et la poudre traitee par une solution de NaOH k 2,5 °/ 00 .
En ajoutant de Pacide acetique dilue, on precipitait la caseine vege¬
tale. Pour la reaction des predpitines, nous avons pris directement la
3 *
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36
B. Galli-Valerio et M. Bornand
Le fait que notre lactos6rum, bien quo pr6par6 avec des
injections de cas6ine du lait de vache, pr6cipitait aussi la
lactoalbumine et la lactoglobuline du meme animal, Concorde
avec ce qui a 6t6 observe par nn grand nombre d’observateurs,
et confirmd par les demises recherches de Graetz 1 ) et de
Bauereisen*) mfime par les proc6des de fixation dn com¬
plement et de l’anaphylaxie, c’est k dire qu’entre caseine,
lactoalbumine et lactoglobuline d’une m§me esp&ce animale,
il y a plutOt des differences quantitatives que qnalitatives.
La chose peut du reste aussi depen dre du fait, que par
les procedes ordinairement employes pour isoler ces differentes
albumines, on n’arrive souvent pas & les separer complfcte-
ment les unes des autres.
En tout cas, nous sommes surpris de voir que Talbot 8 ),
en inoculant un lapin avec de la caseine de vache prepare
d’une faqon identique & la ndtre, n’a pas obtenu de precipite
en presence de lactoalbumine de vache. II s’agissait peut Stre
d’un antisdrum peu actif.
Uffenheimer et Yoshiyiro - Takeno 4 ) dans des
recherches analogues k celles entreprises par Talbot, disent,
avec raison, qu’on devrait parler plutot d’albumine de vache
que de caseine, car on ne peut pas differencier d’une faqon
absolue les differentes albumines du lait
Le fait que notre serum donnait un faible precipite avec
l’extrait de viande des bovides, est aussi d’accord avec les
constatations du plus grand nombre des experimentateurs, et
le precipite obtenu dans le lait de chfcvre, chose constatee
pour la premiere fois par Moro 5 ), est en complet accord
avec tout ce qui a 6te constate, au point de vue zoologique
par le procede des serums precipitants, par Nuttall 6 ) et ses
collaborators.
solution de caseine dans la solution de NaOH et dilute dans la proportion
de 1 c. c. dans 9 c. c. de solution physiologique.
1) Zeitschr. f. Iinmunitiitsf., Orig., Bd. 9, 1911, p. 679.
2) Zeitschr. f. Immunitiitsf., Orig., Bd. 10, 1911, p. 306.
3) Travail cit&
4) Zeitschr. f. Kinderheilkunde, Orig., Bd. 2, 1911, p. 32.
5) Wien. klin. Wochensch., Bd. 14, p. 1073.
6) Nuttall, Blood immunity and Blood relationship. Cambridge 1904.
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Sur quelquea applications des lacto- et ovoeera.
37
Nous avons appliqu6 notre lactosdrum k deux groupes de
recherches:
a) Grumeaux de casdine dans les f&ces d’en-
fants nourris au lait de vache.
b) Substances alimentaires.
a) tlrameanx de easelae daas lea ftces d'eafaats aa lait de rathe.
Talbot 1 2 ), Uffenheimer et Yoshiyiro-Takeno*)
ont appliqu4 le proc4d6 des prdcipitines it l’examen des gru-
meaux blanchatres, qu’on trouve dans les ftces des nourrissons,
nourris au lait de vache, pour 4tablir s’ils sont formas par de
la cas4ine; et ils ont pu ainsi constater qu’on trouve en effet,
dans plusieures cas, la presence de cas4ine dans ces gru¬
meaux. Nous avons employe la technique suivie par ces obser-
vateurs pour preparer les solutions k soumettre it Faction de
l’antis4rum, e’est it dire:
Les selles etaient lav4es dans une solution dilute d’acide
ac4tique, puis extraites par une solution de soude caustique
h 5 % 0 . On prdlevait sp4cialement les grumeaux blancs, ou Ton
puisait dans les parties blanchatres des ftces; le materiel dtait
malax6 avec une solution de soude caustique it 5 °/oo (10—15 c. c.)
et abandonnd a la digestion pendant deux k trois heures.
On filtrait, et du filtrat on pr61evait 1 c. c. qu’on diluait
avec 9 c. c. de solution physiologique.
Nous avons examine les grumeaux contenus dans les
matftres ftcales de treize enfants de la clinique infantile de
Lausanne; enfants, nourris au lait de vache, qui, pour plu-
sieurs enfants avait 4t6 sterilise an Soxhlet.
Les grumeaux que nous y avons constate, etaient trfcs
petits, pour la plupart de la dimension de petites tfites
. d’6pingle.
Nous avons obtenu la formation de pr4cipit4 dans 5 cas
(38%)- Chez un enfant nourri au sein et chez un nourri au
lait de clftvre, nous n’avons pas obtenu de pr4cipit4, non-
obstant la presence de grumeaux, grumeaux qui pourtant sem-
blaient dans le 2* cas, constitu4s surtout par de la graisse.
1) Travail cit6.
2) Travail cit&
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38
B. Galli-Valerio et M. Bornand,
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Nous confirmons done les recherches de Talbot et
d’Uffenheimer et Yoshiyiro-Takeno, sur la possibility
de reconnaitre la presence de casdine dans les matures fdcales
d’enfants nourris au lait de vache, par le proc4d6 des pr4-
cipitines.
b) Substances aliaentaires.
Les denrdes alimentaires que nous avons examinees
ont 6t4:
1) Lait condensd et lait en poudre.
2) Chocolats au lait et ovomaltine.
3) Patisseries au lait et farine lact£e.
1. Lait condense et lait en poudre.
Ges laits ont £t£ dilu£s de fa^on k les ramener k la
composition normale d’un lait naturel, d’apr&s les indications
donndes sur les boites.
La dilution dtait filtrde sur papier humeetd d’eau, et 1 c. c.
du filtrat ytait dilud avec 9 c. c. de solution physiologique.
Nous avons examine un £chantillon de lait condense, et
un de lait en poudre: les deux nous ont donnd un prdcipitd
spdcifique.
2. Chocolats au lait et ovomaltine.
Voici la technique suivie:
a) 10 gr. de chocolat k examiner, £taient broyds avec du
sable fin et introduits dans un appareil k extraction de
Soxhlet pour les d£barasser de la graisse.
L’extraction se poursuivait pendant 6 heures. Le melange
chocolat et sable £tait traitd par 20—25 c. c. de solution de
soude caustique k 5 °/oo pendant 2—3 h.; le liquide 6tait filtr4,
et 1 c. c. du liquide filtr6 £tait dilu£ avec 9 c. c. de solution
physiologique.
b) Des essais semblables ont 6td faits sans ddgraisser
le chocolat, en traitant 10 gr. de la poudre par 20—25 c. c.
de solution de soude caustique 5 %o> avec des r£sultats
identiques.
La raeme technique a £t£ suivie pour l ovomaltine.
Gck 'gle
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39
Sur quelques applications des lacto- et ovosera.
•
Nous avons examine huit espfcces de chocolats au lait,
(Cailler, Kohler, Norma, Peter, Suchard etc.) et tous nous
ont donne une reaction positive. Tous les chocolats sans
lait, nous ont donne, au contraire, une reaction complement
negative.
L’ovomaltine x ) a aussi donne une reaction positive.
3. Patisseries au lait et farine 1 ac16e.
La technique employee a ete la suivante: Pour les petits
pains: La partie centrale (mie) du petit pain, 6tait dess6ch£e
i une temperature de 50—60°, puis broy£e en poudre fine
dans un mortier, et traitee par 15—20 c. c. de solution de
soude caustique h 5 % 0 pendant 2—3 heures pour en extraire
la cas£ine, puis filtr6e, et le filtrat dilu6 dans la proportion
de 1 c. c. dans 9 c.c. de solution physiologique.
Pour la farine lact£e: 10 gr. de farine etaient mis a
macdrer avec 20—25 c. c. de solution de NaOH a 5 %,, pen¬
dant 2 h. La solution filtr£e etait dilute dans la proportion
d’l c. c. pour 9 c. c. de solution physiologique.
Sur cinq petits pains au lait et sur une pate alimentaire
aux ceufs et au lait, tous ont donne une reaction positive.
Les petits pains sans lait, n’ont donne aucun pr6cipite.
Une farine lactee (Nestle) a egalement donne une reac¬
tion positive.
n. Becherohes aveo l’ovoserum.
Nous avons prepare Tovoserum qui a servi a nos recher-
ches, en inoculant & 5 jours d’intervalle, dans la cavite ab-
dominale d'un lapin de 3000 gr„ du jaune et du blanc d’oeuf
melanges et battus dans la solution physiologique. La tech¬
nique pour les prises de sang a 6t6 identique a celle employee
dans les experiences precedentes avec le lactoserum.
Le serum obtenu, qui etait actif a 1:50000 (trfcs faible
pouvoir precipitant a 1:100000), pr6cipitait le blanc et le
jaune d’oeuf de poule, isol6s ou melanges, n’avait aucune action
sur la caseine du lait de vache, ni sur l’extrait de viande de
1) Suivant Nauer (Revue suisse de MMecine, T. 5, 1910, No. 46)
I’ovomaltiiie est compos£e d’oeufs, lait, cacao et extrait de malt.
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40
B. Galli-Valerio et M. Bornand,
boeuf. Experiments par un de nous, en employant comme
dans on travail precedent 1 ), la technique de Carnwath, ce
sSrum a donnS une reaction positive forte en presence
du blanc et du jaune de l’oeuf de poule et de l’ovule d’une
poule; moins forte avec le blanc et le jaune de l’oeuf de
Passer domesticus et le sang de poule, faible avec l’oeuf
d’Emys europsea, trSs faible avec le sang d’une sSrie
d’oiseaux; negative avec les oeufsdeBufo vulgaris, Rana
aesculenta, Trutta fario et Coregonus fera.
Nous avons applique l’ovosSrum prSpar6 par nous, au
controle de denrSes alimentaires designees comme contenant
des oeufs. L’application des ovosera au controle des denrSes
alimentaires a dSj& 6tS conseillSe par Uhlenhuth et Otto-
lenghi en 1900 et 1903 2 ).
Nous avons experiments surtout sur des pates alimentaires
et des gateaux k l’ceuf. La technique suivie pour prSparer le
material k soumettre k Faction du sSrum precipitant a StS la
suivante.
La pSte alimentaire Stait broySe en poudre trSs fine dont
on prenait 5 gr. qu’on laissait digSrer dans 15—20 c. c. de
solution physiologique k 9 %o pendant 3—4 h.
On filtrait, et du filtrat, on prenait 1 c. c. diluS dans 9 c. c.
de solution physiologique.
Pour la reaction prScipitante, on prenait */ 10 de cette
derniSre solution et Vio d’ovos6rum.
Pour la recherche des oeufs dans les gateaux etc., on en
prSlevait 10—15 gr., on les broyait et mettait k digSrer dans
20 c. c. de solution physiologique & 9 %o» puis on filtrait, et
1 c. c. du filtrat Stait diluS dans 9 c. c. de solution physio¬
logique.
Sur quatorze pates alimentaires (Papillons, Lassagnes,
Cheveux d’ange, nouilles, coiffes etc.), dSsignSes comme con-
1) B. Galli-Valerio, Quelques reeherehes sur les antiserums pour
l'albumine du sang et de l’oeuf de poule. Zeitschr. f. Immunitiitsf., Orig.,
Bd. 9, 1911, p. 313.
2) Uhlenhuth et Weidanz, Travail cite*, p. 11.
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Sur quelques applications dee lacto- et ovosera.
41
tenant des ceofs, treize ont donn6 une reaction positive
pins on moins forte, et nne, une reaction complement
negative.
Snr quatre pates alimentaires d6sign6es sans oeufs, toutes
ont donn6 une reaction compl&tement negative.
Sur quatre gateaux d6sign6es comme contenant des oeufs,
la reaction n’a 6t6 positive que dans deux cas; mais ici la
temperature h laquelle ont £t£ soumis les gateaux lors de
la preparation, pouvait avoir joue un r61e emp&chant la
reaction.
Nous avons aussi obtenu un resultat positif avec l’ovo-
maltine, preparant une solution comme nous l’avons indiqu6
pour la recherche de la cas6ine, mais en dissolvant l’ovo-
maltine dans la solution physiologique. M§me resultat positif
avec une huile de foie de morue & l’oeuf et au malt, dont on
faisait une solution en prenant 2 c. c. de l’huile, 10 c. c. de
solution physiologique, on laissait digfcrer pendant 1 heure,
on filtrait et diluait dans la proportion de 1 c. c. pour 9 c. c.
de solution physiologique.
L’ensemble des recherches que nous venons d’exposer sur
les lacto- et ovosera, d6montre la grande importance qu’il y
a d’introduire dans la pratique ce procede de recherches, soit
dans les cliniques, soit surtout dans les laboratoires de denies
alimentaires.
Zusammenfassung.
Die Lacto- und Ovosera sind ftir die Kontrolle verschie-
dener GenuBmittel sehr zu empfehlen.
Die Lactosera kOnnen auch in der Kinderklinik verwendet
werden, um die Kaseinverdauung zu kontrollieren.
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42
Ulrich Friedemann und Henryka Bozenblat,
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Nachdruck verboten.
[Ana dem medizimsch-polikliuiachen Institut der Universitht Berlin
(Direktor: Geh. Med.-Rat Prof. Dr. Goldscheider).]
Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen des Serums
und den antikomplementftren Eigenschaften der
Serumglobullne.
Von Prof. Dr. Ulrioh Friedemann and Dr. Henryka Rosenblat.
(Gingegangen bei der Redaktion am 23. April 1912.)
Durch die Untersuchungen von Bauer, Ranzi, Land-
stein er und Mflller, GroB und Volk u. a. wurde die
Aufmerksamkeit auf die nahen Beziehungen zwischen der
Wassermannschen Reaktion und den Globulinen des Blut-
serums gelenkt. Es zeigte sich, dafi die Reaktion an die
durch Ammonsulfat oder C0 2 aus den luetischen Seris aus-
gef&llten Globuline gebunden ist.
Von besonderer Bedeutung fur die Theorie der Wassermann schen
Reaktion ist aber der zuerst von Landsteiner und Miiller erhobene
Befund, daS auch die Globuline normaler Sera haufig eine positive Was¬
sermann sche Reaktion geben oder aber auch ohne Extrakt antikom-
plementar wirken. Landsteiner sprach daher bereits die Vermutung
aus, dafi die Wassermannsche Reaktion auf irgendeine bisher unbe-
kannte Modifikation der Serumglobuline zuruckzufiiliren seL Unabhangig
von diesen Untersuchungen hat sich Friedemann mit der Frage be-
schiiftigt und festgestellt, dafi zwischen den Globulinen normaler und
luetischer Sera ein fiir die Erklarung der Wassermann schen Reaktion
wichtiger Unterschied besteht. Beim normalen Serum wird — eine be-
stimmte Versuchsanordnung vorausgesetzt — die antikomplementare Wir-
kung resp. die Wassermannsche Reaktion der Globuline durch Zusatz
der Albumine aufgehoben. Den Globulinen luetischer Sera gegeniiber ver-
sagen hingegen die Albumine vollstiindig. Weiterhin sprach Friede¬
mann die Vermutung aus und konnte sie teilweise auch durch Versuche
bestiitigen, dafi eine Reihe anderer Vorgange wie das Inaktivwerden der
Komplemente beim Stehen, beim Verdiinnen mit Wasser (Sachs und
Teruuchi), die antagonistischen Substanzen von Pfeiffer und Fried-
berger, das Gengou-Moreschische Phiinomen und die sogenannte
„B rand sche Modifikation des Mittelstiicks“ zu der antikomplementaren
Wirkung der Serumglobuline in naher Beziehung stehen.
Die Bedeutung dieser Erscheinung fiir so zahlreiche
Imraunitatsreaktionen, unter denen die Wassermann sche
Gck igle
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Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen dea Serums etc. 43
Reaktion gegenw&rtig wohl das grofite Interesse beanspruchen
kann, veranlafite uns, weitere Versuche fiber die Ursachen
der antikomplement&ren Globulinwirkung anzustellen. Den
Ausgangspnnkt dieser Untersuchungen bildete die von F r i e d e -
mann aus seinen Experimenten gezogene Folgerung, dafi
an der antikomplement&ren Wirkung nicht nur die Globuline
selbst, sondern auch die in der Globnlinfraktion enthaltenen
Seifen beteiligt sein mfifiten. Diese Ansicht stfitzte sich auf
folgende Tatsachen:
1. Der in den alkoholischen Extrakten luetischer Lebern
enthaltene wirksame Bestandteil ist nach Sachs and Alt-
mann in erster Lime das oleinsaure Natrium. Die aus
menschlichem Serum ausgef&llten Globuline zeigen nun ein
sehr wechselndes Verhalten. In einem kleinen Teil der Ffille
lassen sie die H&molyse unbeeinflufit, in den andern Fallen
geben sie entweder die Wassermannsche Reaktion oder
sie wirken schon ohne Extrakt antikomplement&r. Dieses
wechselnde Verhalten liefie sich sehr gut durch einen un-
gleichen Seifengehalt der Globulinreaktionen verschiedener
Sera erklfiren.
2. Das „Verdflnnungsph§,nomen“. Wie schon er-
w&hnt, vermogen die Albumine die antikomplement&re Wirkung
und die Wassermannsche Reaktion normaler Globuline
aufzuheben. Dies gelingt aber nur, wenn Albumine und
Globuline in konzentrierter Ldsung gemischt und erst nach
der Untersuchung verdfinnt werden. Wird hingegen jede der
Komponenten ffir sich verdfinnt und dann mit der andern ver-
mischt, so bleibt die antikomplement&re Wirkung erhalten.
Es mfissen also beim Zusatz des Ldsungsmittels irreversible
Zustands&nderungen eintreten und die einfachste Annahme ist,
dafi es sich dabei urn hydrolytische Spaltungen mit Entstehung
kolloidaler Spaltprodukte handelt. Da derartige Reaktionen
bei den EiweifikOrpern nicht bekannt sind, so wird auch da-
durch wiederum die Aufmerksamkeit auf die Seifen des Serums
gelenkt, die ja nach Krafft schon in wSsseriger Lbsung in
Alkali und die freie FettsSure gespalten werden.
Dieser Schlufi wird besonders gestfitzt durch die Tatsache,
dafi auch die seifenhaltigen Extrakte luetischer Lebern ein
fihnliches von Sachs und Rondoni entdecktes Verdunnungs-
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44 Ulrich Friedemann und Henryka Rozenblat,
ph&nomen geben, das nach den Untersuchnngen von Gatz
und In aba wohl ebenfalls mit einer hydrolytischen Spaltung
der Seifen in Zusammenhang gebracht werden mufi.
Es wird deshalb von Friedemann angenommen, dafl
die antikomplementflre Globulinwirknng auf dem Vorhanden-
sein von Seifenglobulinverbindungen bernht. Die Aufgabe
der vorliegenden Arbeit bestand darin, diese Vermutung einer
experimentellen PrOfung zu unterziehen.
Die Methodik fflr diese (Jntersuchungen war durch die
Ergebnisse der Vorversuche fiber Seifenextraktion aus ge-
trocknetem Serum des einen von uns (diese Zeitschr.) gegeben,
indem auf Grund derselben mit Sicherheit angenommen
werden konnte, dafi es durch die Alkoholreaktion des auf
FlieBpapier getrockneten ungespaltenen Serums gelingt, die
Seifen aus der Globulinfraktion desselben zu entfernen. Die
antikomplementSre Wirkung der auf diesem Wege extrahierten
Globuline mit den aus dem getrockneten aber nicht extra¬
hierten Serum zu vergleichen, war unsere n&chste Aufgabe.
Diese Versuche wurden so ausgefiihrt, daB auf FlieBpapier in der
Menge von 0,6 ccm getrocknetes Menschenserum */,—3 Stunden mit Alkohol
extrahiert (im Schuttelapparat), durch einmaliges Uebergiefien mit Aether
schnell getroeknet und in 10-facher Menge destillierten Wassere gelost
wurde. Da einige Zehntel-Kubikzentimeter immer verloren gehen, indem
sich nicht alle9 aus dem Papier ausdrucken lafit, wurden von der Oesamt*
menge der Serumlosung immer genau 5,0 ccm zum Versuch benutzt. Ala
Kontrolle diente in derselben Menge gleichzeitig getrocknetes, aber nicht
extrahiertes Serum.
Die Ausfallung der Globuline geschah mittels Koblensaure, die 10
Minuten lang durchgeleitet wurde. Die ausgefiillten und abzentrifugierten
Globuline wurden in 0.5 ccm physiol. NaCl gelost und in absteigenden
Mengen auf Komplementlosung austitriert.
Wir arbeiteten mit der Titermenge des Komplements, der 10-fachen
Titerdosis des Ambozeptors und 0,5 ccm gewaschener 5-proz. Hammelblut-
• aufschwemmung.
Volumen: 2,5 ccm.
Komplementbindung: 1 Stunde bei 37°.
Nach dem Blut-Ambozeptorzusatz bleiben die Versuche 2 Stunden im
Brutschrank.
Als Extraktionsmittel wurde auBer dem absoluten Aethyl-
alkohol in einer Reihe von Versuchen der Methyl- und Amyl-
alkohol (Kahlbaum) benutzt; von diesen beiden 18ste der
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Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen des Serums etc. 45
Methylalkohol die Seife (oleinsaures Natron) im Kontrollver-
such ebenso stark, wie der Aethylalkohol; der Amylalkohol
15ste sie dagegen schlechter.
Die Zahl der Versuche mit Aethylalkohol betrug 23; es
warden sowohl normale wie laetische Sera untersucht, ohne
daB irgendein Unterschied bezuglich der GlobulinlSsung der-
selben festgestellt werden kdnnte.
Die Ergebnisse dieser Versuche veranschaulichen folgende
Protokolle:
Versuch
No.
Menge der
Globuknlosung
Extraktions-
dauer
Extrahiert
Trocken
a) Normale Sera.
1
0,25
V, Stunde
0
fast komplett (?)
0.125
0
0
0,062
fast komplett
schwach
0,031
komplett
fast komplett
0,015
yy
komplett
0,007
yy
yy
2
0,25
Vt Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
0
0,015
Spur
0
0,007
schwach
0
3
0,25
1 Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
Spur
Spur
0,015
mafiig
schwach
0,007
komplett
mafiig
4
0,25
17* Stunde
Spur
0
0,125
>1
0
0.062
komplett (?)
0
0,031
stark
0
0,015
fast komplett
fast komplett
0,007
komplett
komplett
5
0,25
1 7 t Stunde
0
0
0,125
Spur
0
0,062
fast komplett
0
0,031
Spur
0,015
komplett
komplett
0,007
»
yy
6
0,25
l 1 /* Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
0
0,015
fast komplett
0
0,007
yy yy
I 0
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46
Ulrich Friedemann und Henryka Bozenblat,
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Versuch
No.
Menge der
Globulinlosung
Extraktions-
dauer
Extrahiert
Trocken
7
0,25 |
l 1 /, Stunde
0
0
0,125
Spur
0
I 0,062
stark
0
i 0,031
H
0
0,015
komplett
0
1 0,007
0
8
0,25
I 1 /* Stunde
stark
0
1 0,125
fast komplett
0
0,062
komplett
0
| 0,031
D
0
0,015
11
0
0,007
11
maflig
9
0,25
l 1 /* Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
schwach
0
0,031
stark
0
0,015
fast komplett
Spur
0,007
ii ii
schwach
10
0,25
0,125
1V, Stunde
0
Spur
0
0
0,062
m&fiig
0
0,031
komplett
0
0,015
ii
schwach
0,007
ii
miiBig
11
1 0,25
0,125
1
l 1 /* Stunde
0
0
0
0
0,062
1 0
0
0,031
1
schwach
0
0,015
fast komplett
0
0,007
komplett
Spur
12
0,25
2 Stunden
0
0
1 0.125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
0
1 0,015
schwach
0
[ 0,007
stark
miiSig
13
0.25
2 Stunden
0
0
0,125
Spur
0
0,062
i
i
jj
0
0.031
schwach
0
0.015
1 stark
0
0,007
komplett
0
14
1 0,25
1 1 4 Stunde
0
0
' 0.125
0
0
1 0,002
0
0
0,031
0
0
! 0,015
I
1 fast komplett
fast komplett
0,007
1
| komplett
komplett
Gck 'gle
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Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen des Serums etc. 47
Vereuch
No.
Menge der
Globulinlosung
Extractions-
dauer
Extrahiert
Trocken
15
1
0^5
l 1 /, Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
0
0,015
schwach
schwach
0,007
stark
stark
16
0,25
1 l 1 /, Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
0
0,015
0
0
0,007
schwach
maflig
17
0,25
1V 2 Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
0
0,015
0
0
0,007
schwach
komplett
18
0,25
3 Stunden
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
0
i 0,015
0
0
| 0,007
malBig
komplett
b) Luetische Sera.
19
0,25
I 1 /, Stunde
0
0
0,125
0 .
0
0,062
Spur
0
0,031
0
0,015
maBig
maBig
0,007
fast komplett
fast komplett
20
0,25
1 V 2 Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
komplett
0
0,015
miifiig
0,007
fast komplett
21
0,25
17, Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
Spur !
0
0,031
fast komplett
0
0,015
komplett
Spur
0,007
>>
schwach
22
0,25
17, Stunde
0
0
: 0,125
i
0
0
j 0,062
0
0
! 0,031
Spur
0
i 0,015
I
schwach
0
! 0,007
( miil3ig
0
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48
Ulrich Friedemann und Henryka Rozenblat,
Versuch
No.
Menge der
GlobulinloBiiDg
Extraktions-
dauer
Extrahiert
Trocken
23
0,25
1'/, Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
schwach
0
0.015
fast komplett
Spur
0,007
komplett
schwach
Der Einflufi der Alkoholextraktion auf die Globulin-
hemmung ist in diesen Versuchen unverkennbar, indem in der
flberwiegenden Mebrzahl der F&lle die Globnlinwirkung be-
deutend abgeschw&cht wurde.
Eine weitere Reihe von Versuchen wurde in der Weise
angestellt, dafi nicht das ungespaltene Serum, sondern aus
nativem Serum ausgeffillte und auf FlieCpapier angetrocknete
Globuline extrahiert wurden. Es ergaben sich dabei dieselben
Resultate, d. h. auch bei dieser Versuchsanordnung war die
Globulinwirkung bedeutend abgeschw&cht; da aber die M5g-
lichkeit besteht, dafi die unmittelbare Einwirkung des Alkohols
auf die isolierten Globuline mit einer Sch&digung derselben
verbunden war, soil hier fiber diese Versuche nicht ausffihr-
licher berichtet werden.
Die Extraktion des auf Papier getrockneten Serums mit
Methyl- und Amylalkohol ergab im grofien und ganzen den
Extraktionsversuchen mit Aethylalkohol fihnliche Resultate,
und zwar waren die aus 11 verschiedenen, mit Methylalkohol
extrahierten Menschenseris ausgef&llten Globuline:
2mal in ihrer antikomplement&ren Wirkung unver&ndert,
5mal abgeschw&cht resp. ganz unwirksam,
4mal verst&rkt (dieser letzte Befund wird weiter noch
ausffihrlicher besprochen werden).
Beim Amylalkohol war unter 9 untersuchten Seris 2mal
die Globulinwirkung unver&ndert und 7mal abgeschw&cht.
Im ganzen ergab es sich auf Grund der mit diesen drei
Alkoholen ausgeffihrten Extraktionsversuche, dafi in 2 / 8 der
F&lle die Extraktion des getrockneten Serums eine im Ver-
gleich zum nicht extrahierten Kontrollserum bedeutende Ab-
schwachung resp. Aufhebung der Globulinwirkung bewirkte.
In den fibrigen Fallen handelte es sich meistens in dem ex¬
trahierten Serum um eine ebenso Starke Hemmung wie in
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Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen des Serums etc. 49
der Kontrolle, und nur selten am eine Verst&rkung derselben.
Es konnte schon auf Grand dieser Befunde mit Wahrschein-
licbkeit vermutet warden, dafi die Abschw&chung der Globulin-
wirkung dnrch die Entfernnng eines alkohollSslichen Stoffes
aus der Globnlinfraktion verursacht war. Andererseits wiesen
die a. 0. besprochenen Ergebnisse der Seifenextraktion aus
der Globulinfraktion darauf hin, dafi dieser Stoff auch nur
eine Seife sein mufite; beststigt wurde diese Annahme da-
durch, dafi es uns nicht gelang, durch ganz analoge Extraktions-
versuche mit Aether, Chloroform und Benzol, also mit Fett
und nicht seifenlOsenden Mitteln irgendeine Einwirkung auf
die Globulinhemmung auszuldsen.
Auch gelang uns eine Abschw&chung der Globulinwirkung
in einer weiteren Reihe von Versuchen nicht, in denen die
Extraktion zwar mittels Aethylalkohol geschah, in einer Weise
aber, dafi keine Seifenextraktion dabei stattfinden konnte. Die
Modifikation bestand darin, dafi das Serum nicht auf Fliefi-
papier, sondern auf Glas (ObjektglSsern) getrocknet und ex-
trahiert wurde. Es ergab sich dabei, dafi die aus solchen Seris
ausgef&llten Globuline nur fiufierst selten in ihrer Wirkung abge-
schw&cht, dagegen auffallend hftufig betrftchtlich verstSrkt waren.
Die Ursache dieses paradoxen Befundes konnte leicht er-
mittelt werden, indem festgestellt wurde, dafi auf Glas ge-
trocknetes Serum ttberhaupt nicht extrahierbar ist, wie aus
dem folgendem Veruch ersichtlich:
Zwei Portionen Menschen serum zu 5 ccm. Jede wurde auf Fliefi-
papier (10 Streifen) und Glas (10 Objektglaser) getrocknet 1 ), 2 Stun den
mit absolutem Alkohol extrahiert; die abgedampften Seifenruckstande aus
den alkoholischen Auszugen, auf hamolytische Eigenschaften untersucht,
ergaben folgendes:
Menge der
Ruckstandsldfiung
Glas
Papier
1,0
komplett
0
0,5
»
0
0,25
jj
0
0,125
ji
0
0,062
0
0
0,031
0
0
1) Die Eintrocknung geschah immer bei Zimmertemperatur und nahm
1—17* Stunde in Anspruch.
Zeittchr. f. ImmonlUiUfortchuiig. Orig. Bd. XIV. 4
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50 Ulrich Friedemann und Henryka Eozenblat,
Auch schon in der Menge der beiden Rttckstande bestand
ein groBer Unterschied, indem derselbe aus dem auf Papier
getrockneten Serum sehr reichlich, derjenige aus dem auf
Glas getrockneten fiufierst sp&rlich war. Offenbar kann der
Alkohol durch die sich bei der Eintrocknung auf Glas bildende
glasurfihnliche Oberfliche in die tieferen Schichten des Serums
nicht eindringen, der Seifengehalt der Globuline bleibt also
unbeeinflufit und die Globulinwirkung, wie wir es geseben
haben, bleibt ebenfalls erbalten. Oefters war die Globulin¬
hemmung sogar betrftchtlich verst&rkt, was mit Sicherheit auf
die bei dieser Extraktionsmethode stattfindende, bei der Ldsung
des Serums im Wasser leicbt erkennbare Eiweifikoagulation
bezogen werden mufite. Bekanntlich wirkt ja gef&lltes Serum-
eiweiB antikom piemen tar (Landsteiner und Stankovic,
Centralbl. f. Bakt., Bd. 42) und so hatten wir es auch hier
nicht mit einer eigentlichen VerstUrkung der Globulinwirkung,
sondern mit einem durch die antikomplement&ren Eigenscbaften
des zum Teil koagulierten und mit den Globulinen mitgef&llten
Serums vorget&uschten Vorgang zu tun.
Am auffallendsten war diese Wirkung bei Extraktions-
versuchen auf Glas mit Methylalkohol: das Serum konnte in
destilliertem Wasser nur zum Teil gelbst werden und ent-
bielt deutlich koagulierte EiweiBpartikelchen in grofier Menge.
Abzentrifugiert und in NaCl geldst, wirkte dieser Niederschlag
stark antikomplement&r. Dagegen liefi sich eine Zunahme
der Globulinhemmung auch bei der Glastrocknung nie durch
Extraktion mit Amylalkohol bewirken, ein mit den geringen
eiweififailenden Eigenscbaften dieses Alkohols gut tlberein-
stimmender Befund.
Nachdem auf Grund dieser Ergebnisse die Identit&t
zwischen den eiweiBf&llenden und die Globulinhemmung ver-
stSrkenden Eigenschaften des Alkohols sich als unzweifelhaft
erwiesen hatte, konnte auch die in den Extraktionsversuchen
mit Aethylalkohol mitunter beobachtete geringe Verstftrkung
der Globuline (Versuch 16, 17, 18), mit Sicherheit auf dieselbe
Ursache zurtickgefilhrt und nicht als Widerlegung des diesen
Versuchen zugrunde liegenden Gedankens betrachtet werden.
BestStigt wurde diese Annahme dadurch, dafi der das
Eiweifi am starksten koagulierende Methylalkohol auch bei
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Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen dee Serums etc. 51
der Extraktion auf Papier die Globulinwirkung am hfiufigsten
and am stfirksten beeinfluflte, w&hrend beim Amylalkohol
eine Verst&rkung nicht beobachtet werden konnte.
Abgesehen aber von dieser Nebenwirkung des Alkohols
war das Ergebnis der Alkoholextraktion in der ganzen bis
jetzt besprochenen Versuchsreibe insofern ein vollkommen
ubereinstimmendes, als die aus dem extrahierten Serum aus-
gefallten Globuline in der Regel viel schwficher antikomple-
mentfir wirkten, wie die Kontrolle.
Als unerwflnschter Nebenumstand erwies sich aber bei
diesen Versuchen die Tatsache, dafi bei der gegebenen Ver-
suchsanordnung die Globulinhemmung meistens sehr stark
ausfiel und es konnte z. B. eine ganze Anzahl yon Versuchen
fiberhaupt nicht verwertet werden, in den sowohl die ge-
trockneten, als auch die extrahierten Globuline in s&mtlichen
6 Rohrchen eine komplette Hemmung der Hfimolyse gaben.
Die Ursache dieser bei den menschlichen Globulinen
sonst nicht flblichen so starken Hemmung konnte auf Grund
von Parallelversuchen mit Globulinen aus nativem und ge-
trocknetem Serum ermittelt werden. Es ergab sich, dafi in der
Qberwiegenden Mehrzahl der F&lle die Anstrocknung des Serums
von einer bedeutenden Verstfirkung der Globulinwirkung be-
gleitet wird, wie es aus den folgenden Protokollen ersichtlich ist:
52
Ulrich Friedemann und Henryka Rozenblat,
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Versuch
No.
Menge der
Globulwlosung
Getrocknetes
Serum
Natives Serum
4
0,25
0
Spur
0,125
0
0,062
0
0,031
0
stark
0,015
Spur
komplett
0,007
schwach
99
5
0,25
0
0
0.125
0
schwach
0.002
0
stark
0,031
0
fast komplett
0,015
schwach
0,007
stark
6
0.25
0
0
0.125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
maBig
0,015
0
stark
0,007
maftig
komplett
7
0,25
0
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0
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0
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0
Spur
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0
schwach
0,007
Spur
fast komplett
0,25
0
Spur
0,125
0
fast komplett
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0
komplett
0,031
0
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Spur
77
0,007
schwach
97
II. Luetische Menschensera,
9
0,25
0
Spur
0,125
0
0,062
0
m&fiig
0,031
0
0,015
Spur
fast komplett
0,007
komplett
komplett
10
0,25
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
schwach
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0
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fast komplett
11
0,25
0
0
0,125
0
schwach
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0
fast komplett
0,031
0
komplett
0,015
Spur
»
0,007
schwach
97
Gck >glf
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber die BeziehuDgen zwischen den Seifen dee Serums etc. 53
Unter 11 Versuchen war also die Wirkung der aus nativem
und aus getrocknetem Serum ausgef&llten Globuline nur 2mal
unverfindert, 9mal dagegen bedeutend verst&rkt.
Die Beeinflussung der Globuline durch den Trocknungs-
prozeB konnte schon aus dem physikalischen Verhalten der-
selben erkannt werden: die aus dem getrockneten Serum aus¬
gef&llten Globuline waren in NaCl fast unldslich, d. h. $ie
bildeten eine relativ dunkle, undurchsichdge, opaleszierende
Emulsion im Gegensatz zu der meist wasserklaren LOsung der
Globuline aus nativem Serum. Nur da, wo keine Zunahme
der Globulinwirkung nach der Austrocknung des Serums er-
folgte (Versucb 1 und 2), war auch kein Unterschied in der
Ldslichkeit dieser Globuline und der Kontrolle.
Was die Ursache dieser Zunahme der Globulinwirkung
anbetrifft, so kOnnte man an einen Koagulationsvorgang des
Serums, analog dem durch Alkohol bewirkten, denken; viel
wahrscheinlicher scheint es aber, und zwar auf Grund der
von einem von uns festgestellten Tatsache (diese Zeitschrift),
daB bei der Eintrocknung des Serums eine Vermehrung
der Globulinseifen stattfindet, diese Verschiebung der Seifen
auch als Ursache der verst&rkten Globulinhemmung zu be-
trachten. Es wftre also in gewissem Sinne ein der bisher
besprochenen Versuchsanordnung entgegengesetzter Vorgang,
bestehend in einer kflnstlichen Vermehrung der Globulinseifen,
anstatt der durch die Extraktion bewirkten Entfernung der-
selben aus der Globulinfraktion. Wir sehen, daB auch das
Ergebnis in beiden Versuchsreihen sich als flbereinstimmend
erwies, indem die Stfirke der Globulinhemmung bei der Trock-
nung des Serums zugenommen und bei der Extraktion des*
selben abgenommen hatte.
Allerdings war auf Grund dieser Versuche auch die M6g-
lichkeit nicht ausgeschlossen, daB es sich bei der Alkohol-
extraktion nur um eine vorget&uschte Globulinabschwfichung
handeln kdnnte, d. h. um eine rflckg&ngig gemachte Verst&rkung
derselben.
Um die Unrichtigkeit dieses Einwandes beweisen zu kbnnen,
war es vor allem notwendig, mit Globulinen zu arbeiten, auf
die das Eintrocknen des Serums nicht in der erw&hnten
stOrenden Weise einwirken wflrde.
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Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
54 Ulrich Friedemann und Henryka Rozenblat,
Auf Grund der von einem von uns festgestellten Tatsache,
daB sich Meerschweinchenglobuline in bezug auf die Seifen-
verschiebung bei der Anstrocknung des Serums ganz anders
als die Menschenglobuline verhalten, konnte a priori vermutet
werden, daB auch ein analoger Unterschied in der Einwirkung
der Anstrocknung auf die Globulinwirknng bestehen wird.
Bekanntlich wirken aber die £risch ausgefallten Meerschwein¬
chenglobuline sehr selten antikomplement&r, konnten also far
die hier in Betracht kommende Frage nicht benutzt werden.
Dagegen besitzen die in NaCl aufbewahrten, als „Brandsche
Modifikation des Mittelstflckes 44 bekannten Meerschweinchen¬
globuline hemmende Eigenschaften, konnten also als Ersatz
der Menschenglobuline angewandt werden.
Die von den meisten Autoren auch noch heute als eine
Verfinderung des Mittelstflckes gedeutete „Brandsche Modi¬
fikation “ kann auf Grund der Untersuchungen von U. Friede¬
mann (1. c.) nicht mehr als die Modifikation eines Komple-
mentteiles betrachtet werden. Durch Absorption des Mittel-
stfickes mit sensibilisierten Blutkdrperchen gelanges Friede¬
mann, die antikomplement&re Wirkung der „Brandschen
Modifikation“ zu verst&rken, wodurch endgflltig der Beweis
geliefert wurde, daB es sich dabei unmOglich urn eine Mittel-
stflckwirkung handeln konnte. Es mufi demnach als feststehend
betrachtet werden, daB der beim Stehen des Mittelstflckes in
NaCl entstehende antikomplement&re Kdrper mit dem Mittel-
stflck selbst nicht identisch ist, daB dagegen die in die
„Brandsche Modifikation* Obergegangenen Meerschweinchen¬
globuline in ihrer Wirkung mit den komplementhemmenden
menschlichen Globulinen vergleichbar sind, eine auch von
Thomsen und Leschly (Zeitschr. f. Immunit&tsf., Bd. 11,
Heft 2) geteilte Meinung.
Diese Identity zwischen der antikomplement&ren Wirkung
der „Brandschen Modifikation 4 * und der frisch ausgef&llten
menschlichen Globuline hatte sich auch Ofters im Laufe unserer
Versuche bestfitigt, indem diejenigen menschlichen Globuline,
die unmittelbar nach der Ausf&llung noch nicht antikomple-
mentSr wirkten, regelmSBig diese Eigenschaft durch Auf-
bewahren in physiologischer NaCl-L6sung gewannen, und
andererseits auch frisch ausgefailte Meerschweinchenglobuline
sich bfters als komplementhemmend erwiesen.
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Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen des Serums etc. 55
Zn den hier in Betracht kommenden Versuchen bedienten
wir uns der aus dem 1:10 verdtinnten Serum mit CO g aus-
gefSllten Globuline, welche 18—20 Stnnden im Eisscbrank in
physiologischer NaCl-L5sung aufbewahrt warden. Im tlbrigen
war die Versuchsanordnung der bei den Versuchen mit
Menschenserum angegebenen vollkommen gleich.
Was den Einflufi der Austrocknnng anf die Meerschwein-
chenglobuline anbetrifft, so konnte in einer Reihe von Ver-
snchen tatsfichlich ein dem Menschenserum entgegengesetztes
Verhalten festgestellt werden.
Meerschweinchenserum.
Vereuch
No.
Menge der
Globulinlfeung
Getrocknetes
Serum
Natives Serum
1
0,25
fast komplett
0
0,125
komplett
schwach
0,062
fast komplett
stark (?)
0,031
ii
0,015
0,007
ii
komplett
2
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Spur
0,125
schwach
1
0,062
»
fast komplett
0,031
11
komplett
0,015
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ii
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11
ii
3
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o
0
0,125
0
0
0,062
miifiig
0
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komplett
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0,015
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0,007
* y
u
4
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o
0
0,125
0
stark (?)
0,062
i 0
0
0.031
fast komplett
Spur
0,015
11 11
komplett
miifiig
0,007
komplett
5
0,25
0
0
0.125
1 0
i o
0,062
0
1 0
0,031
Spur
>*
0
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0
0,007
1 11
Spur
6
0,25
l 0
0
0,125
0
0
0,062
! o
0
0.031
Spur
Spur
0,015
■ schwach
schwach
0,007
miiSig
stark
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UNIVERSITY OF CALIFORNIA
56
Ulrich Friedemann und Henryka Rozenblat,
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Versuch
No.
Menge der
GlobulinlOsung
Getrocknetes
Serum
Natives Serum
7
0,25
0
0
0,125
schwach
0
0.062
fast komplett
schwach
0.031
V 99
fast komplett
0,015
komplett
99 9t
0,007
99
komplett
8
0,25
0
0
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0
0
0,062
Spur
0
0.031
miiflig
Spur
0.015
fast komplett
mtiflig
0,007
komplett
stark
9
0,25
Spur
Spur
0,125
mafiig
>»
0.062
komplett
schwach
0,031
fast komptett
0.015
99
komplett
0,007
•9
99
10
0,25
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
Spur
0
0,015
schwach
schwach
0,007
miiBig
stark
11
0,25
0
0
0,125
0
0
0,062
0
Spur
0,031
0
stark
0.015
schwach
fast komplett
0,007
stark
komplett
12
0.25
0
0
0,125
0
0
0,062
0
schwach
0.031
0
fast komplett
0.015
schwach
komplett
0,007
komplett
99
13
0,25
0
0
0,125
0
0
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0
0
0,031
0
o
0,015
0
Spur
0,007
schwach
fast komplatt
14
0,25
0
0
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0
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0
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0
0
0,015
Spur |
Spur
i
0,007
99 1
schwach
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Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber die Beriehungen zwischen den Seifen dee Serums etc. 57
WShrend also die Eintrocknung des Menschenserums die
Globulinwirkung fast immer verst&rkt, werden die Meer-
schweinchenglobuline (Brand sche Modifikation) im Gegenteil
in der Bberwiegenden Mehrzahl der F&lle abgeschw&cht: unter
14 Versnchen handelte es sich nur 4mal um eine — ganz
nnbedentende — Znnahme der Globulinwirkung.
Die Frage von der Ursache der so differenten Einwirkung
desselben Eingriffes auf Menschen- nnd Meerschweinchenserum
muB dahingestellt bleiben, da wir beim Meerschweinchen fiber
keine Parallelversuche verfflgen, die uns einen Aufschlufi fiber
die Verteilnng der Serumseifen bei der Eintrocknung geben
wflrden. Der einzige oben erw&hnte derartige Versnch ergab
allerdings ein mit den Befnnden beim Menschenserum voll-
kommen abereinstimmendes Resultat; es handelt sich dabei
nm die fast unverftnderten Globnline aus dem Versuch 6, und
auch der Seifenhftmolyseversuch zeigte einen absolut gleichen
Seifengebalt der Globuline im getrockneten und im nativen
Serum.
Ob in denjenigen Fallen, in denen eine Abschwftchung der
Globulinwirkung vorlag, sich auch eine entsprechende Ver-
minderung der Globulinseifen im getrockneten Serum whrde
nachweisen lassen, oder ob es sich dabei um eine durch die
Austrocknung hervorgerufene, nicht nfther bekannte Schfidigung
der vielleicht weniger resistenten Meerschweinchenglobuline
handelt, rauB unbeantwortet bleiben.
Es wurde jedenfalls auf Grund dieser Versuche festge-
stellt, daB die Brand sche Modifikation tats&chlich eine far
die Nachprflfung der Extraktionsversuche geeignete Globulin-
form darstellt, desto mehr, als es uns auf Grund der a. 0.
zitierten Versuche bekannt war, daB die Alkoholextraktion des
getrockneten Meerschweinchenserums gleichfalls eine Ver-
minderung der Globulinseifen zur Folge hat.
Die Globulinwirkung erwies sich allerdings nur in der
H&lfte der F&lle abgeschw&cht, was vielleicht auf die meist
kflrzere Extraktionsdauer, als bei den Versuchen mit Menschen¬
serum, bezogen werden kann:
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Gck 'gle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
58
Ulrich Friedemann und Henryka Rozenblat,
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Versuch
No.
Menge der
Globuhnl6simg
Extraktions-
dauer
Extrahiert
Trocken
1
0,25
V 2 Stunde
komplett
H
Spur
0,125
stark
0,062
M
komplett
0,031
0,015
0,007
if
a
2
0,25
V, Stunde
fast komplett (?)
0
0,125
mafiig
0
0,062
stark
0
0,031
0
0,015
komplett
0
0,007
-
stark
3
0,25
v, Stunde
maBig
schwach
0,125
fast komplett
stark
0,062
komplett
fast komplett
0,031
0,015
0,007
if
a
a
a a
a a
a fi
4
0,25
v, Stunde
fast komplett
0
0,125
a
0
0,062
komplett
0
0,031
0
0,015
»>
Spur
0,007
a
a
5
0,25
l 1 /, Stunde
0
0
0,125
schwach
0
0,062
fast komplett
0
0,031
a a
0
0,015
a a
schwach
0,007
a >»
maBig
6
0,25
V, Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
Spur
0.031
Spur
71
0,015
jj
schwach
0,007
schwach
if
7
0,25
a / 4 Stunde
0
0 .
0,125
Spur
0
0.062
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miiSig
0,031
ft
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0.015
stark
stark
0,007
fast komplett
fast komplett
8
0,25
1 */a Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
0
0,031
0
Spur
0,015
schwach
schwach
0,007
komplett
komplett
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UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen des Senims etc. 59
Versuch
No.
Menge der
Globuunlfeuog
ExtraktionB-
dauer
Extrahiert
Trocken
9
0,25
l 1 /* Stunde
0
0
0,125
0
schwach
0,062
fast komplett
komplett
0,031
komplett
yy
0,015
yy
yy
0,007
yy
yy
10
0,25
l 1 /* Stunde
0
0
0,125
0
0
0,062
0
Spur
0,031
Spur
mfifiig
0,015
schwach
yy
0,007
stark
stark
Versuch
No.
Menge der
Globulin-
lfiBung
Extraktions-
dauer
Extra¬
hiert
Trocken
Nativ
11
0,25
*/* Stunde
komplett
0
0
0,125
yy
0
0
0,062
yy
0
0
0,031
yy
fast komplett
Spur
0,015
yy
yy yy
mafiig
0,006
yy
yy yy
komplett
12
0,25
l 1 /* Stunde
Spur
0
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0,125
komplett
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yy
0
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0,031
0
stark
0,015
schwach
fast komplett
0,007
yy
stark
komplett
13
0,25
*/, Stunde
Spur
0
0
0,125
yy
0
0
0,062
stark
0
0
0,031
komplett
0
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0,015
yy
0
Spur
0,007
yy
schwach
fast komplett
14
0,25
*/, Stunde
0
0
0
0,115
0
0
0
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0
Spur
0
0,031
schwach
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Spur
0,015
komplett
fast komplett
miillig
0,007
yy
komplett
stark
15
0,25
17, Stunde
0
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1
0
0,125
0
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0
schwach
0,031
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0
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0,015
schwach
Spur
komplett
0,007
; komplett fast komplett: „
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Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
60 Ulrich Friedemann und Henryka Bozenblat,
Der EinfluB der Seifenextraktion war also auch in diesen
Versuchen sehr deutlich und es konnte nachgewiesen warden
(Versuch 12 und 13), daft — trotz der geringen Verstfirkung
der Globulinwirkung durch die Eintrocknung — die extra-
hierten Globuline sogar schwllcher antikomplementSr wirken
kfinnen, als die aus nativem Serum ausgef&llten. Offenbar
kann es sich dabei nicht nur um die Extraktion der erst beim
Trocknen in die Globulinfraktion hereingewanderten Seife has-
deln, sondern muBte auch etwas von der mit den Globulinen von
vornherein verbundenen Seife extrahiert werden. Die Tatsache,
daB sich aus den Globulinen des nativen Serums flberhaupt
nur geringe — im Vergleich zu den Albuminen — Seifen-
mengen extrahieren lassen, darf keineswegs als diesem Befunde
widersprechend betrachtet werden, denn auch der durch H&mo-
lyse eventuell nicht nachweisbare, geringe Seifengehalt der
Globuline kann zur Entfaltung von antikomplementfiren, auf
unbekannten chemischen oder physikalischen Vorgan gen be-
ruhenden Wirkungen vollkommen gen fl gen.
Es muB jedenfalls auf Grund der erdrterten Versuche an-
genommen werden, daB ein kausaler Zusammenhang zwischen
dem Seifengehalt der Globuline und der antikomplementaren
Wirkung desselben besteht. Irgend etwas Naheres fiber die
Art dieses Zusammenhanges behaupten dfirfen wir nicht.
Vermuten l&Bt sich nur, dafi die „Brandsche Modifikation“
der Meerschweinchenglobuline vielleicht auf einer in NaCl-
Lfisung entstehenden hydrolytischen Spaltung der Globulin-
seifen beruht, daB sie also nur eine auch den frischen mensch-
lichen Globulinen eigene „Modifikation a der Seifenglobulin-
verbindung darstellt.
Zusammenfassung.
1) Die aus menschlichem Serum durch C0 2 -Failung her-
gestellten Globuline wirken meist antikomplementfir.
2) Nach Extraktion des getrockneten Serums mit Alkohol
ist die antikomplementfire Wirkung der Globuline meist be-
deutend abgeschwficht.
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Go^ 'gle
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UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber die Beziehungen zwischen den Seifen dee Serums etc. 61
3) Nach Extraktion von getrocknetem Meerschweinchen-
serum mit Alkohol bildet sich die „Brandsche Modifikation
des Mittelstfickes" hflufig nicht mehr aus Oder zeigt doch eine
sehr abgeschwfichte antikomplementare Wirkung.
4) In einigen Fallen war die antikomplementftre Wirkung
der Meerschweinchen- wie der Menschenglobuline nach der
Alkoholextraktion starker geworden. Dies Verhalten zeigte
sich besonders, wenn infolge der Versuchsanordnung eine
partielle Koagulation der Eiweifik&rper dnrch den Alkohol
eingetreten war.
5) Da die Koagulation im Sinne einer Verstarkung der
antikomplementaren Eigenschaften wirkt, ist anzunehmen, daJB
die Abschwachung nicht auf einer Einwirkung des Alkohols
auf die EiweifikOrper, sondern auf einer Extraktion lipoider
Bestandteile beruht.
6) Da andere Ldsungsmittel, wie Aether, Chloroform,
Benzol, ohne Wirkung sind und da die verschiedeuen Alkohole
in dem Malle, in dem sie Seifen ldsen, auch die antikom-
plementare Wirkung der Globuline abschwachen, so wird an-
genommen, daB die Alkoholwirkung auf einer Extraktion der
Serumseifen beruht.
6) Aus diesen und verschiedenen theoretischen Erwagungen
wird es wahrscheinlich, daB die antikomplementare Wirkung
der Menschenglobuline sowie die „Brandsche Modifikation"
beim Meerschweinchenserum auf das Vorhandensein von
Globulinseifenverbindungen zurQckzufflhren ist.
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62
Henryka Rozenblat,
Naehdruek verboten.
[Aus dem medizmisoh-poliklinischen Institut der Universit&t Berlin
(Direktor: Geh. Med.-Rat Prof. Dr. Goldscheider).]
Untersuchungen fiber die Verteilung der Seifen im Serum.
Von Dr. Henryka Bosenblat.
(Eingegangen bei der Redaktion am 23. April 1912.)
Obwohl die bekaonte Tatsache, dafi Seifen im Blutserum,
und zwar in einer an sich zur Hftmolyse genfigenden Menge
vorhanden sind, keinem Zweifel unterliegt, ist die Rolle der-
selben im Serum noch ganz unbekannt.
Die Vermutung von Liebermann and Nogachi, dafl die — durch
Ambozeptor spaltbaren — Seifeneiweiflverbindungen im Serum ala Kom-
plemente wirken, konnte bekanntlich durch eine Reihe yon Autoren nicht
bestatigt werden (M. Friedemann und F. Sachs, Liefmann und
Cohn, U. Friedemann und Herzfeld u. a.).
Dagegen hat sich die Behauptung von Liebermann und Noguchi,
das Ausbleiben der Seifenhamolyse im Blut beruhe auf einer Bindung der*
selben mit den EiweiBkbrpern des Serums, als vollkommen richtig erwiesen
(H. Sachs und Altmann, M. Friedemann und F. Sachs, Land-
steiner und Ehrlich, Hessberg u. a.).
Irgendwelche n&here Angaben fiber die Art dieser Bindung
resp. fiber die Verteiluug der Seifen zwischen einzelnen EiweiB-
komponenten des Serums finden wir bei keinem der genannten
Autoren,
K. Meyer (Arch. f. Hyg., Bd. 65, 1908) hat sich mit der Frage von
der Einwirkung der verschiedenen Eiweiflkdrper auf die Seifenhamolyse
beschiiftigt und festgestellt, dafl dieselbe sowohl durch die Albumine wie
durch die Globuline des Serums gehemmt wird; als Ursache dieser Wirkung
nimmt er eine direkte Beziehung zwischen dem hamolytischen Agens und
den Eiweifikorpern an.
Liefmann und Cohn (Bioch. Zeitschr., Bd. 26,1910) konnten diese
Angaben bestatigen, indem sie ein gleichsinniges Verhalten der beiden
Komplementteile (Mittel und Endstiick) in bezug auf die Seifenhamolyse
fanden. Allerdings soil — auf Grund spaterer Versuche (Zeitschr. t
Immunitatsf., Bd. 6, 1910) — der Albuminfraktion eine starkere Bindungs-
kraft den Seifen gegeniiber zukommen.
In der vorliegenden Arbeit wurde versucht, dieselbe
Frage von den Beziehungen der Seifen zu den EiweiBkfirpern
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Un tersuchungen fiber die Verteilung der Seifen im Serum. 63
des Serums auf anderem Wege zu 15sen, indem das von
v. Dun gem und Hirschfeld angegebene, von Friede-
mann und Herzfeld (Berliner klin. Wochenschr., 1911,
No. 47) zu theoretischen Untersuchungen mit Erfolg ange-
wandte Verfahren der Eintrocknung des Serums auf FlieB-
papier zur Anwendung kam.
Die Extraktion der Seifen aus dem auf diese Weise ge-
trockneten Serum resp. aus den durch C0 8 isolierten und
gleichfalls auf FlieBpapier eingetrockneten Albumin- und
Globulinfraktionen, geschah mittels absoluten Alkohols im
Schflttelapparat Die Extraktionsdauer betrug l 1 /,—3 Stunden.
Was den von E. Suranji in seiner mir erst nach Ab-
schluB dieser Versuche bekannt gewordenen Arbeit (Berliner
klin. Wochenschr., 1912, No. 9) erhobenen Einwand, man
kdnnte auf diesem Wege tlberhaupt keine Seifen extrahieren,
‘ anbetrifft, so habe ich im Gegensatz zu den Angaben dieses
Autors in meinen Versuchen gesehen, daB der weiBliche, mit
Wasser schfiumende und mit physiologischer NaCl-Ldsung eine
trObe, opaleszierende Emulsion bildende AlkoholrQckstand aus
Seifen bestand, da ich hfimolytische Eigenschaften desselben
nachweisen konnte, worttber noch ausfOhrlicher berichtet wird.
Allerdings war meine Extraktionsmethode etwas inten-
siver, indem die Extraktionsdauer durchschnittlich 1V* Stunde
betrug und das SchOtteln im Apparat geschah. Es gelingt
auch auf diese Weise nur einen Teil der Seifen aus dem
Serum zu entfernen; es ist anscheinend nicht mOglich, mittels
der hier benutzten Methode die an die EiweifikSrper des Serums
festgebundenen Seifen zu extrahieren; der alkoholische Rack-
stand besteht offenbar aus den freien Seifen des Serums und
aus den an die EiweiBkOrper relativ locker gebundenen.
Wenn hier also der KOrze wegen einfach von Albumin- und
Globulinseifen gesprochen wird, so ist darunter eben nur dieser
durch Alkohol unter den gegebenen Versuchsbedingungen ex-
trahierbare Teil derselben gemeint. Im einzelnen gestaltete
sich die Versuchsanordnung folgendermafien:
Auf FlieBpapier getrocknete
a) 5 ccm Serum,
b) aus 5 ccip mit der 10-fachen Menge Aq. dest. verdiinnten Serums
durch CO f ausgefallte, in 5 ccm physiologischer NaCl geloste Globuline und
c) — Albumine (im Wasserbad bei 38° auf das urspriingliche Serum-
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64
Henryka Rozenblat,
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volumen eingedampft), warden mit absolutem Alkohol l 1 /,—3 Stunden ira
Schiittelapparat extrahiert Der alkohoiische Auszug wunie filtriert und
langsam abgedampft, der Rucks tand in 3 ccm physiologischer NaCl auf-
genommen. Zu absteigenden Mengen dieser Seifenl&sung kam je 0,4 ccm
der 5-proz. Aufschwemmung von gewaschenen Hammelbutkorperchen, das
Ganze wurde auf 1,5 mit Kochsalz aufgefiillt und 2 Stunden bei 37° ge-
lassen. Da die Seifenhamolyse meistens langsam erfolgte und einzelne
Rohrchen sich noch stark nachlosten, wurde das Resultat erst am nachsten
Tage (Eisschrank) abgelesen.
£s wurden auf diese Weise 8 verschiedene Menschen-
sera 1 ) und ein Meerscbweincheuserum untersucht, wie aus
den folgenden Protokollen ersichtlich ist.
Menge der in 3 ccm
NaCl aufgenommenen
Seifenidsung
Serum
Albumine
Globuline
1) Luetisches Menschenserum. Extraktionsdauer l 1 /, Std.
1,0 ccm
komplett
komplett
Spur
0,5 „
yj
0
0,25 „
»*
0
0,125 „
0
maSig
0
0,0G2 „
0
schwach
0
0,031 „
0
0
0
2) Normales Menschenserum. Extraktionsdauer l 1 /* Std.
1,0 ccm
komplett
komplett
0
0,5 „
V
V
0
0,25 „
Jt
yi
0
0,125 „
0
0,062 „
Spur
8
0
0,031 „
0
0
0
3) Normales Menschenserum. Extraktionsdauer l 1 /* Std.
1,0 ccm
stark
stark
0
0,5 „
Spur
Spur
0
0^5 „
0
0
0
0,125 „
0
0
0
0.062 „
0
0
0
0,031 „
0
0
0
4) Normales Menschenserum. Extraktionsdauer l 1 /* Std.
1,0 ccm
komplett
komplett
schwach
0,5 ,,
0
0,25 „
miifiig
tf
0
0,125 „
schwach
0
0,062 „
0
0
0
0,031 „
0
0
0
1) Zwischen luetischen und normalen Seris wurden in bezug auf die
vorliegende Frage keine Unterschiede gefunden.
Gck >glf
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Untersuchungen fiber die Verteilung der Seifen im Serum. 65
Menge der in 3 ccm
Nad aufgenommenen
Seifenldsung
Serum
Albumine
Globuline
5) Normales Menschenserum. Extraktionsdauer 3 Std.
1,0 ccm
komplett
komplett
schwach
0,5 „
♦i
ii
0
0,25 „
mafiig
i»
0
0,125 „
0
ii
0
0,062 „
0
Spur
0
0,031 „
0
0
0
6) Luetisches Menschenserum. 1
Extraktionsdauer
l‘/ t Std.
1,0 ccm
komplett
komplett
komplett
>9
n
ii
0,25 „
I)
7*
0
0,125
II
||
0
0,062 „
l|
0
0,031
0
0
0
7) Normales Menschenserum. Extraktionsdauer VL Std.
1,0 ccm
komplett
komplett
komplett
0,5 „
ii
ii
0
0,25 „
i»
ii
0
0,125 „
0
0
0
0,062
0
0
0
0,031 „
0
0
0
8) Normales Menschenserum. Extraktionsdauer 2 Std.
1,0 ccm
komplett
komplett
komplett
0)5 ii
ii
ii
ii
0,25 „
ii
ii
ii
0,125 „
ii
0
0,062 „
n
0
0,031 „
0
0
0
9) Meerschweinchenserum. Extraktionsdauer 2 Std.
1,0 ccm
komplett
komplett
komplett
0,5 „
i*
ii
ii
0,25 „
i»
ii
0,125 „
v
0
0,062 „
ii
0
0,031 „
n
ii
0
Es ergab sich also der absolat konstante Befund, dafi,
wahrend die h&molytische Wirkung des Rflckstandes aus der
Albuminfraktion der aus dem Vollserum gleich war oder die-
selbe sogar flbertraf, aus den Globulinen entweder gar keine
oder im Verhaltnis zu dem Albuminrttckstand jedenfalls nur
sp&rliche Seifenmenge erhalten wurde. Selbstverst&ndlich
kounte daraus noch nicht gescblossen werden, dafi die Seifen
des Serums ilberhaupt nur an die Albumine gebunden sind.
Das Urteil darfiber war um so schwerer, als man auch mit
Zdttehr. f. Immunity tsforachang. Orlg. Bd. XIV. 5
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Henryka Rozenblat,
der MOglichkeit von verschiedener Festigkeit dieser Seifen-
eiweifiverbindungen und einer dadurch bedingten schwereren
and leichteren Extrahierbarkeit derselben rechnen mufite.
Anders kbnnte man sich z. B. die Versuche 1, 5, 6, 7 nnd 8
nicht erkl&ren, in denen die Menge des Totalrflckstandes ans
den isolierten Albuminen and Globulinen grQfier war, als die
aus dem ungespaltenen Serum, als dnrch die Annahme, dafi
nach der Spaltung die Extraktionsbedingungen fflr die Seifen-
eiweifiverbindungen gtinstiger werden. Es durfte also auf Grand
der mitgeteilten Versuche sowohl ein Fehlen der Seifen in
der Globalinfraktion, als auch nur eine festere Bindung der¬
selben angenommen werden.
In einer weiteren Reihe von Versuchen wurde die Seifen-
verteilung im nativen und getrockneten Serum verglichen.
Die entsprechend modifizierte Versuchsanordnung bestand hier
darin, dafi:
a) aua nativem Serum,
b) aua getrocknetem und in der 10-fachen Menge Aq. dest. wieder-
geldstem Serum
ieolierte Albumine und Globuline auf Fliefipapier angetrocknet und in der
ublichen Weise extrahiert wurden. Eb wurden 3 Menschensera und 1 Meer-
Bchweinchenserum unteraucht.
Menge der
Natives Serum
Getrocknetes Serum
Seifenlosung
Albumine
Globuline
Albumine
Globuline
1,0
0.5
0,25
0,125
0,062
0,031
1,0
0,5
0,25
0,125
0,062
0,031
1,0
0,5
0,25
0,125
0,062
0,031
Luetisches Menschen serum. Extraktionsdauer l 1 /* Std.
komplett
komplett
komplett
komplett
11
11
11
yy
0
0
0
0
iy
0
0
17
Normales Menschen serum. Extraktionsdauer 1 J / 2 Std.
komplett
it
komplett
komplett
schwach
komplett
0
0
schwach
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Normales Menschenserum. Extraktionsdauer 2 Std.
komplett
komplett
komplett
komplett
ii
ii
7J
V
ii
ii
ii
0
M
0
schwach
% i .
0
0
0
o
0
0
o
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Untersuch ungen liber die Verteilung dear Seifen im Seram. 67
Menge der
Seifenlbsung
Natives Serum
Getrocknetee Serum
Albumine
Globuline
Albumine
Globuline
4) Meerschweinchen serum. Extraktionsdauer 2 Std.
1,0
komplett
komplett
komplett
komplett
0.5
If
i>
11
11
0,25
11
ii
0
11
0,125
11
0
0
0
0,062
11
0
0
0
0,031
ff
0
0
0
Wie aus diesen Versuchen ersichtlich, ftnderte sich das
Bild der Seifenverteilung im getrockneten Serum sehr wesent-
lich, indem im Albuminteil eine konstante Abnahme und in
der Globulinfraktion in der Halite der Versuche eine Zunahme
der Seifen erfolgte. Der Einflufi der Anstrocknung auf die
Extrahierbarkeit der Seifenverbindungen war kein konstanter;
im Versuch 1 mflssen wir eine Zunahme derselben im ge¬
trockneten Serum vermuten, in den Obrigen Versuchen da-
gegen eine Abnahme.
Ganz konstant ist dagegen die Tatsache, dati die Seifen-
menge, die aus der Globulinfraktion des getrockneten Serums
extrahiert werden kann, eine grOBere ist, als die aus dem
Albuminteil extrahierbare; in dieser Hinsicht verhait sich also
das getrocknete Serum wesentlich anders als das native.
Auf Grund der mitgeteilten Befunde dflrfen wir den an-
scheinend so harmlosen (das Komplement z. B. nur zum Teil
zerstftrenden) Eingriff der Eintrocknung des Serums auf FlieB-
papier nicht als einen fflr die Spaltprodukte desselben ganz
gleichgflltigen Vorgang betrachten. Dafi es sich dabei um
eine diesem Eingriff ganz eigenttimliche physikalische Ein-
wirkung handelt, die nicht durch irgendeine andere Schadigung
des Serums ersetzt werden kann, konnte ich dadurch beweisen,
dafi es mir nicht gelang, dieselbe Aenderung der Seifenver¬
teilung durch Inaktivieren des nativen Serums zu erzielen.
Nachdem sich die Einwirkung der Eintrocknung von so
grofier Bedeutung fflr die Seifenverteilung im Serum erwiesen
hatte, war es von Interesse, festzustellen, wie sich die Albu-
mine und die Globuline des trockenen ungespaltenen Serums
bei der Alkoholextraktion desselben verhalten, d. h. aus welcher
Eiweififraktion der Seifenriickstand, den man bei der Extraktion
des getrockneten Serums bekommt, extrahiert wird.
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Henryka Rozenblat,
Die einzige Moglichkeit, diese Frage zu entscheiden, be-
stand darin, das getrocknete Serum in der flblichen Weise zu
extrahieren und den Seifengehalt der aus demselben isolierten
Albumine und Globuline mit dem Seifengehalt der Albumine
und Globuline aus der Kontrolle (d. h. nicht extrahiertem
Trockenserum) zu vergleichen. Allerdings konnte die Extraktion
des Serums nicht allzu lange ausgedehnt werden, da es sonst
nicht mdglich wfire, aus den isolierten Eiweififraktionen des
extrahierten Serums noch sch&tzbare Seifenmengen zu extra¬
hieren. Es zeigte sich, dafi nach 1-sthndiger Extraktion des
Trockenserums sich noch betrfichtliche Seifenriickst&nde aus
den beiden Fraktionen extrahieren lassen, die miteinander
und mit den aus dem Kontrollserum verglichen werden konnten.
Es wurden also:
a) aus getrocknetem,
b) aus getrocknetem und 1 Stunde mit Alkohol extrahiertem Serum
isolierte Alb umin e und Globuline auf Flieflpapier angetrocknet und in der
iiblichen Weise extrahiert.
Menge der
Seifemosung
Getrocknetes Serum
Extrahiertes Serum
Albumine
Globuline
Albumine
Globuline
1) Norm ales Menechenserum. Extraktionsdauer 2 Std.
1,0
komplett
komplett
komplett
komplett
0,5
>?
*>
yy
yy
0,25
schwach
V
0
yy
0,125
0
fast komplett
0
0
0,062
0
stark
0
0
0,031
0
schwach
0
0
2) Normales Menschenserum. Extraktionsdauer 2 Std.
1,0
komplett
komplett
komplett
komplett
0,5
Spur
V
tj
yy
0,25
0
yy
0
Spur
0,125
0
Spur
0
0
0,062
0
0
0
0
0,031
0
0
0
0
3) Normales Menschenserum. Extraktionsdauer 2 Std.
1,0
komplett
komplett
komplett
komplett
0,5
if
yy
yy
0,25
V
yy
yy
yy
0,125
0
schwach
0
schwach
0,062
0
0
0
0
0,031
0
o
0
0
4) Meerschweinchenserum. Extraktionsdauer 2 Std.
1,0
komplett
komplett
komplett
komplett
0,5
Spur
fast komplett
Spur
Spur
0,25
0
Spur
0
0
0,125
0
0
0
0
0,062
0
0
0
0
0,031
0
0
0
0
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Untersuchungen fiber die Verteilung der Seifen im Serum. 69
Wir sehen, daB trotz der vorangegangenen Extraction des
nngespaltenen Serums, die nach 1 Stunde schon ziemlich be-
tr&chtlich sein dfirfte, sich immer noch ein bedeutender
Seifenrfickstand aus den beiden Eiweififraktionen erzielen lieB.
Dieser Befund erinnert an die frfiher schon erOrterte Tat-
sache, daB die aus den beiden EiweiBfraktionen einzeln extra-
hierte Seifenmenge mitunter grbfier sein kann als die aus dem
ungespaltenen Serum erhaltene, und kann wohl am sicbersten
durch die dort begrtindete Annahme von festen, erst nach der
Spaltung extrahierbaren Seifenalbumin- und Globulinverbin-
dungen erkl&rt werden. Versuch 3, in dem die Menge des
aus dem getrockneten und dem extrahierten Serum erhaltenen
Totalrflckstandes die gleiche war, beweist, daB mitunter die
Extraktion des ungespaltenen Serums Bberhaupt wirkungs-
los ist.
In den tibrigen Versuchen sehen wir dagegen eine be-
trichtliche Verminderung des Seifengehaltes der Globuline,
nur lmal aber eine sehr schwache Wirkung der Extraktion
auf die Seifen der Albuminfraktion. Wir sehen also, daB die
aus dem getrockneten Serum extrahierten Seifen im wesent-
lichen der Globulinfraktion entstammen; sicher handelt es
sich dabei um dieselben Seifenmengen, die im nativen Serum
in der Albuminfraktion nachgewiesen wurden und die beim
Eintrocknen des Serums in die Globulinfraktion fibergewandert
sind.
Zusammenfassung.
1) Die Globulinfraktion des nativen Serums enth< ent-
weder keine durch die Extraktion nachweisbaren Seifen oder
nur einen geringen Teil der gesamten Seifenmenge des be-
treffenden Serums; der grdBte Teil derselben ist an die
Albumine gebunden.
2) Bei der Eintrocknung des Serums auf Fliefipapier
findet ein Uebergang der Seifen in die Globulinfraktion statt.
3) Die aus dem getrockneten Serum extrahierten Seifen
stammen im wesentlichen aus der Globulinfraktion.
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70
Guido Guerrini,
Nachdruek verboten.
[Aus dem Pathologischen Institute der kbnigliohen tier&rztliohen
Hochschule in Mailand.]
Beitrag zum Stadium der Anaphylaxie.
Veber Anaphylaxie dnrch Gewebe- and Bakterlenproteide 1 ).
Von Prof. Guido Guerrini,
Director des Institutes.
(Eingegangen bei der Redaktion am 21. Marz 1912.)
Die vorliegenden Untersuchungen unterscheiden sich von
den zablreichen anderen, welche fiber diesen Gegenstand aus-
gefQhrt wurden, nur durch das angewendete Material. Da aber
die Auswahl dieses Materials einem bestimmten Kriterium
untergeordnet wurde, so glaube ich annehmen zu dttrfen, daft
die Ergebnisse meiner Untersuchungen sich nicht darauf be-
schr&nken, die Anzahl der bisher in bezug auf ihre ana-
phylaktisierenden Eigenschaften geprflften Substanzen zu er-
hOhen, sondern einen spezifischen Beitrag zur Frage der
Anaphylaxie im allgemeinen liefern.
Die Fflhigkeit, die anaphylaktische Reaktion hervorzurufen,
wurde bis jetzt bei Substanzen verschiedenster Art beobachtet.
Ich will alle Beobachtungen, welche mit dem Blutserum
gemacht wurden, und welche die groCe Mehrzahl bilden, bei-
seite lassen und mich darauf beschr&nken, diejenigen Unter¬
suchungen zu erw&hnen, deren Untersuchungsmaterial sich den
von mir verwendeten am meisten n&herte. Ich werde somit
folgende nennen:
Untersuchungen mit durch Auspressung gewonnenen Extrakten aus
normalen Geweben (Remlinger, Ranzi, Okhubo, Schittenhelm
und Weichardt, Delille) oder mit Org&nautolysaten (McFarland);
Untersuchungen mit durch Auspressung gewonnenen Extrakten aus
neoplostischen Geweben (Pfeiffer, Pfeiffer und Finsterer, Donati,
Ranzi, Maragliano, Isaia, Relling);
Untersuchungen mit Erythrocyten (Battelli, Thomsen, Preti)
oder Erythrocytenstroma (Coca);
Untersuchungen mit dem EiweiS der Augenlinse (Kraus, Doerr und
Sohma, Andrejew) und mit Ovalbumin (Vaughan und Wheeler,
Armit);
1) Ins Deutsche ubertrngen von Dr. med. K. Riihl (Turin).
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Beitrag zum Studium der Anaphylaxie. 71
Untersuchungen mit Proteoeen (Ogorodnikow) und Lipoiden
(Bogomolez);
Untersuchungen mit organischen Sekreten (Nicolie und Pozerski')
and mit Milch (Besredka);
Untersuchungen mit Echinococcuscystenfliisaigkeit (Chauffard,
Boidin und Laroche, D6r£, Boidin und Laroche);
Untersuchungen mit vegetabilischen Antigenen (Pozerski, Kara-
sawa, Schern) und mit Schimmelpilzen (Axamit);
Untersuchungen mit Bakterien, und zwar mit Typhusbacillen (Asco li,
Holobut, Delanoe, Livierato, Kraus und Amiradzibi, Btud-
zinski), Choleravibrionen (Kraus und Amiradzibi, Holobut),
Tuberkelbacillen (Tamanouchi. Lesud und Dreyfus, Slatineanu
und Danielopulo, Simon, Vallardi, Orsini, Bail), Streptokokken
(Muller) — und mit Bakterientoxinen, d. h. mit den Toxinen der
Meningokokken (Briot und Dopter). der Pestbacillen (Briot und
Dujardin-Beaumetz), der Tetanusbacillen und der Diphtheriebacillen
(De Waele);
Untersuchungen mit Osteokongestin (Lassalbidre), Mytilokongestin
(Bichet), Crepitin (Bichet), Urohypotensin (Abelous und Bardier),
Hamorrhagin des Ottergiftes (Billard).
Diese Aufstellung ist durchaus keine vollst&ndige. Sie
kann jedoch daza dienen, eine ziemlich ann&hernde Vorstellung
des heutigen Standes unserer Kenntnisse auf diesem Gebiete
zu geben.
*
* *
Meine Untersuchungen bzw. Versuche fOhrte ich aus:
a) mit Extrakten aus Geweben;
b) mit Extrakten aus Bakterien;
c) mit Extrakten aus Zooparasiten.
Ich benutzte nicht gewShnliche, durch Auspressung in toto
gewonnene Extrakte, wie es von seiten der anderen Autoren
geschehen ist, die sich mit der durch Gewebsextrakte oder
durch Extrakte aus Neoplasien hervorgerufenen Anaphylaxie
besch&ftigt haben, sondern ich benutzte Extrakte, welche mit
einem Yerfahren gewonnen wurden, das die Gewinnung eines
in bezug auf seine biochemische Zusammensetzung besser
individualisierten Materials, d. h. des Nukleprotelds, erlaubt.
Die hohe biologische Bedeutung dieses normalen Bestand-
teiles der Gewebe und der Bakterien ist allzusehr bekannt,
als dafi ich auf diesselbe hier n&her eingehe. Anderseits h&tte
dieser Teil der Frage keinerlei Beziehung zu dem Zwecke
meiner Untersuchungen. Ich beschr&nke mich infolgedessen
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72
Guido Guerrini,
darauf, zu erw&hnen, daB das Nukleoproteid bereits mehrfach
bei der Vaccination und besonders bei derjenigen gegen die
Pest (Lustig und Galeotti), die Cholera (L us tig, Heller,
Schmitz) und den Milzbrand (Tiberti) Verwendnng ge-
funden hat.
Darans ergibt sich, daB meine Untersuchungen einen
doppelten Zweck hatten. Die Versuche mit den Gewebsnukleo-
proteiden haben dazn beigetragen, eine noch bestrittene Frage
zu ldsen, da bekanntlich einige Autoren (Ranzi, Delille)
die Existenz einer durch Organextrakte hervorgerufenen Ana-
phylaxie annahmen, w&hrend sie andere Autoren (Okhubo)
in Abrede stellen. Die Versuche mit den Bakteriennukleopro-
teiden haben Tatsachen zutage gefOrdert, deren Kenntnis bei
der Vaccination durch Nukleoproteide nfltzlich sein kann. Die
Versuche mit den Nukleoproteiden der Zooparasiten haben
Kontrollelemente geliefert.
Die Nukleoproteide, welche ich bei meinen Versuchen be-
nutzt habe, werden nach der Methode Wooldridge’s her-
gestellt. Einige Bakteriennukleoproteide wurden mir vom
Berner Institute geliefert.
Die Organe, aus welchen ich das Nukleoproteid gewann,
waren: die Pferde- und Hundemilz und die Pferde- und Hunde-
leber. Bakterielle Nukleoproteide habe ich aus dem Pest-
bacillus und dem Choleravibrio gewonnen. Von Zooparasiten
habe ich die Fasciola hepatica und das Dicrocoelium
lanceatum benutzt.
Zur Herstellung dee Gewebsnukleoproteids habe ich folgendes Ver-
fahren angewendet. Zuerst wurde das Organ, aus naheliegeoden Griinden,
auBerst sorgfiiltig entblutet. Einige Autoren (Okhubo) haben ja behauptet,
die anaphylaktisierende Eigenschaft der Extrakte aus Organen in to to
sei nicht auf das Extrakt aus dem Gewebe, sondern auf das Blut
zuriickzufiihren, welches in dem Gewebe zuriickgeblieben ist. Um eine voll-
stiindige und sichere Beseitigung des Blutes zu erzielen, habe ich zuerst
durch die Gefiifie des Organs eine grofie Menge (zuweilen mehrere Liter)
physiologischer Kochsalzlosung zirkulieren lassen.
Die FliisBigkeit wurde unter miifligem Druck in die Hauptarterie des
Organs eingefiihrt, und diese Operation dauerte so lange fort, bis die Fliissig-
keit ganz farblos heraustrat. Nun wurde das Organ in zahlreiche Stiickchen
zerschnitten, welche wiederholt mit physiologischer Kochsalzlosung gewaschen
und geschiittelt wurden. Diese Operation wurde mehrmals wiederholt, und
hierbei wurden jedesmal die Stiicke in noch kleinere Stiickchen geschnitten.
Als ich glaubte, eine geniigende Waschung ausgefiihrt zu haben, trocknete
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Beitrag zum Stadium der An&phylaxie.
73
ich die Stiickchen mit Filtrierpapier ab und zerrieb sie in einem Morser zu
einem homogenen Brei, welchem ich nach und nach eine gewisse Menge
1-proz. Aetzkali zusetzte. Die Menge des Aetzkalis betrug gewdhnlich dag
20-fache des Volumena des Breies.
Dieses Gemisch wurde unter stetem Schiitteln wahrend 24 Stunden
in einem Eisschrank aufbewahrt und dann in groBe Becher zum Sedimen-
tieren getan. Die Flussigkeit, welche sich im oberen Teil des Bechers an-
sammelte, wurde abgegossen, und zwecks Entfernung der vorhandenen
Gewebsstuckchen zentrifugiert.
Danach wurde eine 1-proz. Losung yon Essigsaure bis zur Ansaue-
rung zugesetzt. Sobald diese erreicht wurde, erfolgte die charakteristische
Fallung des Nukleoproteids, welches auf einem Filter aufgesammelt und
im Vakuum getrocknet wurde.
Das zur Herstellung des Bakterienproteids angewendete
Verfahren war, abgesehen vom ersten Teil der Operation,
dasselbe.
Die Bakterien wurden auf festen Nahrsubetanzen in groSen Petri-
scbalen geziichtet Ale die Kulturen eine genugend reichliche Entwicklung
erreicht hatten, wurde der Eulturrasen vermittels einee sterilen Bpatels auf¬
gesammelt und in der Aetzkalil&sung aufgeschwemmt. Im iibrigen ging
ich wie bei den Gewebenukleoproteiden vor.
Die Zooparasiten wurden in reichlicher Menge aus der
Leber von Ochsen (Fasciola hepatica) oder von Ziegen (Dicro-
coelium lanceatum) entnommen, sorgfaitig in physiologischer
KochsalzlOsung gewaschen, in kleine Stiickchen zerschnitten,
wieder ausgiebig und wiederholt mit physiologischer Koch-
salzldsung gewaschen, mit Filtrierpapier abgetrocknet, im
M5rser zerrieben, in der AetzkalilOsung aufgeschwemmt usw.
Zu meinen Versuchen wurden Meerschweinchen benutzt.
Zur Hervorrufung der Anaphylaxie wurde das gewdhnlich bei
Untersuchungen dieser Art benutzte Verfahren angewendet.
Die erste Inokulation geschah in das Peritoneum oder unter
die Haut Das zweite Mai wurde stets in das Peritoneum
eingespritzt Das Nukleoproteid wurde im Augenblick des
Gebrauches in 1-proz. NatriumkarbonatlOsung im Verhaitnis
1:100 geldst. Diese Mutterldsung wurde dann noch im Ver¬
haitnis 1:10, 1:25, 1:50, 1:100 verdtlnnt. Das erste Mai
wurde 1 can, das zweite Mai 2 ccm eingeimpft. Die Versuche
wurden stets unter denselben Verhaltnissen ausgefflhrt, um
miteinander vergleichbare Resultate zu gewinnen.
Zur Feststellung des Eintretens des anaphylaktischen
Shocks habe ich verschiedene Elemente verwertet.
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74
Guido Guerrini,
Bekanntlich wurden verschiedene Befunde als diagnosti-
sches Kriterium fflr den anaphylaktischen Shock benutzt: so
z. B. die Gesamtheit der objektiven Symptome des Tieres,
das Sinken der Temperatur (Pfeiffer, Pfeiffer and Mita,
Mita, Friedberger and Mita) usw. Bekanntlich hat auch
die physiologische Technik mehrere Grscheinungen zusammen-
gestellt, welche als genane und konstante Symptome des ana¬
phylaktischen Shocks und seiner verschiedenen Phasen dienen
konnen: so das Sinken des Blntdruckes (Arthus, Richet,
Manwaring, Biedl und Kraus, Friedberger und
GrOber), die Verminderung der Gerinnbarkeit des Blutes,
die Leukopenie und die Vermehrung der Blutpl&ttchen (L e s n e
und Dreyfus, WeiB und Tsuru), die Vermehrung der
Lymphe und die Erhdhung ihres Druckes (Calvary), die
Toxizitfit der Nervenzentren (Achard und Flan din), die
ImmobilisierungderLungen (Auer und Lewis, Graetz) usw.
Auch ich habe vor kurzem Untersuchungen fiber den ana¬
phylaktischen Shock in Beziehung zur Physiopathologie der
Atmung ausgeffihrt und den Wert hervorgehoben, den die
Atmungskurve nicht nur als Kennzeichen,! sondern besonders
als Messungselement annehmen kann. Ich habe auf Grund
meiner anaphylaktischen Untersuchungen der respiratorischen
Reaktion wShrend des anaphylaktischen Shocks aus Grttnden,
die ich ausffihrlich dargelegt habe, vorgeschlagen, bei dieser
Erscheinung drei Phasen zu unterscheiden, welche ich, ihren
Hauptcharakteren gemfiB: 1) Phase der Latenz, 2) Phase der
Treppe, 3) Phase der Atemrarefaktion x ) nenne.
Bei gegenwfirtigen Untersuchungen sind mir die physio-
pathologischen Befunde von groBem Nutzen gewesen. Be¬
sonders die Untersuchung der Atmungskurve hat mir mehr-
mals sichere Anhaltspunkte geliefert, w&hrend ich solche mit
keiner der gewShnlich angewendeten Methoden gewinnen konnte.
Das ist aber nicht das wichtigste. Es ist natfirlich, dafi
Untersuchungen wie diese fiber die Anaphylaxie desto beweis-
krfiftiger sind, je wertvoller die angewendeten Untersuchungs-
methoden sind.
1) G. Guerrini, Sulla fisiopatologia dello shock anafilattico. Shock
anafilattico e funzione respiratoria. Pathologica, 1911, No. 69.
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Beitrag zum Studium der Anaphylaxie.
75
Bemerkenswert scheinen mir hingegen die Resultate meiner
Untersnchungen.
Da es sich um eine ziemlich betr&chtliche Anzahl von
Versuchen handelt, hielt ich es nicht fQr zweckm&fiig, sie alle
einzeln zn beschreiben and habe meine Resultate in tabel-
larischer Form kurz zusammengefaGt. Dabei habe ich nattlr-
lich alle wichtigsten Erscheinungen in Betracht gezogen.
In den Tabellen habe ich folgende Abkfkrzungen benutzt:
I.P. = intraperitoneale Inokulation.
S.C. = subkutane Einimpfung.
Tabelle I. Erste Inokulation: Hundemilznukleoproteid.
d
fc
Erste Inokulation
Zwischen-
raum zwischen
den 2 In-
okulationen
Zweite Inokulation
Besultat
Ort
Ver-
dunnung
Nukleoproteid
Ver-
diinnung
i
LP.
1:10
24 Tage
Hundemilz
1:50
hochpositiy
2
Hundeleber
unsicner
3
Pferdemilz
negativ
4
Hundeserum
ft
5
Vib. cholerae
ft
6
Dist. hepat.
tt
7
! s.c.
1:25
20 Tage
Hundemilz
1:25
hochpositiy
8
Hundeleber
negatiy
9
i
Pferdemilz
10
I
Hundeserum
tt
11
B. pestis
tt
12
s.c
1:50
18 Tage
Hundemilz
1:10
positiv
13
i
Hundeleber
negativ
14
Pferdemilz
»
15
Pferdeleber
tt
16
B. pestis
tt
Tabelle II. Erete Inokulation: Hundelebemukleoproteid.
Erete Inokulation
Zwischen-
Zweite Inokulation
6
55
raum zwischen
den 2 In-
okulationen
Besultat
Ort
Ver-
diinnung
Nukleoproteid
Ver-
diinnung
i
LP.
1:25
22 Tage
Hundeleber
1:50
hochpositiy
unsieher
2
Hundemilz
3
Pferdeleber
negativ
4
Hundeserum
5
Vib. cholerae
tt
6
7
S.C.
1:50
18 Tage
Dist. hepat.
Hundeleber
1:25
hockpositiv
8
Hundemilz
negativ
9
Pferdeleber
10
Hundeserum
tt
11
B. pestis
tt
12
1
Dicr. lanceat
..
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76 Guido Guerrini,
Tabelle 111. Erste lnokulation: Pferdelebemukleoproteid.
6
Erste lnokulation
Zwischen-
raum zwischen
den 2 In-
okulationen
Zweite lnokulation
Besultat
Ort
Ver-
diinnung
Nukleoproteid
Ver-
diinnung
1
I.P.
1:10
25 Tage
Pferdeleber
1:50
hochpositiv
2
Pferdemilz
positiv (?)
3
Hundeleber
negativ
4
Hundeserum
tt
5
Vib. eholerae
tt
6
Dicr. lanceat.
hockpositiv
7
S.C.
1:25
22 Tage
Pferdeleber
1:25
8
Pferdemilz
negativ
8
Hundeleber
ft
10
Pferdeserum
ft
11
B. pesti9
tt
12
13
1
S.C.
1:50
20 Tage
Diet, hepat.
Pferdeleber
1:10
positiv
14
Pferdemilz
negativ
15
1
Hundeleber
tt
16
Pferdeserum
tt
Tabelle IV. Erste lnokulation: Pferdemilznukleoproteid.
sf
Erste lnokulation
Zwischen-
raum zwischen
den 2 In-
okulationen
Zweite lnokulation
Besultat
Ort
Ver-
dimming
Nukleoproteid
Ver-
diinnung
i
I.P.
1:25
24 Tage
Pferdemilz
1:50
hochpositiv
2
Pferdeleber
negativ
3
Hundemilz
r
4
Pferdeserum
tt
5
Vib. eholerae
tt
5
Dicr. lanceat.
V
7
S.C.
1:50
20 Tage
Pferdemilz
1:25
hochpositiv
8
Pferdeleber
negativ
9
Hundemilz
v
10
Pferdeserum
tt
11
B. pestis
tt
12
1
Dist. hepat.
tt
Tabelle V. Erste lnokulation: Bac. pestis-Nukleoproteid.
6
Erste lnokulation
Zwischen-
raum zwischen
den 2 In-
okulationen
Zweite lnokulation
Besultat
Ort
Ver-
diinnung
Nukleoproteid
Ver-
diinnung
1
o
i.p.
1:100
20 Tage
Bac. pestis
1:50
hochpositiv
Li
3
i
tt tt
Vib. eholerae
tt
negativ
5
M tt
Hundeleber
tt
tt
6
Dicr. lane.
tt
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Beitrag zum Studium der Anaphylaxie.
77
o
Erste Inokulation
Zwischen-
raum zwischen
den 2 In-
okulationen
Zweite Inokulation
Eesultat
i
Ort
Ver-
dunnung
Nukleoproteid
Ver-
dunnung
7
q
S.C.
1:100
22 Tage
Bac. pestis
1:100
hochpositiv
O
9
77 77
Vib. cholerae
negativ
10
11
Pferdemilz
77
H
12
S.C.
1:50
25 Tage
Bac. pestis
1:100
hochpositiv
13
»• >>
77
14
Vib. cholerae
negativ
15
77 77
77
16
Hundemilz
77
17
Diat. hepat.
77
Tabelle VI. Erste Inokulation: Vibrio cholerae.
Erste Inokulation
Zwischen-
1 Zweite Inokulation
o
5s
raum zwischen
Resultat
Ort
Ver-
dunnung
den 2 In-
okulationen
Nukleoproteid
Ver-
dunnung
i
I.P.
1:100
22 Tage
Vib. cholerae
1:50
hochpositiv
2
77 77
77
3
A
Bac. pestis
negativ
**
5
77 77
Pferdeleber
77
»7
6
S.C.
1:100
24 Tage
Vib. cholerae
1:100
hochpositiv
7
77 77
8
Bac. pestis
77
9
Hundemilz
negativ
10
77
11
S.C.
1:50
28 Tage
Vib. cholerae
1:100
7 *
hochpositiv
12
77 77
13
Bac. pestis
7*
14
15
Pferdemiiz
negativ
77
16
j
Dicr. lanceat.
77
17
Dist. hepat.
77
Zusammenfassung.
Aus den in obigen Tabellen zusammengestellten Resnltaten
kann man iolgende Schlufifolgerungen ziehen:
1) Anch die Gewebsnukleoproteide haben die
Eigenschaft, eine stark charakteristische ana-
phylaktische Reaktion (Shock) hervorznrnfen.
2) Diese Eigenschaft der Gewebsnukleo¬
proteide ist eine typische und konstante.
Bei den hier berichteten Versuchen wurden die zur In¬
okulation und zur Reinokulation angewendeten Nukleoproteide
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78
Guido Guerrini,
in verschiedener Art und Weise zusammengestellt, d. h. ich
benutzte:
a) zur Inokulation und Reinoknlation das Nukleoproteid
ans einem und demselben Organ eines und desselben Tieres;
b) zur Inokulation und Reinoknlation das Nukleoproteid
aus verschiedenen Organen eines und desselben Tieres;
c) zur Inokulation und Reinoknlation das Nukleoproteid
aus einem und demselben Organ verschiedener Tiere;
d) zur Inokulation das Nukleoproteid aus einem Tier-
organ, zur Reinokulation das Blutserum desselben Tieres;
e) zur Inokulation das Nukleoproteid aus einem Tier-
organ, zur Reinoknlation ein Bakterien- oder ein Zooparasiten-
nukleoproteid.
In den unter a angefiihrten Fallen war die anaphylaktische
Reaktion stark positiv. Bei den unter b erw&hnten Versuchen
konnte in einzelnen Fallen der Zweifel bestehen, dafi die
Reaktion positiv ausgefallen ware; moistens war diese jedoch
negativ. In alien flbrigen Fallen war das Resultat stets negativ.
3) Aus den erwahnten Beobachtungen geht somit hervor,
dad die durch das Gewebsnukleoproteid hervorgerufene Reaktion
fQr ein und dasselbe Organ eines und desselben Tieres spezifisch
ist. In seltenen Fallen kann eine jedoch stets schwache ana¬
phylaktische Reaktion zwischen den Nukleoproteiden zweier
verschiedener Organe eines und desselben Tieres eintreten.
Die Reaktion tritt hingegen nie ein, wenn die Nukleoproteide
eines und desselben Organes zweier verschiedener Tiere an-
gewendet werden.
Das Ausbleiben der anaphylaktischen Reaktion in den
Fallen, wo zur Inokulation das Nukleoproteid und zur Re¬
inokulation das Blutserum desselben Tieres benutzt wurde,
bestatigt die Meinung derjenigen Autoren, welche beh&uptet
haben, man kbnne mit Organextrakten eine anaphylaktische
Reaktion herbeifuhren, es widerspricht hingegen der Anschauung
derjenigen Autoren, welche der Vermutung Ausdruck gegeben
haben, daB in solchen Fallen die Reaktion auf im Organextrakt
zuruckgebliebene Blutspuren zurQckzufiihren sei.
4) Auch die Bakteriennukleoproteide sind im-
stande, eine typische anaphylaktische Reaktion
(Shock) hervorzurufen.
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Beitrag zum Studium der Anaphylaxie.
79
5) Die dnrch das B ak terien n uk 1 e opr ot eid
herbeigefflhrte anaphylaktische Reaktion ist
spezifisch ffir die Bakterienart, aus welcher das
Nukleoproteid gewonnen wurde.
Aus den oben von mir dargelegten Grflnden kann diese
letzte Wahrnehmung von groflem Interesse sein, wenn es sich
darum hand el t, zu prophylaktischen Zwecken eine Vaccination
mit dem Nukleoproteid auszuffihren.
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Gck igle
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H. T. Karsner, Longs in Anaphylaxis produced by Toxic Sera. 81
Nachdruck verboten .
The Longs of the Guinea Pig in Anaphylaxis produced
by Toxic Sera 1 ).
By Howard T. Karsner, M. D. (Boston, U. S. A.).
(Eingegangen bei der Redaktion am 24 April 1912.)
In a study of the lungs of the guinea-pig in anaphylaxis
produced by horse serum, contrasted with the lungs of guinea-
pigs poisoned by Witte’s peptone, toxic serum (fresh ox
serum), haemolytic amboceptor and by various haemotoxic
agents such as ricin, abrin, solanin and sodium oleate, it was
shown that histologically the “lung picture in horse serum
anaphylaxis in the guinea-pig is quite distinctive, the most
noticeable features being bronchial constriction and marked
distention and rupture of alveoli”. It was further shown that
in the various forms of non-anaphylactic poisoning (except by
Witte’s peptone) the lungs showed haemorrhage into the
interstitial tissue and alveoli and oedema in both the peri¬
vascular lymphatics and alveoli. “The effect on the lungs of
haemolytic amboceptor is characterized especially by marked
oedema; that of toxic ox serum by haemorrhage; and that
of the haematoxic agents mentioned is closely similar to that
of fresh ox serum.” “Conglutination (fusion) of erythrocytes
is common to all the processes studied, but is more marked
in the non-anaphylactic th$n in the truly anaphylactic con¬
ditions” (1). The purpose of this paper was to emphasize
the importance of the acuta emphysema of the lungs in im¬
mediate anaphylaxis, first described as a constant feature by
Gay and Southard (2) and pointed out to be characteristic
by Auer and Lewis (3), as contrasted with the appearance
of the lungs in the non-anaphylactic conditions studied at the
same time. While this paper was in press Graetz (4) pub¬
lished his study of the lungs of the guinea-pig in anaphylaxis.
1) This work was begun in the Me Manes Laboratory of Pathology,
University of Pennsylvania, with the assistance of Mr. George K. Strode
and continued and finished in the Laboratory of Pathology, Harvard Medical
School (Phillips Fund).
Zeitachr. f. lmmunttMtaforachung. Grig. Bd, XIV. g
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82
Howard T. Karsner,
The two papers approach the subject from somewhat
different points of view and although agreeing in some minor
points, disagree in the most important findings.
Graetz Bays “the conclusion of Biedl and Eraus (5) that complete
pallor of the lungs is the characteristic of the anaphylactic lung cannot be con*
firmed. There are found all stages, from a pallid finely punctate haemorrhagic
lung up to a markedly hyperaemic organ with numerous confluent haemor¬
rhages”. Further “the findings of Biedl and Eraus that oedema and
marked hyperaemia of the lungs are found In anaphylatoxin poisoning and
haemolytic amboceptor poisoning, and, in contrast, emphysema and pallor
characterize the anaphylactic lung cannot be confirmed”. “Ox serum
poisoning cannot be differentiated anatomically with absolute certainty
from genuine anaphylaxis.”
In a critical examination of Graetz’s study it will be
seen that he used, for his study of anaphylaxis, toxic sera
such as ox serum, dog serum, and organ extracts of the trout
(Forelle) in animals sensitized to homologous proteins. That
the immediate toxic effect of these sera in unsensitized guinea*
pigs is far more severe than that of horse serum there can
be no room for doubt. It has therefore been felt that the
discrepancy in the findings of Graetz and the writer might
be due to the former’s use of toxic sera insted of horse serum.
Hence, a series of experiments has been carried out, studying
the lungs of animals poisoned with eel serum, ox serum, and
dog serum and the lungs of animals killed by anaphylaxis
produced by these sera.
The lungs of the animals killed by fresh eel serum and
by fresh dog serum resemble those of animals killed by fresh
ox serum so closely as to be indistinguishable except for
slight differences in degree, the lungs of the animals poisoned
by eel serum showing somewhat more marked conglutination,
haemolysis, haemorrhage and oedema than of those poisoned by
ox serum, and the lungs of those poisoned by dog serum somewhat
less marked similar changes than in the ox serum animals. This
is not remarkable when one considers the toxicity of these
sera, dog serum having a fatal intravenous dose, for a 300 g
guinea-pig, of about 0,02 c. c., ox serum about 1,0 c. c. to
2,0 c. c., and dog serum 2,0 c. c. to 3,0 c. c. The distribution
of the haemorrhage in the interstitial tissues and alveoli and
of the oedema in the perivascular lymphatic spaces and alveoli
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Lungs of the Guinea Pig in Anaphylaxis produced by Toxic Sera. 33
is the same in poisoning by all three sera. The absence of
bronchial constriction and of notable alveolar distention pre¬
vails in all. In the lungs of dog-serum poisoning and to a
much less degree of the poisoning by ox and eel sera, although
there is no gross distention of the lungs there are to be found
occasional small focal areas of acute emphysema. These pro¬
bably compensate for the loss of air space produced by con¬
gestion and oedema, rather than by bronchial contriction, be¬
cause the latter cannot be demonstrated (table I).
In a series of pigs sensitized to eel serum the following
experiments were performed (table I, p. 84).
In a series of normal pigs of about 400 g in weight
0,1 c. c., of the eel serum employed in this experiment had
proven fatal and 0,05 c. c. had produced well marked symptoms
but was followed by recovery. The intoxicating dose given the
anaphylactic pigs averages somewhat less than the essentially
fatal toxic dose. Particular attention is called to the brief
notes of the lung findings.
A similar series with ox serum was then studied (table II,
p. 85).
The ox serum used for the intoxicating dose was an old
inactivated serum, in itself not higly toxic for normal pigs.
In like manner a third series was carried through with
dog serum (table III, p. 86).
The dog serum used in these experiments was inactivated
serum. The difference caused by use of fresh serum for
the intoxicating dose is one of degree only as is shown in
table IV (p. 86).
Study of these charts will show that within certain limits
variations in sensitizing dose produce no constant effect on the
outcome. In the same way it will be seen that variations in
the size of the intoxicating dose produce no constant variation
in appearance of the lungs. It might be supposed that the
greater degree of bronchial contraction assumed to be present
with larger intoxicating doses, as indicated by the quantitative
relation between the intoxicating dose of serum and the pro¬
tective dose of atropin (6), might produce a greater degree of
emphysema and a corresponding pallor of the lungs, but this
was not found to be the case. Again it might be thought
6 *
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84
Howard T. Karsner,
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Table FT.
Lungs of the Guinea Pig in Anaphylaxis produced by Toxic Sera. 85
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86
Howard T. Karsner,
Table III.
Number
Sensitizing
do9e dog
serum
Number of
days
sensitized
Intoxi¬
cating dose of
inactivated
dog serum
Symp¬
toms
Death
Gross appearance
of lungs
Minute appearance
of lungs
1006
c. c.
0.05
21
c. c.
0.1
Typical
Reco¬
vered
—
—
1004
0.05
21
0.5
Typical
5 min.
Distended, congested, few
haemorrhagic areas
Bronchial constriction and
emphysema. Congestion of
large vessels, haemolysis,
conglutination, haemor¬
rhage, oedema
1002
0.05
21
1.0
Typical
3 min.
Same except somewhat
less congested
Same as 1004
1000
0.05
21
2.0
Typical
2 min.
Distended, congested,
numerous haemorrhages
Same as 1004
1007
0.005
21
0.2
Typical
3 min.
Distended, pallid, few
haemorrhages
Same as 1004
1005
0.005
21
0.5
Typical
5 min.
Distended, slightly, con¬
gested , few haemorrhages
Same as 1004
1003
0.005
21
1.0
Typical
2 min.
Same as above
Same as 1004
1001
0.005
21
2.0
Typical
2 min.
Same as above
Same as 1004
Table IV.
Number
Sensitizing
dose dog
serum
Number of
days
sensitized
Intoxicating
dose of fresh
dog serum
Symp¬
toms
Death
Gross appearance of
lungs
Minute appearance of
lungs
c. c.
c. c.
1010
0.05
22
0.2
•
Typical
5 min.
Distended, congested, few
haemorrhages
Bronchial constriction and
emphysema. Congestion
in large vessels, haemo-
sis, conglutination, hae¬
morrhage and edema
1008
0.05
22
2.0
Typical
2 min.
Distended, congested,
markedly haemorrhagic
Same as 1010 except for
greater haemorrhage
1009
0.005
22
2.0
Typical
7 min.
Distended , congested ,
moderately haemorrhag.
Same as 1010
1011
0.005
22
3.5
Typical
2 min.
Distended , congested,
slightly haemorrhagic
Same as 1010
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Longs of the Guinea Pig in Anaphylaxis produced by Toxic Sera. 87
that the increase in intoxicating dose, carrying with it incre¬
asing amounts of toxic material would increase the amount of
haemorrhage, conglutination, haemolysis and oedema, but this
was not found to be true within the limits of the doses
employed. As practically constant findings are noted bronchial
constriction and alveolar emphysema just as would be seen in
a similar series with horse serum; but in addition there are
the conditions seen in simple toxic serum poisoning, conglu¬
tination, haemolysis, haemorrhage and oedema. In other
words, we may say that the lungs of the guinea-pig show the
appearance of horse serum anaphylaxis with the superadded
alterations of toxic serum poisoning. If this were the case,
it ought to be possible, in horse serum anaphylaxis, to simu¬
late toxic serum anaphylaxis by the addition of an active
toxic serum to the intoxicating dose of horse serum. Accord¬
ingly, the experiment with the addition of fresh dog serum
to the intoxicating dose of horse serum as indicated in table V
(p. 88) was tried. A similar series with the addition of ox serum
was carried out, as shown in table VI (p. 89).
In the series shown in table V the dog serum was toxic
for a 270 g normal guinea-pig in a dose of 3.0 c. c. and failed
to kill a 270 g normal guinea-pig in a dose of 2.0 c.c. Six
sensitive animals were given ascending doses of horse serum
and a constant small dose of dog serum, and five more were
given ascending doses of horse serum with a constant large
dose of dog serum; the result being practically constant
throughout, i. e., the production of a lung picture, in essential
and in detail, like that of toxic serum anaphylaxis.
In the corresponding series with ox serum a toxic serum
was used which killed a 200 g normal guinea-pig in a dose
of 0.5 c. c. and was not fatal for a 240 g pig in a dose of
0.4 c. c. It would appear from examination of the gross find¬
ings that the smaller associated dose of ox serum produced
less congestion than the larger dose, but this is not borne out
by the histologic examination nor by the findings with dog
serum in Series V. It can safely be said, however, that
inasmuch as the process to which these animals were subjected
differed only from horse serum anaphylaxis in the addition of
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Lungs of the Guinea Pig in Anaphylaxis produced by Toxic Sera. 89
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5 min.
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90 H. T. Karsner, Lungs in Anaphylaxis produced by Toxic Sera.
a toxic serum, so the appearance of the lungs, which differs
from horse serum anaphylaxis in the addition of conglutination,
haemolysis, haemorrhage and oedema, depends on this added
factor present in the toxic serum.
Zusammenfassung.
Die Lungen von Meerschweinchen, die an der durch
toxische Seren verursachten Anaphylaxie gestorben sind, zeigen
dieselben Verftnderungen, die von Pferdeserum-Anaphylaxie er-
zeugt werden, aber dazu kommen Konglutination, H&molyse,
H&morrhagie nnd Oedem. Diese letzteren Erscheinungen sind
nicht von der Anaphylaxie erzeugt, sondern von einem in dem
toxischen Serum vorkommenden Faktor. Solche Ergebnisse
verfftlschen nicht, sondern stfltzen die Ansicht, dad die charak-
teristischen Verftnderungen der wahren anaphylaktischen Lungen
Verengerung der Bronchien und akutes Ephysem sind.
References.
1) Karsner, H. T., Die Lungen bei der Anaphylaxie. CentralbL f. Bakt.,
Bd. 61, 1911, p. 248, also Proc. Path. Soc. P hil*- , N. S Vol. 14, 1911,
p. 33.
2) Gay, F. P., and Southard, E. E., The Localization of Cell and Tissue
Anaphylaxis in the Guinea Pig, with Observations on the Cause of
Death in Serum Intoxication. Jour. Med. Research, VoL 19, 1908, p. 17.
3) Auer, J., and Lewis, P. A., The Physiology of the Immediate Re¬
action of Anaphylaxis in the Guinea Pig. Journ. Ex per. Med., Vol. 12,
1910, p. 151.
4) Graetz, Fr., Die Bedeutung der Lungenblahung als Kriterium der
Anaphylaxie. Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 8, 1911, p. 740.
5) Biedl, A., und Kraus, R., Ueber die Giftigkeit heterologer Sera und
Kriterien der Anaphylaxie. Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 7,1910, p. 408.
6) Karsner, H. T., and Nutt, J. B. The relation of the Intoxicating
Dose of Horse Serum to the Protective Dose of Atropin in Anaphylaxis
in the Guinea Pig. Journ. Amer. Med. Ass., Vol. 57, 1911, p. 1023.
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A. Seitz, Ueber Bakterienanaphylaxie.
91
Nachdruck verboten.
[Aus dem Hygienischen Instttut der Universit&t Bonn a. Rh.
(Direktor: Prof. Dr. Eras e).]
Ueber Bakterienanaphylaxie.
II. Mitteilung.
Von Priv.-Doz. Dr. A. Seitz.
(Eingegangen bei der Redaktion am 26. April 1912.)
In einer frfiheren Mitteilung (diese Zeitscbr., Bd. 11,
Heft 5), die Uebereropfindlichkeit gegen bakterielles Eiweifi
betreffend, batten wir Befunde mitgeteilt, welche die Ge-
winnung des anaphylaktischen Giftes Oder des „Anaphyla-
toxins u aus Bakterien und inaktiviertem Serum zum Gegen-
stande hatten. Unsere Resultate deckten sich mit denjenigen
von Kraus (diese Zeitschr., Bd. VII), welcher anaphylak-
tisches Gift erzielt hatte aus Eiweifi, ohne Mitwirkung des
Komplements. Da die Inaktiviernng jedoch nur bei 56—58°
erfolgt war, konnte Friedberger wohl mit Recht den Ein-
wand erbeben, dafi die Alexine nicbt in ihrer Gesamtheit zer-
stOrt worden waren.
Wir haben deshalb die Inaktivierung 1 Stunde hindurch
bei 65° vorgenommen, nacbdem wir das Serum zur Hfilfte
mit physiologischer Kochsalzldsung verdflnnt batten. Die dies-
bezfigiicben Protokolle m5gen bier folgen.
Meerschweinchenserum 1 Stunde durch Erhitzen auf 65° inaktiviert
(verdunnt zu gleichen Teilen mit physiologischer NaCl-Losung). Je 5 ccm
dieser Mischung mit 20 mg Dysenteriebacillen 1 Stunde bei 87° digeriert,
zentrifugiert, die bakterienfreie Fliissigkeit injiziert in die Jugularis.
(Siehe die Tabelle auf p. 92.)
Neben dem augenf&lligen Temperatursturz bei vielen der
Tiere haben wir also anch hier unter 11 Fallen einmal typische
Krfimpfe mit entsprechendem Lungenbefund; in den tibrigen
Fallen waren die Tiere sehr kollabiert nach der Injektion und
zeigten gleichfalls verschiedene Male Lungenbiahung.
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92
A. Seitz,
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Ge-
wicht
lemp.
vor
der
Temp,
nach Std.
£
g
Injekt.
1
2
12
240
37.5
34,7
15
280
38.7
34,8
•
16
260
38,8
33.2
17
220
38,6
32i2
18
1 250
38.5 |
35,1
19
290
38.7
35,3
m
25
220
| 38,8
34,5
34,9
26
220
39,0
35,0
36,0
27
1 220
38.9 |
34,6
34,8
28
230
38,5 1
35,0
35,2
29
210
38,5 |
34,2
1 35,4
Verhalten naeh der
Injektion
Sehr kollabiert.
Keine deutlichen
Krampfe
Krampfe
Sehr kollabiert. Keine
deutlichen Krampfe
Sektion
Lgn. +,f nach 1 Std.
Lgn. ohne objektiven Behind,
iiberlebt
dgl.
Lgn. +,+ nach 1 Std.
Lgn. —, iiberlebt
Lgn. +, f nach 1 Std.
Lgn. —, f nach 24 Std. ohne
objektiven Befund
dgl.
Lgn. +
Lgn. —, f nach 24 Std. ohne
I objektiven Befund
Wir miissen also schlufifolgern, daB offenbar gelegentlich
auch ohne Mitwirkung der enzymatischen K5rper, welche wir
gemeinhin Komplemente nennen, eine Abspaltung des Ana-
phylatoxins aus EiweiB erfolgen kann. Denn Komplemente,
welche einer Erhitzung flber 56° standhalten, sind bis jetzt
nicbt bekannt, wenn wir unberiicksichtigt lassen, das von
Ehrlich und Morgenroth im Serum einiger Ziegen einige
Male nachgewiesene, bei 56° noch thermostabile Komplement.
Eine Selbstinaktivierung des Meerschweinchenserums durch
Lagern bei Eisschranktemperatur w&hrend 5 Tagen hatte weniger
Erfolg; es gelang nur einmal Kr&mpfe zu erzielen, welche aber
nicht akut todlich waren, w&hrend die Temperaturen Gber-
haupt keine bedeutenden Schwankungen zeigten.
Meerschweinchenserum 5 Tage bei Eisschranktemperatur. Je 4 ccm
dieses Serums mit 20 mg Dysenteriebacillen 1 Stunde bei 37° digeriert,
zentrifugiert, die bakterienfreie Fliissigkeit injiziert.
is i Ge-
u 1 wicht
w I
p 1 g
Temp.
vor
der
Injekt.
21 j 210
38,5
22 1 200
38,6
23 210
38.7
24 200
38.6
30 240
1 38.6
Temp,
nach Std.
1 ! 2
Verhalten nach der
Injektion
35,6 36,ljohne obj. Befund
36,2^ 36.4!dgl.
37.0 37.5 Krampfe
36.4 36.5 ohne obj. Befund
36,2 36.3 krampfartige Zuck-
i , ungen, Unruhe
j
Sektion
nach 24 Std. ohne ob¬
jektiven Befund
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Ueber Bakterienanaphylaxie.
93
Zwar benchtet Lurk (diese Zeitschr., Bd. 12, Heft 4) aus
dem Laboratorium Friedbergers in einer Arbeit, welche
sich mit fihnlichen frfiheren Befunden tod ans befafit, fiber
negative Resultate bei Versnchen, welche mit bei 60° in-
aktiviertem Serum angestellt warden. Leider hat Lurk zur
Nachprfifung unserer Versnche nicht wie wir Dysenterie-
bacillen, sondern den Bacillus prodigiosus gewfihlt. Wie wir
in der Zusammenfassung unserer 1. Mitteilung sub 2 sagen,
gelingt es bei manchen Bakterien — Ruhr und Typhus —
fast regelmfiBig, die Dreiheit der Syiuptome, bestehend aus
Krfimpfen, Temperatursturz und Lungenblfihung, zu erzeugen.
Bei anderen Bakterien kann das eine Oder andere dieser
Symptome fehlen. Von Interesse wfire auch die Angabe, mit
welchen Bakterienmengen Lurk seine Versuche angestellt hat,
da bei zu kleinen Mengen die Anaphylatoxinbildung bekannt-
lich auch nicht bei Verwendung von aktivem Meerschweinchen-
serum gelingt. Auf die Tatsache, daB es in sehr vielen Fallen
gelingt, allein durch intravendse Injektion von Bakterien
virulenter und saprophytischer Natur anaphylaktische Ver-
giftung mit akutem Tod zu erzeugen, haben wir in unserer
I. Mitteilung zuerst hingewiesen, allerdings bedarf es in solchen
Fallen haufig Dosen von Bakterien, welche das Vielfache be-
tragen deijenigen Bakterienmengen, aus denen bei Digerierung
mit Serum das Gift gewonnen werden kann. Es handelt sich
aber bei unseren Versuchen um eine Injektion von Gift ohne
jede Beimengung korpuskularer Elemente, wie aus dem
Protokoll Tabelle IX hervorgeht Im flbrigen wird auch bei
uns selbstverstandlich das Serum von kranken, alten Oder
trachtigen Tieren wegen seines schwankenden Komplement-
gehaltes nicht verwendet. An dieser Stelle mOchten wir auf
die Arbeit von Do err und Russ (Centralbl. f. Bakt., Bd. 63)
hinweisen, welche zu dem Ergebnis kommen, daB es gelingt,
„aus den Eomponenten anaphylaktischer Versuche, aus EiweiB-
antigen und Antiserum, in vitro akut tOtende Gifte ffir Meer-
schweinchen zu gewinnen. Ein EinfluB des Komplementes
auf diesen Vorgang war nicht zu konstatieren.“ In derselben
Publikation kritisiert Lurk unsere negativen Resultate, welche
wir erhielten bei der Nachprfifung der Angaben von Fried-
berger, daB kleineDosen von Hammelserum bei mit Hammel-
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94
A. Seitz,
serum subkutan pr&parierten Tieren fiebererregend wirken.
Wenn die Applikationsart von so einschneidender Bedeutung
ware, hatten wir also bei der intravendsen Injektion von
Hammelserum beim unpr&parierten Tier pyrogenetische Wir-
kung haben miissen, da wir uns in diesem Falle vollkommen
an die Angabe Friedbergers (Berliner klin. Wochenschr.,
1910, No. 42) hielten. Auch dies gelang uns nicht. Bekannt-
lich kann man in anderen Fallen bei gleichartiger Wahl der
Applikationsstelle fflr Sensibilisierung und Reinjektion glatt
Temperaturschwankungen — und zwar Senkungen — hervor-
rufen, und es ist nicht einzusehen, warum eine eventuelle
Temperaturerhdhung, ware sie wirklich zu erhalten, nicht auch
bei diesem Modus erzielt werden kSnnte. Dafi das Pfeiffer-
sche Phanomen des Temperatursturzes eines der sichersten
Kriterien fflr anaphylaktische Reaktion ist, haben wir ja selbst
stets zur Genflge betont. Auf diesen spezifischen anaphylak-
tischen Temperatursturz allein bezieht sich auch die von
Lurk angefflhrte Arbeit von Pfeiffer und Mita (Zeitschr.
f. Immunitatsf., Bd. 4, 1910), sie kann also wohl nicht gut
von Lurk angeftthrt werden zur Bekraftigung der Befunde
von Fieberreaktion bei kleinsten Gabon. Eine genaue Durch-
sicht unserer Arbeit wflrde Luri flbrigens gezeigt haben,
dafi wir die Messungen absolut nicht „zweistttndig u , sonderr
halb- und stflndlich vornehmen, wirklich nennenswerte Tem¬
peraturschwankungen kflnnen sich aber in diesem Zeitintervall
nicht derart ausgleichen, dafi sie gar nicht vorhanden.
Einem Einwand war noch zu begegnen, welcher unter
Zugrundelegung der Verflffentlichungen von Wassermann
und Keysser hatte erhoben werden kflnnen, nfimlich dem
Einwand, dafi mflglicherweise das Meerschweinchenserum
selbst akut toxisch gewirkt hatte.
Obige Autoren (Zeitschr. f. Hyg. und Infektionskrankh.,
Bd. 68, No. 3) fflhren in der Tat eine stattliche Reihe von
Versuchen an, in denen die Versuchstiere, Meerschweinchen,
bis zu 50 Proz. nach Injektion normalen homologen Serums
akut unter anaphylaktischen Symptomen zugrunde gingen. Eine
Erkl&rung fflr diese spontane Giftigkeit des Meerschweinchen-
serums wird von den Verff. in Einklang mit ihrer Theorie
der Bildung des Anaphylatoxins aus dem Ambozeptor als
Antigen durch das Komplement, darin gesucht, dafi die
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Ueber Bakterienanaphylaxie.
95
Normalambozeptoren des Meerschweinchenserums an die
Blutgerinnsel and Fettmolekflle, welche im Serum suspendiert,
adsorbiert werden and wahrend der Dauer der Gewinnung
des Serums die Matrix fflr das Gift abgeben kbnnten. Gegen
diese Anschauung sprachen a priori gewichtige Grflnde, und
auch Friedberger, der gleicbfalls bei Hunderten von
Tieren niemals eine prim are Giftigkeit des Meerschweinchen¬
serums konstatieren konnte, nimmt entweder eine Ver-
unreinigung des Serums mit Bakterien an Oder dafi die
Serum spender verseucht gewesen sind.
Wie dem auch sei, es schien immerhin geboten, die Be-
hauptung von Keysser und Wassermann nachzuprtifen.
Wir injizierten Meerschweinchenserum getrennt, sowohl wie
auch deren Gemiscb, sofort wie auch nach verschieden langem
Aufenthalt im Brutschrank bei 37 °, wie aus folgendem
Protokoll hervorgeht
o
Ge-
wicht
g
Temp.
tot
der
Injekt
Bezeichnung des Serums
Temperaturen
nachderlnjektion
Stunden
Yerhalten
3
4
101
250
1021
1051
106
103
250
230
200
240
104
107
108;
109
270
250
200
220
110 200
111 ! 220
112) 240
113! 230
114| 230
115' 210
116 250
38,0
37.5
38.5
38.2
38.3
38.5
37,9
38.1
38,0
37,9
38.3
38,5
39,0
38,7
38.2
38,5
MischuDg A, B, C, D sofort|38,5|38,5
6 ccm
dgL 4 ccm 37,5 37,8
1 Std. 37° 6 ccm 37,5137.5
del. 4 ccm 38,5 38,0
Mischung E, F, G, H sofort 38,3,39,0
6 ccm I I
dgl. 4 ccm 139,0:38,7
1 Std. 37° 6 ccm 37,8137.0
38,5
38,3
dgl. 4 ccm
Mischung A, B
6 ccm
dgl. 4 ccm
Serum A 8 Std.
dgl. 4 ccm
Serum B 8 Std.
138,0138.5
Std. 37 °,38,0 37,5
38,038,0
37,9138,0
37,938,0
39,0^38,7
39,0l39.0l
37,4,37,9
37,6'37,5
37,7,38,01
37 0 6 ccm
37 0 4 ccm
Serum C 8 Std. 37° 4 ccm
Serum A, B, C 8 Std. 37° 38,5 38,0
4 ccm
Serum A, B 8 Std. auf Blut- 39,5 38,5
korperchen bei 37° |
38,5:38,0 37,6137,7
37.0 372
38,0 38,01
38,0 37,5
37.5 37,5
37,438,0
39,0 38.0
39,0,38,0
38,038.5
37,5 38.0
38,5 38,6
Samtl. Tiere
No. 101-116
zeigen kerne
anaphylakt.
Symptome
und bleiben
munter
Eine prim are Giftigkeit normalen Meerschweinchenserums
konnten wir also auch in dieser langen Versuchsreihe nicht
feststellen.
Was die Bildungsweise des Anaphylatoxins aus Bakterien
betrifft, so sind die Ansichten dartiber geteilt. Der Ansicht
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96
A. Seitz,
Friedbergers, dem es ja zuerst gelungen, in vitro ein
Meerschweinchen akut tdtendes Gift aus der Wechselwirkung
von Bakterien und Meerschweinchenserum zn erhalten,
schlossen sich Neufeld nnd Dold, Friedemann u. a.,
wie anch ich an, wenigstens quoad Auffassung des Bakterien-
eiweifies als Matrix'des Giftes. Friedberger nahm von
vornherein an, dafi bei der Anaphylatoxinbiidung Stoffe,
welche von den Bakterien selbst herstammen, eine wesent-
liche Rolle spielen. Wir konnten gleichfalls zeigen, dafi un-
abgebautes Eiweifi zur Giftbildung notwendig ist. Aus
lebenden und gekochten Bakterien liefien sich gleich starke
Gifte gewinnen, wenngleich sich nicht alle Bakterien gleich
gut zur Bereitung des Giftes eigneten. Ruhr und Typhus
lieferten stets hochtoxische Gifte, w&hrend beispielsweise
Diphtherie und Streptokokken sich schwer oder gar nicht zu
den Versuchen eigneten. Durch Selbstverdauung, Trypsin
oder Lecithin hergestellte Extrakte hingegen lieferten kein
Gift, welches die Dreiheit der anaphylaktischen Symptome,
wie Kr&mpfe, Temperatursturz und Lungenbl&hung, hervorrief.
Neufeld und Dold wollen allerdings gelegentlich Gifte
erzeugt haben, wenn sie Typhusbacillen in 1 ccm physio-
logischer Kochsalzlosung oder Lecithin-Kochsalzlfisung auf-
schwemmten und nach einiger Zeit die fiber den abzentri-
fugierten Bakterien stehende klare Flfissigkeit mit frischem
Meerschweinchenserum digerierten. Regelmfifiig gelang es
ihnen jedoch nicht, auch der vollst&ndige Symptomenkomplex
liefi sich offenbar nicht hervorrufen. Sind also auch die
Bakterien als unverletzte korpuskul&re Elemente zur Bakterien-
anaphylatoxinbereitung nicht unbedingt erforderlich, so kann
ihre antigene Rolle doch nicht zweifelhaft sein. Von anderer
Seite, so von Keysser und Wassermann, hingegen wurde
die Auffassung vertreten, als ob die Bakterien nur als Ele¬
mente fungieren, welche eine Adsorption des Ambozeptors
ermoglichen, aus dem dann vermittels des Serums das Gift
abgespalten wfirde. Bekanntlich haben frflherschon A.Wasser¬
mann und Bruck, bei der Tuberkulinreaktion, die Meinung
vertreten, dafi es sich bei derselben nicht urn einen Abbau
des Antigens durch das Komplement handelt, sondern dafi das
Gift seinen Ursprung aus der Wechselwirkung von Ambozeptor
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UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber Bakterienanaphylaxie.
97
and Komplement nehmen kOnne. Keysser und W as ser¬
in an n trafen deshalb eine Versuchsanordnung, welche die
Vereiniguog von Ambozeptor and Komplement gestattet, bei
der ein organisches Antigen jedoch gar nicht vorhanden ist.
Als „Antigen“ nahmen sie Kaolin oder Bariumsulfat, also
dnrch das Komplement nicht angreifbare Stoffe, als „Ambo-
zeptor“ inaktiviertes normales oder auch Immunpferdeserum
und als Komplement Meerschweinchenserum. Es entstand nun
bei dieser Versuchsanordnung das anaphylaktische Gift. Fried-
berg e r hob mit Recht hervor, dafi sehr wohl das adsorbierte
Pferdeserum nicht als Ambozeptor, sondern als Antigen fungiert
haben kdnnte, da aus dem mit Komplement digerierten Pferde¬
serum sich sehr gut Anaphylatoxin abspalten l&fit. W as ser¬
in a n n und Keysser versuchten deshalb auch durch Digerieren
mit Kaolin aus normalem, an sich ungiftigem Meerschweinchen¬
serum Gift zu gewinnen, nach ihnen auch einige Male mit
Erfolg. In folgendem moge das Protokoll der Versuche folgen,
welche wir mit Kaolin und Meerschweinchenserum allein, wie
auch mit Kaolin und Immunambozeptor an st ell ten.
Tier
No.
Ge-
wicht
Temp.
vor
der
Kaolin und Meerschwein-
chenserum allein. Injiziert
4 ccm, 4 ccm Serum. Ab-
zentrifugiert
Temperatur
nach der In-
jektion
Verhalten
nach der In-
jektion
g
Injekt.
1 Std.
3 Std.
1
270
3 Oesen 3 Std. bei 37°
SamtlicheTiere
2
300
.
6 ff 3 ,, ,y ff
zeigen keine
4
270
.
3 >7 ^ » ff ff
Symptome
5
300
#
3 » 4 ,, v
und bleiben
6
280
3 ff 4 „ ff ff
munter
7
270
39,2
3 » 4 „ ff ff
39,0
38,3
8
280
38,7
3 » 22 „ „ „
38,7
38,2
9
250
38,7
3 i> 22 „ „ „
38,2
38,8
10
240
38,5
3 v 22 „ „ ,,
Kontrolle: 6 Oesen Kaolin
intravenos in 4 NaCl
37,2
39,0
11
250
39,3
36,6
39,0
12 a
270
38,7
Kontrolle: 5 ccm Serum
allein
36,7
36,9
13 a
250
39,0
3 Oesen 3 Std. bei 37°
3 Oesen + Typhusimmun-
•
•
15 a
250
38.5
serum V 2 Std. bei 58° in-
,
16 a 1
250
38,6
aktiviert, 22 Std. bei 37
#
17 a
l
j
i
250
i
38,7
abzentrifugiert + 4 ccm na-j
tives Meerschw.-Serum J
Kontrolle: Serumgemisch
4 ccm, ohne Reaktion
Kontrolle: 3 Oesen, 4 und
6 Oesen Kaolin, ohne Re¬
aktion i
Zoitschr. f. Immunitatifortchung. Orig. Bd. XIV. 7
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98
A. Seitz,
Es gelang uns also nicht, weder normales Meerschwein-
chenserum durch Kaolinbebrtttung giftig zu machen, noch aus
sensibilisiertem Kaolin durch Meerschweinchenserum das Ana-
phylatoxin zu erhalten. Aehnlich wie uns istesFriedberger
und Scymanowski.Neufeld und Dold, Ritz und Sachs
ergangen. Diese Autoren glauben jedoch bei der Kaolin-Meer-
schweinchenserumdigerierung in manchen Fallen eine gewisse
geringgradige Wirkung bemerkt zu haben, „welche an die Sym-
ptome der Anaphylaxie erinnert“. NeufeldundDold nehmen
an, daB die Kaolininjektionen keinen gleichgftltigen Eingriff dar-
stellen, sie vielmehr leicht Anlafi zu Embolien geben kdnnen.
Dies haben wir bei unseren Kontrollen, wie aus den Protokollen
hervorgeht, niemals beobachtet; auBerdem ist aber der Tod an
Embolie nicht zu verwechseln mit richtigen anaphylaktischen
Kr&mpfen. Diese fehlen bei der Embolie, und der Lungen-
sektionsbefund ist bei beiden grundverschieden.
Wie wir oben gesehen haben, muB dem Komplement
beim Entstehen des anaphylaktischen Giftes aus Bakterien
eine ftufierst wichtige, wenn auch nicht unentbehrliche Rolle
vindiziert werden. Wir legten uns nun die Frage vor, ob das
Komplement in seiner intakten Komplexitat ndtig sei, bzw.
welcher Komponente des Komplements die Hauptrolle bei
dem Abbau des EiweiBes zu dem Anaphylaxie erzeugenden
toxischen Produkt zufalle. Seit den Untersuchungen von
Ferrata und Brand wissen wir, daB das der Komplement-
wirkung zugrunde liegende Agens kompliziert gebaut ist. Es
wurde erkannt, daB das Komplement bei der Dialyse des
Serums gegen fliefiendes Wasser in zwei Komponenten zer-
fallt. Derjenige Teil, welcher in dem ausgef&llten Euglobulin
zu Boden sinkt, wurde Mittelstflck, der im AbguB befindliche
geloste Anteil Endstiick genannt. Diese beiden Teile sind an
und fttr sich beide unwirksam im hSmolytischen Versuch, und
erst ihre Vereinigung bewirkt die Auflosung der roten Blut-
kbrperchen.
Wir gingen zun&chst so vor, daB wir eine Spaltung des
Komplements nach der von Altmann und Sachs be-
schriebenen Methode vornahmen. 4 ccm natives Meerschwein¬
chenserum wurden mit 32,8 ccm Vsoo-Normalsalzs&urelbsung
gemischt und 2 Stunden bei Zimmertemperatur belassen. Hier-
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Ueber Bakterienanaphylaxie.
99
auf wurde der flockige Niederschlag (= Mittelstiick) abzentri-
fugiert, griindlich gewaschen und in 4 ccm physiologischer
Kochsalzlosung aufgenommen. Der AbguB (= Endstiick) wurde
filtriert und durch Zusatz von 3,2 ccm V^-Normalnatronlauge
in 10-proz. Kochsalzlosung neutralisiert und auf den iso-
tonischen Salzgehalt gebracht. Das Mittelstiick — wie iibrigens
auch das Endstiick — wurde sofort zum Versuch verwandt, um
Versuchsfehler auszuschlieBen, wie sie beispielsweise durch
Bildung der Brandschen Kochsalzmittelstiick-Modifikation
entstehen konnten. Ein hSmolytischer Vorversuch orientierte
uns iiber die vollzogene Trennung der beiden Komponenten.
Dieser h&molytische Vorversuch wurde vor jeder Versuchs-
reihe angestellt.
Mittelstiick
5-proz. Hammelblutaufschwemmung
+ Kaninchen-Hammelambozeptor
Endstuck
Erfolg
0,25
0.5
_
ungelost
0,5
0,5
ungelost
0,25
0,5
0,5
gelost
Vereuche mit Meerschweiuchenkomplement-Mittelstiick und Endstuck
und Typhus- und Dysenteriebacillen, sowie Choleravibrionen, 1 Stunde bei
37° digeriert, abzentrifugiert, injiziert.
Tier
No.
Ge-
wicht
Temp.
vor
der
Bakterienart
und Hence
In-
jizierte
Menge
Kom-
plement-
Temperatur
nach Stunden
Verhalten nach der Injektion
und Sektion
g
Injekt.
mg
anteil
1
2
3 j
71
200
38,9
20 Cholera
6
ccm
Endstuck
.
sofort f, Sekt. ohne bes. Befund
72
200
38,0
20
99
6
„
38,0137,5
37,5
Kriimpfe, erholt sich
73
200
38,2
20
99
4
9 9
Mittelstiick
38,2
38,5
38,3
ohne objekt. Befund, iiberlebt
74
200
37,9
20
99
4
99
99
36,5
38,0
38,0
ohne objekt. Befund, + nach
24 Std. ohne Befund
92 j
220
37,9
20 Dysenterie
4
99
99
35,0
34,3
35,0
krampfart. Zuckung., iiberlebt
93
220
38.3
20
99
4
99
99
33,5
•
•
Kriimpfe, f nac ^ 2 Stunden,
Lungen —
91
200
38,4
20
99
4
99
99
37,0
37,5
39,0
ohne objektiven Befund
101a,
200
20
99
4
99
,
ohne objektiven Befund
Kriimpfe, + nach 2 Tagen,
102 a
105 a
250
•
20
99
4
99
•
•
Lungen —
320
20
99
4
99
#
106 a
350
20
99
4
Endstiick
#
•
•
103 a
220
20
19
6
#
*
107 a
108 a
97
350
320
250
37,2
20 „
20
20 Typhus
6
6
4
99
99
*9
99
Mittelstiick
36,5
36,5
36,7
ohne objektiven Befund,
iiberlebten
98
250
37,8
20
99
4
99
99
37,5
38,0
38,0
99 1
250
38,1
20
99
4
99
3S,0
39,0
38,5
100
250
37,9
20
99
4
99
9 *
37,0
39,0
38,7 i
7*
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100
A. Seitz,
Bei den Versuchen, mit Endstiick allein ans Bakterien
anaphylaktiscbes Gift abzuspalten, hatten wir demnach in einem
Fall dentliche, wenn aucb nicht letale Kr&mpfe zn verzeichnen,
w&hrend der Temperatursturz ausblieb. Mit Mittelstiick allein
waren letale Kr&mpfe and Temperatursturz vorhanden, die
Lungen zeigten aber nicht die typische anaphylaktische Lungen-
bl&hung. Auch Friedberger und Ito (Zeitschr. f.Immunit&tsf.,
Bd. 11, Heft 3/4) gelang die Erzielung des anaphylaktischen
Symptomenkomplexes nicht mit getrennten Komplement-
komponenten.
In einer weiteren Versuchsreihe nahmen wir die Spaltung
des Komplements durch die Dialysemethode vor. Wir be-
dienten uns mit Erfolg der Schleicher-Schflllschen Dif-
fusionshfllsen, in denen das frische Serum 2mal 24 Stunden
lang mit Zusatz von einigen Tropfen Phenol gegen fliefiendes
Wasser dialysiert wurde. Der ausgefallene Niederschlag von
Euglobin (= Mittelstflck) wird durch Zentrifugieren entfernt
und die Fliissigkeit durch ein dichtes Filter filtriert, um sie
von den letzten Spuren des Niederschlags zu befreien (= End-
stflck). Das Dialysat wird durch geeignete Mengen Kochsalz-
15sung auf den isotonischen Salzgehalt gebracht; die Flflssig-
keitsmenge in den Hdlsen blieb auch nach der Dialyse dieselbe.
Meerschweinchenkomplement, Mittelstiick und Endstiick a us je 4 ccm
Serum mit Dysenterie-Bacillen 1 Stupde bei 37 0 digeriert, zentrifugiert und
intravends injiziert. Injizierte Menge 4 ccm.
Tier No. |
Ge-
wicht
g
Temp, vor
derlnjekt.
Bakterien art
und Menge
rag
Tempera-
turen nach
Stunden
1 2 3
Komplement-
anted
Verhalten nach der
Injektion
117
240
37,9 20 Dysenteric
37,0^37,2! 37,4
Mittelstiick
Ohne objekt. Befuud
118
220
38,31
d g i.
36,0
37,0. 37,1
n
d g i.
119
210
38,0
yy
37,0
37,21 37,5
yy
yy
120
220
37,6
yy
.
. 1 .
yy
Sof. +» ohne Befund,
1
Lungen —
121
250
38.0
yy
37,0
37,5' 37,5
Endstiick
Ohne objekt. Befund
122
220
38.6
1 yy
38.5 39,0 38,0
•7
dgL
123
220
138,0
1 ”
38,0,38,0, 37,9
yy
yy
Im Gegensatze zu der vorhergehenden Versuchsreihe
hatten wir hier also keinen Erfolg. Auch bei der Gewinnung
von Komplementkomponenten zur Einleitung gasfbrmiger
Kohlensaure, wie dies von Lief man n seinerzeit angegeben
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Ueber Baktenenanaphylaxie.
101
wurde (Mflnch. med. Wochenschr., 1909, No. 41), und weiteren
Behandlung von Bakterien mit denselben, haben wir keine
anaphylaktischen Symptome erzielen kOnnen. Die betreffenden
Protokolle fflhren wir hier nicht an.
Wir legten uns nunmehr die Frage vor, ob nicht mflg-
licherweise durch einen UeberschuB von Mittelstfick oder auch .
von Endstflck aus den Bakterien durch die flbliche Methode
Anaphylatoxin sich darstellen lieBe. Wir gewannen Mittelstflck
nnd Endstflck durch die Dialysemethode.
2 Ge-
u wicht
> a)
•
st!
Bakterienart
und Menge
Inj.
Menge
Komplem en tan teil
in 4 ccm Nad
Tempera-
turen nach
Stunden
Verhalten nach der
Injektion
^1 g
HT3
mg
ccm
V,
1
1
40 240
37,7
20 Dysenterie
4
Mittelst. aus 12 Ser.
31,7
32,8
Keine Krampfe, + nach 2
Tagen ohne Befund
51 210
38,6
dgl.
11
4
dgl.
Endstflck 10 ccm
32,0
35,0
dgl.
52 210 I
38,9
4
36,0
37,5
11
53 220 !
39,3
I
11
5
35,5
34,0
f sofort, Lung, ohne Bef.
54 215
38.9
11
5
dgl.
.
55 205 I
39,0
11
5
11
.
dgl.
Keine Krampfe. Ueberlebt
56 210
39,0
11
5
11
35,4
35,0
57i 210 j
39,0
11
5
11
35,5
34,5
dgl.
Es lassen sich die Ergebnisse der Versuche, mit nnr einer
der bekannten Eomplementkomponenten anaphylaktische Sym¬
ptome auszulflsen mithin dahin resQmieren, daB sich in ge-
wissen Fallen wohl die eine Oder andere der anaphylaktischen
Erscheinungen hervorrnfen l&Bt, jedoch nicht der anaphylak¬
tische Symptomenkomplex.
Seit den Untersuchungen von Sachs und Bolkowska
(Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 7, Heft 6) wissen wir, daB ge-
ringe Mengen von Komplement, welche an und fflr sich im
hamolytischen Versuch unwirksam sich erweisen, durch Zu-
satz von Endstflck eine energische Wirkung entfalten kdnnen.
Wir suchten in Anlehnung an diese Befunde das gift-
abspaltende Vermflgen des Komplements oder besser des
Serums durch Zusatz von Endstflck zu erhohen. Wir gingen
so vor, daB wir Bakterien und Serummengen zusammen-
brachten, aus denen allein kein unaphylaktisches Gift sich dar¬
stellen lieB; darauf fflgten wir steigende Mengen von durch
Dialyse gewonnenen und geprflften Endstflcks hinzu und
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102
A. Seitz, Ueber Bakterienanaphylaxie.
digerierten 1 Stunde bei 37 °. Die abzentrifugierte bakterieu-
freie Flflssigkeit wurde in flblicher Weise intravenSs injiziert.
6
fc
fc
Ge-
wicht
U J
21
I s !
Bakterienart
und Menge
Inj. Menge
aufgefiilJt
mit NaCl
Serum- und
Endstuckmenge
Tempera-
turen nach
Stunden
Verhalten nach der
Injektion
s
g
EH-S
mg
cem
1
41
190
39,0
20 Dysenterie
4
1 com Serum
37,0
37,0
Ohne obiektiven Befund
42
180
37,3
dgl.
4
dgl.
37,7
37,7
dgl.
43
200
38,9
yy
4
1 Ser. + 1 Endst.
37,7
37,9
yy
44
180
39,1
ff
4 I
1 „ + 1 yy
36,2
37,6
yy
45
180
38,5
yy
4
1 + 2 „
Krampfe und t- Lungen +
48
180
39,l 1
•y
4
1 +2 „
.
.
dgl.
Ohne obj. Behind, f nach
2 Tagen ohne Behind
Krampfe. Erh. sich. f nach
2 Tagen ohne Befund
49
185
38,G
yy
4 i
i
1 yy +3 „
35,4
36,2
50
185
39,0
yy
4 1
!
1 yy + 4 „
35.5
34,9
1 1
Uebereinstimmend mit den frttheren Resultaten zeigt nns
also auch dieser Versuch, dafi das sogenannte Komplement in
seiner Gesamtheit zur Giftabspaltung nicht unbedingt not-
wendig ist.
Znsammenfassung.
1) Das Komplement ist nicht, wie vielfach angenommen
wird, znr Gewinnung des anaphylaktischen Giftes unbedingt
erforderlich.
Auch mit Serum, welches bei 65° inaktiviert wurde, lafit
sich dieses aus Bakterien darstellen.
2) Gine primftre Giftigkeit nativen Meerschweinchenserums
fflr Meerschweinchen gibt es nicht.
3) Es gelingt nicht durch Einwirkung von Kaolin bei
Bruttemperatur auf frisches Meerschweinchenserum dieses
toxisch zu machen fiir Meerschweinchen. Ebenso lafit sich
aus dem Komplex Kaolin-Ambozeptor kein Gift abspalten.
4) Trennt man das Komplement in seine Komponenten
Mittelstiick und Endstiick und digeriert eine derselben mit
BakterieneiweiC, so gelingt es gelegentlich auch auf diese
Weise, ein anaphylaktisches Gift zu erzielen, welches das eine
oder andere der drei anaphylaktischen Kardinalsymptome
hervorruft.
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F. Ditthorn und W. Schultz, Biologische Versuche etc. 103
Nachdruck verboten.
[Aus dem Untersuchuugsamt der Stadt Berlin (Direktor: Geh.
Reg.-Rat Prof. P r o s k a u e r) und dem st&dtischen Kraokenhause
Charlottenburg-Westend (Dirig. Arzt: Prof. Dr. Umber).]
Biologische Versuche fiber Metailf&llungen mit Eiwei.fi-
lbsungen und Gonokokkenextrakten.
Von
Dr. Fritz Ditthorn, und Dr. Werner Sohnltz,
standigem Bakteriologen am Unter- Oberarzt der lnneren Abteilung des
suchungsamt der Stadt Berlin Krankenh. Charlottenburg-Westend.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 2. Mai 1912.)
Durch Fallung von EiweiBlbsungen mit Eisensalzen lassen
sich salzartige EiseneiweiBverbindungen herstellen, welche,
wie man sich ausdrfickt, das Eisen maskiert enthalten. Frflhere
Untersuchungen zeigten nun, daB in Eisenalbuminaten
der biologische Charakter des EiweiB erhalten ge-
blieben ist, so daB im Komplementbindungsversuch sowie im
Ueberempfindlichkeitsversuch der spezifische Charakter der
Ausgangslbsung zutage tritt. Es erhob sich nun die Frage,
ob diese Eigenschaft der EiweiBverbindungen von allgemeiner
Bedeutung ist. Zu diesem Zwecke sind die folgenden Unter¬
suchungen angestellt, welche darauf hinaus zielten, festzu-
stellen, in wieweit sich mit anderen Metallen Eiweifi-
fftllungsprodukte herstellen lassen, die, in Lbsung gebracht,
den antigenen Charakter des EiweiB konserviert zeigen. Ein
positives Ergebnis wurde mit Kupfersulfat, Blei-
nitrat, Quecksilberchlorid und Zinksulfat erzielt.
Die Herstellung einer Kupferalbuminatlfisung, wie
das gewonnene Produkt zun&chst ohne Rflcksicht auf die nahere
chemische Beschaffenheit genannt werden soil, ist folgende:
20 ccm einer 3,5-proz. Lbsung von Albumen ovi siccum
werden mit 15 ccm einer 5-proz. Kupfersulfatlosung vollstkndig
gefallt. Der Niederschlag wird mit Aq. dest. gewaschen, bis
in der fiberstehenden Flfissigkeit weder EiweiB noch Schwefel-
sRure, noch Kupfer nachweisbar sind. Der Niederschlag
wird in 15 ccm Aq. dest unter Zugabe von 10 Tropfen einer
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104
Fritz Ditthorn und Werner Schultz,
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1-proz. Natronlauge gelOst und mit 5 ccm Glyzerin auf das
Ausgangsvolumen der EiweiBlosung (20 ccm) gebracht.
Mit einer derartigen „KupferalbuminatlSsung tt
wurden Kamplementablenkungs- und Prftzipitin-
versuche angestellt, deren Resultat aus den folgenden beiden
Tabellen ersichtlich ist.
Ablenkungsversuch vom 6. V. 10.
Versuch
No.
Huhnereiweifi
3,5 Proz.
Kaninehen-Hiihner-
eiweiSantiserura
Resultat
1
0,001
0,05
Hemmung
2
0,0001
0,05
Losung
3
—
0,1
77
4
0,002
Kupferalbuminat
vom 27. XII. 09
77
|
5
0,1
0,05
Hemmung
6
0,01
0,05
97
7
0.001
0,05
99
8
0,0001
0,05
Losung
9
0.2
—
79
10
0,02
N ormalkaninchen serum
79
11
0,1
0,05
Losung
12
0,01
0,05
77
13
0,001
0,05
99
14
0,0001
0,05
fast kompl. Losung
15
—
0,1
Prazipitinverauch vom 30. IV. 10.
Versuch
KupferalbuminatlCsung
Hiihnereiweifl-
Resultat
No.
vom 27. XII. 09
antiserum
sofort
nach 20 Min.
1
1 :10
0,1
+
++
2
1 :100
0.1
+
++
3
1 :200
0,1
—
+
4
1 :400
0,1
—
+
5
1 :600 1
0.1
—
+
6
| 1:800 I
0,1
—
Sp.
7
1 :1000
0,1
—
77
8
1:2dO0
0.1
_ !
77
9
1 :4000 1
0,1
— 1
7J
10
1 :6000
0,1
— j
11
1 : MjoO :
0,1
—
—
12
1
1 :10 IKK)
3,5 Proz. HUhnereiweifi
0,1
1
|
—
13 i
1 :1000 ,
0,1
+
+ +
14
1 :S000
0,1 1
Sp.
+
15 !
Aq. dest.
0.1
Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Biologische Verauche iiber Metallfallungen mit EiweiBlbsungen etc. 105
Es zeigt sicb, dafi mit spezifischem Antiserum
sowohl Prfizipitation wie Komplementbindung
positiv ausfallen. Wfthrend die Prfizipitation mit Eiweifi
einen hdheren Titer gibt als mit Kupferalbuminatldsung, ist
aus dem Ablenkungsversuch diese Differenz in den gegebenen
Abstufnngen nicht erkennbar, wobei allerdings zu berflck-
sichtigen ist, dafi bei der Komplementablenkung die Ldsung
von Albumen. ovi mit der Eiweifildsung, aus welcher das
Kupferalbuminat hergestellt worden war, nicht identisch ist
Entsprechend dem Vorgehen mit Albumen ovi und Kupfer-
sulfat gelang es, auch mit menschlichem Ascites ein
analoges Ffillungsprodukt von spezifischem Art-
charakter herzustellen.
In fihnlicher Weise ist es gelungen, eine „Bleialbumlnat-
Idsnn^ herzustellen:
20 ccm einer 3,5-proz. HfihnereiweifilOsung werden mit
10 ccm einer 5-proz. BleinitratlOsung geffillt. Der Nieder-
schlag wird bis zum Verschwinden der Eiweifi-, Blei- und
Salpetersfiurereaktion mit Aq. dest. gewaschen, unter tropfen-
weiser Zugabe von 1-proz. Natronlauge gelOst und mit Aq.
dest und Glyzerin (25 Proz.) auf 20 ccm aufgefflllt. Versuche
mit einer derartigen Ldsung ergeben mit spezifischem
Antiserum positiven Ausfall von Komplement¬
bindung und Prfizipitation.
Ablenkungsversuch vom 3. V. 10.
Versuch
No.
HOhnereiweifi-
losung 3,5 Proz.
Eiweifiantiserum
Resultat
1
0,001
0,05
ungelost
2
0.0001
0.05
komplette Loeung
3
0,002
—
>>
4
■
Bleialbuminat
vom 14. XII. 09
0,1
5
0,1
0.05
ungelost
6
0.01
0,05
i *
7
0.001
0,05
groBe Kujipe
8
0,0001
0.05
Ku [>pe
9
0,00001
0,05
komplette Losung
10
0.2
—
O M
11
1 0,02
1
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Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
106
Fritz Ditthorn und Werner Schultz,
Versuch
No.
Bleialbuminat
vom 14. XII. 09
Norroalkaninchenserum
Kesultat
12
0,1
0.05
komplette Losung
13
0,01
0,05
yy yy
14
O.oOl
0.05
yy y*
15
o,o in
0,05
yy v
16
0,0 0)1
0,05
yy >«
17
—
0,1
fast kompl. Losung
Ein quantitativer Vergleich zwischen der EiweiBlSsuug
und der Bleialbuminatlbsung vom Ablenkungsversuch vom
3. V. 10 ist ohne weiteres nicht statthaft, weil die in dem
Versuch zur Kontrolle benutzte HflhnereiweiBlbsung nicht
identisch war mit derjenigen, welche zur Ablenkung des
Kupferniederschlages verwendet worden war.
Priizipitmversuch vom 28. IV. 10.
Versuch
No.
Bleialbuminatloeung
Hiihnereiweifi-
Resultat
vom 14. XII. 09
antiserum
sofort
nach 20 Min.
1
1:10
0,1
+ +
+ + +
2
1:100
0,1
Sp.
+
3
1:200
0,1
-f
4
1:400
0,1
yy
+
5
1:600
0,1
+
6
1:800
0,1
—
+
7
1 :1000
0.1
—
Sj>.
8
1 : 2< DO
0,1
—
9
1:4000
0,1
—
yy
10
1 : CoOO
0,1
—
yy
11
1:8000
0,1
—
yy
12
1:10OO0
3,5 Proz. HiihnereiweiB
0,1
13
1:1000
0.1
+ +
+ + +
14
1 :8000
i 0.1
Sp.
15
Aq. dest.
, 0,1
—
Sowolil Kupferalbuminatlosung wie Bleialbu-
minatlSsung erwiesen sich ferner als geeignet zur
Erzeugung von Antiserum bei Kaninchen. Mit beiden
Flussigkeiten wurden Antisera erzielt, welche sowohl EiweiB-
lfjsung wie die gelosten Metallosungsprodukte pr&zipitierten
und spezifisch ablenkten.
In fihnlicher Weise wie mit Blei und Kupfer ist es uns
gelungen, mit Zlnksulfat und Quecksilberchlorid vorzugehen
Digitized by
Gck igle
Original from
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Biologische Versuche iiber Metallfallungen mit Ehveifilosungen etc. 107
and zu konstatieren, daB die Metallf&llungsprodukte wie bei
den vorhergehenden untersuchten Metallen den spezifischen
Charakter des EiweiBes erhalten zeigten. Der mit Silber-
nitrat und EiweiB erhaltene Niederschlag bedarf zu seiner
Lbsung groBer Mengen Ammoniak, welche die AusfQhrung
biologischer Reaktionen stbren. Die durch F&llung mit Gold-
chlorid erhaltenen NiederschlSge gelatinierten beim Lbsungs-
versuch.
Die beschriebenen Versuche mit Metallalbuminaten wurden
weiterhin auf das bakterielle Gebiet ansgedehnt.
Nach verschiedenen Versuchen, durch F&llung von
BakterieneiweiB mit Metallsalzen biologisch wirksame Pr&-
parate zu erzielen, auf die nicht n&her eingegangen werden
soil, ist es uns gelungen, durch F&llung von Gono-
kokkenausschQttelungsflQssigkeit mit Silber-
nitratlbsung ein Produkt zu erhalten, welches zwar nicht
durch Alkali zur Lbsung gebracht, wohl aber in FlQssigkeit
fein suspendiert, den biologischen Charakter des
GonokokkeneiweiBes durch Ablenkungsversuch und
Immunisierung erkennen l&Bt.
Die Herstellung der Gonokokken-SllberelweLBverblndung
ist folgende:
Die Gonokokken werden auf Eieragar als Oberfl&chen-
kultur bei 37° C 48 Stunden geztlchtet und dann jede Petri-
schale mit je 20 ccm sterilem destillierten Wasser abge-
schwemmt und die erhaltene Abschwemmung auf 48 Stunden
in den Schflttelapparat gebracht. Der erhaltene Extrakt wird
durch 1-stQndiges Zentrifugieren von den Gonokokken ge-
trennt, und das klare Filtrat mit einer zur F&llung der
EiweiBstoffe hinreichenden Menge Silbernitratlosung genau
gef&llt Von der durch Abschwemmung der Platten erhaltenen
Gonokokkensuspension werden vor der Ausschfittelung 0,5 ccm
zur Z&hlung der Gonokokken entnommen. Es ist dieses notig,
um nach der F&llung berechnen zu kbnnen, auf wieviel die
FlQssigkeit vor dem Gebrauche mit sterilem Wasser aufgefullt
werden muB, damit im Kubikzentimeter genau das EiweiB
von 1000000000 Gonokokken an Silber gebunden ist. Aus
der zur F&llung verbrauchten Silbernitratlbsung l&Bt sich auch
der Silbergehalt der Suspension in Prozenten berechnen. Das
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Go>, 'gle
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108
Fritz Ditthorn und Werner Schultz,
Pr¶t wird durch Verimpfen in Bouillon auf seine Sterilit&t
geprflft.
Beispiel.
Priiparat No. XXXIV vom 17. II. 1912 (Stamm W.).
8 Platten werden mit je 20 ccm sterilem destillierten Wasser ab-
geschwemmt. Die Feststellung der Keimzahl der Abschwemmung erfolgt
nach der von der Firma Zeifl-Jena flir das hierfiir angefertigte Objektiv-
mikrometer und Okularnetzmikrometer bei 144 mm Tubuslange und l / l9
Immersion angegebenen Methode. Die Keimzahlung ergibt in 0,005 ccm,
einer Verdiinnung 1 :10 der erhaltenen Gonokokkenaufschwemmung 5
Keime pro Feld des Okulars; 1 ccm enthalt also 10000 Gonokokken.
10000 X 400000 = 4000000000 Gonokokken im Kubikzentimeter. In
132 ccm des Filtrats entspricht 1 ccm dem EiweiB von 4000000 000
Gonokokken. Es mufi daher die Fliissigkeit 4mal verdunnt (132 X 4),
d. h. also auf 528 ccm aufgefiillt werden, dainit 1 ccm dem Eiweifl von
1000000000 Gonokokken entspricht. Zur kompletten Fallung des Gono-
kokkenextraktes wurden 15 ccm AgNO s verbraucht, was einem Gehalt von
0,032 Proz. Ag entspricht. Zur Konservierung der Fliissigkeit ist ein Zu-
satz von 5 Proz. Glyzerin gemacht.
Das Praparat wird gleich nach der Fallung mit Silber-
nitrat vor dem Glyzerinzusatz mit Gonokokkenantiserum auf
seine antigenen Eigenschaften geprflft.
Beispiel vom 16. IV. 1912.
^ Kaninchen-
Gonokokken-
'S antiserum
No. II
£ v. 16. XI. 11
29 0,4
30 0,2
31 0.1
Normales
Kan.-Serum
Gonokokken-
Eiweib-
Silberpraparat
No. XXXIII
v. 15. n. 12
Go.-
Si.-Prap.
No. XXXIV
v. 17. II. 12
Go.-
Si.-Prap.
No.
XXXVIII
v. 9. HI. 12
Go.-
Si.-Prap.
No. XXXIX
v. 14. III. 12
Go.-
8i.-Prap.
No. XLI
v. 4. IV. 12
Go.-
SL-Prap.
1 No. XLII
v. 13. IV. 12
0,2 kpl. Hmg.
0,1 gro6e Kuppe
0,05 Kuppe
0,01 kleineKupp.
0,005 fast gelost
grofie Kuppe
Kuppe
gelost
99
kpl. Hmg. kpl. Hmg. kpL Hmg.
grofie Kuppe groBe Kuppe fastkpl.Hmg.
Kuppe kleine Kuppe 1 kleine Kuppe
kleine Kuppe gelost fast gelost
fast gel6st „ „ „
kpl. Hmg,
fast kpl. Hmg.
Kuppe
gelost
99
0,4)
0,2; gelost
0,1 )
j gelost
gelost
gelost
fast gelost
gelost
I
!j gelost
— groBe Kuppe
gelost
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•
•
mt s el58t
gelost
geldst
gelost
gelost
gelost
_i
j_| gelost
;
•
•
Digitized by Gougle
Original from
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Biologiflche Versuche fiber Metallfallungen mit Eiweifildeungen etc. 109
Die Versache ergeben, dafl die Silberf&llungs-
produkte der Gonokokkenausschfittelungen mit
spezifischem Antiserum noch in den Dosen 0,05
bis 0,001 ccm deutliche Hemmung geben.
Urn nachzuweisen, dafi in dem filtrierten Schttttelextrakt
die antigene Substanz der Gonokokken znm grOBten Teil in
Ldsung gegangen ist, wurden Ablenknngsversuche mit dem
klaren Filtrat (Extrakt), sowie mit dem Zentrifiigat (den aus-
gelaugten Gonokokken) angestellt
Ablenkungsversuch vom 2. XI. 1911.
Gonokokken extrakt VII mit Gonokokken antiserum Schwarz.
Verouch
No.
Gonokokken-
antiserum
Schwarz
▼. 16. in. 11
Gono¬
kokken -
extrakt
VII
Komple-
ment
Ambo-
zeptor
Blut
Besultat
1
0,2
0,2
komplette Hemmung
2
0,2
0,1
ff V
3
0,2
0,05
yy yy
4
0,2
0,01
fast geldst
5
0,2
0,005
gelost
6
7
0,2
0,001
0,4
■ 1:10
.1:300
■ 5 Proz.
r>
yy
8
—
0,2
yy
9
—
0,1
yy
10
0,4
yy
11
0,2
—
yy
12
0,1
—
Ablenkungsversuch vom 2. XI. 1911.
Zentrifugat VII (ausgelaugte Gonokokken) mit Gonokokken an tiseru m
Schwarz.
■a
u
>
Gonokokken-
antiserum
Schwarz
v. 16 . in . 11
Zentri-
fu^at
Komple-
ment
Ambo-
zeptor
Blut
Besultat
13
0,2
0,2
fast kompl. Hemmung
14
0,2
0,1
fast gelost
15
0,2
0,05
geiost
16
02
0,01
yy
17
02
0,005
1:10
1:300
> 5 Proz.
i yy
18
02
0,001
yy
19
0.4
|
20
—
02
i
21
—
0.1 1
1
Digitized by
Gck >gle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
110 F. Ditthorn und W. Schultz, Biologische Versuche etc.
Aus den beiden Versuchsreihen geht dentlich hervor,
dafi der Extrakt reicher an antigener Substanz
ist, als die extrahierten Gonokokkenleiber.
Zum weiteren Nachweis des antigenen Charakters der
Gonokokken-Silberverbindung wurden Kaninchen mit der
Gonokokken-EiweiBsilberverbindung und zum Ver-
gleich mit Gonokokkenextrakt immnnisiert. Die Tiere er-
hielten von beiden Flflssigkeiten dreimal intravenQs je 1 ccm.
Das Serum beider Tiere gab nach der Vorbehandlung, noch
bei 0,05 ccm mit 0,2 ccm Gonokokkenabscbwemmung fast
komplette Hemmung. Die weiteren Versuche mit Gono-
kokkensilber ergaben ebenfalls brauchbare Antisera.
Die Herstellung eines Gonokokkensilberprfiparates
konnte als Objekt der experimentellen Therapie in
Vorschlag gebracht werden, und zwar mit folgendem Ge-
dankengang:
Bei der Heilung der akuten GonorrhOe ist an-
zunehmen, daB unter dem Einflufi des Virus eine,
wenn auch nur kurze Zeit anhaltende relative,
lokale Immunitat der erkrankten Schleimhaut
erzeugt wird, welche bewirkt, daB sich die
Schleimhaut, welche anfangs auf Gonokokken
mit profuser eitriger Sekretion reagierte, all-
m a h 1 i c h vom infektiftsen Virus reinigt. Die
Heilung wird durch die Wirkung der LOsung von
Metallsalzen (Argent, nitric, und Zinksulfat) auf
die Schleimhaut untersttttzt. Kombiniert man
nun Metall und Gonokokkenausschttttelung und
bringt das gewonnene GonokokkeneiweiBprodukt
auf die erkrankte Schleimhaut, so kommt unter
dem zersetzenden E i nf1uB des vorhandenen
Sekretes einmal die spezifische Silberwirkung
zur Geltung. Daneben wird die lokale Immuni-
sierung der Schleimhaut durch vermehrte Gono-
kokkenwirkung in Form des biologisch wirksam
erhaltenen God okokkenproduktes angefacht und
unterhalten, ohne die Entziindung zu steigern,
weil die Silberwirkung besteht.
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Gck igle
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Freifeld, Ueber die Spezifitat der Agglutinationsreaktion etc. HI
Dieser Grundgedanke schliefit sich einem Prinzip an,
das man vielfach mit Erfolg (Bakterienvaccines, Tuberkulin,
Wassermannnsche Staphylokokkensalbe etc.) anwendet,
nnr erscheint es uns nach den angefflhrten Grfinden
empfehlenswert, das Pr¶t nicht subkntan, sondern lokal
anzuwenden.
Zusammenfassung.
1) Analog dem Verhalten von Eisensalzen lassen sich
durch Fallung von EiweiB18sungen mit Kupfersulfat, Blei-
nitrat, Quecksilberchlorid und Zinksulfat FSllungsprodukte
erzielen, die in Losung gebracht, den spezifischen EiweiB-
charakter erhalten zeigen. (Komplementbindung, Prftzipitation,
Erzeugung von spezifischen Antiseris.)
2) Wasserige Auszfige von Gonokokkenkulturen geben
mit Silbernitrat ein F&llungsprodukt, das sich in suspendiertem
Zustande als ein Silber-Gonokokkenextraktpr¶t von er-
haltenem artspezifischen Charakter erweist.
Nachdruck verboten,
[ Aus dem Bakteriolog. Institufc von Dr. Diatroptoff, Moskau.]
Ueber die SpezifltSt der Agglutinationsreaktion bei der
Diagnose der Cholera- nnd choleraartigen Yibrionen 1 ).
Von Dr. E. Freifeld.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 10. Mai 1912.)
I.
Die Cholera nimmt unter anderen epidemischen Krank-
heiten, was die Genauigkeit und Allseitigkeit des Studiums
ihres Erregers anbelangt, eine der ersten Stellen ein.
Bei der praktischen Durchfiihrung der bakteriologischen Diagnose
dieser Erkrankung stoBt man jedoch nicht selten auf bedeutende Schwierig-
keiten. lndem wir die Frage iiber alle diejenigen Falle gar nicht beriihren,
wo es nicht gelingt, bei dem untriiglichen klinischen Bilde der Erkrankung
1) Vortrag, gehalten auf dem KongreB der Bakteriologen und Epi-
demiologen am 29. Marz 1912 in Moskau.
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Gck igle
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112
E. Freifeld,
den Vibrio zu isolieren. mbchten wir nur diejenigen absolut spezifischen
Merkmale erbrtern, mit Hilfe derer die Cholera mehr oder weniger genau
diagnostiziert werden kann.
Das vergleichende Stadium zahlreicher Vibrionenstamme ergab, dafl
diejenigen spezifischen Eigenschaften, welche nach Koch fur den Cholera*
vibrio charakteristisch sind, wie es sich erwiesen, schrofien Schwankungen
unterliegen und bei weitem nicht spezifisch sind, da eine ganze Reihe der*
artiger Merkmale nicht nur irgendeiner bestimmten Art, „sondern einer
ganzen Familie von Choleravibrionen eigen sind“.
Aus diesem Grande wurde das Studium der Morphologie,
des Wachstums auf verschiedenen Nfihrboden und einiger
biochemischen Reaktionen der Vibrionen durch die Anwendung
von biologischen Immunitatsreaktionen ergfinzt, unter denen
die Agglutinationsreaktion die erste Stelle einnehmen
muB, sowohl in bezug auf die Einfachheit ihrer technischen
Ausfuhrung, als auch ihrer Spezifitat nach.
Bis zur neuesten Zeit schien es positiv festgestellt zu sein,
daB nur diejenigen Arten als echte Choleravibrionen angesehen
werden mflssen, die mit dem Choleraimmunserum entweder
bis zu seinem Grenztiter agglutinieren oder jedenfalls nicht
niedriger als 1:1000; alle ttbrigen gelten alscholeraartige,
die mit dem Erreger der echten Cholera sehr wenig Gemein-
sames haben.
Dank den Angaben der letzteren Zeit (von Taranuchin,
Jirnoff, Zlatogoroff, Horowitz, Barrenscheenu. a.)
in bezug auf die Cholera, und ferner durch die Arbeiten (von
Hirschbruch, Slemmer, Sobernheim und Selig-
mann, Altmann und Rauth, Stromberg, Eisler und
Sou. a.) in betreff der Bakterien des Typhus abdominalis, der
Enteritis Gartneri und des Paratyphus B, ist die Spezifitat der
Agglutinationsreaktion als bedingt anerkannt worden, welche
sich in Abhangigkeit von einer ganzen Reihe von physi-
kalisch - chemischen, biologischen und anderen Bedingungen
der Entwicklung der Mikroorganismen mehr oder weniger
andern kann.
Theoretisch sttttzt sich eine derartige Behauptung darauf,
„daB die lebende bakterielle Zelle sich immerwahrend andert,
indem sie sich an die umgebenden Verhaltnisse anpaBt und
ihre saprophytische Lebensweise in parasitare oder umgekehrt
wechselt u .
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Ueber die Spezifitat der Agglutinationsreaktion etc.
113
„Das Transformation sgesetz, das fflr die ganze Tierwelt
allgemein ist, SuBert sich auch in vollem MaBe in der Welt
der unendlich kleinen Organismen, wobei es in relativ kurzen
Zeitraumen zur Beobachtung tritt u (Horowitz). Der Meinung
oben angeffihrter Autoren zufolge berfihrt diese Frage „die
Lehre fiber die Spezifitfit der pathogenen Wirkung der Arten
nicht, sondern bezieht sich nur auf die Differenzierung der
Typen ein und derselben Art und auf deren Eigenschaft, sich
in gewissen Grenzen unter dem EinfluB der sie umgebenden
Bedingungen zu Sndern. u
Gegenwartig haben sich ziemlich viele Fakta gehfiuft, die
diese Voraussetzung bestatigen, jedoch bezieht sich die Mehr-
zahl derselben nicht auf die Cholera, sondern auf andere
Bakterien.
So haben Kuhn und Woithe darauf hingewiesen, dafi das B. coli
communes und sogar der Staphylococcus, die aus dem Darmkanal ernes
Dysenteriekranken geziichtet worden sind, durch das Dysenterieserum
agglutiniert wurden.
Saquep£e, Bancel u. a. fanden, dafi die aus den Leichen und
dem Eiter der Kranken geziichteten Stabchen des Abdominaltyphue eine
abgeschwachte Agglutinationsfahigkeit besitzen, welche jedoch nach einer
ganzen Beihe von Ueberimpfungen auf Nahrboden im Laufe von 3—6—11
Monaten wieder zur Norm zuriickkehrt.
Es ist gelungen, die Agglutinationsfahigkeit der Ileotyphusbakterien
durch eine ganze Beihe von Einfliissen zu andern: durch Ziichtungen auf
Nahrboden mit Zusatz von Immunserum (Achard, Saquep6e, Ran¬
som und Kitashima 1 ), von antiseptischen Flussigkeiten (10-proz.
Losungen); Temperatursteigerung bis 42° (Nicolle und Trenel), Aus-
waschen mit Wasser (Hirschbruch und Malvoz) bleiben auch nicht
ohne Einflufl auf die Veranderungen der Agglutinationsfahigkeit.
Die ausfiihrhche Arbeit von Slemmer, welcher die Eigenschaften
von 9 Typhusstammen studierte (37 von Bacillentragern und 22 von
Kranken), zeigte, dafi verschiedene Kulturen verschiedenen Empfindlichkeits-
1) Die in dieser Bichtung vorgenommenen Versuche von Giulio
Crescenzi ergaben gar keine Abschwachung der Agglutination derTyphus-
bakterien; fuhrte jedoch der Autor einem frischen Tier eine auf dem Nahr¬
boden mit Zusatz von agglutinierendem Serum gezuchtete Kultur ein, so
erhielt er ein Serum von bedeutend niedrigerem Titer, und zwar in Abhangig-
keit davon, da6 ein Teil der bakteriellen Bezeptoren schon fhiher gebunden
und als solcher nicht imstande war, bei der Immunisation die Bildung von
entsprechenden Antikorpern hervorzurufen.
Zeitschr. f. ImmaniUtifonchuof. Grig. Bd. XIV. 8
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Gck igle
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114
E. Freifeld,
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grad dem Immunserum gegeniiber besitzen. Alle Veranderungen der
Agglutmationsfahigkeit der Typhusbakterien gehen nicht ruckweise, sondern
ganz allmahlich vor sich. Somit sehen wir, dafl dieses Faktum auch in
bezug auf den Typhus nicht von alien in gleichem Mafle abgesch&tzt wird.
Die Veranderlichkeit der Agglutination ist in bezug auf den Diplo-
bacillus Friedlanderi, das B. coli, Dysenterie u. a. verzeichnet worden.
Nach den Angaben von Schr3ter und Gutjar konnte wahrend
einer Dysenterieepidmie in einem Stadtchen in Thiiringen bewiesen
werden, dafl die Epidemie, die ihren Anfang im Jahre 1906 von einem
Bacillentrager nahm, der in sich Bacillen vom Typus Shiga-Kruse be-
herbergte, im Jahre 1910 zum Abschlufl kam, wobei es sich herausstellte,
dafl jetzt der Erreger nicht raehr das Shiga-Stabchen war, sondem ein
Stabchen vom Typus Y. Dieselbe Umwandlung konnte nach den Angaben
dieser Autoren auch auf kiinstlichen Nahrboden erzielt werden.
Diese Arbeit ist jedoch von niemandem nachgepriift worden; die Be-
hauptung der Autoren aber, dafl im Laufe von vier Epidemiejahren die
ganze Zeit als Erreger ein und dasselbe Stabchen funktionierte, ist selbst-
verstandlich nicht in vollem Mafle bewiesen.
Die in dieser Richtung am genauesten ausgefuhrten Arbeiten sind
diejenigen, welche sich auf die Frage iiber die Schwankungen der Agglu¬
tinationsfahigkeit der Bakterien vom Typus enteritidis Gartner und des
Paratyphus B, als den wichtigsten Erreger der Fleischvergiftung, be-
ziehen.
Bleiben wir bei den hochst interessanten Untersuchungen von
Sobernheim und Seligmann stehen. Die Untersuchung obenerwahnter
Bakteriengruppen ergab, dafl sie sich sowohl morphologisch als auch ihrem
Wachstum auf den Nahrboden nach in nichts voneinander unterschieden.
Als einziges differential-diagnostisches Merkmal erscheint der Unterschied
in der Agglutination mit spezifischen Seris. Die obenerwahnten Autoren
unterzogen dem Studium ungefahr 100 Stamme dieser Bakterien, indem
sie gegen 60 agglutinierende Sera mit denselben herstellten und kamen
dabei zu folgendem Schlufl: die Agglutinationsreaktion ist bei weitem kein
konstantes Merkmal; sie unterliegt Schwankungen sowohl in Abhangigkeit
von den Veranderungen der Kulturen selbst als auch von denen der spezi¬
fischen Sera. Sobernheim und Seligmann ist es gelungen, eine be-
sondere Abart von Paratypus B zu isolieren, die sie als Typus Aertryck
benannten und welche sich im Laufe der Zeit in den typischen B. enteritidis
Gartner umwandelte, da dieselbe ausschliefllich nur von dem Serum
Gartner agglutiniert wurde. Als jedoch mit dieser selben Kultur des
Typus Aertryck ein Kaninchen immunisiert wurde, so erhielt man ein
Serum, das ausschiiefllich Bakterien desParatyphusBagglu-
tinierte. Aus dieser hochinteressanten Beobachtung ziehen die Autoren
den Schlufl, dafl die Ziichtung der Bakterien auf kiinstlichen Nahrboden
im Laufe der Zeit zum Verluste eines gewissen Teiles der Rezeptoren fiihre,
wahrend der andere Teil derselben unverandert bleibt; dafl „die agglutinin-
bildende und agglutininbindende Fiihigkeit einer Kultur nicht parallel
Gck igle
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Ueber die Spezifitat der Agglutinationsreaktion etc.
115
gehen“. Kontrollversuche der Spezifitat der Agglutinationsreaktion mit
Hilfe der Methode der Komplemen tbindung ergaben bei diesen Autoren
dieselben Resultate; aus diesem Grunde sprechen sie in einer ihrer weiteren
Arbeiten die Behauptung aus, dafl „weder die Agglutination noch die Me¬
thode der Komplementbindung ein sicheres Mittel fiir die Differential-
diagnose des betreffenden Bakterientypus sind“.
Zu ihren weiteren Untersuchungen wahrend der Berliner Epidemie
von Fleischvergiftung konnten sie noch zwei Kulturen isolieren, Rum-
fleth und Haustedt, die sich im Anfang als typische Vertreter des B.
enteritidis Gartner prasentierten, weiterhin aber die Fahigkeit, durch das
Gartnersche Serum agglutiniert zu werden, vollkommen einbiiflten.
Indem sie die genannten Kulturen in Tochterkolonien zerlegten, ge-
lang es ihnen, verschiedene Uebergangsphasen in der Veranderung der
Agglutinationsreaktion festzustellen, wobei in einigen Fallen die verloren-
gegangene Agglutination wieder hergestellt werden konnte (Haustedt).
Die Moglichkeit eines Fehlers wurde durch die Anwendung der Methode
von Burri beseitigt, wo jede einzelne Kolonie einem einzelnen Bak-
terium entspricht, und auflerdem noch dadurch, dafl sie analoge Resultate
mit zwei verschiedenen Stammen erhielten.
Der Meinung dieser Autoren zufolge „kdnnte es sich hier um einen
ganz gesetzmafligen Evolutionsprozefl handeln, der zur Umwandlung der
biologisch wichtigen Eigenschaften irgendeines Bakteriums in das andere
fiihrt“.
Sehr wichtig erscheint aber ihre Bemerkung, dafl es gelingt,
diesen Prozefl ausschliefilich nur beim Studium alter Laboratoriums-
kulturen zu verfolgen, dafl aber in frisch isolierten Stammen die
Agglutination streng spezifisch ist.
Die mit der groflten Sorgfalt angestcllten Untersuchungen von
Sobernheim und Seligmann sprechen augenscheinlich fiir die Mdg-
lichkeit einer solchen Transformation der Bakterien; es mufl jedoch erwahnt
werden, dafl nach diesen Arbeiten nicht weniger genaue und sorgsam aus-
gefiihrte Untersuchungen von Strom berg erschienen, der mit denselben
Stammen Aertryck, Rumfleth 5 und Haustedt 5 arbeitete, deren sich
Sobernheim und Seligmann bedienten, und welcher nach Ueber-
impfungen derselben im Laufe von 7 Monaten zum Schlufl kam, dafl von
einem Uebergange einer Bakterien art in die andere keine Rede sein kann;
„ebenfalls kbnnte man von starkeren oder schwacheren Graden der De¬
generation, die schon langst in bezug auf alte Laboratoriumskulturen fest-
gestellt sind, leden, dafl namlich die zur Beobachtung tretende Mutation
die Grenzen der Gruppenagglutination nicht iiberschreitet“.
Somit spricht diese kurze Uebersicht der Frage beziiglich
anderer Bakterien dafflr, dafl dieselbe noch ungenflgend aufge-
klirt ist und noch viele Meinungsverschiedenheiten flber die
Spezifitat der Agglutinationsreaktion herrschen.
8 *
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116
E. Freifeld,
Was die Cholera anbelangt, so haben wir auch hier nicht
weniger zahlreiche Angaben darflber, daB die Cboleravibrionen
nicht nur auBerhalb des menschlichen Organismus (im Wasser),
sondern auch in demselben verschiedenen Ver&nderungen unter-
liegen, die sich nicht nur auf ihre Morphologic, sondern auch
auf ihre biologische FShigkeit, sich agglutinieren zu lassen,
beziehen.
Aus diesem Grunde gibt es neben Vibrionen, die sich
stark und schwach agglutinieren lassen, auch solche, die sich
gar nicht agglutinieren lassen, und trotzdem darf man nicht,
der Meinung einiger Autoren zufolge, dieselben zu den
choleraartigen rechnen, da mit Hilfe einer ganzen Reihe von
Manipulationen die verlorene F&higkeit wiederhergestellt
werden kann.
„Diese Ver&nderlichkeit der Choleravibrionen kennend“,
sagt Zlatogoroff, „mflssen wir bei der bakteriologischen
Diagnose der Cholera vorsichtig sein (?) und werden sie
h&ufiger dort finden, wo sie bei Fehlen der Agglutination
nicht vorhanden war.“ Wenn somit die strenge Spezifitat
der Agglutination bei der bakteriologischen Diagnose der
Cholera in Abrede gestellt wird, so muB ein jeder Vibrio,
der wahrend einer Choleraepidemie geziichtet worden ist, als
ein, wenn nicht echter, so doch choleraverdachtiger Vibrio
betrachtet werden, was selbstverstandlich die schon an und
fiir sich nicht leichte Diagnose der Cholera in bedeutendem
MaBe erschweren wird.
Wenn wir weiter die von den Autoren aufgestellten
Thesen akzeptieren, so mflssen wir auBerdem jede Trink-
wasserquelle, in der irgendein Vibrio gefunden wird, welcher
sich sogar gar nicht agglutinieren lafit, als eine Infektions-
quelle ansehen, da ja im Laufe der Zeit ein derartiger Sa-
prophyt zum Parasit werden und Agglutination geben kfmnte.
In der vorliegenden Arbeit beschaftigten wir uns mit
der Aufkiarung der Frage, ob die spezifische Agglutination
der Choleravibrionen auch wirklich so veranderlich ist und
ob es auf dem Wege der Laboratoriums-Untersuchungen
moglich ist, einerseits die schon vorhandene Agglutination
abzuschwSchen, andererseits die verloren gegangene wieder-
herzustellen.
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Ueber die Spezifitiit der Agglutinationsreaktion etc.
117
Im Laufe fast eines ganzen Jahres, d. h. vod April 1911
bis M&rz 1912, warden von mir 14 Kulturen von Vibrionen
antersucht: 2 Stfimme echter Choleravibrionen, die von
Kranken aus dem Moskaner Gonvernement (No. 2 stain mt
aus Kolomna 1911) gezflchtet worden sind und Agglutination
bis znm Grenztiter gaben; ferner 10 Stfimme choleraartiger
Vibrionen, die sich sogar bei Verdfinnung 1:100 nicht agglu-
tinieren lieBen; von diesen warden 6 aus dem Wasser, 2
von Rekonvaleszenten und 2 von Bacillentr&gern gezflchtet;
aufierdem standen mir zur Verfflgung Laboratoriumsstfimme
von V. Metschnikowi und Finkler-Prior.
Zu dem Material, welches mir zur Verfflgung stand,
kann ich noch die Beobachtungen von Dr. Federowitsch
hinzufflgen, welche 25 Kulturen von choleraartigen Vibrionen
betrafen, die aus dem Leitungswasser in Rostow am Don
wflhrend der Epidemie des Jahres 1910 gezflchtet wurden;
ich spreche auch an dieser Stelle dem verehrten Kollegen
meinen innigsten Dank aus.
Von 300 Wasseruntersuchungen, die von der oben-
erwahnten Antorin gemacht wurden, sind in 166 Fallen
Vibrionen gezflchtet worden, welche sich entweder gar nicht
oder nur sehr schwach, nicht mehr wie 1:200, agglutinieren
lieBen.
Einem ausfflhrlichen Studium wurden 25 Kulturen unter-
zogen; 16 derselben unterschieden sich nach alien ihren
Merkmalen mit Ausnahme der Agglutinationsreaktion absolut
in nichts von den echten Choleravibrionen, die flbrigen er-
innerten mehr an cholera&hnliche Vibrionen.
Aus der vorliegenden Tabelle ist dieses alles deutlicher
und genauer zu ersehen.
Samtliche oben aufgezflhlte Kulturen wurden nicht nur
in bezug auf ihre Morphologie und ihr Wachstum auf ver-
schiedenen Nflhrboden untersucht (auf schwach alkalischem
Agar, auf Gelatine, auf den Nflhrboden von Dieudonn6,
auf Agar mit Galle und Blut u. a.), sondern es wurde auch
der Grad ihrer Virulenz, die Fahigkeit der Indolbildung
(Cholerarot), die hamolytische Fahigkeit usw. studiert; die
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118
E. Freifeld,
Zeit der
Zuchtungder
Vibrionen
Herkunft
der Vibrionen
AeuBeres
Aussehen an
gefarbten
Praparaten
Beweg-
lichkcit
Zahl
der
GeiSeln
Cholerarot
Fiirbung
1
1910
Aug.
Moskau: Exkremente
vom Kranken
Normale Grolle,
stark gekriimmt
energische
1
0
+
2
1911
Aug.
Kolomna: Entleerung.
eines Kranken
dgl.
jy
1
+
+
3
1910
Moskau: Exkremente
eines Rekonvaleszent.
Weniggekriimmt
yy
1
+
+
4
1909
Ekaterinoslav: Ent-
leerungen eines Re-
konvaleszenten
Typisch
schwach
1
0
+
5
1910
Moskau: Entleerungen
eines Bacillentragers
Lang, wenig ge-
krtimmt
yy
2
0
+
6
1911
dgl.
Moskauer Gouvern.:
Brunnen wasser
Typisch
beweglich
1
+
4-
7
1910
Dick, lang, wenig
gekriimmt
schwach
Biindel
—
sehr
schwach
8
1908
Ekaterinoslav: Wasser
des Dneprs
Typisch
2
—
+
9
1911
Ekaterinoslav: Lei-
tungs wasser
Moskau: Wasser eines
Teiches
beweglich
1
+
+
10
1910
Lang, diinn,
weniggekriimmt
Typiscn
schwach
Biindel
—
+
11
1910
Moskau: Brunnen¬
wasser
beweglich
yy
+
+
12
1909
Ekaterinoslav: Wasser
aus einem Schacht
Dunn, lang,
weniggekriimmt
schwach
2
0
+
13
—
Metschnikoff
Typiscn
yy
2
—
+
14
—
Finkler-Prior
jy
yy
2
—
+
15
1910
Wasser der Leitung
in Rostow am Don,
10 Kulturen
yy
i
1
+
16
1910
dgl. 9 Kulturen
i
- yy
Biindel
—
—
grftBte Aufmerksamkeit jedoch wurde auf ihre Agglutinations-
f&higkeit gerichtet, wobei die erhaltenen Resultate der Agglu¬
tination durch die Kreuzagglutination (2mal) und durch die
Reaktion der Komplementbindung (4mal) kontrolliert wurden.
Das Pfeiffersche PhSnomen konnte nicht angewandt werden,
da die Kulturen zu schwach virulent waren. Diejenigen
Autoren, welche die Spezifitat der Agglutination in Abrede
stellen, behaupten, daB Schwankungen derselben sowohl in
der Richtung der Abschw&chung, als auch bei gewissen Um-
stfinden in der Richtung ihrer VerstSrkung vorkommen kdnnen.
In erster Linie ist von uns eine ganze Reihe von Ver-
suchen angestellt worden, mit deren Hilfe wir uns bemiiht
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Ueber die Spezifitat der Agglutinationsreaktion etc.
119
Wachstum auf Nahrboden
Hamo-
Kreuz-
Kom-
plement-
oindung
lytische
Agglu¬
tination
agglu-
tina-
tion
Virulenz
Agar
Gelatine
Dieu-
donn6
Fiihig-
keit
Tvpisehes
W achs-
Verfliissigt
am 2.—3.Tage
Tvpisehes
\V r achs-
+
1:8000
—
—
1 Oese
turn
turn
dgl.
dgl.
dgi.
+
1:10000
—
+
7» Oese
99
0
jj
_
0
—
0
l l ? Agarkultur
Gelbliche
Verfliissigt
yi
0
0
_
_
dgl.
Kolonien
am 3. Tage
Typisch
dgi.
V
+
0
0
0
Ganze Agar¬
kultur
l / 2 Kultur
+
0
_
_
99
0
0
0
—
—
Ganze Kultur
n
—
Typisches
\\ r achst.
0
0
—
—
—
99
Verfliissigt
+
+
1:200
0
0
GanzeKultur
w
am 2. Tage
0
_
_
0
__
_
_
If
+
+
0
0
—
—
Zartes
Wachst.
—
+
0
0
—
dgl.
—
+
0
0
0
—
99
—
+
0
0
0
—
99
—
—
—
1 :200
0
0
—
99
_
—
_
1:200
0
0
haben, die Agglutination zweier unserer StSmme (No. 1 und
2) von echten Choleravibrionen abzuschw&chen, zu welchem
Zweck sie der mechanischen Wirkung des Auswaschens unter-
zogen wurden, „dem Auswaschen der Rezeptoren u , ferner
einem langedauernden Aufenthalt in der physiologischen Koch-
salzlosung, angefertigt aus dem Leitungswasser, sowohl ein-
fachem, als auch sterilisiertem, und kein einziges Mai
konnten wir eine deutliche Herabsetzung des
Agglutinationstiterskonstatieren.
Bei der Ausfiihrung dieser Versuche hielten wir uns an
die Metbode von Barrenscheen, d. h. wir wuschen die
24-stflndige Agarkultur mit 15 ccm Wasser aus und liefien
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120
E. Freifeld,
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die Emulsion bei Zimmertemperatur im Laufe von 8 Tagen
stehen. Nacb Verlauf dieser Zeit wnrde sie zentrifugiert,
mehrere Male mit Wasser ausgewaschen und wieder auf
Agar ausges&t. Darauf wurde sie von neuem ausgewaschen
und so 5mal nacheinander. Nach diesem 40-tfigigen Waschen
konnten wir nur eine relative Verringerung des Wachstums
der Vibrionen beobachten, die Agglutination aber blieb ganz
unverfindert.
Aus der Zahl der wenigen Autoren, denen dieser Ver-
such gelungen war, miissen Zlatogoroff, Barrenscheen,
Taranuchin und teilweise auch Jim off genannt werden.
Besonders starke Herabsetzung der Agglutination beobachtete
Barrenscheen, welcher schon nach der zweiten Ueber-
impfung eine Agglutination von 1:300—500 anstatt 1:40000
erhielt. W&hrenddessen konnte Jirnoff nach Verlauf von
sogar 37 Tagen die Herabsetzung des Titers von 10000 nur
auf 7000 in Leitungswasser, in der physiologischen Koch-
salzlosung nicht einmal diese Abschw&chung konstatieren.
Bedeutend grbBer ist die Zahl derjenigen Arbeiten, in
welchen die Kontrolle dieses Versuches vollkommen negative
Resultate ergab: Horowitz konnte sogar keine Ver&nde-
rungen nach Verlauf von 11 Monaten notieren, Haendel
und Woithe, die Ueberimpfungen alle 8 Tage vornahmen,
haben gar keine Herabsetzung der Agglutination sogar nach
161 Tagen beobachten kbnnen; zu denselben Resultaten
kamen Wank el und KSlisch, obgleich letzterer eine ge-
wisse Verlangsamung im Agglutinationsphanomen verzeichnen
konnte.
Was aber die Wiederherstellung der geschwundenen
Agglutination mittels erneuter Ueberimpfungen anbelangt, so
ist dieselbe, mit Ausnahme von Zlatogoroff, von keinem
erzielt worden.
Die Ziichtung von 15 Kolonien unserer Kulturen auf
Agar mit Zusatz von Immunserum, sowohl des konzen trier ten,
als auch verfliissigten von 1:10000—1:100 in Menge von
10 Proz., sowie auch auf einem Gemisch von Pferdeserum
mit Immunserum, ergab ebenfalls kein einziges Mai eine
Herabsetzung des Agglutinationstiters.
Gck igle
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Ueber die Spezifitat der Agglutinationsreaktion etc.
121
Der Versuch, ein Pr&zipitat roit dem Waschwasser der
bakteriellen Emulsionen nach Zusatz von spezifischem Serum
zu erbalten, blieb ebenf&lls resultatlos, aus welchem Grunde
der Uebergang des Agglutinogens in gelosten Zustand nicht
vermerkt werden konnte.
Analoge Resultate erbielten Horowitz, Kfllisch,
Wankel u. a., wShrend es Zlatogoroff gelungen war,
schon in der 18. Generation den Titer bis 1:100 herab-
zusetzen, welcher jedoch nach der 10.—12. Ueberimpfung
wieder zur Norm zurflckkehrte.
Aus dem Obenerwahnten miissen wir den SchluB ziehen,
daB der eine Teil der Laboratoriumsversuche — die Herab-
setzung des Agglutinationstiters — verschiedene Resultate,
unseren Beobachtungen aber nach vollkommen negative
ergeben hatte; aus diesem Grunde muB die Behauptung, „daB
der Aufenthalt der Vibrionen im Wasser zur Abschwachung
ihrer Agglutinationsfahigkeit fiihre“, und daB unter natttr-
lichen Verhaltnissen gerade solche Verknderungen vor-
kommen, welche auch in den Bedingungen des Experimentes
konstant werden konnen, zum mindesten als verfriiht be-
trachtet werden.
III.
Wenn aber die oben angefilhrte Versuchsreihe mehr
tbeoretisches Interesse hat, so erhalten eine praktische
Bedeutung die Angaben dariiber, daB man mittels gewisser
Methoden den choleraartigen, sich nicht agglutinierenden Vibrio
in einen Choleravibrio umwandeln kann, daB „das Fehlen der
Agglutinationsfahigkeit bei dem gezflchteten Vibrio durchaus
nicht gegen dessen Choleranatur spricht“.
Um diese Angaben zu kontrollieren, machten wir den
Versuch, mit den uns zur Verftlgung stehenden Kulturen eine
Reihe von Experimenten anzustellen, wobei wir fast alle bisher
verSffentlichten Methoden einer Verst&rkung der Agglutination
anwandten, in einigen Fallen aber unsere eigenen Erganzungen
hinzufiigten.
So machten wir vom 15. April des verflossenen Jahres
bis zum 15. Juni Ueberimpfungen aller unserer choleraartigen
Kulturen alle 2 Tage auf schwach-alkalischen Agar, im ganzen
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122
E. Freifeld,
20mal; gleichzeitig damit tiberimpften wir lmal in der Woche
auf geronnenes Blutserum, im ganzen 8mal, wobei No. 3, 4,
5, 6 und 7 kombiniert ausgesat wurden, sowohl auf Agar als
auch auf Serum. Somit hatte ich gegen Ende des zweiten
Monats Rassen von 32 St£mmen, und keine einzige von ihnen
gab einigermafien deutliche Agglutination, sogar bei Ver-
dflnnung 1:100.
Angefangen vom 15. Juni bis zum 1. September wurden
alle Ueberimpfungen lmal in der Woche ausgeftlhrt, im ganzen
12mal; im Laufe der flbrigen Zeit lmal im Monat, im ganzen
6mal. Somit gehdrten einige St&mme der 50. Generation an;
die Resultate jedoch blieben dieselben l ).
Nach den Angaben von Dr. Fedorowitsch konnten
Ueberimpfungen ihrer 25 Kulturen von isolierten Vibrionen
im Laufe von 5—7 Monaten die Agglutinationsfihigkeit der-
selben absolut nicht steigern.
Im Laufe dieser ganzen Zeit flberimpfte ich meine Kulturen
auf den Nfthrboden von Dieudonn4 (20mal), auf Agar mit
Blut und Galle 8 ), auf flflssiges Pferde- und Menschenserum;
aufierdem wurden die Kulturen dem Gefrieren mit darauf
folgendem raschen Auftauen ausgesetzt (15 Minuten lang im
Wasserbade bei 55°); die Agglutination blieb jedoch die
ganze Zeit unverfindert.
Die von mir erhaltenen Resultate stehen in vollem Wider-
spruch mit den Befunden anderer Autoren; so z. B. erhielt
Jirnoff bei seinen Ueberimpfungen von Agar auf Agar
choleraartiger Vibrionen, die von ihm 1907 in Zarizin und
Astrachan isoliert worden waren, nach Verlauf von 5 Monaten
eine Agglutination 1:8000—10000, anstatt der anf&nglichen
1:200. Noch besser erwies sich die Methode der Ueber¬
impfungen auf geronnenes Blutserum; nach Verlauf von
1) Unser agglutinierendes Serum stammte aus dem Fort Alexander I.,
sein Titer betrug 1:10000. Die Agglutination wurde von uns sowohl
makro- als auch mikroskopisch ausgefiihrt, wobei die Resultate nach
2 Stunden notiert, zum zweiten Male nach Verlauf von 24 Stunden kon-
trolliert wurden.
2) Galle habe ich deshalb gewiihlt, weil nach den Angaben von Dr.
Kulescha der Choleravibrio mit besonderer Vorliebe sich in der Gallen-
blase bei Bacillentragern entwickelt und ziemlich lange seine Virulenz bei-
behiilt.
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Ueber die Spezifitat der Agglutinationsreaktion etc. 123
24 Tagen nach den Ueberimpfungen, mit Intervallen von
8 Tagen, stieg die Agglutination bis 1:10000, w&hrend gleich-
zeitig die Ueberimpfungen auf Agar nur 1:5500 ergaben.
Besonders effektvoll erwies sich, diesem Autor nach, die
Radiumemanation, wobei nach Verlauf von 9 Tagen der
Agglutination stiter bis 1:40000 gestiegen war 1 ).
Zlatogoroff konnte an den von ihm in Zarizin und
Saratoff gezfichteten Vibrionen in der 54. Generation Steige-
rung der Agglutination bis 1:20000 beobachten; zu denselben
Resultaten kam er auch auf Grund seiner in Petersburg an-
gestellten Untersuchungen, wo er von 55 Kulturen, die sich
schwach agglutinieren lieBen, 45 in echte Cholerakulturen
umwandeln konnte 2 ).
Resultate, die den unseren vollkommen analog sind, er-
hielten auch andere Autoren; so kamen Ha end el und
Woithe, die eine ganze Reihe von St&mmen, sowohl frischer
als auch alter Laboratoriumvibrionen untersucht hatten, zu
dem SchluB, daB sich die Morphologic bei frischen Kulturen
viel starker andere, wahrend alte Kulturen den Schwan-
kungen in der Agglutination mehr ausgesetzt sind, wobei
diese Schwankungen sich nur im langsameren Verlauf der
Reaktion aufiern. Trotz der Meinung von Zlatogoroff u. a.
ist die Organisation des Rezeptorenapparates bei Cholera-
vibrionen bedeutend resistenter als bei den tlbrigen Bakterien,
so z. B. bei denen des Abdominaltyphus, Paratyphus B usw.;
aus diesem Grunde ist wohl die Meinung von Horowitz
nicht ganz begrflndet, daB namlich die rasche Wiederherstellung
der Agglutination von der Wirkung der vor sehr kurzer Zeit
eingetretenen und geringen Veranderungen im Rezeptoren-
apparate der Vibrionen abhangt.
Dr. Margulies untersuchte 29 Choleravibriokulturen,
die keine Agglutination, sogar 1:100, gaben und konnte nach
43 Ueberimpfungen auf das Blutserum gar keine Verstarkung
der Agglutination konstatieren. Ebenso gelang es auch
1) Trotzdem gelang ihm eine derartige Umwandlung der aus dem
Wasser gezuchteten Vibrionen nicht.
2) Unter 2540 Untersuchungen sind von ihm im ganzen 82 in dieser
Beziehung „verdiichtiger“ Kulturen geziichtet, dem Studium aber 55
unterzogen worden.
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124
E. Freifeld,
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Kblisch nicht, welcher 21 von Kranken und Vibrionentrfigern
gezflchtete Kulturen untersuchte, dieselben zu verst&rken, ob-
wohl er s&mtliche vorgeschlagenen Methoden anwandte, wes-
halb er auch zu dem Schlusse kam, daB man bislang sich
noch auf die gewdhnliche Methode der Choleradiagnose stfltzen
kann, sogar in den F&llen, wo es auf die Diagnose von aus
dem Wasser gezflchteten Vibrionen ankommt.
Aus der unl&ngst erschienenen Arbeit von Wankel aus
dem Laboratorium von Gaffky ist zu ersehen, daB die Kon-
trolle aller Verfahren der Verst&rkung der Agglutination,
welche von Zlatogoroff und Horowitz vorgeschlagen
worden sind, vollkommen negatives Resultat ergab. Er arbeitete
im Laufe von 8 Monaten mit Kulturen, die aus Petersburg
stammten, und kontrollierte dieselben mit dem Serum von
Schurupoff; es gelang ihm kein einziges Mai, irgendeinen
der choleraartigen Petersburger St&mme in einen echten Cholera-
stamm umzuwandeln, sowie auch umgekehrt, obwohl er sich
streng an die vorgeschriebenen Forderungen der Technik hielt.
Im hbchsten Grade interessant erscheintin der Wankel-
schen Arbeit noch der Umstand, daB das rein morphologische
Studium der quasi Cholerakulturen, die er aus Petersburg
erhalten, zeigte, daB dieselben mit echten Choleravibrionen
nichts zu tun haben.
So hatten sie alle nicht mehr als 3—4 GeiBeln, keine
von ihnen verfltissigte die Gelatine, keine derselben gab die
Indolreaktion, keine einzige agglutinierte sogar in Verdilnnung
von 1:100. Dieselben Stamme No. 2 und No. 7, bei denen
eine Agglutination von 1:500, 1:800 zutage trat, gaben eine
ebensolche auch mit dem normalen Pferdeserum.
Aus diesem Grunde werden auch die SchluBfolgerungen
verstandlich, zu denen der Autor in seinen weiteren Unter-
suchungen kam, d. h. er zog den SchluB, daB er es mit cholera¬
artigen Vibrionen zu tun hatte, welche auch als solche, trotz
aller angewandten Manipulationen, blieben.
Somit kamen wir auf Grund unserer eigenen Beobach-
tungen, im Zusammenhang mit den aus der Literatur be-
kannten Tatsachen, zu dem SchluB, daB die Methode „der
Mutation von choleraartigen in echte Choleravibrionen" nicht
als absolut festgestellt gelten kann, und, was die Hauptsache
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Ueber die Spezifitat der Agglutinationsreaktion etc.
125
ist, daB die mit ihrer Hilfe erzielten positiven Resultate anf
irgeodeine andere Weise erklBrt werdeu mflssen, daB es ferner
sich hier nicht um das Verlorengehen des Rezeptorenapparates
and nicht am dessen Verstarkung handele; deshalb ist es
wohl kaum anzunehmen, daB „verschiedene Individuen ein
und derselben Rasse in AbMngigkeit von verschiedenen Lebens-
bedingungen eine Generation mit scharf charakterisierten
Grnndzflgen geben k6nnen“.
Indem wir im weiteren auf unsere Kulturen biologische
Faktoren einwirken lieBen, ztichteten wir sie (No. 7) zusammen
mit der Sarcina lutea im Laufe eines ganzen Monats bei 22
bis 25°, wobei weder von seiten der Morphologie, noch der
Agglutination irgendwelche Veranderungen auftraten; W a n k e 1
erhielt analoge Resultate; Zlatogoroff und besonders
Horowitz erhielten frtiher noch bei einer derartigen Syra-
biose starke Steigerung der Agglutination 1 ).
Ferner unterzogen wir unsere Kulturen No. 3, 4, 5, 6, 7
und 9 einer Passage durch Meerschweinchen, indem wir ihnen
in die Bauchhdhle % bis zu einer ganzen Agarkultur injizierten,
wobei, falls das Tier nach Verlauf von 48 Stunden nicht ein-
ging, mittels Pasteurscher Pipette das Bauchexsudat ent-
nommen und auf Agar gesat wurde; wir mfissen bemerken,
daB wir alle diese Passagen mit Kulturen ausfflhrten, die schon
mehrmals verschiedene Nahrmedien passiert hatten, und nur
in zwei Fallen (No. 3 und No. 5) erzielten wir kaum bemerk-
bare Spuren einer Verstarkung der Agglutination (Verdflnnung
1 :500) nach der dritten Passage.
Das kombinierte Verfahren gleichzeitiger Ueberimpfungen
mit der Tierpassage ergab ebenfalls eine Steigerung des
Agglutinationstiters.
Aufier den vorgeschlagenen Methoden versuchte ich die
Vibrionen zu zflchten, indem ich in die Bauchhdhle der Meer¬
schweinchen Kollodiumsackchen einnahte, welche Bouillon-
kultur der Vibrionen enthielten; jedoch verstarkte sich dabei
weder ihre Virulenz noch ihre Agglutinationsfahigkeit.
1) Horowitz halt die Sarcina lutea fur ein sehr energisches kata-
lysierendes A gen 8, welches Sauerstoff in UeberechuB produziert, wodurch
die Eigrenschaften des Nahrbodens derart veriindert werden, daB er fiir die
Restitution der verlorenen Eigenschaften der Vibrionen wieder fiihig wird.
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126
E. Freifeld,
Im ganzen g&ben zwei von tmseren Kulturen (No. 3 und
No. 7) eine 124. Generation, und bei No. 3 erhielten wir eine
schwache Agglutination (1:500) nach der Tierpassage. In
alien tibrigen Fallen gelang es nicht, irgendeine Steigernng
der Agglutination zu gewinnen, aus welchem Grande wir zu
dem Schlufi kamen, dafi in bezng auf die Kulturen, die uns
zur Verfflgung s tanden, die Agglutinationsreaktion vollkommen
spezifisch erscheint, und dad es uns nicht gelungen war,
irgendwelche Schwankungen derselben im Experiment nach-
weisen zu kdnnen.
IV.
Die Agglutinationsreaktion priiften wir mit Hilfe anderer
empfindlicheren biologischen Metboden, und zwar mittels der
Kreuzagglutination und der Komplementbindung.
Die Kreuzagglutination wurde mit Kulturen No. 5 und
No. 9 ausgeftthrt, zu welchem Zweck wir 2 Kaninchen 1 ) mit
den genannten St&mmen immunisierten und mit dem erhaltenen
Serum Choleravibrionen No. 1 und No. 2 agglutinierten; in
den Vibrionen jedoch, die sich nicht agglutinieren liefien,
konnten wir gar keine agglutinogene Fahigkeit nachweisen.
Die in dieser Richtung von Dr. Fedorowitsch ange-
stellten Versuche mit ihren Kulturen ergaben ebenfalls keine
Anhaltspunkte fiir deren Choleranatur. Positive Resultate
erhielten Horowitz, Kantzel und Zlatogoroff.
In 4 Fallen fiihrten wir die Reaktion der Komplement¬
bindung mit Kulturen No. 2, 3, 5 und 9 aus. Als Antigen
diente uns eine bakterielle Emulsion von bei 60° im Laufe
einer Stunde abgetoteten und 24 Stunden lang im Schiittel-
apparat geschiittelten Choleravibrionen in Dosis von 0,1. Als
Antikdrper benutzten wir teils agglutinierendes Serum, teils
das Heilserum von Schurupoff in Menge von 0,05; das
Komplement wurde vom Meerschweinchen genommen in Ver-
diinnung von 1:15. Alles dieses wurde auf 1 Stunde in den
Brutschrank gestellt, worauf das hamolytische System hinzu-
1) Zur Immunisation benutzen wir lebende Vibrionen, welche in die
Ohrvene in Menge von */« bis zur ganzen Agarkultur in Zeitraumen von
3—5 Tagen injiziert wurden. Der Titer erreichte nach der 5. Injektion
3000 - 5000 .
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Ueber die Bpezifitat der Agglutinationsreaktion etc. 127
geftigt wurde; in sfimtlichen Fallen erhielten wir eine voile
' H&molyse, mit Ausnahme der Kontrolle mit dem Antigen
echter Choleravibrionen, wo sie vollstfindig ausblieb.
Somit haben auch alle Eontrollreaktionen neben der
Agglutinationsprobe die choleraartige Natur der von uns
nntersuchten Kultnren bestatigt; aufierdem konnten mit Hilfe
dieser Methoden irgendwelche Veranderungen im Sinne ihres
Choleraursprungs nicht nachgewiesen werden.
Epidemiologist wird dieser genetische Zusammenhang
zwischen den Cholera- nnd choleraartigen Vibrionen augen-
scheinlich anf Grand der zusammenfassenden Uebersicht der
bakteriologischen Untersuchungen festgestellt, die in Peters¬
burg unternommen worden sind, wo vom September 1908 bis
zum Mai 1910 9457 Untersuchungen von Wasserproben ge-
macbt wurden, wobei 1062 agglutinierende Vibrionen und 1432
nicht agglutinierende geztichtet werden konnten. Die Autoren
erhielten dabei den Eindruck, „als ob mit der Verringerung
der Zahl der Choleraerkrankungen die Menge der nicht aggluti-
nierenden Vibrionen im Wasser auf Kosten der agglutinierenden
anwachst und nmgekehrt u .
Der Umstand ferner, dafi es gelingt, bei ein und dem-
selben Kranken, jedoch in verschiedenen Krankheitsperioden,
einmal den einen, einmal den anderen Typus von Vibrionen
zu zflchten, kdnnte augenscheinlich dafflr sprechen, dafi wir
es hier mit einem gewissen Mutationsgesetz derselben in
Analogie mit anderen Mikroorganismen zu tun haben, dafi
das nattlrliche Ende von Choleraepidemien durch die De¬
generation der Vibrionen und andererseits alle neuen Cholera-
ausbrfiche durch die Wiedergewinnung der verlorenen Eigen-
schaften unter besonders giinstigen Bedingungen erklfirt werden
konnen.
Wie verlockend eine derartige Erkiarung auch ist, so
haben wir doch zu wenig wohlbegrflndete Anhaltspunkte, sie
zu akzeptieren. Wenn wir auch zugeben, dafi es gelingt, auf
Laboratoriumswege die verlorene Agglutination wieder herzu-
stellen, so ist damit die Wiederherstellung der PathogenitSt
des betreffenden Vibrio noch lange nicht bewiesen; indessen
gibt es in bezug auf die choleraartigen Vibrionen eine ganze
Reihe von Beobachtungen, welche ergeben, dafi die maximale
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128
E. Freifeld,
PathogenitSt derselben sich hOchstens io einer akuten Gastro¬
enteritis auflert.
Als einziges in der Literatur bekanntes Beispiel einer
Epidemie, die durch den choleraartigen Vibrio hervorgerufen
worden war, kann die Cholera in Lissabon im Jahre 1894
dienen, wfthrend welcher von 15000 Kranken nur einer ge-
storben war und alle gezflchteten Vibrionen keine Agglutination
gaben.
Verschiedene serologischeBlutuntersuchungen von Kranken
(angestellt von Dr. Kandiba), in deren Exkrementen ein
choleraartiger Vibrio gefunden wurde, ergaben in denselben
vollkommenes Fehlen irgendwelcher spezifischer Antikdrper
in bezug auf den betreffenden Mikroorganismus, woraus der
SchluB berechtigt erscheint, dafi nicht dieser Vibrio fiir den
Organismus pathogen war. Eher schon kann hier die Rede
von irgendeiner Symbiose der einen und der anderen Vibrionen
sein, was auch von Dr. Margulies bewiesen worden ist;
diese Autorin trank unter anderem eine ganze Kultur eines
solchen choleraartigen Vibrio aus und erkrankte nur an leichter
Uebelkeit und Verstarkung der Peristaltik.
Es ist hervorzuheben, dafi beiZlatogoroff selbst ungefahr
20 Proz. der Vibrionen in solche, die sich agglutinieren lassen,
nicht umgewandelt werden konnten (10 von 55), nach den
Angaben von Horowitz aber solche verdachtige Vibrionen,
die von Kranken geztichtet worden, nicht mehr als 4 Proz.
ausmachen, wahrend 96 Proz. sofort Agglutination geben.
Zusammenfassung.
1) Unter Bedingungen des Laboratoriumsexperimentes
gelingt es nicht, den positiven Beweis zu fflhren, daB der
Choleravibrio in den choleraartigen flbergeht und umgekehrt.
2) Wenn auch eine solche MOglichkeit der Umwandlung
verwandter Organismen unter natQrlichen Bedingungen zuge-
geben werden kann, so ist der Grad ihrer Verbreitung be-
zuglich der Choleravibrionen wahrscheinlich wohl im hdchsten
MaBe begrenzt.
3) Bei dem gegenwartigen Stand unserer Kenntnisse
miissen die biologischen 'fmmunitatsreaktionen, unter denen
der Einfachheit der technischen Ausfuhrung nach die Aggluti-
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Ueber die Spezifitat der Agglutinadonsreaktion etc.
129
nation sreaktion, die Reaktion der Kreuzagglntination, der
Komplementbindung und das Pfeiffersche PMnomen die
erste Stelle einnehmen mflssen, als spezifisch anerkannt
werden und sicbern in genttgendern Grade die Genauigkeit
der Differentialdiagnose der Cholera- und choleraartigen
Vibrionen.
Literatur.
1) Zlatogoroff, Wratschebnaja Gaz., 1908, No. 13.
2) — Russky Wratsch, 1908, No. 24.
3) — Centralbl. f. Bakt., Bd. 48, 1909, Heft 5.
4) Jirnoff, Russky Wratsch, 1909, No. 8.
5) Taranuchin und Strogaja, Berichte d. Sozialen Hygiene, Bd. 2
(russisch).
6) Horowitz, Arch. d. biol. Wissensch., Bd. 12, 1911 (russisch).
7) Margulies, Russky Wratsch, 1902, No. 52.
8) Die Choleraepidemie in Petersburg 1908—1909.
9) Eandiba, Charkower med. Journ., Bd. 16, 1911, No. 8.
10) Vortrage fiber die asiatische Cholera. Charkower Med. Gesellsch., 1905.
11) Hirschbruch, Zeitschr. f. Hyg., Bd. 56; Arch. f. Hyg., 1906.
12) Giulio Crescenzi, Centralbl. f. Bakt, Bd. 50, Heft 1.
13) Pergola, Centralbl. f. Bakt., Bd. 59, Heft 1.
14) Ramson und Eitashima, Deutsche med. Wochenschr., 1898.
15) Eolle und Wassermann, Handb. d. pathogenen Mikroorganismen,
Bd. 4.
16) Efihn und Woithe, Centralbl 1 Bakt., Bd. 44.
17) Asakawa, Zeitschr. f. Hyg., Bd.45.
18) Besche und Eohn, Zeitschr. f. Hyg., 1909.
19) Barrenscheen, Centralbl. f. Bakt., Bd. 50, 1909, Heft 2.
20) Ha end el und Woithe, Arbeiten aus d. Eaiserl. Gesundheitsamte,
Bd. 34, Heft 1.
21) Wankel, Zeitschr. f. Hyg., Bd. 71, Heft 1.
22) Baerthlein, Arbeiten aus d. Eaiserl. Gesundheitsamte, Bd. 36, 1911,
Heft 4.
23) Efilisch, Centralbl. f. Bakt., Bd. 55, 1910, Heft 2.
24) Schrfiter und Gutjar, Centralbl. f. Bakt, Bd. 58, Heft 7.
25) Altmann und Rauth, Zeitschr. f. ImmunitatsL, Bd. 7, 1910, Heft 5.
26) Sobernheim und Seligmann, E., Deutsche med. Wochenschr.,
1910, No. 8.
27) -Zeitschr. 1 Immunitatsf., Bd. 7, 1910, Heft 3.
28) -Ebenda Bd. 6, Heft 2—3.
29) Slemmer, Zeitschr. f. Hyg., Bd. 60, 1911, Heft 2.
30) 8tromberg, Centralbl. f. Bakt, Bd. 58, 1911, Heft 5.
Zeitschr. f. Immonltitsforschuug. Orig. Bd. XIV.
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130
K. E. Boehncke und K. Bierbaum,
Nachdruck verbolen.
[Aus dem Kbnigl. Institut flir ezperunentelle Therapie za Frank¬
furt a. M. (Direktor: Wirkl. Geh.-Rat Prof. Dr. P. Ehrlich).]
IJeber den ElnflnB der Kfilte nnd fiber die ErschOpftmg
des Antigens bet der Darstellnng des Anaphylatoxins.
Von Dr. E. E. Boehncke und Dr. K. Bierbaum.
(Eingeg&ngen bei der Redaktioo am 12. Mai 1912.)
A.
Von den physikalischeu Einflfissen auf die einzelnen Kom-
ponenten bei der Anaphylatoxindarstellung in vitro ist der
EinfluB der Wfirme bzw. Hitze genauer studiert.
Nach den tlbereinstimmenden Erfahrungen der Autoren
macht eine Erhitzung das Antigen fflr diesen Zweck nicht nur
nicht untauglich, sondern vielfach wird die Abspaltung des
Anaphylatoxins dadurch noch erleichtert, wie z. B. die Ver-
suche mit gekochten Prodigiosusbacillen und Metschnikoff-
Vibrionen zeigen. Anders verhftlt es sich mit dem Meer-
schweinchenserum. Eine vdllige Inaktivierung scheint das-
selbe unfabig zur Abspaltung des Giftes zu machen. Auch
das Anaphylatoxin hat sich als thermolabil erwiesen.
Es erschien nun von Interesse, die Einwirkung der Kfilte
auf das Antigen, das Meerschweinchenserum und das bed der
Digerierung beider in vitro resultierende Produkt zu prtlfen.
Gelegentlich von Untersuchungen fiber die Anaphylatoxin-
bildung bei Rotlaufbacillen haben wir diese Verhfiltnisse
genauer untersucht.
Versuch I.
430 mg feucht gewogene Rotlaufbacillen aus 4-tagiger Bouillonkultur
werden bei — 8 0 eingefroren und nach 3-maligem Auftauen in 24-stiindigen
Intervallen zu 80,150 und 200 mg mit je 4 ccm frischen Meerschweinchen-
serums l 1 /, Stunden bei 37 0 digeriert und der Abgufl nach Abzentrifugieren
Meerschweinchen von 200 g intravenos injiziert.
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EinfluB der Kalte and fiber die Erschdpfung des Antigens etc. 131
Kultur-
menge
Menge des
injizierten Abgusses
Symptome
Ausgang
80 mg
4 ccm
Typischer Anfall
t 7 Minuten
150 „
4 „
Typischer Anfall, schwer
krank
davon
200 „
4 „
Typischer Anfall
t 3 1 /, Minuten
Es ergibt sich also, dafi durch mehrfaches Gefirieren and
Auftauen das Knlturmedium zur Darstellung des Anaphyla-
toxins nicht unbrauchbar wird.
Versuch II.
In der gleichen Weise wie oben wiederholt gefrorenes und aufgetautes
Meerschweinchen serum wird mit steigenden Mengen von Rotlaufbacillen
digeriert und der AbguB Meerschweinchen von 200 g injiziert (vgl. oben).
Kultur-
menge
! Menge des
| injizierten Abgusses
Symptome
Ausgang
60 mg
3,5 ccm
Typischer Anfall, Erholg.
Typischer Anfall
davon
120 „
3,5 „
+ 4 Minuten
200 „
3,5 „
Typischer Anfall, schwer
krank j
davon
Durch mehrfaches Gefirieren und Auftauen wird danach
das Meerschweinchenserum in seiner Aktion bei der Abspaltung
des Anaphylatoxins nicht geschw&cht.
Versuch III.
100 bzw. 200 mg Rotlaufbacillen werden mit je 7 ccm frischen Meer¬
schweinchen serums l 1 /, gtunden bei 37° digeriert und der AbguB jeder der
beiden Versuchsrohrchen nach scharfem Zentrifugieren halbiert. Von den
beiden AbguBmengen gelangt je eine Halfte sofort zur Injektdon, die andere
Halfte wird dreimaligem Gefrieren und Auftauen (s. oben) unterworfen.
Kultur-
menge
Art des
Abgusses
Injizierte
Menge
Symptome
Ausgang
100 mg
100 „
200 „
200 „
frischer AbguB
gefrorener AbguB
frischer AbguB
gefrorener AbguB
3 ccm
3 „
3 ”
0 »
Typischer Anfall,
Erholung
Typischer Anfall
» yy
yy yy
davon
t 4 Minuten
t 4 „
t 3 „
Wie die Versuchsresultate lehren, erweist sich das fertig
gebildete Anaphylatoxin gegen mehrfaches Einfrieren und Auf¬
tauen resistent.
9*
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132
K. E. Boehncke und K. Bierbaum,
B.
Bei der Digerierung von frischera aktiven Meerschwein-
chenserura mit einem bakteriellen Antigen resultiert das bei
der Injektion im Tierkorper zur Wirkung kommende Ana-
phylatoxin. Es fragte sich nun, ob das Antigen durch die
einmalige Digerierung mit Meerschweinchenserum so verfindert
wird, dafi eine weitere Anaphylatoxinbildung nicht mehr zu-
stande kommt. Zur Prflfung dieser Frage digerierten wir
daher dieselbe Antigenmenge mehrfach hintereinander mit
frischem Meerschweinchenserum. Wir benutzten hierbei in
2 Versuchsreihen Rotlaufbacillen, die sich nach unseren Er-
fahrungen zur Darstellung des Anaphylatoxins sehr gut eignen.
In einer weiteren Versuchsreihe, bei der es sich darum
handelte, nicht mehr vermehrungsf&higes Bakterienmaterial
anzuwenden, bedienten wir uns gekochter Prodigiosuskultur,
da uns einmal aus anderen Versuchen bekannt war, dafi zur
Abspaltung des Anaphylatoxins gekochte Rotlaufbacillen nicht
so gut geeignet sind, w&hrend andererseits gekochte Prodigiosus-
bacillen sich sehr gut dazu eignen (Friedberger, Sachs
und Ritz).
1. Ver8uchsreihe.
250 mg .Rotlaufbacillen (feucht gewogenl aus 4-tagiger Bouillonkultur
werden mit 7 ccm frischen Meerschweinchenserums l'/ f Stunden bei 37°
digeriert, danach scharf abzentrifugiert und von dem Abgufi fallende Mengen
Meerechweinchen von 200—220 g intravenos injiziert. Der Versuch wird
nach jedesmaligem sorgfaltigen Waschen der Bakterien mit Kochsalzlosung
an 4 aufeinander folgenden Tagen wiederholt, unter Anwendung deraelben,
in der Zwischenzeit bei Eisschranktemperatur aufbewahrten Kulturmenge.
Der Ausfall der einzelnen Versuche ergibt sich aus der nachfolgenden
Uebereicht (siehe die Tabelle I auf p. 133).
Wie die Uebersicht zeigt, war scheinbar durch das ein¬
malige Digerieren eine derartige ErschOpfung des Antigens
eingetreten, dafi schon bei der ersten Wiederholung der Ver¬
suchsreihe (2. Tag) kaum noch oder wenigstens ganz be-
deutend geringere anaphylaktische Erscheinungen resultierten.
Weiterhin aber gelang die Anaphylatoxinabspaltung noch nach
4-maliger Digerierung desselben Antigens mit frischem Meer¬
schweinchenserum. Es schien also, als ob das Antigen trotz
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Einflufi der Kalte und iiber die Erschopfung des Antigens etc. 133
Tabelle I.
Men ge der
Injekfc.-
Fliissigk.
Entsprechend
einer Kultur-
menge von ca.
Symptome und Ausgang der Versuche
1. Tag
2. Tag
3. Tag
4. Tag
3 ccm
100 mg
Typischer
Anfall,
f 5 Minuten
Typischer
Anfall,
davon
1
Leicht krank,
davon
Typischer
Anfall,
f 4 Minuten
2 ccm
70 mg
Typischer
Anfall,
f 6 Minuten
Leichte
Krankheits-
erscheinung.,
davon
Typischer
Anfall,
t 5 Minuten
Schwer
krank,
112 Stunden
1 ccm
30 mg
Leichte
Krankheits-
erscheinung.,
davon
Ohne Eeakt.,
davon
Ohne Reakt.,
davon
Ohne Reakt.,
davon
mehrfacher Abspaltung des Anaphylatoxins nicht erschopft
wfirde, woraus man weiter vielleicht den SchluB ziehen konnte,
daft dem Antigen als solchem bei der Darstellung des Ana¬
phylatoxins in vitro eine nur mehr allgemeine und weniger
spezifische Eolle zufillt. Andererseits war nicht von der Hand
zu weisen, daB die in toto vorgelegte Antigenmenge zu groB
gew&hlt war, um in 4 Versuchen erschdpft zu werden.
SchlieBlich konnte auch eine Bakterienvermehrung in den
zwischen den einzelnen Versuchen liegenden Zwischenr&umen
nicht ganz ausgeschlossen werden, wenngleich eine solche in
erheblicherer Weise allerdings nicht sehr wahrscheinlich war.
Es wurden daher in einer weiteren Versuchsreihe diese etwaigen
Fehlerquellen ausgeschaltet und der Versuch in folgender
Weise ausgefQhrt.
2. Versuchsreihe.
430 mg Rotlaufbacillen (feucht gewogen) aus 4-tagiger Bouillonkultur
werden zu 80, 150 und 200 mg mit je 4 ccm frischen Meerschweinchen-
serums 1 */, Stunden bei 37° digeriert und der Abgufi nach Abzentrifugieren
Meerschweinchen von 200 g intravenos injiziert. Die Bacillenmengen werden
nach sorgfaltigem Waschen mit Kochsalzlbsung bis zum nachsten Tage bei
— 8° eingefroren gehalten, hiernach aufgetaut und mit je 4 ccm frischen
Meerschweinchenserums l'/ t Stunden bei 37° digeriert und die Abgiisse
intravenos injiziert. In der gleichen Anordnung wird der Versuch bis zum
7. Tag fortgesetzt. Der Ausfall der einzelnen Versuche ergibt sich aus der
nachstehenden Tabelle.
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134 K. E. Boehncke und K. Bierbaum,
TabeUe 11.
■o
scSfg
Liar*
Sgsgf
Symptome und Ausgang der Versuche
1. Tag
2. Tag
3. Tag
4. Tag
5. Tag
6. Tag
7. Tag
4 ccm
200 mg
1
Typischer
Anfall,
+37, Min.
Ohne He¬
at tion,
getbtet
Leichter
Anfall,
112 Std.
Typischer
Anfall,
t 3 Min.
Schwer
krank,
112 Std.
Typischer
Anfall,
t 6 Min.
Typischer An¬
fall , agonal,
davon
4 ccm
150 mg
Typischer
Anfall,
schwer
krank,
davon
Typischer
Anfall,
t 4 Min.
•
Ohne Ke-
aktion,
davon
Typischer
Anfall,
davon
Typischer
Anfall,
davon
Schwer
krank,
davon
Ohne Reakt,
davon
4 ccm
80 mg
Typischer
Anfall,
t 7 Min.
Typischer
Anfall,
157, Min.
Ohne Re-
aktion,
davon
Ohne Re-
aktion,
davon
Typischer
Anfall,
davon
Ohne Be-
aktion,
davon
Stirbt umnit-
telbar nachd.
Injekt., ohne
Symptome;
Sektion:
Meerschwein-
chenseuche
Auch aus diesen Versuchsreihen l&Bt sich eine ErschOpfung
des Antigens nicht dartun. Bei Verwendung der hdheren An-
tigendosen (200 bzw. 150 mg) sind noch bis zur 7. bzw. 5.
Wiederholong typische anaphylaktische Anfalle ausgelOst wor-
den. (Bei der mittleren Dosis zeigt das Versuchstier ebenfalls
noch am 7. Tage schwere Krankheitserscheinungen, kommt
aber davon.) Man kOnnte den Ausfall dieser Versuche vielleicht
zurUckfflhren auf einen UeberschuB an Antigen. Sehr grofl
kann derselbe aber, wie uns unsere frtlheren Versuche lehrten,
besonders in der Dosis von 150 mg nicht gewesen sein. Diese
Ursache fBllt jedoch weg in der 3. Versuchsreihe, in der als
Antigendosis von vornherein nur eine zur einigermaBen
sicheren Erzeugung des Anaphylatoxins genQgende Bacillen-
menge Verwendung fand. Auch hier erfolgte noch bei der
5. Wiederholung ein typischer anaphylaktischer Anfall. Nun
konnte bei unserer Versuchsanordnung mit lebendem, in der
Zwischenzeit eingefroren aufbewahrtem Bakterienmaterial
eine Vermehrung immerhin noch w&hrend der jedesmaligen
Digerierung bei 37° statthaben und dadurch vielleicht zur
Anaphylatoxinabspaltung aus den allerdings wohl nur spar-
lichen, neu entstandenen Bacillen Veranlassung geben. Es
wurden daher in einer. weiteren Versuchsreihe durch Hitze
abgetOtete Bakterien verwendet und dazu aus den oben er-
Orterten Grunden Prodigiosusbacillen gewShlt. Da ferner Ver-
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EinfluB der Kalte und iiber die Erschbpfung des Antigens etc. 135
schiedenheiten in dem Ausfall der einzelnen Versucbe auch
bedingt sein konnten durch die untereinander nicht fiberein-
stimmenden, jedesmal nengewonnenen Komplement-Serum-
mischungen, so entschlossen wir uns, da eine Aufbewahrung
fiber mehrere Tage binans nicht ratsam erschien, den folgen-
den Versuch innerhalb 24 Stunden unter Verwendung der-
selben Komplement-Serummischung vorznnehmen.
Versuchsreihe III.
Zwei bzw. eine 24-stiindige Prodigiosus-Schragkulturen werden mit je
6 ccm physiol. Kochsalzlosung abgeschwemmt und die Abschwemmungen
20 Minuten im Wasserbad bei 100° gekocht. Nach Durchschiitteln werden
aus der starkeren Bakterienaufschwemmung je 2,5 ccm (entsprechend je einer
Schragagarkultur) in 2 Zentrifugenrohrchen gefiillt Das gleiche geschieht
mit der schwacheren Bakterienaufschwemmung. Nach scharfem Abzentri-
fugieren wird der Bodensatz jedes Rohrchena mit 3,5 ccm frischen Meer-
schweinchenserums 1*/, Stunden bei 37° digeriert. Die Versuche werden
dann an dem selben Tage unter Verwendung derselben Antigenmengen und
der gleichen Komplementserummischung, von der 80 ccm bereitgestellt
waren, ausgefiihrt Nach jedesmaligem Digerieren wurde die abzentrifu-
gierte Bakterienmenge sorgfaltig mit phyBiol. Kochsalzlosung gewaschen.
Die Injektion der Abgiisse erfolgte intravenos bei Meerschweinchen von
200—220 g. Zur groBeren Sicherheit wurde der Versuch in je 2 Parallel-
reihen angesetzt
Tabelle HI.
Injek-
tions-
menge
i
Entsprechend
Symptome und Ausgang bei
einer Kultur-
menge von
Versuch
I
Versuch
II
Versuch
III
Versuch
IV
Versuch
V
3 ccm
1 Schrftg-
kultur
Schwer
krank,
Temp.
36,2, f 8
Std.
Typischer
Anfall, f
5 Min.
Schlechte
Atmung,
schwer
krank, f
20 Std
Schlechte
Atmung,
Temp.
35,4, da-
von
Leichte
Krankheits-
erscheinun-
gen, Temp.
36,7, davon
3 ccm
1 Schrag-
kultur
Typischer
An fall, f
3 Min.
Typischer
Anfall. f
4 Min.
Typischer
Anfall, f
5 Min.
Anfall,
Temp.
35,0, da-
von
Ohne Reak-
tion, Temp.
35,9, davon
3 ccm
i
'/, Schriig-
kultur
Typischer
Anfall, f
4 Min.
Schlechte
Atmung,
Temp.
34,2, da-
von
Schlechte
Atmung,
Temp.
33,4, da-
von
Leichter
Anfall,
Temp.
35,2, da-
von
Ohne Reak-
tion, Temp.
36,0, davon
3 ccm
*4 Schrag-
kultur
Typischer
Anfall, f
3 l / f Min.
Schwer
krank,
Temp.
36,0, f 8
Std.
Ohne Re-
aktion,
Temp.
37,1, da-
von
Ohne Re-
aktion,
Temp.
38,0, da-
von
Ohne Reak-
tion, Temp.
36,0, davon
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136 Boehncke and Bierbaum, Ueber den Einfiufi der Kalte etc.
Auch diese Uebersicht zeigt, dafi eine ErschOpfung des
Antigens durch wiederholtes Digerieren nicht eintritt; denn
auch diese Versuche, bei denen eine Vermehrung des Bakterien-
materials ausgeschlossen war, ergaben noch nach 4—5maliger
Benutzung desselben Antigens deutliche anaphylaktische Syra-
ptome. Unverkennbar ist jedoch eine allmahliche Abnahme
in der Intensit&t der anaphylaktischen Erscheinungen. was
auf eine allmahliche Abschwachung des Antigens durch die
wiederholte Digerierung mit frischem Serum deuten kOnnte.
Inwieweit diese Abschwachung aber in einer allmahlichen Ver-
ringerung der Antigenmenge durch das wiederholte Waschen
und Zentrifugieren unter eine gewisse Mindestmenge ihren
Grund hat, erscheint fraglich. Andererseits kOnnte diese Ab¬
schwachung vielleicht bedingt sein, durch eine mechanische
Behinderung infolge einer Adsorption gewisser Serumbestand-
teile, die bei dem mehrfachen Digerieren die einzelnen Bak-
terienleiber umhQllen und sie so trotz grflndlichen Waschens
der Einwirkung der spezifischen Stoffe des frischen Meer-
schweinchenserums entziehen.
Zusammenfassung.
1) Mehrfaches Einfrieren und Auftauen macht weder das
Antigen noch das Komplementserum ungeeignet zur Anaphyla-
toxinabspaltung.
2) Das in vitro gebildete Anaphylatoxin ist resistent gegen
wiederholtes Einfrieren und Auftauen.
3) Durch wiederholtes Digerieren desselben Antigens mit
frischem Meerschweinchenserum bei der Anaphylatoxindar-
stellung in vitro scheint eine ErschOpfung des Antigens nicht
einzutreten 1 ).
1) Nach Erledigung der Korrektur sind wir von Prof. Friedberger
auf eine Arbeit von ihm und Vallardi (diese Zeitschr., Bd. 7,1910, p. 94ff.)
aufmerksam gemacht, in der iiber entsprechende Versuche berichtet worden
sei. Wir nehmen geme Kenntnis von diesem Hinweis und bemerken, dafi
die erwahnten Versuche, die mit Prazipitaten von Anti-Eiweifiseris und
mit Blutkorperchenschatten angestellt wurden, uns bisher entgangen sind.
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McIntosh, Fildes and Dearden, Reply to the remarks etc. 137
Nachdruck verboten.
[From the Bacteriological Laboratory of the London Hospital
(Dr. William Bulloch).]
Reply to the remarks of H. Freund upon our article:
Salt Fever and the treatment of Syphilis by “606”.
By James McIntosh, Paul Fildes and H. Dearden.
Heft 2, Bd. 13 of this journal contains a criticism by
H. Freund of our paper: Salt Fever and the treatment of
Syphilis by “606” (Heft 2, Bd. 12). Exception is taken to
our conclusion “Kochsalzfieber verdankt seine Entstehung dem
Vorhandensein der in der angewandten Losung vorkommenden
Bakterien”.
H. Freund presumes that the saline solution used by
us was made from water abnormally contaminated with bac¬
teria. In our paper we gave full details of the conditions
under which the water was collected and stored and there is
no reason to suppose that it was any more contaminated than
that used by H. Freund in his experiments. We have since
on more than one occasion and at different times of the year
estimated the number of bacteria in our water and have
found 350000 to 750000 per c. c. This result is in accord
with the estimates made by others in connection with the
toxicity of saline solutions for Salvarsan injections, and unless
there is some evidence to the contrary it must be presumed
that the water used by H. Freund was similarly contami¬
nated. It must be noticed that Freund admits that the
fever following his injections of Ringer’s solution was pro¬
bably due to bacteria and that he does not give any reasons
to explain why such a conclusion showed not be drawn in the
case of his saline injections.
In fact in his 10 recent cases injected with redistilled
water, quoted as evidence against us, the average fever was
much less than he formerly obtained with ordinary water.
To us it seems clear that by redistillation he has eliminated
the bacteria and thus also the most marked symptoms of
“Kochsalzfieber”.
We readily admit that elevation and also apparently
fall of temperature may follow injections of bacterium free
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138 Do Id und Ogata, Nachtrag zu der Arbeit: Weitere Studien etc.
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saline into rabbits and examples of such may be found in
our paper in the Lancet (March 9. 1912). We did not however
obtain such large variations as H. Freund reports and did
not attach much importance to them.
We also admit the possibility of inhibiting the toxic effect
of saline injections in some cases with calcium as has been
shown by Freund and others. We do not know the ex¬
planation of this phenomenon, but would point out a circum¬
stance possibly analogous namely that symptoms of anaphylaxis
may be prevented by barium chloride.
Our present view is that in man no Kochsalzfieber occurs
on injection of NaCl solutions. Perhaps it may be necessary
to exclude from this rule persons suffering from enteritis or
even other pathological conditions. In rabbits slight elevations
of temperature may occur but these are not equivalent to
what has been described as Kochsalzfieber in man.
Nachdruck verboUn .
Nachtrag zu der Arbeit: Weitere Studien fiber die
wfisserigen Organcxtraktgifte.
(Diese Zeitschrift, Bd. 13, Heft 6, p. 667 ff.)
Von Dold und Ogata.
In der oben genannten Arbeit haben wir darflber be-
richtet, daB der Zusatz von Hirudin zu den wfisserigen Organ-
extrakten deren giftige Wirkung nicht aufhebt und daB darum
die Annahme, daB die Giftwirkung der Organextrakte nur auf
ihrem Gehalt an Thrombozym beruhe, nicht berechtigt sei.
Wir kamen zu diesen Ergebnissen bei Verwendung von
Hirudin Jacoby.
Neuere Versuche, bei denen wirvonuns selbst frisch
aus BlutegelkSpfen hergestelltes Hirudin be-
niitzten, fiihrten zu anderen Resultaten. Es gelang durch
vorherige Injektion dieses frisch bereiteten
Hirudins oder durch Zusatz dieses Hirudins zu
den Organextrakten sonst todliche Organextrakt-
dosen unwirksam zu machen.
Frommannsche Buchdruckerei (Hermann Pohle) in Jena. — 4165
Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Zeitschriit £ Imumnit^tsforsctmng. Originala Bi HV. Ho. 2.
Nachdruck verboten.
[From the Departments of Pathology and Experimental Pathology
in the Medical College of Cornell University, New York.]
A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction.
By Arthur F. Coca and Elise S. L’Esperance.
(Eingegangen bei der Eedaktion am 12. April 1912.)
Since the publication by Wassermann, Neisser and
Bruck of their method of blood examination in the diagnosis of
syphilis — the “Wassermann reaction” — many modifications
of their original technic have been offered. The only one of
these that has had wide acceptance is the substitution of an
alcoholic extract of normal organs, for example, the heart
muscle, for extracts of the liver of a syphilitic foetus.
It is not our purpose to offer a modification either as
to source or method of preparation, of any of the reagents
that are used in the performance of this test. We wish only
to call attention to some important sources of error in the
use of the reaction, which must attach to all the methods
hitherto recommended, and to demonstrate, in a short series
of examinations, the advantage of their elimination.
The “positive” Wassermann reaction depends upon the
presence in the serum under examination, of substances which,
when mixed for a time with an emulsion of certain lipoids in
the presence of an “active” serum, cause a disappearance of
the complementary function of the mixture.
The technic of the reaction was modelled after that of
Bordet-Gengou for the demonstration of specific anti¬
bodies, and its mechanism was considered by its discoverers
as identical with that of the latter reaction. This view has
received experimental support from Gay 1 ), who demonstrated
1) Univ. of California publications in Pathology, 1911, Vol. 2, No. 1.
ZeiUchr. f. Immunitatsforschung. Orig. Bd. XIV. 10
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UNIVERSITY OF CALIFORNIA
140
Arthur F. Coca and Eliae 8. L’Esperance,
a similarity in the two reactions, when the proportions of the
reagents entering into them were varied; and although it has
been proven by Noguchi 1 ) that the Wassermann reaction
is not produced by the interaction of immune-body with its
antigen, an identity of mechanism in the two instances, never¬
theless, may still be maintained.
The plan of procedure recommended by its originators
in the performance of the Wassermann test was to combine
a fixed amount of an alcoholic or carbolized watery extract
of syphilitic liver and a fixed amount of fresh guinea-pigs’s
serum with two different quantities of the serum to be
examined, namely, 0.2 and 0.1 ccm. It was observed that,
when the originally recommended organ extracts are used as
“antigen”, unless the sera are heated, positive reactions are
sometimes obtained in diseases other than syphilis. On this
account the sera to be examined are always heated at 55° C
for 20 minutes to one half hour. With the single exception
noted at the beginning of this article, this method is still
generally observed.
Heretofore the reacting power of luetic sera has been rated
according to the degree of inhibition of the complement-
amboceptor hemolysis caused by the combination of a fixed
amount of “antigen” 2 ) with 0.2 ccm. and 0.1 ccm. of the
patient’s serum. Citron 3 ), for example, employs the following
classification.
Patient’s serum
0.2 ccm.
0.1 „
0.2 „
0.1 „
0.2 „
0.1 „
0.2 „
0.1 „
0.2 „
0.1
0.2 and 0.1 ccm.
complete fixation
» »>
incomplete fixation
complete fixation
„ hemolysis
incomplete fixation
complete hemolysis
doubtful fixation
complete hemolysis
both complete hemolysis
strongly
positive
! weakly
positive
| doubtful
negative
1) Journ. of Amer. Med. Assoc., Vol. 58, 1912, No. 16.
2) With some workers the quantity of “antigen” combined with 0.1 ccm.
of the patient’s serum is only half the amount used with 0.2 ccm.
3) Die Methoden der Immunodiagnostik, Leipzig 1910.
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A Modifikation of the Technic of the Wassermann Reaction. 141
The criteria of reacting power just described as well as
the technical procedure on which they are based are open to
serious criticism. In the first place, as was shown by Sachs
and Altmann, heating of the serum at 55° C weakens the
fixing power of the reacting substances in the serum — “reagin”
— so that after even the usual process of inactivation (heating
for one-half hour at 55° C) a strongly positive serum may
produce, according to the standard of determination cited
above, only a weakly positive reaction, and a weakly positive
serum under such treatment may become doubtful or negative.
We have found that the minimum quantity of a strongly
reacting luetic serum which, when combined with eight units
of our “antigen” emulsion, is capable of causing complete
complement-fixation is about 0.08 ccm. The degree of wea¬
kening, therefore, that will render 0.1 ccm. apparently quite
lacking in fixing power under the ordinary conditions, need
not be very great. Other variable factors, also, may affect
the result of the reaction with the smaller quantity of serum,
such as the degree of sensitization of the blood corpuscles
used as indicator.
Beside the disadvantage discussed above (namely, the
necessity of heating the sera) that attaches to the use of the
originally recommended “antigen” preparations, there is another
equally important defect in the raw alcoholic and watery organ
extracts, which greatly limits their use in the Wassermann
test. We refer to the large admixture in such extracts of
substances incapable of “antigenic” function, that exert either
a hemolytic effect upon the blood corpuscles used as indicator
in the test, or an anticomplementary influence during the
reaction period. The presence of these disturbing substances
in the “antigen” preparations limits the amount of the
“antigen” that can be used in carrying out the test l ). It is
known that when immunity reactions are performed with
one antigenic substance in combination with a number of
specific antisera that have been obtained from different animals
1) It is customary to use, as “antigen” in the Wassermann test,
the largest quantity of the organ extracts that, in double amount, is, of
itself, neither hemolytic nor anticomplementary.
10 *
ty Google
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142 Arthur F. Coca and Elise S. L’Esperance,
after the animals have received injections of that antigen, the
zone of reaction (that is, the quantitative limits within which
one reacting substance produces the characteristic effect when
combined with a fixed amount of the other reacting substance)
is found to be different with the different anti-sera. Usually,
also, the relative position and extent of the zone of reaction
is determined by the reacting power of the anti-serum. Under
these circumstances it is possible arbitrarily to select a quantity
of the antigen, which, with one anti-serum would lie within
the zone of reaction, but, with the same quantity of another
anti-serum, would lie outside that zone.
If then, as we have some reason to believe, the mechanism
of the Wassermann reaction is identical with that of the
immunity reactions, the question properly may be asked whether,
with some luetic sera, the quantity of “antigen” contained in
the arbitrarily selected amount of organ extract, as employed
in the original Wassermann test, lies outside the zone of
reaction. Experiments by Neisser, Bruck and Schucht 1 )
throw light on this question.
Early in the history of the Wassermann reaction these
investigators suggested that the reacting strength of luetic
sera be determined according to the minimum quantity of
“antigen” that, in combination with a fixed amount of the
luetic serum, is capable of causing complete complement-
fixation. The protocols published in their article clearly
demonstrate differences in the reaction zone with
the different sera. However, from the absence-of any
further communication upon their suggestion it may be as¬
sumed that the practical application of their plan proved un¬
satisfactory. An analysis of the protocols of these authors
reveals the further fact that the working range of their organ
extract (that is, the quantitive limits within which these writers
were able to use their organ extract in order to obtain the
fixation of complement that is characteristic of the Wasser¬
mann reaction) included only from one to eight units of
“antigen”. It was easily conceivable, therefore,
1) Deutsche med. Wochenschr., 1906, No. 48.
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A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction. 143
that with some luetic sera the zone of reaction
did lie above the working range of their extract.
As we have already remarked, the organ extracts, such
as these authors employed as “antigen”, contain much that
is not capable of functionating as “antigen”, and the question
may be asked whether, if the “antigenic” substances could
be freed from those extraneous matters, the working range
of the preparation would be so extended as to include the
zone of reaction of luetic sera that, under the ordinary
conditions of examination, give a negative result.
Through the researches of Noguchi 1 ) there is at our
disposal a preparation, in which the “antigenic” substances
have been isolated to such an extent as to provide a working
range of at least 500 units. With this preparation a
number of sera 2 ) of known luetic origin have in
our hands reacted positively within a quantitative
zone that lies above the working range of the
Wassermann organ extracts. The method of isolation
employed by N o g u c h i is the usual one applied to the sepa¬
ration of the organ lipoids — that is, the ether-soluble, aceton-
insoluble fraction of an alcoholic extract.
Technic.
Antigen: The most convenient source of suitable lipoids is the heart
muscle of the ox. The muscular tissue is dissected out from the heart of
a recently slaughtered ox, and, after being finely comminuted in a meat
grinder, is shaken well with about ten volumes of 95 % alcohoL The
alcoholic extract is filtered after five to ten days and evaporated nearly to
dryness with the use of an electric fan. The sticky residue is extracted
with ordinary ether and the ether extract again evaporated with the use
of the fan, supplemented finally with gentle warming. The resulting residue
is then extracted with water-free ether, in small quantity, and the clear
solution, obtained by centrifugation, mixed with five volumes of aceton.
After thorough shaking the fluid is poured off the waxy precipitate, which
is then shaken several times with fresh portions of aceton. The stock
solution is a filtered 2 % solution of the lipoids in pure methyl alcohoL
For each series of tests a fresh emulsion is made by diluting one part, by
1) Journ. of Exp. Med., Vol. 9, 1909, p. 84.
2) See Table IV, cases 2, 3 and 9.
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144
Arthur F. Coca and Elise S. L’Esperance,
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volume, of the stock solution lip to ten parts with physiological salt solution
Ringer’s). Of this 0.2 % emulsion 0.4 ccm. has never produced the
slightest hemolysis when mixed with 0.1 ccm. of a 5 °/ 0 suspension of sheep’s
blood, nor is that amount anti-complementary with 0.01 ccm. of guinea-
pig’s serum (indicator 0.1 ccm. of 5 °/ 0 sensitized sheep’s blood).
The lipoid preparations from ox’s heart muscle are not always capable
of functionating as “antigen” in the Wassermann test. Of four such
preparations made from four different ox-hearts, one was completely lacking
in “antigenic” property. The other three were equally efficient in that
capacity. The “antigenic” property of our firet preparation has remained
unchanged for one year.
In the interest of economy of materials, all the reagents entering into
the Wassermann test have been used in one-tenth of the usual quantities.
Under this condition we have found that with cases of untreated secondary
syphilis, the minimum fixing amount of ox-heart lipoids is frequently as
little as 0.0002 ccm. of a 0.2 % emulsion, that is, 0.0000001 g. In most
of the tests we have used the antigen emulsion in five different quantities
— 0.2, 0.1, 0.05, 0.02 and 0.01 ccm. — and have combined these amounts
with the serum to be examined in two series, one of which was made with
0.2 ccm., the other with 0.1 ccm. of the serum diluted 1 to 10 with physio-
ogical salt solution.
Patient’s serum: Our experience has thus far confirmed the state¬
ment of Noguchi that when the lipoid fraction of the alcoholic organ
extracts is used as “antigen”, inactivation of the patient’s serum is un¬
necessary. Herein lies a further important advantage in the use of the
purified lipoids, because, as is well known, the heating of the serum dimi¬
nishes the fixing power of the “reagin”. However, some of the sera that
had been obtained more than twenty-four hours previous to the examination
were found to have become anti-complementary, that is, 0.4 ccm., or less,
of the diluted serum inhibited by itself the complementary function of
0.1 ccm. of guinea pig’s diluted serum. In order to remove this anti-
complementary property it was necessary to heat such sera for one-half
hour at about 55°C 1 ). For the exact determination of the fixing strength
of a luetic serum, it is, therefore, important that the test be made within
twenty-four hours after the blood has been taken, so that the necessity of
inactivation may be avoided. If, as we have always done, the reagents
entering into the Wassermann test are all used in one-tenth of the usual
quantities, the amount of the patient’s serum required for such examination
is correspondingly reduced; so that sufficient blood for the test can be
easily obtained from the ear or finger. Such small amounts — 1.5 to
2 ccm. — are best defibrinated and centrifugated at once. The serum can
then be removed with a pipette and is ready for immediate examination.
1) 50° C. has since been found to be a sufficiently high temperature
for the purpose.
Gck igle
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A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction. X45
Complement: This function was supplied by 0.1 ccm. of a 1—10
dilation of fresh guinea pig’s serum in physiological salt solution. Whenever
this serum was naturally hemolytic for sheep’s blood corpuscles, the natural
hemolysin was removed by the cold separation method — 1—2 hour at
0® C. in contact with washed sheep’s corpuscles.
Indicator: 2% sheep’s blood corpuscles sensitized with two to three
minimum hemolytic doses of immunized rabbit’s serum were used as in¬
dicator. To each tube was added 0.25 ccm. of this suspension — representing
0.1 ccm. of the usual 5 °/ 0 suspension.
When the test was carried out according to the plan that we have
described, we were not able to observe any essential difference in the
results that could be due to differences, within the limits given above, in
the degree of sensitization of the blood corpuscles that were used as indicator
of the reaction. The sensitization should be so adjusted to the comple)
mentary activity of the guinea-pig’s serum that not more than 0.05 ccm.
of that serum diluted 1—10 will be required, and that not less than 0.025 ccm.
will be able completely to hemolyse one unit (0.25 ccm. of a 2 % suspension
of the sensitized blood cells.
The advantages of the purified lipoid “antigen” for the
Wassermann test, over the originally recommended organ
extracts, are important. These are, as we have already said,
first, the avoidance, through its use, of the ne¬
cessity of heating the sera under examination,
and secondly, the very great extension of the
quantitative working range of the organ extract
in an “antigenic” capacity — at least bOtimesthat
of the raw extracts.
It is necessary, however, to point out an equally important
source of error that attaches to the use of the organ lipoids
in the conditions under which the usual Wassermann re¬
action is carried out. A frequent phenomenon that is observed
in all immunity-reactions when the different reagents are mixed
in varying proportions, is the so-called pre-zone of wanting
reaction. This phenomenon occurs whenever the quantity of
either of the reacting substances used is in excess of a certain
definite proportion to the other. In tables I and II are shown
examples of the prezone that were observed in examining the
serum of immunized rabbits with the use of the reaction of
complement fixation. The antigens were an emulsion of
amoebae and horse serum respectively.
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146
Arthur F. Coca and Elise S. L’Esperance,
Digitized by
Table I.
An illustration of the prezone of wanting complement-fixation pro¬
duced in the Bordet-Gengou test by the presence of an excess of
antiserum.
After 1 hour at room temperature 0.25 ccm. 20 °/ 0 sensitized sheep’s blood.
Inactive serum of
rabbit immunized
against amoebae
In each tube 0.1 ccm. amoeba
suspension (2400000 amoebae)
and 0.05 ccm. guinea-pig serum
ccm.
Grade of hemolysis after 2 hrs.
at 37° C
0.2
strong
0.1
slight
0.05
trace
0.025
99
0.0125
0
0.006
0
0.003
0
0.0015
0
0.0008
trace
0.0004
slight
0.0002
partial
0.0
complete
Table II.
An illustration of the prezone of wanting complement-fixation pro¬
duced in the Bordet-Gengou test by the presence of an excess of antigen.
After 1—2 hours at 37 0 C 0.25 ccm. of 20 °/ 0 sensitized sheep’s blood cells.
Inactive
horse serum
In each tube 1—80 ccm. of the inactivated
serum of rabbit 645 that had received
injections of horse serum. Also 0.05 ccm.
of guinea pig’s serum in each tube
ccm.
Grade of hemolysis after 2 hrs. at 37 0 C
0.02
complete
0.01
9 #
0.005
partial
0.002
0
0.001
0
0.0005
0
0.0002
0
0.0001
0
0.0 1
complete
The foregoing experiments illustrate the prezone as due
in one case (table I) to an excess of immune serum, and in
the other (table II) to an excess of the antigen.
It should be expected, therefore, if the mechanism of the
Bordet-Gengou reaction is identical with that of the
Gck igle
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A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction. 147
Wassermann reaction, that the latter reaction could be
performed in such a way as to exhibit the phenomenon just
described.
This has been found to be true. In one of the ear¬
liest cases examined with the use of varying
amounts of “antigen” — a case of gumma of the
nose — a prezone of wanting fixation was clearly
marked. The result of the test in that case is given in
table III.
Table III.
An illustration of the prezone of wanting complement-fixation produced
in the Wassermann test by the presence of an excess of “antigen”.
After 2 hours at room temperature 0.1 ccm. 5 °/ 0 sensitized ox blood cells.
0.2 °/ 0 ox-heart lipoids
in physiological NaCl
In each tube 0.2 ccm. patient’s 10 °/ 0
unheated serum and 0.1 ccm. 10 °/ 0
guinea pig’s serum
ccm.
Grade of hemolysis after 2 hrs. at 37 0 C
0.2
complete
0.1
0.05
partial
0.025
0
0.0125
0
0.006
0
0.003
0
0.0015
0
0.0008
0
0.0004
0
0.0002
slight
0.0001
strong
0.0
complete
0.4 ccm. of 10 % lues serum was also
not anti-complementary
This observation revealed a possible source of error in
the usual technic of the Wassermann reaction, for since it
is customary to use as “antigen” the largest quantity of organ
extract that, in double amount, is of itself neither anti-com¬
plementary nor hemolytic, it would seem very likely that in
a case such as we have just described, the ordinary Wasser¬
mann test, if carried out with the purified lipoid “antigen”,
would give a negative result. We continued, therefore, to
carry out each test with the use of descending quantities of
the antigen combined with 0.2 ccm. and 0.1 ccm. respectively,
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148
Arthur F. Coca and Eliee S. L’Esperance,
of the patient’s serum in order to determine how frequently
the “prezone” appears under these conditions.
Our report is based on the results of the W a s s er m a n n
reaction in 127 cases. In 62 instances an independent exa¬
mination had been made by Dr. C. W. Field, who regularly
followed the original plan of using only one fixed quantity of
“antigen”, and employed as “antigen”, the ether-soluble, aceton-
in soluble fraction of an alcoholic extract of syphilitic foetal
livers. Fifty-five of the 127 examinations resulted in a
positive reaction and of these 55 positive tests ele¬
ven showed a distinct prezone of wanting fixation,
sometimes where 2 —10 ccm. and 1 — 10 ccm. of the
patient’s serum was used, sometimes only where
1 —10 ccm. of the patient’s serum was employed.
In six cases in which the prezone was found, the
same serum, examined independently according
to the usual technic and thoroughly controlled by
Dr. Field, gave a negative result.
In every instance except one — Case 5 — the sera
with which the prezone phenomenon was observed, had been
obtained from a case of recognized syphilis. The spinal fluid,
also, was of syphilitic origin. The clinical diagnoses were as
follows:
1. Gumma of the nose.
2. Case of syphilis in which mild mercurial treatment had been
applied.
3. History of syphilis contracted one year ago followed by mercurial
treatment At the time of the examination suspicious patches had
appeared on the palms of the hands.
4. Untreated syphilis.
5. Follicular tonsilitis in an Indian at the height of the attack.
Aspirin had been administered in doses of 10 grains five times
daily. The patient was immediately withdrawn from observation.
6. Secondary syphilis.
7. Tertiary syphilis.
8. Tertiary syphilis.
10. Tertiary syphilis.
11. Paresis (spinal fluid).
12. Secondary syphilis.
These cases will be referred to by number as the prezone
cases. The results of the examination in all of them are given
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A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction. 149
in table IV. Number nine was from the mother of syphilitic
child, With this sernm, fixation was wanting where less than
0.05 ccm. of the “antigen” emulsion was used.
Table IV.
Peculiar results obtained with the Wassermann test in twelve in*
stances when descending amounts of “antigen” were used.
Case
number
Patient’s
serum
1—10
0.2 °/ 0 emulsion of ox-heart lipoids
0.2 ccm.
0.1 ccm.
0.05 ccm.
0.02 ccm.
0.01 ccm.
1.
0.2
++++
+ + + +
++
0
0
0.1
—
—
—
—
—
2.
0.2
++++
4-4-4-4-
++
trace
trace
0.1
—
-j
—
—
—
3.
0.2
++++
+ + + +
0
0
++
0.1
—
—
—
—
4.
0.2
0
0
0
1 0
0
0.1
+ + + +
+ + +
0
0
0
5.
0.2
++++
+ + + +
+ + + 1
+
0
0.1
++++
+ 4-4- +
++++
1 +++
++
6.
0.2
++
+ +
+ +
0
0
0.1
+++
+ + + +
+++ +
[ ++
0
7.
+
+
+
1 0
0
0.2
++++
+ + + +
+ + + +
+ + + +
+++
8.
0.2
+++
+ + +
+ +
0
0
0.1
++++
+ + + +
++++
++++
++++
9.
0.2
0
0
0
++++
++++
0.1
0
0
0
+ +
+++
10.
0.2
--
_
_
_
_—
0.1
—
++++
—
—
0
n.
0.2
—
-1
—
t_
_
0.1
—
++++
—
I
0
12 .
0.2
—
—
_
_
1
0.1
-!
++++1
-;
;-
0
+ + + 4- = complete hemolysis; + + + = very strong hemolysis;
+ 4- = partial hemolysis; 4- = slight hemolysis.
The results in cases 10, 11 and 12 were taken from Dr. Field’s
records.
A study of the results given in table IV shows that in
no instance was any advantage gained by performing the test
with the use of 0.1 ccm. of the patient’s diluted serum. In¬
deed, as would be expected, with the smaller amount of the
patient’s serum the prezone was always exaggerated. There
is, therefore, no reason here, nor have we met with any
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150 Arthur F. Coca and Elise S. L’Esperance,
elsewhere, why the test should not be carried out with the
use of only the larger quantity of the serum.
The analysis of Table IV shows, furthermore, that while
the Wassermann fixation was produced with the use of
0.01 ccm. of the antigen in Cases 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 and 8,
this quantity was not effective in Case 9, for which at least
0.05 ccm. was required. In order, therefore, to have
obtained in all of these cases apositive reaction,
the use of at least two quantities of the antigen
would have been necessary, i. e., 0.05 ccm. and 0.01
ccm of the 0.2 % emulsion. In a few other cases of known
syphilis a result like that of Case 9 has been obtained and in
one instance, 0.2 ccm. and 0.1 ccm. produced fixation whereas
0.05 caused no inhibition of the complementary action.
In a number of diseases other than syphilis and in some
apparently healthy individuals who denied a history of syphilis,
complete or partial fixation was obtained with the serum when
combined with 0.2 ccm. of the 0.2% lipoid emulsion. Since
neither 0.4 ccm. of the lipoid emulsion nor 0.4 ccm. of the
human serum was anti-complementary, it seems correct to
speak of such a result in a non-luetic case as a pseudo¬
reaction. According to our experience, however, in no such
case has the serum ever produced fixation with 0.1 ccm. of
the emulsion.
As we have pointed out, with the use of two different
amounts of our “antigen”, a positive reaction could have been
obtained in all of the twelve cases given in Table IV. However,
as a routine practice we suggest the combining of 0.2 ccm.
of the patient's serum with five different quantities of the
“antigen”. Taking our own preparation ox-heart lipoids as an
example, these quantities would be 0.1, 0.05, 0.02, 0.01 and
0.001 ccm. of a 0.2% emulsion. The reasons for making this
suggestion are discussed in the consideration of the reading
of the results obtained by our plan of examination.
The reading of the results.
Our scale of comparative reacting strength has been
drawn with reference to the minimum amount of “antigen”,
which, in combination with 0.2 ccm. of the patient’s diluted
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A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction. 151
serum, is capable of causing complete fixation of complement
with 0.1 ccm. of guinea pig’s diluted serum. We have referred
to the fact that this plan of determining the fixing strength
of luetic sera has already been suggested byNeisser, Bruck
and Schucht, though these writers have not yet published
any conclusions as to its value. Sormani 1 ), also, advocated
the same plan, but used a “standard antigen” for the com¬
parisons. Plaut 2 ) in his book upon the “Wassermann
Sero-diagnostik” discusses briefly the possibility of using a
fixed quantity of the patient’s serum with descending quan¬
tities of “antigen”, but thinks that the only advantage of this
procedure might lie in bringing out more accurate quantitative
differences.
In the practical performance and reading of the Was ser¬
in an n test we proceed as follows:
1. All the reagents entering into the reaction of fixation
can be most conveniently diluted 1—10 with physiological salt
solution. The sensitized sheep’s blood suspension may be 2 °/ 0
(unit = 0.25 ccm.) or 5% (unit = 0.1 ccm.).
2. Five different amounts of a 0.2 % emulsion of ox-heart
lipoids are to be combined with 0.2 ccm. of the diluted
patient serum and 0.1 ccm. of the diluted guinea pig serum.
The five amounts of antigen are 0.1, 0.05, 0.02, 0.01 and 0001.
A series of examinations with non-luetic sera should be made
for the purpose of determining the lower limit of pseudo¬
reaction. Repeated purification of the “antigen” may raise
the limit of these reactions above 0.2 ccm. of the 0.2%
emulsion.
3. If complete fixation of complement occurs with all of
the five quantities of “antigen” or with only the smallest two
or three quantities we report a “strongly positive reaction; if
with 0.001 ccm. hemolysis has not been prevented, but fixation
has occurred with all the other combinations or with the lesser
one or two quantities of “antigen”, we report a “positive”
1) Nederl. Tijdschr. v. Geneesk., 1909; ref. Polak Daniels, Zeitschr.
f. Immunitatsf., Bd. 10, 1911; also, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 11, 1911.
2) p. 54—55.
Heating of the sera increases the minimum fixing quantity so that
heated sera should not be compared with unheated ones.
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152 Arthur F. Coca and Elise S. L’Esperance,
reaction; if hemolysis is not prevented with 0.001 nor with
0.01 ccm., but fixation occurs with any of the other amounts
of the “antigen”, we report a “weakly positive” reaction.
We have never met with an occasion for reporting a
“doubtful” reaction.
4. Heretofore the incubation for fixation has usually been
made for one hour at 37 0 C. The observations of E. Jacobs-
thal 1 2 ) and of Guggenheimer*) made it seem advisable to
carry out a parallel series for incubation in the ice-box. Since
we began to make the test in duplicate series, one for in¬
cubation during the reaction period at 37° C, the other at
about 0° C, two sera have given a positive reaction at one
temperature but a negative reaction at the other. In one
instance in which, with the usual technic (incubation at 37 0 C)
a positive reaction was obtained by Dr. F i e 1 d, we also found
the reaction positive when the incubation was carried out at
37° C but were unable to produce fixation when the incu¬
bation was carried out for two hours at room temperature,
or for 18 hours in the ice-box. In the second instance, a
case of syphilitic osteomyelitis referred to us by Dr. Keyes,
the series incubated during the reaction period at37°C gave
a completely negative result, whereas in the series incubated
during the reaction period for 18 hours in the ice-box, com¬
plete fixation of complement took place with 0.1, 0.05, 0.02 ccm.
of the lipoid emulsion, only slight hemolysis with 0.01 ccm.,
and complete hemolysis with 0.005 ccm.
In table V are given examples of the results that we
have obtained with our technic, together with our “reading”
of them (cf. table V p. 153).
Our scheme of determining the reacting strength of sera
according to the Wassermann test is not entirely regular
in its application; difficulties of interpretation were presented
by a comparison of the results in case 9 (table IV), and in a
number of similar ones that have come to us, with those of
prezone cases 2 3 ) and 3 (table IV). All of these sera were
1) Munch, med. Wochenschr., 1909, No. 13.
2) Miinch. med. Wochenschr., 1911, No. 26.
3) 0.003 ccm. of the antigen produced almost no fixation with this
serum.
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A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction. 153
Table V.
Examples of the results of the Wassermann reaction obtained
under our technic, classified according to the reacting strength of the sera.
Indicator 0.25 ccm. of 2 °/ 0 sensitized sheep’s corpuscles.
In each tube 0.02 ccm. of patient’s serum + 0.01 ccm. of guinea pig’s serum.
0.2 °/ 0 emulsion of ox-heart lipoids
0.1 ccm.
0.05 ccm.
0.02 ccm.
0.01 ccm.
0.001 ccm.
0
+++ +
0
++
+++ +
0
0
+ +
ooo
ooo
1 strongly positive
j reactions.
0
0
0
0
+ + + +
J positive reactions.
4- 4- 4- +
++
0
0
-i—i—i—i-
+++ +
+ +
0
+ + + +
0
0
0
++ +
+ + + +
0
0
0
++
+
xxxx
xxxx
weakly positive
reactions.
+ + + +
0
0
+ +
4- -f + 4-
+ + + +
1 +++
+
4-
4-4-4-4-
+ + + + = complete hemolysis; + + + = very strong hemolysis;
+ + = partial hemolysis; + = slight hemolysis.
derived either from individuals presenting no outspoken syphi¬
litic lesions (case 9) or from those showing early recurrence
(case 3). In other words, a weakly positive reaction was to
be expected in these cases. For the present, then, we are
forced to recognize two types of weakly positive reaction, that
is, a narrow zone of fixation, with or without a prezone of
wanting fixation.
How can we explain the difference in the behaviour of
these sera?
If the reduction in the reacting strength of a luetic serum
is due wholly to a decrease in the quantity of a single
reacting element — reagin — it should be expected that the
increase in the minimum fixing quantity of antigen would be
accompanied by the appearance of a prezone even in those
cases where it had not previously existed; for as is shown in
prezone cases 5 and 6, the prezone may be widened by re¬
ducing the quantity of a luetic serum, or, as in case 4, it may
not be present at all when the larger quantity of serum is
used, but may appear merely upon the use of a smaller amount
of the serum.
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154
Arthur F. Coca and Elise S. L’Esperance,
We see, however, that the prezone is not a characteristic
of all weakly reacting sera. Another difficulty that opposes
the assumption of a single reacting substance in luetic sera, is
presented by the result of theWassermann test in prezone
case 1, which is given in full in table III. Here we have a
decided prezone of wanting fixation exhibited by a serum,
showing a wide zone of fixation, that was taken from a case
of outspoken tertiary syphilis.
It seems, therefore, necessary to assume the existence, in
luetic sera, of more than one reacting element each of which
requires a different “antigenic” substance for the production
of the Wassermann fixation. With this hypothesis we are
able to explain the differences observed in cases 2, 3, and 9.
In the sera of cases 2 and 3, “reagin A” was absent In
case 9, “reagin B” was present, and “reagin A” may also have
been present in very small quantity.
In our preparation of ox-heart lipoids “antigen a” (that
reacts with “reagin A”) is present in large quantity but “anti¬
gen b” (that reacts with “reagin B”) is present only in small
quantity. The prezone was lacking in case 9, therefore, be¬
cause 0.2 ccm. of the ox-heart emulsion did not contain the
excessive amount of “antigen b” that is necessary for the
production of that phenomenon.
The recent study ofPolak Daniels 1 ) “Ueber die Be-
deutung der Verwendung von Antigenen verschiedener Her-
kunft bei der Wassermannschen Reaktion” furnishes strong
support of our assumption of more than one reacting element
in luetic sera. Polak Daniels made successive additions
of complement-serum, and “antigen” derived from syphilitic
livers, incubating, for one hour after each addition, until a
point was reached at which, after the last incubation, com¬
plement was left free in the mixture, as indicated by the
hemolysis that followed the addition to it of sensitized blood
corpuscles. If, then, in the place of the last portion of
syphilitic-liver “antigen” a portion of “antigen” was added
that had been prepared from guinea pig’s heart muscle,
fixation of the last portion of complement was effected. The
1) Zeitschr. t Immunitiitsf., Bd. 10, 1911.
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A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction. 155
same phenomenon was observed by the author when the
“antigens” were used in reverse order. In this observation
Polak Daniels believed he had found evidence that pointed
to the existence, in luetic sera, of specific antibodies produced
against derivatives of spirochaeta pallida. He, also, assumes
the existence of more than one reacting serum element —
the specific and the non-specific reagins.
TTie study of Noguchi, to which we have referred,
sufficiently demonstrates the fallacy of Polak Daniel’s
conclusions so far as the antibody-nature of the reagins is
concerned, and our own experience is in entire harmony with
Noguchi’s results; for, while we have succeeded in re¬
producing the phenomenon of Polak Daniels, this phe¬
nomenon was produced by us with the use of two lipoid
“antigens” neither of which was derived from a
syphilitic source.
We followed exactly the plan of Polak Daniels, using at each
successive addition two minimum binding amounts of the “antigens” pre¬
parations. Both of these preparations were lipoid fractions of alcoholic
extracts, in one instance, of ox-heart muscle and in the other, of the liver
of an apparently normal, certainly non-syphilitic infant. At the point
where a further addition of the first “antigen” preparation failed to cause
fixation of the accompanying portion of complement, the substitution of
two minimum binding amounts of the second “antigen” preparation resulted
in complete complement-fixation.
For the phenomenon of Polak Daniels, also, the as¬
sumption of more than one reacting substance in some luetic
sera offers the simplest explanation. In the serum with which
he observed the phenomenon both reagins “A” and “B” were
present. One of his “antigen” preparations contained chiefly
“antigen a”, whereas “antigen b” constituted the greater part
of his other “antigen” preparation.
The assumption explains, furthermore, why, under the
usual technical procedure, some sera with one “antigen” pre¬
paration react positively, but with an “antigen” derived from
a different source, give a negative result. Such sera contain
only one of the reacting substances.
The prezone that we have demonstrated with the Wasser¬
mann reaction was due always to the use of too large amounts
of “antigen”. We had to see, furthermore, whether that phe-
Zeitacbr. f. ImmanitStiforschung. Orig. Bd. XIV. JJ
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156 Arthur F. Coca and Elise S. L’Eape.rance,
nomenon might be met with in the Wassermann test on
account of the use, also, of too great quantities of the “reagin”
as represented in the luetic serum. This question was answered
in the negative by determining in a short series of cases of
outspoken syphilis, the minimum quantity of the patient's
serum, which, when mixed with eight units of the “antigen”,
produced complete deviation of the usual amount of guinea
pig complement. The minimum fixing quantity of serum in
the four selected cases of syphilis was found to be nearly the
same in all, that is, about 0.08 ccm. of the diluted serum. If
this represents the usual minimum fixing quantity of luetic
serum, it is improbable that a prezone of wanting reaction
would ever be caused by an excess of “reagin”, because the
serum under examination is never used in a quantity exceeding
0.2 ccm. i. e. two and a half minimum fixing amounts.
Our limited experience does not permit us to estimate,
even approximately, the percentage of luetic sera that can be
detected only by the observance of the technical procedure
developed upon the basis of our observations. That the
number of “false” reactions (by which we mean a negative
result in cases that present syphilitic lesions) will be conside¬
rably reduced by the adoption of our technic can, however,
be safely asserted.
There is no direct method of examination with which to
control the findings in each case, and we have been dependent,
in this respect, therefore, upon the diagnosis of the clinician.
With this reservation in mind we are able to state that of
the 55 sera that were derived from cases clinically considered
as syphilitic, only two, that is, less than 4 %, gave negative
results, under our technic, with the Wassermann test. In
neither of these two instances was the parallel test with ice¬
box incubation carried out, and in both instances the sera had
been heated. All of the remaining 72 cases were either non¬
syphilitic or cases of syphilis in which vigorous treatment
with salvarsan had been applied.
A positive reaction was obtained in a case of paroxysmal
hemoglobinuria and in a case of follicular tonsilitis at the
heighth of the infection 1 ). In every other case in which a
1) See prezone case 5.
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Original fro-m
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A Modification of the Technic of the Wassermann Reaction. 157
positive reaction was obtained the existence of syphilitic in¬
fection could be established clinically.
We have to acknowledge the continued support of Dr.
F. C. Edgerton, instructor of clinical surgery in Cornell
University, during this investigation, and also numerous kind¬
nesses from Professor E. L. Keyes of the same department
We wish to express our obligation to Dr. C. W. Field, for
permitting us to examine sera from his laboratory in the
Bellevue Hospital. Material for this study was obtained, also,
from the New York Infirmary for Women and Children.
Zusammenfassung.
1) Als ,, Antigen" fflr die Wassermannsche Reaktion
steht das fitherlosliche, acetonunlOsliche Organlipoidprfiparat
(Noguchi) fiber den Organextrakten der ursprfinglichen
Wassermannschen Vorschriften, und zwar in zwei wichtigen
Hinsichten; erstens ist beim ersteren die Reaktionsbreite
wenigstens ftinfzigmal so groB wie bei den letzteren, und
zweitens: wo die isolierten Lipoide angewendet werden, ist
das Erhitzen des zu untersuchenden Serums nur dann not-
wendig, wenn dieses antikomplementfir geworden ist.
2) Bei mehreren Seris von Luetikern liegt die Reaktions-
zone fiber der Reaktionsbreite der gewdhnlichen Organ-
extrakte. In solchen Fallen ffillt die Wassermann sche
Reaktion negativ aus, wenn man sie unter den ursprfinglichen
Vorschriften ausffihrt. Wenn man aber mit denselben Seris
die Reaktion mit dem lipoiden „Antigen" ausffihrt, so fallt
sie positiv aus, was der grfiBeren Reaktionsbreite letzterer
zuzuschreiben ist.
3) Unter Anwendung der atherlfislichen, acetonunldslichen
Lipoiden des Rinderherzmuskels als „Antigen" ffir die W a s s e r -
mannsche Reaktion wird manchmal eine Vorzone fehlender
Reaktion beobachtet, wo das luetische Serum mit den grfifieren
Quantitfiten des ^Antigens" gemischt worden ist.
4) Diese technische Fehlerquelle kann man so eliminieren,
daB man abgestufte Quantitfiten des ^Antigens" mit einer be-
stimmten Menge des zu untersuchenden Serums mischt.
5) Es wird vorgeschlagen, die Wertbestimmung der „posi-
tiven" Sera in jedem Falle nach der kleinsten Quantitfit des
li*
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158 Coca and L’Esperance, Technic of the Wassermann Reaction.
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„Antigens 44 zu machen, die in Kombination mit einer be-
stimmten Menge des Serums vollst&ndige Ablenkung der
Kom piemen teinheit zu verursachen vermag. Die Unrichtigkeit
der allgemein gebrauchten Wertbestimmungsmethode wird
hervorgehoben.
6) Auf Grund gewisser Beobachtungen wird auf die
Moglichkeit hingewiesen, daB in manchen luetischen Seren
mehr als ein reagierender K5rper vorhanden ist. Dement-
sprechend wird mehr als ein „Antigen u in den Organextrakten
angenommen.
7) Unter den technischen Kautelen, die wir vorgeschlagen
haben, ergab sich mit der Wasserman nschen Reaktion ein
positives Resultat in einem Fall von paroxysraaler H&mo-
globinurie und in einem Fall von Angina acuta, in dem aber
das Vorhandensein luetischer Infektion nicht ausgeschlossen
werden konnte. Unter 55 Fallen, die klinisch als Syphilis
anerkannt waren, fielen nur zwei negativ aus.
Supplementary Note.
Since we sent away the manuscript of this article the number of
axaminations made under the technical conditions that we have described,
has increased to 270 and the number of positive reactions has reached 97.
Against these positive reactions we have to record two additional cases of
syphilis presenting conspicuous tertiary lesions in all of which the test as
employed resulted negatively. In none of these four cases was the serum
heated and in each instance the serfs “incubated” for fixation at low
temperature gave, also, a negative result.
No positive reaction was obtained in any other disease than syphilis.
Among the diseases other than syphilis in which the reaction resulted
negatively were carcinoma, advanced pulmonary and bone tuberculosis,
acute articular rheumatism and ricketts.
No further instances of the prezone phenomenon have been observed.
In view of the fact that all of the additional 42 positive sera were tested
in the unheated condition and that most of the instances of the prezone
phenomenon that we have described occurred with sera that had been
heated, it is most probable that heating of the sera considerably increases
the danger of this source of error. However, that danger is not entirely
avoided by performing the test with unheated sera; for we have twice
observed a prezone of wanting fixation with sera that had not been
heated — Table IV, cases l 1 ) and 2.
1) The result in this case is given in full in table III.
Gck igle
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E. Rosenthal, Antigen- und Antikorperbeeinflussungen etc. 159
Nachdruck verboten.
[Aus dem hygienisch - bakteriologischen Institut der Universit&t
Erlangen, exp.-biologische Abteilung (Prof. Dr. Wolfgang
Weichardt), nnd aus dem chemisch-biologischen Laboratorium
der IV. Abteilung des St. Rochus-Spitales der Haupt- und
Residenzstadt Budapest (Prof. Dr. Stephan v. T 61 h).]
Versuche, Antigen* nnd AntikSrperbeelnflnssnngen
slchtbar zn machen.
Experlneatelle Stud ten nit der Epiphaaiareaktiea.
III. Mitteilung:
Streptokokken.StaphylokokkenundGonokokken.
Von Bugen Rosenthal (Budapest).
Mit 20 Kurven im Text.
(Eingegangen bei der Redaktion am 29. April 1912.)
Der Nachweis von spezifischen Reaktionskdrpern wurde
bei Streptokokkeninfektionen zuerst von Bruck 1 ) mit Hilfe
der Komplementablenkungsmethode erbracbt: er konnte bei
allgemeiner Sepsis und schwerer Phlegmone eine positive
Reaktion erhalten. Da die Mbglichkeit des Nachweises solcher
spezifischer Stoffe daran denken lieB, aus dem Vorhandensein
Oder dem Fehlen dieser Reaktionskorper etwa praktische
SchlQsse bei septischen Erkrankungen ziehen zu kOnnen,
schien es lohnenswert, nachzusehen, wie sich die Sache mit der
Streptokokken-Komplementablenkung verhait. Auf meinen
Vorschlag unternahm Georg Szegvdri 2 ) diesbezQgliche
Untersuchungen, welche sich vor allem mit der Ausarbeitung
einer entsprechenden Methodik besch&ftigen muBten, zumal
diesbezQgliche Mitteilungen (namentlich Qber die Bereitung
des Antigens) in der einschl&gigen Literatur nicht vorzufinjlen
waren. Szegvdri stellte seine Versuche mit drei verschie-
denen Streptokokkenstdmmen an: Str. longus, brevis und
haemolyticus. Von jedem Stamm wurde mit physiologischer
1) Bruck, Deutsche med. Wochenschr., 1906, No. 24.
2) Unveroffentlichte Versuche.
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160
Eugen Rosenthal,
NaCl-Lflsung eine Aufschwemmung bereitet, welche durch ein
1-stflndiges Erhitzen auf 60° C abgetOtet wurde. Die Zahl
der in einer Aufschwemmung vorhandeuen Bakterieu wurde
mit der Wrightschen Methode bestimmt; Kaninchen wurden
durch 4 Wochen wochentlich mit steigenden Dosen 1 ) des
obigen Vaccins immunisiert. Das Serum der Tiere wurde
mit dem homologeu Stamm untersucht, alle Versuche fflhrten
indessen zu einem negativen Resultat. Mit den obigen Anti-
genen wurden ferner Komplementfixationsversuche mit ver-
schiedenen Antistreptokokkenseren (mit Marmoreks, Men-
zers monovalentem, und Aronsons polyvalentem Serum)
angestellt, leider ebenfalls mit einem negativen Ergebnis. —
Diese mit Einschaltung alter Kontrollen und mit groBer Sorg-
falt ausgefflhrten Versuche Szegvdris fflhrten also im Gegen-
satz zu den Angaben Brucks zu keinem positiven Resultat,
und somit hatten wir zum Nachweis jener spezifischen Stoffe,
welche bei der Streptokokkeninfektion seitens des Organismus
produziert werden, keine Methode.
Nachdem ich dann meine Studien mit der Epiphanin-
reaktion begann, ging ich bald daran, diese Methode auch in
dieser Richtung zu prflfen. Zu diesem Zwecke wurde eine
Reihe von Meerschweinchen mit abgetoteten Streptokokken-
kulturen bestimmter Stfirke (siehe weiter unten) 3 Wochen
hindurch mit steigenden Dosen wflchentlich immunisiert, un-
gefflhr 8 Tage nach der letzten Impfung wurden die Tiere
entblutet, das gewonnene Serum abgehoben, mit Karbol ver-
setzt (siehe I. Mitteilung) und nach 2 Tagen untersucht. Als
Antigene haben sich folgendermaBen hergestellte Vaccine be-
w&hrt: mehrere, gewflhnlich 3, 24—36 Stunden alte Bouillon-
kulturen wurden zusammengegossen, durch Hitze abgetotet
und zentrifugiert; die abgesetzten Bacillen wurden nach Ab-
guB der Qberstehenden Bouillon mit steriler physiologischer
Kochsalzlflsung versetzt, umgerflhrt und zentrifugiert. Auf
diese Weise sollen die Bacillen dreimal mit Kochsalzlosung
gewaschen werden; schliefllich nimmt man 0,5 ccm der ab-
geschleuderten gewaschenen Bacillen und ergflnzt sie mit
1) Von ungefiihr 300 Millionen bis 5000 Millionen Streptokokken pro
Kubikmillimeter.
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Antigen* und Antikorperbeeinflussungen sichtbar zu machen. 161
9,5 ccm 20-proz. Glyzerinwasser. Es erwies sich zweckmfiBig,
das auf diese Weise hergestellte Antigen einige Stunden
schQtteln zu lassen und vor Gebrauch mit etwas Alkali ver-
setzt, 1—2 Tage so stehen zo lassen. Ein solches Antigen
ist dann gut haltbar, monatelang brauchbar; natfirlich mull es
im Sinne unserer frfiheren Mitteilungen mit normalem Meer-
schweinchenserum eine negative Reaktion geben und diesbe-
zQglich vor Gebrauch geprflft werden 1 ).
In unseren Versuchen kamen als Antigene 3 verschiedene
Streptokokkenst&mme zur Untersuchung, teils monovalent, teils
als polyvalent; die Reaktion wurde zuerst mit dem homologen
Immunserum und dann auch mit heterologen Antiseris aus-
geftthrt; schliefilich kamen einige Antistreptokokkensera des
Handels zur Untersuchung. Die Resultate, welche sich bei
einer solchen Versuchsanordnung bei Streptokokken ergaben,
sind am besten aus den beifolgenden Kurven zu ersehen. Die
in Eurve 1 wiedergegebene Reaktion bezieht sich auf einen
Kurve 1. Kurve 2.
Fig. 2. Antigen: Streptokokkenstamm 17. Serum: unterbrochene Linie
vor der Immunisierung, ausgezogene Linie naeh der Immunisierung mit
dem homologen Stamm.
1) Auch diese Antigene wurden, wie bereits in Mitteilung I und II be-
schrieben, vor der Reaktion mit Antikenotoxin versetzt (0,1 der Standard-
ldsung 10— 4 auf das 10- 4 verdunnte Antigen.
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162
Eugen Rosenthal,
Versuch, in welchem das Meerschweinchen mit dem Strepto-
kokkenstamm 14 in der oben beschriebenen Weise immuni-
siert wurde. Vor derselben gab das Serum des Tieres
eine negative Reaktion [Kurve mit unterbrochener Linie 1 )
gezeicbnet], nach derselben erhielten wir dagegen einen
starken Ausschlag mit positivem Verlauf. Ebenso erhielten
wir bei einem zweiten ahnlichen Versuch (mit Strepto-
kokkenstamm 17) vor der Impfung eine negative, nach der¬
selben eine positive Kurve (Fig. 2). In diesen Versuchen
wurden stets homologe StSmme und Antigene verwendet;
nimmt man dagegen zum Versuch heterologe Antigene, so
sind die auf diese Weise erhaltenen Ausschlfige zwar ausge-
sprochen positiv, aber entschieden schwacher als bei Verwen-
dnng eines Antigens, mit welchem die Immunisierung vorge-
nommen wurde (Kurve 3 und 4).
Kurve 3. Kurve 4.
Fig. 3. Antigen: Streptokokkenstamm 14. Serum des mit Strepto-
kokkenstamm 17 immunisierten Tieres.
Fig. 4. Antigen: Streptokokkenstamm 17. Serum des mit Strepto¬
kokkenstamm 17 immunisierten Tieres.
Die st&rkste Reaktion, welche bei Streptokokken zu finden
war, erhielt ich bei der Immunisierung mit dem polyvalenten
Vaccin; der Ausschlag, welcher nach der Immunisierung zu
1) Auch in den weiteren Figuren sind die Kurven, die bei der CJnter-
suchung des Serums vor der Behandlung des Versuchstieres erhalten
wurden, mit unterbrochenen Linien gezeichnet.
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Antigen- und Antikorperbeeinflussungen sichtbar zu raachen. 163
erhalten war, betr> mehr
al8 12 ccm n/ 1000 H 2 S0 4 ,
der Verlauf der Kurve ist
typisch positiv; das vor
den Impfnngen untersuchte
Serum des Versucbstieres
reagierte negativ (Kurve 5).
— Das aus drei verschie-
denen Streptokokkenstam-
men hergestellte polyva-
lente Antigen reagierte mit
heterologen monovalenten
Immunseris zwar noch
ebenfalls positiv, indessen
Kurve 5. Antigen: Strepto-
kokkenstamme 5, 14, 21. Serum:
unterbrochene Linie vor der Im-
munisierung, ausgezogene Linie
nach der Immunisierung mit den
obigen Stammen.
viel schw&cher als mit dem homologen polyvalenten Anti¬
serum, wie dies aus Kurve 6 und 7 zu sehen ist.
Kurve 6. Kurve 7.
Kurve 6. Antigen: wie bei Kurve 5. Serum: des mit Streptokokken-
stamm 14 immunisierten Tieres.
Kurve 7. Antigen: wie bei Kurve 5. Serum: des mit Streptokokken-
stamm 17 immunisierten Tieres.
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164
Eugen Rosenthal,
In einer weiteren Versuchsreihe wurden verschiedene
Streptokokkensera des Handels auf ihr Verhalten bei
der Epiphaninreaktion untersucht, wobei verschiedene Antigene
zur Verwendung kamen. Unser monovalentes Streptokokken-
antigen 17 ergab mit dem Moser schen Scharlachserum
(Hdchster Farbwerke) keine positive Reaktion (Kurve 8),
Kurve 8. Kurve 9.
Kurve 8. Antigen: Streptokokkenstamm 17. Serum: Mosersches
Scharlachserum (Hochst).
Kurve 9. Antigen: wie bei Kurve 5. Serum: Mosersches Scharlach¬
serum.
Kurve 10. Kurve 11.
Kurve 11. Antigen: wie bei Kurve 5. Serum: Menzers mono¬
valentes Serum.
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Antigen- und Antikbrper beeinflussungen sichtbar zu machen. Jg5
dagegen erhielt ich bei Verwendung eines polyvalenten Antigens
ein ganz schwaches positives Eesultat (Kurve 9).
Ein negatives R e -
snltat erhielt ich ferner
mit dem M e n z e r schen
monovalenten Serum, gleich
ob das verwendete Antigen
monovalent (Knrve 10) oder
polyvalent war (Kurve 11).
Eine deutlich positive
Kurve ergab dann der
Versuch, als unser poly-
valentes Antigen mit dem
polyvalenten Aronson-
schen Serum zusammenge-
bracht wurden (Kurve 12).
Eine positive Reaktion konnte also nur in jenen Fallen
erhalten werden, wo einerseits polyvalentes Antigen, anderseits
Scharlachserum oder ein polyvalentes Antiserum aufeinander
wirkten. Die mit monovalenten Antigenen und Seren ausge-
fflhrten Reaktionen fielen negativ aus.
Ohne hier auf die Biologie der Streptokokken eingehen
zu wollen, mochte ich bemerken, daB diese mit der Epiphanin-
reaktion ausgefiihrten Versuche die von anderer Seite be-
hauptete Artverschiedenheit der Streptokokken zu sttltzen
scheinen, indem jene feinen Unterschiede, welche tinktoriell,
kulturell und oft selbst im Tierversuch nicht hervortreten,
durch diese vorliegende Methode in dem verschieden starken
Ausfall der Reaktion Ausdruck finden.
Im weiteren untersuchte ich das Verhalten der Epiphanin-
reaktion bei Staphylokokken. Die Immunisierung der
Meerschweinchen, die Gewinnung des Serums, die Herstellung
des Antigens geschah in ganz analoger Weise, wie weiter oben
fflr die Streptokokken beschrieben wurde. Im Laufe der dies-
bezfiglichen Versuche wurden 3 Meerschweinchen mit Staphylo¬
kokken immunisiert, einmal mit Staphylococcus albus behan-
delte Tiere reagierten positiv (Kurve 13), nur fiel der Wert von
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166
Eugen Rosenthal,
10^ 4 etwas hoch aus; die Kurve wiirde dann durch die Be-
stimmung von IQ -8 ergSnzt: dieser Wert lag 1 ccm unter der
Nullinie. Der vor der Immunisierung erhaltene Wert ent-
spricht einer typischen negativen Kurve. — Die beim zweiten
Versuchstier erhaltene Kurve (Kurve 14) scheint etwas in die
H8he verschoben zu sein, wobei aber der positive Ausfall der
Reaktion nicht beeinflufit wurde.
Kurve 13. Kurve 14.
Kurve 13. Antigen: Staphylococcus albus. Serum: des mit dem-
selben immunisierten Tieres; unterbrochene Linie vor der Immunisierung.
Kurve 14. Antigen: Staphylococcus aureus. Serum: des mit dem-
selben immunisierten Tieres; unterbrochene Linie vor der Immunisierung.
In einem weiteren Versuch, wo das Tier mit einem
anderen Stamm von Staphylococcus aureus behandelt wurde,
erhielt ich ebenfalls eine positive Kurve, welche in Fig. 15
wiedergegeben ist.
Ich wollte schliefilich sehen, wie sich Staphylococcus albus
und aureus zueinander verhalten und nahm zu diesem Zweck
als Antigen das Vaccin des Staphylococcus albus und als Immun-
serum das des Staphylococcus aureus „H“. Das Ergebnis des
Versuches zeigt Kurve 16.
Die Kurve nimmt zwar einen etwas atypischen Verlauf,
im ganzen ist sie aber als eine, wenn auch schwache positive
Reaktion zu betrachten. Dieser Versuch zeigt also, dafl bei
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Antigen- und Antikorperbeeinflussungen sichtbar zu machen. 107
Kurve 15. Kurve 16.
Verwendung verschiedener Staphylokokkenarten bzw. Antiseren
— in unserem Fall Staphylococcus albus und aureus — die
Zusammengehdrigkeit derselben sich ohne weiteres zeigt, in¬
dent auch die in Fig. 16 gezeichnete Kurve im Prinzip positiv
ist; dafi aber in ihnen Unterschiede bestehen, scheint der
weniger starke positive Ausfall und der erw&hnte etwas
atypische Verlauf der Kurve anzudeuten.
SchlieBlich babe ich in einer kleinen Versuchsreihe die
Epiphaninreaktion beiGonokokken ausgefiihrt. Als Antigen
benutzte ich bei der Immunisierung und bei der Reaktion
selbst Gonokokkenvaccine, einmal das von Parke, Davis & Co.
London, und in einera zweiten Versuch das Gonovaccin der
Kaiser-Friedrichs-Apotheke, Berlin.
Vor Gebrauch miissen diese Vaccine mit normalem, 2 Tage
lang unter Karbolzusatz aufbewahrten Meerschweinchenseruro
geprtift werden; dieser Vorversuch fiel bei den von uns ver-
wendeten Vaccinen in befriedigender Weise aus, wie dies die
mit unterbrochener Linie gezeichnete Kurve der Figg. 17
und 18 zeigt. — Bei Verwendung des Londoner Gonokokken-
vaccins konnten wir eine sehr starke positive Kurve er-
halten. Weniger charakteristisch, zwar ebenfalls positiv ver-
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IQg Eugen Rosenthal,
lauft Kurve 18, indem 10~ 4 und nicht 10 -6 den hbchsten
Punkt vorstellt.
Kurve 17. Kurve 18.
Kurve 17. Antigen: Gonokokkenvaccin (10 Mill.) von Parke, Davis
& Co., London. Serum: des mit demselben immunisierten Tieres.
Kurve 18. Antigen: Gonokokkenvaccin (Friedrich-Apotheke Berlin).
Serum: des mit demselben immunisierten Tieres.
In einem weiteren Versuch wurde dann das Londoner
Antigen mit dem Immunserum des mit dem Berliner Vaccin
behandelten Tieres zusammengebracht: das Ergebnis ist in
einer so ausgesprochenen Weise positiv, als hatte man den
Kurve 19. Kurve 20.
Kurve 19. Antigen: wie bei Kurve 17. Serum: wie bei Kurve 18.
Kurve 20. Antigen: wie bei Kurve 17. Serum: Aronsons poly-
valentes Streptokokkenserum.
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Antigen- und Antikdrperbeeinflusaungen sichtbar zu machen. 269
Versuch mit homologen Reaktionsprodukten ausgefflhrt. —Fflr
weitere Versuche mSchte ich also das Londoner Gonokokken-
vaccin empfehlen, da man mit demselben entschieden schSnere
Resultate erh<.
Die in Fig. 20 niedergelegte Kurve ist das Ergebnis eines
Kontrollversuches, in welchem das Londoner Gonokokken-
antigen mit dem Aronson schen polyvalenten Streptokokken-
serum zusammengebracht wurde: das Resnltat ist negativ.
Von einer unspezifischen Beeinflnssung unserer Reaktion durch
das Gonokokkenvaccin kann somit keine Rede sein.
Zusammenfassung.
1) Die Epiphaninreaktion ist zum Nachweis von Strepto-
kokkenantikdrpern geeignet, wenn man zum Versuche homo-
loge — gleich ob mono-Oder polyvalente — ReaktionskSrper
verwendet. In solchen Fallen erhait man eine stark positive,
typisch verlaufende Reaktion.
2) Verwendet man bei Streptokokken heterologe
ReaktionskSrper, so ist der Versuch meistens schwficher, kann
zweifelhaft Oder selbst negativ werden.
3) Von den untersuchten Antistreptokokkenseris
reagierte nur das polyvalente Antigen, und zwar mit dem
Scharlachserum (polyvalent) und mit dem Aron son schen
ebenfalls poly valenten Serum. War das Antigen oder das
Immunserum monovalent, so fiel die Reaktion nicht in
positivem Sinne aus.
4) Die Epiphaninreaktion war bei den untersuchten
3 Stapbylokokkenstammen positiv; der bekannte biologische
und kulturelle Unterschied, welcher zwischen Staphylococcus
albus und aureus bekanntlich vorhanden ist, trat, wenn auch
nur wenig deutlich, in der Reaktion hervor.
5) Bei Gonokokken war die Epiphaninreaktion in den
untersuchten Fallen ebenfalls positiv; als Antigen scheint sich
am besten das Londoner Gonokokkenvaccin zu eignen.
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170
Leonor Miehaelis und Ferruccio Marcora,
Nachdruck verboten.
[Aus dem biologiechen Laboratorium des stRdtischen Kranken-
bauses Am Urban, Berlin.]
Die SSureprodnktlvltat des Bacterium coll.
Von Leonor Miohaelis and Ferruocio Maroora.
(Eingegangen bei der Redaktion am 9. Mai 1912.)
Bekanntlich hat das Bacterium coli die Eigentflmlichkeit,
Milchzucker unter Entwicklung von Milchs&ure zu spalten.
Andererseits wissen wir, dafi die SBuren auf alle Bakterien
einen sch&dlichen, in hoheren Konzentrationen tddlichen Ein-
fluB haben. Wir stehen hier vor einer in der Biologie nicht
vereinzelten Tatsache, daB ein Organismus StofFe produziert,
welche seiner eigenen Entwicklung nachteilig sind. In An-
betracht dieses Umstandes stellten wir uns die Frage, inner-
halb welcher Grenzen das Bacterium coli imstande sei,
Milchsaure zu produzieren, und wie die maximal produzierbare
Sauremenge mit der fur das Leben des Bakteriums vertrfig-
lichen SSuremenge in Beziehung zu setzen sei.
Zu diesem Zweck legten wir zun&chst Bouillonkulturen
des Bacterium coli mit Zusatz von verschiedenen Mengen
Milchzucker an und bestimmten den Grad der S&uerung, dem
diese Kulturen schlieBlich zustrebten. Als MaB fflr die
SHuerung wShlten wir aber nicht die Menge der Milchs&ure,
sondern die Konzentration der Wasserstoffionen. Denn das
Sch&dliche der Milchstiure ist nicht ihr Anion, wie die Un-
schadlichkeit der milchsauren Salze lehrt, sondern das Wasser-
stoffion. Die Bestimmung der Wasserstoffionen geschah mit
Hilfe von Gasketten genau in der Weise, wie wir diese Me-
thode kiirzlich beschrieben haben 1 ). Die Messungen wurden
an einzelnen Proben vorgenommen, die der Kultur sofort nach
der Impfung, nach 1, 2, 3 usw. Tagen Wachstums bei 37°
entnommen wurden. Die Messungen wurden bei Zimmer-
1) L. Miehaelis, Die Bestimmung der Wasserstoffionen konzentration
durch Gasketten. Abderhaldens Handb. d. biochem. Arbeitsmethoden,
Bd. 5, 1911.
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Die Saureproduktivitiit des Bacterium coli.
171
temperatur vorgenommen. Das Ergebnis dieser Messungen
war folgendes:
Tabelle I.
Milchzuckergehalt
der Kultur
[H - ] sofort
nach 2 Tagen
nach 4 Tagen
nach 6 Tagen
1 Proz.
5 „
10 „
4,0-10- 9
8,2-10- 8
1,0-10- 8
1,3-10-®
1,3-10-®
1,3-10-®
1.3- 10-®
1.3- 10-*
1.3- 10-®
1,2-10-*
1.3- 10-*
1.4- 10-®
Die Wasserstoffionenkonzentration der vorher leicht alka-
lischen Kultur wachst also rapide bis zu einem Wert von
ungefShr l*10~ s und bleibt dann vdllig konstant. Aber auch
wenn wir von Losungen ganz verschiedener AlkalitSt aus-
gingen, indem wir der Bouillon wechselnde Mengen Natron-
lange zusetzten, waren die definitiv erreichten Wasserstoff-
ionenkonzentrationen kaum merklich anders:
Tabelle II.
a) 80 ccm Bouillon + 8 g Milchzucker + 8,8 ccm n. NaOH,
mit Bacterium coli beimpft.
[H-] sofort = 1,1-10— 9
nach 1 Tag == 1,1-10— 5
nach 2 Tagen = 1,1-10— 5
nach 3 Tagen = 1,0-10— 4
b) Wie oben, aber nur + 7,0 ccm n. NaOH.
[H-l sofort = 2,1-10- 9
nach 1 Tag = 1,0-10-®
nach 2 Tagen = 0,94-10— 6
nach 3 Tagen = 0,81-10 -®
c) Wie oben, aber ■+■ 5,0 ccm n. NaOH.
[H-] sofort = 4,0-10- 9
nach 1 Tag = 0,87-10— 6
nach 2 Tagen = 0,90-10—®
nach 3 Tagen = 0,80-10—®
d) Wie oben, aber nur 3,5 ccm n. NaOH.
[H-] sofort = 7,3-10- 9
nach 1 Tag = 0,90-10—®
nach 2 Tagen = 1,0-10-®
nach 3 Tagen = 0,91-10—®
Abimpfnngen aller dieser Kulturen zu den verschiedensten
Zeiten zeigten, daB stets noch in flppigster Menge lebende
Bakterien in den angesauerten Kulturen vorbanden waren.
Das Bacterium coli erreicht also in NS-hrboden der verschie¬
densten Alkalit&t nach Milchzuckerzusatz stets die gleiche
Zeitschr. f. Immunitiuforachung. Orig. Bd. XIV. 12
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172
Leonor Michaelis und Ferruccio Marcora,
Wasserstoffionenkonzentration von etwa 1 • 10 -5 . Es ist natfir-
lich, daB bei wechselnder AnfangsalkalitSt das Bakterium ganz
verschiedene Mengen an Milchs&ure produzieren muB, um auf
diesen AciditStsgrad zu gelangen.
Hierdurch wird geradezu bewiesen, dafi wir ein Recht
hatten, das Ende der SSuerung auf die Wasserstoffionen-
konzentration, nicht aber auf die Menge der gebildeten Milch-
sfiure zu beziehen. Auch Betracbtungen fiber „freie“ und
„gebundene“ Milchsfiure, fihnlich wie man die Aciditfitsverhfilt-
nisse des Mageninhaltes zu betrachten pflegte, wfirden bier
nicht zur Klarheit ffihren.
Als notwendige Fortsetzung dieser Untersuchungen ergab
sich die Frage nach der schfidlichen Wirkung willkfirlich her-
gestellter Wasserstoffionenkonzentrationen auf das Bacterium
coli. Zu diesem Zwecke wurden in fihnlicher Weise wie zu
anderen Zwecken frfiher (vgl. diese Zeitschr., Bd. 4, p. 357)
Gemische von Essigsfiure mit Natriumacetat hergestellt. In
solchen Gemischen ist die Wasserstoffionenkonzentration
, 10 - 5 . [EssigsSure]
[Natriumacetat]
Durch Variieren des Verhfiltnisses der freien Essigsfiure
zum Natriumacetat haben wir es somit in der Hand, Wasser-
stofifionenkonzentrationen in verschiedenen Stufen willkfirlich
herzustellen. Es wurden je 10 ccm verschiedener solcher Ge¬
mische hergestellt und je 1 Platinose einer Agarkultur des
Bacterium coli eingeimpft. Nach verschieden lange bemessenem
Aufenthalt im Brutschrank wurde eine Oese des Gemisches
auf Agar geimpft, um festzustellen, ob die Bakterien in dem
Sfiuregemisch getdtet waren. Die Resultate sind in Tabelle III
zusammengestellt:
Tabelle III.
n/ l 0 Natriumacetat ccm
n/ 1( , Essigsiiure „
n. Essigsiiure „
Wasser „
1
0,23
8,87
0,7
8,3
1
2,1
6,9
1
6,3
3>
1
4,4
4,6
Bakterienkultur je eine Platinose
Wachstum (auf Agarrohrch.) |
nach 24-std. Einw. bei 37 0
» ^ ,, ,, y, yy
normal
normal
normal
normal |
schwach
o
Spur
0
0
0
[H-j
10,5-10-®
11,4-10— 6
14,2-10-®j
11,3-10—*
7,0-10— 4
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Die Saureproduktivitat des Bacterium coli.
173
Wie man sieht, hat eine Wasserstoffionenkonzentration
von 1,4* 10 -5 selbst nach 2-tagiger Einwirkung bei 37° noch
keine merkliche schadliche Einwirkung auf das Bacterium coli,
wahrend hflhere Aciditaten es sehr bald schadigen und tOten.
Die Tolerabilitatsgrenze ist also fast genau dieselbe wie die-
jenige Wasserstoffionenkonzentration, welche das Bacterium
coli in Milchzuckerlosungen spontan maximal erzeugt Noch
besser zeigt sich das in einem zweiten Versuch, in dem wir
die Aciditaten noch feiner abstuften, und in dem wir die
Wachstumspriifungen durcb AusgieJSen von Agarplatten und
Auszahlen der gewachsenen Kolonien ausfflhrten:
TabeUe IV.
n/ 10 Natrium ace tat
i
i
1
1
1
1
1
1
n/ I( j Essigsiiure
n. Essigsiiure
0,25
0.5
1
2
4
8
—
—
—
—
1
—
—
—
1,6
3,2
VVasser
8,75
8,5
8
7
5
1
7,4
5,8
Je eine Platinose Bacterium coli
Zahl der gewachsenen Kolonien
nach 24-stiindiger Einwirkung
CXI X 100
50
5
0
0
0
48
oc | oo | 0
0
0
0
0
0
[H-] I
0,5 -It )- 6 1-10— 5 .2-10— s j
4-10— 6 |
8-10— 5 ,1,6-10— 4 1
310—7-10— 4
Hier markiert sich noch deutlicher die Tolerabilitats¬
grenze: bei 1*10 -6 flberhaupt keine merkliche Schadigung,
bei 2-10 -5 sind nach 24 Stunden nur noch verschwindende
Reste, nach 48 Stunden gar keine Bakterien mehr am Leben.
Zusammenfassung.
Die Wasserstoffionenkonzentration von 1*10~ 5 hat also
fflr das Bacterium coli die Bedeutung, daB es erstens der
hbchste Aciditatsgrad ist, den das Bakterium bei 37° auf die
Dauer ohne merkliche Schadigung ertragen kann, und daB es
zweitens diejenige Aciditat ist, welche das Bacterium coli in
Milchzuckerkulturen bei 37° zu erzeugen imstande ist. Wir
haben somit eine for die Biologie des Bacterium coli charak-
teristische Zahl festgestellt, deren Beziebung zu anderen
physikochemischen Eigenschaften des Bacterium coli weiter
untersucht werden muB.
12 *
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174
Eugen Rosenthal
Nachdruck verbolen.
[Aus dem chemisch-biologischen Laboratorium der IV. Abteilung
des St. Rochus-Spitals der Haupt- und Residenzstadt Budapest
(Oberarzt: Prof. Stephan v. T6th).]
Ueber den biologischen Parallelismus der fOtalen und
Krebszellen nebst Beziehnngen ihrer EiweiBe.
Von Eugen Rosenthal.
Mit 6 Kurven im Text.
(Eingegangen bei der Redaktion am 9. Mai 1912.)
Im Anschlufi an eine Versuchsreihe, welche ich in Bezng
auf das biologische Verhalten der fotalen Zellen ausgeffihrt
habe, besch&ftigte ich mich auch mit der Frage, wie sich die
fdtalen Zellen dem Carcinomserum gegeniiber verhalten. Meine
diesbezflglichen Versuchsergebnisse habe ich in dem be-
treffenden Aufsatz*) bereits kurz erwahnt, indessen mochte ich,
bei dem besonderen Interesse, welches sich an diese Versuche
knfipft, dieselben von einem andern Standpunkt besprechen,
zumal sie in dieser Richtung mit Heranziehen ganz anderer
Versuchseinrichtungen ergfinzt wurden.
In der obenerwfihoten Mitteilung berichtete ich fiber Ver¬
suche, in ich welchen fotale Zellen mit dem Blutserum ver-
schiedener Herkunft untersuchte.
In die Einzelheiten der diesbezfiglichen Technik mochte
ich hier nicht eingehen, dieselbe ist in den Mitteilungen von
Freund und Kaminer 1 2 3 * ), in den Verfiffentlichungen von
R. Kraus und seinen Mitarbeitern 8 ) sowie an obiger Stelle
eingehend besprochen, weshalb ich auf dieselbe verwiesen
haben will. — Nur ganz kurz mbchte ich erwfihnen, daB man
mit Hilfe dieser Methodik Zellemulsionen fotaler Organe
1) Eugen Rosenthal, Untersuchungen iiber das biologische Ver¬
halten der fotalen Zellen. Gynakologische Rundschau, Bd. 6, 1912, Heft 7.
2) Freund und Kaminer, Biochem. Zeitschr., 1910; Wiener klin.
Wochenschr., 1910, No. 34.
3) Kraus und v. Graff, Wiener klin. Wochenschr., 1911, No. 6;
Kraus, v. Graff und Ranzi, Wiener klin. Wochenschr., 1911, No. 28.
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Ueber den biologischen Parallelismus der fotalen und Krebszellen. 175
(Leber yon Foten vom 4.—6. Monat, fbtaler Teil der Placenta)
erbalten kann, deren Dichte man durch ZShlung in der
Thoma-ZeiBschen Rammer feststellen kann.
Der Versuch wird dann in der Weise angestellt, daS man in ein
kleines Reagenzrohr Blutserum und Zellemulsion abfiallt, wobei man die
letzteren in einer solchen Verdiinnung zum Versuch heranzieht, dafi auf
v„ cmm einer Thoma-Zeifischen Kammer etwa 20 Zellen fallen. Die
so beschickten Kohrchen kommen dann unter Einschaltung der notigen Kon-
trollen (Zellemulsion + phys. NaCl-Losung) auf 24 Stunden in den Thermo-
staten; dann folgt eine zweite Zahlung, welche dann, mit dem Ergebnis der
ersten Zahlung verglichen, das Resultat des Versuches vorstellt. Eine ge-
wisse Losung tritt auch stets bei der Kochsalzkontrolle ein (etwa bis
25 Proz.), so dafi nur eine starkere Losung einer Serumwirkung zugeschrieben
werden kann 1 ).
Mit dieser Methodik wurden dann meine Versuche aus-
gefilhrt.
In einer Reihe von Experimenten wurde das Verhalten
der fStalen Zellen zum Serum von Graviden studiert, in einer
weiteren Reihe wurden erstere mit fdtalem Serum zusammen-
gebracht und schlieBlich wurde in dieser Richtung auch das
Serum von Eklamptischen untersucht. — Diese Versuche er-
gaben zun&chst, daB im Serum nicht gravider, wie im Serum
gravider Individuen cytolytische Substanzen vorhanden sind,
welche fdtale Zellen auflSsen, ferner, daB diese Stoffe im
Nabelschnurserum fehlen. Bei Eklamptischen war unmittelbar
nach dem Anfall eine stark herabgesetzte Losungskraft des
Serums vorhanden, welche in den F&llen, wo Heilung eintrat,
alsbald zur Norm zuriickkehrte, so daB am 5. oder 6. Tag
auch dem Serum eklamptischer Frauen eine ziemlich normale
Ldsungsf&higkeit zukam. Wo hingegen die Eklampsie einen
todlichen Verlauf nahm, konnte ich nach dem 1. Tag keine
Zunahme, sondern eine weitere Abnahme der cytolytischen
FShigkeit des Serums beobachten. Allerdings mochte ich be-
merken, daB, wenn man auch geneigt w&re, diesen zahlen-
mSBigen Ausdruck der weiteren Abnahme in die Fehlergrenzen
der Versuchsordnung hineinzubeziehen, daran festzuhalten ist,
daB in dem Fall, wo der eklamptische Anfall einen
tddlichen Ausgang zur Folge hatte, am 2. Tag
1) Das Serum von gesunden normalen Individuen lost etwa 60—80
Proz. der Zellen auf.
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176
Eugen Rosenthal,
keine erhShte LSsungsfahigkeit im Serum zu
fin den war, im Gegensatz zu meinen anderen 3 Fallen, wo
bereits am 2. Tag ein zuweilen erheblicher Anstieg der
LSsungskraft zu beobachten war. — Auf Grund dieser Ver-
suche muBte also die Eklampsie mit dem Mangel vou cyto-
lytischen Substanzen im Serum, Oder allgemeiner mit eiuer
Reaktionsunfabigkeit des mtitterlichen Organismus in Ver-
bindung gebracht werden. Nach diesen Versuchsergebnissen
ware also der physiologische Verlauf der Schwangerschaft und
das Zustandekommen der Eklampsie in der Weise aufzufassen,
daB nach Eintritt der Schwangerschaft im Sinne der Schmorl-
schen Befunde 1 ) und der von Veit 2 ) festgestellten Zotten-
deportation auch unter physiologischen Bedingungen fOtale
Zellen in die miitterliche Blutbahn gelangen; die hier vor-
handenen cytolytischen Substanzen losen diese Zellen auf, so
daB sie mehr kleine korpuskulare Elemente vorstellen und
daher zu keinen mechanischen Storungen AnlaB geben kbnnen.
Tritt eine Verminderung jener cytolytischen Substanzen ein,
so entstehen pathologische Zustande, namentlich Eklampsie.
Diese Insuffizienz der cytolytischen Substanzen kann natttrlich
eine relative und eine absolute sein, denn es kbnnen einer-
seits mehr fbtale Zellen als gewohnlich in den Kreislauf ge¬
langen, anderseits kann eine Armut des Organismus an cyto¬
lytischen Substanzen vorhanden sein. — Die Ursache der
Eklampsie liegt also in einem MiBverhaitnis,
welches zwischen den in das mfitterliche Blut
eingeschwemmten fOtalen Zellen und den ent-
sprechenden Reaktionsprodukten des mtitter-
lichen Organismus besteht.
Da sich die mangelhafte Reaktion des miitterlichen Or¬
ganismus nicht nur auf die Erzeugung von Syncytiolysinen
beschr&nkt, so daB es auch zu einer fehlenden Produktion von
Antisynzytioendotoxinen kommt, kreisen auch diese unabge-
sattigt im Blut. Es besteht also eine Reaktionsunfabigkeit des
1) Schmorl, Pathologisch-anatomische Untersuchungen uber die
puerperale Eklampsie, Leipzig 1893 — Zur Lekre der Eklampsie. Arch. f.
Gyn., Bd. 65, 1902, Heft 2.
2) Veit, Ueber Deportation von Chorionzotten. Zeitschr. f. Geburtsh.
u. Gyn., Bd. 44.
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Ueber den biologischen Parallelismus der fotalen und Krebszellen. 177
mfltterlichen Organismus, welche eine mangelhafte Produktion
der betreffenden Reaktionskfirper (Syncytiolysine, Antisyncytio-
endotoxine Weichardts) zur Folge hat.
Mit anderen Versuchsergebnissen und Yorstellungsweisen
tiber die Entstebung der Eklampsie, welche mit einer ganz
verschiedenen Methodik angestellt und aus ganz differenten
Ausgangspunktenausgefflhrt wurden [Weichardt 1 ),Abder-
halden, Freund und Pincussohn 2 3 )], lied sich obiger Ge-
dankengang sehr gut in Einklang bringen, so dad ihre gegen-
seitige Bestatigung wohl als ein ganz auffallendes Zeichen
ihrer Richtigkeit betrachtet werden kann. — Die diesbezflg-
lichen interessanten Details sollen indessen an dieser Stelle
keine nahere Besprechung linden und es sei diesbezOglich auf
meinen eingangs angefflhrten Aufsatz verwiesen.
Wahrend der Drucklegung meiner diesbezttglichen Arbeit
erschien eine Mitteilung von R. Kraus, Ishiwara und
Winternitz 8 ) tiber das Verhalten fOtaler Zellen gegentiber
N abelschnurserum und Retroplacentarserum. Insofern sich
der Gegenstand unserer Untersuchungen deckte, konnten durch
die Versuchsergebnisse dieser Autoren meine Angaben eine
Bestatigung linden, indem auch Kraus, Ishiwara und
Winternitz zu dem bereits oben angefflhrten Resultat
kamen, dad embryonale Zellen durch das mfltterliche Serum
aufgeldst werden, dad dagegen eine Ldsung ausbleibt, wenn
man dieselben mit Nabelschnurserum zusammenbringt. Auch
sie machen auf die auffallende Tatsache aufmerksam, dad sich
bier die Embryonalzellen genau so verhalten, wie die Carcinom-
zellen in den Versuchen von Kraus und v. Graff 4 ), in
welchen bekanntlich beobachtet werden konnte, dad Krebs¬
zellen vom mfltterlichen Serum gelflst werden, wogegen die
1) Weichardt, Experimentelle Studien uber die Eklampsie. Deutsche
med. Wochenschr., 1902, No. 35, und 1906, No. 46; Hygien. Rundsch.,
No. 10. — Weichardt, Mosbacher und Engelhorn, Arch. f. Gyn.,
Bd. 94, Heft 3.
2) Abderhalden, Freund und Pincussohn, Prakt. Ergebnisse
der Geburtsh. u. Gyn., 1910.
3) Kraus, Ishiwara und Winternitz, Deutsche med. Wochen-
schrift, 1912, No. 7.
4) Kraus und v. Graff, 1. c.
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178 Eugen Rosenthal,
L6sung bei Nabelschnurserum und Carcinomserum nicht vor-
handen ist.
Wie ich bereits an anderer Stelle (1. c.) kurz berichtete,
wurden dann diese Versuche in der Richtung fortgeftthrt, daB
ich Embryonalzellen mit dem Serum Krebskranker zusammen-
brachte; solche Versuche wurden von mir in 11 Fallen aus-
geftihrt, davon 5mal mit positivem Erfolg, d. h. in diesen
Fallen verhielt sich das Serum von Carcinomatbsen genau so,
als waren die betreffenden Zellen Krebszellen gewesen 1 ).
Die diesbezuglichen Resultate sind flbrigens in der folgen-
den Tabelle zusammengestellt:
Losung n. 24 Std. in Proz.
Fall
1.
Care.
ventriculi
72
ff
2.
ff
coli
7
3.
ff
uteri
12
ff
4.
ff
cervicis
49
ff
5.
ff
mammae
86
n
6.
ff
ventriculi
16
9)
7.
ff
ff
62
j>
9.
ff
recti
14
if
9.
ff
uteri '
78
ff
10.
*9
ves. felleae
8
>1
11.
Hypernephroma
69
Die Reaktion trat also in den Fallen 2, 3, 6, 7 und 10
in positivem Sinn in Erscheinung, wahrend ich mit den
tlbrigen Carcinom seris mehr oder weniger normale Werte er-
hielt. Aus diesen Versuchen schien also hervorzugehen, daB
die Krebs- und Embryonalzelle bei Anwendung derFreund-
Kaminerschen Zellreaktion eine identische Reaktion geben
und daB zwischen ihnen ein gewisser biologischer Parallelismus
besteht. — Meiner Ansicht nach ist die Annahme eines solchen
berechtigt, da einerseits Krebszellen, anderseits Embryonal¬
zellen vom miitterlichen Serum gelbst und vom Nabelschnur¬
serum nicht geldst werden, und anderseits sich beide Zell-
arten dem normalen und Krebsserum gegenilber gleich ver-
halten.
Es war nun von ganz besonderem Interesse, der Frage
naher zu treten, ob es etwa moglich ist, diesen so auffallenden
1) Inzwischen erschien eine weitere Mitteiliuig von Kraus und
Ishiwara (Wiener klin. Wochenschr., 1912, No. 16), in welcher iiber
analoge Resultate berichtet wird.
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Ueber den biologischen Parallelismus der fotalen und K rebszellen. X79
Parallelismus zwischen Krebs- und Embryonalgewebe auch
auf eine andere Weise nachzuweisen. Zu diesem Zwecke
machte ich zunfichst mit der Weichardtschen Epiphanin-
reaktion einen Versuch, zumal mir andere Methoden zum
Nachweis solcher Feinheiten zu wenig empfindlich schienen.
Auf die Beschreibung der diesbezflglichen Technik kann ich
an dieser Stelle nicht eingehen und radchte hier nur bemerken,
daB wir nach den neueren Erfahrungen in der Epiphanin-
reaktion eine Methode in der Hand haben, welche zum Nach¬
weis und zum Studium von Eiweifiarten ganz besonders ge-
eignet erscheint. Ihr Prinzip beruht darauf, daB der Phenol-
phthaleinumschlagspunkt in einem Baryt-Schwefelsauresystem
in Gegenwart von Antigen-Antikorper in einer bestimmten
charakteristischen Weise beeinfiufit wird. In unserem Fall
wurde zuerst aus womoglich jungen (ca. 1 cm langen) Mause-
embryonen ein Glyzerinwasser-Antigen x ) hergestellt. Mit dem-
selben wurden 2 Meerschweinchen behandelt, indem diese am
1., 4, 8. und 12. Tag des Versuches je 2 ccm des Glyzerin-
wasser-Antigens erhielten. Am 18. Tag erfolgte die Ent-
Kurve 1. Kurve 2.
Kurve 1. Mauseembryonen-Antigen. Serum eines mit demselben be-
bandelten Meerechweinchens.
Kurve 2. Mauseembryonen-Antigen. Serum eines zweiten mit dem
selben behandelten Meerechweinchens.
1) Ueber Technisches siehe Eugen Rosenthal, Experimcntelle
Studien fiber die Epiphaninreaktion. I. Mitteilung. Zeitschr. f. Immuni-
tatsforechung, Bd. 13, 1912, p. 383.
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180
Eugen Rosenthal,
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blutung der Tiere and das gewonnene Serum kam dann zur
Untersuchung. Das Resultat beider Versuche war ein posi¬
tives, iodem ich im ersteu Fall eiue deutlich positive Kurve
erhielt (Kurve 1), wahrend im zweiten Versuch ein ungemein
starker positiver Ausschlag zu erhalten war (Kurve 2).
Die vor der Immunisierung
ausgefflhrte Untersuchung der
Sera fiihrte zu einem negativen
Ergebnis: der Verlauf dieser
Kurven ist in den obigen
Figuren punktiert gezeicbnet.
— In einem dritten Versuch
wurde ein Meerschweinchen
mit M&usecarcinoraantigen ge-
nau in derselben Weise be-
handelt, wie die beiden obi¬
gen Tiere mit dem M&use-
embryonenantigen. Die Unter¬
suchung des am 17. Tag des
Versuches gewonnenen Serums
ergab die in Fig. 3 gezeichnete
positive Kurve (nebst dem
punktiert gezeichneten Anfangswert). Nun wurde in weiteren
Versuchen die Einrichtung derselben in der Weise variiert,
;I ? e
Serum des mit demselben behandelten
Meerschweinchens.
Kurve 4. Kurve 5.
Kurve 4. Mauseembrvonen-Antigen. Maiisekrebs-lmmun serum.
Kurve 5. Miiusekrcbs-Antigen. Mauseembryonen-lmmunserum.
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Ueber den biologischen Parallelismus der fotalen und Krebszellen. Jgl
dafi das MSusekrebsimmunserum mit dem MSuseembryonen-
antigen undumgekehrt M&usekrebsantigen mitMSuseembryonen-
immunserum zusammengebracht wurde. Das Resultat dieser
Versuche war ein ganz eindeutiges: die im ersten Fall er-
haltene positive Kurve ist in Fig. 4 zu sehen, die im zweiten
Versach erhaltene, vielleicht etwas starker positive Kurve ist
in Fig. 5 wiedergegeben.
Wenn man diese Versuche aus dem weiter oben be-
sprochenen Standpunkt betrachtet, so mull man daran fest-
halten, dafi zwischen dem Eiweifi der Krebs- und
Embryonalzellen dieselben Beziehungen zu be-
stehen scheinen, welche zwischen den betreffen-
den Zellen selbst festgestellt werden konnten,
indem das Mausekrebsantigen mit dem Mauseembryonen-
immunserum und das Mausekrebsimmunserum mit dem M&use-
embryonenantigen positiv reagierte; die Reaktion fiel also
ebenso aus wie im Versuch, wo die zusammengehdrigen
Antigene zusammengebracht wurden.
Es ist daher anzunehmen, dafi zwischen fStalen und
Carcinomzellen nicht nur in
den biologischen Funktionen «•
bzw. in ihrem Verhalten bei 4.
der Freund-Kaminer- s .
schen Zellreaktion ein Pa- lm
rallelismus vorhanden ist, ^
sondern, dafi auch zwischen +
den EiweifikSrpern dieser * io 1 io ? io 3 io 4 io 5 io‘ 10
Zellen so nahe Beziehungen 1 '
bestehen, dafi diese mit *■
einer so feinen und em- 3 -
pfindlichen Methode, wie
es die Epiphaninreaktion
ist, voneinander nicht zu v . . ..
trennen Sind. Erwahnen gen. Menschenkrebs-Meerschweinchen-
mbchte ich noch, dafi immunserum.
das Mauseembryonenanti-
gen mit einem Menschencarcinom - Meerschweinchenimmun-
serum eine negative Reaktion gab (Kurve 6). Mit dem dazu
immun serum.
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182 Eugen Rosenthal.
gehdrigen Antigen erhielt ich dagegen eine sehr starke
positive Reaktion x ).
AuBerdem mdchte ich auf einige weitere Vergleichs-
punkte aufmerksam machen, welche zwischen dem fdtalen
und Krebsgewebe bestehen, und welche geeignet sind, den
zwischen diesen Geweben vorhandenen Parallelismus auch in
einer anderen Richtung erkennen zu lassen. Es ist nSmlich
seit den Versuchen von E. Petry 1 2 ) bekannt, dafi im Tumor-
gewebe die autolytischen Vorg&nge gesteigert sind. Eine
diesbezilgliche Angabe betreffend der Autolyse fbtaler Organe
fand ich in Oppenheimers „Fermente tt : die betreffenden
Versuche wurden von Schlesinger 3 ) ausgefuhrt und
zeigen, daB die Autolyse erabryonaler Organe ebenfalls ge¬
steigert ist.
Wir wissen ferner, daB der Katalasegehalt der Tumoren
stark herabgesetzt ist [B1 u m e n t h a 1 und Brahn 4 )]; hier-
mit ist der Befund von Batelli und Stern 5 ) in Parallele
zu setzen, wonach auch die fbtalen Organe wenig Katalase
enthalten. Ferner konnten Lockemann und Thies 6 ) fest-
stellen, daB das Blut von Kaninchenfoten weniger Katalase
enth< als das Blut des Muttertieres.
Wir sehen also, daB das fbtale und Krebsgewebe auch
in Bezug auf den Katalasegehalt, wie auch beim Autolyse-
versuch ein gleiches Verhalten aufweisen.
1) Siehe Kurve 11 in der IV. Mitteilung meiner experimentellen
Studien mit der Epiphaninreaktion. Zeitschr. f. Immunitatsf., 1912.
2) E. Petry, Ein Beitrag zur Chemie der malignen Geschwiilste,
Zeitschr. f. physiol. Chemie, 1899 und Beitr. zur chem. Physiol, u. Pathol.,
Bd. 2 f 1902.
3) Schlesinger, Hofmeisters Beitriige, Bd. 4, 1903, p. 87, zit. nach
Oppenheimer.
4) Blumenthal und Brahn, Med. Klinik, 1909, Xo. 1; Brahn,
Sitzungsbericht der preuS. Akad. der Wissensch., 1910.
5) Batelli und Stern, zit. nach v. Dalmady und v. Torday,
Wiener kiln. Wochenschr., 1907, No. 10, p. 461.
6) Lockemann und Thies, Biochem. Zeitschr., Bd. 25, Heft 2
und 3.
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Ueber den biologischen Parallelismus der fotalen und Krebszellen. 183
Der von uns eben entwickelte Parallelismus ist somit
ein ziemlich weitgehender: er bezieht sich einerseits auf das
Verhalten der Krebs- und Embryonalzellen bei den oben be-
schriebenen Zellversuchen, auf die Reaktionsweise bei der
Epiphaninreaktion und schliefilich auf den Gehalt bestimmter
Fermente 1 ). Durch die Annahme dieses biologischen Paral¬
lelismus soil indessen nicht die Identity dieser Zell-
arten etwa im Sinne der Cohnheimschen Theorie be-
hauptet werden, denn diese wird heute ebenso wie die
fibrigen Embryonaltheorien von den verschiedensten Seiten
mit gewichtigen Einw&nden abgelehnt 2 3 * * * ), welche durch die
vorliegenden Befunde natiirlich nicht beeinflufit werden
kdnnen.
Es ist vielmehr daran festzuhalten, dafi das Wachs-
tum an und fttr sich in der Struktur der Zelle,
vielleicht in ihrem physikalischen oder che-
mischen Aufbau, solche biologische und funk-
tionelle Eigenschaften erzeugt, welche dann in
einer Shnlichen 8 ) oder gar identischen Reaktions¬
weise zum Ausdruck kommen. Ich mochte also an-
nehmen, dafi die spezifischen Zellfunktionen in diesen Zellen
entweder noch nicht vorhanden sind (Embryonalzellen) oder
bereits vorhanden waren und verloren gingen (z. B. eine Zelle
eines Adenocarcinoms im Magen) gegentiber der proliferativen
Tendenz, welche in den Vordergrund tritt. Dadurch, dafi
1) Bemerken mochte ich, dafi dieser Parallelismus noch weiter vertieft
werden kann: ich erwahne nur, dafi das Wachstum fotaler Organe, ebenso
wie das von Tumorgewebe zur Ausscheidung von Oxyprote'insauren fiihrt
(Salomon und Saxl); femer weist auch Edwin E. Goldmann darauf
hin, dafi „Foetus und maligne Neubildung zum mindesten ahnliche Wuchs-
stoffe aus dem Muttertier vermoge der ihnen in exzeptioneller Weise zu-
stehenden Absorptionsenergie extrahieren".
2) Diesbeziiglich sei auf die Darstellung von C. Lewin in seiner
Monographie „Die bosartigen Geschwiilste" verwiesen, insbesondere auf den
Abschnitt: Eritik der Embryonal theorie (p. 187).
3) da Krebszellen in den letzten Monaten der Graviditiit nicht oder
nur wenig gelost werden (Kraus und v. Graff), wiihrend ich selbst in
den letzten Monaten der Schwangerschaft eine normale Losung der
Embryonalzellen beobachtete (1. c.).
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184
Eugen Rosenthal,
von den der Zelle zur Verfiigung stehenden
Energiemengen nur relativ wenigzur Verrichtung
spezifischer Zellfunktionen, relativ viel dagegen
zum Wachstum und zur Vermehrung verbraucht
wird, ist es moglich, daB hierdurch eine Ver-
schiebung in der quantitativen und qualitativen
VerteilungderZellbausteine stattfindet, und daB
die auf diese Weise bedingte Ver&nderung der
Zellstruktur eine verSnderte biologische Re-
aktionsweise hervorruft. Die Richtigkeit dieses Ge-
dankenganges scheinen eben diese vorl&ufig noch wenigen
Versuche zu stiitzen, welche ich mit Leberzellenemulsionen
Neugeborener angestellt habe. Dieselben sind nicht zahlreich
genug, um auf sie n&her eingehen zu kbnnen, nur mbchte
ich bemerken, daB ich nach meinen bisherigen diesbezflglichen
Erfahrungen ira Nabelschnurblut meist hbhere Lbsungswerte
erhielt (zwischen 24 und 38 Proz.) als mit der Leberzellen-
emulsion vom 4.—6. Monat Oder mit Carcinomzellenemulsion.
Zusammenfassung.
1. In den Versuchen, welche mit fotalen und Krebszellen
der Freund-Kaminerschen Zellreaktion bisher angestellt
wurden, zeigte sich, daB dieselben einen weitgehenden Paral-
lelismus aufweisen, da Carcinom- und Embryonalzellen
a) in zahlreichen Fallen vom Serum krebskranker Men-
schen nicht gelost werden,
b) da diese Zellen vom Serum gesunder Individuen ge¬
lost werden; ferner,
c) da sie vom Serum gravider Frauen gelbst werden
und schlieBlich
d) da dieselben vom Nabelschnurserum nicht gelost
werden.
2. Das Serum krebskranker Menschen und das fbtale Serum
(Nabelschnurserum) verhalten sich bei der Zellreaktion ganz
gleich, indem sie weder Krebszellen, noch fbtale Zellen zu
Ibsen imstande sind.
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Ueber den biologischen Parallelismus der fotalen und Krebszellen. Jg5
3. Einen weiteren Vergleichspunkt in dieser Richtung
stellt das biologische Verhalten der betreffenden EiweiBkSrper
vor: das Serum der mit M&use-EmbryoneneiweiB bebandelten
Meerschweinchen reagierte bei der Epiphaninreaktion mit
dem M&usekrebsantigen, und umgekehrt M&usekrebs-Meer-
schweinchenimmunserum gab mit M&useembryonenantigen
eine positive Reaktion. Die Reaktion trat dagegen nicht in
Erscheinung, als zu diesem letzteren Versuch anstatt MBuse-
krebs - Meerschweinchenimmunserura Menschenkrebs - Meer-
schweincbenimmunserum herangezogen wurde.
4. Fbtale Gewebe zeigen ebenso wie Krebsgewe"be eine
gesteigerte Autolyse; ferner ist bei denselben die Menge der
Katalase vermindert.
5. Es ist anzunehmen, daB das Wachstum an und fflr
sich in der Struktur der Zelle, vielleicht in ihrem physi-
kalischen oder chemischen Aufbau solcbe biologische und
funktionelle Eigenschaften oder Ver&nderungen erzeugt, welche
dann in einer Shnlichen oder identischen Reaktionsweise zum
Ausdruck kommen.
6 . Es kann also auf Grund dieser Versuche angenommen
werden, daB zwiscben dem biologischen Verhalten der fotalen
und Krebszellen, sowie zwischen ihren EiweiBarten ein deut-
licher und weitgehender Parallelismus vorhanden ist, welcher
durch Heranziehen feiner biologischer Methoden nachweisbar
ist, und welchen ich im Sinne der obigen Betrachtungen
deuten mochte.
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186
Ludwig G6zony,
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JSachdruck verboten,
[Aus dem Bakteriologischen Institut der Universit&t in Budapest
(Direktor: Prof. Dr. Hugo Preisz).]
1st die normale Serumbakterlzldle komplex?
Von Dr. Ludwig Qozony, Assistent.
(Eingegangen bei der Redaktion am 13. Mai 1912.)
Wie erklSrt sich die Erscheinung, daB gelegentlich des
Auftretens von Seuchen, wo jedes Individuum der Infektion
in gleichem MaBe ausgesetzt ist, nur ein gewisser Teil der
bedrohten Menschen Oder Tiere erkrankt?
Woher kommt es, daB eine Tierart empfanglich, die andere
dagegen einer gewissen Infektion gegenflber refrakt&r ist?
Diese Fragen waren es, welche zum raschen Ausbau der heutigen
Serologie den Anstofi gaben, wobei Metschnikoff zum Begriinder der
Phagocytosetheorie und Fodor zum Begriinder der Lehre von der Serum-
bakterizidie wurde und die Forscher sich in zwei Lager schieden.
Die Anhanger der Phagocytosetheorie erblickten ausschliefilich in den
Leukocyten die Verteidiger des Organismus gegen die Bakterien, die An¬
hanger der Fodor-Buchnerschen Schule dagegen in der bakterien-
tdtenden Fahigkeit des normalen Serums, obgleich schon Buchner selbst
anerkennt, „da6 eine gewisse Uebereinstimmung zwischen der bakterien-
totenden Wirkung des Blutes und der Leukocytenmenge besteht a , und
seiner Ansicht nach es sogar die Leukocyten sind, die den bakterientoten-
den Stoff des Serums ausscheiden.
Metschnikoff und seine Schuler bleiben aber bei der Ansicht, daB
die Ursache der Immunitat blofi in den Phagocyten zu finden sei, und
wenn das Serum bakterien to tend wirkt, so kann dies nur eine postmortale
Erscheinung, namlich die Folge des Leukocytenzerfalles sein.
Ein langwieriger Streit entfaltete sich um diese Frage, in welchem
die Beweiskraft jedes einzelnen experimentellen Besultates der Metschni¬
koff schen Schule duroh ebenso viele Versuchsresultate der Gegenpartei
geschwacht wurde, bis man endlich durch langwierige Experimente zur
Erkenntnis gelangte, daB bei der Immunitat sowohl die Phagocyten wie
auch die bakterientotenden Stofle des Serums eine Rolle spielen.
Die im Serum von Denys, Neufeld und Wright entdeckten
Opsonine, die Entdeckung der Anaphylaxie iiberbriicken allmahlich die
Leere zwischen der Metschnikoff schen und Buchner schen Schule.
Nach und nach nimmt man die Giiltigkeit der auf das „balancement orga-
nique“ von Etienne Geoffroy de Saint-Hilaire aufgebauten Kor-
relationslehre hier an, nach w’elcher: „im belebenden Organismus alles zu-
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1st die normale Serumbakterizidie komplex?
187
saramenhangend ist, es findet sich keine unabhangige Funktion, kein Organ,
dessen Form und Bau nicht von alien anderen Korperteilen beeinflufit ist“,
denn nur bo kann sich der Organismus gegen die Injektionskeime wehren.
Der Kampf beider Schulen nahm die Forscher derart in Anspruch,
daS die Ermittlung des Wesens der normalen Serumbakterizidie in den
Hintergrund gedrangt wurde. Ferner, ale der Streit zwischen beiden
Schulen sich legte, lenkte die Entdeckung der Seramhamolyse, der Glo-
bulizidie, die Aufmersamkeit von der Erforschung der Bakterizidie ab.
Aus den Untersuchungen Fodors und Buchners war es bekannt,
dafi die bakterientotende Fahigkeit des Serums durch Erwarmung auf
50—60° C erlischt; spater erkannte man bei den Serumhamolysinen ein
ahnliches Verhalten. Alsbald aber kommt man zur Erkenntnis, dafi das
durch Erwarmung unwirksam gemachte Serum seine blutkorperlosende
Wirkung wieder gewinnt, wenn man es mit frischem Serum versetzt, wenn
auch letzteres allein die Blutkorper nicht zu losen vermag. — Rote Blut¬
korper, mit aktivem hamolytischen Serum versetzt, losen sich im Eisschrank
nicht auf, und wird die von den gesetzten Blutkorperchen abgesaugte
Fliissigkeit mit physiologischer NaCl-Losung ersetzt. so ldsen sich die
Blutkorperchen auch bei 37° nicht, so wie die abgesetzte Fliissigkeit auch
nicht mehr ldsend wirkt auf frische rote Blutkorper. Wurde aber die
abgesaugte Fliissigkeit zu den im Eisschrank gestandenen Blutkorperchen
zuriickgegeben, so losten sich letztere bei hoherer Temperatur; ebenso wirkt
die abgesaugte Fliissigkeit im Verein mit inaktivem Serum auf frische Blut¬
korper losend.
So gelang es, den Beweis zu erbringen, dafi auch die normalen Hamo*
lysine aus einem thermolabilen und thennostabilen Teil bestehen. Im Eis¬
schrank bindet sich der thermostabile Teil (Ambozeptor) an die roten Blut¬
korperchen, I6st sie aber nicht auf, denn er benotigt des anderen, des
thermolabilen Teiles (Komplement). Kurz, die Hamolyse der Sera erwies
sich als komplex.
Diese Versuchsergebnisse libertrug man per analogiam
auf die normalen bakteriziden Sera, ohne dafttr Experimente
zu bringen.
Zwar schienen die Pfeifferschen Versuche dies zu
rechtfertigen, denn das auf 60° erwSrmte normale Ziegenserum,
das seine totende Kraft auf Choleravibrionen in vitro verlor,
schfltzte dennoch Meerschweinchen vor der Infektion.
Aber diese Frage lSBt sich mit dem Tierexperiment kaum
entscheiden, da im Organismus des Tieres im Kampfe gegen
die Bakterien nicht nur das Serum, sondern auch andere Stoffe
eine Rolle spielen.
Wir miissen daher die Frage, ob die normalen bakteriziden
Stoffe komplex sind, als unentschieden betrachten.
Zeitwhr. f. ImmunitHtsforschung. Ortg. Bd. XIV. 13
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188
Ludwig G6zony,
Es ist bekannt, dafi das normale bakterizide Serum,
ebenso wie das h&molytische, durch Erw&rmen inaktiv wird.
Angenommen, dafi der bakterizide Stoff gleichfalls komplex
ist und aus einem thermostabilen und thermolabilen Teil be-
steht, so wird durch Erw&rmen nur der labile Teil zerstOrt;
wird nun das erwfirmte Serum durch Zusatz eines Serums,
welches fflr sich die zum Experiment bentitzten Bakterien
nicht zu tdten vermag, wieder bakterizid, so ist der Beweis
erbracht, dafi die normale Serumbakterizidie auch auf einer
komplexen Wirkung beruht.
Ich untersuchte nun, wie sich in dieser Hinsicht die ver-
schiedenen Normalsera den verschiedenen Keimen gegenflber
verhalten.
Bei dem ersten Versuch (Tabelle I) beschickte ich 0,2 ccm Serum von
verschiedenen Tieren mit verschiedenen Bakterien, nach 2-stiindigem Be-
lassen im Brutschrank wurden die Bohrchen mit fliissigem Agar aufgefiillt
und zu Platten gegossen, um die Anzahl der am Leben gebliebenen Keime
festzustellen.
Tabelle I.
Verimpft mit
Serumart
B. an-
thracis
6080
V.cho-
lerae
2800 j
B. coli
32 000
B. cuni-
culicidae
64 750
B.dysen-
teriae
6720 |
V. Metsch-^B. rhino-
nikoffi 8clerom.
5800 29 600
Staphylo¬
coccus
6682
B.
typhi
7000
Tau be I
12800; .
Keimzahl
1 3 2001 1 702 1
nach 2 Stunden
I 0 1 0
; 0
52 800 1
Ente
1 104
.
7 520
1850
0
0
! 0
8000
—
Katze
j 6 720
7 938
! 30560
0 1
0
i 118
2046 ,
—
Kaninch.
! o
0
14 400
j 22 400
0
0
0
285
—
Schwein
6200
i #
6880
35 688
0 1
0
1 o
10880 ;
—
Meerschw.
2400
1
•
31060
2205 '
0
! o
1
—
Wie aus der Tabelle I ersichtlich, toten die
SeraverschiedenerTiereimallgemeinendieselben
Bakterienarten und auch in Hhnlichem Mafie.
Blofi der Staphylococcus wird von Kaninchenserum
ziemlich gut getotet, von den anderen dagegen
kaum, vom Entenserum aber iiberhaupt nicht.
Wird nun das Kaninchenserum inaktiviert und dadurch
fur Staphylokokken unwirksam, vermag es aber, mit frischem
Entenserum versetzt, welches allein sie ebenfalls nicht tStet,
die Staphylokokken wieder zu toten, so ist anzunehmen, dafi
die staphylokokkentotende Wirkung des Kaninchenserums
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1st die normale Serumb&kterizidie komplex?
189
komplex ist; denn das Inaktivieren zerstort bloB den thermo-
labilen Teil, w&hrend die Ambozeptoren wirksam bleiben und
durch das Komplement des Entenserums ergfinzt werden.
Ich inaktivierte nun Kaninchenserum durch Erw&rmen
V, Stunde auf 56° und setzte frisches Entenserum hinzu. In
einem solchen Gemisch wurden aber Staphylokokken nicht
abgetdtet, sondern sie vermehrten sich sogar stark darin.
Durch zahlreiche Bakterizidieversuche erfuhr ich, daB
durch Vermengung zweier verschiedener bakterizider Sera die
Bakterizidie sich aufhebt, was auch schon Buchner fest-
gestellt hatte.
Das inaktive Kaninchenserum enth< Ambozeptoren, die
mit Staphylokokken verimpft von diesen auch fixiert werden,
und die Wirkung des Komplementes des Entenserums gelangt
moglicherweise nur deshalb nicht zur Geltung, weil das EiweiB
des Kaninchenserums es daran verhindert, wie folgender Ver-
such zeigt.
Zur Siittigung mit Ambozeptoren verimpfte ich inaktiviertes Kanin¬
chenserum mit Staphylokokken, nach Verweilen von */ 4 Stunde im Brut-
schrank und 2 Stunden im Eisschrank schieuderte ich die Kokken aus,
saugte die Fliissigkeit ab und entfernte mittels zweimaligem Waschen mit
5,5 ccm Kochsalzlosung das uberfliissige Serum. Mit den so vorbereiteten
Kokken fuhrte ich folgenden Yersuch durch.
Tabelle II.
Keimzahl
No.
Welches Serum
bei der
Verimpfung
nach
3 Std.
1
0,5 ccm inaktiv. Kaninchenserum + sensibilisierte
Staphylokokken
47 200
96000
2
0,5 ccm aktiv. Kaninchenserum + sensibilisierte
Staphylokokken
22 500
12 800
3
4
0,5 ccm aktiv. Entenserum ]+sensibilisierte /
0,5 ccm inaktiv. Kaninchenser./Staphylokokken/
0,5 ccm aktiv. Entens. -f sensibilisierte Staphylo¬
kokken
60 000
38 800
129 600
34 240
5
0,5 ccm aktiv. Entenserum + nicht sensibilisierte
Staphylokohhen
1100
9 048
Es muB deshalb vor der Hinzufflgung des Entenserums
das tiberfliissige Kaninchenserum entfernt werden. Wenn es
im inaktivierten Kaninchenserum Ambozeptoren gibt, so binden
sie sich an die Kokken, und mittels Ausschleudern kann man
13*
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190
Ludwig G6zony,
das tiberflfissige Kaninchenserum entfernen und sogar die
Kokken durch Waschen vom Serum reiuigen.
Aus der Tabelle II ist ersichtlicb, daB sich die senSi¬
bil isier ten Keime vermehren kbnnen, denn sie pflanzten
sich sowohl im inaktiven Kaninchenserum (1) wie auch im
Gemisch des aktiven Entenserums und inaktiven Kaninchen-
serums fort.
Das aktive Entenserum totete (5) die nicht sensibilisierten
Kokken nicht, nach 3 Stunden vermehrten sie sich auf das
9-fache der ursprfinglichen Menge; dagegen verminderte sich
die Zahl der sensibilisierten Keime wahrend derselben Zeit,
wenn auch nur mfiBig, wobei jedoch in Betracht zu ziehen ist,
daB bei diesem Versuch von den sensibilisierten Coccus im
Verhaitnis zu den nicht sensibilisierten eine 30mal groBere
Anzahl verimpft wurde, und vermutlich reichte der bakterizide
Stoff nicht ffir jeden Coccus aus, deren Vermehrung die
m&Bige Differenz verursachte.
Es scheint sonach in diesem Fall die Staphylokokken-
bakterizidie komplex zu sein.
Nach der Tabelle I kann dieser Versuch mit anderen
Bakterien nicht angestellt werden, denn die verschiedenen
Sera t6ten eigentfimlicherweise dieselben Bakterienarten, sogar
im selben MaBe. Jedenfalls ist dies eine auffallende Erschei-
nung und erweckt den Anschein, als ware bei der normalen
Serumbakterizidie der untersuchten Bakterien ein und derselbe
Stoff wirksam.
Ueber die Ergebnisse der in dieser Richtung veranstalteten
Versuche werde ich spater ausfUhrlicher berichten.
Zur Entscheidung der Komplexitatsfrage muBte ich folg-
lich einen anderen Weg einschlagen.
Betreffs der Hamolyse wissen wir aus Untersuchungen
von Ferrata, Brand, Sachs und Liefmann, daB selbst
das hamolytische Komplement kein einheitlicher Stoff ist,
sondern daB das Komplement in zwei Teile spaltbar ist, in
das sogenannte Mittelstiick und das Endstiick und daB das
erste in der Globulinfraktion, das letztere aber in der Albumin-
fraktion des Serums enthalten ist. Wir wissen ferner, daB
die Globulinfraktion verschiedener Sera sich gegenseitig er-
setzen kann.
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1st die normale Serumbakterizidie komplex?
191
DemgegenUber ist nach Liefmann and Statzer das
die Ambozeptoren des bakteriziden Immunserums sSttigende
Komplement einheitlich und in der Albuminfraktion ent-
halten.
Pick und Meyer fanden, daB die durch Immnnisierung
entstandenen Immunkorper immer in der Globulinfraktion
enthalten sind. Nach ihren Versuchen mit fraktionierter
Ammonsulfatsattigung des immunen Ziegenserums enthalt das
Euglobulin die Choleralysine, und im allgemeinen enthalt das
Albumin niemals Immunkorper, wenigstens kein Agglutinin,
Lysin, Antitoxin und Prazipitin. Folglich sind die Ambozep¬
toren im Globulin, das Komplement dagegen im Albumin ent¬
halten; ist also die bakterientotende Wirkung komplex, so
darf weder die Globulin- noch die Albuminfraktion flir sich
allein Bakterien toten.
Zur Erforschung der Komplexitat der Bakterizidie spaltete
ichnach Liefmanns Methode Kaninchen-undMeerschweinchen-
serum in Globulin und Albumin.
1 ccm Serum wird rait 3 ccm destilliertem Wasser verdiiimt und in
diese Flussigkeit so lange durch Watte filtrierte Kohlensaure gefiihrt, als
Globulin noch ausfallt. Nach dem Ausschleudern der Globulinfiillung
wird die Albuminfraktion vom Bodensatz abgesaugt, das Globulin mit
destilliertem Wasser moglichst albuminfrei gewaschen und endlich in 0,85-
proz. Kochsalzlosung gelost.
Das Albumin wurde mit Ausnahme des ersten Versuches der Tabelle III
isoton gemacht.
Bei samtlichen folgenden Versuchen wurden stets 0,05 ccm der Ge-
mische zu Agarplatten gegossen. In den Tabellen sind dagegen die Zahlen
auf die ganze Fliissigkeitsmenge iibertragen.
Tabelle III.
Vei*suche mit dem gespalteten Kaninchenserum. Verimpft wurde mit
9000 B. dysenteriae.
No.
Welcher Serumbestandteil >
Keimzahl
n. 7 t Std.
n. 3 Std.
n. 24 Std.
1 0,8 ccm Ser.-Alb. +
2 0,8 „ „ + 0,2 ccm Ser.-Glob.
3 0.2 „ Seramglobulin
4 0,2 „ Serum + 0,6 ccm dest. Wasser
17 632
8300
13080
8 341
1180
10200
11 032
5 8-72
400
0
oo
2800
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192
Ludwig G6zony,
Tabelle IV.
Das hamolytische Vermogen des gespalteten Kaninchenserums gegeniiber
1 ccm sensibilisierten Rinderblutkorperchen.
Welches Serum oder Serum-
bestandteil
Grad der Lyse
n. V, Std.
n. 3 Std.
n. 24 Std.
0,8 ccm Serumalbumin
0,2 „ Serum globulin
0,8 „ Ser.-Alb. + 0,2 ccm Ser.-Glob.
0,2 „ Serum + 0,6 ccm NaCl-Losung
schwach
0
miiflig
schwach
0
vollkommen
yy
schwach
0
vollkommen
1 yy
Aus der Tabelle IV ist es ersichtlich, daB die Spaltung
des Serums eiue vollkommene war, denn weder das Albumin
noch das Globulin 15sten in sich allein die Blutkdrperchen,
blofi beide vereinigt. Es ist zu bemerken, daB das Albumin
allein auch eine schwache Lbsung hervorrief, dies ist jedoch
der Hypotonie zuzuschreiben.
Was die Bakterizidie anbelangt (III), so sehen wir, daB
das Serumalbumin allein beinahe ebensogut totet wie Albumin
und Globulin zusammen; daB dies nicht etwa der Hypotonie
zuzuschreiben ist, zeigt der 4. Versuch, wo das mit destil-
liertem Wasser verdfinnte Serum an bakterizider Kraft verlor.
Uebrigens betrachteten wir das Ergebnis bei Versuchen
mit isotonisiertem Albumin.
Tabelle V.
Verimpft wurden 4000 B. dyscnteriae.
No.
Serum resp. Serumbestandteil
Keimzahl
n. V, Std.
n.3Std.
n. 16 Std.
1
0,8 ccm hypoton. Serumalbumin
2320
480
0
2
0,8 „ isoton. Serumalbumin
848
80
0
3
0,8 hvpoton. Ser.-Alb. 4- 0,2 ccm Ser.-
Glob.
2300
2120
107
4
0,8 ccm isoton. Ser.-Alb. + 0,2 ccm Ser.-Glob.
2180
1000
0
5
0,8 „ inakt. hypoton. Ser.-Alb.
3152
2088
104S
6
0,8 „ inakt. isoton. Ser.-Alb.
1552
1280
1008
7
0,8 „ inakt. hypoton. Ser.-Alb. + 0,2 ccm
Ser.-Glob.
1 4700
2800
7040
8
0,8 ccm isoton. inakt. Ser.-Alb. + 0,2 ccm
Ser.-Glob.
1
| 2800
4800
1197
9
0,8 ccm Serum 4 - 0,6 ccm 0,85-proz. NaCl-
Losung
1908
! 480
0
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1st die normale Serunibakterizidie komplex?
193
Vor allem mochte ich bemerken, daB die Dysenterie-
abtdtung viel kr&ftiger und rascher vor sich geht in isotoner
(2, 4), als in hypotoner L6sung (1, 3). Der Versuch verst&rkt
somit die Ergebnisse des Versuches III.
In dieser V. Versuchsreihe nntersuchte ich ferner, welche
Rolle das NaCl bei der Inaktivierung spielt und fand, daB
sich die bakterientotende FShigkeit fur Dysenterie- und auch
fttr Anthraxbacillen bei Erw&rmen auf 56° wfthrend einer
halben Stunde viel wesentlicher verringert in der hypotonen
als in der isotonen Serumalbuminlbsung. Auch beobachtete
ich einen gewissen Unterschied zwischen aktivem und in-
aktivem Serumalbumin. W&hrend ich bei DurchfQhrung von
CO* im aktiven Serumalbumin gar keine oder nur eine ganz
schwache Trilbung erhielt, schied aus demselben inaktiven
Serumalbumin eine groBe Menge Globulin aus. Dieser Ver¬
such ist um so mehr interessant, da einige (Eisenberg) das
Wesen der Inaktivierung darin erblicken, daB durch Er¬
w&rmen aus dem Serumalbumin Globulin entsteht, welches
das wirksame Komplement absorbiert.
Diese Versuchreihe liefert zugleich einen Beweis gegen
die schon von mehreren Forschern bestrittene (Fischer-,
Baumgarten- und Walzsche) Osmosentheorie, denn sie
bezeugt, daB die Bakterizidie in isotoner Ldsung vollkommener
ist als in hypotoner.
Uebrigens, auf die Frage, ob die dysenterietotende Kraft
des Kaninchenserums eine Doppelwirkung ist, gibt dieser
Versuch keine entscheidende Antwort. Wenn das Serum¬
albumin allein die Dysenteriebacillen totet, so bezeugt dies
noch nicht, daB nicht zwei Substanzen bei dem Vernichten
der Keime mitwirken; denn es ware mbglich, daB das aus-
geflockte Globulin die Ambozeptoren nicht mit sich riB.
Jedenfalls bezeugt der Versuch, daB die Globulinfraktion bei
der Dysenterizidie nicht notwendig ist.
Ganz anderer Natur sind die Versuchsergebnisse mit
Meerschweinchenserum.
Gleich dem Kaninchenserum spaltete ich das Meer¬
schweinchenserum in die Globulin- und Albuminfraktion.
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194
Ludwig G6zony,
Tabelle VI.
Versuch mat gespaltetem Meerschweinchen- und Kaninchenserum.
Welcher Serumbestandteil
Geimpft
mit B.
dysent.
Keimzahl
n. Std.jn. 3 Std.jn. 24 Std.
0,4 ccm Ser.-Alb. aus Meerschw.-Serum
i 4040
2600
4400
oc
0,4 ccm Ser.-Alb. aus Meerschw.-Serum +
'
01 ccm Ser.-Glob. aus Meerschw.-Ser.
4040
3690
0
0
0,4 ccm Ser.-Alb. aus Meerschw.-Serum +
0,1 ccm Ser.-Glob. aus Kan.-Serum
4040
,
4410
i
1 5940
oo
Tabelle VII.
Versuch mit gespaltetem Meerschweinchenserum.
Welcher Serumbestandteil
Geimpft mit
B.dysentenae
Keimzahl
n. V, Std.
n. 3 Std.
0,4 ccm Serumalbumin
440
648
8640
0,4 „ Ser.-Alb. + 0,1 ccm Ser.-Glob.
440
264
0
0,1 „ Serum
440
34
0
0,1 „ Serum + 0,3 ccm NaCl-Losung
440
0
0
Die Resultate dieser beiden Tabellen kann ich im folgenden
zusammenfassen.
Die Albuminfraktion des Meerschweinchenserums t6tet
Dysenteriebacillen nicht. Die anffingliche Verminderung der
Keimzabl erfolgt auch bei Verimpfung in einen guten N&hr-
boden, z. 6. in Bouillon. Ein Teil der verimpften Bakterien
geht auch in Bouillon zugrunde, nicht weil die Bouillon viel-
leicht eine bakterientbtende Wirkung bes&Be, sondern ebenso
wie andere Lebewesen dauern auch die Bacillen nicht ewig
fort und das Absterben der keimunfahigen Bacillenleiber ver-
ursachte die Keimzahlverminderung, da die lebenden Bakterien
sich innerhalb einer halben Stunde noch nicht vermehrten.
DaB tatsachlich die Albuminfraktion des Meerschweinchen¬
serums die Bacillen nicht t6tet, ist aus der nach 3 Stunden
entnommenen Probe offenbar. Die Bakterien haben sich sehr
stark vermehrt. — Nach Hinzufiigung des Globulins zur
Albuminfraktion sehen wir als gleichartiges Ergebnis zweier
Versuche die verimpften 4000 Bacillen samtlich zugrunde gehen.
Es tbtet sonach die Albuminfraktion des Meer¬
schweinchenserums allein die Bacillen ebenso-
wenig wie die Globulinfraktion. Zum Toten ist
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1st die normale Serumbakterizidie komplex ?
195
das Zusammenwirkon beider Fraktionen n51ig.
Fraglicb, ob deshalb, weil, wie bei der Hamolyse, das Kom-
plement wirkt, welches in Albnmin and Globulin spaltbar ist,
nnd nur dann wirkungsfahig wird, wenn beide beisammen sind.
Die Albuminfraktion des Meerschweinchenserums in Ge-
meinschaft mit der Globulinfraktion des Kaninchenserums
tStete jedoch die Dysenteriebacillen nicht, w&hrend bekannt-
lich die Globulinfraktionen der h&molytischen Komplemente
verschiedener Tiere einander ersetzen kSnnen. Wenn sonach
bei der Bakterizidie die Globulinfraktion des Kaninchenserums
die Albuminfraktion des Meerschweinchenserums nicht erg&nzt,
so ist dessen Ursache darin zu suchen, daB das Kaninchen-
globulin keine Ambozeptoren enth<, wfihrend im Meer-
schweinchenglobulin solche enthalten sind.
Wenn nun bei der Spaltung des Meerschweinchenserums
die Albuminfraktion nur deshalb nicht gewirkt h&tte, weil das
Globulin als komplementbildende Fraktion fehlte, so ware es
durch Kaninchenglobulin ersetzbar gewesen.
DaB tatsachlich das Meerschweinchenalbumin das bak-
terizide Komplement ist, sollte folgender Versuch entscheiden.
Wenn es namlich gelingt, das inaktivierte Meerschweinchen-
serum damit zu aktivieren, so ist der Beweis erbracbt, daft
das Albumin das bakterizide Komplement enthalt.
Tabelle VIII.
No.
Welches Serum oder Serumbestandteil
Keimzahl
n. l'/j ;3td.
n. 3 Std.
1
0,2 ccm akt. Serum + 0,8 ccm NaCl-Losung
302
12
2
0,1 „ iuakt. Serum + 1 ccm Serumalbumin
4832
2034
3
yy yy .*> "f" ^ yy yy
(3048
4928
4
0,3 ,, ii + 1 ii ii
5342
3678
5
0,3 „ „ „ +1 „ NaCl-Losung
5CO0
8892
6
1 Ser.-Alb. + 0,1 ccm Ser.-Glob.
3120
4982
7
1 „ NaCl-Losung + 0,1 ccm Ser.-Glob.
5848
7106
8
1 „ Serumalbumin
6400
9200
Zwar tdtet das mit Albumin erganzte inaktive Serum
die Dysenteriebacillen bei weitem weniger als das aktive
Serum, aber jedenfalls ist aus dieser Versuchsreihe ersicht-
lich, daB Serumalbumin und inaktiviertes Serum vereint die
Dysenteriebacillen toten (2), einzeln aber nicht (5 und 8).
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196
Ludwig G6zony,
Mit einem anderen Versuch wollte ich zeigen, daB das
Globulin die Ambozeptoren enth<. Behufs dessen erschdpfte
ich die Ambozeptoren des frischen Meerschweinchensernms
mit abgetSteten Dysenteriebacillen. Ich fand bei anderweitigen
Erschdpfungsversuchen, daB die Bakterien innerhalb 1 j i Stunde
s&mtliche Ambozeptoren binden, dagegen bleibt der groBte
Teil des Kompleroents frei. Wenn daher die Globulinfraktion
tats&chlich Ambozeptoren enth<, so muB sie mit erschbpftem
Serum als Komplement die Dysenteriebacillen toten.
Aus der folgenden Tabelle ist ersichtlich, daB Meer-
schweinchenglobulin mit erschdpftem Serum zusammen die
Dysenteriebacillen t8tet.
Tabelle IX.
Eingeimpft B. dypenteriae: 11720.
No.
Welches Serum
Keimzahl
n. 1 Std.
n. 4 Std.
1
0,5 ccm erechopftes Serum
12 600
55 680
2
0,5 „ „ „ + 0,1 ccm Globulin
6400
76400
3
,, „ yy 4 " 0,2 ,, „
8 320
108 800
4
0,4 „ NaCl-Losung 4- 0,2 ccm Globulin
25 920
oc
5
0,2 „ Serum 4- 0,4 ccm NaCl-Losung
5490
0
6 !
0,5 „ erechopft^ Serum 4> 0,1 ccm altes Globulin
6400
83 200
7 I
0,4 „ NaCl-Losung 4- 0,2 ccm altes Globulin |
| 70400
oo
Das Gemenge des Globulins und erschbpften Serums (2, 6)
tbtete in der ersten Stunde die H&lfte der verimpften Keime
ab. Nach 4 Stunden vermehrten sich letztere schon bedeutend.
Im erschdpften Serum vermehrten sich die Bacillen schon in
der ersten Stunde, im Globulin noch mehr (4 und 7).
Diese Versuche sprechen fflr die Komplexitat der nor-
malen Dysenteriekeimtotung.
Die komplexe Beschaffenheit der Dysenteriebakterizidie
bezeugen auch die mit embryonalem Serum veranstalteten
Versuche.
Das embryonale Meerschweinchenserum tbtet nicht diese
Bacillen. Es sind hier drei MSglichkeiten zu beachten: es
tbtet entweder deshalb nicht, weil es kein Komplement ent-
halt oder weil die Ambozeptoren fehlen Oder aber auch beide.
Fehlt das Komplement, so konnen wir es leicht ersetzen.
Die Albuminfraktion des Meerschweinchenserums, welches das
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1st die normale Serumbakterizidie komplex ?
197
bakterizide Korn piemen t enth§.lt, besitzt laut obigen Versuchen
keine Ambozeptoren und t5tet deshalb auch Dysenteriebacillen
nicht. Wenn wir nun dem embryonalen Meerschweinchen-
serum miitterliches Meerschweinchenalbumin zusetzen und
finden, daB das Gemenge Dysenteriebacillen tbtet, so wird es
bezeugen, daft das embryonale Serum Ambozeptoren, das
mfitterliche Albumin dagegen Komplement enth<, d. h. die
normale DysenterietStung ist komplex.
TabeUe X.
Welches Serum
Keimzahl
gleich
n. 1 Std.
n. 3 Std.
0,4 ccm embryonales Serum + B. dysenteriae
99200
103 600
89 000
0,8 „ Serumalbumin + B. dysenteriae
0,4 „ embryonales Ser. + 0,8 ccm Ser.-Alb.
118000
145 000
oo
+ B. dysenteriae
96 000
1452
395
Weder das embryonale Serum noch das Serumalbumin
vermag fOr sich allein die Bacillen zu t8ten, wohl aber ein
Gemisch von beiden, was beweist, daB die dysenteriebaeillen-
totende F&higkeit des normalen Serums auf Zusammenwirkung
zweier Stoffe, nSmlich der Ambozeptoren und des Komplementes
beruht.
Zusammenfassung.
Die rait verschiedener Methodik veranstalteten Versuche,
die Aktivierung des inaktiven Serums durch frisches, nicht
tfttendes Serum, das Verhalten des in Globulin und Albumin
gespalteten Serums, die Aktivierbarkeit des embryonalen
(Ambozeptoren enthaltenden) Serums durch Serumalbumin
sind nur weitere Beweise dafifr, daB die normale Serum¬
bakterizidie (filr Dysenteriebacillen) auf der Zusammenwirkung
zweier Stoffe, eines thermolabilen und eines thermostabilen,
beruht.
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198
Oluf Thomsen,
Nachdruck verboUn.
[Aua Statens Seruminstitut Kopenhagen (Direktor:
Dr. Th. Madsen).]
Experlmentelle Untersuchungen fiber die Poliomyelitis.
Zweite Mitteilung.
Von Oluf Thomsen,
Abteilungsvorsteher am Institut.
Mit 1 Figur im Text.
(Eingegangen bei der Redaktion am 13. Mai 1912.)
I. Koltivierungsversuohe.
In einer frtiheren Arbeit 1 ) berichtete ich fiber Versuche,
die Poliomyelitis auf Affen zu fibertragen durch Vermischung
des Virus mit genuiner Pockenvaccine und Vaccination mit
dieser Mischung. Es gelang bei diesem Verfahren, eine typische
Poliomyelitis zu erzeugen, welche also hfimatogen entstanden
sein mull durch Deportation des Virus von den Vaccinations-
einschnitten zu dem Zentralnervensystem. Es zeigte sich, dad
das Virus in mehreren Generationen durch Vaccination von
Affe zu Affe fibertragen werden
konnte. Zu den Versuchen
wurden ausscblieJSlich M.
cynomoigus verwendet. Das
Ergebnis dieser Versuche, die spfiter
fortgesetzt wurden, erhellt am besten
aus dem nebenstehenden Schema.
Erlauterung zu dem Schema:
Die mit fetten Ziffem markierten Affen (Q)
zeigten samtlich eine sowohl klinisch ala
pathologisch-anatomisch typisch charakteri-
sierte Poliomyelitis. Die nicht fett ge-
druckten Ziffem bezeichnen Affen, die keine
Anzeichen von Poliomyelitis aufwiesen. No. 1 wurde vacciniert mit einer
Mischung von Pockenvaccine (Kalb) und Emulsion aus virulentem Riicken-
mark eines an Poliomyelitis gestorbenen Affen. Von den iibrigen wurde
1) Hospitalstidende, 1911, No. 47, und Berl. klin. Wochenschr., 1912,
No. 2.
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Experimentelle Untersuchungen liber die Poliomyelitis.
199
jeder mit durch Abschrapen der Pustelmasse von einem von den vaccinierten
Affen bereiteter Vaccine vacciniert Die Reihenfolge ergibt sich von selbst
aus dem. Schema. Die Pustelmasse wurde in einem Porzellanmorser mit
drei Gewichtsteilen Glyzerin (90-proz.) zu einer dickfliissigen Emulsion ver-
rieben, womit die Vaccination vorgenommen wurde.
No.
1 erkrankte an Poliomyelitis am 9. Tag, starb am 11. Tag, Vaccine
gewonnen am 8. Tag
2 erkrankte an Poliomyelitis am 9. Tag, starb am 10. Tag, Vaccine
gewonnen am 10. Tag
3a erkrankte an Poliomyelitis am 6. Tag, starb am 6. Tag, Vaccine
gewonnen am 6. Tag
8a 1 erkrankte an Poliomyelitis am 12. Tag, starb am 14. Tag, Vaccine
gewonnen am 9. Tag
erkrankte an Poliomyelitis am 5. Tag, starb am 7. Tag, Vaccine
gewonnen am 7. Tag
4 a 1 erkrankte an Poliomyelitis am 7. Tag, starb am 10. Tag, Vaccine
gewonnen am 10. Tag
keine Poliomyelitis, 30 Tage nach der Vaccination intraperitoneale
Injektion von 0,5 ccm Virus (filtriert), starb 6 Tage spater an
Poliomyelitis, Vaccine gewonnen am 8 Tag
erkrankte an Poliomyelitis am 8. Tag, starb am 10. Tag, Vaccine
gewonnen am 6. Tag
der Vaccination
„ ,, Vaccine gewonnen am 6. Tag
4a
4b
5a
5 a 1
5 a 2
5b
6 a
6 a l
6 b
7
starb am 1. Tag nac]
» „ 6 .
„ „ 17.
„ 11 .
tf
J?
(.
10 .
9.
2 .
6 .
7.
7.
8 .
8 .
Wie ersichtlich, gelang es in dem einen Hauptzweig des
in dem Schema aufgestellten Stammbaumes eine poliomyelitis-
virulente Vaccine in 5 Generationen (1, 2, 3 a, 4 a, 5) zu er-
zeugen. In dem zweiten Hauptzweig (1, 2, 3 a 1 ) gelang die
Erhaltung nur in 3 Generationen und in dem Nebenzweig
(1, 2, 3 a, 4 a 1 ) zu dem ersten Hauptzweig in 4 Generationen.
Zuerst versagte in der 4. Generation 4b; dies beruhte nicht
darauf, daB dieses Tier eine natfirliche Immunitat gegen Polio¬
myelitis besaB, denn eine 30 Tage nach der Vaccination vor-
genommene intraperitoneale Injektion von Virus rief eine
tSdliche Poliomyelitis hervor. Eine Immunity hatte somit
die Vaccination auch nicht erzeugt. Von den mit der 5. Vaccine-
generation vaccinierten 5 Affen starben 4 (5 a, 5 a 1 , 5 a 2 , 5 b),
ohne Anzeichen von Poliomyelitis aufgewiesen zu haben, am
1., 6., 17. und 11. Tag nach der Vaccination. Die mit der
6. Generation vaccinierten (6 a, 6 a 1 , 6 b) starben am 7., 10.
und 9. Tag darauf, und endlich starb der eine in der 7. Ge-
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200
Oluf Thomsen,
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Deration (7) 2 Tage nach der Vaccination, ebenfalls samtlich
ohne Anzeichen von Poliomyelitis gehabt zu haben. Die
Sektion all dieser Affen ohne Poliomyelitissymptome zeigte
keine makroskopischen Ver&nderungen an irgendeinem Organ.
In alien Fallen wurde das Rttckenmark histologisch unter-
sucht, es gab aber gar keine Anhaltspunkte fflr Poliomyelitis
an die Hand. Die Todesursache war anfangs vollkommen
r&tselhaft; es zeigte sich aber bei einer bakteriologischen
Untersuchung des unmittelbar nach dem Tode entnommenen
Herzblutes der zuletzt erkrankten (6a, 6a 1 , 5a 2 , 6b und 7),
daB dieses Streptokokken in Reinkultur enthielt. Derselbe
Streptococcus wurde darauf aus der Vaccine von den Gene-
rationen 5, 6 und 7 kultiviert (die friiheren Generationen waren
zu dieser Zeit nicht mehr erhalten und wurden daher nicht
untersucht). Der Grund des Eingehens der Tiere war hier
unzweifelhaft eine Streptokokk&mie, entstanden durch die
Vaccinationsrisse. Merkwiirdigerweise zeigten diese nur eine
vollkommen typische Vaccineeruption, dagegen keine auffallende
Rdte oder andere Anzeichen einer gemischten Infektion. Am
natilrlichsten ist wohl die Annahme einer gesteigerten Virulenz
der Streptokokken infolge der wiederholten Passage von Tier
zu Tier. Ob das spezifische Poliomyelitusvirus wirklich aus-
gestorben war, laBt sich nicht mit Sicherheit entscheiden; es
scheint jedoch hierfiir der Umstand zu sprechen, daB No. 5b
erst 11 Tage und 5 a 17 Tage nach der Vaccination starb,
also nach einem Zeitraum, der die durchschnittliche Dauer der
Inkubation bei den an Poliomyelitis erkrankten Tieren um
etwas flberstieg. Die tibrigen an Streptokokk&mie gestorbenen
Tieren gin gen nach Verlauf von 1—11 Tagen ein, also eben
um die Zeit, zu der die Poliomyelitis gewohnlich zum Aus-
bruch kommt.
Das Material laBt somit keine ganz sichere SchluBfolgerung
zu; es scheint mir jedoch am naturlichsten, anzunehmen, daB
das Poliomyelitisvirus wirklich in den Vaccine-
pusteln gewachsen ist und sich vermehrt hat, daB
es sich also hier um eine auf experimentellem Wege erzeugte
Kultur in vivo atfBerhalb des Zentralnervensystems handelt.
Die Griinde, die mir fiir eine solche Annahme zu sprechen
scheinen, sind: teils, daB die Inkubation nicht mit jeder Ge-
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Experi men telle Untersuchungen iiber die Poliomyelitis. 201
iteration langwieriger wurde (bei 4a betrug die Dauer der
Inkubation sogar nur 5 Tage), teils, daB eine auf gleicbe
Weise ausgefflhrte Vaccination mit Glyzerinemulsion von viru-
lentem Rflckenmark ohne Zusatz von Pockenvaccine
in keinem von 4 angestellten Versuchen Poliomyelitis ergab.
Auch zu diesen Versuchen wurden M. cynoraolgus angewandt.
Diese beiden Momente sprechen, wie mir scheint, dafiir, daB
das Poliomyelitisvirus sich erst in der durch das Vaccinevirus
verursachten spezifischen GewebelSsion vermehrt (deren An-
fang schon nach 24 Stunden sich in charakteristischer Weise
bekundet). Handelte es sich nur um eine einfache Ueber-
tragung eines Restes von dem Poliomyelitisvirus aus der
ersten Emulsion (Affe 1) auf den Aifen 2 und von diesem
aus wiederum eines Restes auf den AiTen 3 usw., so mfifite
die Verdtinnung in der 5. Generation so erheblich geworden
sein, daB es (zumal angesichts der unten zu erwflhnenden
Immunisierungsversuche mit subkutaner Einfflhrung von
lebendigem Virus) wohl nur wenig Wahrscheinlichkeit fflr sich
hat, daB hierdurch eine tbdlich verlaufende Poliomyelitis nach
der gewbhnlichen Inkubation hervorgerufen werden konnte.
Endlich wird die Annahme eines Wachstums in den Vaccine-
pusteln des Affen noch gestiitzt durch einen Versuch, der mit
Vaccination eines Schafes mit Vaccine-Poliomyelitisemulsion
gemacht wurde. Es entwickelte sich hierbei eine typische
Vaccinepustel, und von dieser aus wurde ein weiteres Schaf
vacciniert. Keines von den Schafen zeigte irgendwelche krank-
haften Symptome. Mit Vaccineemulsion von dem letzteren
Schaf wurden nun 2 Affen (M. cynomolgus) vacciniert; keiner
von diesen bekam die Poliomyelitis (die Affen wurden spflter
zu anderen Versuchen gebraucht und erwiesen sich als in der
gewohnlichen Weise empf&nglich fflr das Virus). Es scheint
also, als hatte das Poliomyelitisvirus sich in den Vaccinepusteln
des fflr Poliomyelitis unempfanglichen Tieres (Schafes) nicht
zu vermehren vermocht (abgestorben ?).
Kultivierungversuche in vitro. Auf Grund des
im obigen Dargelegten wurde versucht, das Poliomyelitisvirus
auf kflnstlichem Nabrsubstrat zu kultivieren, welches auf ver-
schiedene Weise (in flflssigem und festem Zustand) aus in
Emulsion (mit 0,9-proz. NaCl-Lbsung oder Bouillon) durch
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202
Olui Thomsen,
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Filtrierung durch einen Berkefeldfilter steril gemachter Vaccine-
pustelmasse hergestellt wurde. Auf die Substrate wurde
filtriertes Poliomyelitisvirus verimpft, welches sich durch
Impfung auf die gewbhnlichen Substrate als bakterienfrei er-
wies, aber das spezifische (filtrierbare) Virus in anschlagf&higem
Zustand enthielt. Die Versuche wurden bisher hauptsachlich
mit aus Kalbvaccine hergestellten Substraten angestellt; sie
haben alle ein negatives Resultat ergeben, insofern als keiu
irgendwie erkennbares Anzeichen eines Wachstums erschien.
(In Vaccinebouillon, d. h. Berkefeldfiltrat von Bouillon, in der
die Vaccinemasse zu einer diinnen Emulsion verrieben ist,
erscheint in der Regel nach 24 Stunden bei 37 0 eine Triibung,
welche jedoch nicht auf Wachstum, sondern auf EiweiBf&llungen
beruht.) Auch Versuche mit aus Affenvaccine hergestellten
N&hrsubstraten wurden gemacht, bisher jedoch — hauptsach¬
lich wegen der Schwierigkeit, genug Material zu beschaffen —
in geringem Umfang und ebenfalls mit negativem Resultat.
n. Immunisierungsversuohe.
Die Tatsache, dad Affen, die eine Infektion mit Polio¬
myelitis (iberstanden haben, gegen eine neue Infektion immun
sind (Flexner, Levaditi und Landsteiner, Leiner
und Wiesner, R6mer und Joseph u. a.), berechtigt uns
zu hoffen, daB eine aktive Immunisierung gelingen kann. Eine
solche zu realisieren, ist denn auch von manchen Forschern
auf verschiedenen Wegen versucht worden. Die Methoden,
die mit mehr oder weniger Erfolg angewandt wurden, be-
standen in:
1) Immunisierung mit steigenden Mengen von lebendigem
Virus, beginnend mit kleinen Dosen [Flexner und Lewis 1 )].
2) Immunisierung mit (auf 56°, 60°) erwarmtem Virus,
entweder einer grbfieren Dosis oder wiederholten kleineren
[Levaditi und Landsteiner 2 )].
3) Immunisierung mit karbolisiertem Virus [Kraus 3 )].
1) Journ. of the Amer. med. Assoc., Vol. 54, 1910, No. 22; Vol. 55,
1910, 20. VIII.
2) Compt. rend, de l’Acad. des Sc., 1910.
3) Wien. klin. Wochenschr., 1910, No. 7, und Zeitschr. f. Immunitiits-
forschung, Orig., Bd. 9, 1911, No. 2.
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Experimentelle Untersuchungen iiber die Poliomyelitis.
203
4) Immunisierung mit eingetrocknetem, virushaltigem
ROckenmark [Levaditi und Landsteiner 1 )].
5) Immunisierung mit Mischungen aus Virus + Serum
von Affen, welche eine Poliomyelitisinfektion iiberstanden
hatten, oder von Tieren (Schaf), die prim Sr unempfang-
lich fflr Poliomyelitis sind und mit wiederholten Virus-
injektionen behandelt worden waren [Levaditi und Land¬
steiner 2 )].
Eine Hauptfrage, die mir hier zu beantworten ndtig scheint,
ist diese: wird das Virus durch die erw&hnten Verfahren
qualitativ oder quantitativ oder gar in beiden Be-
ziehungen ver&ndert. Dieselbe Frage stellt sich ja ein, wo
es sich um Immunisierungsversuche mit etlichen anderen
Virusarten handelt, und bei der Lyssa war sie bekanntlich
schon Gegenstand einer eingehenden Erorterung, ohne dafi
man jedoch sagen konnte, sie sei schon endgultig beant-
wortet.
Eine qualitative Veranderung des Virus kann man
sich wesentlich als auf zwei Weisen sich aufiernd vorstellen,
und zwar entweder so, dafi das Virus bei unveranderter Ver-
mehrungsgeschwindigkeit in seinem Angriff auf den Organismus
weniger bosartig wird (geringereErzeugung eventuell erzeugter
Toxine oder anderer gegen das Bestehen des Organismus ge-
richteter Krafte), oder aber so, dafi diese aggressiven Krafte
des Virus an sich unverandert bleiben, die Vermehrungs-
geschwindigkeit des Virus dagegen vermindert wird. In beiden
Fallen wird — wo andere Umstande sonst gleich bleiben —
weniger „Toxin“ (dies Wort im weitesten Sinne gefafit) in jeder
Zeiteinheit gebildet werden. Eine bloB quantitative Ver-
minderung der Virusmenge wird, jedenfalls am Anfang der
Infektion, im wesentlichen auf ahnliche Weise wirken miissen,
wie die Verminderung der Vermehrungsgeschwindigkeit bei
einer grofieren anfanglichen Virusmenge. Das Ergebnis fur
den infizierten Organismus wird daher davon abhangen, wie
schnell und in welchem Grade der Organismus zu reagieren
1) a. a. O.
2) Compt. rend. Soc. Biol., T. 68, 1910, Seance, 19. II.
Zeitschr. f. Immunitatsforschuog. Orig. Bd. XIII. 14
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204
Oluf Thomsen,
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imstande ist, d. h. AntikArper (im weitesten Sinne des Wortes)
zu bilden, welche der weiteren Vermehrung des Virus und
gegebenenfalls auch der Wirkung schon erzeugter giftiger
Virusprodukte entgegenwirken kAnnen. DaB die VerhAltnisse
sich AuBerst kompliziert gestalten konnen, ergibt sich von
selbst Besonders wichtig scheint es mir desbalb, die Unter-
suchungen mit den am wenigsten komplizierten Verhaitnissen
zu beginnen: derlmmunisierung mitVerdAnnungen
eines gegebenen Virus, welches in einergegebenen
Konzentration typisch todliche Poliomyelitis zu
ergeben imstande ist.
Betrachtet man die bisher ausgeffihrten Untersuchungen,
so findet man zwei Dinge, die sicher nicht gebflhrend berOck-
sichtigt worden sind: 1) daB das Virus, womit man arbeitete,
oft wenigstens in quantitativer Beziehung von Fall zu Fall
ganz verschiedenartig war, und 2) daB die EmpfAnglichkeit der
Versuchstiere eine sehr verschiedene war. Hinsichtlich des
ersten Punktes begnAgten die meisten Forscher sich damit,
ein gewisses Quantum einer Emulsion von virulentem Rucken-
mark in 0,9-proz. NaCl-Losung zu nehmen. Hierbei mAssen
unumganglich Fehler von unberechenbarer GroBe entstehen.
Selbst wenn man ein in alien Fallen gleiches gegenseitiges
Verhaitnis zwischen RAckenmarksubstanz und NaCl-Losung
wAhlt, so kann das Resultat doch ganz verschieden sein: das
eine Ruckenmark kann vielmal mehr Virus enthalten als das
andere, ja in demselben RAckeumark kann wahrscheinlich an
verschiedenen Stellen das Virus in sehr verschiedener Menge
auftreten; jedenfalls findet man oftmals in den verschiedenen
Teilen des Ruckenmarks die anatomischen VerAnderungen in
sehr ungleicher Intensitat. Arbeitet man mit einem Virus,
welches man willkArlich zu modifizieren sucht, z. B. durch
Einwirkung von Karbolsaure oder Eintrocknen (s. oben), so
ist es klar, daB das Ergebnis hier auBerdem in hohem Grade
davon abhAngen kann, wie fein die Emulsion ist, mit der man
arbeitet Auch wenn man durch Filtrieren durch Papier
(Kraus) die ganz groben Teilchen ausschlieBt, wird die
Emulsion doch so unhomogen, daB eine direkte Vergleichung
z. B. zweier scheinbar in gleicher Weise karbolisierter
Emusionen sehr betrachtliche Fehler ergeben muB.
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ExperimenteUe Untersuchungen uber die Poliomyelitis.
205
Es scheint mir daher absolut erforderlich, zu
alien untereinanderzuvergleichenden Versuchen
mit demselben, durch z. 6. einen Berkefeld-Filter
filtrierten Virus zu arbeiten. Verschiedene Filtrate
lassen sich natfirlich nicht durch die Bank ohne vorhergehende
Vergleichung anweriden; zu jeder in sich geschlossenen Reihe
von Versuchen mull nur dasselbe Filtrat benutzt werden. Er-
strecken die Versuche sich fiber einen l&ngeren Zeitraum, so
ist man nattirlich trotzdem Fehlern ausgesetzt durch mfig-
liche allmfihliche Verfinderungen des filtrierten Virus. Doch
sei hier gleich bemerkt, daB das Filtrat, welches zu all meinen
im nachstehenden referierten Versuchen verwendet wurde,
sich, soweit sich beurteilen ISBt, wahrend 4-monatiger Auf-
bewahrung im Dunkeln bei 0° (dartiber s. unten) kaum wahr*
nehmbar verfindert haben dQrfte. Der zweite bedeutsame
Punkt ist die Art des benutzten Versuchstieres. Wie bekannt
ist, muB man ausschlieBlich mit Affen arbeiten. Obwohl einige
Forscher (insbesondere Krause und Meinike, Lentz,
Huntemfiller) auch bei Kaninchen Poliomyelitis erzeugt
haben wollen, so gelingt dies offenbar nur unter ganz be-
sonderen UmstSnden, und jedenfalls scheint die Kraukheit
hier von der bei Menschen und, auf experimentellem Wege,
bei Affen vorkommenden Poliomyelitis wesentlich verschieden
zu sein. In der Literatur findet man jetzt hier und dort die
Angabe, daB die Affen am liebsten junge, noch nicht ausge-
wachsene Tiere sein mtissen, um sehr empffinglich zu sein;
dagegen fand ich nirgends Angaben fiber ungleiche Empffing-
lichkeit bei verschiedenen Affenarten. Die drei Makakenformen,
die gewohnlich auf den Markt kommen und deshalb vorwiegend
in den Laboratorien zur Verwendung gelangen, sind M. r h e s u s,
M. sinicus und M. cynomolgus; auBerdem werden bis-
weilen Cercopitheken und Paviane verwandt.
In dem Seruminstitut haben wir bisher nur mit den er-
wfihnten drei Makakenformen gearbeitet und bei ihnen einen
ganz erheblichen Unterschied in der Empffing-
lichkeit fflr die experimentelle Poliomyelitis ge-
funden.
Um unser filtriertes Virus auszutitrieren, benutzten wir
nfimlich zuerst eine Reihe von M. cynomolgus, denen ver-
14*
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206
Oluf Thomsen,
schiedene Mengen von Virus intraperitoneal injiziert
wurden; das Ergebnis erhellt aus der folgenden Uebersicht
Das zu alien im folgenden besprocbenen Versuchen ver-
wendete Filtrat wurde in folgender Weise hergestellt:
Verechiedene Hime und Riickenmarke an Poliomyelitis verstorbener
Aden (M. cynomolgus) wurden in der Maschine zu einem fein geschnittenen
Brei zerhackt; hinzugesetzt wurden 5 Gewichtsteile 0,9-proz. NaCl-
Losung. Im Morser wurde die so entstandene seimige Masse in kleinen
Portionen zu einer feinen Emulsion verrieben. Diese wurde erst durch
Papier, dann durch einen Berkefeldfilter filtriert. Das Filtrat war ganz
leicht opaleszierend. Beim Stehen sammelte sich am Boden der Glaser
eine diinne Schicht (Eiweifiniederschlag), die dariiberstehende Fliissigkeit
war wasserhell, ganz leicht gelb gefarbt. Auf gewbhnliche Nahrsubstrate
(Bouillon, Agar) verimpft, erfolgte kein Wachstum weder bei aerober noch
bei anaerober Kultur.
M. cynomolgus: 10. XII. 1911. Intraperitoneale Injektion von
Filtrat. Mit 0,9-proz. NaCl-Losung wurde das Volumen der Filtratver-
diinnung bei alien Tieren gleich gemacht: 1 ccm.
No.
Menge des
Filtrats
Eretes Anzeichen von Poliomye¬
litis nach der Injektion am
Verlauf der Krank¬
heit, starb am
1
1,0 ccm
7. Tag
9. Tag
2
0,5 ,,
9. „
10. „
3
0,25 „
8. „
9. „
4
0,12 „
starb an interkurrenter Krankheit nach 3 Tagen
5
0,06 „
8. Tag
10. Tag
6
0,03 „
9. „
10. „
7
0,015 „
7. „
9. „
8
0,007 „
11. „
12 . „
9
0,003 „
15. „
16. „
Wie ersichtlich, erwies sich M. cynomolgus als im Besitz
einer sehr grofien Empfanglichkeit fiir Poliomyelitisvirus,
indem intraperitoneale Injektion von Filtratdosen fiber 0,015 ccm
konstant nach einer Inkubation von 7—9 Tagen Poliomyelitis
ergab und die Krankheit in alien Ffillen todlich verlief. Erst
bei den Dosen 0,007 und 0,003 ccm stellte sich eine geringere
VerlSngerung der Inkubationsdauer ein, aber auch hier endete
die Krankheit mit dem Tode. Leider konnten Dosen unter
0,003 ccm nicht geprflft werden, weil keine Tiere mehr zu
Gebote standen und der M. cynomolgus zu dieser Zeit nicht
auf dem Markt war.
Dasselbe Virus wurde darauf in entsprechender Weise an
M. sinicus und M. rhesus geprfift.
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Experimentelle Untersuchungen iiber die Poliomyelitis.
207
M. sinicus. 10. I. 1912. Intraperitoneale Injektion des Filtrate.
No.
1
2
3
4
5
6
7
Menge des
Filtrate
Verlauf der Krankheit:
0,25 ccm
0,12 ccm
0,06 ccm
0,03 ccm
0,015 ccm
0,007 ccm
0,003 ccm
Keine Anzeichen von Poliomyelitis. Starb nach 33
Tagen an Darmkatarrh.
Keine Anzeichen von Poliomyelitis. Starb nach 12
Tagen an Pneumonie.
Keine Anzeichen von Poliomyelitis. Starb an Darm¬
katarrh nach 41 Tagen.
Keine Anzeichen von Poliomyelitis. Starb an Darm¬
katarrh nach 28 Tagen.
Keine Anzeichen von Poliomyelitis. Starb an Pneu¬
monie nach 37 Tagen.
Schlapp paretisch am 11. Tag. Starb am 13. Tag.
Sektion: typische Poliomyelitis.
Keine Anzeichen von Poliomyelitis. Starb an Darm¬
katarrh nach 18 Tagen.
Das Resultat zeigte hier eine weit grOBere Unregelm&fiig-
keit als bei M. cynomolgus. Nur ein Tier, mit 0,007 ccm
Filtrat infiziert, bekam eine typische Poliomyelitis. Alle
flbrigen hatten nicht die geringsten Anzeichen davon, gingen
aber an interkurrenten Krankheiten (Darmkatarrh und Pneu¬
monie) ein, welche auch einige andere Tiere derselben Art
tSteten, die gar nicht zu Versuchen benutzt wurden. Die
Sektion zeigte keine biologischen Ver&nderungen des Zentral-
nervensystems. Von einem einzigen Tier (No. 4) wurde 1 ccm
Rflckenmarkemulsion einem M. rhesus intraperitoneal einge-
impft; dieser hatte w&hrend der ganzen Dauer der Observation
(48 Tage) keine Anzeichen von Poliomyelitis. Die benutzten
Tiere schienen schon gleich bei dem Eingang im Serum-
institut in schlechterem Zustand zu sein als die Tiere, die wir
sowohl frtther als sp&ter bekommen haben; daB diese Ver-
schlechterung des universellen Gesundheitszustandes die Tiere
weniger empf&nglich fflr das Poliomyelitisvirus gemacht
haben sollte, scheint doch wenig wahrscheinlich. Vermutlich
war die geringere Empf&nglichkeit beim M. sinicus ein Aus-
fluB besonderer EigentUmlichkeiten bei dieser Affenart.
Endlich wurden auf dieselbe Weise 4 M. rhesus mit
intraperitonealer Injektion von 0,5—0,25—0,12 und 0,06 ccm
Filtrat untersucht. Die beiden mit den groBten Dosen in-
fizierten Tiere erkrankten am 12. bzw. am 11. Tag an typischer
Poliomyolitis, die jedoch bei beiden nicht tddlich verlief,
sondern mit dauernden Paresen beider hinteren Extremitaten
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208
Oluf Thomsen,
bzw. des linken Armes. Die beiden mit 0,12 und 0,06 ccm
behandelten weisen keine Anzeichen von Poliomyelitis auf.
Sp&ter wurden sie zu anderen Versuchen benutzt und waren
nicht immun geworden.
Fassen wir das Ergebnis der obigen Versuche zu-
sammen, so ergibt sich also folgendes: M. cynomolgus
erwies sich konstant als sehr einpf&nglich fdrin-
traperitoneale Injektion auch sehr kleiner Men-
gen von filtriertem Virus (0,003 ccm) und die
Krankheit verlief hier stets tddlich. M. sinicus
erwies sich als sehr refraktar, jedoch mit einer
unerwarteten Ausnahme, indem von 7 Tieren nur
1 (mit 0,007 ccm infiziert) Poliomyelitis bekam,
welch etftdlichenAusganghatte. M. rhesus schien,
was die Empfanglichkeit angeht, am ehesten
zwischen M.cynomolgus und M. sinicus zu stehen,
indem von4Tieren 2 mit verh<nism&fiig groBen
Dosen (0,5 und 0,25 ccm) infizierte eine nicht
todlich verlaufende Krankheit bekamen, w&hrend
2 andere Tiere (0,12 und 0,05 ccm) nicht er-
krankten.
Ob das Resultat sich entsprechend gestaltet haben wiirde,
wenn man statt intraperitonealer Injektion des Virus intra-
cerebrale oder subkutane Injektion angewandt hatte, laBt sich
natfirlich a priori nicht entscheiden. Oekonomische Riick-
sichten hinderten mich vorl&ufig, solche Untersuchungen, die
nicht ohne Interesse waren, zu unternehmen. Auf alle
Fftlle scheint es berechtigt, vor Verwendung
verschiedener Makakenarten zu warnen zu Ver¬
suchen, die untereinander verglichen werden
sollen. Ferner scheint die konstatierte groBe
Empfanglichkeit des M. 'cynomolgus dieses Tier
zum Nachweis selbst sehr geringer Virusmengen
ganz besonders geeignet zu machen. Es sei nur
bemerkt, daB alle angewandten Affen junge Tiere von unge-
fahr demselben Gewicht waren.
Nach diesen orientierenden Versuchen war es meine Ab-
sicht, Immunisierung des M. cynomolgus als des empfindlichsten
zu versuchen. Es war jedoch mehrere Monate nicht moglich,
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Experimentelle Untereuchungen iiber die Poliomyelitis.
209
mehr als ganz wenige Tiere dieser Art aufzutreiben, und die
sfimtlichen Immunisierungsversuche wurden deshalb mit M.
rhesus augestellt. Zur Immunisierung wurde ausschliefilich
subkutane Injektion und zum Schlufi, um die Immumt&t
noch weiter zu prQfen, intracerebrale Injektion angewendet.
Versuch 1.
M. rhesus. 2. I. 12 subkutane Injektion von 0,5 ccm Fil-
trat. 10 Tage nach der Injektion starker Tremor und gleichzeitig Parese
beider hinteren Extremitaten, zunehmend. Starb am 12 Tag. Sektion:
typische Poliomyelitis.
ResumS: Die angewandte Menge Filtrat (0,5 ccm) ergab
eine tddliche Injektion am 12. Tag. Offenbar war hier die
Dosis zu grofi.
Versuch 2.
M. rhesus. 6.1.12 subkutane Injektion von 0,03 ccm Filtrat.
17. I. Heute Morgen starker Tremor des ganzen Kdrpers und dee
Kopfes. Unruhe. Keine Paresen. 18. I. Andauernd Tremor, am starksten
der des Kopfes. Vielleicht leichte Parese der Hinterbeine. 19. I. bis 20.1.
Zustand wie am 18. I.
22. I. Tremor geringer, Bewegungen der Hinterbeine etwas unsicher.
23. I. 0,06 ccm Filtrat subkutan injiziert. Tremor fast
aufgehort
25. I. Jetzt ganz natiirlich, nur Anflug von Tremor.
30. I. 0,06 ccm Filtrat subkutan injiziert. Jetzt ganz
naturlich.
6 . II. 0,2 ccm Filtrat subkutan injiziert.
13. II. 0,4 ccm Filtrat subkutan injiziert.
20. II. 1,0 ccm Filtrat subkutan injiziert.
27. II. 2,0 ccm Filtrat subkutan injiziert.
5. III. 0,5 ccm Filtrat intracerebral injiziert.
31. IV. Immer noch voilkommen gesund.
Resum6: Die erste subkutan injizierte Dosis ergabnach
11 Tagen eine unzweifelhafte, aber leichte und schnell
vorubergehende Erkrankung. Dann immun, selbst gegen-
iiber betrachtlichen Multipla der ersten Dosis, subkutan
und intracerebral injiziert.
Versuch 3.
M. rhesus. 6.1.12 subkutane Injektion von 0,03 ccm Filtrat.
16. I. Grofie Unruhe, vielleicht geringer Tremor der hinteren Extremi¬
taten. Spater am Tage deutlicher Tremor.
17. I. Tremor verstarkt. Auch der ganze Korper, die vorderen Ex¬
tremitaten und der ganze Kopf sind nun Sitz des Tremors. 18. I. Tremor
nahezu unveriindert. Keine Paresen.
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Oluf Thomsen,
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19. I. Tremor abnehmend. Etwas unsicher in den Hinterbeinen.
20. I. Jetzt nur schwacher Tremor. Keine Ansiitze zu Paresen.
20. I. 0,06 ccm Filtrat subkutan.
24. I. Vollkommen natiirlich.
27. I. 0,12 ccm Filtrat subkutan.
3. II. 0,25 ccm Filtrat subkutan.
10. II. 0,5 ccm Filtrat subkutan.
17. II. 1,0 ccm Filtrat subkutan.
24. II. 2,0 ccm Filtrat subkutan.
2. III. 0,5 ccm Filtrat intracerebral.
31. IV. Vollkommen wohl. Keine Ansatze zu Paresen.
Resum4: Die erste subkutan injizierte Dosis ergabnach
10 Tagen eine ganz leichte Poliomyelitis, welcher eine aus-
gesprochene Immunitat folgte.
Versuch 4.
M. rhesus. 23.1. subkutane Injektion von 0,03 ccm Filtrat.
30. I. Vollkommen wohl. Subkutane Injektion von 0,12 ccm
Filtrat (versehentlich statt 0,06 ccm).
6 . II. Volkommen wohl. Subkutane Injektion von 0,2 ccm
Filtrat
13. II. Vollkommen wohl. Subkutane Injektion von 0,3 ccm
Filtrat.
17. II. Heute wurde starke Unruhe und Tremor am ganzen Kbrper
beobachtet.
18. II. Tremor hat zugenommen. Sehr unruhig. Keine Paresen.
19. II. Tremor abnehmend. Keine Paresen.
20. II. Tremor nunmehr nur geringfugig. Keine Paresen.
21. II. Noch Andeutungen von Tremor. FriBt gut.
24. II. Vollkommen gesund.
27. II. 2 ccm Filtrat subkutan.
5. III. Vollkommen gesund. 0,5 ccm Filtrat intracerebral.
31. III. Vollkommen gesund.
Resum6: Die ersten Symptome (den 17. II.) sind wahr-
scheinlich entweder der Injektion vom 31. I. (0,12 ccm) zu-
zuschreiben, die versehentlich zweimal so grofi wurde wie
beabsichtigt, oder der Injektion vom 6. II. (0,2 ccm). Dafi
die Krankheit ganz abortiv, ohne Paresen verlief, sich nur
in Tremor aufierte, beruht wahrscheinlich auf der Wirkung
der ersten Injektion (0,03ccm). Nach Ablauf der ganz abor-
tiven Erkrankung ausgesprochene Immunitiit.
Versuch 5.
M. rhesus. 6.1.12 subkutane Injektion von 0,02 ccm Filtrat.
23. I. Vollkommen wohl. 0,04 ccm Filtrat subkutan.
30. I. Vollkommen wohl. 0,08 ccm Filtrat subkutan.
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Experimentelle Untersuchungen fiber die Poliomyelitis. 211
2. II. Heute Morgen wurde leichte Schwache der Hinterbeine be-
obachtet. 5 h nachm. deutliche Parese der Hinterbeine. 3. II. Heute aufler-
dem ganz paretisch im rechten Arm.
4. II. Krankheit fortschreitend. 5. H. Tot. Sektion: typische Ver-
anderungen im ganzen Rfickenmark.
Resum4: Die erste Dosis (0,02) scheint keine besondere
Immunitat ergeben zu haben, da die ersten, am 2. II. be-
ginnenden Krankheitssymptome vermutlich durch die In-
jektion vom 23. I. (0,04) hervorgerufen sind, die eine todlich
verlaufende Krankheit herbeif fihrte.
Versuch 6.
M. rhesus. 23. I. 12 subkutane Injektion von 0,02 ccm
Filtrat.
30. I. Vollkommen wohl. 0,04 ecm Filtrat subkutan,
2. II. Recht starker universeller Tremor. 3. H. Tremor hat zuge-
nommen. 4. H. Wie gestern. 5. IL Im ganzen starker angegriffen,
Tremor stark, etwas Parese beider Hinterbeine. 6. II. Eher etwas besser,
Tremor andauemd bedeutend. Eigenartiges scarlatinaahnliches Exanthem
im Gesicht. 7. II. Wie gestern. 8. II. Exanthem zuriickgegangen, Tremor
etwas vermindert. 10. II. Tremor abnehmend. Ausgepragte schlaffe Parese
beider Hinterbeine. 12. II. Exanthem ganz geschwunden, Zustand sonst
unverandert.
13. H. 0,5 ccm Filtrat subkutan.
17. H. In guter Besserung. Andauemd schlaffe Parese der Hinter¬
beine.
20. H. 1 ccm Filtrat subkutan. Parese unverandert, sonst wohl,
frifit mit gutem Appetit.
27. H. 2 ccm Filtrat subkutan. Zustand unverandert.
5. HI. 0,5 ccm Filtrat intracerebral.
8 . III. Starb an Pneumonie. Mikroskopie des Lendenmarkes
zeigt Atrophie der Ganglienzellen, Reste perivaskularer Infiltration.
Resum4; Die erste Dosis (0,02 ccm) rief hier offenbar
eine recht ernste, jedoch nicht tfidlich verlaufende Erkran-
kung hervor, welche aber mit dauernder Invaliditat endet.
Nach Ablauf dieses akuten Stadiums immun.
Versuch 7.
M. rhesus. 23. I. 12 subkutane Injektion von 0,02 ccm
Filtrat.
30. I. Vollkommen wohl. Subkutane Injektion von 0,12 ccm
Filtrat (versehentlich statt 0,04).
31. I. Etwas leichter Tremor am ganzen Korper, am meisten jedoch
an den Armen. Keine Paresen.
1. II. Wie gestern. 2. II. Der Tremor hat aber abgenommen.
3. II. Tremor hat nachgelassen. Keine Paresen.
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212
Oluf Thomsen,
6 . II. 0 ,2 ccm Filtrat subkutan.
13. II. 0,4 ccm Filtrat subkutan.
20. II. 1,0 ccm Filtrat subkutan.
27. II. 2,0 ccm Filtrat subkutan.
5. III. 0,5 ccm Filtrat Intracerebral.
31. III. Vollkommen wohl.
Eesum4: Die erste Dosis (0,02) ergab hier eine ganz
rudimentare Erkrankung, welche sehr betriichtliche Im-
munitat hinterlieB.
FaBt man das Ergebnis der obigen Versuche zusammen,
so sieht man, daB eine Anfangsdosis von 0,5 ccm Filtrat sub-
kntan injiziert (Versuch 1) tOdliche Infektion ergab. Eine
Anfangsdosis von 0,03 ccm (Versuch 2, 3 und 4) rief eine
abortive, vollst&ndig schwindende Krankheit hervor, die eine
ausgesprochene Immunitat hinterlieB (Versuch 2 und 3). Beim
Versuch 4 sind die Verhaltnisse etwas unklar. Die ersten
Symptome zeigten sich hier am 25. Tag nach der ersten In-
jektion (0,03 ccm). Inzwischen waren am 7. Tag 0,12 ccm,
am 14. Tag 0,2 ccm und am 21. Tag 0,3 ccm injiziert worden.
Die zweite Dosis (0,12 ccm), die infolge einer Verwechslung
zweimal so groB war wie beabsichtigt, kann die ganz abortive
Erkrankung hervorgerufen haben, welche vermutlich infolge
des relativ refraktaren Zustandes so leicht verlief, der durch
die erste Injektion (0,03 ccm) herbeigeffihrt worden sein mag.
Beim Versuch 7 findet man, daB eine Anfangsdosis von 0,02 ccm
ebenfalls eine nur andeutungsweise vorhandene Krankheit
hervorruft, die sich in einem 3 Tage dauernden Tremor auBerte
und einen ausgesprochen refraktaren Zustand fur steigende
Virusmengen hinterlieB. Versuch 6 lehrt, daB selbst eine
Initialdosis von 0,02 ccm eine schwerere Erkrankung als be¬
absichtigt herbeifuhren kann, indem die hier hervorgerufene
Parese bis zu dem Eingehen des Tieres an einer interkurrenten
Krankheit bestehen blieb, und sich bei der Sektion irreparable
Destruktionen in der grauen Substanz des Lendenmarkes
fanden. Endlich zeigt der Versuch 5, daB die Dosis 0,02 ccm
als erste Dosis nicht in alien Fallen gegen eine spatere In¬
jektion von der zweifachen Dosis schiitzen kann, welche in
diesem Falle vermutlich die den Tod herbeifiihrende Infektion
hervorrief.
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Experimentelle Untersuchungen fiber die Poliomyelitis.
213
Interessant war das in den Versuchen 2, 3, 4 und 7 be-
obachtete Krankheitsbild, welches von der sehr heftigen Krank-
heit ganz verschieden ist, die sich bei M. cynomolgus konstant
entwickelte und hier stets den Tod herbeiffihrte. Ans&tze zu
scbnell schwindender Parese fanden sich in den Versuchen 2
und 3, dagegen war keine Spur hiervon vorhanden in den
Versuchen 4 und 7, wo die Krankheit sich nur in einem sehr
charakteristischen Tremor der Muskulatur fast des ganzen
Korpers fiuBerte.
War es somit gegliickt, durch willkurlich gewShlte Ver-
minderung der Virusmenge eine leichte oder gar g&nzlich
abortive Erkrankung hervorzurufen, der eine ausgesprochene
Immunit&t folgte, so w&re es doch wilnschenswert, daB die
Immunit&t mit geringerem Risiko erzielt werden kbnnte, als es
bei den besprochenen Versuchen der Fall war, wo man sich
offenbar in dem Grenzgebiet bewegte, in welchem Zufallig-
keiten und individuelle Verschiedenheit von entscheidender
Bedeutung sein konnten. Mdglicherweise liegt die Sache so, daB
eine, wenn auch ganz leichte Affektion des Zentralnerven-
sy stems eine unumg£ngliche Notwendigkeit ist, urn zu der
Immunit&t zu gelangen. Der universelle Tremor, der in keinem
der obigen F&lle ausblieb, muB unzweifelhaft als eine AeuBe-
rung einer Irritation der motorischen Elemente im Rflcken-
mark aufgefaBt werden. Das haupts&chlichste Ziel muB in
diesem Falle das sein, diese Affektion des zentralen Nerven-
systems auf das MindestmaB zu beschrSnken, wombglich bis
zu dem Punkt, wo tiberhaupt keine nachweisbaren klinischen
Symptome sich einstellen. 0,02 ccm Filtrat, die kleinste bisher
angewandte Anfangsdosis, war nun offenbar eine zu groBe
Dosis, indem sie im Versuch 6 eine weit schwerere Erkrankung
herbeigefflhrt hatte, als es erwtinscht war. Andererseits scheint
der Versuch 5 zu zeigen, daB eine einmalige Injektion von
0,02 ccm wirkungslos bleiben kann, indem es hier, angesichts
der Dauer der Inkubation, wohl am wahrscheinlichsten ist,
daB die tOdlich verlaufende Krankheit durch die nachfolgende
Dosis 0,04 hervorgerufen wurde. Falls nun, wie erwahnt,
die Sache so liegt, daB eine Affektion des zentralen Nerven-
systems zur Erzielung der Immunit&t unbedingt erforderlich
ist, so laBt sich sehr wohl denken, daB eine zufallige und im
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214
Oluf Thomsen,
fraglichen Augenblick besonders ausgesprochene Resistenz des
Tieres all das in 0,02 ccm Filtrat enthaltene Virus vernichtet
haben kann, ehe dieses noch das Zentralnervensystem an*
greifen konnte, und unter dieser Voraussetzung mufite dann
die n&chste Dosis 0,04 ccm als erste Dosis wirken. Die
folgenden Versuche (8—14) wurden deshalb in der Weise
angestellt, daB die Anfangsdosis vermindert und jede Dosis
mehrmals wiederholt wurde, ehe die Dosis vergrSBert wurde.
Das Resultat war folgendes:
Versuche 8 —14.
7 gleich groSen M. rhesus wurden je die folgenden Dosen Filtrat
subkutan injiziert:
22. I.
0,005
ccm
5. m.
0,06 ccm
29. I.
0,005
tj
12. in.
0,12 „
5. II.
0.01
20. III.
0,24 „
13. II.
0,01
yy
27. III.
0,5 „
20. II.
0,015
yy
3. IV.
1,0 „
27. II.
0,03
10. IV.
2,0 „
24. IV. 0,5 ccm intracerebral.
5 von diesenTieren haben bis heute 1 ) kein irgendwie er-
kennbares Symptom aufgewiesen; 1 Tier hatte in den Tagen
vom 16. III. bis 19. III. einen ganz leichten, kaura wahr
nehmbaren Tremor, derdaraufvollkommenschwand. Ferner
wurde bei einem Tier eine typische, aber leicht verlaufende
Poliomyelitis, welche jedoch mit dauernder Invaliditat
endete, beobachtet. Der Verlauf der Krankheit dieses Tieres war im
einzelnen, wie folgt:
Am 2. III. w r urde eine vollstiindige Monoplegie des linken Hinter-
beines bemerkt. Sie erfolgte plotzlich und ohne voraufgehende Anzeichen
einer Erkrankung des Tieres, welches denn auch seine natiirliche Lebhaftig-
keit und FreBlust unvermindert bewahrte; kein Tremor. 3. III. Heute ist
auch das rechte Hinterbein ganz schlaff. Das Tier klettert flink umher
mit den Armen, die Rinterbeine schlaff hiingen lassend. Das Allgemein-
befinden nicht angegnffen. 7. III. Parese unverandert, Oedem zunehmend,
verbreitet sich aufwiirts an den Crura. Allgemeinbefinden gut. Da das
Oedem zunahm und das Tier mit seiner vollstiindigen Parese beider Hinter-
beine sehr hilflos war, wurde es am 14. III. getotet.
Die Sektion ergab ausgesprochene Atrophie der grauen Substanz
der Intumescentia lumbalis; schon mit blofiem Auge sah man die graue
Substanz hier eingefallen, an der Schnittfliiche sich als von der weifien
Substanz umgebene Vertiefungen darstellend. Mikroskpisch: starker Schwund
der Vorderhorngan glienzellen.
1) 21. Juni 1912.
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Experimen telle Untersuchungen iiber die Poliomyelitis. 215
Es unterliegt keinem Zweifel, daB das Ergebnis dieser
7 Versuche ein wesentlich besseres war als das der fruheren,
indem 3 von den Tieren, ohne die geringsten Symptome der
Poliomyelitis aufzuweisen — nicht einmal Ans§tze zu Tremor
konnten wahrgenommen werden — sich als f&hig erwiesen,
immer grSBere Dosen Filtrate zu vertragen. Selbst sehr
bedeutende Dosen (2 ccm subkutan, 0,5 ccm intracerebral)
wurden ohne den geringsten Schaden vertragen. Bei einem Tier
wurde w&hrend einigen Tagen ein eben angedeuteter Tremor
beobachtet; dieser war so wenig deutlich ausgeprSgt, daB er
sicher unbeachtet geblieben ware, wenn nicht die Aufmerk-
samkeit speziell auf dieses Symptom gerichtet gewesen wfire.
Nur bei einem Tier tiberstieg die Wirkung der Injektion das
gewflnschte MaB. indem bier eine dauernde Parese der Hinter-
beine eintrat, die auf Vernichtung der Vorderhornzellen des
Lumbarmarkes beruhte. Die Krankheit des Tieres war an
sich leicht, indem das Allgemeinbefinden tiberhaupt nicht
merkbar angegriffen war. Vielleicht h&tte man auch bei diesem
Tier durch noch mehr allmShliches Steigen der Filtratmengen
vermeiden konnen, eine eigentliche Krankheit hervorzurufen.
Man sieht also, daB es im Prinzip unzweifelhaft gelingen
kann, den M. rhesus aktiv zu immunisieren mittels steigender
Mengen von lebendigem Virus. Wie eben erwkhnt, wurde
dies schon frtther von Flexner und Lewis versucht, welche
jedoch der Ansicht zu sein scheinen, daB zuverlassige Oder
sichere Ergebnisse hiermit nicht gewonnen werden kbnnen,
indem von ihren Versuchstieren einige keine starke Immunitat
erwarben, andere Paralyse bekamen oder eingingen. Es scheint
mir aber, daB das Ergebnis meiner oben mitgeteilten Versuche
eine Aussicht erbffnet, daB die Immunisierung auf diesem Wege
mit grbBerer Sicherheit, als gewohnlich angenommen wird, ge¬
lingen kann, wenn jede ndtige Rucksicht genommen wird.
Was die am Anfang dieser Arbeit erwahnten Immuni-
sierungsversuche mit „qualitativ“ verandertem Virus angeht,
so scheinen die damit erzielten Resultate noch viel weniger
konstant zu sein, und dies scheint leicht erkl£rlich, weil bisher
kein Beweis dafflr vorliegt, daB das Virus durch die Ein-
wirkung von Karbolsaure oder von viruzidem Serum oder
aber durch Eintrocknen wirklich qualitativ verSndert wird.
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216
Oluf Thomsen
Die gewonnenen Resultate lassen sich ebensogut mit der An-
nahme erklaren, daB die betreffende Einwirkung einen grbBeren
Oder geringeren Teil des Virus abgetbtet hat. Wenn es aber
das nicht abgetotete unveranderte Virus ist, das die erzielte
Wirkung verschuldet hat, so ist es ohne weiteres klar, daB
man viel mehr Aussicht hat, sicher arbeiten zu kbnnen, bei
Verwendung eines genau bekannten, filtrierten Virus, dessen
Menge man dem nachgestrebten Ziel genau anpassen kann.
Noch eine Frage verdient erwahnt zu werden, namlich
die, ob das filtrierte Virus sich im Laufe der Zeit verandert.
Das von mir benutzte Filtrat ist zu Versuchen verwendet
worden, die sich uber etwa 5 Monate erstreckten. Wahrend
dieser Zeit wurde es in mit Gummistopseln geschlossenen
braunen Giasern aufbewahrt, die im Dunkeln bei 0° standen.
Die Flfissigkeit blieb andauernd vollkommen klar, nur am
Boden der Glaser findet sich eine dOnne Schicht, die aus
EiweiBniederschiagen besteht. Von einer Vermehrung des
Virus wahrend der Aufbewahrung kann vermutlich keine Rede
sein. Mehr Wahrscheinlichkeit konnte es fur sich haben, daB
das Virus im Laufe der Zeit zu einem mehr Oder minder groBen
Teil abstiirbe. Das scheint jedoch nicht der Fall gewesen
zu sein. Am 1. Marz 1912, d. h. als das Filtrat 4 Monate
alt war, wurde an 2 M. cynomolgus eine intraperitoneale
Injektion von 0,03 bzw. 0,003 ccm vorgenommen. Das erstere
Tier starb nach Verlauf von 13 Tagen an Poliomyelitis, das
zweite nach 21. Vergleicht man dies Ergebnis mit der Wirkung
der am 10. XII. 1911 an einer Anzahl von M. cynomolgus vor-
genommenen Austitrierung, so sieht man keinen Unterschied,
abgesehen von einer unerheblichen Verlangerung der Inkubation,
welche jedoch nicht grbBer ist, als daB sie auf Zufall beruhen
kann. Eine wesentliche Abschwachung erfuhr das Virus somit
nicht wahrend der 5-monatigen Aufbewahrung.
Fragt man nun, ob die gewonnenen Immunisierungs-
ergebnisse auch auf Menschen anwendbar gemacht werden
konnen, so muB dies mit groBer Zuriickhaltung beantwortet
werden. Hinsichtlich des M. rhesus scheinen die Versuche
darzutun, daB man eine sogar betrachtliche Immunitat mit
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Experimentelle Untereuchungen iiber die Poliomyelitis.
217
Sicherheit erzielen kann, aber bislang nicbt ganz ohne Gefahr
ffir das Individuum. Aber auch wenn es gelingt, die Technik
so auszuarbeiten, daB sowohl Sicherheit der Wirkung und
Ungefahrlichkeit der Methode erreicht wird, so bleibt es doch
eine groBe Frage, ob die Verhaltnisse sich ohne weiteres auf
Menschen ilbertragen lassen und hier Geltung haben. Im
Hinblick hierauf ist alle Ursache vorhanden, erneut auf die
verschiedene Empf&nglichkeit der verschiedenen Makakenarten
hinzuweisen, die eine direkte Anwendung der fiir die eine
Art gewonnenen Erfahrungen auf die andere nicht gestattet.
In noch viel hoherem MaBe muB dies naturgemBB Geltung
haben, wenn die Versuchsobjekte Menschen sind.
Zusammenfassung.
Das Poliomyelitisvirus scheint in Vaccinepusteln beim
Macacus cynomolgus wachsen und sich vermehren zu kbnnen.
Die Kultur in vitro auf aus Vaccinepustelmasse hergestellten
Substraten ist bisher nicht gelungen.
Es wurde ein bedeutender Unterschied in der Empf&ng-
lichkeit fOr intraperitoneal injiziertes Poliomyelitisvirus bei
M. cynomolgus, M. sinicus und M. rhesus gefunden. M. cyno¬
molgus erwies sich als weit empfindlicher als die beiden
anderen Arten. M. cynomolgus erscheint daher fiir den Nach-
weis ganz kleiner Virusmengen besonders geeignet.
Es gelang regelm&Big bei angemessener quantitativer
Dosierung des lebendigen Virus (subkutaner Injektion) dem
M. rhesus eine betr&chtliche Immunity, selbst gegen intra-
cerebrale Injektion des Virus beizubringen. In weitaus den
meisten Fallen kann diese Immunisierung ohne Schaden fiir
das Versuchstier vorgenommen werden.
Ob die bisher zur „Abschwachung“ des Poliomyelitisvirus
angewandten Methoden eine qualitative VerBnderung ver-
nrsachen, bleibt zweifelhaft. Die Abschwachung kann rein
quantitativ erklfirt werden.
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218
Methodi Popoff,
Nachdruck verboten.
Ueber h&molysehemmende Erscheinungen bel luetischen
Seren and fiber die MOglichkeit ihrer diagnostischen
Verwertung.
Von Dr. Methodi Popoff,
Dozent an der Univeraitat Sofia.
(Eingcgangen bei der Redaktion am 15. Mai 1912.)
Beim Arbeiten mit normalen und luetischen Menschen-
seris fielen mir Unterschiede in den hUmolytischen Eigen-
schaften derselben gegeniiber Meerschweinchenblutkorperchen
auf. Diese Beobachtung war der Ausgangspunkt, um diese
Unterschiede einer eingehenden Prtifung zu unterziehen. Ich
suchte dabei erstens Auskunft dartiber zu bekommen, ob
diese Eigenschaften irgendwelche Regelm&Bigkeit zu erkennen
geben, und zweitens ihre Ursacben zu ermitteln. Die zur
Losung dieser Fragen vorgenommenen Versuche ergaben ferner
Resultate, welche ein Eingeben auf die Frage der Komplement-
bindung, speziell bei der Wassermann-Neisser-Bruck-
schen Reaktion bei Syphilis, notwendig machten. Es zerfiel
deshalb diese Studie in zwei Teile; in dem ersten Teil fand
die Besprechung der hamolytischen Eigenschaften der normalen
bzw. luetischen Sera statt; der zweite Teil wurde der Theorie
der Komplementbindung bei der Wassermann-Neisser-
Bruckschen Reaktion und den sich daraus ergebenden Frage-
stellungen und Versuche einger&umt.
Enter Teil.
1. a) Hamolytische Eigenschaften normaler Mensohensera.
Das normale Menschenserum hat, wie bekannt, eine ver-
schieden holie hamolytische Kraft gegen die verschiedenen
Blutkorperchenarten. So ergab eine vergleichende Unter-
suchung die folgenden Resultate 1 ):
1) Die Blutkorperchen sind fiir alle Versuche gewaschen angewandt.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 219
Tabelle I.
Blutkorperchen in
Verdiinnung 1:10.
0,1 ccm Menschenserum, 1 ccm NaCl-Losung
0,1 ccm Schweine-
blutkorperchen
0,1 ccm Rinder-
blutkorperchen
0,1 ccm Hammel-
blutkorperchen
Nach 20 Min. im
Thermostat, bei
37° C
Nach 20 Std. im
Zimmer
Kompl. Hemmung
GroBe Kuppe. Die
Flussigkeit kaum
rosa verfarbt
Kompl. Hemmung
GroBe Kuppe. Die
Flussigkeit schwach
rosa verfarbt
Kompl. Hemmung
Hamolyse m. noch
sehr schwacher
Triibung
0,1 ccm Menschenserum, 1 ccm NaCl-
Losung
Kontrollen:
von jeder
0,1 ccm
WeiBe-Maus-
blutkorperch.
0,1 ccm
Kaninchen-
blutkorperchen
0,1 ccm Meer-
schweinchen-
blutkorperchen
Blutart (0,1)
und 1 ccm
NaCl-Losung
Nach 20 Min. im
Thermostat, bei
37° C
Nach 20 Std. im
Zimmer
Hemmung
Nach 3 St. fast
kompl. Losg.
mit Triibung
Losung mit
starker Trii-
bung
Nach 3 Std. fast
, kompl. Losg.
mit schwacher
| Triibung
Komplette Lo¬
sung
dgl.
Nach 24 Std.
keine Spur
von Losung
dgl.
Der Versuch 1 Std. im Therraostaten bei 37° C, dann Zimmertemperatur.
Diese Versuche ergeben, daB das Menschenserum eine
hohe h&molytische Kraft gegeniiber Meerschweinchenblut-
korperchen besitzt, dagegen ist seine h&molytische Wirkung
anderen Blutkbrperchenarten gegeniiber eine sehr schwache
bzw. gleich Null. Deshalb habe ich bei meinen sp&teren Ver-
suchen nur gewaschene MeerschweinchenblutkSrperchen x ) an-
gewandt, und zwar in Verdiinnung 1:10 und 1:5.
1) Die mit defibriniertem (durch Schiitteln mit Glasperlen) Meer-
schweinchenblut angestellten Parallelversuche zeigen, daB die auf diese
Weise praparierten Blutkorperchen auch zum Versuch geeignet sind uud
dieselben Kesultate ergeben. Doch ist das Arbeiten mit gewaschenen Blut¬
korperchen vorzuziehen, da es mogliche Fehler (Vorhandeusein von Meer-
schweinchenkomplement!) ausschaltet.
ZeiUchr. f. Immunititsforschung. Ong. Bd. XIV. 15
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220
Methodi Popoff,
Die Austitrierung des Menschenserums J ) in bezug auf seine
h&molytische Wirkung gegentlber Meerschweinchenblutkbrper-
chen ergab folgende Resultate:
a) MeerschweinchenblutkOrperchen in Verdiinnung 1:10. Auf 1,1 ccm
Fliissigkeitsmenge mit NaCl-Lbsung aufgefiillt. Thermostat, 37" C 2 ).
Serum:
0,5
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
Kompl. Los. nach:
10'
15'
15'
15'
15'
15'
15'
Serum:
0,17
0,15
0,12
0,1
0,07
0,05
0,02
Kompl. Los. nach:
15'
20 1 2 3
20*
20'
30'
45'
1»
Los. mit Triib.
Kontrolle: 0,1 ccm Blutkorperchen + 1 ccm NaCl nach 24“ keine Ldsung.
Die MeerschweinchenblutkOrperchen werden also durcb
das Menschenserum noch in Verdtlnnung 1:20 nach 2 Stunden
komplett h&molysiert; in Verdtlnnung 1:50 vermag es nach
3 Stunden die BlutkOrperchen halb zu h&molysieren (LOsung
mit Trtibung).
/?) Wendet man zum Versuche die MeerschweinchenblutkOrperchen in
Verdiinnung 1:5 an (Dosis 0,1 ccm), so bekommt man folgende Resultate *)
(auf 1,1 ccm Fliissigkeitsmenge mit NaCl-Losung aufgefiillt; Thermostat,
37® C):
Serum:
0,3 0,2
0,1
0,08
0,07
Kompl. Los. nach :
7' 10'
15'
25'
35'
Serum:
0,05
0,04
Kontrolle: 0,1 ccm Blut-
Kompl. Los. nach:
1"
fast kompl. Losg. mit
schwacher Triibung
18 h
halbe
Losg.
korperch. + 1 ccm NaCl
nach 24 b keine Losung
In einer Verdtlnnung 1:15 vermag das frische Menschen¬
serum 0,1 ccm MeerschweinchenblutkOrperchen nach ca. 35 Mi-
nuten komplett zu h&molysieren. HOhere Serumverdtinnungen
(1:20) bewirken nur eine teilweise bzw. beginnende H&molyse.
Es war nun die Frage von Interesse, wie sich das Menschen¬
serum in bezug auf seine Mmolytischen Eigenschaften bei
einer und derselben Person in verschiedenen Tagen bzw. in
verschiedenen Stunden des Tages und der Nacht verh<.
1) Das Menschenserum nicht ganz frisch, iiber 2 Tage alt.
2) Bei Zimmertemperatur (ca. 14° C) wird die Hiimolyse stark ver-
langsamt; es tritt z. B. komplette Ldsung nach 2 h bis zur Serumdoeis 0,35
inkl. ein.
3) Das Serum ganz frisch, 6" nach der Blutentnahme untersucht.
Dies erklart auch die Unterschiede in seiner hiimolytischen Kraft im Ver-
gleich zur Versuehsserie a.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 221
0,1 ccro Serum, 0,1 ccm MeerschweinchenblutkOrperchen in Verdunnnng
1:5, 1 ccm NaCl-L6sung, im Thermostaten bei 37*.
Blu ten tnahme
am
Untersucht
am
Zahl der Stun den
zwischen Blut-
entnahme und
Untersuchung
Komplette
Losung nach
1912
29. III.
4° nachm.
29.
in.
Herr P.
4“® nachm.
7 ,
30 Minuten
30.
10 80 vorm.
30.
12® mittags
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30
77
30.
6° nachm.
1.
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11"® vorm.
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55
77
1.
IV.
9° vorm.
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27,
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9.
77
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1
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77
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10.
77
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1
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77
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10.
77
3 s ® nachm.
1
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10.
77
9°
11.
77
10® vorm.
13
20
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11.
77
3° friih
11.
77
10’ ,.
7
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11.
77
7° vorm.
11.
77
10® „
3
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11.
77
3° nachm.
11.
77
4® nachm.
1
15
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11.
77
8° „
12.
97
11® vorm.
15
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77
12.
77
8 s ® vorm.
12.
77
11 30 „
3
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77
12.
77
2 40 nachm.
12.
77
4® nachm.
17,
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13.
77
8° vorm.
13.
77
10® vorm.
2
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14.
77
10° „
14.
77
10 s ®
7 ,
15
77
15.
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10“ „
15.
77
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l
20
77
16.
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15.
77
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6
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17.
77
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17.
77
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18.
77
4° nachm.
19.
77
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12
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77
19.
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19.
77
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* 77
6
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77
2.
IV.
I s ® nachm.
2.
IV.
Herr J.
4 80 nachm.
3
30 Minuten
5.
77
8® vorm.
5.
79
11° vorm.
3
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77
5.
77
10 3 ® nachm.
6.
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6.
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1
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12.
77
11° „
15
30
77
1) Komplette Losung mit iiuUerst leichter Triibung.
15*
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Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
222
Methodi Popoff,
Blutentnahme
am
Untersucht
am
Zahl der Stunden
zwischen Blut¬
entnahme und
Untersuchung
Komplette
Losung nach
1
12.
IV.
8*° vorm.
12.
Herr J.
IV. ll i0 vorm.
3
30 Minuten
12.
99
2*° nachm.
12.
„ 4° nachm.
17 ,
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13.
99
8 °
vorm.
13.
„ 10 ° vorm.
2
20 „
16.
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4°
nachm.
17.
„ 4° nachm.
24
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17.
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17.
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j 20 Minuten
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99
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1 15 „
5.
IV.
3°
nachm.
6 .
Herr S.
IV. 12° mittags
21
40 Minuten
6 .
99
2 °
99
6 .
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2
30 „
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1 °
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3
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IV.
2 °
nachm. !
9.
Herr G.
IV. 5° nachm.
3
50 Minuten
10 .
99
2 °
99 i
10 .
6 °
99 U 99
4
40 „
12 .
IV.
6 °
nachm.
13.
Herr 0.
IV. 10° vorm.
10
50 Min. 1 )
13.
99
10 °
vorm.
14.
10 °
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40 „ >)
2 .
IV.
10 °
vorm.
2 .
Herr K.
IV. 12 ° mittags
2 I
40 Minuten
17.
99
10 °
?>
17.
190
99 x ~ 99
2 I
40 „
Wie aus der vorhergehenden Tabelle zu ersehen ist, zeigt
zwar die Mmolytische Kraft des Serums einer und derselbeu
Person kleine Schwankungen, so aber, daft spfitestens nach
1 Stunde eine komplette Hamolyse eintritt. Aus derselben Ta¬
belle ist weiterhin ersichtlich, dafi bei zwei Herren das Serum
je lmal (Herr J. 10. IV) bzw. 2mal (Herr 0.) zwar eine kom¬
plette Hllmolyse gab, doch war die FIflssigkeit nicht kristall-
klar durchsichtig. Dies veranlaBte mich, nachzuprflfen, in-
wieweit solche individuelle Schwankungen vorkommen konnen.
Zu diesem Zweck untersuchte ich nach der obigen Versuchs-
anordnung das Serum weiterer 101 gesunder Menschen. Es
wurde also, die vorhergehenden 7 Falle mitgerechnet, das
Serum von 108 gesunden Menschen in 161 Reaktionen auf
seine hamolytische Kraft nachgeprtift. Die erzielten Resultate
waren die folgenden: bei 106 Personen bewirkte das unter¬
suchte Serum eine komplette Losung der Blutkorperchen; nur
1 ) Komplette Losung, aber nicht kristallklar.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 223
in zwei Fallen zeigte das Serum LbsungmitTrttbung. Von
den 106 Seren, welche eine komplette Lbsung gaben, war bei
97 die Losung kristallklar lackfarben, bei den fibrigen 9 war die
Losung ebenfalls komplett, aber nicht kristallklar durchsichtig.
In der Zeit des Eintretens der kompletten Losung waren
diesel ben Schwankungen zu beobachten, wie die auf p. 221/22
wiedergegebenen: deshalb sehe ich von der Wiedergabe der
ganzen Protokolle ab.
Beim Durchsehen derselben Versuchsreibe ist auBerdem
noch zu bemerken, daB die unmittelbar bzw. ein paar Stunden
nach der Blutentnahme untersuchten Sera rascher h&mo-
lysierten als diejenigen, welche 24—30 Stunden alt waren.
Um den Einflufi des Alterns der Sera auf ihre h&molytische
Kraft hin zu untersuchen, habe ich die Sera von 10 gesunden
Menschen gleich nach der Blutentnahme bzw. 1, 2, 3 und
4 Tage nach derselben untersucht. Es zeigte sich, daB noch
am 2. Tage die Seren nach hochstens 1 Stunde eine H&mo-
lyse hervorriefen. Die <eren Sera h&molysierten zwar viel-
fach ganz komplett, doch trat in der Mehrzahl der F&lle eine
HSmolyse mit mehr oder weniger ausgesprochenen Trfibungen
auf. FOr vergleichende Untersuchungen auf ihre h&molytische
Wirkung sind deshalb nur Sera zu verwenden, die nicht alter
als 2 Tage sind.
b) H&molytische Eigenschaften manchor Krankensera.
Die nach dieser Richtung von mir gesammelten Beobach-
tungen sind nicht zahlreich. Doch nach dem wenigen von mir
Beobachteten zu urteilen, kann man mit einer gewissen Sicher-
heit annehmen, daB bei vielen Krankheiten, Tuberkulose
(4 F&lle), Typhus (4 F&lle), Pneumonie (2 F&lle), Meningitis
(1 Fall), Chlorose (1 Fall), die h&molytischen Eigenschaften
des Serums, verglichen mit denjenigen gesunder Menschen,
nicht ver&ndert werden*). Nicht so steht es aber mit den
o) Hamolytisoben Eigenschaften der luetischen Sera.
Die nach der Wassermann-Neisser-Bruckschen
Reaktion positiv reagierenden Seren zeigten in den meisten
1) Diese Befunde werden durch ahnliche in der Literatur verstreute
Angaben gestiitzt.
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224
Methodi Popoff.
Fftllen eine mehr oder weniger komplette Hemmung der
H&molyse. Die nach dieser Richtung vorgenommenen Unter-
suchungen ergaben, daft diese Koinzidenz keine zufailige ist,
sondern dafi sie mit einer gewissen Konstanz bei den nach
der Wassermann-Neisser-Bruckschen Reaktion positiv
reagierenden Sera eintritt.
Angesichts dieses Ausfalls der Resultate lag der Gedanke
nahe, die h&molysehemmenden Eigenschaften der luetischen
Sera diagnostisch zu verwerten. Die zu diesem Zweck von
mir angewendete Untersuchungsmethode ist die folgende.
Von jedem znr Untersuchung kommenden Serum werden
die unten angegebenen Verdflnnnngen hergestellt.
Tabelle II.
No.
Verdunnungen
Ser.No 1
Ser. No. 2
Ser. No. 3
Ser. No. 4.
1
0,3 ccm Serum
0,8 ccm NaCl-Losung
0,1 ccm Meerschw.-Blutk.
Hem-
mung
Hamolyse
od. begrnn.
Haraolyse
Hamo-
lyse
Hamolyse
2
0,2 ccm Serum
0,9 ccm NaCl-Lbsung
0,1 ccm Meerschw.-Biutk.
Hem¬
mung
Hemmung
Hiimo-
lyse
Hiimolyse
3
0,1 ccm Serum
1,0 ccm NaCl-Losung
0,1 ccm Meerschw.-Blutk.
Hem-
mung
Hemmung
Hem-
mu ng
Hemmung mit
beginn. Hii-
molyse. Die
Flussigkeit
durchsichtig
Resultat
++++!
+ + + j
+ +
+
No.
Verdiinnungen
Ser. No. 5
Ser. No. 6
Kontrolle
1
0,3 ccm Serum
Hamolyse
Hamolyse
1 ccm NaCl-Losung
0,8 ccm NaCl-Losune
0,1 ccm Meerschw.-Blutk.
+ 0,1 ccm Meer-
schweinchenblut-
2 (0,2 ccm Serum
0,9 ccm NaCl-Losung
0,1 ccm Meerschw.-Blutk.
Hamolyse
Hamolyse
korperchen. Muli
aucn nach 24 Std.
keine Spur von
Hiimolyse zeigen 1 )
3
0,1 ccm Serum
1,0 ccm NaCl-Losung
0,1 ccm Meerschw.-Biutk.
Hamolys.mit
sehr schwach.
Hiimolyse
Hemmung
Resultat
±
—
Nach deni Zufiigen des Blutes (d. i. Meerschweinchenblutkorper-
chen, gewaschen, Yerdiinnung 1:5) kommen die Rohrchen in den
1) Eine Kontrolle mit normalem Mensehenserum ist unentbehrlic-h.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 225
Thermoetaten 37° C, wo sie eine Stunde verbleiben. Nach dieser Zeit
(ja viel fruher, schon nach 20—10 Min.) zeigen die normalen Sera eine
komplette Hamolyse (= negative Sera im AnschluB an Wassermann),
die luetischen Sera dagegen zeigen eine komplette Hemmung (= stark
positive Sera) oder Hemmung mit einem mehr oder weniger gut ausge-
pragten Ansatz zur Hamolyse (— schwach positive bzw. zweifelhafte (±)
Sera, im AnschluB an Wassermann). Die Ablesungsweise ist in der
Tabelle wiedergegeben. Der Versuch wird dann im Zimmer gelassen und
die Resultate nach 2 Stunden nochmals kontrolliert (der Versuch zeigt
dann dieselben Resultate auch nach 24 Stunden), denn manche negative
Sera zeigen nach der Herausnahme aus dem Thermoetaten noch eine
vorubergehende schwache Triibung, welche nach einer gewissen Zeit auf-
gehoben wird. Bleibt die Triibung bestehen, so ist das Serum schwach
positiv oder bei einer sehr leichten Triibiujg ist es zweifelhaft (±). Solche
Sera, die schwach positiven und die zweifelhaften, miissen nach 1—2 Tagen
nachuntersucht werden. Fiir eine rasche Orientierung ist sehr die in
der Tabelle II unter „3“ wiedergegebene Versuchsanordnung (die gleiche
wie bei der Untersuchung der normalen Sera angewendete) zu empfehlen').
Fallt dabei der Versuch negativ aus, d. h. zeigt das Serum eine komplette
Hamolyse, so ist eine weitere Nachprufung derselben nicht erforderlich.
Bei Seren dagegen, welche eine komplette Hemmung oder Hemmung mit
Neigung zur Losung zeigen, ist es notwendig, eine Austitrierung nach der
in der Tabelle II wiedergegebenen Weise vorzunehmen.
Nach der hier beschriebenen Methode habe ich mehr als
600 Seren (meistens bei der unter „3“ wiedergegebenen Ver-
dfinnung) untersucht und die dabei erzielten Resultate mit
dem jeweiligen Ausfall der Wassermann -Neisser-
Bruckschen Reaktion verglichen. Allgemein ausgerechnet
bekam ich eineDifferenz mit den Resultaten der Wassermann-
Neisser-Bruckschen Reaktion in ca. 25 Proz. Die flbrigen
75 Proz. stimmten mit dem Ausfall dieser Reaktion flberein.
In einigen Versuchsreihen erzielte ich manchmal mit der
Wassermann-Neisser-Bruckschen Reaktion flberein-
stimmendere Werte, so z. B. bei einer Untersuchung von
20 Seren stimmten alle 20, d. i. 100 Proz., (therein; bei einer
anderen Untersuchung von 21 Seren war eine Ueberein-
stimmung von 91 Proz. zu verzeichnen (2 Seren gaben ab-
weichende Reaktion), bei einem dritten Fall, wo 25 Sera unter¬
sucht wurden, waren 3 abweichend, 12 Proz.; bei einem
anderen Fall wichen von 20 Seren 2 von den Resultaten der
1) Das Blut zu diesem Versuch ist leicht aus der Fingerkuppe oder
aus dem Ohrliippchen zu entnehmen.
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226 Methodi Popoff,
Wassermann - Neisser - Bruckschen Reaktion ab,
10 Proz. etc. 1 ).
Das hier angewendete Untersuchungsverfahren hat einige Aehnlichkeit
mitder syphilisserodiagnostischen Methodo von Tschernogoubow. Dieselbe
1 st iihnlich der Wassermann-Neisser-Bruckschen Reaktion auf dem
Prinzip der Komplementbindung aufgebaut; Tschernogoubow benutzt
deshalb dieselben alkoholischen Leberextrakte wie Wassermann. Er be-
seitigt aber das bei der Wassermann-Neis^er-Bruckschen Reaktion
gebrauchte Meerschweinchenkomplement, indem er das Komplement des
frischen Menschenblutes benutzt und der immune Hammelblutambozeptor
wird durch den im Menschenblut normal vorhandenen, gegeniiber Meer-
schweinchenblutkorperehen stark wirksame Ambozeptor ersetzt*).
2. Hftmolyse und Hemmung.
Wie sind die mitgeteilten Resultate bei den normalen
bzw. luetischen Seris zu erkl&ren?
FQr das Zustandekommen einer HSinolyse sind zwei
Komponenten notwendig: erstens eine die betreffenden Blut-
kbrperchen sensibilisierende Koraponente, der Ambozeptor,
und zweitens eine die H&molyse herbeifflbrende Komponente,
das Komplement. Diese zwei Komponenten linden sich mit
einer ziemlichen Konstanz nicht nur im Blute normaler Men-
schen, sondern auch solcher an Tuberkulose, Typhus, Pneu¬
monic etc. erkrankten, wie dies aus den Angaben p. 224 zu
entnehmen ist. Diese Angaben werden auch durch frflhere
Untersuchungen gesttitzt. So fand z. B. Hecht unter 325
auf Hammelblutambozeptor gepriiften Sera nur 11 F&lle, welche
einen teilweisen Mangel an denselben aufwiesen und unter
200 Sera zeigten nur 3 eine Verminderung des Komplement-
gehaltes 3 ).
1) Fur die Untersuchung von Liquor cerebrospinalis konnte man
0,1 ccm akt. neg. Serum + 0,2—0,3 Liquor (1 Stunde im Zimmer), dann
0,1 Blutk. (alles auf 1,2 ccm Fliissigkeit mit NaCl-Losung aufgefiillt) an-
wenden. Doch sind meine Erfahrungen nach dieser Richtung zu gering
(nur 6 Liquor untersucht).
2) Tschernogoubow, Berl. klin. Wochenschr., 1908, 1909; Deutsche
med. Wochenschr., 1909.
3) Da das normale Menschensemm eine viel hohere sensibilisierende
Kraft gegeniiber Meerschweinchenblutkorperchen aufweist, so diirfte sich
dieser wenn auch selten beobachtete teilweise Mangel an Ambozeptoren durch
ihre stiirkere Wirksamkeit fast vollstiindig kompensieren (siehe dariiber auch
die Angaben von Tschernogoubow, Berl. klin. Wochenschr., 1909.)
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Hiimolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 227
Fiigt man zu solchen Seren MeerschweinchenblutkOrper-
chen hinzn, so werden dieselben jedesmal komplett h&molysiert
werden.
Wie steht es mit diesen zwei Komponenten im Blute
eines Lueskranken? Beruht die hamolyse-hemmende Wirkung
der Luesseren auf Mangel an Ambozeptor bzw. Komplement
oder aber auf Mangel an alien beiden ?
a) Priifung des Ambozeptorgehaltes.
Um die sensibilisierende Kraft der positiven 1 ) und nega-
tiveD*) Sera vergleichend nachzuprilfen, habe ich folgende
Versuche ausgeffihrt.
a) In drei Rohrchen je 0,1 ccm aktives positives Serum mit je 0,1 ccm
Meerschw.-Blutk. getan. Nach 45 Min. im Therm. 37° kommt in das
erste Rohrchen 0,1 ccm in das zweite 0,07 ccm und in das dritte 0,05 ccm
eines aktiven negativen Serums.
1) 0,1 ccm akt. pos. Ser. + 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45'
+ 0,1 akt. neg. Ser. — Nach 3' kompl. Hiimolyse.
2) 0,1 ccm akt. pos. Ser. + 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45'
+ 0,07 akt. neg. Ser. — Nach 20' kompl. Hiimolyse.
3) 0,1 ccm akt. pos. Ser. + 1 ccm NaCl-Lds. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45'
-f 0,05 akt. neg. Ser. — Nach 30' fast kompl. Hamolyse.
ft) Kontrolle I. Drei Rohrchen mit je 1 ccm NaCl und 0,1 ccm
Blutk. 45' im Therm. 37 °. Dann je 0,1 ccm, 0,07 ccm und 0,05 ccm eines
akt. neg. Ser. zugefiigt.
1) 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45' + 0,1 ccm akt. neg. Ser.
— Nach 20' kompl. Hamolyse.
2) 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45' + 0,07 ccm akt. neg. Ser.
— Nach 30' Hiimolyse mit starker Triibung.
3) 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45' -f 0,05 ccm akt. neg. Ser.
— Nach 30' Hemmung mit beginnender Losung.
y) Kontrolle II. Das akt. neg. Ser. in abfallenden Mengen: 0,1 ccm;
0,07 ccm und 0,05 ccm. Nach 45' im Therm. 37° je 0,1 ccm Blutk. zu-
gesetzt.
1) 0,1 ccm akt. neg. Ser. + 1 ccm NaCl-Los. Nach 45' + 0,1 ccm Blutk.
— Jfech 30' kompl. Hamolyse.
2) 0,07 ccm akt. neg. Ser. + 1 ccm NaCl-Los. Nach 45' + 0,1 ccm Blutk.
— Nach 30' Hiimolyse mit starker Trubung.
3) 0,05 ccm akt. neg. Ser. + 1 ccm NaCl-Lds. Nach 45' + 0,1 ccm Blutk.
— Nach 30' Hemmung mit Losung.
1) Ich gebrauche im AnschluB an Wassermann fur die normalen
Sera die Bezeichnung negative Sera und fiir die Luesseren die Bezeichnung
positive Sera.
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228
Methodi Popoff
£)KontrolleIII. 3 Rohrchen mit je 1 ccra NaCl-Los. und 0.1 com
Blutk. Nach 45' im Therm. 37° C je 0,1 ccm akt. posit. Ser. und 0,1 ccm;
0,07 und 0,05 ccm akt. neg. Ser. zugesetzt
1) 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45' + 0,1 akt. posit. Ser. +
0,1 ccm akt. neg. Ser. — Nach 25' kompl. Hamolyse.
2) 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45' + 0,1 akt. posit. Ser. +
0,07 ccm akt. neg. Ser. — Nach 30' Hamolyse mit schwacner Triibung.
3) 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 ccm Blutk. Nach 45' + 0,1 akt. posit. Ser. +
0,05 ccm akt. neg. Ser. — Nach 30' Hamolyse mit schwacner Triibung.
Aus dem Vergleich der Versuchsreihen a, {3, y und 8 ist
zu entnehmen, daB bei Sensibilisierung der Blutkdrperchen
(45 Min. bei 37 0 C) mit einem positiven Serum die Hamolyse
nach ZufQgen von einem aktiven negativen Serum viel
energischer vor sich geht (a), als bei gleichzeitigem ZufQgen
derselben Mengen von positivem und negativem Serum (8).
In diesen zwei Fallen tritt die Hamolyse ihrerseits energischer
ein als dies bei den Versuchsreihen (3 und y der Fall ist, bei
welchen nur ein Serum (das negative) angewandt wird, da
dabei die Blutkdrperchen nicht so stark sensibilisiert werden.
Das positive Serum hat also noch seine sensibilisierenden
Eigenschaften, d. h. seine Ambozeptoren, trotzdem daB es
allein hamolytisch unwirksam ist.
Dieselben SchlQsse gestattet auch die folgende Versuchs-
reihe. Es gait, nachzuprfifen, ob bei einem positiven Serum
genau so gut Sensibilisatoren vorhanden sind wie bei einem
negativen Serum. Zu dem Zweck habe ich je 0,8 ccm von
einem stark positiven aktiven Serum (a) bzw. einem nega¬
tiven in aktiven (30 Min. bei 55° C) Serum (b) (um das
Komplement zu zerstdren; das stark positive aktive Serum
weist, wie wir spater sehen werden, kein Komplement auf), je
1 ccm Meerschweinchenblutkorperchen (VerdQnnung 1:10) und
1 ccm NaCl-Losung hinzugefugt und 5 Stunden im Thermo-
Staten stehen gelassen; dann wurde zentrifugiert, die oben-
stehende Flussigheit abpipettiert, die Blutkdrperchen zweimal
mit NaCl-Ldsung gewaschen und im Eisschrank fiber Nacht
stehen gelassen. Am nachsten Tage (die obenstehende Flussig-
keit war ganz klar) wurde die Wirkung aktiver negativer bzw.
schwach und stark positiver Sera auf die so sensibilisierten
Blutkdrperchen unter Kontrolle von normalen Blutkdrperchen
bei folgender Versuchsanordnung gepriift.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 229
I. Aktives negatives Serum No. 1.
1) 0,1 Ser. + 0,1 sens. Blutk. a + 1 ccm NaCl-Los. — Nach 10' kompl.
Hamolyse.
2) 0,1 Ser. + 0,1 sens. Blutk. b + 1 ccm NaCl-Los. — Nach 10' kompl.
Hamolyse.
3) 0,1 Ser. + 0,1 norm. Blutk. •+- 1 ccm NaCl-Los. — Nach 30' kompl.
Hamolyse.
II. Aktives negatives Serum No. 2.
Der Versuch ergab genau dieselben Besultate wie I.
III. Schwach positives aktives Serum No. 1.
1) 0,1 Ser. + 0,1 sens. Blutk. a + 1 ccm NaCl-Los. — Nach 40' fast kompl.
Losung mit schwacher Triibung.
2) 0,1 Ser. + 0,1 sens. Blutk. b + 1 ccm NaCl-Los. — Nach 40' fast kompl.
Losung mit schwacher Triibung.
3) 0,1 Ser. + 0,1 norm. Blutk. -f 1 ccm NaCl-Los. — Nach 40' Hemmung
mit kaum beginnender Losung.
IV. Schwach positives aktives Serum No. 2.
1) Wie 1. III. — Nach l h 20' Losung mit Triibung.
2) Wie 2. III. — Nach l h 20' Losung mit Triibung.
3) Wie 3. IU. — Nach l b 20' Hemmung.
V. Positives aktives Serum No. 3.
11 Wie 1. III. — Nach l h 20* Hemmung mit beginnender Losung.
2) Wie 2. III. — Nach l h 20' Hemmung mit beginnender Losung.
1) Wie 3. III. — Nach l 11 20' Hemmung.
VI. Positives aktives Serum No. 4.
Dieselben Resultate wie V.
VII. Kontrollen:
1) 1 ccm NaCl-Los. + 0,1 sens. Blutk. a — Nach 24 Std. keine Losung.
2) 1 „ », + 0.1 „ „ b — „ 24 „ „ „
3) 1 >• » + 0,1 „ „ — „ 24 „ „ „
Die positiven Sera sind genau so im Besitz ihrer Ambo-
zeptoren, wie dies auch bei den negativen Seren der Fall ist.
Die Entfaltung einer energischen h&molytischen Wirkung von
schwach positiven Seren gegenflber sensibilisierten (mit posi-
tivem aktiven bzw. negativem inaktiven Serum) Blutkbrperchen
im Vergleich zu normalen Blutkorperchen weist ebenfalls auf
die sensibilisierende Wirkung der oben genannten Sera hin.
Hier begnflge ich mich mit der Wiedergabe nur dieser
zwei Versuchsreihen, da ich bei meinen weiteren Besprechungen
auf Beobachtungen hinzuweisen habe, welche die sensibilisa-
torische Wirkung der positiven Sera ebenfalls zu stiitzen im-
stande sind.
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230
Methodi Popoff,
b) Priifung des Komplementgehalts.
Beim Vorhandensein der einen fiir die Hamolyse nStigen
Komponente, des Ambozeptors, bleibt fflr die hSmolyse-
hemmende Wirkung eiues luetischen Serums nur das Fehlen
der anderen Komponente, des Komplements, verantwortlich
zu machen. Die nach dieser Richtung vorgenommenen Ver-
suche sprechen fiir die Richtigkeit dieser Annahme.
Es war zuerst nachzupriifen, ob beim Zufiigen eines fremden Kom-
plementes das frische bzw. inakt. positive Serum seine hamolytische Eigen-
8chaft wiedererlangt. Das Meerschweinchenkomplement konnte dabei nieht
in Betracht kommen, da dasselbe gegen die zum Versuch angewandten
Meerschweinchen blutkorperchen unwirksam ist *). Die Versuche mit Rinder-
komplement [Rinderserum 0,15; Menschenserum 0,1; Meerschw.-Blutk. 0,1
(Verd. 1:10); 1 ccm NaCl-Los. Nach 20 Std. keine Ham., die obenstehende
Flussigkeit wasserklar); Pferdekomplement (0,3 PfS.; 0,1 Menschenserum;
0,1 Meerschw.-Blutk.; 1 ccm NaCl-Los. Nach 20 Std. eine sehr schwache
Hamolyse, die obenstehende Flussigkeit rosagefiirbt), weiBeMauskomplemente
(0,05 Koinpl.; 0,05 Menschenserum inakt.; 0,05 Meerschw.-Blutk.; 0,5 NaCl-
Los. Nach 3 Std. im Therm, keine Hamolyse) gaben keine befriedigenden
Resultate. Alle diese Sera erwiesen sich gegeniiber positiven bzw. inakt. neg.
Menschensera + Meerschweinchenblutkorperchen als nicht komplementar
wirkend. Bessere Resultate ergaben die Versuche mit Kaninchenkomplement.
Von 4 posit, inakt. Sera und 2 neg. inakt. Sera wurde je 0,1 ccm
mit je 0,1 Kaninchenkomplement, 0,1 Meerschw.-Blutk. (Verd. 1:10) und
1 ccm NaCl-Los. zusammen getan. Nach 1 Std. im Therm. (37 0 C) zeigten
alle Sera Hemmung, nach weiteren 15 Std. im Zimmer zeigten alle Sera
eine kompl. Hamolyse. (Beobachtungen in der Zwischenzeit habe ich nicht.)
Die Kontrollrohrchen mit genau denselben Mischungen, nur ohne Kom-
plement, zeigten nach 15 Std. nur eine sehr schwache Hamolyse mit Kuppe.
1) a) 0,1 inakt. posit. Ser. + 0,1 defibr. Meerschw.-Bl. (Verd. 1:5) + 1 ccm
NaCl-Los. —
b) 0,1 inakt. posit. Ser. + 0,1 gew. Meerschw.-Bl. (Verd. 1:10) + 0,1
Meerschw.-Kompl. —
c) Kontr. 1 ccm NaCl.-Los. + 0,1 gew. Meerschw.-Bl. —
d) Kontr. 1 „ „ „ + 0,1 defibr. „ „ —
e) Kontr. 0,1 inakt posit. Ser. + 0,1 eew. Meerschw.-Bl. + 0,1 frisches
neg. Ser. + 1 ccm NaCl-Los. — Nach 30' kompl. L5s.
Die Rohrchen a und b zeigten nach 3 Std. Stehen im Therm. 37 0 C kaum
eine rosa Verfiirbung der obenstehenden Fliissigkeit; bei den Rohrchen c
bis d die obenstehende Flussigkeit wasserklar. Dieser und zwei andere
ahnliche Versuche (der eine mit inakt. neg. Serum) mogen aufierdem als
Stutze zif der auf p. 219 gemachten AeuCerung iiber die Moglichkeit der
Anwendung speziell fiir das hier gebrauchte hiimolytische System von nur
defibr. Meerschweinchenblut.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 231
Das Kaninchenkomplement besitzt also eine, wenn auch
schwache, komplettierende Eigenschaft. Diese Versuchsreihe
weist auBerdem darauf hin, daB die hamolyse-hemmende
Eigenschaft eines positiven Serums im Mangel an Kom-
plement zu suchen ist.
Diese SchluBfolgerung wird in liohem Grade durch die
folgende Versuchsreihe gesttitzt.
Zu den Komponenten Hammelbutambozeptor (vorbehandeltes Kanin-
chenserum), Hammelblutkorperchen habe ich einerseits Meerschweinchen-
komplement und andererseits aktives negatives Serum bzw. aktive und in-
aktive positive Sera hinzugefiigt:
1) 0,5 Amboz. 1:100 + 0,5 H-.B1. (1:20) + 0,2 Meerschw.-Kompl. — Hiiinolvse
2) dgl. +
3) n +
4) „ +
5) „ +
6 ) ,. •+■
7) 2 ccm NaCl-Los. +
dgl. + 0,2 akt. neg. Ser. No. 1 —
+ dgl. No. 2— „
+ 0,2 akt. posit. Serum — keine Hiim.
+ 0.2inakt. posit. Serum— „ „
— (Kontr.) keine Hiim.
— (Kontr.) „ „
[Alle Rohrchen auf 2,5 ccm mit NaCl-Los. aufgefiillt. Dcr Ambozeptor ist
sehr schwach gewesen, deshalb ist die Hamolyse bei 1, 2 und 3 erst nach
1 Std. im Therm. (37°) eingetreten.J
Man sieht, daB das aktive negative Serum genau so gut
die Komponenten Hammelblutambozeptor-Hammelblut zu
einem h&molytischen System zu komplettieren imstande ist,
wie dies bei dem Meerschweinchenkomplement der Fall ist;
nicht aber das aktive oder inaktive positive Serum. Bei
dieser letzten Versuchsanordnung tritt keine H&molyse ein,
was darauf hinweist, daB dem positiven Serum das Kom-
plement fehlt 1 ).
Wenn ich jetzt zur Wiedergabe von Versuchen tlber-
gehe, bei welchen als Reaktivierungskomponente f(ir die
positiven (aktiven und inaktiven) bzw. inaktiven negativen
Sera ein normales Menschenkomplement angewandt wird, so
bin ich mir bewuBt, daB die Experimente keine unbedingte
Beweiskraft haben, da das normale Menschenserum gegeniiber
Meerschweinchenblutkdrperchen allein hfimolytisch wirksam ist.
Drei inakt. positive Sera ( l / t Std. bei 56°) wurden in Mengen von je
0,1 ccm mit je 0,1 ccm von 4 akt. neg. Seren und je 1 ccm NaCl-Los.
zusammengetan und
1) Das Menschenserum allein hat fast gar keine hamolytische Kraft
gegeniiber Hammelblutkorperchen.
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232
Methodi Popoff,
I. Reihe
gleich darauf uberall je 0,1 ccm Meerschweinchenblutkorperchen (Verd.
1 :10) zugesetzt. Nach 20' zeigten alle Rohrchen komplette Losung. Die¬
sel ben Resultate wurden erzielt auch mit aktiven positiven Sera.
II. Reihe.
Das Blut nach 1 Std. 10' Stehen im Brutschrank zugesetzt. Die
Hamolyse trat nach 5' ein 1 2 ).
Als Kontrollen dienten die inakt. positiven Seren einerseits: 0.1 Serum
+ 0,1 Blutk. + 1 ccm NaCl-Los. — komplette Heraraung, und andererseits
die aktiven neg. Seren: 0,1 Serum + 0.1 Blut + 1 ccm XaCl-Los. — kom¬
plette Los. nach 25'.
Dieselben zwei Versuchsreihen wurden unter Beibehaltung ahnlicher
Kontrollen mit zwei inakt. neg. Sera (V, Std. bei 56°) wiederholt. Die er-
zielten Resultate entsprechen denjenigen der inakt positiven Sera.
Aus den Versuchen ist zu entnehmen, dafi, wenn zu
aktiven bzw. inaktiven positiven Sera und zu inaktiven
negativen Sera Menschenkomplement zugesetzt wird, die¬
selben ihre hSmolytische Eigenschaft wiedererlangen.
Um nachzuprflfen, inwieweit ein Komplementverbrauch
bei der Hamolyse vor sich geht und ob das einmal h&mo-
lytisch gewirkte aktive negative Serum noch komplement&r
wirksam ist, wurde folgender Versuch angestellt.
Zu fiinf gehemmten Hiimolyseversuchen mit positiven Sera (je 0,1
akt posit. Serum + 0,1 Meerschw.-Blutk., Verd. 1:10, + 1 ccm NaCl-Los.)
habe ich nach l-stiindigem Stehen je 1 komplett gelosten hamolytischen
Versuch (0,1 akt. neg. Serum -f 0,1 Meerschw.-Blutk. + 1 ccm NaCl-L5s.)
zugefiigt. Es zeigte sich, daS nach 40' im Therm. *) bei drei von denselben
eine kompl. Losung eintrat, wiihrend bei zwei die Reaktion bis zur Losung
mit Triibung vorgeschritten war. Der zum Rohrchen [0,1 Blut -f 1 ccm
NaCl (die Kontrolle)] zugefiigte kompl. hiimolysierte Versuch (0,1 akt. n^.
Serum + 0,1 Blutk. + 1 ccm NaCl-Los.) zeigte komplette Hemmung.
Aus dieser Versuchsreihe ist zu entnehmen, daS in der
Tat nach einmaliger Hamolyse das negative Serum von seiner
komplementaren Kraft einbflfit (der Versuch mit der Kon-
1) Der Ausfall der Versuche von der II. Reihe (energischere hamo-
lytische Wirkung) ist so zu erklaren, dafi infolge der Vorerwarmung die
Wirksamkeit der Sera gesteigert ist.
2) Die Hamolyse tritt normal nach ca. 15' ein. Der Zeitunterschied
ist zu beachten.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 233
trolle); doch es bleiben noch geringe Komplementmengen
fibrig, welche imstande sind, nach lingerer Zeit sensibilisierte
Blutkfirperchen aufzuldsen 1 ).
8 .
Wie ist der Komplementmangel im Serum eines Lueti-
kers zu erkl&ren? Infolge der Infektion kommt es bei
Lues, wie schon von verschiedener Seite hervorgehoben
worden ist, zu einer Abspaltung von Lipoiden oder lipoid-
fihnlichen Stoffen, die ins Blut fibergehen. Die Lipoide haben
aber, wie schon frfihere Untersuchungen zeigen (siehe die
Beobachtungen von Sakaye Okubo, Zeitschr. f. Im-
munitfitsf. etc., Bd. 5, 1910, fiber die Beziehungen von
Pyocyanaselipoid und Komplement) eine starke Affinitfit zu
den als Komplement zusammengefafiten Verbindungen. Sie
bleiben demnach im Blute nicht frei, sondern gehen mit dem
Komplement Verbindungen ein. Da die Menge dieser ab-
gespaltenen Lipoide im akuten Stadium der Krankheit grofier
ist, so wird in floriden Luesffillen fast das ganze Komplement
von den Lipoidstoffen gebunden: das Serum reagiert kom-
plett hemmend (stark positives Serum). In filteren Stadien
von Lues und in F&llen, wo die Krankheit infolge Behand-
lung etc. an Intensity nachgelassen hat, nimmt auch die
Menge der abgespaltenen Lipoide ab; es bleibt demnach noch
ein Teil vom Komplement frei, welches die Meerschweinchen-
blutkorperchen teilweise hfimolysiert (schwach positives Serum).
Diese Erklfirung findet eine Stfitze in den Befunden von
Jacobaeus und Backmann, nach welchem der Kom-
1) Dafl die Sensibilisierung der Blutkdrperchen dabei wirklich eine
Rolle spielt, beweisen die folgenden Kon troll versuche, bei welchen zu 7
komplett gelosten Rohrchen (je 0,1 von verschiedenen akt. neg. Sera +
0,1 Blutk. + 1 ccm NaCl-Lds.) nach 1 Std. Stehen je 0,1 frische (also nicht
sensibilisierte!) Meerschw.-Blutk. zugesetzt wurden. Nach 1 Std. Stehen
im Therm, zeigten 4 Kohrchen keine Losung und 3 eine kaum beginnende
Ldsung. Ich mochte hier gleich bemerken, dafi diese Kontrollversuche
nicht ganz der Hauptversuchsreihe entsprechen. Um dies der Fall zu
sein, soli ten die in der Hauptreihe gebrauchten positiven Versuche zentri-
fugiert und nur die sensibilisierten Blutkdrperchen verwendet werden, desgl.
auch bei dem Kontrollversuch mit 1 ccm NaCl-Lbs. + 0,1 Blutk.
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234
Methodi Popoff,
plementgehalt bei behandelter und symptomenfreier Syphilis
grOBer als bei floriden Fallen ist 1 ).
Als Sttttze dieser Erkiarung dienen noch die folgenden
Versuche.
Sollte eben der Komplementschwund bei den luetischen
Seren die Folge einer Bindung desselben mit Lipoidstoffen
sein, dann muB es gelingen, ein normales Serum durch Zu-
satz von Lipoidextrakten seiner hamolytischen Eigenschaften
zu berauben.
a) Die Ektoplasmaschicht der Zellen ist besonders reich an Lipoid¬
stoffen. Ich liefi deshalb eine Aufschwemmung von Meerschweinchenblut-
korperchen in Verdiinnung 1:10 und 1:5 eine Stunde lang bei 56° C
stehen. Durch die hohe Temperatur wurde die Ektoplasmaschicht der roten
Blutkorperchen so weit beschiidigt, daS eine komplette Hamolyse eintrat.
Dann kamen die Rohrchen fiir 2 Std. in den Schlittelapparat und 24 Std.
in den Eisschrank.
Nach dieser Zeit durfte man annehmen, dafi die abzentrifugierte
Fliissigkeit lipoidhaltig ist. Dieselbe wurde verwendet fiir Inaktivierungs-
versuche mit frischen negativen Seren.
Zu je 0,1 ccm von einem akt. neg. Serum wurden fallende Dosen
vom Zentrifugat 1:10 zugesetzt. Nach 1 Std. Stehen im Therm. (37 0 C) je
0,1 Meerschw. - Blutk. (Verdiinnung 1:10) hinzugegeben. Der Versuch
1 Std. im Therm., 37° C, dann Zimmertemperatur.
1) 0,1 Ser. + 1,0 Zentrifugat 1
£4
— keine Losung
D. 15“
2)0,1 „ +0,7
„ + 0,3 NaCl-Los.
Jj- 3
,, ,,
,» ,,
3)0,1 „ +0,5
„ + 0,5 „
!"• i- **
r : n
,, ,,
,, ,,
4)0,1 „ +0,2
„ + 0,8 „
Jr T
„ „
>• 5?
5)0,1 „ +0,15
,, + 0,95 „
« o i,
3n bt
»»
n. 4 h j
6)0,1 „ +0,1
,, +1,0 „
^ li N
M
—kaum Spur v. Los.
„ ,,
U|
7)0,1 „ +0,05
„ +1,0 „
to
— Spur von Los.
,, „
lt«
8)0,1 „ +0,03
„ +i,o „
a «
— schwache „
,» ,, *
Die Kontrollen ergaben: 1) neg. Serum (0,1) mit 0,1 Blutk. + 1 ccm
NaCl-L5s. — nach 15' kompl. Los.; 2) genau dieselben abfallenden Mengen
des Extraktes ohne Serum — nach 15 Std. keine Los.
Das Zentrifugat 1:5 ergab bei genau derselben Versuchsanordnung
eine starkere Wirkung.
Aus diesen Versuchen ist zu ersehen, daB das lipoid-
haltige Zentrifugat, in hoheren Dosen angewendet, die hamo-
lytische Kraft eines aktiven negativen Serums aufzuheben
imstande ist. Von einer gewissen Zentrifugatdosis ab kommt
1) Eine positive Reaktion ist deronach auch bei Krankheiten zu er-
warten, in deren Verlauf es zu einer Lipoidabspaltung kommt (Malaria,
Frambosie). Untersuchungen iiber Malaria sind im Gang.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 235
die h&molxtische Kraft des Serums wieder zum Vorschein:
die geringen Zentrifugatmengen sind nicht ausreichend ge-
wesen, um eine totale Bindung des Komplements zu bewerk-
stelligen; der freigebliebene Teil desselben verursacht eine
teilweise Hamolyse der BlutkOrperchen.
b) Dasselbe Resultat, d. i. die komplette oder teilweise
Aufhebung der hSmolytischen Eigenschaften ernes negativen
Serums laBt sich aucb bei Anwendung yon alkoholischen
Lipoidextrakten, wie sie fflr die W.-N.-Br. Reaktion gebrSuch-
lich sind, erzielen.
Zu je 0,2 ccm von einem akt. neg. Serum, Ochsenherzextrakt [in
Verd. 1:5 1 )] in abfallenden Dosen zugesetzt. Nach 2 Std. Stehen im Therm,
bei 37° C je 0,1 ccm Meerschweinchenblutkdrperchen (Verd. 1:10) zuge-
geben (die Resultate nach 1 Std. Stehen im Therm, bei 37° C abgelesen):
1) 0,2 Ser. + 0,1 Blutk. + 0,2 NaCl-Los. + 0,8 Extr. — kompl. Hemmung
2) 0,2 „ + 0,1 „ + 0.4 „ + 0,6 „ — dgl.
3) 0,2 „ + 0,1 „ + 0,6 „ + 0,4 „ — f. kompl. Losung mit
schwacher Trilbung
4) 0,2 „ + 0,1 „ 4- 0,8 „ + 0,2 „ — kompl. Losung
5) 0,2 „ + 0,1 „ + 0,9 „ + 0,1 „ — dgl.
Kontrollen.
1) 0,2 Serum + 0,1 Blutk. -f 1 ccm NaCl-Los. — kompl. Ldsung nach 20'
2) 5 Kontrollen mit abfallenden Extraktmengen (s. den Hauptversuch), je
0,1 Blutk. und die entsprechenden Mengen NaCl-Losung — alle zeigen
komplette Hemmung
3) 0,1 Blutk. + 1 ccm NaCl-Losung — komplette Hemmung.
Aus diesem Versuch geht hervor, daB nach 2 Stunden
Steben im Thermostaten eine Bindung zwischen Komplement
und Extrakt eingetreten sein muB, da die hemmende Wirkung
des Serums proportional mit der Steigerung der Extraktdosis
zunimmt. Mit den Extraktdosen 0,6—0,8 ist eine vollst&ndige
Bindung des Komplements eingetreten und deshalb auch die
Hfimolyse ganz ausgeblieben.
Es konnte aber hier noch die Moglichkeit ins Auge gefaBt
werden, daB die hamolysehemmende Wirkung dem bloBen
Vorhandensein des Extrakts allein zuzuschreiben ist. Sollte
dies der Fall sein, dann muB bei einem nachtraglichen Zusatz
eintreten, da die Extraktmenge sich immer gleich bleibt. Dies
1) Derselbe Extrakt wird bei der W.-N.-Br. Reaktion in Verdiinnung
1 :10 angewandt.
Z«itsehr. f. Imraunitatbforschung. Orig. .Bd. AIV. 16
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236
Methodi Popoff,
von negativem Serum der Hauptversuchsreihe keine HSmolyse
ist aber nicht der Fall: fflgt man zu dem Rohrchen 1—5 je
0,2 ccm von einem frischen Serum hiuzu, so tritt schon uach
10 Minuten eine vollst&ndige H&molyse ein ! ).
Dafi das Ausbleiben der HSmolyse eine Folge der Bindung
Komplement-Lipoidextrakt ist, beweist noch die folgende Ver-
suchsreihe.
Zu einem akt. negativen Serum wurde Ochsenherzextrakt [in Verd.
1:5 1 2 )] in aufsteigenden Dosen zugefugt und
I. Reihe
gleich nach der Mischung je 0,1 ccm Meerschweinchcnblutkorperchen (Ver-
diinnung 1:10) zugegeben. Der Versuch nach 30' Stehen im Thermo¬
staten bei 37° C abgelesen.
1)
0,2 Ser
• +
0,1 Blutk. +
l,0NaCl-L6s.
2)
0.2 „
+
0,1 „
+
0,8
3)
0,2 „
+
0,1 „
+
0,65 „
4)
0,2 „
+
0,1 „
+
0,5 .,
5)
0,2 „
-F
0,1 .,
+
0.35 „
6)
0,2 „
+
0,1 „
+
0,3
— kompl. Losung
+ 0,2 Extr. — dgl.
+ 0,35 „ — Lbsung mit schwacher
Trubung
+ 0,5 „ — Losung mit Trubung
+ 0,05 ,, — 1 Losung mit starkerer
+ 0,8 „ — / Triibung
II. Reihe.
Extrakt und Serum nach der Mischung 2 Std. im Thermostaten bei
37° C; dann erst Blutkorperchen zugesetzt. Sonst die Versuchsanordnung
gleich der der I. Reihe.
2 )
3)
4)
5)
6 )
SO
o
6co
co r,
komplette Losung
dgl.
dgl. mit sehr schwacher Triibg.
Losung mit Triibung
Hemmung mit beginn. Los.
komplette Hemmung
<
komplette Losung
dgl.
dgl.
Los. mitTrub. (kleineKuppe)
Hiim. m. mittelgr.Kuppe
komplette Hemmung
Kontrollen.
Das Blut erst nach 2 Std. Stehen im Thermostaten bei 37° C zugesetzt.
X Therm im Nach 15 “ im Zimmer
1) 1,0 NaCl-Lbs. + 0,1 Blutk. — k.Hemm.; kompl. Hemmung
2) 0,2 Extr. + 0,8 NaCl-Los. + 0,1 Blutk. — dgl. dgl.
3) 0,35 „ + 0,65 „ + 0,1 „ — dgl. dgl.
4) 0,5 „ 4- 0,5 „ + 0,1 „ — dgl. kompl. Los. mit Triib.
5) 0,65 „ + 0,35 „ + 0,1 „ — dgl. dgl.
6) 0,8 „ + 0,2 „ + 0,1 „ — dgl. kompl. Losung
1) Die Hamolyse tritt in dem Fall im Vergleich zur Kontrolle 1
rascher ein, da die Blutkorperchen schon sensibilisiert gewesen sind.
2) Grebrauchsverdunnung flir die W.-N.-Br. Beaktion 1:10.
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Hiimolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 237
Vergleicht man die Versuchsreihen I und II, so ist zu
entnehmen, daB bei der Versuchsreihe I dieselbe Extraktmenge
schwHcher hemmend gewirkt hat, als dies bei der Versuchs¬
reihe II der Fall ist. In der zweiten Reihe wurde die Mischung
Extrakt-Komplement 2 Stunden im Brutschrank gelassen und
erst dann das Blut zugefilgt. Es ist infolgedessen die Bindung
Extrakt-Komplement vollstandiger gewesen. Bei der Versuchs¬
reihe I dagegen wurde das Blut gleich nach der Mischung
des Extraktes mit dem Komplement zugesetzt; die Bindung
Extrakt-Komplement hat nur ungenflgend eintreten, und der
frei gebliebene Komplementrest hat hSmolytisch wirken kdnnen.
Diese Auslegung der Versuchsergebnisse wird noch durch
folgende Beobachtung gestfltzt. Nach 15 Stunden im Zimmer
zeigten die Extraktrdhrchen 4, 5 und 6 (Kontrolle) eine kom-
plette Losung. Das Rohrchen 6 der zweiten Versuchsreihe
zeigte dagegen eine komplette Hemmung, und das Rohrchen 5
(derselben Reihe) zeigte eine unvollst&ndige HSmolyse mit
mittelgroBer Kuppe. Es muB also in diesen zwei Rohrchen
eine Bindung von Extrakt und Komplement eingetreten sein;
infolgedessen wird die nach 15 Stunden eintretende h&mo-
lytische Wirkung des Extraktes (s. die Kontrollen) aufgehoben.
DaB dies wirklich der Fall ist, beweisen die Rohrchen 1—4
(II. Reihe), wo die Extraktmenge ungeniigend gewesen ist,
urn eine vollstfindige Bindung des Komplements herbei-
zufQhren. Fttr diese Hamolyse ist der frei gebliebene Teil
des Komplements verantwortlich zu machen, da der Extrakt,
in den bei den RShrchen 1—4 (II. Reihe) angewandten
Dosen, an und fflr sich auch nach 15 Stunden gar keine
hSmolytische Wirkung auszutiben vermag (s. die Kontroll-
rohrchen 1—3).
Da die negativen, schwach positiven und stark positiven
Sera nach den obigen Voraussetzungen eine absteigende Reihe
in bezug auf ihren Komplementgehalt darstellen, so muB
diejenige Dosis des Extraktes, welche n6tig ist, um die ganze
Komplementmenge total zu binden und dadurch eine kom¬
plette Hemmung der H&molyse herbeizufflhren, in Parallele
mit der obigen Komplementgehaltreihe stehen. Um dies nach-
zuprflfen, wurden die folgenden Versuche ausgefiihrt.
16 *
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238
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I. Aktives negatives Serum.
N ach 10'
1) 0.2 Ser. + 0,2 Extr.') 4- 0.8 NaCl-I-os.
2) 0,2 „ + 0,35 „ + 0,65 „
3) 0,2 „ + 0,5 „ + 0,5 „
4) 0,2 „ + 0,65 „ + 0,35 „
5) 0,2 „ + 0,8 „ + 0,2
6) 0,2 „ +1,0 NaCl-L6s. (Kontrolle)
ia i .
.£ = 8*
tc
N
£ h i c
— jirfSo,
o- 50 -^ rH J
^ •
.a 3 2 g"H
(kompl. Losg.
f. kompl. Loe.
mitTriibung
Hemraung
Hemraung
yy
kompl. Lbsg.
Nach 15 Std.
im Zimmer
kompl. Losg.
dgl.
schwaeheHii-
molyse mit
mittelgr. K.
Hemmung
yy
kompl. Losg.
II. Aktives schwach positives Serum.
I
6 )
Die Versuchsanordnung genau wie bei I.
Nach 10'
— Hemmung
yy
fehlt
— Hemmung mit Losung
Nach 15 Std. im Zimmer
Hemmung
>>
yy
yy
Losung mit Trubung
III. Aktives positives Serum.
Die Versuchsanordnung genau wie bei I.
Nach 10' Nach 15 Std. im Zimmer
1) — Hemmung Hemmung
2 )
3) ,, ,,
4) -
Interessant aus der obigen Versuchsreihe ist das Ver-
halten des schwach positiven und des negativen Serums.
Wahrend das negative Serum eine komplette Hemmung erst
bei Extraktdosis 0,5 zeigt, zeigt das schwach positive Serum
eine komplette Hemmung schon bei der ersten Extraktdosis,
0,2. Die Komplementmenge ist in dem Falle so gering ge-
wesen, daB eine Extraktdosis von 0,2 geniigt, um eine totale
Bindung desselben und dadurch eine komplette Hemmung der
Hamolyse herbeizufuhren.
1) Ochsenherzextrakt in Verdunnung 1:5 (fur die W.-N.-Br. Reaktion
in Verdiinnung 1:10).
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Hamolysehemmeiide Erseheinungen bei luetischen. Seren etc. 239
4 .
Die im vorstehenden angeftthrten Versuche liber die
Bindung von Komplement und Lipoidextrakten beim Menschen-
serum habe ich durch Versuche mitMeerschweinchenkomplement
weiter zu stiltzen gesucht.
Zu je 1 ccm Komplement in Verdiinnung 1:15 habe ich 0,1* 0,2, 0,3,
0.4, 0,5 ccm unverdiinnten alkoholischen Ochsenextrakt zugefiigt 1 ). Nach
l j q Std. Stehen im Thermostaten bei 37 0 C wurden Hammelblutambozeptor
(je 1 ccm 1:150) und Hammelblutkorperchen (je 1 ccm 1:20) zugesetzt.
Ee trat eine Hamolyse nur bis zur Extraktmenge 0,2 inkL ein. Von Ex-
traktdosis 0,3 aufwarts war eine vollstandige Hemmung zu beobachten.
Spricht dieser Versuch (der bei der Austitrierung der
Extrakte fflr die W.-N.-Br. Reaktion immer vorgenommen wird)
zugunsten einer Bindung zwischen Extrakt und Komplement,
so wird dies in noch hdherem Grade deutlich bei der folgenden
Versuchsanordnung:
I. Extrakt 2 3 ) in Verdiinnung 1:5.
1) 2,0 Extrakt
1,0 Meerschw.-Kompl. *)
1,0 Hammelblutkorp. 4 )
1,0 NaCl-Losung
Nach 2 St. imf
Thermost. bei I
37 °C 1,2 Am-1
bozept. 1:1001
Nach 1 Std. Hemmung mitkaum
beginnender Losung
Nach 15 Std. Hemmung mit be-
ginnendem Durchsichtigwerden
2) 1,5 ccm Extrakt
Ip 9f 97
1,^ „ ,»
1,5 „ NaCl-Losung
3) 1,0 ccm Extrakt
1,0 „
1,0 „
2,0 „ NaCl-Losung
Wie bei I, 1
Nach 1 Std. Hemmung mit kaum
beginnender Losung
Nach 15 Stunden wie bei I, 1
Wie bei I, 1
Nach 1 Std. Hemmung mit kaum
beginnender Losung
Nach 15 Std. Hemmung mit
Durchsichtigwerden
4) 0,5 ccm Extrakt
0>5 „ „
0>5 „ „
2,5 „ NaCl - Losung
( Nach 1 Std. Durchsichtigwerden
Nach 15 Std. Losung mit Trii-
bung
Anmerkung: Nach 1 Std. ist eine schwache Abstufung in der Starke
der Losung, von Rohrchen 4 (am ausgesprochensten) anfangend nach
Rohrchen 1 (am schwiichsten) wahrzunehmen.
1) Gebrauchsverdunnung fur die W.-N.-Br. Reaktion 1:10.
2) Der Extrakt (alkoholisch) nach der gewohnlichen Methode aus
Ochsenherzen neu hergestellt. Fiir die W.-N.-Br. Reaktion noch nicht
gebraucht.
3) In Verdiinnung 1:10.
4) In Verdiinnung 1 :20.
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240
Methodi Popoff,
II. Extrakt in Verdiinnung 1:10.
Die Versuchsanordnung entspricht sonst vollkommen der Versuchsreihe I.
1) Nach 1 8td. wie bei II, 3.
Nach 15 Std. Losung mit starker Triibung.
2) Nach 1 Std. wie bei II, 3.
Nach 15 Std. Losung mit Triibung.
3) Nach 1 Std. Durchsichtigwerden.
Nach 15 Std. Losung mit Triibung.
4) Nach 1 Std. Losung wie bei III, 3.
Nach 15 Std. Losung mit leichter Triibung.
Anmerkung: Eine Abstufung in der Losungsstiirke von 4 (am stiirksten)
anfangend nach 1 (am schwachsten) zu beobachten.
III. Extrakt in Verdiinnung 1:15.
Die Versuchsanordnung entspricht sonst vollkommen der Versuchsreihe I.
1) Nach 1 Std. Losung mit starker Triibung, wie IV, 1.
Nach 15 Std. Losung mit mittelstarker Triibung.
2) Nach 1 Std. Losung wie bei IV, 1.
Nach 15 Std. Losung mit Triibung.
3) Nach 1 Std. Losung, etwas starker als bei IV, 1.
Nach 15 Std. Losung mit leichter Triibung.
4) Nach 1 Std. Losung wie bei IV, 2.
Nach 15 Std. fast komplette Losung mit leichter Triibung.
Anmerkung: Wie bei I und II.
IV. Extrakt in Verdiinnung 1:20.
1) Nach 1 Std. Losung mit Triibung.
Nach 15 Std. Losung mit Triibung.
2) Nach 1 Std. fast komplette Losung mit leichter Triibung.
Nach 15 Std. fast komplette Losung mit leichter Triibung.
3) Nach 1 Std. fast komplette Losung mit sehr leichter Triibung.
Nach 15 Std. komplette Losung.
4) Nach 30' fast komplette Losung.
Nach 1 Std. komplette Losung.
Anmerkung: Die Losungsverhiiltnisse von Rbhrchen 4 nach Rbhrchen 1
wie bei I, II und III.
Die Kontrollen:
1) Komplement -f Blutkorperchen
2) Ambozeptor -f- Blutkorperchen
3) Extrakt + Blutkorperchen
4) NaCl-Los. + Blutkorperchen
zeigten keine Losung.
Bei diesen Versuchen wurde ein und derselbe Ochsenherz-
extrakt in 4 verschiedenen Verdiinnungen (1:5, 1:10, 1:15
und 1:20) angewandt. Zu je 4 verschiedenen Dosen (2,0,
1,5, 1,0 und 0,5 ccm) Extrakt von jeder Verdiinnung wurden
dann sich gleich bleibende Komplement- und Hammelblut-
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 241
kdrperchenmengeD zugefiigt und nach 2 Stunden Stehen im
Thermostaten bei 37° C Qberall noch 1,2 ccm Hammelblut-
ambozeptor in Verdfinnnng 1:100*) zugegeben. Die Resultate
wurden nach 1 Stunde bzw. 15 Stunden abgelesen.
Die Versuche zeigen das Folgende. Nach 2 Stunden
Stehen im Thermostaten 37° C hat eine direkte Bindung
zwischen Komplement und Lipoidextrakt stattgefunden, und
zwar ist bei der Reihe IV infolge der st&rkeren VerdQnnung
(1:20) des Extraktes noch ein Teil des Komplementes frei
geblieben. Bei den Versuchsreihen III, II und I nimmt all-
m&hlich mit dem Steigern der Extraktkonzentration auch die
noch frei bleibende (nicht gebundene) Komplementmenge ab,
wie dies aus dem Ausfall der H&molyse zu ersehen ist. In
der Reihe IV tritt nach Zusatz vom Ambozeptor vom R6hr-
chen IV anfangend eine komplette H&molyse ein, die allm&h-
lich mit dem Steigern der Extraktdosis (RShrchen 3, 2 und 1)
an St&rke verliert. Genau solch eine Abnahme der H&mo¬
lyse ist auch innerhalb der anderen Reihen III, II und I zu
beobachten. AuBerdem ist beim Vergleichen der 4 Reihen
untereinander wahrzunehmen, daB die H&molyse am st&rksten
in der Reihe IV (Extraktverdfinnung 1:20) und am schwfich-
sten in der Reihe I (Extraktverdfinnung 1:5), wo es zu einer
kompletten Hemmung kommt, eingetreten ist.
DaB die H&molyse aus Mangel an Komplement ausge-
blieben und nicht die Folge einer „hemmenden Wirkung tt des
Extraktes selbst ist, beweist der Umstand, daB beim Zusatz
zur Reihe I von je 1 ccm frischem Meerschweinchenkomple-
ment iiberall eine komplette HSmolyse eintrat, trotzdem daB
die Extraktdosis die gleiche blieb.
6 .
Von den Ergebnissen der bisher angeffihrten Versuche
iiber die direkte Bindung von Komplement- und Lipoidextrakt
in vitro, ausgehend habe ich versucht, dasselbe Experiment in
vivo, und zwar im Meerschweinchenkfirper durchzufflhren. Zu
1) Das hamolytische System: Ambozeptor, Hammelblutkorperchen
und Komplement hat einen Titer nach 30' bis 2000. Fiir die Versuche
wurde die 4-fach starkere Dosis genommen und dieselbe auf 5 ccm FUissig-
keitsmenge ausgerechnet, d. i. Ambozeptorverdiinnung 1:100.
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242
Methodi Popoff,
diesem Zweck habe ich mir einen wfisserigen Lipoidextrakt
von Meerschweinchenherzen hergestellt x ) und nach 5-tagigem
Stehen das Zentrifugat (unverdflnnt) auf seine hemmende
Wirkung geprttft.
Zur Anwendung kamen: Meerschweinchenkomplement in
Verdtinnung 1:10; Hammelblutkbrperchen in VerdOnnung
1:20; Hammelblutambozeptor; alle Rdhrchen auf 2,7 ccm
Fliissigkeitsmenge mit NaCl-LSsung aufgefflllt. Die Blut-
kbrperchen nach 40 Minuten Stehen im Thermostaten 37° C
zugefflgt. Die Versuche 1 Stunde im Thermostaten, dann im
Zimmer.
I. Reihe.
1 ) 0,5 ccm Amb. 1:100 + 0,5 Kompl. + ■> Nach 35' kaum beginn. Lbs.
0,5 Blutk. + 0,2 Extr. a Nach 1 Std. Halblosung.
do g Nach 18 St. kompl. Ham.
2) 0,5 ccm Amb. 1:200 + 0,5 Kompl. + Nach 1 Std. Hemmung.
0,5 Blutk. + 0,2 Extr. .§ 2 Nach 18 Std. Halblos.
3) 0,5 ccm Amb. 1:400 + 0,5 Kompl. + '.*:§{ Hemmuug; dgl. nach 18
0,5 Blutk. + 0,2 Extr. ~~ W Std.
4) 0,5 ccm Amb. 1:800 + 0,5 Kompl. + N a Hemmung; dgl. nach 18
0,5 Blutk. + 0,2 Extr. -g > Std.
5) 0,5 ccm Amb. 1:1600 + 0,5 Kompl. + J® Hemmung; dgl. nach 18
0,5 Blutk. + 0,2 Extr. 55 l Std.
Kontrollen:
Die Versuchsanordnung gleicht derjenigen in der ersten Reihe, nur
ohne Extrakt.
1 ) Nach 15' komplette Hamolyse.
2) 15'
3) „ 35' „
4) „ 1 Std. beginn. Hamolyse.
5) „ 1 Std. Hemmung.
II. Reihe.
1) 0,5 Amb. 1:100 + 0,5 Kompl. + j(Nach 35' kaum beginn. Los.(-a •
0,1 Extr. + 0,5 Blutk. Nach 1 Std. starke Loe. £ =a
co g mit Triibung.
2) 0,5 Amb. 1:100 + 0,5 Kompl. + «Nach 1 Std. beginn. Lbs. . u
0,2 Extr. + 0,5 Blutk. •§ 2 J 3J8
3) 0,5 Amb. 1 :100 + 0,5 Kompl. +:S {Nach 1 Std. Hemmung. 2S
0,3 Extr. + 0,5 Blutk. 3 «
4) 0,5 Amb. 1:100 + 0,5 Kompl. + 00 g Nach 1 Std. Hemmung. 'S.*»
0.4 Extr. + 0,5 Blutk. -g ® £ B
5) 0,5 Amb. 1 :100 + 0,5 Kompl. + 4; Nach 1 Std. Hemm. Nach 18 Std.
0,5 Extr. + 0,5 Blutk. ) l Hemmung
1) Die Meerschweinchenherzen mit Sand gut verrieben, zu je 1 g Herz-
substanz 3 ccm Wasser zugegeben und 24 Stunden geschiittelt.
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Hiimolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 243
Kontrollen:
0,1 ccm Extr. +0,5 Blutk.l Nach j Std . keine Hamolyse.
0,5 „ „ + 0,5 „ )
0,3 ccm vom Extrakt war imstande, 0,5 ccm Komplement in Ver-
diinnung 1:10 bei Ambozeptorverdiinnung 1:100 total zu binden.
2 ccm von diesem Extrakt habe ich in die Jugularvene
eines Meerschweinchens injiziert 1 2 3 ), nach 15 Minuten das Tier
entblutet und 1 Stunde nach der Gewinnung des {Complements
folgenden h&molytischen Versuch ausgefilhrt.
1) 3 ccm Amb.*) + 1 ccm Blutk. 9 ) + 1 ccm Kompl. 4 ). — Nach 30' Los.
mit Trubung.
2) 2,5 ccm Amo. + 0,5 NaCl-Lds. + 1 ccm Blutk. + 1 ccm Kompl. —
Nach 30' Losung mit Trubung.
3) 2 ccm Amb. + 1,0 ccm NaCl-Los. + 1 ccm Blutk. + 1 ccm Kompl.
— Nach 30' Losung mit Trubung.
4) 1,5 ccm Amb. + 1,5 ccm NaCl-L6s. + 1 ccm Blutk. + 1 ccm Kompl.
— Nach 30' Losung mit Trubung.
5) 1 ccm Amb. + 2 ccm NaCl-Ixis. + 1 ccm Blutk. + 1 ccm Kompl.
— Nach 30' Losung mit schwacher Trubung.
6) 0,5 ccm Amb. + 2,5 ccm NaCl-Los. + 1 ccm Blutk. + 1 ccm Kompl.
(d. h. Amb. in Verd. 1:1000) — Nach 30' Losung mit Trubung.
7) 0,25 ccm Amb. + 2,75 ccm NaCl-Los. + 1 ccm Blutk. + 1 ccm Kompl.
(a. h. Amb. in Verd.- 1:2000) — Nach 30' kompl. Hemmung.
8) 0,175 ccm Amb. + 2,85 ccm NaCl-Los. +1 ccm Blutk. + 1 ccm Kompl.
(d. h. Amb. in Verd. 1:3000) — Nach 30' kompl. Hemmung.
Es ist in der Tat ein Schwund an Komplement deutlich
bemerkbar; das Komplement eines unbehandelten Tieres, zu
denselben hfimolytischen Komponenten (Hammelblutambozeptor,
Hammelblutkorperchen) zugesetzt, zeigt einen Titer 1:2000.
Dem so ausgefiihrten Versuche haften aber manche Fehler-
quellen an, die durch Mangel an den notigen Kontrollen bedingt
sind. Um dies moglichst zu vermeiden, habe ich die folgende
Versuchsanordnung eingeschlagen.
I. Um Vergleiche tlber die Wirksamkeit des Komplements
vor und nach der Injektion des Extraktes zu haben, habe ich
die linke Carotis des Tieres freigelegt, ca. die H&lfte des
5
"3
J8
3
00
1) Die Injektionstechnik ist eingehend bei Hermann Dold: „Das
Bakterienanaphylatoxin und seine Bedeutung fur die lnfektion u , Jena 1912
angegeben.
2) Ausgangsverdiinnung des Hammelblutambozeptors 1:100.
3) Hammelblutkorperchen in Verdiinnung 1:20.
4) Meerschweinchenkomplement 1:10.
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244
Methodi Popoff,
Blutes abgezapft (Vergleichskomplement), die Carotis abge-
klemmt und gleich darauf 2 ccm von dem unverdtinnten
wSsserigen Lipoidextrakt in die rechte Jugularvene einge-
spritzt. Nach 20 Minuten wurde das Tier entblutet und die
zwei Komplementmengen vor und nach der Injektion auf ihre
h&molytische Wirkung untereinander verglichen.
a) Versuch mit dem Komplement vor der Einspritzung.
1) 0,5 Amb.') 1:100 + 0.5 Kompl. 1 2 3 ) + 0,5 Blutk. *) + 1 ccm NaCl-Los. —
Nach 1 Std. kompl. Losung.
2) 0,5 Amb. 1:200 + 0,5 Kompl. + 0,5 Blutk. + 1 ccm NaCl-Losung. —
Nach 1 Std. kompl. Losung.
3) 0,5 Amb. 1:400 + 0,5 Kompl. + 0,5 Blutk. + 1 ccm NaCl-Losung. —
Nach 1 Std. kompl. Losung.
4) 0,5 Amb. 1:800 + 0,5 Kompl. + 0,5 Blutk. + 1 ccm NaCl-Losung. —
Nach 1 Std. beginnende Losung.
5) 0,5 Amb. 1:1600 + 0.5 Kompl. + 0,5 Blutk. + 1 ccm NaCl-Losung. —
Nach 1 Std. Hemmung
b) Versuch mit dem Komplement nach der Einspritzung.
Genau dieselbe Versuchsanordnung wie bei a.
1 ) Amb. 1:100. — Nach 1 Std. Losung mit Triibung.
2) Amb. 1:200. — Nach 1 Std. Losung mit starkerer Triibung.
31 Amb. 1:400. — Nach 1 Std. Hemmung mit beginn. Los., wie bei a, 4.
41 Amb. 1:800. — Nach 1 Std. kompl. Hemmung.
5) Amb. 1:1600. — Nach 1 Std. kompl. Hemmung.
II. Um nachzuprttfen, ob nicht infolge der Operation an
und fttr sich ein Komplementschwund zu verzeichnen ist, habe
ich einem zweiten Tier auf genau dieselbe Weise ca. die H&lfte
des Blutes abgezapft, dann die Carotis abgeklemmt; nach
20 Minuten das Tier vollstandig entblutet und die zwei Kom¬
plementmengen auf ihre hamolytische Wirkung miteinander
verglichen.
a) Versuch mit dem Komplement von der I. Blutentnahme.
Die Versuchsanordnung genau wie bei I.
1) Amb. 1:100. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
21 Amb. *1:200. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
3) Amb. 1:400. — Nach 1 Std. fast kompl. Losung mit leichter Triibung.
4) Amb. 1:800. — Nach 1 Std. beginnende Losung.
5) Amb. 1:1600. — Nach 1 Std. Hemmung.
1 ) Hammelblutambozeptor.
2) Komplementverdiinnung 1:10.
3) Haramelblutkorperchen, Verdiinnung 1:20.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 245
b) Versuch mit dem Komplement von der II. Blutentnahme.
Die Versuchsanordnung genau wie bei I.
1 ) Amb. 1:100. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
2) Amb. 1:200. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
3) Amb. 1:400. — Nach 1 Std. fast kompl. Losung mit leichter Triibung.
4) Amb. 1:800. — Nach 1 Std. beginnende Losung.
5) Amb. 1:1600. — Nach 1 Std. Hemmung.
III. Um drittens nachzuprflfen, ob nicht die bei Versuch I
zu konstatierende AbschwSchung des Komplementes einfach auf
seine Verdiinnung infolge der Einspritzung yon 2 ccm Flfissig-
keit (Extrakt) zurflckzuftthren ist, habe ich einem Tier ca. die
Haifte des Blutes abgezapft und gleich darauf 2 ccm physio-
logischer Kochsalzlosung in die Jugularvene eingespritzt; nach
20 Minuten das Tier entblutet und die so gewonnenen Kom-
plementproben auf ihre hamolytische Wirkung untereinander
verglichen.
a) Versuch mit dem Komplement vor der Einspritzung der
NaCl-Losung.
Die Versuchsanordnung genau wie bei I.
1 ) Amb. 1:100. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
2) Amb. 1:200. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
3) Amb. 1:400. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
4) Amb. 1:800. — Nach 1 Std. beginnende Losung.
5) Amb. 1:1600. — Hemmung.
b) Versuch mit dem Komplement nach der Einspritzung von
NaCl-Losung.
Die Versuchsanordnung genau wie bei I.
1) Amb. 1:100. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
2) Amb. 1:200. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
3) Amb. 1:400. — Nach 1 Std. kompl. Losung.
4) Amb. 1:800. — Nach 1 Std. beginnende Losung.
5) Amb. 1:1600. — Nach 1 Std. Hemmung.
Allen diesen Versuchen ging ebenfalls eine Nachpriifung der hem-
menden Wirkung des wasserigen Meerschweinchenherzextraktes voraus (der
Extrakt neu hergestellt nach der schon angegebenen Weise).
1) 0,5 Amb. 1:100 + 0,5 Kompl. 1:10 + 0,5 Hammelblutk. (1:20) + 0,2
unverd. Extr. — Nach 1 Sta. beginnende Losung mit Triibung. Nach
18 Std. fast komplette Losung.
2) 0,5 Amb. 1:200 + 0,5 Kompl. 1:10 + 0,5 Hammelblutk. (1 :20) + 0,2
unverd. Extr. — Nach 1 Sta. Hemmung. Nach 18 Std. Halblosung
3) 0,5 Amb. 1:400 + 0,5 Kompl. 1:10 + 0,5 Hammelblutk. (1:20) + 0,2
unverd. Extr. — Nach 18 Std. Hemmung.
4) 0,5 Arab. 1:800 + 0,5 Kompl. 1:10 + 0,5 Hammelblutk. (1:20) + 0,
unverd. Extr. — Nach 18 Std. Hemmung.
Alle Rohrchen auf 2,7 ccm Fliissigkeit mit NaCl-Losung aufgefullt.
1 Stunde im Therm. 37° C, dann im Zimmer.
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246
Methodi Popoff,
Kontrolle: Dieselbe Versuchsanordnung nur ohne Extrakt.
Nach 1 Std. im Therm. 37° C komplette Losung bis Amboz. 1:400
inkl. Nach 18 Std. komplette Losung auch beim Ambozeptor 1:800').
Aus dem Vergleich der drei Versuchsreihen ist zu er-
sehen, dafi innerhalb ein und derselben Reihe ein Unterschied
in der hfimolytischen Wirksamkeit des Komplementes nur bei
dem Tiere zu beobachten ist, welches wfisserigen Lipoid-
extrakt injiziert bekam, und zwar ist das Komplement nach
der Injektion in seiner Wirksamkeit schwScher als vor der
Injektion. Dieses Resultat ist nur dadurch zu erklfiren, dad
es im Kdrper des Meerschweinchens zu einer Bindung vom
Komplement des Blutes mit den injizierten Lipoiden ge-
kommen ist.
II. Teil.
1. Nach den vielen Arbeiten, die fiber die theoretische
Begrtindung der Wassermann - Neisser- Br u ck schen
Reaktion erschienen sind, kann man heute als feststehend
betrachten, dad diejenige Erklfirung, wonach dieselbe den Kom-
plementbindungsreaktionen im Sinne von Bordet-Gengou
einzureihen ist, wenigstens unzureichend ist Nach dieser Er-
klarung sollen folgende Wechselbeziehungen zwischen den
einzelnen, bei der Reaktion gebrauchten Komponenten be-
stehen. Infolge der Infektion werden im Blute eines Luetikers
Antikfirper gebildet. Wenn man zu diesen ein spezifisches
Antigen zusetzt, so mud nach dem Bordetschen Kom-
plementbindungsprinzip, eine Bindung Antikfirper - Antigen-
Komplement stattfinden. Fflgt man zu diesem System zwei
von den Komponenten eines hfimolytischen Systems, Ambo¬
zeptor und Blutkfirperchen, hinzu, so wird keine Hfimolyse
1) Wie aus dem Vergleich der Extraktversuche mit deu Kontrollen zu
ersehen ist, besitzt der Extrakt eine ziemlich starke hemmende Wirkung [nach
1 Stunde kaum beginnende Losung mit Triibung beim Ambozeptor 1:100,
wiihrend die Kontrollen (ohne Extrakt) in derselben Zeit eine komplette
Losung bei einer Verdiinnung des Ambozeptors iiber 1:400 zeigen]. Qierist,
wie auch schon friiher, unter ,,hemmende Wirkung eines Extraktes sein
Lipoidgehalt und folglich auch seine Eigenschaft, eine gewisse Komplement-
menge zu binden und dadurch das Serum hiimolytisch zu schwiichen, zu
verstehen.
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Hiimolysehemmende Erscheinungen bei luetisehen Seren etc. 247
eintreten, da das nbtige Komplement schon gebunden worden
ist; das betreffende Serum reagiert positiv. Beim Serum
eines normalen Menschen dagegen, wird das zugefttgte
Antigen infolge Mangel an spezifischen Antikorpern in keine
Bindung eintreten kbnnen, das Komplement bleibt infolge-
dessen frei und kann die nachtrSglich zugefflgten Korn-
ponenten Ambozeptor, Hammelblutkorpercben zu einem voll-
st&ndigen h&molytischen System komplettieren: es tritt in
dem Fall eine vollstSndige HSmolyse ein, das Serum reagiert
negativ. Diese Wechselbeziehungen zwischen den funf ge-
nannten Komponenten werden jedesmal eintreten, wenn wirk-
lich AntikSrper und spezifiscbes Antigen vorhanden sind.
Aus vielen eingehenden Untersucbungen (Levaditi und
Yamanouchi, Levaditi und Marie, Porges und
Meyer, Landsteiner u. a.) geht aber hervor, daB das bei
der Wassermann-Neisser-Bruckschen Reaktion ange-
wandte Antigen (luetischer Leberextrakt) kein spezifisches
Antigen ist, denn die Reaktion gelingt genau so gut, wenn
man irgendeinen anderen Organextrakt (Ochsenherz-, Meer-
schweinchenherz-Extrakt etc.) anwendet.
Wie ist dann die Wassermann-Neisser-Brucksche
Reaktion zu erklSren? Auf die vielen nach dieser Richtung
gemachten Erklarungsversucbe will ich hier nicht eingehen,
da dieselben schon genilgend in anderen Arbeiten und Lehr-
bflchern besprochen und gewtirdigt worden sind. Icb werde
mich nur begniigen, die Wassermann-Neisser-
Brucksche Reaktion im Lichte der im ersten Teil dieser
Arbeit besprochenen Versuche iiber die direkte Bindung von
Komplement und Lipoiden zu betrachten.
Danacb wurden bei der Wassermann-Neisser-
Bruckschen Luesreaktion folgende Wechselbeziehungen
zwischen den einzelnen Komponenten eintreten. Es wtirde
bei dieser Reaktion keine Komplementbindung im Sinne von
Bordet-Gengou (Antigen - AntikSrper - Komplement) statt-
finden (da kein spezifisches Antigen), sondern es wiirde zu
einer direkten Bindung zwischen den im Extrakt vorhandeuen
Lipoiden und dem bei der Reaktion angewandten Meer-
schweinchenkomplement kommen. Es wird die Menge der
Komponenten Extrakt-Komplement bei der Wassermann-
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248
Methodi Popoff
Neisser-Bruckschen Reaktion so austitriert, daB ein Teil
des Komplementes noch frei bleibt, welches dann die Kom-
ponenten Hammelblut -f- Hammelblutambozeptor zu einem
hamolytischen System komplettiert *). Beim Zufiigen eioes
normalen Serums wird in diesem System nichts gefindert;
das Serum wird demnach negativ reagieren (es wird eine
komplette HSmolyse nacb wie vor eintreten). Fflgt man aber
zum System Komplement-Extrakt ein Luetikerserum hinzu, so
werden sich die in demselben vorhandenen Lipoide mit dem
frei gelassenen (durch die fdr eine totale Bindung unzu-
reichend gewahlte Extraktdosis) Komplementrest verbinden,
die H&molyse wird infolgedessen ausbleiben (das Serum wird
positiv reagieren). Bei der Wassermann-Neisser-
Bruckschen Reaktion wflrden demnach zwei Komplexe von
Komponenten: 1) Ambozeptor- Hammelblut und 2) Kom-
plement-Extrakt-Serum zu unterscheiden sein, die durch Aus-
titrierung so eingestellt worden sind, daB zum SchluB nur
noch die hemmende Wirkung des Luetikerserums, durch die
in ihm vorhandenen Lipoide, fiir den positiven Ausfall der
Reaktion ausschlaggebend ist. (Siehe in diesem Zusammen-
hang die Arbeiten von Levaditi und Yamanouchi,
L. Michaelis, Muller und Potzl, Porges und Meier,
James McIntosh u. a.)
Hier noch einige diesbeziigliche Versuche.
a) Inaktivierung von positiven Seren.
Wenn bei einem luetischen Serum das Komplement
durch die Lipoidstoffe gebunden wird, so kann der Fall vor-
kommen, daB die Lipoidmenge gerade ausreichend gewesen
ist, um das Komplement zu binden. Solch ein Serum muB
dann nach der Wassermann-Neisser-Bruckschen Re¬
aktion negativ reagieren, da ja keine freien Lipoidstoffe vor-
handen waren, welche nach unserer obigen Annahme not-
wendig sind, um die Menge des angewandten Lipoidextraktes
1 ) Da die freibleibende Komplementmenge bei dieser Vereuchs-
anordnung sehr gering ist, so wird dieselbe durch einen auBerst stark
wirkenden Ambozeptor (ca. die 4-fache Titerdosis) kompensiert. Der Ambo¬
zeptor des Menschenserums kommt dabei nicht in Betracht, da er fiir
Hammelblutkdrperchen 6ehr schwach ist.
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Hiiraolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Keren etc. 249
bei der Bindung des Komplementes zu komplettieren. Dies
scheint in der Tat bei Anwendung von frischen Seren vor-
zukommen, da die Reaktion in diesem Falle nach den bis
jetzt geraachten Erfahrungen nicht ganz zuverl&ssig sein soil.
Mit der Anwendnng von inaktiven Seren wird aber dieser MiB-
stand einigermafien beboben, denn, wenigstens nach V, Std.
Inaktivierung x ), wirken die inaktivierten Sera stSrker hemmend
als die aktiven, was als eine Folge von frei gewordenen
Lipoidstoffen betrachtet werden kann 2 3 ).
Von 4 positiven Seren wurde je die Halfte inaktiviert ( l / t Std. auf
56° C) und die andere Halfte aktiv gelassen. Dann wurden alle beide
Halften durch Zusatz von aktivem neg. Serum reaktiviert und ihre hamo-
lytische Kraft bei folgender Versuchsanordnung verglichen. Zu je 0,1, 0,2
und 0,3 ccm von jedem inaktivierten bzw. aktiven positiven Serum wurde
je 0,1 ccm von ein und demselben akt. neg. Serum, 0,1 ccm Meerschw.-
Blutk. in Verd. 1:5 getan *), und nach 1 Std. im Therm. (37 0 C) die
Hamolyse bei den entsprechenden akt. und in akt. Sera untereinander
verglichen. Bei den aktiven posit. Seren war die Hamolyse weiter fort-
geschritten, als dies bei den entsprechenden inakt. posit. Seren der Fall war.
b) Die Annahme von einer direkten Bindung zwischen
Komplement und Extrakt bzw. Komplement, Extrakt und
positivem Sernm wird auch durch den Ausfall folgender Ver-
suche untersttitzt.
Inaktives positives Serum in Verd. 1:5.
Meerschweinchenkomplement in Verd. 1:10.
Hammelblutambozeptor (im Vorversuch: Titer bis 3000) in Verd.
1 : 200 .
Hammelbutkorperchen in Verd. 1:20 und 4 verschiedene Extrakte
(fiir alle Versuche gleichmaBig angewandt):
I. Ochsenherzextrakt a in Verd. 1:10.
IL Luetischer Leberextrakt a in Verd. 1:20.
III. Luetischer Leberextrakt b in Verd. 1:20.
IV. Ochsenherzextrakt b in Verd. 1:15.
Die Rohrchen auf 5 ccm Fliissigkeit mit NaCl-Losung aufgefiillt.
1 ) Interessante diesbeziigliche Angaben sind in der Arbeit von Selig-
mann und Pincus enthalten (Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 4, 1909).
2) Siehe auch die Angaben von Stern (Zeitschr. f. Immunitatsf.,
Bd. 5, 1900): beim Arbeiten mit aktiven Seren muB man mit der Extrakt-
dosis heraufgehen.
3) Jedes Rohrchen auf 1,3 ccm Fliissigkeitsmenge mit NaCl-Losung
aufgefiillt.
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250
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I. Versuchsreihe.
1 ) 1 ccm Extrakt + 1 ccm
Komplement
2) 0,5 ccm Extrakt -f 1 ccm
Kompl. + 0,5 NaCl-Los.
Nach 20' (im Zimmer)
je 1 ccm Hammelblut
u. 1 ccm Ambozeptor
zugesetzt.
Nach 5' waren die Rohr-
chen mit den 0,5 ccm Ex¬
traktdosen, nach 10' die
Rohrchen mit den 1 ccm
Extraktdosen gelost.
Dieselben Versuche mit alien 4 Extrakten.
Bei den halben Extraktdosen ist mehr Komplement frei gewesen.
II. Versuchsreihe.
LiiBt man vor dem Zufiigen des Ambozeptors und der Blutkorperchen
die Versuche 1 und 2 eine Stunde im Therm. (37° C) stehen, dann ist
der Unterschied in der hamolytischen Wirkung von 1 und 2 nicht so aus-
gesprochen, da das Komplement infolge der Vorerwarmung energischer
wirksam ist.
III. Versuchsreihe.
Dieselbe Versuchsanordnung wie bei II, nur daS nach 1 Std. noch
je 0,5 ccm inakt. positives Serum (Verd. 1:5) zugesetzt wird.
1) Nach 10' zeigen die Rohrchen mit Extrakt-IV-Dosis 0,5 starkere
Los. (Halblosung) als die Rohrchen mit Extraktdosis 1 ccm. — Nach 20'
alle beide kompl. Los.
2) Bei Extrakt III zeigten die Rohrchen nach 10' mit der 0,5 ccm
Dosis beginnende Los., mit der 1 ccm Extraktdosis Hemmung. Nach 20'
iiberall kompl. Los.
3) Zu den Versuchen mit Extrakt I habe ich je 1 ccm posit. Serum
zugefugt. Nach 10' in den beiden Reihen: Extrakt 1 ccm und 0,5 ccm,
fast Hemmung. Nach 20' iiberall kompl. Los.
4) Zu den Versuchen mit Extrakt II, und zwar nur in den Rohrchen
mit 1 ccm Extrakt, habe ich 1,5 ccm positives Serum zugefugt. Nach 20'
fast kompl. Hemmung, welche auch nach 1 Std. bestehen bleibt.
Die Versuche zeigen, dafl beim Zufiigen von positivem Serum eine
6 tarkere Hemmung (als ohne Serum) eintritt, und zwar steigt diese Hem¬
mung parallel mit der Dosis des posit. Serums 0,1, 1,0 und 1,5 ccm 1 ).
IV. Versuchsreihe.
Dieselbe Versuchsanordnung wie bei II, nur bei hoheren (2,0 und
1,5 ccm) Extraktdosen. Nach 1 Std. Stehen im Therm, je 1 ccm Ambo¬
zeptor und 1 ccm Hammelblut zugesetzt. Nach 10' bei der Extraktdosis
1,5 ccm Los. mit schwacher Triib., bei der Dosis 2 ccm Los. mit Triib.
Nach 30' iiberall kompl. Los.
Die erhohte Extraktdosis verlangsarat die Hiimolyse. (Komplett wurde
sie nicht unterdriickt, da der Ambozeptor zu stark genommen.)
1 ) In den obigen Versuchen bleibt sich die Komplementmenge in
den beiden Versuchsreihen ganz gleich, da die aktiven und inaktiven
positiven Seren, wie die entsprechenden Kontrollen zeigten, kein freies
Komplement aufweisen; es kommt deshalb nur die Komplementmenge des
aktiven negativen Serums in Betracht.
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Hiimolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 251
V. Versuchsreihe (ohne Extrakt).
1) 1 ccmkompl. +1 ccminakt.neg.Ser.%Nach 1 Std. i.Therm.) Nach 5'\ vr.-t,
2) 1 „ „ +2 „ „ „ „ |37° C jelccm Amb.J Hem- ,,,
3) 1 „ „ +3 „ ,, „ „ >u. 1 ccm Blutzugef iigt J mung ^ k ompl>
Kontr. 1 ccm kompl. j {llalbliisJ ^ s ‘
Dieselbe Versuchsanordnung mit inakt. posit. Serum nach 15'.
N.»h5' IffclH”""®
l!i H —
Nach 30'
komplette
Losung
Das positive Serum verlangsamt, ahnlich einera Eztrakt, die Hamo¬
lyse, ein negatives Serum dagegen nicht.
DaB das positive Serum komplettiereud bei der Bindung
(Komplementextrakt) eingreift, zeigen noch die folgenden
Versuche, welche eine Fortsetzung und Variation der auf
p. 239—240 wiedergegebenen Versuchsreihen (siehe Einzel-
heiten dort) darstellen.
- 1) 0,5 ccm Eztrakt (Verd. 1:5) ) 1
1,0 „ Hammelblutkorperchen Nach 2 Std. keine Hii-1 Nach
1,0 „ Komplement Imolyse. Noch 1,2 ccm I 15 Std.
1,0 „ Ambozeptor 1:100 | Ambozeptoren 1:100 j keine
0,5 „ NaCl-Losung I zugesetzt lHamolyse
1,0 „ inakt. posit. Serum (Verd. 1:5)1 J
2) Genau dieselbe Versuchsanordnung, nur mit Extrakt in Verd. 1:10.
Nach 15 Std. keine Hamolyse.
3) Genau dieselbe Versuchsanordnung, nur mit Extrakt in Verd. 1:15.
Nach 15 Std. keine Hamolyse.
4) Genau dieselbe Versuchsanordnung, nur mit Extrakt in Verd. 1:20.
Nach 15 Std. keine Hamolyse.
Vergleiche die obigen Resultate mit den Kontrollen Rohrchen I, 4;
II, 4; III, 4 und IV, 4 (p. 239—240). Nach 15 Std. wurde zu alien
4 Rohrchen je 1 ccm frisches Meerschweinchenkomplement (1:10) zugesetzt.
Ueberall ist eine komplette Hamolyse eingetreten. Das Ausbleiben der Hamo¬
lyse ist an Mangel an Komplement gelegen.
2. Von den hier angefflhrten Versuchen und der Aus-
legung derselben ist zu entnehmen, daB bei der Wasser-
m ann - Neisser- Bruckschen Reaktion die hemmende
Wirkung des Luetikerserums, durch die in ihm vorhandenen
Lipoide, eine Rolle bei dem positiven Ausfall der Reaktion
spielen muB.
Im Grunde genommen beruht die hamolyseheminende
Wirkung der Luesseren und die Hemmung der Hamolyse,
welche die Luesseren in der W.-N.-Br. Reaktion zeigen, auf
Zeitschr. f. Immunttiitsforschnng. Orig. Bd. XIV. ]7
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252
Methodi Popoff,
einem Mangel an Komplement, Menschen- bzw. Meerschwein-
chenkomplement; nur daB bei der W.-N.-Br. Reaktion die
Nachprtlfung auf Komplementmangel durch viele in ihrer
Wirkung geschickt verkettete Reagentien vorgenommen wird.
Es kann nun bei der W.-N.-Br. Reaktion vorkommen, daB
eine der nicht sich gleich bleibenden Komponenten (Kom¬
plement, Ambozeptor, Extrakt) in ihrer Wirkung versagt,
dadurch werden aber die Resultate stark beeinfluBt 1 ). Zwar
werden die Komponenten Ambozeptor, Komplement, Hammel-
blut vor jeder Reaktion durch den Vorversuch eingestellt,
dies wird aber mit der wichtigsten derselben, dem Extrakt,
nicht getan. Wie wechselnd aber seine Wirksamkeit ist,
zeigen die schonen Untersuchungen von Blanck und Friede-
mann 2 ). Diese Inkonstanz in dem Wert des Extraktes
erkl&rt zur Geniige 1) die abweichenden Resultate, welche
man bei Untersuchung derselben Seren in verschiedenen An-
stalten bekommt 3 ), und 2) die groBen Unterschiede im Prozent-
satz der positiven Reaktionen, welche in den verschiedenen
Anstalten fflr eine und dieselbe Luesperiode gefunden worden
sind. Diese Unterschiede im Ausfall der W.-N.-Br. Reaktion
betont auch ein in der Luesserodiagnostik so erfahrener
Forscher wie Kolle: „Damit die UngleichmaBigkeiten, die
auch jetzt noch bei genauer Einhaltung der quantitativen
Methode der Syphilisdiagnostik zwischen verschiedenen Unter-
suchungsstellen bestehen kdnnen, und die wesentlich auf die
Schwankungen in der Wirksamkeit und in der Brauchbarkeit
der Extrakte zurflckzufiihren sind, ganz aus der Welt geschafft
werden, sollten nur geeignete, an einer Zentralstelle genau
eingestellte Extrakte als Antigen zur Verwendung kommen.
Nur wenn in dieser Weise vorgegangen wird, lassen sich die
bisher noch zum Teil bestehenden Unterschiede beseitigen“ 4 ).
1 ) Eingehende Angaben daruber eind in der Arbeit M. Sterns,
Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 5, p. 201—235, zu finden.
2) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 4, 1909.
3) Wossildo (Berl. Med. Ges., 15. VI. 1910) hat bei 21 F&llen
in 66 Proz. von je drei Instituten differente Resultate er-
halten.
4) Centralbl. f. Bakt., Beilage zu Bd. 50, 1911; Bericht iiber die
5. Tagung der freien Vereinigung fiir Mikrobiologie.
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Hamolysehemmende Erscheinungen bei luetischen Seren etc. 253
Diese Ausffihrungen erklfiren auch die manchmal groBen
Unterschiede im Ausfall der W.-N.-Br. Reaktion und der hier
angegebenen Untersuchungsmethode. Es genfigt eben eine
kleine Verschiebung im W.-N.-Br. System, urn schwach
positive, ja sogar ganz negative Sera positiv reagieren zu
lassen and umgekehrt. Aus dem Gesagten geht hervor, daB
eine exakte Nachprtifung der oben mitgeteilten Beobachtungen
fiber die hamolysehemmenden Eigenschaften der Luesseren
und fiber die Moglichkeit ihrer serodiagnostischen Verwertung
nur an klinisch als Lues feststehendem Material vorgenommen
werden darf, denn nur solch eine Nachprflfung (und nicht
nur der Vergleich mit dem Ausfall der W.-N.-Br. Reaktion
allein) konnte sichere Schlfisse fiber die diagnostische Brauch-
barkeit der oben mitgeteilten Hemmungserscheinungen geben.
Zusammenfassung.
1) Das normale Menschenserum wirkt gegenflber Meer-
schweinchenblutkbrperchen stark hfimolytisch. Diese hamo-
lytische Eigenschaft wechselt zwar in geringen Grenzen an
verschiedenen Tagen bei ein und derselben Person. Sie ist
auch nicht gleich energisch bei verschiedenen Personen. Bei
einer Versuchsanordnung: 0,1 ccm Serum, 0,1 ccm gewaschene
Meerschweinchenblutkfirperchen in Verdfinnung 1:5 und 1 ccm
NaCl-Losung bei 37° C tritt aber hfichstens nach 50 bis
60 Minuten immer eine komplette Hamolyse ein. Die
nach dieser Richtung ausgeffihrten 161 Untersuchungen bei
108 gesunden Individuen ergaben nur in zwei Fallen be-
deutende Abweichungen in der hfimolytischen Wirkung des
Serums, so daB es zu einer inkompletten Hamolyse (Losung
mit Trfibung) kam.
2) Die hamolytische Kraft des Serums der an Tuberkulose,
Pneumonie, Typhus, Meningitis, Chlorose Erkrankten wird
durch die Krankheit nicht beeinfluBt.
3) Das Serum Lueskranker zeigte dagegen eine mehr Oder
weniger komplette Hemmung der Hamolyse. Diese hemmende
Wirkung der luetischen Seren lafit sich, soweit es aus meinen
bisherigen Erfahrungen zu ersehen ist, ffir eine Serodiagnostik
bei Syphilis verwenden.
17*
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254 M. Popoff, Ueber hamolysehemmende Erecheinuugen etc.
4) Die fiber die mOglichen Ursachen dieser hemmenden
Wirkung der luetischen Seren vorgenommenen Versuche deuten
darauf hin, dafi die Ambozeptorenmenge der luetischen Seren
unver&ndert vorhanden ist, dasselbe ist aber nicht der Fall
mit dem Komplementgehalt. Die luetischen Seren zeigen eine
Verminderung Oder ein vollkommenes Schwinden des Kom-
plementes.
5) Und zwar ist dieser Komplementmangel mit sehr groBer
Wahrscheinlichkeit auf eine direkte Bindung des Komplements
mit den infolge der Luesinfektion im Organismus abgespaltenen
Lipoidstoffen zurflckzufflhren.
6) Als Analogon zu diesem Fall wurde durch Injektion
von wasserigem Lipoidextrakt im K8rper eines Meerschwein-
chens eine teilweise Bindung des Komplements und dadurch
die Abschwachung seiner h&molytischen Kraft 1 ) noch in vivo
zu erzielen gesucht. Die nach dieser Richtung vorgenommenen
Versuche bestatigten diese Erwartungen.
7) Die Erfahrungen iiber die direkte Bindung zwischen
Komplement und Lipoidstoffen fiihrten zu einigen Bemerkungen
iiber die Theorie der W.-N.-Br. Reaktion.
1) Im System Hammelblutambozeptor, Hammelblutkbrperchen.
Krcmmannscho Buchdruckerei (Hermann Fohle) in Jen*. — 416r>
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ZeitscMt £ InunnmUtsfarsdiniig. Original! BiHV. No. 3.
Nachdruck verboten.
Experlmentelle Untersnchungen fiber Wesen and Ursprnng
der Hfimagglatination.
Von Dr. S. Bergel in Hohensalza.
Mit 10 Figuren im Text.
(Eingegangen bei der Eedaktion am 16. Mai 1912.)
Nachdem ich den Nachweis liefern konnte, daB die
H&molyse im wesentlichen auf einer Ldsung der lipoid-
haltigen Htille der roten BlutkOrperchen beruht, daB die
Quelle dieser Lipolyse in der fettspaltenden Wirkung der
einkernigen ungranulierten basophilen weifien BlutkOrperchen
und deren Produktionsstatten, vornehmlich der Milz, der
Lymphdrflsen, tiberhaupt dem lymphatischen Gewebe zu
suchen ist, und daB ferner Blutserum, Milz und Lymph-
drtisen durch Vorbehandlung mit den lipoidhaltigen roten
BlutkOrperchen nicbt bloB an h&molytischem, sondern auch an
lipolytischem VermOgen zunehmen (Mflnch. med. Wochenschr.,
1912, No. 12, und Deutsches Arch. f. klin. Med., Bd. 106,
Heft 1—2), erwies sich die Erkenntnis von der fettspaltenden
Eigenschaft der genannten einkernigen weifien BlutkOrperchen
auch ffir das Verstfindnis des Wesens und des Ursprungs
der Agglutininbildung von groBer Wichtigkeit. Neuberg
und Reicher konnten feststellen, daB pflanzliche Agglutinine
gleichzeitig lipolytisch wirken, und die Vermutung war wohl
berechtigt, daB bei dem AgglutinationsprozeB irgendeine Ein-
wirkung auf die Oberflachenschicht der roten BlutkOrperchen
stattfinden mOchte.
Ich konnte nun den direkten Nachweis erbringen, daB
die Hemagglutination infolge der Lipasenwirkung der ein¬
kernigen ungranulierten basophilen weiBen Zellen auf die
LipoidhUlle der Erythrocyten zustande kommt. Durch In-
jektionen von Hammelblut in die BauchhOhle von weiBen
M&usen und Meerschweinchen (die gleichen Versuche wurden
ZeiUchr. f. ImmunitJttsforschung. Orig. Bd. XIV. 18
ty Google
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256
S. Bergel,
auch mit Einspritzungen von roten Meerschweinchen- und
Kaninchenblutkdrperchen in die PeritonealhOhle von weifien
Mfiusen gemacht) bildet sich ein zuerst sowohl an poly¬
morph*, wie auch an einkernigen, nach kurzer Zeit aber vor-
wiegend an einkernigen weifien Blutkdrperchen reiches
Exsudat, das, auf einem Objekttr&ger mit frischem Hammel-
blut zusammengebracht, je nach dem Zeitpunkt nach der
ersten Injektion oder nach mehrfacher Vorbehandlung ent-
weder nur mikroskopisch nachweisbare, aber stets wieder-
kehrende typische Befunde erkennen liefi, oder auch schon
makroskopisch deutlich sichtbare Erscheinungen zeigte, die
Mr das Verst&ndnis des Agglutinationsvorganges von be-
sonderer Wichtigkeit sind, und die im folgenden n&her be-
schrieben und durch eine Reihe von Mikrophotogrammen er-
lautert werden sollen.
Wenn man 24—48 Stunden nach der Injektion von
roten Hammelblutkdrperchen in die Bauchhdhle von weifien
M&usen mittels einer Kapillare einen Tropfen Bauchhdhlen-
exsudat dem Tier entnimmt, anf einem Objekttr&ger bei Zimmer-
temperatur mit einem Tropfen einer 5-proz. roten Hammel-
blutkdrperchenemufsion zusammenbringt, vermischt and leicht
verstreicht, so kann man unter dem Mikroskop oft schon
jetzt beobachten, wie um ein oder eine kleinere Anzahl von
weifien Blutkdrperchen sich rote Blutkdrperchen kreisfdrmig
herumlagern in einer oder zuweilen sogar in mehreren
Reihen. Fast ausnahmslos wird die Beobachtung gemacht,
daB das Zentrum Mr die Agglutinationsbildung, der Mittel-
punkt, um den sich die Erythrocyten scharen, ein, oder was
dfter der Fall ist, mehrere weiBe Blutkdrperchen sind. Die
Untersuchung im gef&rbten Pr¶t ergibt, daB gerade die
einkernigen ungranulierten basophilen weifien Blutkdrperchen
es sind, welche die roten in ausgesprochener Weise chemo-
taktisch anlocken, eine Erscheinung, die besonders dort als
beweisend gelten kann, wo nur ein weifies Blutkdrperchen,
und zwar ausnahmslos ein einkerniges von den roten um*
geben ist (Fig. 1). Selbstverst&ndlich findet man in grdBeren
Reihen und Ballen von Leukocyten auch polymorphkernige
mit eingelagert, aber niemals bilden sie Mr sich allein den
Anziehungspunkt Mr die roten Blutkdrperchen. An dem
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Exp. Unters. uber Wesen and Ureprung der Hemagglutination. 257
Uebersichtsbild (Fig. 2), auch an Fig. 5 und 6 kann man er-
kennen, wie die einkernigen Zellen von Erythrocytenhaufen
umgeben sind, w&hrend der allergrOfite Toil der polymorph-
kernigen isoliert daliegt, ohne eine chemotaktische Wirkung
auf die roten Blutkorperchen auszuftben. Geffirbt wurde
meist nach Giemsa, seltener nach May-Grtinwald.
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258
S. Bergel,
Makroskopisch ist urn diese Zeit noch keine Agglutination
zu beobachten. / Im groBen und ganzen werden dieselben
Befunde auch an den folgenden 3—4 Tagen erhoben, da sind
sie noch etwas mehr ausgesprochen, weil die Anzahl der Ein-
kernigen zunimmt und infolgedessen auch das Agglutinations-
verraogen ein gesteigertes ist.
Besonders lehrreich und schon sind aber diese charakte-
ristischen, typisch sich wiederholenden Befunde nach mehrfachen,
nach 2—3, in ZwischenrSumen von 5—6 Tagen erfolgten In-
jektionen von roten Blutkorperchen in die Bauchhdhle der Tiere.
Entnimmt man nach wiederholter Einspritzung der Bauchhohle
einer Maus einen Tropfen Exsudat, bringt ihn zusammen mit
Fig. 3.
einem Tropfen der entsprechenden Blutkorperchenemulsion
und verstreicht beides leicht auf dem Objekttrager, so sieht
man meist schon nach ganz kurzer Zeit, auch bei Zimmer-
temperatur, mit bloBem Auge ganz deutliche Agglutinations-
bildung. Wahrend nach einmaliger Injektion sich die roten
Blutkorperchen meist um einen oder nur wenige Leukocyten
scharen und ihre Form gewohnlich noch ganz deutlich er-
kennen lassen oder nur wie Kreise an ihren Beruhrungs-
punkten miteinander verkleben, ist das Bild nach mehrfachen
Einspritzungen, wenn auch prinzipiell das gleiche, so doch
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Exp. Unters. iiber Wesen und Ursprung der Hiimagglutination. 259
graduell von dem ersten verschieden. Hier sieht man unter
dem Mikroskop, wie in kurzer Zeit eine ganze Anzahl von
Fig. 5.
einander fiigen und miteinander verschmelzen. Sehr haufig
ist hierbei in der ersten Zeit die normale Gestalt der Ery-
Fig. 4.
meist einzelnen weiBen Blutkorperchen, die von roten um-
lagert sind, sich vereinigen (Fig. 3), sich dann zu Ballen an-
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260
S. Bergel,
throcyten noch erhalten (Fig. 4), sp&ter aber ist sie oft nicht
mehr zu erkennen, und zwar sind nicht blofi einzelne Be-
rflhrungspunkte miteinander verklebt, sondern ganze Haufen
verschmelzen miteinander wie Wachskflgelchen und sehr oft
ist das Bild derart, daB die weiBen Blutkorperchen ein-
gelagert erscheinen in eine unfbrmige Masse (Fig. 5), die
ihre ZwischenrSume durchsetzt und auBen nur noch meist
rundliche Konturen, und hin und wieder ein wohlerhaltenes
oder wenigstens deutlich erkennbares rotes Blutkorperchen
aufweist (Fig. 6). Ueberall wird bei den gefSrbten Pr&-
paraten die gleiche Beobachtung gemacht, daB es die ein-
Fig. 6.
kernigen ungranulierten, basophilen, weiBen Blutkorperchen
sind, die den Grundstock und Ausgangspunkt fiir die Ent-
wicklung der Agglutination bilden, und nur aufierst selten
sieht man ein Haufchen von roten Blutkorperchen in der
Nahe von polymorphkernigen, weiBen Zellen oder flberhaupt
ohne eingelagerte weiBe.
Wenn man nach mehrfachen Injektionen eine Maus totet
und das Serum derselben auf Hammelblutkorperchenemulsion
einwirken l&Bt, so erhalt man gleichfalls eine schon makro-
skopisch sichtbare, sehr deutliche und schone HSufchen-
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Exp. Unters. iiber Wesen und Ursprung der Hiimagglutination. 261
bildung, die auch mikroskopisch sich als solche pr&sentiert,
hier natiirlich ohne eingelagerte weiBe Zellen (Fig. 7). Da
normales Mauseserum Hammelblut nicht agglutiniert und das
Bauchhdhlenexsudat nach der Vorbehandlung mit intra-
peritonealen Injektionen friiher agglutinierend wirkt als das
Serum, so ist wohl als sicher anzuuehmeD, dafi die ueu eut-
standene FShigkeit der Blutfliissigkeit erst eine sekundare
ist, erst als eine Folgeerscheinung des erhohten Fettspaltungs-
vermogens des Blutserums zu betrachten ist, und daB dieses
wiederum bedingt ist durcb die fettlosende Fahigkeit der ein-
kernigen weiBen Blutkorperchen und ihrer ins Serum iiber-
Fig. 7.
gehenden Fermente. Den gleichen Befund der Agglutinations-
bildung erbielt ich durch Einwirkung des Saftes der in pbysio-
logischer Kochsalzlosung mazerierten und filtrierten Milz der
vorbehandelten Tiere (Fig. 8). Doch dariiber, wie iiber die
Befunde nach Einwirkung von Lymphdrusenmazeration auf
rote Blutkorperchen soil spater berichtet werden.
Bei den Agglutinationsversuchen ist hSufig die Beobach-
tung gemacht worden, daB einkernige weiBe Blutzellen im
Zerfall begriffen Oder bereits zerfallen waren. Oft sab man
in den agglutinierten Ballen von roten und weiBen Blut-
kdrperchen neben der Mehrzahl von wohlerhaltenen, typisch
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262
S. Bergel.
Fig. 9.
exsudat ernes mehrfach vorbehandelten Tieres mit den ent-
sprechenden roten Blutkorperchen sich zuerst makroskopisch
gefSrbten, zum allergroBten Teil einkernigen weiBen Blut-
zellen auch einige in Degeneration begriffene oder degenerierte.
Fig. 8.
Ziemlich haufig wurde ferner die interessante Tatsache kon-
statiert, daB nach dem Zusammenbringen von Bauchhohlen-
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Exp. Untere. iiber Wesen und Ursprung der Hamagglutination. 263
deutlich sichtbare und mikroskopisch kontrollierte Agglu¬
tination der roten Blutkorperchen bildete, und dafi dann nach
einiger Zeit die roten Blutkorperchen entweder vollkommen
verschwunden waren Oder hin und wieder nur Schatten
hinterliefien, wfihrend die aneinander gelagerten weifien Blut¬
korperchen vollstfindig erhalten blieben. Auf der Fig. 9 z. B.
sieht man deutlich, wie die einkernigen weifien Zellen zu
einem Haufen vereinigt sind, wfihrend die roten, die da-
zwischen und darnm gelagert waren, fast vollstfindig fehlen.
Die Resultate in bezug auf Agglutinationsbildung waren
die gleichen, ob man das gerinnbare Bauchhohlenexsudat un-
mittelbar mit dem Hammelblut zusammenbrachte, verstrich
und antrocknen liefi, Oder ob man das entnommene Exsudat
zunfichst gerinnen liefi, das Fibrin entfernte und nur das
flfissige Bauchhohlenexsudat auf die roten Blutkorperchen
einwirken liefi. Der Unterschied bestand nur darin, dafi das
flfissige Exsudat weniger Zellen enthielt als das ungeronnene,
aber auch dort war in der Hauptsache der Befund der gleiche,
dafi die Erythrocyten sich immer um die einkernigen weifien
Zellen lagerten und durch sie verklumpt wurden.
Die Agglutininbildung ist ebenso wie die Hfimolysin-
bildung spezifischer Natur. Wenn man eine Maus mit Hammel-
blutkOrperchen vorbehandelt, so agglutiniert das fibrinhaltige
wie das defibrinierte Bauchhohlenexsudat, besonders das nach
mehrmaligen Einspritzungen gewonnene, ebenso das Milzfiltrat
und das Blutserum, wohl HammelblutkOrperchen, aber nicht
Oder nur in viel geringerem Mafie andersartige rote Blut¬
korperchen, die nicht schon normalerweise von ihnen agglu¬
tiniert werden. Das fettspaltende Ferment der einkernigen
weifien Blutkorperchen scheint sich eben infolge der mehr-
fachen Vorbehandlung spezifisch gegen das Lipoid der be-
treffenden roten Blutkorperchen Oder nahe verwandter Arten
einzustellen; denn erstens wfichst das AgglutinationsvermOgen
des Peritonealexsudates sowohl wie auch des Serums mit der
Zeit nach der ersten Injektion, besonders aber wird es nach
mehrmaliger Vorbehandlung speziell gegenfiber der betreffenden
roten Blutkorperchenart stfirker, und zweitens kommt es zwar
nach Injektion anderer Fettsubstanzen in die BauchhOhle, die
das Auftreten einkerniger weifier Blutkorperchen in dem Ex-
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264
S. Bergel,
sudat hervorrufen, ofter zu einer geringen Umlagerung dieser
einkernigen Zellen durch Erythrocyten, aber eine ausgeprfigte
Agglutination kommt nicht zustande.
Die oben geschilderten Befunde haben nach verscbiedenen
Richtungen hin eine groBe Bedeutung ftlr das Verstftndnis der
Agglutinationsvorg&nge. Einmal beweisen sie, daB die Quelle
der Agglutinationsbildung zu suchen ist in der chemischen
F&higkeit der einkernigen ungranulierten basophilen Zellen
und ihrer Bildungsorgane, daB die Agglutination der roten
Blutkorperchen herbeigeftihrt wird durch die Einwirkung des
fettspaltenden Fermentes dieser einkernigen Zellen auf die
LipoidhQlle der Erythrocyten, dafi also der Agglutinationsvor-
gang in einer Verklebung, in einer Verschmelzung der lipoiden
Oberfl&chenschicht der roten Blutkorperchen besteht, daB ferner
die Agglutination eine AntikOrperbildung ist, daB auch hier
das Lipoid als Antigen wirkt und der Antikdrper eine Art
Lipase darstellt, daB diese Lipase sich spezifisch gegen das
Lipoid einstellt, und daB die Agglutinationsffihigkeit des Blut-
serums erst eine sekund&re Eigenschaft desselben ist, erzeugt
durch die Tfitigkeit der fettspaltenden Organe und Ueber-
fflhrung des lipolytischen Fermentes in den Sfiftestrom des
KOrpers.
Wenn man nun die Frage aufwirft, wie die H&ufchen-
bildung auch der weiBen Blutkorperchen bei den beobachteten
Agglutinationserscheinungen zustande kommt, so glaube ich
sagen zu dilrfen. daB sie eine passive ist, hervorgerufen durch
die Vermittlung der miteinander verklebten und selbst klebrig
gewordenen, die weiBen umlagernden roten Blutkorperchen.
Diese Entstehung konnte oft direkt unter dem Mikroskop be-
obachtet werden, daB namlich eine um ein einkerniges weiBes
Blutkorperchen gelagerte Reihe von Erythrocyten mit fthn-
lichen anderen verschmolz, und sich dieser Anhkufung weiter-
hin noch andere anschlossen.
Man konnte nun vielleicht den Einwurf machen, daB die
durch die mononukle&ren Leukocyten bewirkte Agglutination
der Erythrocyten gar nicht auf dem Fettlbsungsvermbgen der
einkernigen weiBen Blutkbrperchen beruhe, sondern durch eine
rein mechanische Wirkung entstehe, daB die roten Blut¬
korperchen durch die fremden weiBen mechanisch mitgerissen
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Exp. Untere. iiber VVesen und Ureprung der Hamagglutination. 265
wflrden. Allein alles spricht gegen die mechanische und ftlr
die chemische Auffassung des Agglutinationsprozesses. Fremd-
artige rote Blutkdrperchen z. B., die mit andersartigen Erythro-
cyten gemischt werden, sind nicht imstande, die Erscheinung
der Agglutination hervorzurufen, w&hrend bei manchen Tier-
arten normalerweise im Serum, das doch keine kdrperlichen
Elemente enth<, Agglutinine fflr bestimmte andersartige rote
Blutkdrperchen vorhanden sind. Ferner besitzt in den ersten
24 Stunden nach der Injektion von roten Blutkdrperchen in
die Baucbhdhle einer Maus oder eines Meerschweinchens das
Exsudat, das noch ziemlich viel polynukle&re Leukocyten ent-
halt und weniger einkernige, eine viel geringere Agglutinations-
kraft als in den spSteren Tagen, wo die mononukleftren Zellen
in flberwiegender Anzahl vorhanden sind und die H&ufchen-
bildung und Verklebung schon recht deutlich ausgesprochen
ist Besonders aber der Umstand, dafi durch mehrmalige
Yorbehandlung von Tieren mit der gleichen Blutart sich
spezifische Agglutinine im Bauchhdhlenexsudat immunisatorisch
erzeugen lassen, spricht durchaus fflr den rein cbemischen
Charakter der Agglutinationsbildung und dafflr, dafi die Lipase
der einkernigen weiBen Blutzellen sich infolge der Vorbehand-
lung spezifisch gegen das betreffende Lipoid einstellt. Auch
das weitere Moment, daB das Serum der vorbehandelten Tiere
ein starkes Agglutinationsvermdgen gegenflber den roten Blut¬
kdrperchen gewinnt, spricht sicher fflr die chemische Auf¬
fassung. Ueberdies deuten die Formver&nderungen, die Ver-
klumpungen und das Zusammenbacken der roten Blutkdrper¬
chen durch das Exsudat von mehrmals vorbehandelten Tieren
unzweideutig darauf hin, daB die Oberflflche der roten Blut¬
kdrperchen, die ja durch eine Lipoidhfllle gebildet wird,
chemische Veranderungen erlitten hat.
Ich habe nun gesucht, weitere Belege dafflr zu erbringen,
daB es die chemische Einwirkung der einkernigen weiBen
Blutkdrperchen ist, welche die Agglutination hervorruft. Ich
habe MSusen und Meerschweinchen eine 2-proz. Fibrinemulsion
in die Bauchhdhle injiziert und dadurch ein Exsudat erhalten,
das zum groBten Teil aus polymorphkernigen Leukocyten be-
steht, und in dem erst in den spateren Stadien einkernige in
geringer Anzahl auftreten. Entnimmt man nun einem so, auch
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266
S. Bergel,
mehrfach vorbehandelten Tiere etwas Exsudat aus der Bauch-
h8hle und vermischt es mit Hammelblut, so kommt in der
Tat keine Agglutination zustande, die polymorphkernigen
Neutrophilen sind mit den roten Blutkorperchen ziemlich
gleichmSBig vermischt, ohne daB man auch bei mikroskopischer
Untersuchung eine Zusammenballung konstatieren kann (Fig. 10).
In den sp&teren Stadien, wo in dem entziindlichen Exsudat
auch eine Anzahl einkerniger vorhanden ist, sieht man hin
und wieder eine Andeutung von Ansammlung mehrerer roter
Blutkorperchen, und zwar gerade an den Stellen, wo die ein-
kernigen weiBen Zellen liegen, zu einer ausgesprochenen,
irgendwie starkeren Agglutination kommt es aber nicht, weder
makroskopisch, noch auch nur mikroskopisch. Auch das Serum
von Maus und Meerschweinchen, die mit Fibrininjektionen
intraperitoneal vorbehandelt waren, ergab, zusammengebracht
mit Hammelblut, keine Agglutination.
Wenn man also einen Tropfen Bauchhohlenexsudat einer
mehrfach mit roten Hammelblutkfirperchen vorbehandelten
Maus auf einem Objekttrager bei Zimmertemperatur auf einen
Tropfen einer 5-proz. Emulsion roter HammelblutkSrperchen
einwirken laBt, so kann man unter Umst&nden alle Phasen
und Entwicklungsstadien von den ersten mikroskopischen An-
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Exp. Unters. fiber Wesen und Uraprang der Hamagglutination. 267
deutungen bis zur ausgeprSgten, makroskopisch sichtbaren
Agglutination, ofter bis zum vollkommenen Verschwinden der
roten Blutkdrperchen, bis zur v811igen Hamolyse verfolgen und
dabei beobachten, daB die Agglutination sowobl wie die Hamo¬
lyse durch die Wirkung der einkernigen ungranulierten baso-
philen Zellen zustande kommt Scbon einige Tage nach der
ersten Injektion sieht man, wie die roten Blutkdrperchen von
den einkernigen weiBen chemotaktisch angezogen werden, wie
ein Kranz von roten Blutkdrperchen eine Oder mehrere ein-
kernige weiBe Zellen umgibt. Hier haben die Erythrocyten
gewdhnlich noch ibr normales Aussehen, ihre runde Form ist
erhalten, dann erst sieht man, wie die roten Blutkdrperchen
an ihren Berfihrungsstellen punktfdrmig oder schon etwas mehr
flachenhaft miteinander verkleben, wie weiterhin Reihen von
einkernigen Zellen, die von roten Blutkdrperchen umgeben
sind, sich zusammenballen, weil die Hfillen der letzteren
klebrig geworden sind.
Die Vorgange spielen sich schneller und pragnanter ab,
und die Agglutinationserscheinungen werden auch makro¬
skopisch deutlich sichtbar, wenn die Tiere in gewissen Zwischen-
r&umen mehrfach Injektionen erhalten haben. Dann werden
die einkernigen weiBen Zellen schneller von roten Blutkdrper¬
chen umlagert, ballen sich schneller und gewdhnlich auch zu
grdfieren Haufen zusammen, die roten Blutkdrperchen ver-
lieren weiterhin ihre normale Form, ihre Konturen werden
verwischt, und sie schmelzen vielfach zu formlosen Massen
zusammen, an deren Randern man nur noch unregelmaBige
Linien und hin und wieder einmal ein normales rotes Blut-
kdrperchen beobachten kann. Schon in diesem Stadium konnte
dfter konstatiert werden, dafi die bei Zimmertemperatur be-
obachtete Agglutination in eine Hamolyse ttberging, wenn man
den Objekttrager fttr kurze Zeit in den Brutschrank bei 37°
brachte. Aber auch bei Zimmertemperatur wurde oft die Tat-
sache konstatiert, daB eine Zeitlang, nachdem makroskopisch
das typische kdrnige, klumpige Aussehen und mikroskopisch
deutlich ausgesprochene Agglutination der roten Blutkdrper¬
chen beobachtet wurde, die Erythrocyten an den meisten
Stellen verschwunden waren und nur hin und wieder Schatten
hinterlieBen. Dieser Uebergang von Agglutination zur H&mo-
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268 8. Bergel, Wesen und Ureprung der Hamagglutination.
lyse vollzieht sich beim Frosch z. B. nach mehrfacher intra-
peritonealer Vorbehandlung mit roten BlutkOrperchen vom
Kaninchen Oder Hammel auch bei Zimmertemperatur viel
schneller, oft so schnell, daB man nur bei genauer Beobach-
tung ein Stadium schnell vorflbergehender Agglutination wahr-
nimmt, worauf dann sofort Hftmolyse eintritt. Oft sieht man
allerdings makroskopisch von Agglutination gar nichts und
kann nur die eingetretene Hftmolyse konstatieren.
Wenn man auch nicht ohne weiteres behaupten kann, dafi
der Agglutinationsvorgang eine Vorstufe filr die Hftmolysin-
bildung ist, so ist doch durch diese Untersuchungen die
chemisch nahe verwandte Beziehung beider Phftnomene zu-
einander, die man ja schon zum Toil frflher annahm, biologisch
sehr verstftndlich gemacht. Nicht selten konnte ich an dem-
selben mikroskopischen Prftparate gleichzeitig Phagocytose und
Agglutination beobachten und manchmal nachher noch Hftmo¬
lyse konstatieren. Ueber den feineren Mechanismus dieser
Vorgftnge sind weitere Untersuchungen im Gange.
Die Mikrophotogramme sind mit Leitz Okul. 3, Objekt 7,
Fig. 2 mit Okul. 3, Objekt. 4, Fig. 8 mit Okul. 3, Objekt. 3
hergestellt.
Zusam menfassun g.
Die Hftmagglutination stellt einen chemischen Vorgang
dar, der auf einer Verklebung der Lipoidhfllle der roten Blut-
kdrperchen beruht und bedingt ist durch die Einwirkung des
lipolytischen Fermentes der einkernigen weiBen BlutkOrperchen
und ihrer BildungsstStten, sowie des sekundftr in die Blut-
und Gewebsfltissigkeit ergossenen Fermentes.
Die Hftmagglutination ist eine spezifische AntikOrper-
bildung, und zwar wirkt das Lipoid der roten BlutkOrperchen
als Antigen, und die sich spezifisch einstellende Lipase der
einkernigen weifien BlutkOrperchen, ihrer Bildungsorgane und
der Blut- und Gewebsfltissigkeit als AntikOrper.
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T. Kumagai, Hitzebestandigkeit der gebundenen Antikorper. 269
Naehdruck verboten.
[Aus dem Pharmakologischen Institute der Universitat Berlin;
Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung fdr Im-
munit&tsforscbung und experimentelle Tberapie, Leiter: Prof. Dr.
E. Friedberger).]
Znr Frage der Hitzebestftndigkeit der gebundenen
AntikOrper.
Von Dr. T. Kumagai, Tokio.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 17. Mai 1912.)
In einer vor mehreren Jahren im Centralbl. f. Bakt.,
Bd. 45, erschienenen Arbeit berichteten Friedberger und
Pinczower fiber Versuche, denen zufolge mit Agglutinin
vollstfindig beladene Typhusbakterien auch nach dem Er-
hitzen auf 100° kein Agglutinin mehr einem Immunserum
entziehen. Auf Grund dieser Versuche kamen die Autoren
zu der Annahme, dafi eine Zerstdrung der gebundenen Anti-
kdrper, die ja die Voraussetzung einer erneuten Bindungs-
f&higkeit ist, nicht statt hat, dafi also die einmal vom Antigen
gebundenen Antikdrper thermostabil seien (natfirlich kann
sich das nur auf die haptophore Gruppe beziehen). Wfiren
sie durch die Erhitzung auf 100° ebenso zerstdrt worden, wie
das bei dem Antikdrper im freien Serum der Fall ist, so hfitten
ja danach die Bakterien mindestens in gleicher Weise wiederum
Agglutinin binden mfissen. Binden doch an sich nach den
Untersuchungen von Scheller 1 ) die auf 100° erhitzten Bak¬
terien sogar noch mehr Agglutinin als unerhitzte.
Gelegentlich einer Nachprfifung der Angaben von Fried¬
berger und Pinczower kam Bessau*) zu dem Ergebnis,
„dafi im Gegensatz zu den Angaben Friedbergers und seiner
Schiller die gebundenen Antikdrper nicht koktostabil sind“.
In Anbetracht dieses vdllig entgegengesetzten Resultats
habe ich auf Veranlassung von Herrn Prof. Friedberger und
unter seiner Leitung die frfiheren Versuche noch einmal nach-
geprfift und erweitert. Ich habe mich bei dieser Nachprfifung
vollkommen an die Methode der beiden Autoren gehalten,
und auch den gleichen, seinerzeit aus dem Pfeifferschen
1) Centralbl. f. Bakt., 1904.
2) Centralbl. f. Bakt, Bd. 60, 1911.
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270
T. Kumagai,
Institut iibernommenen und seitdem jahrelang nur auf Agar
fortgezfichteten Typhusstamm benutzt, mit dem damals Fried-
berger und Pinczower ihre Versuche angestellt hatten.
Ehe ich jedoch auf meiue eigenen Versuche eingehe,
mdchte ich zun&chst kurz die Experimente von Bessau
einer Kritik unterziehen. Sie sind im wesentlichen mit einer
anderen Bakterienart und meist in einer anderen Technik
ausgefOhrt als die von Friedberger und Pinczower
(Tabelle I-V, VIII, IX).
Von einer Nachprfifung dieser Versuche babe ich ab-
gesehen, weil die hier angewandte Methodik meines Erachtens
zur Lbsung der vorliegenden Frage nicht sehr geeignet ist.
Aus den Untersuchungen von Pfeiffer und Fried¬
berger 1 ) ist es bekannt, daB reichlich mit Ambozeptor be-
ladene Cholerabakterien, wenn sie in der Bauchhbhle des
Meerschweinchens zur Auflosung gelangen, durch die dabei
wieder freiwerdenden Ambozeptoren neu hinzugefflgte Cholera-
vibrionen aufzulosen imstande sind.
Nach Bessaus Untersuchungen (Tabelle I—V) kommt
beladenen und dann gekochten Oder auch nur auf 80° er-
hitzten Bakterien dieses Vermbgen nicht mehr zu.
Wenn auch Bessau auf Grund dieser Versuchsresultate
mit Recht den SchluB ziehen kann, „daB selbst kurzdauerndes
Kochen die Funktionstflchtigkeit der an die Bakteriensubstanzen
gebundenen Bakteriolysine vollst&ndig vernichtet“ (sc. be-
zflglich der bakteriolytischen Wirkung), so hat er damit noch
keineswegs, wie er meint, die Annahme widerlegt, „daB die
Funktionstiichtigkeit der gebundenen AntikOrper durch Hitze-
einwirkung nicht zerstbrt werde“.
Wenn wir auch heute in Uebereinstimmung mit Bail,
Bordet, sowie Friedberger u. a. die Einheitlichkeit des
Antikbrpers gegen ein bestimmtes Antigen annehmen diirfen,
so kann es doch keinem Zweifel unterliegen, und ist ja
experimentell hinl&nglich erh&rtet, daB zwischen der aggluti-
nierenden und der bakteriolytischen Funktion dieses ein-
heitlichen Antikorpers wesentliche Differenzen bestehen, die
die Befunde von Bessau in anderem Lichte erscheinen lassen.
Ffir die Agglutininbildung kommt bekanntlich nur die cyto-
1) Pfeiffer und Friedberger, Centralbl. f. Bakt., 1905.
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Zur Frage der Hitzebestandigkeit der gebundenen AntikOrper. 271
phile Gruppe des Antikflrpers in Betracht, wfihrend znr
Bakteriolyse auch die komplementophile Gruppe, um im Sinne
Ehrlichs zu spreehen, intakt sein mufi 1 ).
Wenn allein die letztere durch die Erhitzung auf 100°
zerstOrt wird, die erstere aber erhalten bleibt, so ist es ver-
st&ndlich, dafi in der BauchhOhle des Meerschweinchens von
beladenen and dann gekochten Bakterien keine funktions-
tflchtigen Ambozeptoren mehr in Freiheit gesetzt werden
konnten, wfthrend sehr wohl noch die cytophile am Bakterium
selbst haftende Gruppe erhalten sein konnte, also jene Gruppe,
die in den Agglutinationsversuchen von Friedberger und
Pinczower allein eine Rolle spielte.
Diese Versuche von Bessau zeigen also ausschliefilich,
dafi die bakteriolytische Funktion verankerter Anti¬
kOrper durch die Erhitzung zerstOrt wird. Ueber die Frage, mit
der sich die Versuche von Friedberger und Pinczower
befassen, ob dabei die vom Bakterium verankerte Gruppe
zerstOrt ist, vermOgen sie nichts auszusagen.
Der gleiche Einwand gilt gegenOber einer Reihe weiterer
Versuche von Bessau (Tabelle VIII, IX).
Im Anschlufi an die Versuche von v. Dungern, wo-
nach vollst&ndig mit AntikOrper gesftttigte BlutkOrperchen
nicht mehr Hfimolysine erzeugen und mit Agglutinin ges&ttigte
Bakterien kein Agglutinin (M. Neisser), hatte R. Pfeiffer
analoge Resultate bei vollkommen mit Ambozeptor beladenen
Gholeravibrionen erhalten. Bessau konnte nun zeigen, dafi
derartige, bis zur Ausschaltung der antigenen Qualit&t be-
ladene Choleravibrionen nach dem Kochen wieder imstande
sind, AntikOrper zu erzeugen.
Das schien zunfichst gleichfalls daffir zu spreehen, dafi durch
die Erhitzung auf 100° die verankerten AntikOrper wieder
zerstOrt sein mflssen. Doch ist dieser Schlufi nicht zwingend.
Wenn vOllig mit AntikOrper beladenes natives Eiweifi nicht mehr
antigen wirkt, so ist das auf Grund unserer heutigen Eenntnisse
in Uebereinstimmung mit Friedberger und Vallardi sowie
Pfeiffer und Bessau offenbar darauf zurfickzuffihren, dafi es
1) Dafi eine derartige Differenz zwischen agglutinierender und bakterio-
lytischer Funktion bestehen mufi, ist ja nicht Hypothese, sondern experi-
mentell erhartet.
Zeitschr. f. ImmunitStaforschunar. Orig. Bd. XIV. 19
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272
T. Kumagai,
zu schnell im Organismus zu Spaltprodukten abgebaut wird,
denen eine antikorperausldsende Fahigkeit nicht mehr zukommt.
Wenn andererseits die stark beladenen Antigeoe nach
dem Erhitzen ihre antikdrperbildende Qualitat wieder-
gewinnen, so lafit sich das dadurch erklaren, daB nur die
komplementophile Gruppe durch die Erhitzung zerstdrt worden
ist. Dann kann innerhalb des Organismus der rapide Abbau
der beladenen Antigene nicht stattfinden, und diese vermOgen,
unverfindert im Sinne von R. Pfeiffer als spezifischer
Reiz wirkend, eine spezifische Antikdrpersekretion hervor-
zurufen.
Wir kommen nunmehr zu denjenigen Tabellen des Autors,
in denen entsprechend den Versuchen von Friedberger
und Pinczower Adsorptionsversuche mitgeteilt sind
(Tabelle VI, VII).
Zunkchst wurde das Adsorptionsvermogen von mit Cholera-
immunserum beladenen Vibrionen nach der Erhitzung geprQft
(Tabelle VI).
In dieser Versuchsreihe ist die Sensibilisierung der nicht
erhitzten Bakterien, die zur Kontrolle herangezogen wurden,
nicht geniigend, so daB von den 20 zur Verfflgung stehenden
Immunitatseinheiten durch diese beladenen Bakterien
noch 16 adsorbiert wurden, wahrend sie tats&chlich ja keine
Bindungskraft mehr hatten besitzen dQrfen.
Unter diesen Umstanden besagt es nicht viel, wenn die
sensibilisierten und dann erhitzten Bakterien zwei Immuni-
tatseinheiten mehr zu verankern imstande waren, zumal
ja Scheller ein besseres Bindungsvermdgen erhitzter Bak¬
terien bewiesen hat, was Bessau allerdings bestreitet.
Ferner kann man, streng genommen, in diesem Versuch
das Bindungsvermdgen der sensibilisierten und dann erhitzten
Vibrionen nur mit dem Adsorptionsvermogen der nicht sensi¬
bilisierten erhitzten vergleichen. Hier kommt aber nur die mini¬
male Dififerenz von einer Immunitatseinheit zustande. Diese
Differenz liegt bei den Mangeln, die naturgemafi der Methode
der Auswertung im Tierversuch anhaften, wohl noch innerhalb
der Versuchsfehlergrenzen. Denn wir sehen, daB bei der Aus¬
wertung, durch die diese Dififerenz von einer Immunitatseinheit
zustande kommt, das eine Mai ein Meerschweinchen mit 0,5
Serumverdunnung (B. 916) trotz anfanglicher glatter Bakterio-
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Zur Frage der Hitzebestandigkeit der gebundenen Antikorper. 273
lyse schlieBlich doch noch einging, wobei in seinem Peritoneum
ziemlich spftrlich Vibrionen gefunden wnrden, w&hrend das
Tier mit Adsorptionssernm bei dieser Dosis noch vollstfindige
Vibriolyse gab, aber doch auch in .24 Stunden einging.
(B. 918.) Hier handelt es sich also um eine so minimale
Differenz, daB selbst der rechnerisch angenommene Unterschied
von einer Immunit&tseinheit nicht einmal aus dem Versuch
sehr deutlich erhellt. Es kdnnte sich anch um den Bruchteil
einer Immunitatseinheit gehandelt haben.
Es kommt denn auch Bessau selbst bezflglich dieser
Versuchsreihe zu dem Schlufi, daft „das Bakteriolysinebindungs-
vermogen der einzelnen Bodens&tze nicht sehr different ist“,
und „daB der schon beschriebene Versuch keine sehr in die
Augen springende Differenzen ergab“.
Unter diesen Umst&nden erscheint mir aber auch die
SchluBfolgerung, „daB zum mindesten ein Teil der gebundenen
Bakteriolysine durch die Erhitzung vollst&ndig zerstdrt worden
ist“, durch die Versuche Bessaus nicht begrflndet.
Bessau bringt dann noch eine Versuchsreihe, in der er,
mit Agglutinin arbeitend, sich an die Versuchsanordnung von
Friedberger und Pinczower hielt.
Hier war die Beladung der nicht erhitzten Bakterien mit
Agglutinin eine vollst&ndige.
Vergleicht man nun das Adsorptionsvermdgen der be-
ladenen und erhitzten Bakterien mit dem der sensibilisierten
nicht erhitzten, so ergibt sich, daB nach der Adsorption mit der
einen Quote das Serum noch bis zur Verdflnnung 1:32000,
nach der Adsorption mit der anderen aber bis 64 000 den
Agglutinintiter fflr Typhusbakterien behalten hatte. Wir haben
also scheinbar besseres Bindungsvermogen der beladenen
Bakterien nach der Erhitzung.
Wenn wir zun&chst einmal ganz davon absehen, daB erhitzte
Bakterien an sich ein besseres Bindungsvermogen zu zeigen
pflegen, so ist doch meiner Meinung nach der SchluB zu weit-
gehend, daB „das Serum, welches mit der sensibilisierten und
erhitzten Kultur behandelt worden war, die H&lfte der ur-
sprflnglichen Agglutinineinheiten eingebflBt h&tte“.
Eine derartige Berechnung erscheint bei der Ungenauig-
keit der Methode der Agglutininauswertung Qberhaupt nicht
zweckm&Big.
19*
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274
T. Kumagai,
Wir stellen die Verdflnnungen in arithmetischer Reihe
an, so dafi zwischen zwei Proben schon eine Differenz von
50 Proz. jedesmal besteht, nnd gleichwohl ist die Ablesung
nnd die Entscheidung, ob ein RShrchen noch agglutiniert ist
Oder nicht, nnter UmstSnden schwierig.
Das zeigt, daB es nicht ang&ngig ist, auf Grand einer
zahlenmBBigen Berecbnung zu schlieBen, daB prinzipielle
Differenzen von 50 Proz. in dem Bindungsvermbgen bestehen,
weil mit sensibilisierten nicht erhitzten Bakterien die Aggluti¬
nation bis zum 6. Rohrchen, mit nicht sensibilisierten erhitzten
nur bis zum 5. Rdhrchen positiv war.
Wenn durch das Erhitzen die gebundenen Antikdrper
zerstdrt worden w&ren, so h&tten die beladenen gekochten
Bakterien nachher etwa soviel Agglutinin entziehen mfissen
wie native gekochte, sicher aber viel mehr Agglutinin als
die nicht gekochten. Die Differenz ist aber bei Bessau nur
eine minimale.
Wenn somit auch durch die VersucheBessaus die ftlteren
Befunde von Friedberger und Pinczower nicht erschfittert
werden, so folgte ich gleichwohl gerne der Aufforderung von
Herrn Prof. Friedberger, nochmals, mich streng an die
frtlhere Versuchsanordnung haltend, in einer grbfieren Zahl von
Versuchsreihen die Angaben Bessaus einer NachprQfung zu
unterziehen.
Zun&chst gait es allerdings, eine Nachprflfung der Angabe
von Bessau vorzunehmen, wonach erhitzte Bakterien an sich
weniger Agglutinin entziehen als unerhitzte, ein Verhalten, durch
das nach Bessau „die an sich ja nicht sehr groBe Differenz 44
in den vorerwShnten Versuchen „sehr bedeutungsvoll 44 wird.
Diese Angaben Bessaus stehen im Gegensatz zu den
Untersuchungen von R. Scheller, der bereits im Jahre 1904
in eingebenden Untersuchungsreihen dargetan hat, dafi eine
solche Differenz zwischen erhitzten und unerhitzten Bakterien
nicht existiert. Wir selbst kommen bei einer Nachprllfung im
Gegensatz zu Bessau zu einer Best&tigung der Scheller-
schen Angaben, zum mindesten insoweit als bei uns die auf
100 0 erhitzten Bakterien das Agglutinin sicher nicht schlechter
banden als frische.
Als Beispiel fOr eine Reihe gleichverlaufener Versuche
fflhren wir den folgenden an:
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Zur Frage der Hitzebestandigkeit der gebundenen Antikorper. 275
Eine 24-stiindige gut gewachsene Agarkultur von Typhus Gieflen
wird in physiologischer Kochsalzlosung aufgeschwemmt; die Emulsion wird
in zwei gleiche Teile geteilt, jeder einmal mit reichlicher Menge physio¬
logischer Kochsalzlosung gewaschen. Die eine Halfte wird */ 4 Stunde lang im
of fenen Eeagenzglas gekocht, dann werden beide Halften zentrifugiert und
der gekochte (A) und ungekochte (B) Bodensatz mit je 5 ccm der Ver-
diinnung 1:25 eines gut agglutinierenden Pferdeserums versetzt. 1 Stunde
bei 37°; Zentrifugieren, Auswertung der Abgusae auf ihren Agglutiningehalt
Zur Kontrolle wurde auch das nicht vorher mit Bakterien in Kontakt
gewesene native Serum ausgewertet (C).
A
B
C (frisches Serum)
7„
+
+
+ + +
1,
'50
±
+
+ + +
7,00
+ +
+ +
+ + +
7,00
+ +
+ + +
+ + +
\u 00
+ + +
+ + +
+ + +
^800
+ + +
+ + +
+ + +
1/
1800
+ +
+ +
+ + +
/s?oo
+
+
+ + +
1/
6400
—
—
+ +
/1*800
—
*-
+
/ 9B600 1
1 -
—
—
Analog verlief der folgende Versuch:
2. XII. Versuchsanordnung wie oben.
Nut wurde der gekochte bzw. ungekochte Bodensatz mit 5 ccm einer
Verdiinnung 1:100 veraetzt.
A
B
C (frisches Serum)
7,00
+
+
+++
7,00
—
—
+++
7,00
—
—
+++
v
i / 800
—
—
+++
J 1800
—
—
+++
V 8200
—
—
+++
J* 400
—
- |
i ++
/12800
—
- |
+
Jw oo
—
—
—
/utoo
—
- 1
—
Aus diesen Versuchen ergibt sich unzweideutig in Ueber-
einstiramung mit frQberen Versuchen von Scheller und
anderen Autoren die Tatsache, daB auf 100 0 erhitzte Bakterien
zum mindesten ebensogut wie frische bzw. auf 60° erhitzte
Agglutinin verankern.
Nach Entscheidung dieser Frage bin ich dann an die
Frage herangetreten, inwieweit mit Typhusagglutinin voll-
st&ndig beladene Bakterien nach dem Kochen noch imstande
sind, einem Serum Agglutinin zn entziehen.
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276
T. Kumagai,
Wenn eine ZerstOrung der gebundenen Agglutinine durch
die Erhitzung auf 100° statt hfitte, so mQBten derartige Bak-
terien nachher das Agglutinin ebensogut dem Serum entziehen
wie unsere nativen gekochten, deren Bindungsf&higkeit for Ag¬
glutinin in den vorstehenden Versuchen ja erneut dargetan ist
Die Versuchsanordnung war in Anlebnung an die von
Friedberger und Pinczower in alien Versuchen die
gleiche.
Die Emte von zwei gut gew&chsenen Agarrohrchen dee Typhus GieSen
wurde in 6 ccm Kochsalzlbsung aufgeschwemmt, bei 60 0 abgetotet, einmal
gewaschen.
Der Bodensatz wurde in 2 gleiche Halften geteilt, die eine Halfte A
wurde mit verdunntem Typhuspferdeimmunserum so lange beladen, bis alle
Affinitaten gesattigt waren, d. h. diese Aufschwemmung, nach dem Waschen
zu verdunntem Typhusimmunserum zugesetzt, diesem kein Agglutinin mehr
entzog.
Die Beladung gelingt, wie auch Bessau fflr die Cholera
angibt, nicht ganz leicht Wir mufiten zum Teil bis zu llmal
hintereinander mit dem 1—50 bzw. 1—100 verdttnnten Serum
die Bakterien ausf&llen (jedesmal 1 Stunde im Brutschrank),
urn sie soweit zu s&ttigen, daB sie dem Immunserum keine
nachweisbaren Spuren von Agglutinin mehr entzogen.
Die zweite Kontrollquote der Bakterien (B) wurde in einem Teil der
Versuche den gleichen Prozeduren unterworfen l ), jedoch nicht unter Ver-
Wendung von ImmunBerum, sondern unter Verwendung physiologischer
Kochsalzlbsung.
Nachdem in der Quote A die Beladung vollendet war, wurden nun
beide Halften ‘/« Stunde lang im siedenden Wasser in offenen Reagenz-
glasern gekocht.
Dann wurde zentrifugiert und beide Bodensatze mit gleichen Mengen
verdunntem Typhusimmunserum versetzt. 1 Stunde 37°; Zentrifugieren,
Auswertung der Abgiisse auf ihren Agglutiningehalt, mit frischen Typhus-
bakterien.
Zur Kontrolle wurde wiederum das Serum in entsprechender Ver-
diinnung allein ausgewertet (C).
Nach den Versuchen von Friedberger und Pinczower
und meinen vorausgegangenen war zu erwarten, daB die ge¬
kochten nativen Bakterien das Agglutinin vollstSndig entziehen,
die gekochten beladenen aber nichts oder hSchstens nur sehr
geringe Mengen, so daB das Serum nach dem Abzentrifugieren
etwa seinen ursprflnglichen Titer bewahrt hatte. Wenn dagegen
1) In anderen Versuchen nicht, um eine eventuelle Fehlerquelle durch
Bakterienverlifst zu vermeiden.
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Zur Frage der Hitzebestandigkeit der gebundenen Antikorper. 277
die verankerten Agglutinine durch das Kochen, wie Bessau
annimmt, zerstSrt worden wftren, so batten die beladenen Bak-
terien ebensogut alles Agglutinin entziehen mflssen, wie die
nativen gekochten. Das ist nun keineswegs der Fall. Viel-
mehr sehen wir aus den nachstehenden Tabellen,
daB der Abgufi von den gekochten nativen Bak-
terien Oberhaupt nicht mehr Oder hdchstens in
einzelnen Versuchen bis zu 100 bzw. 200 aggluti-
nierte, wfihrend die gekochten und beladenen
Bakterien noch Agglutination bis 6400 bzw. 8000
zeigten.
1. Versuch.
2 AgarrShrchen von 24-etiindiger gut gewachsener Typhuskultur
wurden in 6 ccm physiol ogischer NaCl-Losung aufgeschwemmt, durch Er-
hitzen bei 60° im Wasserbad abgetdtet, in gleiche Teile geteilt (A und B).
A wurde 7mal mit 5 ccm des 1:50 verdiinnten agglutinierenden Serums
beladen. Dann wurde veraucht, ob eine viillige Absattigung aller Bezeptoren
erfolgt ist. Zu dem Zweck werden 5 ccm des 1:100 verdiinnten Serums
mit A-Bacillen versetzt, nach 1-stiindigem Aufenthalt im Brutofen abzentri-
fugiert. Der Abgufi wird auf semen Agglutiningehalt im Vergleich mit
frischem Serum gepriift.
Verdiinnung
Mit A-Bacillen
behandeltes Serum
Frisches Serum
VftO.
+
+
VlOOO
+++
+ + +
V 2000
+++
+ + +
J 4 QQO
+++
+ + +
Vsooo
++
+ +
J 1BOOO
+
+
J S2000
—
— •
1 /«4000
—
Die Absattigung ist also vollstandig.
A und B werden nun abzentrifugiert und lmal gewaschen. Beide
im kochenden Wasser 15 Minuten lang gekocht. Abzentrifugiert; zu den
Bodensiitzen je 5 ccm 1:100 verdiinnten SerumB. 1 Stunde im Brutschrank,
zentrifugiert, Abgusse austitriert.
Verdiinnung
A
B
Frisches Serum
7,00
+
+
+
7,00
+ +
—
+ 4-
1/
/ soo
+ + +
—
+++
1/
/1600
+ + +
—
1 +++
1/
/ 3200
±
—
! +
1/
' A400
—
—
+
1/
i 'l5S00
—
—
+
V 2 B 6 OO
—
—
1 -
/ 61200
—
—
—
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278
T. Kumagai,
2. Vereuch.
Verfahren wie beim 1. Vereuch. Mit 5 ccm dee 1:100 verdiinnten
Serums llmal beladen. Sattigung vollstandig (A). Nach 15 Minuten
Aufenthalt in kochendem Wasser wurden A und B mit 4 ccm dee 1:100
Terdiinnten agglutinierenden Serums vereetzt. Nach l-atiindigem Aufenthalt
bei 37° abzentrifugiert; die Abgiisse auf ihren Agglutiningehalt gepriift
Verdiinnung
A
B
C (natives Serum)
1/
/ 500
+ + +
_
+++
1/
l{ l0##
/ 9000
+ -I- +
—
+++
++
—
+++
1/
J 4000
+
—
++
/rooo
—
+
1/
i /lF>00
—
—
+
Jatoo
—
—
—
JdiOO
—
1 19800
—
—
3. Vereuch.
Verfahren wie bei den iibrigen Vereuchen. Nur geringere Bakterien-
menge. Agarkultur in 2 gleiche TeUe geteilt 8malige Beladung mit je
10 ccm des 1:100 verdiinnten Serums (A). Sattigung vollstandig. Waschen,
Kochen der Quote A und B. Beide mit 5 ccm des 1:100 verdiinnten
agglutinierenden Serums vereetzt. Gewinnung der Abgiisse wie oben. Aus-
titrierung der Abgiisse.
Verdiinnung
A
B
C (frischee Serum)
7,00
+
+
+ +
7,00
+ + +
+
+ + +
7,0.
+ + +
—
+ + +
V «00
1 /
/1000
+ + +
—
+ + +
+ +
—
+ + +
1/
/ 8200
+
|
+ +
1 /
.'♦>400
±
+
* 1
^12*00
—
—
+
/sr>r>oo
V 51200
.
'
Das ist unverst&ndlich unter der Annahme einer Zer-
stdrung der gebundenen Agglutinine durch die Erhitzung.
Allerdings entziehen die erhitzten beladenen Bakterien immer
noch geringe Mengen von Agglutinin, denn das native Serum
wirkt an sich starker agglutinierend als der AbguB von den
gekochten beladenen Bakterien.
Wir mochten das darauf zurtickfQhren, daB bei der Prozedur
des Waschens und Kochens vielleicht ein Teil der gebundenen
Agglutinine wieder dissoziiert. Eine partielle ZerstOrung
der gebundenen Agglutinine scheint uns aber ausgeschlossen.
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Zur Frage der Hitzebestandigkeit der gebundenen Antikfirper. 279
Wenn diese nach der Bindung nicht hitzebest&ndig w&ren, so
rnttfiten ja bei dem langdauernden Kochen alle Agglutinine
zerstdrt werden und die gekochten beladenen Bakterien das
Agglutinin ebensogut entziehen wie die gekochten unbeladenen.
Meine Versuche ftlhren also in Uebereinstimmung
mit denen von Friedberger und Pinczower zu dem
Schlufi, dafi, w&hrend gekochte Bakterien das
Agglutinin einemSerum vdllig zu entziehen ver-
mdgen, beladenen und gekochten Bakterien diese
Ffihigkeit im wesentlichen abgeht.
Das ist am einfachsten wohl mit einer Thermoresistenz
der einmal verankerten Agglutinine (im Gegensatz zu freien)
im Sinne von Friedberger und Pinczower zu erklfiren.
Soweit Bessau entsprechende Versuche angestellt hat,
fOhren sie in ihren Ergebnissen zu demselben Resultat, doch
gibt er ihnen eine meines Erachtens unrichtige Deutung.
Friedberger hat nun auch per analogiam und nach den
obigen Versuchen wohl zu Recht, die Therm ostabilit&t der ver¬
ankerten Pr&zipitine angenommen und damit vor 2 Jahren x ) die
Tatsache erkl&rt, dafi auch aus gekochten Prfizipitaten durch
Komplement Anaphylatoxin abgespalten wird; nachdem dieser
Autor aber bald darauf selbst gezeigt hat 2 ), dafi aus nativem
gekochten Eiweifi auch durch Komplement schon allein die
Anaphylatoxinbildung gelingt, braucht die Thermostabilit&t, die
ja den verankerten Pr&zipitinen ebenso zukommen dfirfte wie
den Agglutininen, nicht als Grundbedingung ffir die Giftbildung
unter diesen VerhSltnissen angenommen werden.
Zusammenfassung.
Es wird gezeigt, dafi entsprechend der Angabe Fried -
bergers und Pinczowers und im Gegensatz zu der An-
nahme Bessaus beladene und dann gekochte Bakterien nicht
von neuem ebenso wie einfach gekochte einem Serum Agglu¬
tinin entziehen. Das spricht im Sinne der beiden
Autoren fttr eine Koktostabilitfit der verankerten
Agglutinine.
1) Diese Zeitschr., Bd. 7, 1910, Heft 6.
2) Diese Zeitschr., Bd. 8, 1910, Heft 2.
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280
Georg Joachimoglu,
Nachdruck verboten.
[Aus dem Pbarmakologischen Institut der Universitftt Berlin;
Direktor: Gebeimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung ftir Im-
munitktaforscbung und experimentelle Therapie, Leiter: Prof.
Dr. E. Friedberger).]
Ueber Anaphylaxle.
XXVIII. Mitteilung.
Weiteres Ober Anaphylatoxinbildung aus Bakterien von pepton-
freien Nahrboden, zugleich ein Beitrag zur Frage der quantitativen
Verh<nisse bei der Giftbildung.
Von Dr. Georg Joachimoglu.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 17. Mai 1912.)
In einer frflheren Arbeit aus unserem Institut zeigte
Lurk 1 ), daB im Gegensatz zu der Behauptung von Besredka
und S tr 0 b e 1 *) die Anaphylatoxinbildung aus Bakterien gelingt,
die auf peptonfreien Nahrbbden gewachsen sind 3 ). Damit ist
die Annahme widerlegt, daB die Quelle des Friedberger-
schen Anaphylatoxins das Pepton des N&hrbodens ist. Das
ergibt sich, wie Friedberger hervorgehoben hat, ohne
weiteres aus den Versuchen mit Szymanowski 4 ), in denen
es gelang, Anaphylatoxin aus Trypanosomen abzuspalten, die
im Tierorganismus gewachsen sind, und ebenso aus den ent-
sprechenden Versuchen Mar cor as 5 ).
Eine der Bakterienspecies, aus der die Anaphylatoxin¬
bildung besonders leicht und regelmkBig gelingt, ist der
Tuberkelbacillus. Hier haben zuerst Friedberger und
Goldschmid 6 ) das Gift dargestellt. Bei der Bedeutung, die
dieser Tatsache fttr das Verstandnis des Wesens der Tuber-
kulose zugeschrieben werden muB, schien es von Interesse,
auch beim Tuberkelbacillus die Versuche der Giftabspaltung
1) Lurk, diese Zeitsehr., Bd. 13.
2) Besredka und Strobel, Compt. rend. Soc. de Biol., 1912.
3) Anmerkung bei der Korrektur: Dieser Befund ist inzwischen durch
Boehncke (Zeitsehr. f. Hyg.) bestiitigt.
4) Friedberger und Szymanowski, diese Zeitsehr., Bd. 9, 1911.
5) Marcora, ibid., 1912.
6) Friedberger, Berl. klin. Woehensehr., 1910; Friedberger und
Goldschmid, diese Zeitsehr., Bd. 9, 1911.
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Weiteres iiber Anaphylatoxinbildung aus Bakterien etc. 281
mit Kulturen zu wiederholen, die auf peptonfreien N&hrboden
gewachsen sind. Dazu veranlaBte mich noch ein anderer Beweg-
grund. Bekanntlich werden alle Immunitatsreaktionen wie
auch Fermentreaktionen gehemmt, wenn ein UebersclmB des
anzngreifenden Substrata vorhanden ist. So gelang Fried-
berg e r und V a 11 a r d i x ) die Giftabspaltung aus EiweiB nicht,
wenn ein UeberschuB des Antigens vorlag. Das gleiche Ver-
halten kehrt in alien Arbeiten unseres Instituts fiber Anaphyla-
toxinbildung wieder. Besonders auffallend tritt das zutage
bei den Versuchen von Friedberger und Girgolaff 2 ),
in denen in einem vdllig homogenen getrockneten Material
in zahlreichen Versuchen flbereinstimmende Resultate erzielt
wurden. In einer frfiheren Arbeit von Friedberger und
A. Schfitze 8 ) war das gleiche Verhalten in ein und der-
selben Versuchsreihe erkannt. Nicht so deutlich, bei der
Vergleichung der verschiedenen Versuchsreihen untereinander,
weil damals nicht trockene, sondern mehr oder weniger feuchte
Bakterien (Ernte von Bouillonkulturen) verschiedenen Alters
verwendet wurden und die hohe Bedeutung der Homogeni-
sierung, auf die Friedberger und Girgolaff groBes Ge-
wicht legteu, noch nicht erkannt war.
Aronson 4 ) erhob nun gegenfiber den Versuchen von
Friedberger und Girgolaff den Einwand, dafi die schein-
bare Gesetzmfifligkeit der Resultate darauf beruhe, daB das
Klimmersche Material, mit dem Friedberger und Gir¬
golaff gearbeitet hatten, mit fremden Beimengungen verun-
reinigt war. Er grfindet diese Behauptung auf zwei Be-
obachtungen. Erstens sollen sich bei den Klimmerschen
Bacillen im geffirbten PrSparat betrfichtliche Mengen nicht
sfiurefester Partikelchen finden, die er ffir Agar hfilt. Zweitens
soil sich die Tatsache der Verunreinigung auch darin kennt-
lich machen, daB das Prfiparat der Klimmerbacillen makro-
skopisch hellrot aussieht, wfihrend Tuberkelbacillen dunkelrot
erscheinen sollen. Was das letzte anbelangt, so ist ja die
Tatsache, daB verschiedene Rassen von Tuberkelbacillen ver-
1) Friedberger und Vallardi, diese Zeitschr., Bd. 7.
2) Friedberger und Girgolaff, diese Zeitschr., Bd. 11, 1911.
3) Friedberger und Schiitze, Berl. klin. Wochenschr., 1911, und
diese Zeitschr., Bd. 9, 1911.
4) Aronson, Berl. klin. Wochenschr., 1912.
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282
Georg Joachimoglu,
schiedene S&urefestigkeit besitzen, den Bakteriologen hinl&ng-
lich bekannt. Auch der Einwand, daft die K1 i m m e r - Bacillen
mit fremden Beiraengungen verunreinigt sind, die vom Agar
stammen sollen, ist unschwer zu widerlegen. Nach einer Mit-
teilung, die wir der Freundlichkeit des Herrn Prof. Klimmer
selbst verdanken, ist sein Material flberhaupt nicht von Agar*,
sondern von Bouillonoberfl&chenkulturen gewonnen and nach-
tr&glich noch mit Wasser gewaschen. Und tats&chlich babe ich
dementsprechend in zahlreichen Pr¶ten bei Verwendung
von sorgfaltig gereinigten Objekttrflgern and DeckglSschen und
klarer Methylenblauldsung eine derartige Verunreinigung des
Materials 1 ), wie sie Aronson schildert, nicht gesehen. Ganz
vereinzelt sieht man hie und da blau gef&rbte SchQppchen und
Wolken, wie sie nach Robert Koch beim Zerreiben von
Tuberkelbacillen regelm&fiig auftreten und wie dieser sie ja
bereits ira Jahre 1897 ausfhhrlich beschrieben hat.
Diese Gebilde hat natttrlich auch Aronson gesehen und
sie f&lschlicherweise far Verunreinigungen gehalten.
Die Einwendungen von Besredka sowohl wie von
Aronson veranlaBten Herrn Prof. Friedberger, mich
die Versuche noch einmal mit einem anderen, und zwar von
peptonfreien N&hrboden stammenden Tuberkelbacillenmaterial
wiederholen zu lassen. Ich benutzte die mir in dankens-
werter Weise seitens der Hbchster Farbwerke zur Verfflgung
gestellten Tuberkelbacillenrflckst&nde, die bei der Gewinnung
des albumosefreien Tuberkulins erhalten werden. Es handelt
sich also hier um Material, welches, auf peptonfreien Nfthr-
bdden gewachsen, im Sinne von Besredka kein Peptotoxin
liefern durfte, und andererseits durfte man annehmen, dafi
das Material auch von fremden EiweiBbeimengungen, welche
aus den Nahrbdden stammend irgendwie die Resultate be-
einflussen kdnnten, frei war. Ich hielt mich bei meinen Ver-
suchen genau an die Versuchsanordnung von Friedberger
und Girgolaff. Auf die Herstellung der mit dem Normal-
meerschweinchenserum zu versetzenden Bakteriensuspension
wurde die von diesen Autoren empfohlene Vorsicht angewandt,
ohne die gleichmaBige Resultate nicht zu erhalten sind.
1) Es sind dieselben Bacillen, die auch von Friedberger und
Girgolaff benutzt worden waren.
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Weiteres iiber Anaphylatoxinbildung aus Bakterien etc. 283
Es wurden abgewogene Mengen der Bakterien im Achatmoreer aufs
sorgfaltigste verrieben und dann tropfenweise mit physiologischer Kochsalz-
losung versetzt, bis eine vollkommen homogene Suspension entstanden
war. Diese Suspension wurde noch langere Zeit (2 Stunden) bei Zimmer-
temperatur im Schiittelapparat geschiitteit. Von diesem vbllig gleichmaftig
suspendierten Material wurden dann aliquote Teile mit je 4,0 ccm Normal-
meerachweinchenserum versetzt, 1 Stunde bei 37 0 und dann 12 8tunden im
Eisschrank aufbewahrt. Dann wurde zentrifugiert und die Abgiisse auf
ihren Gehalt an Anaphylatoxin bei normalen Meerschweinchen ausgewertet.
No.
Bakterien-
menge
Kom-
plement
No. des
Tieres
Gewicht
Krankheitsverlauf
19. XU. 1912.
1
0,5
4,0
11
190
Bleibt gesund
2
0,1
4,0
12
190
Schw. Anaphylaxie. Tod in 4'
26. I
11. 1912.
3
0,7
4,0
13
200
Bleibt gesund
4
0,07
4,0
14
200
Anaphylaxie. Tod in 5'
23. IIL 1912.
5
0,5
4,0
15
210
Bleibt gesund
6
0,25
4,0
16
200
dgl.
7
0,1
4,0
17
190
Anaphylaxie. Tod in 4'
8
0,05
4,0
18
210
dgl.
27. III. 1912.
9
0,05
4,0
19
190
Anaphylaxie. Tod in 6'
10
0,01
4,0
20
190
Bleibt gesund
11
0,005
4,0
21
190
dgl.
12
0,001
4,0
22
195
Uebereinstimmend in alien Versuchsreihen
sehen wir, daB bei einem UeberschuB von Bak¬
terien die Giftbildung ausbleibt. Wir haben bei
den auf albumosefreien Nahrbbden gewachsenen
Tuberkelbacillen genau dieselben Verhaituisse,
wie sie in unserem Institut bei anderen Tuberkel¬
bacillen vonFriedberger mit Goldschmid, Schfitze
undGirgolaff und bei alien anderen untersuchten
Mikroorganismen aufgedeckt worden sind. Wenn
Aronson schreibt (Berl.klin. Wochenschr., 1912, No.6): „Was
die Mengenverh<nisse anlangt, die zur Darstellung eines wirk-
samen Anaphylatoxins nbtig sind, so mull ich auf Grund sehr
zahlreicher Versuche daran festhalten, daB eine obere Grenz-
dosis bei der Anwendung von Bakterien nicht existiert“, so
zeigen die heutigen Versuche erneut, daB diese Angaben un-
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284 C. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
zutreffend sind und nur auf ungenQgender Variierung der
quantitativen Versuchsbedingungen beruhen kCnnen.
Zusammenfassung.
£s wird gezeigt, daB im Gegensatz zu Besredka and
StrObel und in Uebereinstimmung mit den bei anderen Bak-
terien in unserem Institut gewonnenen Resultaten auch Tuberkel-
bacillen, die auf albumosefreien NShrboden gewachsen sind,
Anaphylatoxin bilden. Zugleich best&tigen diese Versucbe
wieder die von Aronson bestrittene Tatsache, daB groBere
Antigenmengen fflr die Anaphvlatoxinabspaltnng hinderlich sind.
Nackdruck verboten.
[From the Pathological Laboratories of the University and
Western Infirmary, Glasgow, and of Gartloch Asylum.]
The Lecithin Fractions of Yarions Organ Extracts:
their Action as Syphilitic Antigens and as Cobra-Venom
Haemolysins in Relation to their Iodine Yalnes 1 ).
By
Carl H. Browning, M. D., John Cruickshank, M. B., Ch. B.,
and
Walter Gilmour, M. B., Ch. B.
(Eingegangen bei der Redaktion am 17. Mai 1912.)
Since the discovery of the action of alcoholic tissue ex¬
tracts in causing deviation of complement in the presence of
sera from cases of syphilis (as well as yaws and tubercular
leprosy) a considerable amount of attention has been paid to
the nature of the bodies extractable by alcohol from animal
tissues. In particular, the ether-soluble acetone-insoluble or
“lecithin” fraction has been investigated. The results have
shown that the complement-deviating power of the original
extract is considerably greater than that of the lecithin or
other components obtained from it. Interest in bodies of the
lecithin type has, however, been stimulated especially in their
relation to the Wassermann syphilis reaction. Chemically
1) We have much pleasure in acknowledging our indebtedness to the
Carnegie Trust for a grant toward the expenses of this research.
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The Lecithin Fractions of Various Organ Extracts etc. 285
considered, lecithin is a fatty body containing nitrogen, phos¬
phorus and fatty acids — a phospholipine (Leathes, 8). From
its cleavage products it is generally regarded as derived from
glycero-phosphoric acid by the substitution of the three hy¬
droxyl-groups by two radicles of fatty acid and one of choline
(hydroxyl-ethyl-trimethyl-ammonium hydroxide). The constitu¬
tion would thus be represented by the formula
CH,OR
I
CH • 0 • R,
CH.-0
\t><^
O
CH,
Oil \>C,H 4 —N^H,
/ CH,
OH
where R and R 1 stand for radicles of higher fatty acids.
Various acid radicles may be present, and the existence of
double carbon bonds (non-saturation) in these radicles may
be measured by estimating the affinity of the compound for
iodine (“Iodine Value”). The estimation of the iodine value
has led to the conclusion (Erlandsen, 4) that fatty acids
belonging to groups of more unsaturated type than oleic acid
are probably present in “lecithin”. Another variable compo¬
nent probably is the basic radicle. Thus according to
Maclean (9) the amount of choline obtained from lecithin
accounts for only a small amount of the total nitrogen present.
In this connection, however, it has been pointed out by
v. Ffirth (5) that cholin is very readily decomposed by che¬
mical procedures. Considerable variation therefore may exist
in bodies of the lecithin type, but the close similarity of their
physical properties renders their separation by chemical
methods extremely difficult. Under these circumstances the
results obtained by bio-chemical investigation are likely to
prove of importance. Moore (11) showed that the haemo¬
lytic activity of fatty acids was directly proportional to the
degree of unsaturation. In the case of lecithin, however, it
is impossible to say whether the haemolytic power can be
taken as an indication of the degree of unsaturation of the
acid radicles contained in it. The so called “Cobra-lecithid”
which is probably the most actively haemolytic phospholipine
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286 C. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
known (Kyes 7, Man waring 10) is stated to be a lecithin
containing only one fatty acid radicle 1 ).
Browning, Cruickshank and McKenzie (2) have
shown that by a special method of extraction invoking the
use of ethyl acetate, and repeated precipitation with acetone
from ethereal solution, a lecithin can be obtained from fresh
ox’s liver which is practically constantly non-haemolytic, has
no anticomplementary effect and which when used in con*
junction with cholesterin forms a most delicate and reliable
“antigen” for the detection of syphilitic sera. By way of con¬
trol the haemolytic action of lecithin along with cobra venom
was always examined. In the process of preparation of lecithin
by this method fractions were obtained which were soluble in
cold ethyl acetate and in acetone; these were also tested. The
portion soluble in cold ethyl acetate was more lytic than the
lecithin, distinctly anticomplementary and inefficient in the
Wassermann reaction (obviously this fraction corresponds
in composition fairly closely with the “acetone soluble” portion
investigated later by Noguchi and Bronfenbrenner, 13).
These workers examined the acetone-soluble and acetone-
insoluble fractions of alcoholic extracts of organs in various
pathological conditions with reference to 1) value as antigen
in the syphilis reaction, 2) haemolytic activity, 3) power of
inhibiting complement and 4) iodine-value. Their results
showed that the acetone-insoluble or lecithin portion was
usually non-haemolytic, frequently anticomplementary and more
highly antigenic than the other fractions, and that a high
antigenic value was generally associated with a high iodine-
value in the case of the lipoids obtained from the liver and
heart, but not in the case of those from the brain. The
acetone-soluble fraction (containing the fatty acids, cholesterin,
neutral fats etc.) in confirmation of the results obtained by
Browning, Cruickshank and McKenzie (2) was acti¬
vely haemolytic, anticomplementary and inefficient as antigen
in the syphilis reaction. The lecithins from fatty livers showed
the lowest antigenic value. Wilson (16) has separated the
1) An investigation of the iodine values of bodies of the type of
cobra-lecithid is in progress.
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The I wi thin Fractions of Various Organ Extracts etc. 287
lipoids of dried fresh pig’s liver by extracting successively
with ether, cold and hot alcohol The acetone - insoluble
fraction of the ethereal extract yielded the most suitable antigen;
the cold and hot alcoholic extracts yielded substances differing
from each other and from the ethereal extract in physical and
biochemical properties. These differences apparently did not
depend on the iodine or saponification values.
In the following paper the results are given of the exa¬
mination of a number of lecithins from different sources. The
lecithins have all been prepared from the fresh normal tissues
of adult animals according to a uniform method slightly
modified from that described by Browning, Cruickshank
and McKenzie.
The crude extract obtained by macerating the minced tissues with
alcohol (1 part of tissue to 4 parts of 95 per cent, alcohol) for 7 or 10 days
at room temperature, was evaporated on the water bath at 60° C, this
operation lasting about 5 hours. The residue was then rubbed up with
quartz sand (previously washed with water and dried) and extracted with
ethyl acetate at 60 0 C for 10 or 15 minutes. The solution in ethyl acetate
was placed in the ice-chest and the precipitate which formed was removed
and redissolved in ethyl acetate. This was again allowed to precipitate in
the ice-chest. These processes were repeated till the supernatant fluid was
colourless (usually three times was sufficient). The ultimate precipitate was
dissolved in water-free ether and the solution precipitated with excess of
acetone, the treatment with ether and acetone being repeated three times.
Finally the acetone precipitate was pressed in a mortar in order to get rid
of fluid, rapidly rubbed up with quartz sand and the mass treated with
absolute alcohol at room temperature. The portion soluble in alcohol con¬
stituted the lecithin. The strength of the solution was determined by
evaporating a measured quantity and weighing the residue. A 0.75 per
cent, solution was usually prepared.
All the lecithins have been tested for 1) effect as antigen
in the Wassermann syphilis reaction, 2) haemolytic action
along with cobra venom, 3) degree of saturation as tested by
the iodine-value.
In the performance of the Wassermann reaction the
method employed has been that described by Browning,
Cruickshank and Me Kenzie (2), v. also Browning and
McKenzie (3). This consists in testing the action of the
lecithin in causing absorption of complement (fresh guinea-
Zettschr. f. Immunitatsforschung. Ortg. Bd. XIV. 20
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288 C. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
pig’s serum 18 hours after withdrawal) in the presence of
syphilitic serum (previously heated at 55 0 C for half an hour)
and the effect of the addition of cholesterin (1 per cent,
cholesterin in the alcoholic lecithin solution) in increasing the
amount of complement absorbed. The presence of cholesterin
in the mixture of serum with lecithin emulsion leads to an
increase in the amount of complement absorbed when the
serum is syphilitic. The delicacy and reliability of lecithin
and lecithin - cholesterin as reagents for the detection of
syphilitic infection has been substantiated by Gilmour (6)
and by Muirhead (12) and the experience of two years in
the employment of this method for routine purposes of
diagnosis has fully confirmed the original estimate of its
value.
The lecithin has been employed in the form of an emul¬
sion with salt solution (1 part of alcoholic lecithin to 7 parts
of 0.85 per cent. NaCl-solution) this being made as turbid as
possible by floating the alcoholic solution on to the surface of
the salt solution in a test tube and mixing by slow rotation of
the tube. The importance of the turbidity of lipoidal emulsions in
determining the amount of complement absorbed has been shown
by Sachs and Rond on i (15) for the crude extract, and by
Browning and Cruickshank (1) in the case of lecithin-
cholesterin mixtures. A rapidly made emulsion deviates less
complement than a slowly made, more turbid one. In all the
experiments, therefore, with a view to comparing the action
of different lecithins, only the most turbid emulsions of each
have been employed.
A large number of preliminary experiments have been
carried out to test the effect of varying the amounts of leci¬
thin and of alcohol in the emulsions. As regards varying the
quantity of lecithin, the alcohol being kept constant, it was
found that only a very small amount of lecithin was necessary
to produce a positive Wassermann reaction in the presence
of syphilitic serum. In general, increased amounts of lecithin
produced increased absorption of complement with positive
sera (v. table I). Occasionally, a slight zone effect was found
(v. table II), that is, an increase in the amount of lecithin
beyond a certain optimum quantity, caused the absorption of
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The Lecithin Fractions of Various Organ Extracts etc.
289
Table I.
8yphilitic Serum 0.05
c. c. + Turbid Emulsion
Amounts of Guinea-pig’s Complement
of Ox-liver Lecithin
0.6 c.c.
0.09 c. c.
0.12 c. c.
0.15 c. c.
0.18 c. c.
0.24 c.c.
Weak
Lecithin 0.6
per cent.
Very
Faint
Trace
Marked
Very
Marked
Complete
Complete
Positive
Serum
Lecithin 0.2
per cent.
Trace
Very
Marked
Complete
Complete
Complete
Lecithin 0.06
per cent.
Distinct
Almost
Complete
Complete
Complete
Complete
Lecithin 0.6
per cent.
0
0
0
Faint
Trace
Almost
Complete
Strong
Positive ■
Serum
Lecithin 0 2
per cent.
0
Very
Faint
Trace
Distinct
Marked
Complete
Lecithin 0.06
per cent
Trace
Very
Marked
Complete
Complete
Complete
Controls: All emulsions 0.6 c. c. + Compl. 0.04 c. c. = Just Complete Lysis.
Sera 0.05 c. c. + Salt Solution 0.6 c. c. + Complement 0.035 c. c.
= Complete Lysis.
Dose of Complement = 0,01 c. c.
In this and the following tables the amount of lysis of 1 c. c. of
5 per cent, suspension of washed ox-blood sensitized with 5 doses of immune
body from the rabbit is indicated.
Table II.
Syphilitic Serum
0.05 c. c. + Emulsion
0.6 c. c.
Amounts of Guinea-pig’s Complement
_&_
0.08 c. c.
0.12 c. c. |
0.17 c.c.
0.24 c. c.
0.36 c.c.
Ox-liver lecithin 0.75
per cent.
0
1
i
0
Very
Faint
Trace
Almost
Complete
Complete
Ox-liver lecithin 0.25
per cent.
0
0
0
Marked
Almost
Complete
Ox-liver lecithin 0.083
per cent.
0
0
0
Very
Marked
Complete
Ox-liver lecithin 0.027
per cent.
Faint
Trace
Trace
Almost
Complete
Complete
Complete
Controls: Emulsions alone 0.6 c. c. + Complement 0.03 c.c. = Complete.
Serum 0.05 c. c. + Salt Solution 0.6 c. c. -f Complement 0.01 c.c.
= Complete.
Dose of Complement = 0,015 c. c.
20 *
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290 0. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
less complement; but the zone effect was negligible practically.
The addition of a fixed amount of cholesterin, in every
case 1.3 per cent., to the lecithin solutions of varying strength,
while causing increased absorption of complement in the
presence of syphilitic serum did not cause any notable diffe¬
rences in the various series (v. table III). The effect of
varying the amount of alcohol is shown in table IV.
As with the crude extract so also with lecithin, increase of
alcohol (short of an amount sufficient to destroy complement)
causes increased deviation of complement in the presence of
syphilitic serum, while not increasing the inhibitory effect of
the emulsion itself on complement.
Table III.
Syphilitic
Ser. 0.05 c.c.
Amounts of Guinea-pig’s Complement
+ Emulsion
0.6 c .c.
0.08 c. c.
0.12 c. c.
0.18 c. c.
0.24 c. c.
0.32 c. c.
0.4 c. c.
Ox-liver leci¬
thin 0.75 per
cent.
Distinct
Ju8t
Complete
Complete
Complete
Complete
!
Complete
Ox-liver leci¬
thin 0.75per
cent. + Cho¬
lesterin 1.3
per cent.
0
0
Very
Faint
Trace
Trace
Very
Marked
Complete
Ox-liver leci¬
thin 0.2 per
cent.
Trace
Almost
Complete
Complete
Complete
Complete
Complete
Ox-liver leci¬
thin 0.2 per
cent + Cho¬
lesterin 1.3
per cent.
0
0
0
Very
Faint
Trace
Very
Marked
Complete
Ox-liver leci¬
thin 0.075
per cent.
Trace
Very
Marked
Complete
Complete
Complete
Complete
Ox-liver leci¬
thin 0.075
per cent. -f
Cholesterin
1.3 per cent
0
0
0
Very
Faint
Trace
Very
Marked
Complete
Controls: Emulsions alone 0.6 c. c. + Complement 0.035 c. c. = Complete.
Serum 0.05 c. c. + Salt Solution 0.6 c. c. + Complement 0.025 c. c.
= Complete.
Dose of Complement = 0.015 c. c.
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The Lecithin Fractions of Various Organ Extracts etc. 291
Table IV.
2.37 per cent, solution of ox-heart lecithin in alcohol; 1 part emul-
sionised with 7 parts of saline, so as to produce the maximum turbidity
= stock emulsion.
A. 2.5 c. c. of stock emulsion + 5.5 c. c. of NaCl-solution.
B. 2.5 c. c. of stock emulsion + 5.2625 c. c. of NaCl-solution + 0.2375 c. c.
absolute alcohol.
C. 2.5 c. c. of stock emulsion + 4.8125 c. c. of NaCl-solution + 0.6875 c. c.
absolute alcohol.
Syphilitic
Ser' 0.05 c. c.
Amounts of Guinea-pig’s Complement
+ Emulsion
0.6 c. c.
0.06 c. c.
0.09 c. c.
0.13 c. c.
0.17 c.c.
0.22 c. c.
0.3 c. c.
Emulsion A
Faint
Trace
Trace
Distinct
Very
Marked
Complete
Complete
1
Emulsion B
0
Very
Faint
Trace
Faint
Trace
Trace
Very
Marked
Complete
Emulsion C
0
0
Very
Faint
Trace
Faint
Trace
Trace
Very
Marked
Controls: Emulsions 0.6 c. c. + Complement 0.02 c. c. = Complete.
Serum 0.05 c. c. + Salt Solution 0.6 c. c. + Complement 0.02 c. c.
= Complete.
Dose of Complement = 0.01 c. c.
The results above noted show that where the amounts of
syphilitic serum and of alcohol are kept constant very con¬
siderable variation in the amount of a given preparation of
lecithin, within certain limits, produces only a comparatively
small difference in the amount of complement absorbed. The
strength of the lecithin solution usually employed to bring
out differences in individual preparations was 0.75 per cent.
To obtain an idea of the average efficiency of the various
lecithins it was necessary to test them as far as possible at
the same time and with the same complement and serum. By
using also a standard ox-liver lecithin throughout the experi¬
ments, it was possible to compare the results obtained on
different occasions. All the lecithins were tested with more
than one syphilitic serum. This is important in view of the
fact that the ratio of the antigenic value of two given lipoid
emulsions may vary to some extent with different sera. The
inhibitory effects of the lecithin emulsions by themselves on
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292 C. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
complement and the lytic effects for ox’s red blood corpuscles
were also estimated.
Lecithins from the following sources were prepared, ox’s
heart, liver and kidney, pig’s heart, liver and brain, sheep’s
liver and egg yolk. A number of commercial preparations of
lecithin [Merck, Kahlbaum, Riedel Nos. I and II,
Poulenc Frbres 1 )] were also tested. (In every case a
clear alcoholic solution was prepared in the first instance, any
insoluble material being removed by centrifugalising.)
Bio-chemical Actions.
Wassermann Syphilis Reaction.
The results of a large number of experiments have shown
that considerable differences exist in the amounts of comple¬
ment absorbed by the various lecithins in the presence of
syphilitic serum. In general, the greatest amounts of com¬
plement were absorbed by the heart lecithins, the least by the
brain and yolk lecithins, while the liver lecithins were inter¬
mediate. Ox-liver lecithin was slightly superior to that from
the liver of the pig and of the sheep (v. table V); but specimens
of lecithin prepared from different ox-livers show some variation
Table V.
Syphilitic Serum
0.05 c.c. + Emulsion
0.6 c. c.
Amounts of Guinea-pig’s
Complement
0.04 c. c.
0.07 c. c.
0.1 c. c.
0.12 c.c.
0.2 c.c.
Ox-liver lecithin
0
0
Faint
Trace
Trace
Almost
Complete
Ox-kidney lecithin
0
0
Faint
Trace
Faint
Trace
Faint
Trace
Ox-heart lecithin
0
0
0
0
Faint
Trace
Sheep-liver lecithin
0
0
Faint
Trace
J ust
Complete
Complete
Egg-yolk lecithin
0
Very Faint
Trace
Very
Marked
Complete
Complete
Controls: All emulsions alone 0.6 c. c. + Complement 0.035 c. c. = Complete.
Serum 0.05 c. c. + Salt Solution 0.6 c. c. + Complement 0.015 c. c.
= Complete.
Dose of Complement = 0.005 c. c.
1) We have to thank Messrs. Riedel and Poulenc Frferes for
their kindness in placing specimens of their lecithins at our disposal.
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The Lecithin Fractions of Various Organ Extracts etc. 293
in this respect (v. table VI). Accordingly we have not attached
any importance to small differences.
Table VI.
Syphilitic Serum
Amounts of Guinea-Pig’s Complement
0.05 c.c. +Turbid
0.02 c. c.
0.03 c.c.
0.05 c. c.
0.08 c. c.
Emulsion 0.6 c. c.
0.12 c. c.
0.17 c. c.
Ox-liver lecithin
0
0
Trace
Very
Complete
No. 1
Marked
Ox-liver lecithin
0
0
0
Faint
Marked
Complete
No. 2
Trace
Eg^-yolk lecithin
Marked
Just
Complete
Complete
Egg-yolk lecithin
No. 2
Marked
Very
Just
Marked
Complete
Ox-heart lecithin
0
0
0
0
0
0
Normal Serum
0.05 c.c. + Turbid
Emulsion 0.6 c.c.
0.02 c. c.
0.03 c.c.
0.05 c.c.
Ox-liver lecithin
Marked
Almost
Complete
No. 1
Complete
|
Ox-liver lecithin
Marked
Almost
Complete
No. 2
Complete
Egg-yolk lecithin
Very
Just
Complete
No. 1
Marked
Complete
Egg-yolk lecithin
No. 2
Marked
Very
Marked
Complete
Ox-heart lecithin
Marked
Just
Complete
Complete
Controls: Emulsions alone 0.6 c. c. + Complement 0.02 c. c. = Just Complete.
Dose of Complement = 0.01 c. c.
It was noted that the emulsions of the heart lecithins
were constantly more turbid and the yolk lecithins less turbid
than the emulsions of liver lecithin, so that there was appa¬
rently a direct correspondence between the density of the
emulsion and its deviating property in the presence of syphi¬
litic serum. The inhibitory effect of the lecithins by them¬
selves on complement was in all cases very slight. All the
emulsions reacted neutral to litmus. The commercial ovo-
lecithins had a comparatively weak action as syphilitic antigen.
The addition of cholesterin to the lecithin solutions
produced in every case an increase in the amount of com¬
plement absorbed in the presence of syphilitic serum, as com¬
pared with the amount absorbed by the corresponding lecithins
themselves (v. tables VII, VIII). The absolute increase was
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294 C. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
Table VII.
Syphilitic Serum
0.05c.c.+ Turbid
Emulsion 0.6 c. c.
Amounts of Guinea-pig’s Complement
jo.Q2 c. c.jO.04 c. c.
0.07 c. c.
0.1 c. c.
0.14 c. c.
Ox-liver lecithin
!
0 1
Very
Faint
Trace
Trace
Marked
Complete
Ox-heart lecithin
0
!
0
0
0
Very
Faint
Trace
0.04 c. c.
j0.08 c. c.
t 0.13 c. c.
0.18 c. c.
0.26 c. c.
0.34 c. c.
Ox-liver lecithin
+ Cholesterin
1 per cent
0
0
| Very
Faint
' Trace
Marked
Complete
Ox-heart lecithin
+ Cholesterin
1 per cent
0
0
0
Very
Faint
Trace
Marked
i
Complete
Crude Extract
(Ox-liver)
0
Trace
Marked
Ju8t
Complete
Controls: All emulsions alone 0.6 c. c. + Complement 0.025 c. c. = Complete.
Serum alone 0.05 c. c. + Salt Solution 0.6 c. c. + Complement
0.025 c. c. — Complete.
Dose of Complement = 0.008 c. c.
Table VIE
Emulsions in every case of maximum turbidity.
Syphilitic Serum 0.05 c, c.
+ Turbid Emulsion 0.6 c.c.
Amounts of Guinea-pig’s Complement
0.1 c. c.
0.14 c. c.
0.2 c.c.
0.32 c.c.
Ox-heart lecithin
0
0
Faint
Trace
Ox-heart lecithin + Cholesterin
0
0
0
0
1 per cent
Ox-liver lecithin
Faint
Trace
Almost
Complete
Trace
Complete
Ox-liver lecithin + Cholesterin
0
0
Faint
Trace
1 per cent
Trace
Egg-yolk-lecithin
Very
Marked
Complete
Complete
Complete
Egg-yolk lecithin + Cholesterin
ikVU
0
Distinct
Complete
Complete
1 per cent
Controls: All emulsions 0.6 c. c. + 0.03 c. c. Complement = Complete.
Serum alone 0.05 c. c. + Salt Solution 0.6 c. c. + 0.015 c. c. Com¬
plement = Complete.
Dose of Complement = 0.005 c. c.
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The Lecithin Fractions of Various Organ Extracts etc.
295
greatest in the case of the heart and least with brain and
yolk lecithins. Ox-liver lecithin was generally inferior to ox-
heart lecithin in this respect. The inhibitory effects of the
various lecithin-cholesterin emulsions by themselves on com¬
plement were practically identical with those of the lecithins.
It was found, however, that the addition of cholesterin to
ox-heart lecithin might cause a marked increase in the amount
of complement absorbed along with certain undoubtedly normal
sera (previously heated at 55° C for half an hour), whereas,
under similar conditions cholesterin caused no such increase
with ox-liver lecithin. This was the case with one of the
specimens of ox-heart lecithin, as is well shown in table IX.
Table LX.
Normal Serum (*/, hour 55° C)
0.05 c. c. + Turbid Emulsion
0.6 c. c.
Amounts of Guinea-pig’s Complement
0.04 c.c.
0.07 c. c.
0.1 c, c.
0.12 c. c.
Ox-liver lecithin
Almost
Complete
Just
Complete
Complete
Complete
<
£ .
Ox-liver lecithin + Cholesterin
1 per cent
Marked
Just
Complete
Complete
Complete
5
6
Ox^heart lecithin
Almost
Complete
Faint
Trace
Complete
Complete
Complete
Ox-heart lecithin + Cholesterin
1 per cent
Trace
Marked
Almost
Complete
Ox-liver lecithin
Just
Complete
Complete
Complete
Complete
PQ
E.
Ox-liver lecithin + Cholesterin
1 per cent
Almost
Complete
Complete
Complete
Complete
1
Ox-heart lecithin
Almost
Complete
Trace
Complete
Complete
Complete
Ox-heart lecithin + Cholesterin
1 per cent
Marked
Almost
Complete
Just
Complete
Controls: Emulsions alone 0.6 c. c. + Complement 0.025 c. c. = Just Complete.
Sera 0.05 c. c. + Salt Solution 0.6 c. c. + Complement 0.03 c. c.
= Complete.
Dose of Complement = 0.0075 c. c.
These sera when tested with the ox-heart lecithin and lecithin-
cholesterin gave a positive Wassermann reaction (i. e. the
absorption of at least four or five doses more of complement
with lecithin-cholesterin than with lecithin); whereas their true
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296 C. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
state was shewn by the use of ox-liver lecithin-cholesterin
and by the crude extract of normal ox’s liver. This is
important in view of the fact that heart extract has been
very commonly adopted for the diagnosis of syphilitic sera
[v. Sachs (14)].
An attempt was made to effect further purification of
some of the lecithin preparations by keeping the ethereal
solutions at a low temperature by means of ice and salt. An
ether-insoluble body separated out. The portion remaining
in solution was precipitated with acetone, redissolved in ether,
and again cooled. This process was repeated a number of
times over a period of days, a considerable amount of ether-
insoluble matter being thus removed, until at last practically
no further precipitate separated out on cooling. The acetone
precipitate was finally dissolved in alcohol. The lecithin so
obtained was compared with the original preparation. Practi¬
cally no difference was found.
The action as syphilitic antigen of preparations of lecithin
from different specimens of the same tissue is thus fairly
constant. The difference between the lecithins from two dif¬
ferent tissues, e. g. heart and egg-yolk, cannot be explained
as due to the presence of any gross and easily separable
impurity such as cholesterin. This is obvious from the fact
that the addition of even a large amount of cholesterin to
egg-yolk lecithin does not produce as great deviation of com¬
plement in the presence of syphilitic serum as does “pure”
ox-heart lecithin, which can only contain at the most a mere
trace of cholesterin as impurity.
The results of chemical investigation [v. Erlandsen (4)]
have tended to show that lecithin readily undergoes alteration.
We have found that when an alcoholic solution of lecithin,
prepared in the manner described above, is kept in the dark
over a period of many months practically no change takes
place in its biochemical properties, as cobra-venom haemolysin
and as syphilitic antigen; in addition, the iodine-value has
remained constant. On the other hand, we have observed a
marked effect as the result of evaporating an alcoholic solution
at 55° C.
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The Lecithin Fractions of Various Organ Extracts etc. 297
A 13.0 per cent, solution of egg-yolk lecithin (No. 2) was evaporated
at 55 0 C, the time taken being three days. The dried residue was found
to be partially insoluble in alcohol or ether. The evaporated product was
dissolved in ethyl acetate at 60 0 C and the solution cooled in the ice-chest.
The precipitate which formed was redissolved in ether and precipitated
with acetone, the same procedure being followed as in the case of the
original preparation already described. Finally «on alcoholic solution was
obtained.
The “redissolved” lecithin showed a marked increase in
its action as syphilitic antigen (v. table XIB); bnt with normal
sera it tended to behave like certain specimens of heart-lecithin,
i. e. to give a positive reaction; hence this procedure for enhan¬
cing the antigenic effect of lecithin is probably not of prac¬
tical utility. The haemolytic power along with cobra-venom
was little altered and the iodine-value showed only a slight
diminution (v. table XI A). The fact that a lecithin can be
altered so markedly as regards its antigenic value by such a
simple procedure demonstrates conclusively that differences
can exist in these bodies which are altogether independent of
the presence or absence of cholesterin as an impurity.
Haemolysis with Cobra Venom.
The most actively haemolytic lecithins were the preparations
from egg-yolk, those from ox’s heart were the least active
(v. table XA). The other lecithins occupied an intermediate
Table XA.
Turbid
Emulsions of
0.75 per cent.
Lecithin 1 part
1 c.c. 5 per cent. Ox-blood Suspension + Cobra Venom
1:10000 + Emulsion.
+ NaCl-solu-
tion 7 parts
0.005 c. c.
0.01 c. c.
0.015 c.c.
0.02 c.c.
0.025 c.c.
0.03 c. c.
Ox-heart
0
0
Faint
L Trace
Trace
Distinct
Complete
Ox-liver
Faint
Trace
Distinct
Marked
Complete
Complete
Complete
Egg-yolk
o
Distinct
Marked
Complete
Complete
Complete
position. In these comparative experiments the turbid emulsions
were employed. In the case of ox-liver lecithin Browning
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298 C. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
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and Cruickshank (1) have found that with the rapidly made,
clear emulsions haemolysis occurs at first more rapidly than
with the corresponding turbid emulsions, but that the end
results (24 hours) are practically identical in both cases. In each
experiment the haemolytic action of the emulsions by them¬
selves for ox's corpuscles was also tested; in the amounts
used they were always non-haemolytic. Slight differences were
observed in the amounts necessary to produce complete lysis
of the test corpuscles in the absence of venom, the heart
lecithins being usually least lytic and the yolk lecithins most
lytic (v. table XB).
Table X B.
Turbid Emulsions of
0.75 per cent. Lecithin
1 part + NaCl-solution
7 parts
0.25 c. c. 5 per cent. Ox-blood Suspension +
Emulsion
0.5 c.c.
| 0.75 c.c.
1.0 c.c.
Ox-heart
0
0
Faint Trace
Ox-liver
0
Faint Trace
Very Marked
Egg-yolk
Trace
Distinct
Complete
The readings were taken after the tubes had been incubated for
2 hours at 37° C and had then stood for 18 hours further at room-
temperature.
Iodine Values.
The method used for these estimations has been that
of v. H u b 1. This depends on the fact that when the alcoholic
solution of a fat which contains unsaturated acids is allowed
to stand in contact with an alcoholic solution of iodine to
which mercuric chloride has been added, a certain amount
of iodine is absorbed. By titrating the mixture subsequently
with sodium thiosulphate or other suitable reagent (in some
experiments antipyrine was used) the amount of free iodine
is determined and from this the amount of iodine which has
been absorbed can be calculated. The weight, expressed in
grammes, of iodine absorbed by 100 grammes of fat is the “iodine-
value”. In the case of lecithin it might be expected from a
consideration of the provisional formula given above and the
possibility of variation of the fatty acid radicles that different
lecithins would differ considerably in their iodine-values.
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The Lecithin Fractions of Various Organ Extracts etc.
299
Theoretically, for example, the iodine value of a distearyl
lecithin should be 0, that of dioleyl 65 and dilinoleyl 128.
It is also possible that combinations of different acid radicles
may exist in lecithins e. g. stearyl with oleyl. From the
readiness with which lecithin oxidises in the presence of air
it is generally regarded as containing acid radicles of un¬
saturated type such as linolic or linolenic [Erlandsen (4),
v. also Leathes (8)].
In our experiments considerable variation has been found
in the amount of iodine absorbed by the different lecithins.
Table XI shows an actual experiment; all the preparations
noted were, of course, tested simultaneously and 24 hours
was allowed for the absorption of iodine by the lecithin
solutions. It will be seen that not only are there distinct
differences between the lecithins from different tissues, but
also between lecithins obtained from different specimens of
the same organ. Thus ox-liver lecithin No. 1 is apparently
highly unsaturated while ox-liver lecithin No. 2 is only
slightly unsaturated. In comparing the iodine values of the
lecithins with their effects in the Wassermann reaction it
will be observed that no correspondence has been found to
exist between these functions. For example, ox-liver lecithin
No. 1 resembles the lecithin from a fatty human liver in
being highly unsaturated, but the amounts of complement
Tabelle XI A.
0.05 g Lecithin + 10.0 c. c. v. Hiibl solution (mixture allowed
to stand for 24 hours)
Amount of NajS 2 0 3
solution equivalent to
unabsorbed Iodine
Amount of Na,S. 2 0 8
solution equivalent to
absorbed Iodine
Ox-liver No. 1
5.45 c. c.
17.15 c. c.
,, „ No. 2
18.2 „
4.4 „
Fatty human liver
3.7 „
18.9 „
Egg-yolk No. 1
18.1 „
4.5 „
„ „ No. 2
19.0 „
3.6 „
„ „ (No. 2 redissolved)
19.45 „
3.15 „
Ox-heart
16.5 „
6.1 „
Controls: 10.0 c. c. v. Hiibl solution = 22.6 c.c. Na,S a O, solution.
20.0 c.c, standard K^Cr.^O, solution = 16.5 c.c. Na^O,, solution.
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300 C. H. Browning, J. Cruickshank and W. Gilmour,
Table XIB.
Turbid Emulsions
0.6 c. c. + Syphilitic
Serum (55° C */» hour)
0.05 c. c.
J Amounts of Guinea-pig’
s Complement
0.02 c. c.
0.03 c. c.
0.05 c. c.
0.08 c. c.
0.12 c. c.
Ox-liver lecithin No. 1
Distinct
Marked
Very
Marked
Just
Complete
Complete
„ „ „ No. 2
Trace
Distinct
Marked
Very
Marked
Complete
Fatty human liver le¬
cithin
0
0
0
0
Trace
Egg-yolk lecithin No. 1
Complete
Complete
Complete
Complete
Complete
» » b No. 2
Just
Complete
Distinct
i
Complete
Complete
Complete
Complete
yy yy » (No. 2
redissolved)
Marked
Almost
Complete
Just
Complete
Complete
Controls: Emulsions alone 0.6 c. c. + 0.02 c. c. Complement = Complete.
Syphilitic Serum 0.05 c. c. + Salt solution 0.6 c. c. + 0.02 c. c.
Complement = Complete.
Dose of Complement = 0.004 c. c.
deviated in the Wassermann reaction by these two lecithins
differ very markedly, the human liver lecithin having a much
higher “antigenic” value (table XIB). Ox-liver lecithin No. 2
and yolk lecithin No. 1 have approximately the same iodine
value, but the liver lecithin is greatly superior to the yolk
lecithin in deviating power. Again, the more unsaturated ox-
liver lecithin (No. 1) is a less efficient syphilitic “antigen”
than specimen No. 2; but the difference between the two
preparations in this respect is much less than the variation
in their iodine-values. We have not found any alteration to
occur in the iodine-value of lecithins, prepared as described
above, which had been allowed to stand in alcoholic solution
for some months.
Our results differ from those of Noguchi and Bronfen-
brenner (13) who, as has been noted above, in examining
the acetone-insoluble portions of alcoholic extracts from
pathological human organs found that a high iodine-value
corresponded with a high antigenic value in the case of the
lipoids from liver and heart.
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The Lecithin Fractions of Various Organ Extracts etc. 301
Zusammenfassung.
1) Lecithinpraparate sind aus den folgenden Geweben dar-
gestellt worden: Ochsen-Leber, -Herz und -Niere, Schweine-
Leber, -Herz und -Gehirn, Schafsleber, Eidotter. Die bio-
chemischen Wirkungen dieser PrSparate, sowie einer Reihe
von Handelseierlecithinen, sind untersucht worden 1 ).
2) Die Komplementmenge, die nnter dem EinfluB des
Lecithins bei der Wasssermannschen Reaktion gebunden
wird, wecbselt nach dessen Herkunft ans den verschiedenen
Organen. Die Komplementabsorption ist am hbchsten mit
Herzlecithin und am niedrigsten mit Eidotterlecithin.
3) Die verschiedenen Lecithinpraparate fiben an und fQr
sich alle nur eine geringe nnd fast gleiche antikomplement&re
Wirkung aus. Zusammen* mit Cobragift wirkt Eidotterlecithin
in geringem Grade starker h&molytisch als die Praparate aus
Herz oder Leber.
4) Bei dem Vorhandensein von syphilitischem Serum be-
wirkt die ZufQgung von Cholesterin zum Lecithin in alien
Fallen eine bedeutende Zunahme der Komplementabsorption.
Diese Beobachtung ist eine Verallgemeinerung der zuerst
von Browning, Cruickshank und McKenzie bei
Ochsenleberlecithin ermittelten Tatsache.
5) Einige Praparate von Ochsenherzlecithin absorbieren
bei Zugabe von Cholesterin zusammen mit erhitztem norraalen
Menschenserum, eine genQgende Menge von Komplement, urn
eine positive Wassermannsche Reaktion vorzutauschen.
Deswegen sind sie fQr diagnostische Zwecke zur Entdeckung
einer syphilitischen Infektion ungeeignet. Nach der Ansicht
der Verff. gibt es keine zuveriassigere oder empfindlichere
Methode zur AusfQhrung der syphilitischen Reaktion als die
quantitative Bestimmung der Komplementdosen, die von einem
bestimmten Gemisch des Patientenserums mit Ochsenleber¬
lecithin und Lecithin-Cholesterin gebunden werden.
1) Eine kurze Zusammenfassung der Hauptresultate dieser Arbeit ist
von Browning und McKenzie (Recent Methods in the Diagnosis and
Treatment of Syphilis, London 1911) publiziert worden.
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302 Browning, Cruickshank and Gilmour, Lecithin Fractions.
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6) Die Jodwerte verschiedener, nach einer gleichm&fiigen
Methods dargestellten Lecithinpr¶te, zeigen deutliche
Unterschiede. So warden sehr betr&chtliche Differenzen der
Jodwerte bei zwei PrSparaten aus normalen Ochsenlebern
beobachtet. Dagegen kSnnen Lecithine verschiedenen Ur-
sprunges, z. B. Eidotter und Ochsenleber, fast die gleichen
Werte ergeben.
7) Im allgemeinen besteht kein Parallelismus zwischen
dem Jodwert and der syphilitischen Antigenwirkung.
References.
1) Browning and Cruickshank, Journ. of Path, and Bact., Cam¬
bridge, Vol. 16, 1911, p. 225.
2) -and Me Kenzie, Ibid., Vol. 16, 1910, p. 484.
3) — and McKenzie, Recent Methods ih the Diagnosis and Treatment
of Syphilis, London 1911.
4) Erlandsen, Hoppe-Seylers Zeitschr. f. physiol. Chemie, Straflburg,
Bd. 51, 1911, p. 71.
5) t. Fiirth, Probleme der phyBiologischen und pathologischen Chemie,
Leipzig 1912.
6) Gilmour, Journ. of Ment. Science, Vol. 57, 1911, p. 28.
7) Kyes, Journ. of Infect Diseases, Chicago, VoL 7, 1910, p. 181.
8) Leathes, The Fats, London 1910.
9) Maclean, Brit med. Journ., London, Vol. 2, 1909, p. 677.
10) Manwaring, Zeitschr. f. Immunitatsf., Jena, Bd. 6, 1910, p. 513.
11) Moore, Brit med. Journ., London 1909, VoL 2, p. 684.
12) Muirhead, Ibid., 1911, Vol. 2, p. 748.
13) Noguchi and Bronfenbrenner, Journ. of Exper. Med., New York,
Vol. 13, 1911, p. 43.
14) Sachs, Berliner klin. Wochenschr., 1911, No. 46.
15) — und Rondoni, Ibid., 1908, p. 1968.
16) Wilson, Bio-chemical Journal, Vol. 6, 1911, p. 100.
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C. Kling, W. Wemstedt et A. Pettersson, Recherches etc. 303
Nachdruck verboten.
[Travail du laboratoire bact^riologiqne de lTnstitot medical de
l’^jtat k Stockholm.]
Recherches sup le mode de propagation de la paralysie
Infantile ^piddmlque (maladle de Heine-Hedln).
Troisidme m6moire.
Par Carl Kling, Wilhelm Wemstedt et Alfred Pettersson.
Avec 5 figures.
(Eingegangen bei der Redaktion am 30. Mai 1912.)
Nos recherches pr6c6dentes (1) ont d^montrS la presence du
microbe de la paralysie infantile dans less6cr6tionsbucca-
leset nasalesainsi que dans le contenu de l’intestin
chez les individus atteinte de la maladie. Nous ne l’avons
certes pas trouvd dans tous les cas, mais, 6tant donn6 la
grande difficulty de d6celer sa presence, il y a tout lieu de
penser qu’il s’y trouve n4anmoins d’une faQon constante; les
recherches faites sur le cadavre, nous font croire en outre
que les s6cr£tions de la trach6e chez le malade le
renferment 6galement.
Landsteiner, Levaditi et Danulesco (2) viennent
de le constater dans le mucus nasal d’un singe infects.
Or, il est Evident que les s6cr6tions, aussi bien que le
sang pourraient etre la source de la contamination. C’est
pourquoi les recherches ayant pour but d’yiucider le mode de
propagation de la paralysie infantile doivent en tenir compte,
afin examiner la possibility de la transmission du microbe:
1° par contact des s^cr^tions contaminyes d’un in-
dividu malade h un autre, soit directement, soit
par l’intermydiaire d’un sujet sain, homme ou
animal, ou encore par unobjetquelconque; 2° par
les insectes parasites, qui se nourrissent de sang.
Nous ferons remarquer tout de suite, que la prysence
du microbe sur les muqueuses de sujets atteints de paralysie
infantile, ne suffit pas & elle seule pour rendre compte de la
propagation de la maladie. Trfcs souvent les individus con-
taminys n’ont jamais yty en contact avec d’autres malades
ZeiUchr. f. ImmunlUtiforschung. Grig. Bd. XIV. 2l
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304
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
atteints de paralysie. Or, pour admettre l’infection par contact,
il faut prouver que le microbe existe non seulement chez les
malades atteints de paralysie distincte, mais encore chez d’autres’
personnes. N’y a-t-il pas peut-Stre des maladies sans paralysie
manifestos qui sont provoqu6s par le m&me microbe ? ou bien
ne se trouve-t-il pas aussi chez les individus tout k fait sains ?
Lors des epidemics de paralysie infantile, il y a r6gu-
li&rement parmi les personnes de l’entourage des malades, des
gens qui ne manifestant que des symptomes vagues:
fibvre, fatigues, malaises, maux de tete, vomissements, somno¬
lence etc. sans toutefois 6tre affect6es de paralysie, et, souvent
ces symptSmes sont accompagn^s ou suivis d’une certaine
irritability d’humeur. Quand il apparait des symptdmes indi¬
quant une irritation l£g&re du systeme nerveux, comme raideur
du cou, des douleurs dans le cou, le dos et les reins ainsi
que dans les extremes, des paresth£sies, etc. la correlation
avec la paralysie infantile se d£c&le facilement On observe
quelques fois des troubles digestifs, vomissements, diarrheas,
ou mSme des troubles respiratoires: rhume avec otite ou con-
jonctivite, angine, gonflement des amygdales et des glandes
cervicales etc. Dans ces cas, la relation avec la poliomyeiite
aigue n’est pas aussi evidente. La guerison se fait generale-
ment tr£s vite. Wickman (3) a attire l’attention sur ces
formes atypiques, sur la signification epidemiologique des-
quelles il a particulierement insiste. Il les a appeiees «cas
abortifs». On n’est naturellement pas autorise k croire
qu’ils ne se montrent que dans l’entourage des malades atteints
de paralysie averee; au contraire, on a toutes raisons pour
admettre qu’ils existent en dehors de toute relation aves des
cas de paralysie. Lors de la derni^re grande epidemic de
l’annee precedente, enSubde, on a observe un grand nombre
de cas de ce genre.
La seule methode qui permette de savoir si ces maladies sont
provoquees elles aussi par le microbe de la paralysie infantile, est
de demontrer la presence d’un anticorps dans le sang. Mais pour
ce qui nous concerne il suffira de demontrer la presence du germe
dans les secretions par l’inoculation au singe. C’est ce que
nous avons fait sur un certain nombre de malades de cette
categorie. Dans l’expose qui va suivre nous les avons divise
en deux groupes: les ca s ayant et6 en rapport avec
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Mode de propagation de la paralysie infantile 4pid4mique. 305
les malades attaints de paralysies incontestables
et les cas n’ayant eu aucune relation manifesto
avec ces derniers. A part ces cas, nous avons soumis k
l’examen plusieurs personnes bien portantes vivant
dans le voisinage des malades.
Le lavage et l’inoculation des singes s’effeetuent comme
nous l’avons d6crit dans le pr6c6dent article.
A. Cas sans paralysie. en rapport aveo des oas averes
de paralysie infhntile.
Observation I.
La famille A. se compose de 5 membres. Ni le p&re,
commisvoyageur, ni la m&re ne furent attaints.
a) Le fils Ake A, &g6 de trois ans et demi, d’humeur irritable
depuis le commencement de novembre, tomba malade le 16 (13?); il avait
de la fifcvre, des maux de t£te et des vomissements, il 6tait abattu et apa¬
thique. A plusieurs reprises il fut pris de d£lire, notamment le 18 et le 19 f
surtout dans la nuit. Entr£ k la clinique des enfants malades de Stock¬
holm, le 20 septembre, on soupyonna d’abord une m6ningite tuberculeuse;
son £tat trfes apathique, le regard 6tait fixe et inconscient, mais les pupilles
6gales; il accepts cependant la nourriture qu’on lui presents; le cou £tait
un peu raide et les mouvements de la tfite provoquaient quelques douleurs;
il semblait m£me qu’il avait une 14gfere par&ie faciale du c6t6 gauche; les
reflexes Etaient normaux. Le 23, Tesprit 6tait plus lucide; et il n’y avait
plus de raideur du cou; cependant 'il y eut dans la soiree une l^gfere
paresie des deux bras. Le 24 il y eut une amelioration notable du sen-
sorium; seule la par&ie des bras augments; les mouvements des yeux vers
la droite se faisaient avec difficult^. Les reflexes rotuliens qui existaient
encore dans la matinee, disparurent dans la soiree. Le 25, il y eut de la
paresie de la jambe droite. C’est alors qu’il fut admis k l’h6pital des in-
fectieux. A son entree, il etait un peu apathique et gemissait, repine dorsale
ne presentait pas de sensibihte, mais les muscles cervicaux etaient un peu
Basques. La paresie des deux bras, particuliferement du bras droit avait
augmente; il ne pouvait se dresser sur son s4ant k cause de la faiblesse
des jambes. Cependant il parvenait encore k se tenir sur les jambes et k
marcher avec assistence; les reflexes plantaires etaient normaux, tandis que
les reflexes du tendon d’Achille avaient disparu; le reflexe rotulien aflaibli
du c6te droit, etait normal a gauche; le reflexe du triceps, normal du c6te
droit, etait aflaibli k gauche; les reflexes abdorainaux et cremasteriens etaient
normaux. Le pharynx etait un peu rouge. Le 4 decembre, la paresie des
bras avait considerablement diminue, mais il ressentait de vives douleurs en
essay ant de se redresser. Le 11, tout en eprouvant encore de la difficulte k
soulever le bras gauche, il put cependant se lever et marcher avec assistance
mais d’un pas mal assure et comme un ataxique. Il quitta Th6pital le 20 .
21 *
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306
C. Kling, W. Wemstedt et A. PetterBson,
b) La petite Isa A., &g4e de huit ans tomba malade le 14 no-
vembre; elle avait la fifevre, des naus^es et des vomissements; elle garda
seulement le lit jusqu’au 16, date oil elle ytait dyjk rytablie.
c) Le petit Sven A., de 5 ane, eut des vomissements le20no-
vembre, le 21 survinrent la fifevre et du dyiire, qui ne durferent qu’un jour,
il Be leva le jour m£me et recouvra la santy, seulement son caractfere devint
plus irritable.
La famille B. eut des relations suivies avec la pr6c6-
dente, surtout pendant le mois pr6c6dent
a) Le pfere tomba malade le 7 novembre: il eut de l’angine, des
douleurs et de la faiblesse dans les jambes et garda le lit pendant 4 jours.
La mfere, soeur du commis-voyageur (Mr. A), fut prise de fikvre et de
sympWmes analogues huit jours plus tard, elle ressentit en outre des dou-
leurs de nuque et d’un c6ty du visage; elle resta alit4e pendant deux jours.
b) La petite Marie Elisabeth B., &g6e de 3 ans, tomba malade
le 22 novembre; aprfes avoir langui et s’dtre amaigrie pendant 2—3 semaines,
elle ressentit des douleurs de nuque et eut de la dysphagie. Le 23, le cou
alia mieux, mais ytait encore un peu raide; elle ytait ffevreuse et yprouvait
des douleurs dans les genoux. Elle entra le 24 k Ph6pital des infectieux;
son ytat g^n4ral ytait bon, Pesprit ytait lucide, il n’y avait ni douleurs,
ni raideur du cou; pas de flaccidity dans les muscles cervicaux, ni de sen¬
sibility de lupine dorsale, pas de vomissement, pas de par^sie des bras;
elle se levait avec facility, mais les jambes ytaient consid<5rablement
affaiblies; quoique tous les mouvements pussent s’effectuer, ils ytaient sans
4nergie, et elle ne pouvait marcher que difficilement avec assistance, car
les jambes ftechissaient sous elle. Les reflexes rotuliens ytaient absents, ceux
du tendon d’Achille affaiblis, les autres reflexes normaux. Le pharynx
ytait rouge. Le 26, dans la nuit, il y eut des contractions spastiques des
bras et des muscles de la t&te, ce qui s’ytait dyjk pr£sent£ d’ailleur la nuit
pr4c4dente; la par^sie des jambes s’ytait aggrav^e, elle ne parvenait plus k
se tenir debout. Quelques jours avant le 1 d4cembre elle pr£sentait une
assez grande sensibility aux jambes, surtout aux mollets; celle-ci ytait
toujours consid4rable le 11 dycembre, les pieds avaient la tendance k se
mettre en flyxion plantaire. Le 20 Pytat gynyral ytait bon; mais la faiblesse
des jambes toujours trfes actentuye et les mollets toujours trfes sensibles; elle
pouvait se reposer sur sa jambe droite, mais non sur la jambe gauche;
les ryflexes rotuliens manquaient toujours. Elle quitta ensuite Phdpital.
c) La petite Ingeborg B., agye de 10 8 / 4 ans, avait la fifevre, des
douleurs de nuque et de la t£te au moment oil sa soeur tomba malade.
Quatre autres enfants de la famille ytaient en bonne santy.
Le 25 novembre on fit un lavage de la bouche chez Mr.
o
et Mme. A. ainsi que chez le petit Ake et la petite Isa. On
injecta 1.0 c. c. de l’eau de lavage dans le nerf sciatique de
singes et le reste dans le pSritoine.
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Mode de propagation de la paralysie infantile £piddmique. 307
Tableau I.
Eaux de
lavage de
Animaux d’essai
Results ts
Mr. A.
90 c. c.
Macacus cynomolgus,
injects 2/XII
Mme. A.
140 c. c.
Isa A.
100 c. c.
Sven A.
100 c. c.
Macacus rhesus,
injects 9/XII
Cercopithecus fuUgi-
nosus, inject^ 2 /XII
Macacus rhesus,
inject^ 9/XII
13/XII court en tr£buchant; on n’observa plus rien
avant le 31/XII, jour oil le singe fut trouv£ mort.
Examen microscopique: hyperdmie, mais pas
d 7 infiltration celiulaire, peu d’hypertrophie des cel¬
lules neurogliques; la plupart des cellules radicu-
laires de la moelle lombaire sont plus ou moms
l& 6 es: le protoplasme est homogfene, de couleur
fonf^e et fortement vacuolis4, 5 a et Ik des neuro
phagies par des cellules de la neuroglie et des
caryolyses fr^quentes.
On injecta dans le nerf sciatique d’une Macacus neuf
une Emulsion non filtr4e de la moelle de ce singe.
II n’en fut aucunement incommode.
Resta en bonne santA
29/XII il refuse de grimper, court p4niblement et
S rlsente de la faiblesse des jambes. II meurt le
3/XII. II presents it l’autopsie une pneumonie
r^cente du lobe moyen droit
Examen microscopique: hyper^mie intense, pas
d’h^morrhagies, pas d’infiltration celiulaire, hyper-
trophie d’une grande partie des cellules neurogli¬
ques; presque toutes les cellules radiculaires sont
plus ou moins alt£r£es, leur protoplasme est horao-
gfcne, fonc 6 , fortement vacuolis^, rappelant une
Sponge k grands trous; les noyaux sont en caryo-
lyse; neuronophagies fr£quentes et avanc^es, provo-
a u£es par les cellules de la gaine des neurones, les
4bris des cellules nerveuses ont souvent une forme
6 toil 6 e. En quelques endroits de la moelle lombaire
la plupart des cellules radiculaires sont ddtruites.
Un Macacus sinicus neuf re<;ut une injection d’une
Emulsion non filtr^e de la moelle £pinifere le 8 / 1 .
Le 20/11 il est amaigri, marche et grimpe lente-
ment, il a de la faiblesse de toutes les extr 6 mit&
et se laisse facilement renverser. Il meurt le 21/11
Examen microscopique: hyper£mie, petites
hSmorrhagies assez fr^quentes, nypertrophie des
cellules neurogliques retraction des cellules nerveuses
qiu sont fonc^es, homogenes et fortement rong&s
par les cellules de la gaine, noyaux en caryolyses.
18/1 est trouv 6 mort, sans avoir rien presents de
special auparavant. Tuberculose avanc4e du pou-
mon gauche, moins avancee du c 6 te droit; tuber-
cules dans le foie et la rate.
Examen microscopique: hyperemie, petites
hemorrhagies, pas d’infiltration celiulaire, pas
d’hypertrophie aes cellules neurogliques, un assez
grand nombre des cellules nerveuses sont un peu
ratatin 6 es, foncees, parfois vacuolisees, les noyaux
en caryolyse; trfes peu de neuronophagies.
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308 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
Les lesions constat6es dans la moelle 6pinifcre des deux
premiers singes sont si considerables qu’elles peuvent etre
consid6r6es comme la cause tout & fait plausible de la mort.
On ne d£couvrit pas d’autres alterations qui auraient pu la
determiner; car la petite pneumonie recente ne saurait dans
tous les cas pas etre consider comme suffisante. Mais on
pourrait se demander, d’un autre cote, si les lesions observees
sont bien dues & une poliomyeiite aigue et si elles prouvent par
consequent la presence du microbe de la paralysie infantile
dans la cavite buccale des personnes ayant fourni les eaux de
lavage injectees. II est it remarquer que les alterations exsu-
datives qui caracterisent la poliomy61it& ainsi que les in¬
flammations en general, font presque totalement defaut; ici la
congestion seule est incontestable. Toutefois il y a une d6-
g6nerescence intense et trfcs etendu des cellules radiculaires
et on remarque de plus une alteration tr£s frappante dans la
substance grise. II est vrai, que l’infiltration cellulaire man¬
que. II n’y a pas d’augmentation appreciable du nombre des
cellules de la neuroglie. Mais, en revanche, ces cellules sont
en general plus ou moins alt6r6es. Leur corps protoplasmique
est plus grand, vesiculeux et se colore mal. Dans les pre¬
parations fixees k l’alcool les cellules sont trfcs claires et
translucides, mais les coupes de pieces congeiees et fixees par
l’aldehyde formique montrent un protoplasme nettement gra-
nuleux. Cette alteration cellulaire saute aux yeux, car k un
faible grossissement des cellules se presentent, gr&ce k leur
protoplasma clair, comme de petites taches claires dans la
substance grise. Le noyau est rond, plus ou moins fonce, k
reticulum chromatique tr&s fin, semblable k celui des cellules
neurogliques normales. Les cellules sont souvent disseminees
dans la substance grise ou amassees autour des vaisseaux,
mais surtout autour des cellules nerveuses degener6es qu’elles
entourent comme une palissade et qu’elles p6nfctrent plus ou
moins profondement. Les limites cellulaires ne se distinguent
pas toujours de sorte que les cellules paraissent se fusionner
ressemblant & des cellules g£antes 4 deux ou plusieurs noyaux.
On pourrait croire que celles-ci r6sultent d’une mitose; seule-
ment nous n’avons jamais observe de karyokinfcse. Leur pro¬
toplasme clair se distingue nettement de celui des neurones
lequel est toujours plus fonc6 (cfr. fig. 3, 4 et 5).
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Mode de propagation de la paralysie infantile 6pidemique. 309
Le noyau des cellules en question rappelle en tous points
celui des cellules neurogliques; or comme nous ne les avons
trouv6es que dans la substance grise et dans la substance
blanche et jamais dans la pie-m&re, nous les consid£rons
comme des cellules neurogliques alt6r6es. Le terme dTiyper-
trophie que nous avons choisi pour designer ces modifications
n’est pas tr&s precis, car il n’y a pas seulement que les
dimensions des cellules qui se soient modifies; le protoplasme
a encore perdu ses caract&res habituels. Nous d£signerons
renvahissement des cellules nerveuses sous le nom de
neuronophagie; nous y reviendrons dans la suite.
En somme nous avons de l’hyper6mie, des alte¬
rations in ter stitielles et de la d£g£n dr escence
des cellules nerveuses.
Bien que l’exsudation manque, il est d’autant plus pro¬
bable que ces lesions ont 6t6 provoqu6es par le microbe de la
paralysie infantile, que des alterations analogues des cellules
nerveuses se presentent dans la poliomyeiite aigue chez l’homme.
C’est ce que nous sommes en mesure de prouver du reste
par quelques exemples. La moelle d’un singe que nous avons
inocuie avec l’eau de lavage de la trachee dans le cas II de
notre premier article, ne presentait presque pas d’alt£rations,
sauf une deg6nerescence des cellules radiculaires; ces derniferes
4taient homog&nes, foncees, ratatin6es, vacuolis^es et souvent
envahies par des grandes neuronophages peu nombreux. Il n’y
avait aucune infiltration cellulaire (fig. 1). Un Macacus neuf
re$ut de l’£mulsion de moelle dans le nerf sciatique. Il
mourut huit jours aprfes. L’examen microscopique de sa
moelle montra: une infiltration cellulaire de la pie-mfere, une
forte infiltration diffuse de la substance grise, en foyer et
autour les vaisseaux ainsi que des neuronophagies intenses
provoqu6es par des polyblastes et des leucocytes k noyau poly-
morphe (fig. 2). Un Macacus cynomolgus fut inocuie ensuite avec
100 c. c. de la lavure de l’intestin du gar^on Arvid S., cas VII
de l’article precedent; l’animal fut atteint de paralysie et
mourut six jours apr&s. Les lesions de la moelle 6pini&re
n’6taient pas considerables: il n’y avait presque pas d’in-
filtration cellulaire; un peu d’hyper6mie, pas d’h£morrbagies,
mais de la d£g£n£rescence des cellules radiculaires, de la
caryolyse et des neuronophagies ainsi que de l’hypertrophie
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310
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
Fig. 1. Partie de la corne ant£rieure cervicale d’un Macacus cyno-
molgus inocul6 le 18 septembre 1911 avec de l’eau de lavage de la trach^e
(cas III de Particle I). Le 27, il a mauvaise mine, marche en tibutant,
tombe parfois, souvent k droite, meurt le 30. Fixation de la moelle par
Tald^hyde formique, h^matoxyline au fer de Weigert-v. Gieson. Zeiss
obj. apochrom. 4 mm, oc. comp. No. 6. Dans la substance grise trois
capillaires (cap.) rempli de sang, des cellules neurogliques hypertrophi&s
(c.n.h.) mais pas d’immigration de leucocytes. Pycnose des noyaux des
cellules radiculaires ( c.n .) qui sont d4g^n6r(5es et k protoplasme homogfene,
fonc4; ces cellules sont envahies par plusieurs grandes cellules k proto-
piasme clair.
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Mode de propagation de la paralysie infantile 4pid4mique. 311
des cellules neurogliques comme nous l’avons mentionn4 ci-
dessus. Elies ressemblaieot done beaucoup aux alterations
que presentment les deux moelles en question. Avec le moelle
enh*
✓1
Fig. 2. Partie de la corne ant^rieure lombaire d 7 un Macacus rhesus
inocul6 avec la moelle du singe pr6c£dent et mort paralytique de 8 itme jour.
Fixation et coloration comme celles de la preparation pr6c6dente. M&me
grossissement. On voit des leucocytes immigr^s, pour la plupart a noyau
polymorphe (/.), quelques cellules neurogliques hypertrophies (c.n.h.), h
gauche deux cellules radiculaires d6sagr£g6es sans prolongements (c.n.),
envahies par une grande quantity de neuronophages, polyblastes (p.) et
leucocytes k noyau polymorphe (J.). Ces dernifcres cellules ne distinguent
que trfcs peu les unes des autres et du protoplasme de la cellule radiculaire.
A droite une cellule radiculaire fortement d6g£n6r6e.
de ce mSme Macacus nous inocularaes un Hamadryas. II mourut
paralytique 24 jours aprfcs. L’examen r6v61a des lesions in¬
tenses de la moelle 6pini6re: une forte congestion, des h6-
cn
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312 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
morrhagies, une infiltration cellulaire considerable de la sub¬
stance grise, principalement autour des vaisseaux; les cellules
radiculaires etaient bien conservees en partie, ou alte^es par
des neuronophagies leucocytaires. Encore un autre exemple: Les
moelles des singes morts k la suite de l’injection des lavures
de la fillette Ingrid S., cas II de l’article precedent, montraient
de trks fortes alterations: hyperemie, hemorrhagies, infiltrations
cellulaires trks considerables dispersees et perivasculaires,
ainsi que des neuronophagies intenses et une destruction
complete des cellules radiculaires. La fillette fut lavee de
nouveau apres un laps de temps de 23 jours. Le Macacus
injecte avec l’eau de lavage de la bouche mourut huit jours
apres; il avait de la paralysie des deux bras. La moelle ne
presentait, independamment d’une hyperemie assez prononcee
et d’une augmentation des globules blancs dans les vaisseaux,
qu’une degenerescence trhs avancee des cellules radiculaires:
celles-ci etaient en quelque sorte ratatinees, foncees, dechirees
au bord ou bien transformees en corps etoiies par les neurono¬
phages neurogliques; ces alterations etaient tout & fait sem-
blables k celles que presentaient la moelle du singe d’Isa A.
Ces faits d6montrent que le microbe de la
paralysie infantile ne provoque pas toujours de
l’infiltration cellulaire. Nous sommes done autorises
k croire que les deux singes inocuies avec les eaux de lavage
de Mr. A. et de la fillette Isa ont contracte la poliomyeiite
aigue. Quant au petit Sven, nous ne pouvons pas conclure
avec certitude k la poliomyeiite.
Des cinq membres de cette famille, l’un a
certainement e16 atteint de paralysie infantile,
car il en presentait des symptGmes cliniques in-
contestables; deux autres eurent un malaise
vague de trks courte dur6e, et deux, les plus kges,
restkrent en parfaite sant6. Le microbe fut
trouve non seulement chez ceux qui furent in¬
disposes, mais encore chez l’un de ceux qui
n’avaient pas ete malade. Des trois individus
portant le microbe un seul fut atteint de para¬
lysie infantile averee, un autre fut un casabortif
et un troisikme seulement porteur de germes.
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Mode de propagation de la paralysie infantile 6pid£mique. 313
Observation II.
La famille H. se compose de cinq membres, y compris
nne servante de 19 ans. Le pfere et la mbre, tous deux flg6s
de 37 ans, ainsi que la servante 4taient de bonne sant6.
a) Era Marie H., fillette de 3 ans, eut de la fifevre le 12 octobre;
et manifests de l’4nervement. Le 13, dans la matinee, elle eut des vomisse-
ments, devint apathique et somnolente;' elle dut s’aliter. Le 16. l’4tat
s’aggrava; elle eut de la faiblesse du bras gauche, des maux de t£te par
moments, de la constipation; elle dorm ait beaucoup. Lore de son entree
k l’hbpital le 18, elle £tait toujoure apathique et somnolente, ne ressentant
aucune douleur, ni de la raideur de la nuque; seule lupine doreale 4tait
un peu sensible. Elle eut de la paralysie considerable du bras gauche, au
point de ne pouvoir remuer que l’avan t-bras; elle n’eut pas de par4sie du
bras droit, mais une 14gkre par&ie de la jam be droite; elle pouvait encore
marcher en 4tunt sou ten ue, mais avec beaucoup d’in certitude car la jambe
fl&hissait facilement. Lee reflexes de la jambe gauche etaient normaux,
le reflexe rotulien droit etait vif; celui du tendon d’Achille droit affaibli;
celui du triceps normal. Le pharynx etait l£gkrement hyperemie. Le 23,
la marche etait encore mal assuree; elle ne pouvait marcher sans aide ni
lever le bras gauche. Le 5 novembre elle commenja de nouveau k marcher
assez bien, quoiqu’en tralnant les pieds, mais elle ne pouvait toujoure pas
lever le bras gauche. Le 12, etat stationnaire; reflexes du triceps aflaiblis.
reflexes rotuliens normaux. Elle sortit de l’hdpital le 20 novembre.
b) Ingeborg H., kg6e de 3 ans. Le 15 octobre, presents de la
fifevre et des frissons, de l’agitation, sans maux de t£te, ni vomissements.
Elle entra le 18 k 1’hApital; elle etait un peu gemissante et morose, mais
n’avait pas de douleure ni de sensibilite dans le dos, le cou n’etait pas raide
et il n’y avait pas de paresie, la marche etait irreprochable et les reflexes
normaux. Le 19, les reflexes rotuliens etaient un peu plus vifs qu’k l’or-
dinaire. Ne presentant plus rien d’anormal le 30 oct. elle sortit de l’h6pital.
On pratiqua le 19 octobre un lavage de la bouche et de
l’intestin chez la petite Ingeborg H.; les produits recueillis
furent filtrSs et injects daus le p^ritoine et le nerf sciatique
de singes.
Tableau II.
Eaux
de lavage
Animaux d’essai
R&ultats
de la bouche
100 c.c.
Macacus cynomolgus,
injects 17/XI
En bonne sant&
de rintestin
65 c. c.
Macacus rhesus,
injects 6/XI
8 /XI ne court plus aussi vivement qu’auparavant et
se soutient difficilement en grimpant; pas de fai¬
blesse des jambes.
de l’intestin
70 c. c.
Macacus rhesus,
inocuh? 6 XI i
En bonne sant£.
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314
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
On renonvela la m&ne operation chez la fillette le 3 fSvrier
1912 et les prodnits recueillis fnrent injects k des singes
comme pr6c6demment.
Tableau III.
Eaux
de lavage
Animaux d’essai
de la bouche Macacus cynomolgus
140 c. c. inject^ 5/II
B&ultats
, 10/11 couch4 sur le fond de sa cage, ne 8e d4place
gufere; meurt dans la soiree.
Examen microscopique: Hyper4mie, h4mor-
rbagies, mais pas d’innltration cellulaire; la plupart
des cellules nerveuses sont en d4g<5n4rescence: dies
sont homogknes, fonc4es, ratatan4es, presen tan t de
la caryolyse; cependant les alterations destructives
sont peu avanc4es et il n’y a pas beaucoup de
neuronophagies.
de l’intestin
120 c. c.
Cercopithecussabaeus, 12/11 l’animal est le plus souvent assis au fond de
injects 5/II la cage; il court et grimpe facilement; cependant
on constate dans la soiree de la faiblesse evident*
des jambes, surtout de la jambe droite. 13/11 il
Be deplace k pas lents et crain tifs; sans parvenir
k se aresser sur les jambes. 17/11 l’echine courbee,
il refuse de se deplacer, tom be parfois pour ne se
relever qu’avec beaucoup de difficult^; les reflexes
rotuliens existent toujoure des deux c6t6s, mais
ils sont plus faibles que d’ordinaire. Il meurt le
18/11.
A l’examen microscopique: Hyperemie, h§-
morrhagies isolees, infiltration cellulaire douteuse,
mais dans tous les cas faible dans la substance
grise; la plupart des cellules nerveuses qui sont
reduites en grumeaux protoplasmiques irreguliers,
sans prolongements, vacuolisees, fonc4es et homo-
i ;bnes. sont pour la plupart fortement d6g4n6r4es.
es caryolvses sont fr4quentes et trfes avancees ; il
y a peu de neuronophagies.
Nous nous sommes d6ji occup£s de cette malade dans
notre precedent article (cas XIII). Nous y revenons ici parce
que nous avons obtenu depuis des preuves plus convaincantes,
qu’elle portait les germes de la poliomy61ite et que son malaise
6tait bien occasionn6 par cette maladie. Des lavages r6p6t6s
de la bouche et de l’intestin furent faits chez elle aprbs trois
mois et demi et les produits furent injects it deux singes
qui moururent, l’un aprbs 5 jours, sans paralysie, l’autre
aprfes 12 jours avec des parties bien nettes, surtout des
jambes. L’examen microscopique r6v61a des lesions con¬
siderables des cellules radiculaires chez ce dernier, moins
avanc£es chez l’autre.
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Mode de propagation de la paralysie infantile fepidfemique. 315
Observation III.
La famille C., comprend cinq membres: le mari, figfe de
40 ans, la femme de 30 ans environ, et trois enfants. Le
manage avait habits Kiel jusqu’au 23 d£cembre. A cette -
6poque il partit pour Stockholm oh il arriva le 24.
a) Le petit Torsten Robert C., tlgfe de 3 ans et demi, resta bien
portant jusqu’en novembre 1911. Ce ne fut qu’au commencement du mois,
qu’il eut de la fifevre, des vomissements et de la constipation qui ne durferent
que quelques jours. On consulta le mfedecin qui prfescrivit un purgatif et
la difete. Mais le malade devint bient 6 t p&le et maigrit. Arrivfe k Stock¬
holm, la veille de Noel au matin, il se sentit fatigufe et dorma quelques
heures. Il ressentit des douleurs stomacales dans la soirfee; on lui passa
un lavement. Le lendemain les douleurs persistaient; il eut alors de lfegferes
nausfees et des vomissements qui s’aggravferent dans la soirfee. Le mfedecin
fut appelfe et constata des hfematfemfeses; le malade se remuait dans le lit
en gfemissant et en se plaignant de douleurs abdominales; il rendait mfeme
Peau qu’il buvait, le pouls fetait accfelferfe, la respiration fetait courte et hale-
tan te, un peu dyspnfeique; le ventre n’fetait pas sensible; Penfant fetait trfes
pkle; il pouvait remuer les bras. Il mourut le lendemain. L’autopsie releva
une congestion intense du cerveau et de la moelle fepinifere qui profeminait
fortement k la coupe; la substance grise avait une teinte gris rosfee bien
nette, surtout la rfegion cervicale; les ganglions mfesentferiques fetaient encore
enflfes; il n’y avait rien de special en dehore de ces modifications.
Examen microscopique: hyperfemie prononcfee de la moelle, pas
d’hfemorrhagie, pas d’infiltration cellulaire; les cellules radiculaires apparais-
saient com me lfegferement rfetractfees, en quelque sorte trop petites pour les
cavitfes qui les renfermaient, mais en gfen feral elles fetaient peu dfegfenferfees
et la substance tigroide fetait souvent trfes distincte; il n’y avait pas non
plus de neuronophagies. La congestion de Pfecorce cferfebrale fetait assez
considferable.
Un Macacus rhesus auquel on injecta Pfemulsion de la moelle fepinifere
de ce patient fut trouvfe mort dans la matinfee du 24'c me jour, sans qu’on
n’eut rien remarqufe de spfecial auparavant. A Pexamen microscopique, la
moelle fepinifere prfesentait de Phyperfemie, de petites hfemorrhagies assez
frfequentes, mais pas d’infiltration cellulaire; les cellules neurogliques fetaient
hypertrophifees, les cellules radiculaires en gfenferal trfes foncfees et souvent
rfetractfees fetaient corrodfees par ces derniferes; on trouvait 9 k et lk des
neuronophagies beaucoup plus avancfees.
b) Harald Emanuel C., dgfe de 2 ans, tomba malade au cours du
voyage; il avait une forte fifevre; il fetait encore brillant k Parrivfee k Stock¬
holm ; il alia mieux le jour de Noel et Ye lendemain, mais son fetat s’aggrava
le troisifeme jour; il se mit k toifeser et sa toux persista jusqu’au 30; il
avait de la fifevre (38.0 le matin, 38.5 le soir). Il eut de la pharyngite et
du coryza, cependant les poumons restferent intactes; il n’y eut pas de
faiblesse des bras ni des jambes. U fut envoyfe k l’hdpital des infectieux
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316
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
le 30 d<5cembre. A ce moment l^tat g£n6ral 4tait bon, la bouche et le
pharynx ne pr&entaient rien d’anormal, si ce n’est une l^gfcre tumefaction
des amygdales, la toux persistait toujours et I’on entendait des rfiles isolSs
dans les poumons; il n’y avait pas de raideur de la nuque, ni de sensi¬
bility du doe et des extr^mites; la marche etait irreprochable, le phenomfene
du genou et les autres reflexes etaient normaux. II sortit du l’hGpital le
2 janvier.
c) Fritjof C., ftge de 6 mois, tomba malade de 31 decembre en
presentant de la fifcvre (38—39°), de la toux, du coryza, un peu de pha-
ryngite et la semaine suivante il fit une otite moyenne.
Entre la Noel et le jour de Tan, le pfere se sentit fikvreux et in¬
dispose.
On fit des lavages de la bouche et du pharynx le 30 d6-
cembre chez le petit Harald et le produit filtr6 fut inocul6
dans le p6ritoine et dans le nerf sciatique d’un Macaque.
Tableau IV.
Eaux
de lavage
R&ultats
de la bouche Macacus cynomolgus,
45 c. c. , injecte 30/XII
2/1 un peu de faiblesse du bras gauche. 4/1 se d£-
I flace trfes peu; il est le plus souvent couche sur
e fond de la cage, il semble ne pouvoir se dresser
sur les jambes, il meurt dans la soir6e.
Exaraen microscopique: Hyper&nie peu con¬
siderable, petites h^morrhagies rares, pas d’infiltra-
tion cellulaire, mais hvpertrophie evidente d’un
grand nombre des cellules de la neuroglie, surtout
autour des cellules radiculaires. Dans la moelle
cervicale la plupart des cellules radiculaires sont
} )lus ou moins d£g£n fries, les unes sont ratatin&s,
eur protoplasme est homogfre et d’une couleur
fonc<5e, les autres sont pales, bleu&tres; il y a de
la caryolyse, des neuronophagies fr&juentes et
avancfrs, ayant souvent reduit les cellules ner-
veuses en corps ytoilfr. Les lesions de la moelle
lombaire sont moins graves.
On injecta une Emulsion non filtrfr de la moelle
4pini£re k un Cercopithecus fuliginosus dans le
nerf sciatique. Il ne devint pas malade.
Il ne fut pas possible de diagnostiquer la maladie de
Torsten Robert pendant la vie, mais la congestion intense du
syst&me nerveux central — en absence d’alt6rations dans les
autres organes — nous fit supposer qu’il s’agissait de la para-
lysie infantile. La moelle du gargon ne pr6sentait pas non
plus le caract&re typique de la paralysie infantile k l’examen
microscopique; le diagnostic n’en fut confirm^ que par l’in-
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Mode de propagation de la paralysie infantile 6pid4mique. 317
oculation exp4rimentale. Le fr4re Harald chez qui Ton soup-
Qonnait la maladie fut envoys & l’hopital des infectieux; il ne
se d4veloppa cependant pas de paralysie infantile typiqne.
Mais un singe auquel on injecta de l’eau de lavage de la
bouche, fut atteint le 5i& m e jour d’une faiblesse manifesto dans
les jambes de derribre et succomba dans la soir4e. L’examen
microscopique r4v41a des lesions considerables des cellules
nerveuses sur une grande 4tendue de la moelle; aussi croyons
nous pouvoir consid4rer ce cas comme une forme atypique de
la paralysie infantile.
C’est certainement k Kiel que 1’infection s’est faite, car
la p4riode d’incubation de la maladie est trop longue pour
supposer que les deux ain£s des gargons aient 4t4 conta-
min4s en Su4de. D’ailleurs Mr. v. Starck, directeur de
l’hdpital des enfants k Kiel, nous apprit que quelques cas
s’4taient d4clar4s dans cette ville apr4s 1909—1910, 4poque
oil il y eut une 4pid4mie. Le dernier cas fut observ4 le
1 d4cembre 1911.
En vue de rechercher la pr4sence du microbe dans les
s4cr4tions nous nous sommes born4s 4 ces trois families pour
l’examen des cas «abortifs». Ces derniers font partie de la
paralysie infantile; c’est ce qui est irr4futablement prouv4
par les recherches de Netter et de Levaditi (4), Flexner
et Lewis (5), ainsi que par Anderson et Frost (6), qui
ont d4montr4 l’action microbicide du s4rum de ces cas sur le
virus de la paralysie infantile. Il n’y a done aucune raison
pour admettre que ces cas «abortifs» ne portent pas le germe
dans leurs s4cr4tions tout comme les cas typiques.
B. Cas sans paralysie et sans rapport apparente aveo des cas
averes de paralysie infantile.
Observation IV.
La famille v. D., se compose de 5 membres. Le pbre,
Carl Gustave v. D. ag4 de 38 ans, n’avait jamais 4t4 malade.
La m4re Elisabeth, &g4e de 32 ans, se plaignait, pendant la
maladie de ces Giles, de fatigues, de douleurs dans l’occiput
et de vertiges d4s qu’elle voulait se lever. Elle n’avait pas
de fifcvre.
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318 C. Kling, W. Wemstedt et A. Pettersson,
a) Elisabeth v. D., &g£e de 8 ans, avait, le 13octobre, de la fikvre
(39.6), du coryza, de la pharyngite, mais pas de fausses membranes; les
ensemencements ne donnkrent pas de bacilles diphth&iques. Jusqu’au 16
la temperature oscilla entre 37.8 et 38.2°; il y eut encore un peu de toux
ainsi que des excoriations aux narines, de la conjonctivite tegfcre, de grosses
amygdales sans fausses membranes; les ganglions de Tangle de la machoire
etaient enflSs et sensibles, surtout du c6t6 droit Le 18, la malade se leva.
Le 20, elle commen 9 a de nouveau k frequenter Tecole.
b) Maud v. D., kg6e de 7 ans, tomba malade le 23 octobre; elle avait
de la fikvre et du coryza, une toux legfcre; le pharynx etait tegkrement
hyperemie mais sans enflures et sans fausses membranes. Le 24, temperature
38.6; douleurs dans les oreilles; le 25, amelioration.
c) Kitty v. D., nourrisson de 6 mois, tomba malade le 20 octobre
avec fifevre (38.4), coryza, pharyngite, tegkre adenite des ganglions cervicaux,
les tympans etaient rouges; ce dernier sympt6me s’aggrava le lendemain.
Le 22, la fifcvre avait disparu, Tenfant etait vive et animee; les tympans
avaient pali.
Des lavages de la bouche furent pratiques le 25 octobre
chez la m4re et la petite Maude et chez les deux autres fil-
lettes vers le 25 novembre. Les lavures furent filtr4es et
inject4es dans le p4ritoine et le nerf sciatique de singes.
(Cf. Tableau V p. 319.)
Un seul des singes inject4es avec les produits recueillis
dans cette famille, tomba malade et mourut. II pr4senta
quelques symptomes qu’on pourrait interpr4ter comme des
signes d’une poliomy41ite aigue; seulement la moelle ne
pr4sentait gu4re d’alt4ration. Cependent, deux animaux de
contrSle, inocul4s avec cette moelle, succombferent apr4s 60
et 10 jours. Les alt4rations de leurs moelles 4taient plus
consid4rables que celles du premier singe; en outre l’un d’eux
avait pr4sent4 des symptomes cliniques rappelant beaucoup
la poliomy41ite exp4rimentale. Ce singe ne pr4sentait aucune
autre alt4ration pouvant expliquer sa morty tandis que le
premier avait de la tuberculose, mais trop peu avanc4e
cependant pour avoir pu occasionn4 le d4c4s. Nous sommes
done port4s k croire que ces deux derniers singes avaient
contract4 la poliomy41ite par l’injection de la moelle du singe
pr4c4dent. Ce dernier devait avoir par cons4quent la polio-
my41ite, ce qui prouve que la fillette portait le microbe de la
paralysie dans la bouche et dans le pharynx.
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid6mique. 319
Tableau V.
Caa ux de Animaux R&ultate
lavage d’essai
Mme. de la bouche Macacus rhesus, Resta en bonne santg.
v. D. 90 c.c. injects 25/X
Maude de la bouche Macacus cyno- 26/X grimpe lentement, court en trgbuchant.
v. D. 25 c.c. molgus, injectg 28/A court toujours mal, flgchit sur les pattes
25/a de devant. Dans la soiree ne court plus, marche
mal, tombe sur la face, parait avoir de la fai-
blesse des pattes de dernere. 29/X il est mori-
bond et est saccrifig.
Examen microscopique: un peu d’hyper-
gmie, mais pas d’hgmorrhagie, les cellules radi-
culaires ne sont en ggngral que peu altgrges, la
substance tigroide est assez bien conservge.
Un Macacus rhesus neuf auquel on injecta la 29/X
une gmulsion de la moelle gpinigre, mourut
subitement le 27/XH. L’autopsie rgvgla quatre
foyers casgeux, de la dimension d’une ffeve dans
le poumon gauche et quelques tubercules dans
le foie et la rate.
Examen microscopique: hypergmie, sans
d’hgmorrhagie; infiltration cellulaire trfes faible
de la substance grise, hypertropbie des cellules
neurogliques, dgggngrescence d’un grand nombre
de cellules nerveuses. Ces dernigres ont une
apparence homoggne, sont rgtractges, prgsentant
de la caryolyse, les neuronophagies sont souvent
si avancees, que quelques-uns des neurones sont
presque totalement dgvorgs.
On injecta ggalement un Cercopithecus fuliginosus
avec cette mgme moelle le 7 /aL Le 9 novembre
il flgchit un peu sur les pattes de devant en
courant. 16/XI ses mouvements sont un peu
lents. Le 17/XI dans la soirge, il est trgs malade,
balance le corps quand il est assis, marche k
pas trgs lents et vacillants et tombe parfois du
c6tg gauche; il a aussi de la diarrhge; plus tard
il est couchg, remue un peu la t&te, mais non
les membres; il meurt dans cet gtat.
Examen microscopique: hypjergmie, pas
d’hgmorrhagie, infiltration cellulaire douteuse,
hypertrophie des cellules neurogliques, les cellules
raaiculaires, surtout dans la rggion lombaire,
sont en grande partie dgggngrges, ratatinges, k
protoplasme homoggne et d’une couleur foncge;
quelques fois elles sont dissoutes ou presque
totalement disparues, de sorte qu’il n’en reste
comme derniers vestiges que des granulations; il
y a aussi de la caryolyse, des neuronophagies
qui sont en ggngral peu avancges.
Elisabeth de la bouche Macacus rhesus, Resta en bonne santg.
v. D. 50 c.c. injectg 16/XII
Kitty de la bouche Macacus rhesus, Resta en bonne santg.
v. D. c.c. 50 injectg 18/XII
ZeiUchr. f. Immunitauforichung. Orig. Bd. XIV. 22
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320 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
C’est seulement chez la petite Maude que nous avons
r6ussi k d4montrer la presence du microbe, or comme tous
les membres de la famille, sauf le pfere, ont 4t4 attaints
k la mgme 4poque, d’une maladie febrile aigu§ et
que l’un d’eux, la mfcre, pr4senta des signes d’irritation
c4r6brale, faut-il ou non admettre qu’il s’agissait d’une para-
lysie infantile? Nous croyons que oui. Nous ferons d’ail-
leurs remarquer que le lavage ne fut pratique sur les deux
petites filles qu’un mois aprgs la maladie et que l’inoculation
des produits au singe dftt Stre remise k trois semaines &
cause du manque d’animaux. II est done possible que le
virus se soit affaibli au point de ne plus infecter les singes.
Observation V.
Famille E. se compose de 2 membres; une femme d6j4
vieille et son enfant adoptif Jules, &g£ de 10 ans.
Ce dernier eut des vomissements le 31 octobre dans la matinee, avant
le dejeuner, et se sentit indispose toute la journ^e. Le lendemain soir il
eut mal de t$te et de la fifevre (39.6). Les jours suivants, ces symptdmes
persistferent (fi&vre de 38® environ dans la matinee, un peu plus le soir).
Le 4 novembre la temperature atteint 40.1°, le m4decin fut appel£ et con-
stata de grosses amygdales et de l’hyper^mie du pharynx; le malade avait
l’air fatigue et apathique; il ne presentait ni de la paralysie, ni de la
dyspnee, ni de la cyanose, ni de l’exanthfeme; les reflexes rotuliens etaient
normaux; le cceur et les poumons n’avaieut rien d’anormal; l’examen
bacteriologique des produits du pharynx ne donna pas le bacille diphtherique.
Le 6, pas de fifevre. Le 10 de la paleur, sans rien d’anormal. Un lavage
de la bouche fut pratique le m&me jour, et le produit filtre fut injecte
dans le peritoine et nerf sciatique d’un singe.
La m^re ne devint pas malade.
(Of. Tableau VI p. 321.)
Bien que le singe, inocuie avec la secretion buccale, mourut
apr&s 39 jours sans aucun signe de paralysie, il pr4senta des
lesions de la moelle 4pini4re analogues & celles que nous
avons g4n4ralement constat4es chez tous les singes inject6s
avec les secretions des cas abortifs; nous sommes port4s &
croire que ces lesions sont provoquges par le germe de la
paralysie infantile; dans tous les cas nous n’avons trouvd
aucune autre cause pour expliquer la mort des singes. L’ani-
mal de contrdle pr4sentait 4galement des alterations analogues
de la moelle 4pini4re, mais moins 4videntes. On pourrait
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Tableau VI.
Eau de
lavage
Animal d’essai
itesultat
de la bouche
95 c.c.
Cercopithecus fuligi-
nosus, injects 10/XI
19/X11 meurt sans que rien d’anormal eftt £t£ con¬
state auparavant
Eiamen microscopique: Hyper&nie. sans
h^morrhagie; les cellules neurogtiques hyper¬
trophies sur une grande etendue; un grand nombre
des cellules nerveuses de la moelle cervicale sont
plus ou moins alt&es, leur protoplasme contract^
est homogfcne, les unes sont fences, les autres
p⩽ il y a de la caryolyse. Une bonne partie
aes cellules radiculaires de la moelle lombaire sont
d£g£n£r£es de la m 6 me manifere; pas de neurono¬
phagies.
Un Macacus rhesus neuf fut iniecfe le 21 d^cembre
dans le nerf sciatique avec de l’^mulsion filtr^e.
15/1, il a mauvaise mine, respire en haletant et
primpe mal. Le 16/1 il tient la main gauche lev£e
lorsqu’il se d^place; mais il peut cependant s’en
semr pour courir et grimper. Le 17/1 il est trfes
malade et meurt dans la soiree. La n4cropsie
r 6 v£la une pneumonie r4cente des deux poumons.
Examen microscopique: Hyper 6 mie nette, 5 a
et lh des h^morrhagies dans la substance grise;
de Thypertrophie d’un grand nombre de cellules
neurogliques; la plupart des cellules radiculaires
sont peu alt£r£es, la substance tigroide est assez
bien conserve; un petit nombre a’entre elles est
pourtant d 6 g 6 n^r 6 ; le protoplasme est re tracts,
ionc4, homogfene; il y a ae la caryohrse; ces lesions
sont le plus marquees dans la region lombaire.
mettre ces alterations sur le compte de la pneumonie aigu§.
Mais inversement on ponrrait tout aussi bien admettre que
celle-ci a 6t6 secondaire et s’est d6velopp4e par suite de la
faiblesse des muscles respiratoires.
Le garQon portait le germe de la paralysie infantile dans
la secretion buccale et pharyngienne 10 jours apr&s le debut
d’une affection aigue. II est fort probable par consequent
que la maladie infectieuse, dont il venait de se remettre, etait
bien une poliomy61ite qui ne se manifesta que par de la rougeur,
de la tumefaction des amygdales, de la fi&vre, des maux de
tete, du malaise sans aucun signe de paralysie.
Observation VI.
Karl Oscar Harry F., ag£ de 10 ans, demeurant dans une com¬
mune oil un grand nombre de personnes furent atteintes de paralysie in-
22 *
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C. Kling, W. Wernstedt et A. Petterason,
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fan tile cet automne. Bien-portant jusqu’au 15 septembre, il eut ce jour-lk
des naus&s et des vomissements et dut s’aliter. 11 se sentait fatigue, avait
l’air abattu et b&illait sane cease. H eut encore des vomiasementa r£p£t&
le lendemain rnSme en dehors des repas; il 4tait apathique et fatigu6, mais
n’avait ni douleurs, ni maux de t£te; il n’avait pas d’app4tit. Le 17. il
avait des vomissements en dehors des repas com me les jours precedents,
mais l’app4tit 4tait devenu un peu meilleur; il etait constipA Ce ne fut
que le huit&me jour qu’il eut une selle normale, h la suite d’un purgatif.
Mais la constipation persists.
Il entra k l’Hospice public des enfants h Stockholm, le 27 sep-
tembre. Il resta assez apathique et dorma beaucoup pendant les premiers
jours, les lfevres et les joues etaient cyanos&s, le pouls trfes variable, tantdt
ralenti (66 pulsations k la minute), tantdt acc£l£r£ (120 it la minute). Le
signe de Trousseau dtait trfes net, le cceur n’dtait pas dilate, les bruits
dtaient normaux; il mangeait bien, mais n’avait pas de selle sans lavement;
il n’eut pas de paralysie ni d’ataxie, pas de troubles de la sensibility, mais
de la parole; it r£pondait tardivement et avec lenteur aux questions qu’on
lui posait. La temperature matin ale et vespdrale oscillait entre 37.0 et 37.6.
Cet etat dura jusqu’au 14 octobre, il eut des selles rdguliferes chaque jour
h partir de ce moment sans purgatif. Entretemps le cceur 6tait redevenu
bon, le pouls £tait de 70 k 80 par minute et le malade reprit sa gaite
habituelle. Il quitta l’hospice le 29 novembre.
Les symptdmes quc presents le malade: vomissement en dehors des
repas, apathie, constipation prolongee, troubles cardiaques, raies de Trousseau,
indiquaient bien une affection du syst&me nerveux central, car le malade
n’etait atteint d’aucune autre affection aigue et venait d’un endroit con-
tamine par la paralysie infantile. On est done en droit de supposer que la
maladie dont il Stait atteint 6tait bien une forme de la paralysie infantile.
Ce fut d’ailleurs k ce diagnostic que s’arrdta le mddecin en chef Mr. le
Docteur Medin.
On fit un lavage de la bouche chez ce malade le 31 oc¬
tobre et le prodnit filtrd fut inoculd dans le pdritoine et dans
le nerf sciatique d’un singe.
(Cf. Tableau VII p. 323.)
Le singe inoculd avec la sderdtion buccale du malade, eut
19 jours apr&s l’injection des symptdmes qui firent soupQonner
la poliomydlite aigud, mais il ne succomba que le 40 iime jour.
Les lesions de la moelle dtaient identiques k celles que nous
avons trouvdes chez plusieurs singes et furent reconnues
comme etant dues k la poliomydlite par l’inoculation expdri-
mentale de la moelle h des animaux de controle. Comme la
durde de l’incubation, les symptdmes et les ldsions anatomo-
pathologiques concordent avec celles qu’on trouve chez les
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Mode de propagation de la paralytic infantile Ipidemique. 323
Tableau VIL
Eau de
lavage
Animal d’essai
B&ultat
de la bouche
100 c.c.
Macacus rhesus, in¬
ject 3/XI
22/XI il grimpe lentement, mais court encore aseez
vite. 8/11 u grimpe lentement et par saccadea.
11 /XII grimpe mal en faisant des efforts, les
pattes de derrilre fl4chissent ; lorsqu’il saute. Le
11 dlcembre dans la soiree. Il est couche dans le
fond de sa cage, il ne se diplace gufere. 13/XQ
il meurt.
Examen microscopique: Hyperlmie, hemor¬
rhagica, mais pas d’inmtration cellulaire inconte¬
stable; hypertrophie des cellules de la neuroglie,
forte dlgenlrescence des cellules nerveuses qui sont
rltractes, fondes, vacuolisles. souvent envahies et
parfois presque dlvorles par les cellules de l’entou-
rage toujours peu nombreux; il y a de la caryolyse.
Un Cercopithecus ruber neuf recut une emulsion
filtrle de la moelle dans le peritoine et dans le
nerf sciatique. Il raourut subitement le 7“" jour.
Sa motile prlsentait h peu prfcs les mimes alterations
que ctile au singe precedent
singes atteints de poliomy61ite, nous nons croyons autorisds k
poser le diagnostic de cette affection chez le singe inocul6
avec la lavnre de la bouche. D’ailleurs ce diagnostic s’est
v6rifi6 chez l’animal de contrdle qui presents des lesions
identiques de la moelle 6pinifere.
La presence da microbe de la paralysie infantile, dans la
cavitd buccale du garqon est done ddmontrde. N6anmoins cela
ne prouve pas que la maladie de ce dernier ait 6t6 provoqnde
par ce germe, c. a. d. qu’elle repr4sentait en r6alit6 une forme,
pea commaae, de la paralysie infantile. Cependant, comme
le tableau cliniqae cadre en qaelqae torte avec celui d’une
forme abortive de la maladie de Heine-Medin et comme le
malade venait d’nn endroit containing, nous devons admettre
qu’il s’agiss&it bien de cette maladie. Poor traneber la
question, il eat falla constater dans son sang la presence
d’un anticorps du microbe de la poliomy£lite, ce que nous
n’avons pa faire jusqu’k present. Si nous nous trompons dans
le diagnostic, le malade doit dans tous les cas 6tre consid6r6
comme an porteur de germe, ce qai revient au m§me au point
de vue 6pid6miologique.
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324 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
La presence du microbe de la poliomy61ite aigue
est done d6montr6e dans la s6cr6tion buccaledes
trois personnes n’ayant 6t6 en contact manifesto
avec des malades atteints de paralysie infantile
averse et dont la maladie ne pr£sentait que des
sympt6mes vagues, qui ne la firent soup^onner que dans
un senl cas grSce 4 la grande experience clinique du docteur
Me din. Quant au deux autres malades ils n’eurent pas de
symptdmes qui rappelassent la paralysie infantile typique, sauf
dans l’une des families ou quelqu’un pr£senta quelques signes
pouvant etre consid6r6s comme resultant d’une irritation c6r6-
brale 16g4re.
Outre ces trois families nous en avons encore examine
quelques autres, mais sans resultat.
Bien que nous soyons convaincus que les personnes
precitees ont 6te reellement atteintes de la paralysie infantile
nous ferons remarquer encore une fois que la presence
du microbe chez elles ne tranche cependant pas la question
d’une fa$on decisive, il faudrait pour cela demontrer la pre¬
sence d’anticorps dans le sang. Neanmoins personne ne
saurait nier que notre manure de voir est la plus vraisemblable
et d’ailleurs le diagnostique, fut-il meme erronne, cela ne
changerait rien aux resultats de nos recherches (puisque nous
n’avons eu 4 faire qu’4 des porteurs de germe de la polio-
myeiite). C’est pourquoi nous nous sommes abstenus de
pousser nos recherches plus loin dans ce sens pour 6viter
des frais trop eieves et aussi parce que nous efimes trfcs
souvent des difficultes de nous procurer les animaux d’expSri-
ence en nombre suffisant.
C. Personnes tout 4 fkit bien-portantes dans l’entourage de
oas averes.
Observation VII.
La famille G. se compose de 4 personnes. Le p&re et
la mfcre 6taient en bonne sant£. La petite Lisen, ag6e d’un
an, eut du coryza vers le premier octobre. Elle ne presents
pas d’autres symptomes et gu6rit rapidement.
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid£mique. 325
Vanja Berta E. G., fille adoptive fig^e de 7 ana, avait fryquenty
lY-cole, sa classe fat ferm6e, parce que dee cas de paralysie infantile
s’4taient d^clar^s. Elle devint malade le 17 octobre: elle eut de maux de
tfite, des frissons et de l’apathie. Elle s’alita le 19, parce qu’elle ressentit
des douleurs dans la jambe gauche, elle se leva h plusieurs reprises le 20
et le 21; elle avait un peu de faiblesse dans la jambe, mais pas de maux
de tfite.
Elle entra le 22 h l’hbpita) des infectieux; le sensorium n’ytait pas
entrepris; pas de douleurs, pas de raideur de la nuque, pas de sensibility
h lupine dorsale; la pupille gauche un peu plus dilatye que la droite;
toutes deux ryagissaient h la lumifere; nystagmus lyger lore de mouvements
extremes du c6ty. Pas de parysie des muscles brachiaux ni du tronc, mais
lygfere parysie de la jambe gauche, la droite ayant oonservy sa force nor-
male, la malade pouvait marcher sans aide mais en boitant de la jambe
gauche. Les rtf flexes plantaires et du tendon d’Achille et les ryflexes ab-
dominaux ytaient normaux; les ryflexes rotuliens affaiblis, ceux du triceps
un peu accentuys. Le pharynx lygferement hyperymiy. Le 30, elle boitait
encore un peu de la jambe gauche. Le 15 novembre, jour de sa sortie de
l’hbpital, son ytat gynyral ytait bon, elle ne boitait plus qu’un peu de la
jambe gauche; les ryflexes rotuliens ytaient normaux.
On fit un lavage de la bouche chez la petite Lisen G. le
26 octobre et le produit filtrd fut injects le jour m£me dans
le nerf sciatique d’un singe.
(Cf. Tableau VIII p. 326.)
Le singe inocul6 avec l’eau de*lavage de la bouche ne
presents pas d’alt^rations importantes de la moelle, tandis que
l’animal de controle en eut de tr&s considerables; des lesions
trfcs graves des cellules nerveuses furent egalement constatees
sur le second singe de controle. Les trois animaux pr6sen-
taient de plus des paresies evidentes; il n’y a pas de doute
qu’ils furent atteints de poliomy£lite experimentale. II en
resulte done que la lavure buccale de la petite Lisen contenait
le microbe de la paralysie infantile.
II est assez probable qu’elle a pris le virus chez sa soeur
qui fut contamin6e k l’6cole oil elle s’6tait servie d’un livre qui
n’6tait pas tout h fait propre. II est encore possible que la
contamination ait pu se faire par d’autres voies. Nous croyons
cependant que le coryza dont souffrait la fille cadette vers le
commencement d’oetobre, n’avait rien & faire avec la paralysie
infantile.
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326 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
Tableau VIII.
Eau de
lavage
Animal d’essai
R&ultak
de la bouche
95 c. c.
Macacos rhesus, in-
ject4 26/X
20/11 grimpe lentement et par saccades, ae laisse
prendre iacilement. 22/XTgrimpe trfes mal, court
a pas lents et tombe stir le nez en sautant, a de
la faiblesse des pieds. 23/XI 4 tat stationnaire,
meurt le 25/XI. La n&ropsie rt:v 6 la de la pneu-
monie cas£euse du lobe inf4rieur gauche, des tuber-
cules diss£min 4 s dans le lobe sup 6 rieur et dans le
poumon droit ainsi que dans le foie.
Examen microscopique: Hyper&nie, h4mor-
rhagies, pas d’infiltration oellulaire, hypertrophie
des cellules de la neuroglie, surtout des cellules
de la gaine des neurones. Les cellules nerveuses
sont assez bien conserves, mais pr&entent cepen-
dant un protoplasme 14gbrement nomogkne et plus
fonc£ que d’onlinaire. Quelques-unes sont en d 6 -
g4n£rescence, il y a 5 a et Ik des neuronophagies.
Un Cercopithecus neuf rejut le 29 novembre
une Emulsion non filtr£e de la moelle dans les
deux nerfs sciatiques. Le 5 d4cembre il grimpe
avec difficult^ et a de la faiblesse dans toutes les
extr£mit£s, il meurt le 6 /XII. A l’examen micro¬
scopique: hyper^mie et forte d£g 6 n 6 rescence de la
plupart des cellules radiculaires.
On injecta une Emulsion filtr^e de cette moelle
dans le p&itoine et dans le nerf sciatique d’un
autre Cercopithecus neuf. Le jour il reste
ass is dans le fond de sa cage et courbe l’4chine;
. il ne se d£place pas et quand on l’y oblige il va
k pas lents en boitant et en trainant La patte
gauche; quand on le renverse il ne se lfeve qu’avec
difficult^; il meurt le lendemain. Il ne presents
k l’autopsie que deux petite foyers pneumoniques
du poumon droit. A l’examen microscopi¬
que peu d’hyper£mie, pas d’h&norrhagies, mais
hypertrophie (rune partie des cellules ae la neu¬
roglie, la plupart des cellules radiculaires sont for-
tement d4ggn£r&s, r 6 tract 6 es, foncdes, vacuolis&s
et consid&ablement envahies par les cellules de
la gaine.
Observation VIII.
La famille I. se compose de 3 membres, plus deux
servantes.
Au commencement de l’ 6 t£, quand la paralyse infantile fit son appa¬
rition dans le quartier de Stockholm oil demeurait cette famille, le petit
Tom Erik I., &g4 de 3 ans, fut envoy 6 en Scanie, contr^e alors indemne
de paralysie infantile. Les cas de maladies 6 tant multiplies dans le
voisinage, la famille quitta pour aller s’installer le 1 “ octobre dans un autre
quartier, oil l’4pidemie ne s’&ait gubre d(ivelopp£e. Le p£re et la servante
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Mode de propagation de la paralysie infantile 4pid4mique. 327
Ellen N. restbrent tout l’4t4 en ville; le premier seul pasaa son cong4, au
moia d’Aoflt, en Scanie, oil ae trouvait la mfere. Celle-ci ne fit pendant ce
temps que quelquea yiaitea It Stockholm oil elle rentra dans la dernifere
quinzaine de aeptembre pour pr4sider au d4m4nagement Quant h l’autre
servante, Elsa L, elle resta tout le temps avec l’enfant qui ne rejoignit lea
aiena que vers la mi-octobre.
Celui-ci tomba malade le 26 octobre dans la soiree, pr4aentant dea
vomissements et de la fibvre. Le 27 dans la matinee, il 4tait trfes
affaibli et avait de temperature 38,5—39,2, le r4flexe rotulien 4tait exag4r4
du cdte droit, normal du c4t4 gauche; il eut une 14gfcre attaque de oon-
vulaiona dnna la soiree, puis de la raideur au cou, dea spasmes dea muscles
dea bras. Le 29, le r4flexe rotulien normal dea deux c6t4a, il est absent du
c6t4 droit le 30 dans la matinee et afiaibli du c6t4 gauche; il manquait dea
deux cdt4s dans la soiree. Le 31, l’4tat s’etait un peu am41ior4.
L’ enfan t entra le l er novembre h l’h6pital dea infectieux: son 4tat
g4n4ral 4tait aaaez bon; plaintif et morose, sans somnolence, 0 avait le
cou raide; l’4pine dorsale n’4tait pas sensible h la preaaion, maia il avait
de la flaccidite 4vidente dea muscles cervicaux; la force dea bras 4tait
satisfaisante, celle dea jambes, surtout de la jambe droite, 4tait diminu4e.
Le malade pouvait se tenir but lea jambes, maia n’avanjait qu’en train ant
lee pieds; lea reflexes plantaires 4taient normaux de deux c6t4s; lea
r4flexes cr4maet4riens et abdominaux 4taient absents, ceux du tendon
d’Achille et lea reflexes rotuliens paraissaient affaiblis. Le 3, l’4tat s’etait
am41ior4; l’enfant tranapira beaucoup. Le 4, il ressentit dea douleun dans
lee jambes; la force dea bras et dea jambes n’avait pas change; il pouvait
ee tourner dans le lit; bien que la palpation ne r4v4lait aucune aensibilite,
il ressentait dea douleura quand on lui aoulevait lea jambes. Dana la nuit
du 5 il eut des douleura dans le dos et dans lea jambes; la palpation dea
jambes et dea bras 4tait douleureuae, le dos n’etait pas sensible; la flac¬
cidite dee musclues cervicaux avait diminu4. Le 7, son 4tat 6tait meiUeur,
bien que lea mollets fusaent toujours un peu sensibles, il parvenait h remuer
lea jambes plus facilement qu’auparavant. Le 8, il pouvait ae tenir sur lea
jambes et marcher avec assistance. Le 10, la sensibilit4 des mollets avait
preaque disparu et la force revenait dans lea jambes. Le 12, amelioration
progressive, demarche meilleure; lea reflexes rotuliens etaient encore toujours
affaiblis. Le 17, plus de par4aie des muscles du cou, dea bras ou du tronc;
la force dea jambes quoique diminu4e encore surtout du c6t4 gauche, avait
suffisamment augments pour permettre aux malade de marcher avec assi¬
stance, d’un paa encore mal assure, car il flechissait assez facilement
Lea reflexes rotuliens et cremasteriena ainsi que ceux du triceps 4taient
toujours affaiblis, tandis que lea reflexes abdominaux et plantaires etaient
redevenus normaux. Il quitta l’hdpital dans cet 4tat
On fit an lavage de la bouche et de l’intestin chez Mr. I.
et chez la servante Ellen N. le 2 novembre et les produits
filtr£s furent inocul6s dans le p6ritoine et dans le nerf scia-
tique de singes.
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328
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
Tableau IX.
Cas
Eau de
lavage
Animaux
d'essai
R&ultats
Mr. I.
de la bouche
100 c. c.
Macacus rhesus,
inject^ 3/XI
26/1 1912, meurfc sans avoir pr6sent6 de para¬
lysie. La n&ropsie r£v£la de la tuberculose
peu avanc^e aux poumons et des tubercules
Isolds dans le foie et la rate ainsi qu’une pleu-
rdsie fibrineuse du c6t6 droit
Examen microscopique: Hvper^mie^hemor-
rhagies assez fr&juentes; les cellules radiculaires
sont en grande partie plus ou moins alt£r£es, le
noyau des mieux conserves, as on aspect normal,
tandis que le corps protoplasmique est homo-
gfcne; un grand nombre de cellules nerveuses
sont ratatin&s. fonc^es, pr&entent de la caryo-
lyse nette, de la neuronophagie provoqu^e par
l*hypertrophie de cellules neurogliques de la
galne. C est dans la legion lombaire que les
lesions sont le plus prononc4es.
de la bouche
40 c. c.
Macacus cyno-
mdjus, injects
9/XI court et grimpe plus lentement et se laisse
prendre avec facilite. 10/X1 court plus vive-
ment, mais grimpe toujours lentement et par
saccades. 5/1 gnmpe lentement. 8/1 grimpe
trfes lentement en faisant des efforts, tremble
de tout le corps, tient la main gauche dans la
position de la paralysie radiale mais s’en sert
pour saisir et pour grimper; meurt le 10/1. La
n^cropsie d^cela des tubercules isol£s dans les
poumons, le foie, la rate et le p^ritoine.
Examen microscopique: Hyper^mie,h^mor-
hagie, augmentation des globules blancs dans
les vaisseaux; les cellules radiculaires pr&entent
les m&mes alterations que celles du singe pre¬
cedent, mais plus intenses encore.
de Tintestin
95 c. c.
Macacus cvno-
molgus, injecte
6 /XI
7/XI grimpe lentement et avec difficulte. 8/XI
court k pas trfes lents, trainant les jambes, boite,
il tombe sur le ventre, quant il veut sauter.
9/XI etat stationnaire, paresie nette de la jambe
gauche; il marche clopin-clopant, ne peut plus
grimper, fait des essais mais ne parvient pas k
se soulever par les bras. 10/XI mouvements
encore plus lents et sans force, grimpe et saute
avec difficult^, il n’arrive pas k appr^hender,
quand il grimpe et doit se retenir avec les pieds.
11/XI il semble assez vif au d£but mais aprfes
quelque temps il a k peine la force de grimper
et dans la soiree il a de la faiblesse des extr£-
mit^s; il court lourdement, le dos courbd, les
genoux flechis, le bras droit en dehors. 12/XI
paralysie de la main droite, qu’il tient dans la
E sition de la paralysie radiale et marche sur
phalanges; il grimpe avec la plus grande
difficult^ et retombe. Dans la soiree u reste
assis et balance la t£te lateralement. 13/XI il
est couch£, ne se d£place plus et pousse de
temps en temps un soupir, il est sacrifi6.
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Mode de propagation de la paralysie infantile 6pid£mique. 329
Cas
Mr. I.
Eau de
Animaux
lavage
d’essai
R&ultats
de
95
Tintestin
c. c.
Macacus cyno-
molgus, injects
6/XI
Exa m en micros copique: La moelle 6pinifcre
ne pr&ente paa de l&ions incontestables, quel-
ques-unes des cellules radiculaires sont un peu
homogfcnes et fonc4es, les autres sont bien con¬
serves et leur substance tigroide est bien
apparente.
On mjecta le 16 novembre une Emulsion filtr^e
de la moelle dans le p£ritoine et le nerf scia-
tique d’un Macacus neuf. Le 19/XI il grimpe
lentement et par saccades, il reste dans cet
6tat jusq’au 30/X1. A ce moment il grimpe
trfes xentement et marche k pas lents, solennels,
mais refuse de courir. 1/X1I il est couch<5, se
remuant trks peu, il a ae la diarrh^e. Il est
sacrifte, moribond dans la soiree. L’ex amen
microscopique ne r6v61a que peu d’alt£-
rations dans la moelle cervicale et lombaire,
tandis que la region dorsale pr^senta de Thyper-
6mie, hypertrophic des cellules neurogliques,
forte d6g£n6rescence et neuronophagies des cel¬
lules nerveuses.
Ellen N.
de Tintestin
80 c. c.
Macacus cyno-ll/XI grimpe un peu lentement et par saccades.
molgus, injects 30/XI grimpe avec une lenteur trks marquSe, court
n txrT I v _x.'_•_ i _j_x l. j** i___x.
7/XI
k pas lents, tire les jambes dont la faiblesse est
trfcs manifeste et plus tard il traine le dos du
pied gauche sur le sol. 1/XII il est moribond
et succombe dans la soirSe.
A l’examen microscopique: HyperSmie,
hSmorrhagies frSquentes dans la substance grise
ainsi que aans la substance blanche, notamment
dans la moelle cervicale; pas d’infiltration cellu-
laire; la plupart des cellules radiculaires ont de
protoplasme nomogkne, fortement colors, quel-
ques-unes sont rStractSes et vacuolisSes; il y a
encore de la caryolyse; les neuronophagies sont
rares.
de la bouche Macacus rhesus,
60 c. c. injects 4/XI
de Tintestin
95 c. c.
Macacus cyno-
mol^us, injects
27/XI grimpe lentement, court mal et en tirant
les iambes de derrikre, aprfes quelques temps il
tombe et ne peut se relever, plus tard il reste
couchS et ne se dSplace gukre; la respiration
est rapide et superncieUe; il meurt le 28/XI.
A Texamen microscopique: Forte hyper-
Smie, hSmorrhagies dans la moelle SpiniSre et
dans le bulbe, une grande quantity des cellules
nerveuses de la rSgion lombaire sont dSgSnSrSes,
les unes homogenes, retractSes et deformSes,
foncSes, souvent envahies par les neuronophages
et reduites par eux en petit corps StoilSs,
d’autres sont p&les et comrae dissoutes, les
noyaux en caryolyse; les cellules de la neuroglie
sont hypertrophies, surtout celles qui entourent
les neurones (cfr. Fig. 3).
Le 8/XI ne court plus aussi bien qu’auparavant.
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330
C. Kling. W. Wernstedt et A. Pettersson,
Fig. 3. Partie de la substance grise du Macacus cynomolgus inocul6
avec de I’eau de lavage de l'intestin de Ellen N., observation VIII. tableau IX.
Grand nombre de cellules claires («. n. h.) autour des capillaires dans la sub¬
stance neuroglique. Fixation, coloration et grossissement commc auparavant.
On r6p6ta le lavage chez le p&re et la servante Ellen N.
le 8 d^cembre, la mfere et la servante Elsa furent soumises
a la m&me operation.
Tableau X.
Cas
Eaux
de lavage
Animaux
d’essai
E^sultat
i
Mr. I.
de l’intestin
120 c. c.
Cercopithecus
sabaeus, inject^
20/XII
Le 27/XII ne grimpe plus, reste assis dans le
fond de sa cage, ou bien court & pas lents en
trainant les pieds, tombe parfois sur le nez ou
sur la jambe gauche. Le 28/XI1 il est couch6
presqu’immobile sur le fond de la cage; il est
sacrifiS le jour m£me.
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid£mique. 331
Eaux
Animaux
de lavage
d’essai
Cas
R£sultats
Examen microscopique: Infiltration cellu-
laire peu considerable de la pie-mfere; hyperemie
intense, infiltration cellnlaire faible de la moelle,
hypertrophie des cellules neurogliques, une
grande quantity des cellules radiculaires sont
homogfcnes, retractees et reduites par des neurono¬
phagies en petits corps etoiles, ii n’en reste
pariois qu’un reticulum k fils epais; les noyaux
sont en caryolvse. Les vaisseaux sont presque
tous remplis de nombreux globules blancs; il
y a parfois m&me en certains points une faible
infiltration cellulaire autour des vaisseaux.
Mme. I.
de la bouche
70 c.c.
Macacus rhesus,
injecte 21/XII
Le 22/XII meurt de peritonite bacterienne.
Elsa I.
de la bouche
80 c. c.
Cercopithecus
Bumetti, in¬
jecte 22/xn
Le 23/XII il est couche sur le fond de sa cage,
il ne se deplace trfcs peu et k pas lents, il n’y
a pas de naccidite des extremites, on observe
un leger strabisme convergent, il meurt le
25/XII. Ce singe avait etc isoie dans une cage
prealablement nettoyee et desinfectee.
Examen microscopique: Hyperemie, ced^rne
intense, forte degenerescence "des cellules ner-
veuses dont il ne reste en general que des petits
grumeaux dechiquetes, fonces d’aspect homo-
gfene et souvent vacuolises; il y a peu ae neurono¬
phagies.
Un Cercopithecus neuf fut inocuie dans le nerf
sciatique avec Pemulsion de la moelle epinifcre.
H mourut paralytique 20 jours apr£s. L’examen
microscopique revela de Phypertrophie des cel¬
lules neurogliques k de la degenerescence des
cellules nerveuses de la moelle epinifcre.
de Pintestin
110 c. c.
Cercopithecus
sabaeus, injecte
20/XII
Le 55/XII meurt sans qu’on n’eut rien constate
d’anormal la veille.
Examen microscopique: Hyperemie, aug¬
mentation des globules blancs dans les vais¬
seaux, ced^rne, mais pas d’infiltration cellulaire;
hypertrophie des cellules neurogliques, degene¬
rescence des cellules nerveuses.
On injecta une emulsion non filtree de la moelle
dans le nerf sciatique d’un Cercopithecus fuli-
ginosus neuf le 3 janvier. 8/II il est amaigri,
a Pair fatigue, marche et grimpe avec difficulte,
tombe facilement, dans la soiree il grimpe tres
mal, a de la faiblesse dans les jambes, surtout
dans la droite; le reflexe rotulien a disparu du
c6te droit, il est affaibli du c6te gauche. L’animal
meurt le 9/H.
Examen microscopique: Hyperemie consi¬
derable, hemorrhagies frequentes, peu de cellules
neurogliques hypertrophiees, degenerescence et
neuronophagie aes cellules nerveuses.
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332
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
Eaux
Animaux
de lavage
d’essai
Cas
R£sultats
On injecta le 2 tevrier une Emulsion non filtr^e
de la moelle du premier singe dans le nerf
sciatique d’un Macacus rhesus neuf. II mourut
subitement le 4 mars.
Examen microscopique: Hyper^mie, h£mor-
rhagies, peu d’hypertrophie des cellules neuro-
gliques, a£g£n£rescence considerable des cellules
nerveuses, neuronophagies.
Ellen N.
de la bouche
115 c. c.
Cercopithecus
sabaeus, injects
le 22/XII
Le 26/XII paralysie du bras droit, il cherche
cependant encore k saisir de la main. Le 27/X1I
il reste assis le dos courts et ne se deplace
gufcre. il ne peut se lever lorsqu’on le renverBe,
u meurt dans la soiree.
Examen microscopique: Hyperemie, h6mor-
rhagies, degenerescence d’une partie des cellules
radiculaires.
|de Tintestin
95 c. c.
Cercopithecus
ruber, injecte
22/XII
Le 27/XII la marche est chancelante et mal as-
suree, Pechine flechit, il tombe sur le nez en
voulant courir. Dans la soiree il est toujours
dans le m£me etat et a de la diarrhee. Il meurt
le 28/XII. A l’autopsie, on trouve de la pneu-
monie recente du lobe inferieur du poumon
droit. Ce singe fut isoie pendant toute la duree
de Pexperience dans une petite cage pr^alable-
ment nettoyee.
Examen microscopique: Hyperemie, h6mor-
rhagies, mais pas d’infiltration cellulaire, hyper-
trophie des ceuules neurogliques, degenerescence
d’un assez grand nombre des cellules nerveuses,
qui sont retractees, foncees et vacuolisees; il y
a encore des neuronophagies occasionnees pax
les cellules de la gaine des neurones.
On injecta le 4 janvier une emulsion non filtree
dans le nerf sciatiaue d’un Cercopithecus et le
12 une emulsion nltr£e dans le p^ritoine et le
nerf sciatique d’un Macacus cynomolgus. Le
premier fut trouve mort le 7 janvier. Sa moelle
pr&enta des alterations identiques & celles du
singe precedent, peut-6tre m&me un plus ac-
centuees. Le second singe presenta une faiblesse
apparente des deux jambes le 13 fevrier; il
gnmpait p^niblement. Le 17/11 la faiblesse
augment#, il marche en vacillant et tombe. Le
18/11 paralysie nette du pied droit et paresie
de la jambe. Le 19/11 il marche trfes lentement
en entrecroisant les jambes de derrifcre et en
chancel ant de temps k autre, les jambes ftechis-
sent m&me parfois et il tombe. Le r^flexe ro-
tulien est plus faible du c6t4 droit que du c6t£
gauche, il meurt le 20/IL A l’autopsie: tuber-
culose avanc^e des ganglions bronchiques, tuber-
cules dans le foie et dans la rate.
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid£mique. 333
Cas
Eaux
de lavage
Animaux
d’essai
Resultats
Examen microscopique: Hyper^mie insigni-
fiante, mais et \k des h^morrhagies; pas
d’infiltration cellulaire £vidente; hypertropnie
des cellules neurogliques autour des neurones,
d4g6n6rescence d’une grande partie des cellules
nerveuses qui sont retract^es, r&luites en gru-
meaux irreguliers ou en corps 6toil£s h. proto-
plasme fonc4 et homog≠ les noyaux sont en
caryolyse; les cellules nerveuses d6g6n6r6es sont
souvent fortement rong&s par les cellules neu¬
rogliques de la gaine.
Deux des singes dont nous nous sommes servis pour les
recherches sur Mr. I. ont malheureusement 4t6 affectss de
tubercnlose dont l’influence doit gtre prise en consideration.
Ndanmoins il n’est pas douteux que le pgre gtait porteur de
germe de paralysie infantile, car il est peu probable que la
tubercnlose ait 6t£ cause de la d6g6n£rescence des cellules
radiculaires. C’est d’ailleurs ce que dgmontrgrent les experi¬
ences faites chez un autre singe avec les eaux de lavage, car
le dernier presenta les alterations tout k fait caracteristiques
de la poliomyeiite aigug. On ne saurait douter un seul instant
que les singes inocuies avec les eaux de lavage des servantes
n’aient 6t6 r6ellement atteints de poliomyeiite exp6rimentale,
si Ton tient compte des symptdmes cliniques et des alterations
pathologiques aiusi que les experiences sur les animaux de con-
trdle ayant succombes en presentant des lesions considerables
de la moelle gpinigre sans alteration des organes internes. Par
consequent des cinq membres de la famille Tun a eu la polio¬
myeiite et trois autres avaient le germe sans gtre malade.
Quant au cinquigme, son cas n’a pu gtre eiucid6 car le singe
qui servit k l’expgrience succomba de peritonite bact6rienne.
On ne peut rien en dire de certain quant k la faqon dont
s’est faite la contamination. Il semble trgs probable que le
pgre ou la servante Ellen N., ou tous deux en mgme temps,
ont pris le germe en 6tg pendant leur sejour k Stockholm et
que l’enfant fut infectg par eux aprgs sa retour. La pgriode
d’incubation plaide en faveur de cette hypothgse, mais il n’est
pas impossible non plus, qu’il ait pu gtre infectg ailleurs et
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334 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
qu’il ait ensuite containing les autres. Cette question n’a
d’ailleurs qu’un int6r6t secondaire pour nous.
0bservation IX.
Famille K. se compose de 8 membres, k savoir:
Le pfere Carl Victor K., kg6 de 34 ans,
la mkre Agnes K., kg6e de 43 ans, et les enfants
Marie Elisabeth K., fig^e de 15 ans,
Frans Oskar K., kg6 de 13 ans,
Nils Gustaf K., ag6 de 12 ans,
Julius K., &g6 de 7 ans,
Ernst JL, &g6 det 4 ans, et
Karin Elisabeth K., &g6e de 9 mois.
II n’y avait pas eu de cas de paralysie infantile dans la region Isolde
qu’habitait cette famille. Aucun membre de la famille n’avait quitt6 depuis
longtemps le domicile, lorsque, le 19 octobre, le pfcre se rendit k Stockholm
avec le petit Ernst K., qui avait de grosses amygdales pour aller con-
suiter le m6decin k ce sujet. Celles-ci dtlrent £tre enlev6es. Vers le 14 no-
vembre Ernst se heurta contre une porte, les parents remarqufcrent peu
de temps aprfes qu’il avait la jambe gauche raide et qu’il l’a remuait dif-
fidlement. Le 16, dans la soiree, il eflt des maux de tSte et presents de
l’hyperesth6sie de tout le corps. La nuit du 19 il eut 39,9° fi&vre, des
maux de t£te intenses et des contractions spastiques surtout des muscles
du bras et de la jambe gauche ainsi que du visage. Le 23 hyperesth&ie
de tout le corps; il tient la t£te recourb^e et ne parvient pas k s’asseoir, il
tombe chaque fois qu’il essaye de se lever; le bras droit ainsi que les
jambes sont complttement paralyses et le bras gauche considSrablement
par^siA Les reflexes rotuliens et abdominaux ont disparu; il n’a pas de
constipation.
Le petit Julius K., fut pris de maux de t£te et de vomissements
le 17 novembre; il garda le lit une demi-journ^e, le 18, puis redevint
bien portant.
On fit des lavages de la bouche et de l’intestin le 23 no*
vembre chez tous les membres de la famille sauf chez Julius,
Ernst et Karin Elisabeth. On injecta de ces produits dans
le p6ritoine et le nerf sciatique de singes.
Tableau XI.
Cas
Eaux
de lavage
Animaux
d’essai
R4sultats
Carl
Viktor
K.
de la bouche
95 c. c.
Macacus rhesus,
injects 27/XI
Demeura en bonne sant4 plus de deux mois, puis
mourut de tuberculose trois mois environ aprfcs
l’injection.
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid£mique. 335
Cas
Eaux
de lavage
Animaux
d'essai
R^s ul tats
de l’intestin
150 c. c.
Cercopithecus
Bumetti, in¬
jects le 25/XI
Mourut le 8/XII sans que rien de particulier n’ait
observe la veille.
A l’examen microscopique: Hyper&nie
considerable, beaucoup d\h6morrhagies, dont
quelques-unes assez Gtendues; infiltration faible
par petit foyers, par ci par lit une couche de
cellules autour des vaisseaux de moyen calibre
dans la substance grise; hypertrophic des cel¬
lules neurogliques, un grand nombre des cellules
nerveuses sont retractees, fancies et vacuolis^es,
leur noyau en caryolyse; neuronophagies fr£-
quentes* mais en general peu avancGes.
On injecta le 15 dicembre une Emulsion filtr^e
de la moelle de cet animal dans le peritoine et
le nerf sciatique d’un Macacus neuf. Le 31 jan-
vier il est accroupi dans le fond de sa cage et
meurt vers midi.
A l’ex&men microscopique: HyperGmie,
hSmorrhagies rares, hypertrophie des cellules
neurogliques, d£g£n6rescence d f un grand nombre
des cellules nerveuses, comme dans la moelle
pr6c6dente et neuronophagies fr&juentes.
A|nes
de la bouche
150 c. c.
Cercopithecus
fuliginosus, in
jectl 29/X1
Le 30/XI grimpe par saccades. Le 2/XII il reste
couche presqu’im mobile au fond de sa cage;
il est sacriti^ le jour m£me.
A l’examen microscopique: HyperSmie,
j>etites hGmorrhagies isol6es, mais pas d’infiltra-
tion cellulaire, pas d’hypertrophie des cellules
neurogliques, peu d’alteration des cellules
nerveuses, pas ae neuronophagie.
On injecta de la m£me fa£on un autre Macacus
rhesus avec une Emulsion filtr^e de la moelle.
Il resta en bonne santA
Marie de la bouche
Eisa- 100 c. c.
beth K.
Macacus rhesus,
injects 24/XI
Demeura en bonne sant6.
Frans
Oskar
K.
de Pintestin
100 c. c.
Macacus rhesus,
injects 24/XI
Demeura en bonne sant£.
de la bouche
125 c. c.
Macacus rhesus,
injects 24/XI
Meurt le 28/XII, la moitiS gauche du visage ainsi
que la region r£tro-auriculaire gauche sont un
peu enfltes. La n6cropsie n’en r6v6la pas la cause.
A l’examen microscopique: Hyperemie 16-
gi*re, hemorrhagies rares dans la substance grise,
infiltration cellulaire nette de la pie-mere sur-
tout dans la region lombaire oil ron d6couvrit
quelques diplocoques prenant le Grain; hyper¬
trophie des cellules neuroglinues, degenerescence
d J une grande partie des cellules nerveuses qui
sont retractees, homogfcnes, foncfes et vacuoli-
sees; leur noyau est en caryolyse; les neurono¬
phagies sont peu fr£quentes mais souvent avan-
cees.
Zcit*chr. f. ImmuniWUforschunf. Grig. Bd. XIV.
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336
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
Cas
Nils
Gustaf
K.
E&ux
de lavage
Animaux
d’essai
de Fintestin
Macacus rhesus,
130 c. c.
injects 24/XI
de la bouche
Macacus rhesus,
100 c. c.
injects 24/XI
de l’intestin
Macacus rhesus,
90 c. c.
injects 24/XI
•Resultats
On injecta une Emulsion non filtr^e de la moelle
6pinifere dans le nerf sciatique d’un Macacus neuf
le 2 janvier. Dfes le 7 fevrier il ne grimpe plus,
essave de marcher mais tombe sur le nez; il a
de la par&ie de la main gauche. H meurt le
8/II.
L’examen microscopique r^vfele de Fhyper-
6raie manifeste, des hgmorrhagies fr6quentes, de
la d6g6n6rescence et de la neuronophagie des
cellules nerreuses comme dans le cas pr6c6dent
Demeura en bonne sant£.
Le 2/XII ne grimpe plus aussi vivement que
dordinaire. Le 16/XlI fait des efforts anor-
maux pour grimper; il a peut-&tre un peu de
faiblesse, sp^cialement dans la jambe gauche.
Le 18/XII il est presque constamment assis au
fond de sa cage, grimpe mal et court lourde-
ment; il meurt dans la soirGe.
A I’ex amen microscopique: Hyper^mie peu
considerable, hGmorrhagies surtout (fans la com¬
missure et dans son voisinage, pas d’in filtration
cellulaire de la substance gnse; les cellules ner-
veuses en partie sont assez bien conserves, mais
un grand nombresontratatin£es, homogfcnes, trfes
fonc^es ou bien encore l£g£rement bleu&tres,
d’aspect homogfcne et translucide avec noyau
en cpyolyse; u y a peu de neuronophagies.
On injecta une emulsion de la moelle epinifere
dans le nerf sciatique d’un Macacus rhesus
neuf. Il tomba malade et mourut 16 joins
aprfes d’une pleuresie fibrineuse bilaterale et
d*une pneumonie du c6te droit
Le 21/1 a de la dyspnee et meurt le 26/1. La
necropsie r^vfele une pneumonie tuberculeuse
du poumon gauche et de la tuberculose du foie
et ae la rate.
Dans cette famille oil il y avait un cas typiqne et un
cas abortif de paralysie infantile, les recherches ont fait d6-
couvrir trois porteurs de germe, le pfere et les deux ain£s des
gargons. Le singe auquel on injecta l’eau de lavage intesti-
nale de Frans Oskar K. eut une leptom£ningite bact^rienne
tellement legfcre qu’elle ne fut constatee qu’4 l’axamen micro-
scopique; elle n’6tait dans tous les cas pas suffisante pour
rendre compte de la d£g6n£rescence considerable des cellules
nerveuses et d’ailleurs un singe de contrdle pr6senta les
m£mes lesions mais sans complication infectieuse. Quant au
singe auquel on injecta les lavures provenant de la m^re, les
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Mode de propagation de la paralyse infantile £pid£mique* 337
lesions de sa moelle n’6taient pas considerables; an animal
de controle resta en bonne sant£. Cependant il est fort pro¬
bable qu’il eut aussi la poliomy£lite puisqu’on put provoqner
cette dernifcre expdrimentalement avec les eaux de lavage
provenant des autres membres de la famille.
Quant k la contamination de la famille il est k supposer
qu’elle s’est faite lors de la visite du p&re et du petit Ernst
k Stockholm le 19 octobre. C’6tait le seal endroit du voi-
sinage oh la paralysie infantile se fut montree & cette epoque.
Mais il n’est pas possible de savoir d’une fagon precise, si
c’est le pfcre ou l’enfant qui ont gagne le germe ou tons
deux en mgme temps. On pourrait supposer que l’op6ration
du petit Ernst ait facilite l’infection et que c’est, lui qui doit
etre soupgonne en premier lieu d’avoir apporte la maladie.
On ne doit pas oublier non plus que les enfants Ernst et
Julius sont tombes malades en m§me temps; ce qui n’exclut
cependant pas la possibilite que ce dernier ait pu Stre con¬
taining par le premier; toutefois nous croyons, vu la dur6e
de la pdriode d’incubation, qu’ils furent tous deux containing
par le pfcre. La famille fut isolde et il n’y eut pas d’autres
cas dans le quartier.
Observation X.
La famille L., comprend 5 membres, le pfcre, la m&re et
trois gar^ons de 14 h 19 ans.
a) Torsten L., ag4 de 19 ans, employ^ dans une fabrique aux
environs de Stockholm oU il n’y avait pas eu de cas de paralysie infantile,
logeait chez ses parents h Stockholm. Il tomba malade le 13 octobre: il
eut de la fifevre, des maux de t£te et 3 ou 4 reprises vomissements, le 15
et le 16, chaque fois, pendant une heure environ; il eut aussi des douleurs,
des fourmillements, des picotements et une certaine sensation d’engour-
dissement dans les jambes. Il remarqua le 17 de la faiblesse de la jambe
droite. Cet 6tat persists les jours suivant.
Il entra le 20 h l’h6pital des infectieux; son 4tat g4n4ral 6tait meilleur,
il n’avait pas de raideur du cou, mais ressentait des douleurs l£gferes aux
reins, quand il inclinait la t£te en avant; lupine dors ale n’4tait pas sensible
h la pression et la motility des muscles des bras et du tronc ne laissait
rien h ddsirer; la jambe droite ytait un peu faible ce qui d^terminait une
leg^re claudication; le patient tenait la jambe en extension. Les reflexes
plantaires et rotuliens ytaient assez exag^r4s des deux c6t6s, celui du tendon
d’Achille normal du c6t4 gauche, manquait k droite; les reflexes crernastf'riens,
abdominaux ainsi que ceux du triceps 4taient normaux. Le 24, il eut des
douleurs l('g&res intermittentes dans la region glut/ 1 ale et de la sensibility
23*
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338
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
sur le trajet du nerf sciatique. Le 3 d^cembre, les douleurs disparurent.
Le 10, les mouvements de la jambe droite avaient repris leur puissance
presque nonnale. Lorsque le malade se reposait sur cette jambe il ne
pouvait s’appuyer sur la pointe du pied; il marchait en boitant un peu;
les reflexes rotuliens et ceux du tendon d’Achille 6 taient normaux; il
sortit PhGpital dans cet 6 tat.
b) Gosta L., ag£ de 14 ans, 6 tait bien portant II avait l’habitude
de prendre part aux exercices des „scoutboys“; il rencontrait tous les
dimanches un camarade A. avec lequel il remplissait les fonctions de chef
de patrouille; ils couchaient ordinairement c 6 te & c 6 te. 11 s furent ensemble
le 17 septembre pour la dernifere fois. Le lendemain, le compagnon A.
tomba malade de paralysie infantile.
Le troisifcme frfere, agde de 17 ans, ne fut pas non plus malade.
On fit un lavage de la bouche et de Tintestin chez G6sta L.
le 30 novembre. Les produits, filtrSs sur filtre Heim, furent
injects dans le p^ritoine et le nerf sciatique de deux singes.
Tableau XII.
Eaux de
lavage
Animaux d’essai
de la bouche Cercopithecus fuli;
100 c.c. nosus, inject^ 1 /X
E4sultats
;i-Le 11/XII trouvg mort sans avoir rien present*? de
tl special.
A rexamen microsconiaue: Forte hyper^mie,
des h&norrhagies 5 & et la, les cellules radiculaires
d 6 g£n£r£es en tr£s grand nombre, d£sagr£gees ou
dissoutes, faiblement colortes ou bien ratatinees,
homogfcnes et fonc^es avec noyau en caryolyse;
neuronophagies peu fr 6 quentes mais sou vent irbs
avanc£es. Les lesions sont le plus prononc&ss dans
la moelle lombaire. Les cellules de la come lat^rale
sont le mieux conserves mais en partie alt^r^es
£galement.
On injecta une Emulsion de la moelle dans le nerf
sciatique d’un Cercopithecus neut 11 resta en bonne
santA
de Pintestin
160 c.c.
Macacus rhesus, in-
I jecte 14/XII
Le 21/XII il a mauvaise mine, reste assis en balaneant
le corps, il a de la faiblesse 6 vidente des deux
jambes qui fl£chissent quand il court; peu aprbs il
ne sait pas courir, et sa marche est mal assur^e;
les jambes flageolent. Dans la soiree, la paralysie
des deux jambes est complete et il y a de la parfeie
des bras; il ne parvient pas h se soulever h. l’aide
de ceux-ci ou s’ll y arrive, il retombe h Pinstant.
Il meurt le 22/XII. Ce singe fut isol 6 pendant
toute la dur£e ae Pexp^rience dans une petite cage
pr^alablement d£sinfect4e au lysol.
A Pexamen microscopique: Hyper&nie et
h^morrhagies dans la substance grise, la plupart
des cellules radiculaires de la moelle lombaire sont
fortement degen^rees, r 6 tract£es, homogenes et
foncfes; il v a en outre de trbs fr^quentes neurono¬
phagies mais pas d’infiltration cellulaire incon¬
testable (cfr. fig. 4 et 5).
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid6mique. 339
Les deux singes ont done pr6sent6 des lesions graves de
la moelle Spinifcre, que nous devons consid6rer en Tabsence
d’autres alterations com me la cause de la mort. Les lesions
/
Fig. 4. Partie de la corne anterieure cervicale du Macacus cynomolgus
inocule avec l’eau de lavage de l’intestin de Gosta L., observation X.
Fixation, coloration, grossissement et designation sont les memes que pour
la figure 1. Les lesions sont tout a fait analogues k celles de ce dernier
cas, seulement la destruction des cellules radiculaires est encore plus avancee,
de sorte qu’il ne reste que trks peu de protoplasme des cellules nerveuses
entre les grands neuronophages.
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340 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
des neurones et la p6riode d’incubation concordent avec ce
que l’on constate dans la poliomy41ite experimental. De plus
un des deux singes pr6sentait de la paralysie incontestable
des pattes de derri&re. II n’y a done aucun doute que les deux
animaux ont 4te atteint de poliomy61ite & la suite de l’injection
de l’eau de la lavage provenant de GOsta L. qui, par consequent,
devait Stre porteur du germe.
enh...
..c.n.
Fig. 5. Coupe par congelation de la moelle dpini^re du macaque
precedent. Preparation Marchi, glycerine. Zeiss obj. a immersion 2 mm,
oc. comp. No. 6. Cellule radiculaire de la corne anterieure cervicale forte-
ment alteree sans prolongement, sans noyau, k protoplasme rata tine et
homogene: cette cellule est envahie par de grandes cellules claires (c.».A.).
Celles-ci, en partie fusionnees, donnent rapparence d’une cellule geante a
plusieurs noyaus. Dans le protoplasme des cellules phagocytaires ainsi
que celui du neurone quelques petite grains noirs egalement visibles dans
les preparations traitees par d’autres methodes (pigment).
II faut se demander naturellement s’il n’a pas transmis
la maladie, k son frfcre Torsten, qui n’avait eu aucune relation
avec d’autres persounes atteintes de paralysie infantile. Bien
que cette hypoth&se soit trfcs admissible, il est impossible d’en
fournir la preuve decisive, car il est tout aussi vraisemblable
qu’il ait pu 6tre containing par son frfcre qui aurait pu prendre
la maladie ailleurs.
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid£mique. 341
Observation XI.
La soeur Angnste, ag4e de 39 ans, 6tait garde-malade
dans la section de l’hdpital des infectieux h Stockholm oh
dtaient soignds les sujets atteints de paralysie infantile lors
de l’dpid^mie de l’annde dernihre. Elle n’a pas 4t4 malade.
Un lavage intestinale fut pratiqud sur elle le 27 novembre
et le produit filtrd fut injects dans le p6ritoine et le nerf
sciatique d’un singe.
Tableau XIII.
Eau de
lavage
Animal d’essai
R4sultats
de l’intestin
130 c.c.
Macacus rhesus, in¬
jects 30/XI
Le 8/1 1912 il parait affaibli, grimpe mal, meurt le
9/1. La n^cropsie r6v61a de la pneumonie cas6euse
dans les poumons et des tubercules dans le foie
et la rate.
A l’examen microscopique: Hyper^mie, pas
d’h4morrhagies, infiltrations cellulaires en tacnes
dans la substance grise, hypertrophie des cellules
neurogliques, surtout autour des cellules radicu-
laires, celles-ci sont d6g6n6r6es en grand nombre,
leur protoplasme homogfene ; fonc6 et souyent
envahi par aes cellules neurogliques, hypertrophies,
leur noyau est en caryolyse. Ces neuronophagies
sont trfes fr&pientes et souvent fort avancees.
On injecta une Emulsion filtre de la moelle ^pinifere
dans le p^ritoine et le nerf sciatique d’un Macacus
neuf. 11 jours aprfcs il paraissait malade, faible
et amaigri; il mourut le lendemain. Les cellules
nerveuses de la moelle £taient en g£n6ral bien con¬
serves, la substance tigroide 6tait bien apparente.
Comme le singe, auquel on avait injects 1’eau de lavage,
6tait atteint de tuberculose avanc4e et comme l’animal de
controle ne presents que des trfes faibles alterations, on ne
peut savoir positivement, si la lavnre renfermait le microbe
de la paralysie infantile ou non, d’autant plus qu’aucun singe
ne fut atteint de paralysie ou de pardsie manifesto. Le cas
ddmontre k l’4vidence la difficult^ de constater la presence
du microbe.
Dans cinq families, y compris la famille A., les
recherches ont fait d4couvrir des porteurs de
germe. On les trouva toujours 1 k oh on les soupqonnait. La
garde-malade, sceur Auguste, n’y fait pas absolument exception.
Dans deux families oh plusieurs personnes furent examinees,
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342 C. Kling, W. Wemstedt et A. Pettereeon,
on trouva plusieurs porteurs da germe. On peut done ad-
mettre qne ceux-ci sont trfes commons dans les milieux infect£s.
Jetons maintenant un coup d’ceil sur les lesions
pathologiques des moelles epinifcres des singes ayant
succomb£s k la suite de l’injection d’eaux de lavage des per-
sonnes examinees, c. k. d. des malades, qui ne pr£sentaient
aucune trace de paralysie ou encore des personnes tout &
fait bien portantes. Ce qui frappe avant tout, e’est que les
alterations ont en g£n£ral un autre caract£re que celles que
pr£sentent les animaux morts k la suite de l’injection des
lavures provenant de malades atteints de paralysies bien
caract£ris£es et recueillies pendant la phase aigu8 de leur
maladie. La caract£ristique de ces moelles, e’est l’infiltration
cellulaire, qui est tantot diss£min£e en taches, souvent pro-
nonc£e dans les cavit£s lymphatiques autour des vaisseaux.
En outre, il y a \k des neuronophagies tr£s intenses, les
cellules nerveuses £tant farcies d’un grand nombre de neu-
ronopbages parmi lesquels se trouvent presque toujours les
leucocytes & noyau polymorphe. Les neurones sont souvent
complement d6vor6s par les phagocytes.
Cette infiltration cellulaire manquait ordinaireraent dans
les moelles des singes du premier groupe. Ce n’est qu’exception-
nellement que l’on constate une tr£s faible augmentation des
cellules autour des vaisseaux, seulement on trouve parfois
comme signe d’inflammation une augmentation des globules
blancs dans les vaisseaux et de l’oed&me dans toute l’£tendue
de la moelle. En ce qui concerne les h£morrhagies, il n’est
pas tout k fait certain qu’elles sont dues k l’inflammation.
C’est la d£g£n£rescence des neurones et 1 * a Ite¬
ration des cellules neurogliques qui constituent
la principale l£sion des moelles. La d£g£n£rescence
se traduit plus par la retraction des cellules, leur vacuoli-
sation et par leur teinte fonc£e, que par l’envahissement des
neuronophages (fig. 4). Il est vrai que parfois les neuronophagies
sont trfes fr£quentes, mais alors les cellules nerveuses ne
sont g£n£ralement envahies que par un nombre relativement
petit de phagocytes.
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid 4 mique. 343
Les neuronophagies en question different beaucoup de
celles que Ton observe ordinairement et qu’on a dfecrites
jusqu’fe present dans la poliomyfelite aigufe chez l’homme et
dans la poliomyfelite expferimentale chez le singe. Ici les
neurones sont envahis par un grand nombre de cellules
(fig. 2), c’est ce que Rissler (7), qui a le premier observfe
les neuronophagies dans la poliomyfelite aigue chez l’homme,
avait dfejfe constatfe. Ces cellules fetudifees d’abord par
Forssner et Sjbvall (8) ainsi que par Wickman (9),
sont les leucocytes k noyau polymorphe et des polyblastes
(Wickman). Ces derniers sont les vrais neuronophages
comme Wickman l’a dfemontrfe. Ces deux espfeces de
cellules ont ceci de commun que leur protoplasme ne se
distingue gufere de celui de la cellule nerveuse tant qu’il
n’est pas totalement dfesagrfegfe. On ne peut souvent les
diffferencier qu’fe leurs noyaux. Au contraire les neuronophagies
particuliferes que nous avons signalfees chez les animaux inoculfes
par les eaux de lavage provenant de cas abortifs et de por-
teurs de germes, prfesentent un aspect trfes different. Les
cellules qui s’insinuent dans les neurones ont un corps
protoplasmique abondant, clair et arrondi, bien
distinct du protoplasme foncfe des cellules
nerveuses, difference persistant jusqu’fe ce qu’il en restequel*
que chose (fig. 4 et 5). On voit assez souvent le reste de la cel¬
lule nerveuse accollfe au grand neuronophage comme une petite
coiffe foncfee. Dans d’autres cas trfes avancfes ces neurono¬
phages rappellent beaucoup les ostfeoclastes rongeant les os.
La destruction de la cellule nerveuse par ces cellules difffere
fevidemment de celle causfee par les polyblastes. II est en
rfealitfe fort douteux que cette espfece de neuronophages —
s’il est permis de leur donner ce nom — englobe le cellule
nerveuse ou ses dfebris comme de simples corps fetrangers,
car du moins nous n’avons jamais pu constater sur les prfe-
parations d’aprfes Mar chi de granulations graisseuses en
quantitfe considferable dans ces cellules. Celles-ci par-
viennent sans doute des cellules neurogliques
qui se trouvent autour de cellule nerveuse. Elies
ressemblent d’ailleurs complfetement aux autres cellules neu¬
rogliques hypertrophifees de la substance grise.
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344
C. Kling, W. Wernstedt et A. Petterasou,
Les lesions pathologiques des moelles epiniferes pourraient
parattre assez considerables k premiere vue et suffisantes
pour justifier notre manire de voir. Cependant des alterations
degen6ratives de cellules nerveuses se rencontrent aussi chez
rhomme dans d’autres maladies infectieuses, par exemple,
dans la fifcvre typhoide, dans la pneumonic aigug et 1’influenza.
II y a dans la premiere non settlement une degen6rescence des
cellules nerveuses du cerveau mais encore une penetration de
leucocytes k leur interieur, c. k. d. de la neuronophagie; on a
m£me observe de l’infiltration cellulaire autour des vaisseaux.
C’est pourquoi nous avons juge indispensable de faire un
examen approfondi pour savoir, si les alterations que nous
avons observees chez les singes en experience ne se pro-
duisent pas egalement dans d’autres maladies chez cet animal,
d’autant plus que les infiltrations exsudatives faisaient defaut
dans la plupart des cas.
Nos singes neufs furent souvent decimes, soit par des
diarrhees ou sans cause apparente. Nous avons tache d’exclure
de nos recberches les individus qui n’etaient pas tout & fait
bien portants. La necropsie decela parfois une pneumonia
aigue, parfois meme rien. Nous avons fait l’examen micro-
scopique de la moelle de ces singes. Le resultat en fut trfcs
interessent. Cbez ceux qui moururent de pneumonie la
moelle presentait souvent de la congestion assez considerable
dans la substance grise, mais pas d’h6morrhagies. Nous avons
presque toujours constate des signes de degenerescence consi¬
derable dans un grand nombre des cellules nerveuses, tels
que caryolyse, fonte de la substance tigroide, retraction, colo¬
ration fonc6e et vacuolisation du protoplasme. Les alterations
etaient parfois tout aussi prononcees que chez nos animaux
d’experience. Par contre, les neuronophagies etaient rares et
peu avancees ou bien manquaient totalement. Les cellules de
la neuroglie avaient en general conserve leur aspect normal.
Chez les singes morts k la suite de diarrhee prolong6e,
ou sans presenter aucun symptome manifeste, les cellules ner¬
veuses etaient assez bien conserv4es et la substance tigroide
etait ordinairement tr&s nette. II y avait parfois un debut de
caryolyse et quelques neurones etaient un peu ronges par les
cellules hypertrophies de la gaine lymphatique. II n’y avait
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Mode de propagation de la paralysie infantile 4pid£mique. 345
pas d’hyper^mie nette, ni d’h4morrhagies; les cellules de la
neuroglie, en general, n’etaient pas augmentees de volume.
Ces derniers singes ne pr6sentaient par consequent pas d’altera-
tions comparables k celles de nos auimaux d’exp6rience mais
bien ceux du premier groupe le faisaient k s’y meprendre.
Voilk pourquoi nous avons eu soin d’eiiminer de nos tableaux
les animaux qui avaient pr4sent4 de la pneumonic & 1’exception
de quelques-uns, qui n’etaient atteints que de pneumonie trbs
r4cente tout & fait insignifiante.
Parmi les singes qui ne furent pas injecte aucun ne
mourut de tuberculose. Nous avons n£anmoins encore exclu
les animaux d’exp6rience atteints de tuberculose avanc4e.
On ne peut pas attribuer une importance pathognomique
k la caryolyse et la valeur decisive des h4morrhagies est aussi
discutable, car celles-ci pourraient tout aussi bien fitre provo-
qudes par l’asphyxie que par l’action nocive directe du microbe,
comme l’a d£j& fait remarquer v. Wiesner (10). Cependant,
elles ont une valeur diagnostique importante en tant que signe
d’asphyxie, parceque, d’autres causes d’asphyxie faisant defaut,
elles rendent une lesion du systbme nerveux central trbs
probable. D’ailleurs les h4morrhagies 6taient si fr4quentes que
nous ne les croyons pas caus4es seulement par Tasphyxie mais
par Taction directe du virus. Mais les d£g£n£rescences des
cellules nerveuses et les neuronophagies ont une valeur patho¬
gnomique plus grande quoiqu’elles ne soient pas non plus
sp£cifiques de la paralysie infantile, comme nous venons de la
faire remarquer. Schmaus (11) est le seul qui ait indiqu£
un grossissement des cellules de la neuroglie. Cependant les
alterations mentionn4es par lui ne doivent pas avoir 4t4 tout
k fait analogue & celles que nous avons observ4es. Cet auteur
trouve que les prolongements des cellules sont nettement
prononces, ce que nous n’avons pas observe sur les pre¬
parations traitees par hematoxyline au fer (Heidenhain).
En absence d’alterations considerables dans les organes
internes chez les animaux en experience, nous croyons que
les lesions precedemment d6crites: telles que Thyper6mie et les
hemorrhagies de la substance grise, Thypertrophie des cellules
neurogliques, les d6generescences des cellules nerveuses et les
neuronophagies, permettent d’autant mieux de poser le dia-
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346
C. Kling, W. Wernstedt et A. Petterason,
gnostic de poliomyeiite exp6rimentale que les sympt6mes clini-
qnes parlent 4galement en ce sens.
II est Evident qu’on doit considdrer les alterations d6-
g6n6ratives des cellules nerveuses m4dullaires comme directe-
ment causdes par le virus de la paralysie infantile, et non
comme des alterations trophiques occasionnees par les in¬
filtrations, puisque tr£s souvent celles-ci font presque totale-
ment defaut. L’hypothese suivant laquelle les produits de la
degenerescence des cellules nerveuses determineraient secon-
dairement l’exsudation inflam matoire se trouve infirm6e par
nos experiences, car souvent on observe de la degenerescence
etendue de ces cellules sans exsudation manifeste. On ne
pourrait soutenir que c’est parce que les exsudats n’ont pas
eu le temps de se former par suite de la rapidite de l’infection,
attendu que celle-ci a mis souvent plusieurs jours k se ddve-
lopper. Quoique nous ayons trouve que ces degenerescences
ont ete les lesions les plus frequentes et les plus prononcees
chez les singes en question, nous ne croyons cependant pas
actuellement que la degenerescence devance toujours l’exsu-
dation inflammatoire, et encore moins qu’elle en soit la cause.
II est vrai que nous n’avons pas vu un renversement de l’ordre
chronologique dans l’apparition de ces alterations, de fa<jon 4
ce que l’exsudation se soit presentee la premiere, ce qu’on
observe parfois chez l’homme; mais nous avons vu un ren-
forcement prononce de l’action inflammatoire du virus apres
un seul passage sur le singe. Selon nous la degene¬
rescence des cellules nerveuses aussi bien que
l’cedeme et l’infiltration cellulaire, sont le rd-
sultat de l’action nocive directe exerc6e par le
virus. Ce dernier peut etre quelquefois trop faible pour
provoquer une exsudation bien nette, mais il est toujours assez
actif pour provoquer une degenerescence des cellules nerveuses
et determiner un trouble progressif de la nutrition des cellules
neurogliques dont l'augmentation de volume est la consequence.
On doit se demander pourquoi les alterations constatees
k la suite de l’injection de produits de lavages provenant des
porteurs de germe et des cas abortifs ont ete moins intenses
que celles provoquees par les produits des cas typiques, c. k. d.
des cas relativement graves? Nous savons qu’il y a chez cer-
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid£mique. 347
tains microbes tm parallelisme bien 6tabli entre leur virulence
et leur action phlogog&ne. Le bacille tuberculeux par exemple
perd la faculty de provoquer des exsudats d£s que sa virulence
diminue tandis que sa faculty proliffcre sur les tissus persiste.
Voyons maintenant ce que nous renseignent les observations
faites sur le virus de la paralysie infantile. Landsteiner
et Levaditi (12) ont constate que l’infiltration cellulaire est
souvent la plus marquee chez les singes inocuies avec un
virus de passage; nous avons pu verifier le fait en ce qui
nous concerne. Nous avons fait remarquer plus haut que les
moelles des singes injectes avec les eaux de lavage provenant
des cas typiques, ne presentaient pas toujours d’infiltration
cellulaire, tandis que les singes de controle injectes avec ces
moelles presentaient des infiltrations considerables. Les in¬
oculations du virus de la paralysie infantile chez le lapin ne
provoquent jamais d’infiltration cellulaire mais seulement de
la degenerescence des cellules nerveuses de la moelle epini&re.
La virulence du microbe se renforce par les passages d’un
animal k l’autre de telle sorte que le virus de passage est en
g£n4ral plus actif que le virus primitif. Le renforcement de
la virulence et de l’infiltration marcbent 6videmment de pair
chez le singe. 11 semble que le lapin soit plus resistant au
microbe que le singe ou, si l’on veut, que le microbe est plus
virulent chez ce dernier. C’est sans doute la raison pour la-
quelle la moelle du lapin ne pr6sente pas d’infiltration cellulaire.
Nous avons observe que les lavures, recneillies au cours de la
p6riode aigue de la maladie, provoquaient la poliomy61ite exp6ri-
mentale h infiltration cellulaire considerable alors qu’au contraire
les s6cr4tions preievees sur les m€mes personnes quelque temps
apr&s leur querison n’occasionnaient plus d’infiltration cellulaire,
mais seulement une degenerescence des cellules nerveuses et de
la neuronophagie determinee par un petit nombre des cellules
neurogliques. On sait que certains microbes qui v4gfctent
longtemps sur les muqueuses, comme le bacille diphtherique
par exemple, perdent beaucoup de leur virulence. II en est
probablement de meme du microbe de la paralysie infantile.
Nous sommes port£s & croire que l’absence d’alt^rations in-
flammatoires considerables de la moelle epini&re chez les
animaux infectes, temoigne d’une modification et pricipalement
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348
C. Kling, W. Wernstedt et A. PettersBon,
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d’une attenuation du virus de la paralysie infantile; cette
hypothhse concorde parfaitement avec le fait que ce sont
les eaux de lavage pr£lev£es chez les individus trhs pen ou
point malades, qui provoquent ordinairement le moins d’alt6-
rations inflammatoires.
La presence du microbe de la paralysie infantile demon-
tree chez un trhs grand nombre de personnes indemnes de
paralysie, porterait it croire que le germe, qui a provoqu6 la
maladie experimental chez les singes, est un germe banal
qu’on peut trouver chez n’importe quel individu. Pour savoir
s’il en est ainsi, nous avons soumis 4 l’examen quelques
individus tout 4 fait bien portant, qui n’avaient pas ete en
contact avec des sujets atteints de paralysie infantile. Mais
ces individus n’etaient pas faciles 4 trouver dans notre ville
oh se sont dej4 produit un grand nombre de cas de paralysie
infantile. C’est pourquoi nous avons eu recours aux proteges
de l’hospice public d’enfants 4 Stockholm. La maladie n’y
avait pas encore fait son apparition 4 ce moment et les
relations de l’hospice avec la ville n’etaient pas bien grandes.
Le medecin en chef, Mr. M e d i n, fut assez aimable pour nous
permettre de pratiquer le lavage de la bouche et de l’intestin
chez cinq enfants; trois avaient moins d’un an, un autre avait
trois ans et demi, le cinquihme onze ans. Ils etaient tous
bien portants. Deux d’entre eux etaient au sein. Le plus
ag6 avait pass6 l’ete 4 Oeland, ile oh la paralysie infantile
nes’etait pas montree. Les lavures filtr^es furent inject6es
dans le p6ritoine et le nerf sciatique des singes. Ceux-ci, au
nombre de 10, furent isoies dans une chambre n’ayant pas de
communication avec celle oh etaient les autres et furent
observes pendant deux mois. Ils restfcrent tous en bonne sante.
Aprhs ce laps de temps nous nous en sommes servis pour
d’autres recherches. La plupart gagna alors la poliomyeiite
experimental.
Nous n’avons d’ailleurs pas r6ussi 4 deceler la presence
du microbe de la paralysie infantile chez tous les sujets
suspects soumis 4 l’examen dans ce but. Les eaux de lavage
de cinq personnes atteintes d’une maladie vague, et n’ayant
jamais 6t6 en rapport avec des gens atteints de paralysie in¬
fantile n’eurent pas d’effet sur les singes auxquels elles furent
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pid£mique. 349
injecttes, alors que quelques-uns de ces animaux auxquels
nous inoculames ensuite un virus de passage succombtrent k
la poliomydlite exptrimentale.
Nous avons d6montrt la presence du microbe
de la paralysie infantile sur les muqueuses de la
bouche, du nez, du pharynx, de la trach6e et de
l’intestin chez des malades k symptomes typi-
ques. Nous l’avons trouvd ensuite sur les mtmes
muqueuses, k l’exception de celle de la trach6e,
chez des personnes trfes peu malades, et sans
symptdines caractdristiques dans le voisinage de
cas av6r6s de la paralysie infantile, mais aussi
chez des sujets n’ayant eu aucune relation con-
statue de cette sorte. Enfin nous l’avons d4-
montrde encore chez des individus tout & fait en
bonne santd et vivant dans l’entourage de per¬
sonnes atteintes de paralysie infantile. Au cours
des 6pid6mies, il y a aussi un grand nombre de cas ne pr6-
sentant pas les symptomes caracttristiques de la maladie et
chez un petit nombre desquels seulement le diagnostic Clini¬
que peut 3tre fait. Le nombre des porteurs de germe est
assortment considerable. Or comme le microbe se
trouve sur les muqueuses de personnes n’ayant
jamais 6t6 malades, il est k supposer qu’il est
venu du dehors, et selon toute probability par l’inter-
mtdiaire de stcrttion contaminte d’un autre individu. Il n’y
a done aucune raison pour douter que e’est bien ainsi que
s’est faite la propagation du germe aux personnes atteintes
de paralysie typique ou atypique.
Les porteurs de germe et les cas abortifs dans une
famille sont parfois 4 ou 5 fois plus nombreux que les cas
k symptomes caracttristiques. Les cas abortifs sont naturelle-
ment eux aussi, entourts d’autres cas abortifs et de porteurs
de germe. Il n’est done pas surprenant, dans ces conditions,
que souvent nous ne puissions pas saisir les relations entre
les divers cas typiques, les seuls qui dans ces derniers temps
encore 6taient consid4rts comme poliomy61ite. La comparaison
dont J&ger s’est servi pour la m4ningite c4r4brospinale au
point de vue 6pid6miologique s’applique trts bien k la para-
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350 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
lysie infantile. La maladie, dit-il, s’est pr4sent6e, jusqu’6
present, comme un paysage montagneux, couvert de brouillards,
dont on n’aper^oit que les cimes les plus hautes, isol6es les
unes des autres; mais d6s que le brouillard se sera dissip6,
on verra les chaines qui relient les cimes. Quand nous aurons
des mGthodes permettant le diagnostic 6tiologique au lieu du
diagnostic symptomatologique, le brouillard, enveloppant la
paralysie infantile, disparaitra et permettra de dScouvrir les
voies de la contagion. Alors, nous verrons probable-
ment que la paralysie infantile est une maladie
commune dans l’enfance, se manifestant-la plu-
part du tempspar des symptomes tr6s 16gersmais
acqu6rant parfois, comme beaucoup d’autres ma¬
ladies infectieuses, un caractfcre malin d6ter-
minant des 16sions du syst6me nerveux. Peut 6tre
s’expliquera-t-on alors que les adultes ne sont que rarement
atteints par ce qu’ils ont d4j6 eu la maladie dans leur enfance;
peut-6tre verrons-nous enfin que les villes sont relativement
exemptes de grandes 6pid6mies malignes, parce que la forme
b£nigne de la maladie est beaucoup plus fr£quente 16 que
dans les campagnes par suite de l’intensit6 des relations, et
par ce que la plupart des habitants des villes ont acquis
l’immunit6 qui les protege contre les 6pid6mies malignes.
A ce point de vue, la paralysie infantile se comporterait de
la m§me fa$on que beaucoup d’autres maladies, comme la
rougeole, par exemple.
II est Evident que la paralysie infantile peut se propager
autrement que par la transmission directe de personne 6 per-
sonne. Wick man (3) a observ6 des cas oil 1’on peut ad-
mettre que la maladie a 6t6 provoqu^e selon toute probability
par la consommation de lait contamin£. Landsteiner et
Levaditi (13) ont d6montr6 que le microbe peut rester
virulent pendant 31 jours dans du lait sterilis4; Neust&dter
et Thro (14) l’ont encore trouv6 dans des ordures. II est
certainement utile d’attirer l’attention sur la posibilit6 de la
propagation par le lait, les boissons et les comestibles, ainsi
que par d’autres objets comme les livres etc. Peut-etre les ani-
maux, les mouches etc. sont-ils aussi susceptibles de propager
la maladie; toutefois les observations manquent k ce sujet.
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Mode de propagation de la paralysie infantile 6pid6mique. 351
C’est vers la fin de l’6t6 et au commencement de l’automne
que la paralysie infantile a le plus de tendance de determiner
des £pid£mies. Elle a k cet egard une certain e analogic avec
la fikvre typhoide, la dysenteric et le cholera. La cause de
ce fait, qui est encore totalement inconnue, est probablement
la mgme pour les quatre maladies. Cette coincidence d’ap-
parition k l’£poque oil les maladies infectieuses de l’intestin
sont les plus frequentes, nous rend compte de l’ancienne
hypothkse d’aprks laquelle la porte d’entree du virus serait
l’intestin, ce qui semblait d’autant plus admissible que cet
organe et les ganglions mesenteriques presentent presque toujours
des alterations pathologiques.
Le mode de propagation que nous venons de preciser,
presume d6jk par Wickman et d’autres, et qui est le plus
probable, d’aprks les faits que nous avons constates, nous
explique encore la singulikre apparition de foyers epidemiques,
tout k fait isoies. Neanmoins nous devons prendre en serieuse
consideration le role eventuel des insectes qui se repaissent
du sang de l’homme, dans la transmission du gerrae et qui
pourraient fort bien occasionner aussi les epidemies de para¬
lysie infantile.
Pour apprecier les chances d’une telle propagation k leur
juste valeur il est necessaire de faire remarquer — avant tout
— que les recherches faites sur les singes ont prouve la rarete
du germe dans le sang; aussi pour transmettre la maladie
avec le sang, il a toujours fallu en injecter une tr&s grande
quantite k l’animal en experience. De plus, le microbe ne se
trouve dans le sang que pendant la phase aiguS de la maladie.
Les experiences sur le singe ont prouve en outre que le
passage de la maladie engendre l’immunite. Des observations
epidemiologiques plaident en ce sens. La maladie 6pargne
les contrees r6cemment devastees par une epidemie, tandis
qu’elle atteint les contrees neuves. L’epidemie de l’annee 1905,
en Sufede par exemple, sevissait violemment dans le gouverne-
ment de Kronoberg; lors de l’6pidemie de l’annee pass6e, il
n’y eu lk qu’un nombre relativement restreint de cas en
comparaison des environs. Les experiences chez l’animal ont
prouve que la resistance acquise est une immunite contre le
Zeltichr. f. Immuntthtsforschung. Orig. Bd. XIV. 24
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352
C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson,
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microbe, et que les substances immunisantes se trouvent
dans le sang. Voild. pourquoi on est autorisd & croire que le
microbe disparait du sang aprds la pdriode aigue de la maladie.
La doctrine d’une transmission du germe contenu dans le
sang n’a par consequent de valeur que pour autant qu’elle
s’applique aux cas aigus.
Le nombre restreint de germes et leur passage de courte
durde dans le sang ne sont nullement favorables k une dif¬
fusion frdquente et rapide par les insectes suceurs pour pouvoir
occasionner de vdritables dpiddmies de paralysie infantile.
Mais il y a encore d’autres motifs pour ne pas admettre cette
thdorie. Pour expliquer la propagation de la maladie sur de
vastes dtendues il faudrait admettre la transmission par l’inter-
mddiaire d’un animal susceptible de parcourir lui-meme de
longues distances. C’est pourquoi en admettant que ce mode
de propagation existe, il parait inadmissible que le transport
du contage par les parasites habituels de l’homme, tels les
puces, les punaises ou les poux, puisse provoquer des dpidd-
mies dtendues.
Mais il y a encore d’autres insectes k prendre en con-
siddration. La paralysie infantile a sdvi surtout dans la partie
nord de la zone tempdrde jusqu’d prdsent. Dans cette rdgion
la vie des insectes est soumise k des variations considdrables
par suite des grandes variations de tempdrature dans le cours
de l’annde et comme les fonctions vitales des insectes sont
engourdies par le froid, il faut ndcessairement que la propa¬
gation de la maladie s’arrdte au moment oil il apparait,
si elle ddpend des insectes. Mais, en Su&de, on n’a pu
constater un parallelisms entre la tempdrature
et la maladie pour faire supposer que la propa¬
gation se fasse par les insectes. Le point culminant
de la courbe d’une dpiddmie de paralysie infantile est en
gdndral en aoftt ou en septembre; elle descend parfois lente-
ment et ne semble gudre influencde par les froids d’octobre
et de novembre. Il y eut mdme en Sudde de petites dpi-
ddmies en plein hiver. Au commencement de cette annde,
un assez grand nombre de cas apparurent dans la rdgion de
Kalix au 66'^me degrd de latitude. Ces faits ont ddjk dtd
relevds en partie par Wick man (15).
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Mode de propagation de la paralysie infantile £pidemique. 353
Le paludisme 4tait autrefois assez frequent dans notre pays.
Sa courbe avait un tout autre aspect. Cette maladie arrivait,
il est vrai, aussi k son maximum en aout ou eu septerabre,
mais les froids de l’automne limitaient toujours sa marche.
Quoiqu’on ne puisse, k notre avis, attribuer une grande
importance aux insectes suceurs comme propagateurs de la
maladie, on ne saurait cependant pas absolument nier leur
role k present. Nous faisons actuellement des recherches en
vue de trancher cette question. II est 4 supposer que ce mode
de propagation joue quand meme un rdle dans les end4mies
k domicile dont nous avons vu un exemple typique dans une
maison k Stockholm, au cours de l’4pid6mie de l’ann6e pass6e.
Nous saisissons ici l’occasion pour adresser notre vive
reconnaissance k tous les m6decins qui ont bien voulu se
charger de nous procurer le materiel n6cessaire & nos re¬
cherches principalement k Mr. le Dr. Thure Hellstrbm,
m4decin en chef de l’hdpital des infectieux 4 Stockholm.
Zusammenfassung.
Der Krankheitserreger der epidemischen Kinderl&hmung
konnte im Mund- und Rachensekrete sowie im Darminhalte
einer Anzahl ganz leichter KrankheitsfSlle ohne jede An-
deutung von Lahmung (Abortivf&lle) nachgewiesen werden.
Einige von diesen Kranken gehcirten der Umgebung von
Kinderlahmungspatienten mit deutlichen Lahmungen an, andere
aber waren, soviel bekannt geworden ist, mit solchen nie in
Bertihrung gewesen.
Dieser Krankheitserreger fand sich weiter auf den ge-
nannten Schleimh&uten mehrerer vollstfindig gesunder Per-
sonen in der Umgebung von Kinderlahmungspatienten, jene
spielten also die Rolle von ZwischentrSgern.
Die Zahl der Abortivf&lle und Zwischentr&ger kann nach
unseren Erfahrungen vier- bis fiinfmal so groB sein als die
der Kranken mit deutlichen LSLhmungen.
In Anbetracht der vielen Abortivffille und Zwischen-
trSger dflrften der Annahme keine ernstlichen Bedenken im
Wege stehen, daB die Verbreitung der Kinderiahmung durch
direktes Oder indirektes Uebertragen infizierter Sekrete oder
24*
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354 C. Kling, W. Wernstedt et A. Pettersson, Recherches etc.
Exkrete erkrankter Personen stattfindet. Das Entstehen
grOBerer Epidemien kann durch das Uebertragen des Krank-
heitserregers durch blutsaugeude Tiere nicht erklfirt werden.
Die pathologischen Ver&nderungen des Rfickenmarkes bei
der experimentelleu Affenpoliomyelitis kbnnen sehr verschieden
sein. Neben Fallen mit inteusiver cellularer Infiltration der
grauen Substanz und Ueberschwemmung der entarteten ner-
vbsen Elemente mit Wanderzellen kommen solche vor, in
denen die celluiare Infiltration vollstandig mangelt und die
Veranderungen wesentlich durch Entartung der Ganglienzellen
und VergrQBerungen der Elemente des Stfitzgewebes charak-
terisiert sind. In den entarteten Ganglienzellen findet sich
gew5hnlich eine Anzahl grofier, schwach tingierter Zellen.
Diese Verhaltnisse bedeuten mit Wahrscheinlichkeit eine Ab-
schwachnng der Virulenz. Die rein degenerativen Verande¬
rungen wurden hauptsachlich bei den mit Spfilfltissigkeiten
von Abortivfailen und ZwischentrSgern infizierten Tieren ge-
funden, die infiltrativen Erscheinungen bei solchen Affen, die
mit SpQlfliissigkeit akuter L&hmungsfalle geimpft worden waren.
Literature.
1) Kling, Wernstedt et Pettersson, Zeitschr. f. Immunitatsf. etc.,
Bd. 12, No. 3 et 6.
2) Landsteiner, Levaditi et Danulesco, C. r. de la Soc. de Biol.,
dec. 1911.
3) Wick man, Beitrage zur Kenntnis der Heine-Medinschen Krankbeit.
Berlin (8. Karger) 1907.
4) Netter et Levaditi, C. r. de la Soc. de BioL, mars 1910.
5) Andersson et Frost, Joum. of Amer. med. Ass., mars 1911.
6) Flexner et Lewis, Joum. of Amer. med. Asb., avril 1910.
7) Rissler, NordiBkt Medicinskt Arkiv, Bd. 20, 1888.
8) Forssner et S jo vail, Zeitschr. f. klin. Medizin, Bd. 63.
9) Wick man, Deutsche Zeitschr. f. Nervenheilk., Bd. 38, 1910.
10) Zappert, v. Wiesner et Leiner, Heine - Medinsche Krankbeit.
Leipzig et Wien (Fr. Deuticke) 1911.
11) Schmaus, Ergebnisse der AUg. Path. (Lubarsch-Ostertag), IX, 1.
12) Landsteiner et Levaditi, Annales de 1’Institut Pasteur, 1910.
13) -Annales de l’lnstitut Pasteur, 1911.
14) Neustadter et Thro, New York med. Joum., 1911, No. 17.
15) W i c k m a n, Die akute Poliomyelitis bzw. Heine-Medinsche Krankheit,
im Handbuch der Neurologie, herausgeg. von Lewandowsky, Berlin
(J. Springer) 1911.
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K. Meyer, Spezifitat der Komplementbindungsreaktionen etc. 355
Nachdruek verboten.
[Aus dem Serobakteriologischen Laboratorium des Stadtkranken-
hauses in Stettin.]
Ueber die Spezifitat der Komplementblndnngsreaktioneii
mlt alkoholischen Parasitenextrakten.
IV. Mitteilnng.
Ueber antigene Eigenschaften von Lipoiden.
Von Dr. Kurt Meyer.
(Eingegangen bei der Kedaktion am 31. Mai 1912.)
Al8 ich micb vor lingerer Zeit mit der Wirksamkeit alkoho-
lischer Parasitenextrakte als komplementbindendes Antigen
besch&ftigte *), schrieb ich ihnen strenge Antigen spezifitat zu,
da ich festgestellt hatte, dafi die verschiedensten normalen
und pathologischen Sera mit ihnen nicht reagierten, auch nicht
luetische Sera, bei denen wegen des Lipoidgehalts der Extrakte
eine positive Reaktion erwartet werden durfte. In der starken
Wirksamkeit der Sera von Kaninchen, die mit Parasitenextrakten
vorbehandelt waren, itn Gegensatz zu den Seren normaler
Tiere, sah ich einen weiteren Beweis fflr die Spezifitat der
Reaktion.
Einige Zeit darauf teilte Brauer 5 ) mit, dafi luetische Sera mit
einzelnen alkoholischen Echinokokkenextrakten unter Komplementbindung
reagieren konnen. Er empfahl daher fur die Praxis, nur solche Extrakte
zu verwenden, die bei der Priifung mit einer grdfieien Zahl luetischer Sera
negativ reagierten.
Bus son") konnte die Angaben Brauers bestiitigen. Da er ferner
fand, dafi die verschiedensten Tierarten. ohne Parasitentriiger zu sein, mit
alkoholischen Parasitenextrakten die Komplementbindungsreaktion im Serum
geben konnen, so warf er die Frage auf, ob die Reaktion iiberhaupt als
streng spezifisch aufgefafit werden darf und ob nicht unter gewissen Um-
standen im Blute Stoffe kreisen konnen, die mit den Lipoiden der Extrakte
unter Komplementbindung reagieren. Bestarkt wurde er in seinen Bedenken
durch die Beobachtung, dafi die Sera von Kaninchen, die mit Injektionen
von Herzmuskelextrakt sowie von Leucin und Tyrosin vorbehandelt waren,
die Eigenschaft annahmen, mit alkoholischen Parasitenextrakten Kom-
1) Kurt Meyer, diese Zeitschr., Bd. 7, 1910. p. 732.
2) Brauer, Miinch. med. Wochenschr., 1911, No. 20, p. 1073.
3) Br. Busson, Centralbl. f. Bakt., Orig., Bd. 60, 1911, p. 426.
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356
Kurt Meyer,
plement zu binden. Er glaubt daher, dafi Immunisierungsversuche an
Kanincben zur Entscheidung der Spezifitatsfrage nicht herangezogen werden
diirfen.
Wird nun durch diese Befunde tatsSchlich die Spezifit&t
der Komplementbindungsreaktion zwischen alkoho-
lischen Parasitenextrakten, und damit auch zwischen den von
mir daraus als wirksame Bestandteile isolierten Lipoiden einer-
seits und dem Serum von Parasitentragern und von ktinstlich
mit Parasitenextrakten immunisierten Kaninchen in Frage
gestellt?
Diese Frage ist glatt zu verneinen, wenn die quanti-
tativen VerhSltnisse berQcksichtigt werden, was von Busson
nicht geschehen ist.
Was zun&chst die Reaktion luetischer Sera mit den alkoho-
lischen Extrakten betrifft, so habe auch ich mich iiberzeugt,
dafi in der Tat manche Extrakte diese Eigenscbaft zeigen.
Ihre Wirksamkeit ist aber unvergleichlich schwScher als die
der Extrakte aus luetischen Organen oder Meerschweinchen-
herzen. Die meisten Luessera geben schon in einer Menge
von 0,1 ccm nur unvollst&ndige Hemmungen bei Verwendung
von 0,05 ccin Meerschweinchenserum als Komplement. Voll-
st&ndige Hemmung mit 0,05 ccm Serum habe ich auch bei
Seren mit stSrkster Wassermannscher Reaktion nicht be-
obachtet.
Berftcksichtigt man, dafi andererseits Sera von Bandwurm-
und Echinokokkentragern noch in Mengen von 0,005 ccm mit
den alkoholischen Parasitenextrakten vbllige Hemmung der
Hamolyse geben konnen," wie ich dies seinerzeit *) beschrieben
habe, so sieht man ohne weiteres ein, dafi es sich in beiden
Fallen um ganz verschiedene Phanomene handelt. Die Reaktion
der luetischen Sera ist in der Tat eine unspezifische, durch den
Lipoidgehalt der Extrakte bedingt; um so rnehr ergibt sich
aus der unvergleichlich starkeren Intensitat der Reaktion der
Parasitentragersera deren Spezifitat.
Ganz dhnlich liegen die Verhiiltnisse bei den Tierversuchen.
Gewifi geben manche Kaninchensera, besonders Immunsera, in
hfiheren Konzentrationen, mit alkoholischen Parasitenextrakten
Komplementbindung, wie das in der folgenden Tabelle I dar-
1) Kurt Meyer, Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 28, p. 1316.
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Ueber die Spezifitat der Kompiemen tbindungsreaktionen etc. 357
gestellte Verhalten einiger wahllos herausgegriffenen Immun-
sera zeigt.
Tabelle I.
0,5 ccm alkoholificher
Bandwurraextrakt
1:10 +
Typhus-
Iramun-
serum
Prodigiosus-
I.-S.
Proteus-
I.-S.
Hammel-
serum-
I.-S.
Rinder-
serum-
I.-S.
0,1 ccm
k. H.
Spur
i. H.
k. H.
Spur
0,05 „
k. H.
i. H.
f. k. H.
k. H.
i. H.
0,02 „
k. H.
f. k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
0,01 „
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H. — komplette Hamolyse; f. k. H. = fast komplette Hamolyse;
i. H. = in komplette Hamolyse.
Vergleicht man damit aber die Reaktionsst&rke der Immun-
sera, wie sie in Tabelle II wiedergegeben ist, so erkennt man,
dafi es sich dort offenbar um unspezifische Lipoidreaktionen
handelt, die der Wassermannschen Reaktion, die so viele
Kanincbensera geben, entsprechen, die jedoch mit den
spezifischen Immunserumreaktionen in keiner
Weise zu vergleichen sind.
Tabelle II.
Alkoholischer Band¬
wurmextrakt 1:10 +
Bandwurm-Immunserum
i
11
hi
IV
V
VI
VII
VIII
IX
0,02 ccm
0
0
0
0
0
0
0
i. H.
0
0.01
0
0
0
0
i.
0
0
k. H.
0
0,005 „
0
0
0
Spur
f.k.H.
0
0
k. H.
0
0,002 „
0
! o
0
f. k.
k. H.
0
0
k. H.
i. H.
0,001 „
i.
Spur
i. H.
k. H.
k. H.
0
0
k. H.
f. k.
0,0005 „
k.
| f. k.
f. k. H.
k. H.
k. H.
f.k.H.
i. H.
k. H.
k. H.
Dali es sich hier in der Tat um spezifische Reaktionen
handelte und nicht etwa um eine allgemein gesteigerte Reaktions-
f&higkeit gegenflber Lipoiden, zeigte sich, als dieselben Sera
mit alkoholischem Meerschweinchenherzextrakt als Antigen
untersucht wurden (Tabelle III).
Tabelle III.
Meerschw.-Herz-
extrakt 1:5 +
Bandwurm-Immunserum
UU
II
Ill IV
V
1 VI
VII
V1H
1 ix
0,05 ccm
0,02 „
0,01 „
i. H.
k. H.
|k.H.
f. k.H. k. H. k. H.
k. H. Ik. H.lk. H.
k. H. Ik. H. k. H.
0‘)
f. k.H.
0
Spur
f.k.H.
i. H.
f. k. H.
k. H.
f. k. H.
k. H.
k. H.
i. H.
f. k. H.
k. H.
1) Eigenhemmung.
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358 K. Meyer, Bpezifitat der Komplementbindungsreaktionen etc.
Hierbei zeigten die Sera nicht stfirkeres Eomplement-
bindungsvermdgen als andere Immunsera. Auch ein Paral-
lelismus zur Stfirke der spezifischen Reaktion war nicht er-
kennbar.
Durch die mitgeteilten Versuche ist, wie ich glaube, die
Spezifit&t der Eomplementbindungsreaktion der
experimentell erzeugten Kaninchenimmunsera
mit den alkoholischen Parasitenextrakten ein-
wandsfrei bewiesen. Mdglich war dies nur durch eine
quantitative Auswertung der Reaktionsf&higkeit der Sera,
die eine Differenzierung von den unspezifischen Reaktionen
der Normal- und anderen Immunsera ermOglichte. Bei der
Prflfung nur einer hohen Serumkonzentration, wie sie von
B u s s o n vorgenommen wurde, muBten sich diese Differenzen
naturgem&B dem Nachweis entziehen. Somit finden auch die
Angaben dieses Autors ihre Erkl&rung.
FQr die diagnostische Praxis sind natilrlich die un¬
spezifischen Reaktionen von nicht zu unterschfttzender Be-
deutung, da die Entscheidung, ob es sich urn solche Oder
urn schwache spezifische Reaktionen handelt, nicht immer mit
Sicherheit zu treffen sein wird. Man wird daher bei der
Echinokokkendiagnose, wenn irgend mdglich, neben den
alkoholischen Extrakten auch die Cystenflflssigkeit als Antigen
verwenden, und durch gleichzeitige Vornahme der W as ser¬
in an nschen Reaktion das Vorhandensein von Lues auszu-
schliefien suchen.
Zusammenfassung.
Die Eomplem entbindungsreaktion alkoholischer Parasiten-
extrakte mit Seren von Parasitentr&gern und mit Parasiten-
extrakten immunisierter Eaninchen ist strong spezifisch.
Der Beweis hierfflr laBt sich durch quantitative Aus¬
wertung der Sera ffihren. Hierbei tritt die groBe quantitative
Differenz gegenflber der Reaktionsfahigkeit unspezifischer,
z. B. luetischer Sera klar zutage.
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Meyer, Komplementbindende Bestandteile des Tuberkelbacillus. 359
Nachdruck verboten.
[Aus dem Serobakteriologischen Laboratorium des Stadtkranken-
hauses in Stettin.]
Ueber die komplementbindenden Bestandteile
des Tabe'rkelbaclllns.
V. Mitteilung.
Ueber antigene Eigenschaften von Lipoiden.
Von Dr. Kurt Meyer.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 31. Mai 1912.)
Nachdem festgestellt war 1 ), daB das spezifische Kom-
plementbindungsvermogen alkoholischer Bandwurmextrakte
durch die acetonunldslichen Lipoide bedingt ist, lag es nahe,
analoge Untersuchungen auch an bakteriellen Antigenen an-
zustellen. Als geeignetes Objekt boten sich hier wegen ihres
bohen Gehaltes an lipoiden Bestandteilen die Tuberkelbacillen.
Aus fiufieren Grfinden fanden die schon vor langer Zeit
begonnenen Versuche erst jetzt ihren AbschluB. Inzwischen
sind Arbeiten erschienen, die sich mit dem gleichen Gegen-
stande befassen. Da meine Resultate unabhfingig davon und
mit anderer Methodik gewonnen sind, so soil fiber sie im
folgenden kurz berichtet werden.
Der Gang der Untersuchung war der, daB durch Behand-
lung mit verschiedenen Extraktions- und Losungsmitteln
einzelne Fraktionen gewonnen und diese auf ihr Komplement-
bindungsvermdgen mit einera spezifischen Antiserum unter-
sucht wurden. Als Antiserum stand mir Hochster Tuber-
kuloseserum zur Verffigung.
Im einzelnen gestaltete sich die Untersuchung, wie folgt:
50 g feuchte Tuberkelbacillen, die mir in liebenswiirdigster Weise yon
den Hochster Farbwerken iiberlassen waren, wurden zweimal mit je 500 g
Alkohol bei 37° unter haufigem Schiitteln extrahiert.
Die vereinigten alkoholischen Extrakte wurden im Vakuum zur
Trockne eingedampft. Die Menge des Ruckstandes betrug 1,5 g. Er
1) Kurt Meyer, diese Zeitschr., Bd. 7, 1910, p. 732, und Bd. 9,
1911, p. 530.
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360
Kurt Meyer,
wurde mit Benzol extrahiert, wobei 1,2 g in Losung gingen. Der nach
Verdampfung der Benzolldsung bleibende Riickstand von 1,2 g wurde er-
Bchopfend mit Aceton extrahiert. In Losung gingen 0,45 g. Der Ruck-
stand wurde mit Petroiather behandelt, wobei nur eine geringe, nicht weiter
untersuchte Menge zuriickblieb. Die petrolatherische Losung wurde mit
einem UeberschuS wasserfreien Alkohols gefallt. Das Gewicht der Fallung
betrug 0,55 g. Der nach Verdampfung der uberstehenden Fliissigkeit
bleibende Riickstand wog 0,18 g.
Die mit Alkohol extrahierten Tuberkelbacillen, deren Trockengewicht
11 g betrug, wurden erechopfend mit wasserfreiem Aether extrahiert. Das
Gewicht des zum Trocknen gebrachten Aetherextraktes betrug 0,35 g.
Die Bacillen, die sich noch immer als siiurefest erwiesen, wurden nun-
mehr, nachdem besondere Versuche gezeigt hatten, dafi durch Benzol,
Chloroform und Tetrachlorkohlenstoff nur unerhebliche Mengen in Losung
gebracht wurden, nach dem Vorgange Aronsons 1 ) wiederholt mit Tri-
chlorathylen extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden im warmen Luft-
strom zur Trockne gebracht. Die Menge des Riickstandes betrug 1,2 g.
Die Bacillen hatten nunmehr ihre Saurefestigkeit verloren.
Nachstehend seien die einzelnen Fraktionen noch einmal
tibersichtlich zusammengestellt unter Beifiigung der Bezeich-
nung, unter der sie spater gefflhrt werden sollen.
A. Alkoholextrakt
a) Benzolunloslich
b) Benzolloslich
a) Acetonloslich
P) Acetonunloslich
1) Alkoholloslich
2) Alkoholunloslich
B. Aetherextrakt
C. Trichlorathylenextrakt
1,5 g
0,3 g = Fraktion I
g
0,45 g = Fraktion II
0,18 g = Fraktion III
0,55 g = Fraktion IV
0,35 g = Fraktion V
1,2 g = Fraktion VI
Bei einem Gesamttrockengewicht der Bacillen von etwa
12,5 g betragt also die Menge der Lipoide im weitesten Sinne
etwa 3 g = 25 Proz. Es stimmt dies mit den Angaben der
Literatur iiberein.
Was die chemische Charakterisierung der einzelnen
Fraktionen betrifft, so ist groBe Reserve geboten, da unsere
Kenntnisse von der chemischen Zusammensetzung des Tu-
berkelbacillus trotz vieler Untersuchungen noch immer un-
zulSnglich sind.
Fraktion I diirfte im wesentlichen aus EiweiBkorpern und
Salzen bestehen, die bei der ersten Alkoholextraktion von den
1) Aronson, Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 35.
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Ueber komplementbindende Bestandteile des Tuberkelbacilius. 361
anderen Substanzen in LSsung gehalten wurden. Fraktion II,
von weicher Konsistenz und braun gef&rbt, setzt sich wohl
hauptsSchlich aus echten Fetten und FettsSuren zusamnien.
Fraktion III, die sich als stark phosphorhaltig erwies, eben-
falls von weicher Konsistenz und von gelber Farbe, dUrfte
Lecithin und &hnliche Phosphatide enthalten. Ueber die Natur
von Fraktion IV ist ein Urteil besonders schwierig. Sie stellte
einen leicht gelb gef&rbten, trockenen, zerreibbaren Ktirper
dar und zeigte nach VeraschungmSBig starke Phosphorreaktion.
Ihre Aufschwemmung in Wasser erwies sich als sehr stabil,
sie verhielt sich wie die eines hydrophilen Kolloids. Ich
mdchte daher glauben, daB auch sie haupts£chlich aus
Phosphatiden, und zwar solchen vom Charakter des Kepha-
lins, besteht. Fraktion V dflrfte nach Aussehen und Eigen-
schaften (weiBe Kristalle, positive Akroleinreaktion, negative
Phosphorreaktion) aus Fetten vom Charakter des Palmitins
und Stearins bestehen. Die trichlor&thylenlSsliche Fraktion VI
soli nach Aronson im wesentlichen aus echtem Wachs be¬
stehen. Sie gibt aber auch positive Akroleinreaktion und
schwache Phosphorsaurereaktion. In isoliertem Zustande ist
sie auch in Tetrachlorkohlenstoif, Chloroform und, wenn auch
schwer, in Aether loslich. Die UnmQglichkeit, sie aus den
Bacillen mit den genannten Losungsmitteln zu extrahieren,
dGrfte wahrscheinlich dadurch bedingt sein, daB sie in irgend-
einer Weise an die EiweiBkorper des Tuberkelbacillus gebunden
ist, und daB diese Bindung nur durch Trichlorfithylen gelost
werden kann.
Vor dem eigentlichen Komplementbindungsversuch wurde
das Eigenhemmungsvermbgen der einzelnen Fraktionen be-
stimmt.
Schwierigkeiten bereitete die Herstellung homogener
Emulsionen. Fraktion I wurde mit Kochsalzldsung direkt
verrieben. Fraktion II und III wurden in etwas Alkohol
gelbst und die LOsungen mit Kochsalzlosung verdfinnt. Frak¬
tion IV, V und VI wurden zunfichst in etwas Aether Oder
Chloroform gelbst, mit Alkohol bis zum Entstehen einer
Trflbung versetzt und dann schnell mit Kochsalzlosung ver-
diinnt. Aether und Chloroform wurden im Vakuum verdampft.
Durch den Alkohol werden die Substanzen in so feiner Form
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362
Kurt Meyer,
gef&llt, daB die Emulsionierung in Kochsalzlosung wenigstens
ann&hernd gelingt. Besonders Fraktion IV gab ganz homo-
gene Aufschwemmungen.
AuBer den beschriebenen Fraktionen wurden auch die
extrahierten Bacillen, sowie einfach im Vakuum getrocknete
Bacillen untersucht. Beide wurden m5glichst fein zerrieben
und in Kochsalzlosung aufgeschwemmt.
In Tabelle I ist das Ergebnis der Eigenhemmungs-
bestimmung wiedergegeben.
Tabelle I.
Auf-
schwemmung
1:500
Fraktion
I
Fraktion
II
Fraktion
III
Fraktion
IV
Fraktion
V
Fraktion
VI
Extra-
hierte
Bacillen
Voll-
bacillen
0,5 ccm
0
1
i. H.
0
i. H.
f.k. H.
f.k. H.
i. H.
0
0.2 „
0
k. H.
i. H.
k. H.
k. H.
k. H.
f.k. H.
i. H.
0,1 „
0
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
f.k. H.
0.05 „
Spur
1 k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
0,02 „
1 i. H.
| k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H. = komplette Hamolyse; i. H. = inkomplette Hamolyse; f. k. H.
= fast komplette HamolvBe.
0,05 ecm Meerschweinchenkomplement; 5-proz. Hammelblutaufschwem-
mung; Gesamtvolumen 2,5 ccm.
Ein erheblicheres Eigenhemraungsvermogen zeigte also
nur Fraktion I.
Das spezifische KomplementbindungsvermOgen wurde in
Gegenwart von 0,006 ccm Tuberkuloseserum bestimmt, nach-
dem dessen eben nicht mehr eigenhemmend wirkende Grenz-
dosis zu 0,012 ccm festgestellt war (Tabelle II).
Tabelle II.
0,006 ccm Tuber¬
kuloseserum +
Aufschwemmung
1:5000
Fraktion
I
Fraktion
II
Fraktion
III
Fraktion
IV
Fraktion
V
Fraktion
VI
Extra-
hierte
Bacillen
Voll-
bacillen
0,5 com
0
k. H.
0
0
ik.H.
Spur
i. H.
0
0,2
11
Spur
k. H.
0
0
k. H.
i. H.
f. k. H.
0
0,1
11
i. H.
k. H.
0
0
k. H.
i. H.
k. H.
Spur
0,05
11
f. k. H.
k. H.
0
0
k. H.
f. k. H.
k. H.
i. H.
0,02
71
k. H.
k. H.
Spur
0
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
0,01
11
k. H.
k. H.
i. H.
0
k. H.
k. H.
k. H.
k.H.
0,005
11
k. H.
k. H.
f. k. H.
i. H.
k. H.
k. H.
k. H.
k. H.
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Ueber komplementbindende Bestandteile des Tuberkelbacillus. 363
Zu der Tabelle II ist zunSchst zu bemerken, daB Fraktion
V in hdheren Konzentrationen noch vollkommene Hemmung
gab, wfihrend bei Fraktion II die Eigenhemmung durch das
Serum nicht nennenswert verstarkt wurde. Auch bei Fraktion I
diirfte die Steigerung des EigenhemmungsvermOgens im wesent-
lichen als Summationswirkung zu deuten sein.
Ohne weiteres ergibt sich aus der Tabelle, daB das spezi-
fische KomplementbindungsvermSgen der Tuberkelbacillen in
der Hauptsache durch die Fraktionen III und IV bedingt ist
und, da Fraktion IV der Menge nach bedeutend Gberwiegt,
im wesentlichen durch diese. Noch in der minimalen Menge
von 0,002 mg Oder in einer Verdtinnung 1:1250000 bewirkt
sie vfillige Hemmung der HGmolyse.
Betrachten wir demgegenGber das Komplementbindungs-
vermOgen der anderen Fraktionen, so kommt Gberhaupt nur
noch Fraktion VI in Betracht. Sie ist etwa lOOmal weniger
wirksam als Fraktion IV. Es ISBt sich nicht mit Sicherheit
ausschlieBen, daB diese schwache Wirksamkeit nicht durch
Beimengungen von Spuren der Fraktion IV bedingt ist, zu-
mal die LGsungsverhaltnisse beider Fraktionen ahnlich sind.
Noch mehr gilt dies fGr die noch schwacher wirksame
Fraktion V.
Auch bei Fraktion III kOnnte die Frage aufgeworfen
werden, ob nicht ihre Wirksamkeit durch Beimengungen von
Fraktion IV zu erkl&ren sei. Diese Moglichkeit glaube ich
nach ihren physikalischen Eigenschaften, ihrer weichen Kon-
sistenz, ihrer braunen Farbe und ihrer leichten Loslichkeit in
Alkohol ausschlieBen zu dflrfen. Nach der Stfirke ihres
Komplementbindungsvermogens berechnet, mGBte die Bei-
mengung von Fraktion IV V 3 bis V 4 ihrer Masse ausmachen;
eine solche Menge mGBte aber ohne weiteres erkennbar sein,
und die Fraktion konnte nicht einen so einheitlichen Eindruck
machen, wie es der Fall ist.
WShrend wir Fraktion III mit einiger Sicherheit als
Lecithin Oder ein verwandtes Phosphatid charakterisieren
kdnnen, sind wir leider bei Fraktion IV, wie schon hervor-
gehoben, bezGglich der chemischen Natur auf Vermutungen
angewiesen. Wir haben uns dahin ausgesprochen, daB auch
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364 Kurt Meyer,
in ihr ein Phosphatid, und zwar vora Charakter des Kephalins,
zu vermuten sei.
Sollte sich diese Annahme bestfitigen, so ware hiermit
eine interessante Analogie zu den Befunden bei den Band-
wurmextrakten gegeben. Auch bei diesen waren die ent-
sprechenden Fraktionen als die wirksamen Bestandteile er-
kannt worden.
FQr die Auffassung der Fraktion IV als Phosphatid spricht
auch ihre leichte Zerstdrbarkeit durch Lauge und ihre Resi-
stenz gegen S&urewirkung, wie sich aus dem folgenden Ver-
such ergibt.
Eine Aufschwemmung in Kochsalzldsung wurde mit dem
gleichen Volumen Normal-SalzsSure resp. -Natronlauge versetzt
und 24 Stunden bei 37° gehalten. Hinterher wurde genau
neutralisiert und der Komplementbindungsversuch mit 0,006 ccin
Tuberkuloseserum angestellt.
Tabelle III.
Fraktiou IV 1:5000
ohne Zusatz |
+ HC1
i + NaOH
0,5
0
0
f. k. H.
0,2
0
0
k. H.
0,1
0
0
k. H.
0,05
0
0
k. H.
0,02
0
i. H.
k. H.
0,01
0
f. k. H.
k. H.
0,005
i. H.
k. H.
k. H.
Unter der Einwirkung der Lauge war also das spezifische
Komplementbindungsvermdgen der Fraktion nahezu ganz ver-
loren gegangen, wahrend die Saure nur eine m&fiige Ab-
schwachung bewirkt hatte, die vielleicht auf die erfolgte Aus-
flockung und die dadurch veranderten Oberflachenverhaitnisse
zurflckzufiihren war.
Die leichte Zerstdrbarkeit der Substanz durch Lauge
macht es sehr unwabrscheinlich, dafi es sich um ein Wachs
handelt. Da andererseits die absolute Unldslichkeit in Alkohol
gegen die Fettnatur spricht, so ist auch aus diesem Versuche
zu schlieSen, dafi in der Tat Fraktion IV von einem Phosphatid
gebildet wird.
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Ueber komplementbindende Bestandteile des Tuberkelbacillus. 365
Fraktion III hatte bei dem gleichen Versuch ein ganz
ahnliches Verhalten gezeigt. nur war bei ihr die Abschw&chung
durch Sfture starker ausgesprochen.
DaB das Komplementbindungsvermdgen der unverknderten
Tuberkelbacillen im wesentlichen durch die Lipoide der Frak-
tionen III und IV bediogt ist, zeigt das schwache Reaktions-
vermogen der extrahierten Bacillen. Offenbar kommt den
EiweiBkorpern des Tuberkelbacillus ein bedeutend geringeres
Komplementbindungsvermogen zu als den Lipoiden. Aller-
dings ist zu berGcksichtigen, daB die Bacillen auch in der
feinsten Verreibung eine erheblich geringere Oberflache be-
sitzen als die in kolloidaleni Zustand suspendierten Lipoide,
was sicher von EinfluB auf die Starke der Komplement-
bindungsreaktion ist. AuBerdem kann die ReaktionsfBhig-
keit der EiweiBkdrper bei den Extraktionsprozessen gelitten
haben.
Andererseits zeigt aber eine einfache rechnerische Ueber-
legung, daB das Komplementbindungsvermdgen der Vollbakterien
durch das der Fraktionen III und IV vdllig zu erklSren ist
Diese noachen zusammen zwar nur etwa 6 Proz. der Trocken-
substanz der Bacillen aus. Dafflr ist aber ihr Komplement-
bindungsvermdgen annahernd 20mal starker als das der Voll-
bakterien, so daB nach einer weiteren Komponente fQr dieses
nicht mehr gesucht zu werden braucht.
Die geringe komplementbindende Wirksamkeit der EiweiB-
kdrper laBt es ausgeschlossen erscheinen, daB das Bindungs-
vermogen der Lipoide durch beigemengte EiweiBspuren bedingt
ist, ein Einwand, der, wenn auch kaum mit Berechtigung,
gegen das spezifische Komplementbindungsvermdgen der
Bandwurmlipoide erhoben werden konnte. Hierdurch gewinnen
auch die frQheren isoliert stehenden Befunde an Sicherheit.
Es ist somit nunmehr fQr zwei ganz differente
Lipoidklassen der Nachweis spezifischer anti-
gener Wirksamkeit erbracht, und zwar in dem
Sinne, daB sie mit Antikdrpern in spezifischer
Weise reagieren, wahrend die AntikQrpererzeugung
im Tierversuch mit ihnen bisher noch nicht ge-
lungen ist.
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366
Kurt Meyer,
Was die frQheren hierher gehOrigen Arbeiten in der Lite-
ratur betrifft, so sind die von Citron und Klinkert 1 ) und
von Aronson 2 3 * ) nur kurz zu erwfihnen, da diese Autoren
nicht mit reinen Substanzen gearbeitet haben.
Sodann sind von Much 8 ) teils allein, teils im Verein mit
anderen Autoren, wieDeycke, Deilmann, Leschke u. a.,
zum Teil schon vor 1 lingerer Zeit Versuche fiber das Kom-
plementbindungsvermdgen der „Fettbestandteile“ des Tuberkel-
bacillus veroffentlicht worden. Seine Ergebnisse sind mit denen
meiner Untersuchungen nicht ohne weiteres vergleichbar, da
er sich anderer Isolierungsmethoden bedient hat.
Er kommt zu dem Ergebnis, dafi es AntikOrper gibt
1) gegen Neutralfett + Fettalkohol der Tuberkelbacillen
= Tuberkuloastin;
2) gegen Fettslluren + Lipoide der Bacillen;
3) gegen Eiweifi der Bacillen.
Diese Antikdrper sollen nicht identisch und in verschie-
denen Seren in ungleicher Menge vertreten sein.
Aufffillig ist das von ihm beobachtete Reaktionsvermogen
des Fettsfiuren-Lipoidgemisches, das er durch Kochen der
Tuberkelbacillen mit Kalilauge, Ansauern der Verseifungs-
flflssigkeit und Extrahieren des ausfallenden Niederscblags
mit absolutem Alkohol gewinnt. Es ist nach allem, was wir
wissen, kaum denkbar, dafi irgendein Lipoid bei einem so
eingreifenden Verfahren der Spaltung entgehen sollte. Es sei
denn, dafi Much die Cholesterine zu den Lipoiden rechnet.
Noch fiberraschender wfire, wenn dabei sogar die spezifische
Reaktionsffihigkeit erhalten bleiben sollte, da wir bereits bei
einer Temperatur von 37° ihre Zerstdrung beobachtet haben.
Man kdnnte daher die spezifische Reaktionsffihigkeit nur auf
die Fettsfiuren beziehen. Ich habe diese in meinen Ver-
suchen, wie oben mitgeteilt, gfinzlich unwirksam gefunden.
1) J. Citron und Klinkert, Berl. klin. Wochenschr., 1910, No. 35,
p. 1614.
2) Aronson, loc. cit.
3) Much, Beitr. z. Klin. d. Tuberk., Bd. 20, 1911, p. 341. Hier die
iibrige Literatur.
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Ueber komplementbindende Bestandteile des Tuberkelbacillus. 367
Es ist mir ferner auch nicht gelangen, mit dem nach Much
dargestellten Gemisch eine Komplementbindungsreaktion zu
erzielen.
Ebensowenig konnte ich Komplementbindung beobachten
mit Nastin, das bei dem eben erwfihnten Verfahren durch
Aetherextraktion des Rflckstandes der Alkobolextraktion ge-
wonnen wird, noch bei einem Nastinpr¶t, das mit der
Benzoylchloridmethode dargestellt war. Ich lasse es dahin-
gestellt, ob Fehler bei der Herstellung der Prflparate ftir das
negative Resultat verantwortlich zu machen sind.
Ich mdchte jedoch meine Bedenken gegenflber der Benzoyl-
chloridextraktion nicht unterdrflcken. Wegen des hohen Siede-
punktes des Benzoylchlorids (195°) l&Bt sich bei der Ver-
dampfung der Fltissigkeit auch unter Anwendung eines guten
Vakuums eine l&ngere Erhitzung auf fiber 100° kaum ver-
meiden. Es ist wohl denkbar, daB dabei labilere Substanzen
nicht gleichgtlltige Veranderungen erleiden. AuBerdem scheint
mir auch die ausgesprochene Reaktionsfahigkeit des Benzoyl¬
chlorids eine unerwfinschte Beigabe zu sein. DaB Benzoylester-
bildung eintritt, ist schon am Geruch zu erkennen. Ob das
Reaktionsvermogen mancher Stoffe dabei nicht ebenfalls ver-
findert wird, ist schwer auszuschlieBen. Aus diesem Grunde
scheint mir die von Aronson vorgeschlagene Extraktion
mit dem indifferenten Trichlor&thylen den Vorzug zu ver-
dienen.
SelbstverstSndlich liegt es mir fern, die Muchschen
positiven Resultate anzuzweifeln. Bei Nachprflfungen laufen
zu leicht Versuchsfehler unter. Vor allem mochte ich auch
betonen, daB ich nur mit einem Antiserum gearbeitet habe
und daB Much selbst angibt, daB die einzelnen Antikorper
keineswegs in alien Seren gleichm&Big enthalten sind.
Ich habe daher selbst Immunisierungsversuche mit den
einzelnen Fraktionen begonnen und hoffe bald iiber deren
Ergebnis berichten zu kbnnen. Ferner sind Versuche darflber
im Gange, wie sich das tuberkulbse Tier den einzelnen Frak¬
tionen gegenflber verh<, ob durch sie der Tuberkulinreaktion
entsprechende Reaktionen ausgelost werden.
Zeittcbr. f. Immunittttsforachung. Orig. Bd. XIV. 25
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368
A. Lura
Zusammenfassung.
Das spezifische Komplementbindungsvermogen der Tuber-
kelbacillen ist im wesentlichen an zwei Fraktionen gebunden,
die beide in Benzol, Petrolather und Aether loslich, in Aceton
unloslich sind und von denen die eine sicher, die andere
wahrscheinlich von Phosphatiden gebildet wird. Die anderen
Fraktionen, Fette, FettsSuren und Wachs geben, wenigstens
mit dem zur Untersuchung benutzten Hochster Tuberkulose-
serura, keine oder nur sehr schwache Komplementbindung.
Die vollig extrahierten Bacillen reagieren ebenfalls nur
schwach mit dem Tuberkuloseserum.
Nach den Angaben Muchs hergestellte Fettsfiure- und
Nastinpraparate gaben mit dem Hfichster Serum keine Kom¬
plementbindung.
Nachdruck verboten.
Bemerkungcn zu der Arbeit von A. Seitz fiber Bakterlen-
anaphylaxie.
Von Dr. A. Lura, Bergamo.
In seiner in Heft 1, Bd. 14 dieser Zeitschrift erschienenen
Arbeit unterzieht Seitz einen Teil meiner Ausfiihrungen, die
in dieser Zeitschrift, Bd. 12, erschienen sind, einer Kritik, die
mich zu den nachstehenden Bemerkungen veranlaBt.
Seitz bebauptet erneut, daB die Anaphylatoxinbildung
durch inaktives Serum gelinge.
Wir sehen aber auch in den jetzt mitgeteilten 11 Versuchen
von Seitz fiber angebliche Giftabspaltungen aus inaktivem
Serum in keinem einzigen Fall akuten Tod, wie er
sich mit aktivem Serum regelm&Big, namentlich auch bei
dem Dysenteriebacillus bei geeigneten Mengen erzielen lfiflt.
Wenn ttbermfiBig groBe Bakterienmengen mit irgend-
einer indifferenten Flfissigkeit, sei es physiologischer Kochsalz-
losung, Wasser oder inaktiviertem Serum, digeriert werden,
so gehen genflgend Leibessubstanzen in Losung, um bei der
Injektion in den Organismus eines Tieres vermoge dessen
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Bemerkungen zu der Arbeit von A. Seitz liber Bakterienanaphyiaxie. 369
Komplement nachtrSglich Anaphylatoxin abzuspalten und
das Tier subakut zu tbten [Friedberger und Mita 1 2 ),
Seitz *)].
Das, was aber hier allein wesentlich ist und worauf es
uns ankommt, ist zu zeigen, daB Bakterien men gen, die viel-
tausendraal unter den an sich akut todlichen liegen 3 ), ein
akut todliches Gift abspalten unter der Einwirkung von Kom¬
plement, wShrend die gleichen und auch betrachtlich grOBeren
Mengen durch keine andere Suspensionsfliissigkeit, wie z. B.
inaktives Serum, ein Gift bilden.
Deswegen war es ganz irrelevant, wie ich im Gegensatz
zu Seitz noch einmal betonen muB, ob wir Prodigiosus
oder eine andere Bakterienart verwandten 4 ), und auch
die absolute Menge spielte keine Rolle, da es ja nur darauf
ankam, daB entsprechende Mengen mit inpktivem Serum kein
akutes Gift lieferten.
Im Bbrigen haben wir uns streng an die in frhheren
Arbeiten aus unserem Institut hinl&nglich beschriebene Me-
thodik gehalten, und zur Giftabspaltung pro Kubikzentimeter
Serum eine Oese Prodigiosus benutzt.
Es ergibt sich also, daB weder unsere Ver-
suche noch die von Seitz einen Anhalt dafttr
liefern, daB eine Giftabspaltung ohne Komple¬
ment zustande kommt; im Gegenteil gerade die
Seitzschen Versuche sind nur dazu geeignet, die
frtlheren Angaben Friedbergers zu sthtzen.
Wenn sich Seitz auf eine neuere Arbeit von Do err
und Russ beruft, so ist es, wie schon Friedberger an
1) Verhandl. d. freien Vereinig. f. Mikrobiol., Juni 1911. — Centralbl.
f. Bakt., Ref., 1911, Beiheft. — Ferner diese Zeitschrift, Bd. 10, Heft 4.
2) Diese Zeitschrift, Bd. 11, Heft 5.
3) Die Prioritat in der Deutung der fur das Normaltier akut todlichen
Yergiftung durch Bakterienleiber als anaphylaktische schreibt sich Seitz,
wie aus obigen Literaturnachweisen hervorgeht, zu Unrecht zu. Die ersten
Bestimmungen des anaphylaktischen Index fur Bakterien riihren von
Friedberger und Mita her.
4) Uebrigens haben schon Friedberger und Reiter (diese Zeit¬
schrift, 1911) gezeigt, dafi die Anaphylatoxinbildung aus Dysenteriebacillen
genau nach denselben Gesetzmafiigkeiten verlauft wie die aus anderen
Bakterien.
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370 A. Lurk, Bemerkungen zu der Arbeit von A. Seitz etc.
anderer Stelle 1 ) betont hat, klar, daB auch bei dieser Ver-
suchsanordnung eine Intervention des Komplementes im
Organism us statt haben muB.
Hier werden vielfach die Bedingungen fibersehen, wie sie
von Friedberger und Castelli 2 ) fiber die prim&re Anti¬
serum gif tigkeit ermittelt worden sind.
Bezfiglich der Fieberversuche mflssen wir unsere Kritik
an den filteren Yersuchen von Seitz aufrecht erhaiten.
Er hat sich keineswegs an die Versuchsanordnung von
Friedberger gehalten.
Wenn er sich auf dessen Arbeit in der Berliner klinischen
Wochenschrift, 1910, No. 40, beruft, so muB hervorgehoben
werden, daB in dieser Arbeit nur die Resultate mitgeteilt
sind und eine Beschreibung der Methode fiberhaupt nicht ge-
geben ist.
Diese ist erst in der Arbeit von Friedberger und
Mita ausffihrlich geschildert, die bereits fiber einen Monat
vor dem AbschluB der Seitzschen Versuche erschienen
ist, so daB er sie wohl hfitte berflcksichtigen kfinnen.
Die Bestfitigungen, die die Versuche von verschiedenen
Seiten erfahren haben, zeigen fibrigens zur Genfige, daB
die abweichenden Resultate von Seitz auf die Nichteinhaltung
der beschriebenen Technik zurfickzuffihren sind.
Endlich wurden die Messungen von Seitz nicht halb-
stttndig vorgenommen, sondern (und auch nur in einem kleineren
Teil der Versuche nur in der ersten halben Stunde) spfiter
1—2-stfindig. Wie schuell sich aber das EiweiBfieber durch
kleine Dosen ausgleicht, zeigen ja hinl&nglich die Versuche
von Friedberger und Mita.
1) Verhandl. d. freien Vereinig. f. Mikrobiol., 1912.
2) Diese Zeitsehrift, 1910.
From mao nsche Buchdruckerei (Hermann Pohle) in Jena. — 4165
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Mschrift £ Mumtatsforschnng. Originala Bd.UV. Ho. 4.
Nachdruck vcrboten.
[Aus dem Fharmakologischen Institut der Universitat Berlin;
Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteilung ftir Im-
munitatsforschnng und experimentelle Therapie, Leiter: Prof.
Dr. E. Priedberger).]
Die SpezifizitSt der Anttanaphylaxie und ihre Beziehungen
zur Resistenz bet einigen der Anaphylaxie Shnlichen
Vergiftungen *)•
(Ueber Anaphylaxie. XXIX. Mitteilung.)
Von
E. Friedberger, Z. Szymanowski, T. Kumagai und Odaira, A. Lura.
(Eingegangen bei der Redaktion am 1. Juni 1912.)
A. Einleitung. Von E. Friedberger.
B. Die Spezifizitiit der aktiven Antianaphylaxie. Von Dr. Z. Szyma¬
nowski, Assistenten am Veterinarmediz. Institut der Universitat Krakau.
C. Die Spezifizitiit der passiven Antianaphylaxie und die Beziehungen der
Antianaphylaxie zum Peptonschutz. Von Dr. T. Kumagai und Marine-
oberstabsarzt Dr. Odaira, Tokio.
D. Die Beziehungen der Antianaphylaxie zum Anaphylatoxinschutz und
zur Vergiftung durch B-Imidazolylathylamin. Von Dr. A. Lurk, Assi-
stenten aer med. Klinik Pavia.
A. Einleitung.
Von E. Friedberger.
Eine der regelmSfiigsten und interessantesten Begleit-
erscheinungen der anapbylaktischen Vergiftung mit untertod-
lichen Dosen ist die von Otto 8 ) entdeckte und regelm&fiig
und bei alien darauf untersuchten Tierarten einsetzende Anti-
anapbylaxie, die ich 8 ) als Anaphylaxie refracta dosi ge-
deutet habe.
In der Tat konnen wir uns kaum eine merkwflrdigere
Tatsache denken als die, dafi eine Substanz, die eben noch in
1) Die Resultate sind vorgetragen und die Tabellen demonstriert in
der Tagung der Freien Vereinigung fiir Mikrobiologie, Sitzung vom
1. Juni 1912.
2) Miinch. med. Wochenschr., 1906.
3) Diese Zeitschr., Bd. 2, 1909.
Zeitschr. f. ImmunitMufortchong. Orig. Bd. XIV. 26
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372
E. Friedberger,
minimaler Dosis das (prfiparierte) Tier nahezu getdtet hat,
schon in kdrzester Frist nach der Erholung in unter Um-
st&nden mehr als 100-fach groBerer Dosis wirkungslos ist
und erst ganz allm&hlich nach Wochen wieder die frBhere
giftige Eigenschaft annimmt. Dieses Verhalten kennen wir
bei keinem der gewdhnlichen chemischen Gifte, und nichts
scheint uns mehr die relative prim&re Ungiftigkeit des
tierischen, pflanzlichen und vor allem des bakteriellen Ei-
weiBes zu demonstrieren, als diese Tatsache. Sie zeigt, daB
erst durch die vitale TStigkeit (sei es im Organismus, sei es
kflnstlich im Reagenzglas, Anaphylatoxinbildung) aus dem an
sich ungiftigen EiweiB das wirksame Gift abgespalten wird.
So ist das Phfinomen der Antianaphylaxie als eine wesent-
liche Folgeerscheinung der Anaphylaxie durch untertddliche
Dosen vor allem geeignet, auch Einblick in deren Wesen und
Mechanismus zu verschaffen.
Ueber die Antianaphylaxie existieren noch eine Reihe von
unklaren und widersprechenden Angaben, die zum Teil eine
erneute experimentelle Bearbeitung einzelner Fragen erheischen.
So findet man hier und da noch immer die Ansicht ver-
breitet, daB beim Kaninchen eine Antianaphylaxie nicht zu*
stande komme. Die diesbeziiglichen filteren Angaben von
Pick und Yamanouchi 1 ), sowie von U. Friedemann*)
sind aber nicht zutreffend.
Wir selbst haben stets auf Grund unserer Tierversuche
betont, daB auch beim Kaninchen Antianaphylaxie auftritt, und
besonders eklatant ergibt sich die Tatsache aus den Resultaten
der Blutdruckversuche von Friedberger und Grbber 3 ).
Auch die Versuche von Friedberger und Mita 4 ) bringen
den Beweis, daB die Antianaphylaxie beim Kaninchen nach
einem anaphylaktischen Shock mit subletaler Dosis sich
ausbildet. Wenn Knox, Moss und Brown 5 ) keine Anti¬
anaphylaxie gegen die Kutanreaktion erzielen konnten, so liegt
das daran, daB durch subkutane Reinjektionen wohl infolge
der mangelhaften Resorption nicht so leicht eine geniigende
1) Diese Zeitschr., Bd. 1, 1909.
2) Ebenda, Bd. 2, 1909.
3) Ebenda, Bd. 9, 1911.
4) Ebenda, Bd. 10, 1911.
5) Journ. of experim. Med., 1910.
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Die Spezifizitat der Antianaphylaxie. Einleitung. 373
Abs&ttigung der zirkulierenden AntikSrper erfolgt, mit der,
wie sogleich noch n&her ausgefflhrt werden soil, die Ausbildung
der Antianaphylaxie zusammenhftngt. Wir zweifeln aber nicht
daran, daB unter geeigneten Bedingungen auch hier die Anti¬
anaphylaxie eintreten wird.
Wir kommen also zu dem SchluB, daB beim
Kaninchen, entsprechend dem analogen Mechanis-
mas der Anaphylaxie, die Antianaphylaxie in
gleicher Weise entsteht wie beim Meerschwein-
chen. Die SchluBfolgerung, die Friedemann aus dem
angeblich abweichenden Verhalten des Kaninchens zieht, „daB
die Antianaphylaxie kein notwendiges Kriterinm der Ana¬
phylaxie ist u , ist also unzntreifend. Im Gegenteil, gerade
die Antianaphylaxie ergibt sich folgerichtig aus dem Wesen
der anaphylaktischen Vergiftung and ist in jedem Fall in irgend
einer Form nachweisbar. Wie gesetzm&Big und regelmfiBig
sie auftritt, haben besonders auch die Temperaturversuche
von Friedberger und Mita (1. c.) gezeigt.
Die Antianaphylaxie entsteht nach der Annahme von
Friedberger dadurch, daB bei der sie auslosenden Injektion
des Antigens ein partieller Antikorperverbrauch statt hat, so
daB bei der sp&ter folgenden Injektion einer beim pr&parierten
Kontrolltier tddlichen Dosis Eiweifi oder selbst eines Multiplums
nicht mehr genflgend AntikSrper vorhanden sind, um eine
todliche Giftdosis zu bilden.
Mit dieser Theorie stehen die Tatsachen in vollem Ein-
klang: das plStzliche Auftreten, die Spezifizit&t, die Mog-
lichkeit, daB man nach Otto gleichwohl mit dem Serum passive
Anaphylaxie flbertragen kann (weil eben ein Teil der Anti-
korper nicht abges&ttigt ist) und der allm&hliche Uebergang
in erneute Anaphylaxie. Die Antianaphylaxie entspricht also
dem homologen Antikbrperschwund, wie er bei dem immu-
nisierten Tier stets nach erneuter Zufuhr genflgender Dosen
des Antigens auftritt, der „negativen Phase"*). Speziell durch
1) Nach Bessau leugnet R. Pfeiffer die negative Phase; das
ist nicht ganz zutreffend. In der Arbeit, in der diese Frage behandelt ist
(Pfeiffer und Friedberger, Centralbl. f. Bakt., Bd. 47), wird ledig-
lich auf Grund von Versuchen nachgewiesen, daB der negativen Phase
eine „Bedeutung im Sinne einer erhohten Empfiinglichkeit des vaccinierten
Individuums“ nicht zukommt. Die Moglichkeit der negativen Phase im
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374
E. Friedberger,
Scott 1 ), sowie durch Joachim oglu 2 ) unter meiner Leitung,
ist auch im Reagenzglas nachgewiesen worden, dafi im ana-
phylaktischen Shock uud bei Erzeugung der Antianaphylaxie
der homologe Antikfirper im Organismus abnimmt, wfihrend
sonstige Antikfirper keine Verfinderung erfahren. Die Ver-
suche Joachimoglus sind neuerdings durch Baecher
und Wakushima 8 ) nachgeprfift und bestatigt worden.
Hier sei auch vor allem auf die bedeutsamen Befunde von
H. Pfeiffer und Mita hingewiesen, die mit dem Eintritt der
Antianaphylaxie das eiweiBspaltende Ferment aus dem Blut-
serum der praparierten Meerschweinchen verschwinden sahen.
Mit der spezifischen, momentan auftretenden und relativ
lange anhaltenden echten Antianaphylaxie sind nicht zu ver-
wechseln eine Reihe von Prozessen, durch die gleichfalls ein
Schutz eintritt, die aber schon mit Rficksicht auf ihre mangelnde
Spezifizitat und auf ihr schnelles Wiederverschwinden mit der
echten Antianaphylaxie kaum etwas zu tun haben. Hierher
gehOrt der Schutz, der nach Biedl und Kraus 4 ), sowie
H. Pfeiffer 5 ), H. Pfeiffer und Mita 6 ) durch Peptoninjektion
erzeugt wird oder durch artfremdes Serum fiberbaupt [Doerr 7 ),
H. Pfeiffer], sogar durch anorganische Substanzen, durch
Kaolin [Keysser und M. Wassermann 8 )] usw. (Dagegen
ist natfirlich der Schutz, der beim normalen Tier durch Normal-
serum spezifisch gegen die todliche Dosis der betreffenden Sera
erzielt wird, als echte Antianaphylaxie aufzufassen.)
Wir haben also hier sozusagen innerhalb gewisser Grenzen
dieselben Verhfiltnisse, wie sie R. Pfeiffers grundlegende
Untersuchungen fiber die Spezifizitfit des „Pfeifferschen
Phfinomens“ aufgedeckt haben. Auch hier mfissen wir eine
weitgehende, fast absolute Spezifizitfit des Ablaufs der Infektion
unter der Wirkung des spezifischen Serums unterscheiden
Sinne einer Antikorperabsattigung nach entsprechender Antigen-
zufuhr wird aber ausdriicklich anerkannt (1. c. p. 503).
1) Joura. of Path, and Bact., Vol. 4, 1909.
2) Joachimoglu, Zeitachr. f. Immunitatsf., Bd. 8, 1911.
3) CentralbL f. Bakt, Bd. 61, 1912.
4) Wien. klin. Wochenechr., 1909.
5) Wien. klin. Wochenechr., 1909.
6) Diese Zeitechr,, Bd. 4.
7) Diese Zeitachr., Abt. II, Bef., Bd. 2, 1910.
8) Wassermann und Keyser, Fol. SeroL; 25eitschr. f. Hyg., 1911.
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Die Spezifizitat der Antianaphylaxie. Einleitung.
375
von der von Pfeiffer und Isaeff so genannten allgemeinen
„Resistenz u , die vdllig unspezifisch durch die verschiedensten
entzilndungserregenden Substanzen im Peritoneum herbei-
geftthrt werden kann.
In analoger Weise ist auch bei der Ana*
phylaxie, wie ich schon frtlher betont habe,
zwischen der s t r e n g sp e zif i s chen u n d al 1 e in
schon deshalb nur auf Antikdrperabs&ttigung
refracta dosi zurfickzufflhrenden echten Anti¬
anaphylaxie zu unterscheiden und einer durch
die verschiedenartigsten Substanzen und Ein-
griffe bedingten allgemeinen Resistenz. Diese
Ansicht vertreten auch Sachs und Ritz 1 ).
Der prinzipielle Unterschied zwischen beiden BuBerlich
in gleicher Weise in Erscheinung tretenden Prozessen ist aber
bei der Anaphylaxie im Vergleich zum Ph&nomen R. Pfeif¬
fers noch urn so groBer, als auch quantitativ ganz enorme
Differenzen bestehen, wie sie in diesem Grad beim spezifischen
Pfeifferschen Phanomen im Vergleich zur aspezifischen
Resistenz nicht hervortreten.
Nur durch die AuBerachtlassung der gerade bei der Ana¬
phylaxie so gesetzm&Big vorhandenen und wichtigen quanti-
tativen Verhaltnisse war es moglich, eine Reihe heterogenster
Vergiftungen, die mit der anaphylaktischen nichts zu tun haben
und nur einen geringen aspezifischen Schutz bedingen,
gleichwohl mit ihr in enge Beziehungen zu bringen, wie das
z. B. bezflglich der Peptonvergiftung durch Biedl und Kraus
geschehen ist.
Auch die Spezifizit&t der Antianaphylaxie ist anfangs an-
gezweifelt worden (Otto, H. P f e i f f e r u. a.). SpSterhin schien
sie aber allgemein anerkannt zu sein und ist auch in unserem
Institut in bis daliin noch nicht veroffentlichten Experimenten
von Szymanowski erneut an gemischt prSparierten Tieren
nachgewiesen worden. Diese Versuche fiihrten zu dem Resultat,
daB zwar eine gewisse allgemeine Resistenz bei gemischt (mit
2 Seris) prAparierten Tieren gegen jede der zur Vorbehandlung
verwandten EiweiBarten eintritt, daB aber beim quantitativen
1) Verhandl. der Vereinigung fiir Mikrobiologie, 1911.
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376
E. Friedbergcr,
Arbeiten gleichwohl die durch die „Resistenz“ teilweise ver-
deckte spezifische Antianaphylaxie deutlich hervortritt.
Worauf speziell die Resistenz, die die Antianaphylakti-
sierung mit dem einen Eiweifi der Pr&parierung gegeniiber
dem anderen zur Folge hat, beruht, ist nicht ohne weiteres
zu sagen. Vielleicht handelt es sicb gerade bier um eine
partielle Antikbrperabstttigung durch gewisse, den verschie-
denen Saugern gemeinsarae Gruppen in dem zur Antianaphy-
laktisierung benutzten Eiweifi. Es lage dann ein Analogon
zur ^Mammalian reaction“ Nuttalls bei der Prazipitation
vor; bei nahe verwandten Tierspecies mtifite dann die Spezi-
fizitat der Antianaphylaxie proportional dem Grad der Ver-
wandtschaft zurflcktreten. Bei so entfernten Systemen wie
Rind—Pferd und Hammel—Pferd ist das aber, wie unsere
Versuche mit der letzteren Gruppierung zeigen, nicht der Fall.
In der jflngsten Zeit glaubte dann aber Bessau 1 ) auf
Grund einer analogen Versuchsanordnung und gleichfalls beim
Meerschweinchen zu anderen Ergebnissen gelangt zu sein.
Auch er ging so vor, „dafi er anstatt mit einem mit zwei
Antigenen sensibilisierte und dann mit einem der beiden
Antigene reinjizierte. Ueberlebten die Tiere die anaphylak-
tische Vergiftung, so waren sie selbstverstandlich gegen die
Reinjektion desselben Antigens geschiltzt; die Frage war,
wie sie sich gegenflber dem anderen Antigen der Vor-
behandlung verhielten. Waren sie auch diesem gegenOber
geschiltzt, so war — die nbtigen Kontrollen vorausgesetzt —
die Unhaltbarkeit der Antikdrperabsorptionstheorie erwiesen,
gleichzeitig aber auch gezeigt, dafi die Antianaphylaxie ein
aspezifischer Zustand ist“ (p. 638). „Da nun aber die mit
Pferde- und Rinderserum sensibilisierten und mit 0,05 ccm
Rinderserum reinjizierten Versuchstiere gegen eine weitere
Injektion von Pferdeserum geschiltzt sind, so kann auf Grund
dieser Tatsache die AntikOrperabsorptionstheorie als endgiiltig
widerlegt gelten“ (p. 651).
Es wird im Verlauf der nachstehenden Arbeiten noch ge¬
zeigt werden, wie wenig diese Schlufifolgerung Bessaus bei
exakter quantitativer Versuchsanordnung aufrecht er-
1) Centralbl. f. Bakt.. Bd. 60, 1911.
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Die 8pezifizitat der An tianaphylaxie. Einleitung. 377
halten warden kann, und wie die mannigfachste Variierung
der Versuche im Gegenteil gerade die Antikorperabsorptions-
theorie nach alien Seiten bestfitigt und stGtzt.
Auf Grund seiner weiteren Versuche mit Anaphylatoxin,
durch das er bei mit Rinderserum prilparierten und anti-
anaphylaktisch gemachten Tieren gleichfalls auch Schutz gegen
Typhusanaphylatoxin erhielt 1 ), und analoger Versuche bei
passiv pr&parierten Tieren kam er dann zu dem Schlufi, daB
„die Antianaphylaxie ein durch ein anaphylaktisches Gift hervor-
gerufener Reaktionszu stand des Organismus ist, der sich in
einer herabgesetzten Empfindlichkeit gegen anaphylaktisches Gift
dokumentiert* (p. 647/50). Die Aspezifizit&t der Antianaphylaxie
hSlt er auf Grund seiner Versuche fflr erwiesen.
Auch in diesen Anaphylatoxinversuchen ist auf eine quanti¬
tative Auswertung leider verzichtet, und wie wenig auch hier
die Schlufifolgerungen Bessaus allgemeine Gflltigkeit be-
anspruchen dOrfen, zeigen die nachfolgenden Versuche Lurks.
Der auffallende Gegensatz unserer Resultate zu denen
von Bessau ist schon ohne weiteres auf Grund der vorauf-
gegangenen Ausfflhrungen verst&ndlich. Die Versuche sind
selbstverstSudlich richtig. Dadurch aber, daB Bessau seine
Versuche nur qualitativ gestaltet und es unterlassen hat, in
grOBeren Versuchsreihen die Grenze der Anaphylaxie und
den Grad der Antianaphylaxie einerseits, der unspezifischen
Resistenz andererseits zahlenm&Big auszuwerten, kam er zu
der irrtdmlichen Ansicht, daB die Antianaphylaxie unspezifisch
sei und daher nicht auf einer Autikdrperabskttigung in unserem
Sinne beruhen kdnne.
Das, was er richtig beobachtet hat, war die tats&chlich
vorhandene und ja auch bereits bekannte unspezifische
Resistenz, das was ihm entgangen ist, ist die spezifische
Antianaphylaxie, die von jener Resistenz teilweise verdeckt
wird. Zu diesem SchluB fQhrten uns bezGglich der aktiven
Anaphylaxie schon die damals bereits vorliegenden Versuche
von Szymanowski. Ich habe jedoch diese Versuche noch
von anderen und nach anderer Richtung ergknzen lassen.
1) Auch Sachs und Ritz berichten schon vor Bessau fiber Schutz
bei antianaphylaktisierten Tieren gegenfiber Anaphylatoxin.
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378
E. Friedberger,
Es gait uns vor allem, auch fflr die Antianaphylaxie gegen-
fiber der passiven Anaphylaxie die Frage der Spezifizitflt
nflher zu untersuchen. Da ferner die Beziehungen zwischen
Anaphylaxie und Peptonvergiftung im wesentlichen
gerade auf Grand des vermeintlichen Uebergreifens des
Schutzes bei der Antianaphylaxie angenommen worden waren,
so haben wir auch nach dieser Richtnng Versuche angestellt.
Auch hier kommt Bess an zu dem Ergebnis, daft die
schon mehrfach geaufierte Annahme, daft Anaphylaxie und
Peptonvergiftung wesensverwandte Prozesse sind, mehr an
Boden gewinnt, nachdem seiner Meinung nach die Aspezifizitat
der Anaphylaxie als „erwiesen“ gel ten kann.
Im Gegensatz dazu wird durch die folgenden Versuche
von K u m a g a i und 0 d a i r a gezeigt werden, daft auch
die von Biedl und Kraus zuerst behaupteten Zusammen-
hange zwischen Antianaphylaxie und Peptonschutz bei quanti-
tativer Prflfung nicht bestehen, so daft damit das Haupt-
argument failt, welches von diesen Autoren fflr die Wesens-
gleichheit beider Vergiftungsprozesse angefflhrt worden ist.
Dazu kommt, daft bereits frflher Sachs und R i t z x ),
Manwaring 2 ), Lowit 3 ) Unterschiede zwischen Anaphylaxie
und Peptonvergiftung konstatiert haben. Namentlich haben
bereits Sachs und Ritz durch Pepton keinen Schutz gegen-
flber Anaphylatoxin gesehen und umgekehrt.
Schlieftlich ist neuerdings vielfach die Ansicht hervor-
getreten, daft zwischen der Wirkung des (3-Imidazolylathyl-
amins und des Anaphylatoxins enge Beziehungen bestehen,
was aber inzwischen durch Friedberger und Moreschi 4 )
widerlegt ist. Auch hier wurde von uns das Verhalten unter
den Versuchsbedingungen der Antianaphylaxie geprflft und die
Beziehung zur aktiven und passiven Anaphylaxie einerseits,
zur Peptonvergiftung andererseits untersucht.
In alien diesen Arbeiten, die im nachstehen-
den veroffentlicht werden, haben wir uns nicht
darauf beschrflnkt, bei reinjizierten Tieren ein-
fach eine beliebige Dosis zur Prflfung auf Anti*
1) 1. c.
2) Diese Zeitschr., Bd. 10.
3) Arch. f. exp. Pharm., 1912.
4) Berl. klin. Wochenschr., 1912, No. 16.
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Die SpeziiLzitiit der Antianaphylaxie. Einleitung.
379
anaphylaxie zu geben, sondern wir haben strong
quantitaiv den Grad der Empfindlichkeit der pr&-
pariertenTiere einerseits, unddermitsubletalen
Dosen reinjiziertep (an tian aphylaktisierten)
andererseits ansgewertet. Unter diesen Verhfilt-
nissen tritt die spezifische Antianaphylaxie, nur
in geringem Grad von der unspezifischen Re-
sistenz verdeckt, deutlich in alien Versuchs-
reihen in Uebereinstimmungmit unseren frfiheren
Ergebnissen zutage.
Bezflglich der aktiven Anaphylaxie hat das Z. Szyma¬
nowski bei mit Hammelserum and mit Pferdeserum zugleich
aktiv prfiparierten Tieren gezeigt.
Noch starker ist die Spezifizitat fibrigens, wie sich ans
den Untersuchungen von Kumagai und Odaira ergibt,
ausgesprochen bei der gemischten passiven Anaphylaxie.
Die bomologe Antianaphylaxie ist bis zu fiber 200 tOd-
liche Dosen (mehr konnte wegen der Schwierigkeit der In-
jektion grOBerer Volumina nicht geprfift werden) vorhanden;
eine heterologe Antianaphylaxie besteht nicht; nur eine mini¬
male Resistenz gegenfiber der 1—17 2 -f&ch todlichen Dosis.
Bei 2—3 tfidlichen Dosen h6rt dieser Schutz bereits auf.
Wenn wir bedenken, daB der Schutz durch die unter-
todliche Reinjektion des homologen Serums bei passiv prfi-
parierten Tieren ganz besonders ausgesprochen endgfiltig und
spezifisch ist, so spricht das deutlich ffir unsere Auf-
fassung, daB die Antianaphylaxie auf einer Ab-
sfittigung der Antikorper beruht Wie wfire sonst
die strenge Spezifizitat zu erklfiren? Nur das Antiserum ist
es ja, durch das wir das Tier prfipariert haben und die Anti-
kOrper sind bei der antianaphylaktisierenden Reaktion teilweise
verbraucht worden; da sie sich nicht sogleich neu bilden kdnnen,
so kehrt die Ueberempfindlichkeit zunfichst nicht wieder, wie es
sehr wohl der Fall sein mflBte, wenn der Komplementschwund bei
der Antianaphylaxie eine ausschlaggebende Rolle spielen wfirde,
denn das Komplement regeneriert sich bekanntlich sehr schnell.
In weiteren Versuchen wurden gleichfalls durch Dr. Ku¬
magai und Dr. Odaira die Beziehungen der Serum-Anti-
anaphylaxie zum Peptonschutz und umgekehrt untersucht,
und zwar bei aktiv wie bei passiv prfiparierten Tieren.
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380 Friedberger, Die Bpezifizitat der Antianaphylaxie. Einleitung.
Bei mit Hammelserum aktiv prfiparierten und mit Pepton
in untertbdlichen Dosen „antianaphylaktisch u gemachten Tieren
versagt der Schutz bereits wiederum bei der Reinjektion der
dreifach tfidlichen Hammelserumdosis.
Entsprechend sind die Resultate bei passiv prfiparierten
Tieren. Wfihrend bier beim durch homologes Serum antiana-
phylaktisch gemachten Tier mehr als 200 tddliche Dosen ver-
tragen werden, verleiht das Pepton nur einen Schutz gegen¬
fiber der vierfach tddlichen Dosis von Hammelserum, und
gegenfiber dem Pepton selbst geht der durch Pepton erzeugte
Schutz sicher nicht einmal wesentlich fiber die einfach tod-
liche Dosis hinaus.
Werden mit Hammelserum aktiv prfiparierte Tiere zu-
nfichst mit einer untertodlichen Dosis Anaphylatoxin behandelt,
so wird dadurch ein nennenswerter Schutz gegenfiber der
nachherigen Reinjektion des homologen Eiweifies nicht erzielt.
Ebenso vertragen mit Hammelserum prfiparierte und mit
Hammelserum antianaphylaktisch gemachte Tiere von Anaphyla¬
toxin nicht mehr als die einfache tddliche Dosis. Das schein-
bar entgegengesetzte Resultat Bessaus, dafi antianaphylakti-
sierte Tiere gegenfiber Anaphylatoxin geschtttzt waren, dfirfte
darauf beruhen, dafi vom Anaphylatoxin gerade nur die knapp
tddliche Dosis injiziert wurde. Damit ffillt aber der Schlufi
von Bessau, „daB die Antianaphylaxie ein durch anaphylak-
tisches Gift hervorgerufener Reaktionszustand des Organismus
ist, der sich in einer herabgesetzten Empfindlichkeit gegen
anaphylaktisches Gift dokumentiert“. Dieser Zustand ist eben
die leichte unspezifische Resistenz, die von der spezifischen
Antianaphylaxie zu trennen ist.
Auch gegenfiber dem {Mmidazolylfithylamin sind anti¬
anaphylaktisch gegenfiber Hammelserum gemachte Tiere in
keiner Weise geschfitzt, und schlieBlich verleiht auch die In-
jektion einer untertodlichen Dosis von (Mmidazolylfithylamin
keinen Schutz gegenfiber der Reinjektion mit dieser Substanz.
Unsere Versuche sprechen auch gegen die von Bessau
vertretene Anschauung, daB die Antianaphylaxie in ihrer
Ausbildung proportional gehe mit der Schwere der Symptome
bei der Antianaphylaktisierung. Das ist sicher ffir die aktive
und passive Anaphylaxie unzutreffend. Durch eine Zufuhr
refracta dosi im Sinne von Besredka oder durch protrahierte
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Z. Szymanowski, Die Spezifizitiit der Antianaphylaxie etc. 381
Zufuhr des Antigens [Friedberger und Mita 1 )] gelingt es
sehr leicht, beim pr&parierten Tier jegliche Symptome hintan-
zuhalten, doch kann die Antianaphylaxie gleichwohl eine be-
sonders vollkommene sein. Der Grad ihrer Ansbildnng
h&ngt lediglich von der vorher zugefflhrten An-
tigenmenge, deren Ort und dem Grad der da-
durch bedingten A n t i kor p e r ab s a 11 i gu n g ab,
einerlei, ob durch ihre Zufuhr schwere Sym¬
ptome ausgelOst werden Oder die Injektion in
einer Weise vorsichtig erfolgt, daB iiberhaupt
das Tier bei der Reinjektion nicht sichtbar er-
krankt. Da nun aber bei einer unzweckm&Bigen Antiana-
phylaktisierung naturgemifi die Symptome um so starker sind,
je grbfier die zugefiihrte Antigenmenge ist, so kann das einen
Zusammenhang zwischen Grad der Antianaphylaxie und Inten¬
sity der voraufgegangenen Symptome vortftuschen.
Wir bringen nun im nachstehenden die Arbeiten, die
des n&heren die experimentellen Belege ftir die obigen Aus-
fflhrungen darstellen.
Zur Technik sei noch ftir alle diese Arbeiten bemerkt,
daB Pr&parierung und Reinjektion in analoger Weise wie bei
frtlheren Untersucbungen aus unserem Institut geschah. In
Fallen, in denen aktuter Tod eintrat, erfolgte er stets unter
den fflr Anaphylaxie charakteristischen Symptomen. Auch der
Obduktionsbefund war stets der typische.
B. Die Spezifizitat der Antianaphylaxie bei mit mehreren
Antigenen zngleich aktiv pr&parierten Meerschweinchen.
Von Dr. Z. Szymanowski (Krakau).
In einer Reihe von Versuchen habe ich auf Veranlassung
von Herrn Prof. Friedberger zu ermitteln gesucht, wie
sich aktiv mit zwei Antigenen praparierte Tiere, nachdem
sie durch Injektion subletaler Dosen des einen Antigens anti-
anaphylaktisch gemacht waren, gegenttber dem anderen ver-
hielten. Es gait, festzustellen, ob unter diesen Bedingungen
1) Deutsche med. Wochensehr., 1912.
ty Google
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382
Z. Szymanowski,
eine Spezifizitat der Antianaphylaxie bestand oder ob das
Meerschweinchen dadurch, daC in seinem Organismus eine
Reaktion mit dem einen Antigen und damit eine mehr Oder
weniger schwere Erkrankung stattgehabt hatte, auch un-
empfindlich war gegen das zweite Antigen, mit dem die
Praparierung gleichzeitig erfolgt war. Eine analoge Versuchs-
anordnung hat Bessau benutzt. Ich habe diese Versucbe
mit Meerschweinchen von etwa 200—250 g KOrpergewicht an-
gestellt, die mit je 0,02 Hammel- und Pferdeserum subkutan
prSpariert worden waren. Die Injektion der beiden Antigene
erfolgte unter die Thoraxhaut beiderseits mbglichst weit von-
einander entfernt. Zu verschiedener Zeit nach der Praparierung
wurde dann innerhalb der einzelnen Versuchsreihen ftir jedes
der beiden Antigene die tddliche Dosis ermittelt. Die flberleben-
den Tiere wurden nicht mit dem homologen, sondern mit dem
heterologen Antigen auf etwa vorhandene Antianaphylaxie ge-
prtift. Die Resultate zeigen die folgenden Tabellen.
Eine Reihe von Meerschweinchen wird am 10. V. 1911
mit je 0,02 Hammelserum und Pferdeserum subkutan pra-
pariert. Reinjektion nach 10 Tagen (am 19. V. 1911). Be-
stimmung der tddlichen Dosis des Hammelserurns bei der
Reinjektion.
Tabelle I.
No.
Gewicht in g
Reinjektion sdosis
Resultat
S. 31
310
0,01
Schwere Anaphylaxie. Lebt.
S. 33
250
0,015
dgl.
S. 42
210
0.02
S. 56
210
0,03
Tot in 5'
Die tbdliche Dosis des Hammelserums betragt also 0,03.
Die Tiere, die mit 0,015 bzw. 0,02 reinjiziert wurden, machten
alle eine schwere Erkrankung durch, erholten sich aber wieder.
Bei der Prilfung anderer entsprechend praparierter Tiere
gegentiber Pferdeserum ergab sich als akut toxische Minimal-
dosis 1,0.
Tabelle II.
No.
Gewicht in g
Rein j ek tion sdosis
Resultat
8.51
280
0,2
Schwere Anaphylaxie. Lebt.
S. 30
280
0,4
dgl.
S. 35
250
0,6
if
S. 49
250
1,0
Tot in 5'
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Die Spezifizitat der Antianaphylaxie bei mehreren Antigenen. 383
Die mit kleinen Dosen behandelten Tiere (0,2, 0,4, 0,6)
kamen wiederum nach einer relativ schweren Erkrankung mit
dem Leben davon und erholten sich bald. Die Tiere, die die
Reinjektion mit Hammelserum iiberstanden hatten, erhielten
nun nach einer gewissen Zeit eine Einspritzung von Pferde-
serum, und die mit Pferdeserum reinjizierten Tiere wiederum
eine Injektion von Hammelserum. Das n&here Verhalten der
Tiere nach der Antianaphylaktisierung und nach der zweiten
heterologen Reinjektion ergibt sich aus nachstehenden Proto-
kollen.
8. 31, Gewicht 210 g. 0,01 ccm Hammelserum.
19. V. 11. 12* 8 Injektion.
12 81 Dyspnoe.
1’ Lebt.
4 s ® Munter.
5 M 2 ccm Pferdeserum.
5 s ® Sprunge.
5 M Ohne Reflexe.
5 89 Tod. Sektion : typisch.
S. 33, Gewicht 250 g. 0,015 ccm Hammelserum.
19. V. 11. 12“ Injektion.
12“ Zuckungen. Dyspnoe.
1’ Schwer krank.
4“ Munter.
5“ 2 ccm Pferdeserum.
5 48 Krampfe. Dyspnoe. Ohne Reflexe. Tod. Sektion: typisch.
S. 42, Gewicht 210 g. 0,02 ccm Hammelserum.
19. V. 11. I s Injektion. Dyspnoe.
I 4 Krampfe.
I s Seitenlage.
I 1 Agone.
I 10 Teilweise Erholung.
4 s ® Munter.
Zum zweiten Male (d. h. mit Pferdeserum) nicht reinjiziert.
S. 56, Gewicht 210 g. 0,03 ccm Hammelserum.
19. V. 11. 1“ Injektion.
1“ Krampfe. Seitenlage. Ohne Reflexe.
1 1T Tod. Sektion: typisch.
S. 51, Gewicht 280 g. 0,2 ccm Pferdeserum.
19. V. 11. 4" Injektion.
4* 8 Dyspnoe. Zuckungen.
4 s ® Seitenlage. Schwer krank.
4 47 Reflexe vorhanden.
4®° Partielle Erholung.
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384
Z. Szymanowski,
20. V. 11. 12 00 Ganz gesund.
12*® Injektion. 0,03 ccm Hammelserum.
12 s * Krampfe. Zuckungen.
1°° Erholung.
S. 30, Gewicht 280 g. 0,4 ccm Pferdeserum.
19. V. 11. 4 41 Injektion.
4 4 * Zuckungen. Harnabgang.
4 M Spriinge. Seitenlage. Reflexe vorhanden.
4*° Partielle Erholung.
20. V. 11. 12 00 Ganz gesund.
12 M Injektion. 0,05 ccm Hammelserum.
12 ST Krampfe Seitenlage.
12 40 Reflexe vorhanden.
12“ Erholung.
S. 35, Gewicht 250 g. 0,6 ccm Pferdeserum.
19. V. 11. 4“ Injektion.
4“ Dyspnoe. Zuckungen.
4 M Spriinge. Walzt sich.
5®’ Erholung.
20. V. 11. 12 40 Ganz gesund.
12“ Injektion. 0,1 ccm Hammelserum.
12“ Dyspnoe. Krampfe.
12“ Seitenlage. Ohne Reflexe.
1“ Erholt sich.
I 1 ® Munter.
S. 49, Gewicht 250 g. 0,01 ccm Hammelserum.
19. V. 11. 5** Injektion.
5“ Spriinge. Seitenlag*.
5 s ® Ohne Reflexe.
5* 1 Agone.
5*® Tod. Sektion: typisch.
TabeUe III.
Aktive simultane Praparierung mit je 0,02 Serum von Hammel und Pferd.
10 Tage nach der Praparierung.
6
Z
Gewicht
in g
Reinjektion
Resultat
II. Reinjektion
nach 5 Std. bzw.
18 Std.
Mult.
d.Do&
let.
Reslutat
32
33
42
56
51
30
35
49
310
250
210
210
280
280
250
250
0,01 Hammel-Ser.
0,015
0,02
0,03
0,2 Pferdeserum
0,4
0.6
|i,o
\ Schwere Ana-
| phyiaxie. Lebt
Tod in 5'
| Schwere Ana-
j phyiaxie. Lebt
Tod in 5'
2,0 Pferdeserum
2,0
0,03 Hammel-Ser.
0,05 „
0,1
2
2
1
y
Tod in 5'
Tod in 3'
| Schwere Ana-
j phyiaxie. Lebt
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Die Spezifizitat der Antianaphylaxie bei mehreren Antigenen. 385
Die mit Hammelserum antianaphylaktisch gemachten Tiere
sind keineswegs, wie das Bessau neuerdings annimmt, auch
antianaphylaktisch gegenttber Pferdeserum. Diesem EiweiB
gegenttber zeigen sie nnr eine geringe Resistenz und erliegen
schon der zweifach todlichen Dosis. Die mit Pferdeserum
anaphylaktisch gemachten Tiere vertragen zwar gerade noch
die dreifach tOdliche Dosis des Hammelserums, aber das mit
0,1 Hammelserum reinjizierte Tier stand doch unmittelbar
ante exitnm.
Eine zweite Versuchsreihe entspricht der vorigen, nur
wurde die antianaphylaktisierende Reinjektion erst am 17. Tage
vorgenommen und die dritte Injektion bei den (iberlebenden
Tieren 18 Stunden spfiter. Es erfolgte zunfichst wiederum bei
den doppelt prfiparierten Tieren die Bestimmung der tbdlichen
Dosis ffir Hammelserum und Pferdeserum.
TabeUe IV.
17 Tage nach der Sensibilisierung.
No.
Gewicht in g
Reinjektion mit
Resultat
8.36
220
Hammelserum
0,01
Leichte Anaphylaxie. Lebt.
8.40
220
0,01
Schwere Anaphylaxie. Lebt
8.28
280
o,os
Schwere Anaphylaxie. Tod in 5'
S. 38
270
Pferdeserum
0,1
Schwere Anaphylaxie. Tod in 5'
8.52
270
0,05
Schwere Anaphylaxie. Tod in 1 Std.
8.45
200
0,025
Schwere Anaphylaxie. Lebt
8.47
250
0,025
Schwere Anaphylaxie. Tod in 1 Std.
8.41
220
0,01
Leichte Anaphylaxie
8 44
270
0,01
dgl.
Die flberlebenden Tiere wurden nun 18 Stunden spfiter
auf Antianaphylaxie geprttft, und zwar die mit Hammelserum
reinjizierten mit Pferdeserum und umgekehrt. Den Verlauf
der einzelnen Versuche zeigen die nachstehenden Protokolle.
S. 43, Gewicht 250 g. Hammelserum 0,001 ccm.
26. V. 11. 5* 8 Injektion.
5®° Zuckungen.
5“ Munter.
Am anderen Tage nicht reinjiziert.
S. 55, Gewicht 270 g. Hammelserum 0,005 ccm.
26. V. 11. 5 s0 Injektion.
5 s * Leichte Zuckungen.
5 40 Munter.
Am anderen Tage nicht reinjiziert.
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386 Z. Szymanowski,
S. 36, Gewicht 220 g. Hammelserum 001 ccm.
26. V. 11. 5“ Injektion.
5 40 Starke Dyspnoe.
5 42 Zuckungen.
5 60 Krank.
6° Erholung.
27. V. 11.10° Hunter.
10 7 Injektion. Pferdeserum 0,2 ccm.
10 22 Dyspnoe. Krampfe.
10 23 Seitenlage.
10 24 Ohne Reflexe.
10 26 Tod. Sektion: typisch.
S. 40, Gewicht 220 g. Hammelserum 0,01 ccm.
26. V. 11. 5 42 Injektion.
5 44 Dyspnoe. Krampfe.
6 5 Sehr schwach.
27. V. 11.10° Munter.
10 3a Injektion. Pferdeserum 0,1 ccm.
10 s6 Zuckungen. Krampfe.
10 87 Dyspnoe.
10 60 Erholung.
8. 28, Gewicht 280 g. Hammelserum 0,03 ccm.
26. V. 11. 5 67 Injektion.
6° Zuckungen.
6 l Krampfe. Seitenlage. Ohne Reflexe.
6 4 Tod. Sektion: typisch.
S. 38, Gewicht 270 g. Pferdeserum 0,1 ccm.
26. V. 11.12“ Injektion.
12 87 Krampfe. Seitenlage.
12 40 Tod. Sektion: typisch.
S. 52, Gewicht 270 g. Pferdeserum 0,05 ccm.
26. V. 11. 5 7 Injektion.
5 9 Krampfe.
5 12 Seitenlage. Reflexe vorhanden.
5 20 Erholung zum Teil.
5 40 Sehr schwach.
6 l ° Tod. Sektion: typisch.
S. 45, Gewicht 200 g. Pferdeserum 0,025 ccm.
26. V. 11. 5 12 Injektion.
5 20 Zuckungen. Krampfe.
5 26 Erholung.
27. V. 11.10° Munter.
10 44 Injektion. Hammelserum 0,04 ccm.
10 47 Krampfe, Spriinge.
10 50 Erholung.
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Die Spezifizitat der Antianaphylaxie bei mehreren Antigenen. 387
S. 47, Gewicht 250 g. Pferdeserum 0,025 ccm.
26. V. 11. 5 M Injektion.
5“ Sehr schwach.
6‘° Tod.
S. 41, Gewicht 220 g. Pferdeserum 0,01 ccm.
26. V. 11. 5 16 Injektion.
5** Zuckungen.
5 3 “ Erholt sich.
27. V. 11.10° Munter.
10 s * Injektion. Hammelserum 0,1 ccm.
10“ Krfimpfe.
lO 37 Tod. Sektion: typisch.
S. 44, Gewicht 270 g. Pferdeserum 0,01 ccm.
26. V. 11.12“ Injektion.
12“ Zuckungen.
1* Erholt sich.
Am anderen Tage nicht reinjiziert mit Hammelserum.
Die Resultate sind in der nachstehenden Tabelle zu-
sammengefafit.
TabeUe V.
17 Tage nach der Praparierung.
.jl tc
£ 1.2
lo
Reinjektion
Resultat
II. Reinjektion
nach 5 Std. bzw.
18 Std.
Mult,
d. Dos.
let.
Resultat
1 1 1
36 220 0,01 Hammel-Ser. Leichte Anaphyl.
40 220 0,01 „ Schwere Anaphyl.
28 2S0 0,03 „ iTod in 7'
41! 220 0,01 Pferdeserum Leichte Anaphyl.
45 200 0,025 „ Schwere Anaphyl.
52 270 0,05 „ Tod in 1 Std. '
38 370 0,1 „ Tod in 5'
0.2 Pferdeserum
0,1
0,1 Hammel-Ser.
0,01
2
1
3
17,
Tod in 18'
Schwere An aph. Lebt
Tod in 5'
Anaphylaxie. Lebt
•
Es ergibt sich hieraus, daB wiederum von dem Ein-
treten einer heterologen Antianaphylaxie keine Rede ist. Die
mit Hammelserum antianaphylaktisierten Tiere erliegen bereits
der doppelt todlichen Dosis des Pferdeserums, und die mit
Pferdeserum antianaphylaktisierten vertragen nicht mehr die
dreifache Dosis des Hammelserums. Ein weiterer Versuch
wurde bei 19 Tage zuvor prSparierten Tieren unternommen.
Zeltschr. f. lmmunitiitsforschung. Orig. Bd. XIV. 27
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388
Z. Szymanowski,
Tabelle VI.
Bestimmung der tddlichen Dosis fiir Hammelserum bzw. Pferdeserum.
No.
Gewicht in g
Reinjektion mit
| Resultat
8.39
250
Hammelserum
0,02
Schwere Anaphylaxie. Lebt
8.46
210
0,02
dgl.
S. 32
220
Pferdeserum
0,1
Schwere Anaphylaxie. Tod in 6 Min.
S. 57
240
0,01
Schwere Anaphylaxie. Tod in 10 Min.
8.48
240
0,01
Schwere Anaphylaxie. Lebt.
8.37
250
0,005
dgl.
S. 54
240
0,005
dgL
£8 folgte dann die PrOfung der dberlebenden Tiere anf
heterologe Antianaphylaxie: Auch dieser Versuch ergibt in
Uebereinstimnmng mit den tlbrigen, daB keine heterologe
Antianaphylaxie vorhanden ist. Die mit Pferdesei'um anti-
anaphylaktisch gemachten Tiere erliegen der etwa lV**fachen
tddlichen Dosis des Hammelserums.
8. 39, Gewicht 250 g. Hammelserum 0,02 ccm.
28. V. 11. 11“ Injektion.
11“ Schwere Krampfe.
12 00 Erholung.
29. V. 11. Munter.
11“ Injektion. Pferdeserum 0,075 ccm.
11“ Zuckungen. Krampfe.
11 4# Schwer krank.
11 4S Erholung.
S. 46, Gewicht 210 g. Hammelserum 0,02 ccm.
28. V. 11. 12“ Injektion.
12“ Schwere Krampfe.
12 48 Erholung.
29. V. 11. 11“ Munter.
11“ Injektion. Pferdeserum 0,05 ccm.
II 06 Zuckungen.
11“ Krampfe. Seitenlage. Reflexe vorhanden.
11“ Erholung.
S. 32, Gewicht 220 g. Pferdeserum 0,1 ccm.
28. V. 11. IP 7 Injektion.
II 19 Krampfe. Seitenlage.
11” Ohne Reflexe.
11” Tod. Sektion: typisch.
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Die Spezifizitat der Antianaphylaxie bei mehreren Antigenen. 389
8.57, Gewicht 240 g. Pferdeseram 0,01 ccm.
28. V. 11. 11“ Injektion.
11 88 Zuckungen. Krampfe.
II 40 Seitenlage. Ohne Reflexe.
11 45 Tod. Sektion: typisch.
8. 48, Gewicht 240 g. Pferdeserum 0,01 ccm.
28. V. 11. II* 9 Injektion.
11 s * Zuckungen.
11“ Krampfe.
II 40 Sehr schwach.
11 46 Erholung.
29. V. 11. 11°° Munter.
12°° Injektion. Hammelserum 0,025 ccm.
12 05 Zuckungen.
12 08 Schwere Krampfe. Reflexe rorhanden.
12 1# Seitenlage.
12 80 Erholung.
S. 37, Gewicht 250 g. Pferdeserum 0,005 ccm.
28. V. 11. II 46 Injektion.
II 48 Zuckungen.
ll 80 Schwere Krampfe.
12°° Erholung.
29. V. 11. 11°° Munter.
12 08 Injektion. Hammelserum 0,02 ccm.
12 1 * Zuckiuigen.
12' 8 Krampfe.
12 s0 Erholung.
8. 54, Gewicht 240 g. Pferdeserum 0,005 ccm.
28. V. 11. 12°° Injektion.
12 06 Zuckungen.
12 07 Krampfe.
12 1# Seitenlage. Reflexe vorhanden.
12” Erholung.
29. V. 11. 11°° Munter.
11 86 Injektion. Hammelserum 0,03 ccm.
ll 88 Unruhe. Harnabgang.
11 88 Dyspnoe. Zuckungen.
11 4# Spriinge.
ll 46 Krampfe.
11 46 Seitenlage. Reflexe fehlen.
11 47 Tod. Sektion: typisch.
Die Resultate sind in Tabelle VII noch einmal zusammen
gefaBt.
27*
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390 Z. Szymanowski, Die Spezifizitiit der Antinnaphylaxie etc.
Tabelle VII.
No.
Ge-
wicht
in g
Reinjektion
Resultat
,
■
II. Reinjektion
Mult,
d. Dos.
let.
Resultat
S. 39
250
0,02 Hammel-Ser.
\ Schwere Ana-
0,075 Pferdeserum
1 1 /,
\ Schwere Ana-
8.46
210
0.02
/phylaxie. Lebt
0,05
1.0
j phylaxie. Lebt
8.32
220
0,1 Pferdeserum
Tod in 6'
““
—
—
8.57
240
0,01
Tod in 10 /
8.48
8.37
8.54
240
250
240
0,01
0,005 „
0,005
| Schwere Ana- j
jphylaxie. Lebt
0,025 Hammel-Ser.
0,02
0,O3
1
1
IV.
\ Schwere Ana-
/ phylaxie. Lebt
Tod in T
Meine Befunde stehen im strikten Gegensatz zu denen
von B e s s a u; das ist darauf zurtickzufiihren, daB dieser Autor
bei seinen Versuchen nicht quantitativ vorher die todlichen
Dosen ermittelt hat.
B e s s a u gibt zwar bei seinen doppelt pr&parierten Tieren
eine im Kontrollversuch sicher tbdliche Reinjektionsdosis; er
kann aber nicht wissen, ob das nicht gerade nur die einfach t6d*
liche Dosis war oder selbst ein geringes Multiplum dem gegen-
tiber wohl die aspezifische Resistenz noch hervortritt.
Daneben sind die von ihm zur PrSparierung benutzten
Antigendosen relativ groB, was nicht sehr zweckmaBig ist, da
wir wissen, daB ein Zuviel an Antigen die Ausbildung der
Anaphylaxie hinausschiebt. So ist es verstandlich, daB die
Tiere nicht sehr gut prapariert waren; wenn wir sehen, daB
nach 14 Tagen 0,05 Rinderserum intravenos ein prapariertes
Tier nicht einmal erheblich krank machten, so kdnnen wir
bei dem geringeren anaphylaktischen Index des Pferdeserums
sogar als hochst wahrscheinlich annehmen, daB 0,5 Pferde-
serum kaum ein nennenswertes Multiplum der todlichen
Dosis darstellte. Dafiir spricht auch die Tatsache, daB nach
29 Tagen bereits 0,5 Pferdeserum nicht mehr tSteten
(Tabelle III, No. 129fF.). Das wundert Bessau selbst und
auch er macht die (unseres Erachtens UDrationelle) Art der
Vorbehandlung verantwortlich. Die Vermutung, „daB die Vor-
behandlung mit zwei Antigenen nicht ganz so stark ana-
phylaktisierte wie die Sensibilisierung mit nur einem Antigen,
findet in unseren Versuchen zunachst keine Begriindung.“
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Kumagai u. Odaira, Spezifizitat der passiven Anaphylaxie etc. 391
Zusammenfassung.
Werden mit zwei Antigenen gleichzeitig prfiparierte Tiere
mit untertfldlichen Dosen des einen Antigens reinjiziert, so
tritt Antianaphylaxie gegenflber dem zweiten Antigen im
Gegensatz zu den Angaben von Bessau nicht ein, sondern
nur eine Resistenz gegenflber geringftigigen Dosen des letzteren.
Die aktive Antianaphylaxie ist also eine streng spezifische
Reaktion.
Nachtrag bei der Korrektur.
Weitere Versuche haben ergeben, daB an doppelt prfl-
parierten Tieren die Reinjektion von subletalen Dosen des
einen Serums der Vorbehandlung eine um so geringere Re¬
sistenz gegenflber der Reinjektion des zweiten Serums herbei-
fflhrt, je hflher der Grad der Ueberempfindlichkeit gegenflber
dem zweiten Serum ist und je kleiner die antianaphylakti-
sierende Dosis des ersten Serums war.
C. Die Spezifizitat der passiven Anaphylaxie und die Be-
ziehungen der spezifischen Antianaphylaxie znm Peptonschutz.
Von
Dr. Taizo Kumagai und Marineoberstabsarzt Dr. Odaira aus Tokio.
Unsere Aufgabe war es, zunflchst im AnschluB an die
Untersuchungeu von Szymanowski fiber die Spezifizitfit
der Antianaphylaxie bei aktiver Prflparierung mit mehreren
Antigenen entsprechende Versuche bei passiv prfiparierten
Tieren anzustellen. Die Versuchsanordnung war ohne weiteres
gegeben. Es mufiten normale Meerschweinchen mit mehreren
verschiedenen Antieiweifiseris gleichzeitig prfipariert werden
und 24 Stunden spSter war einerseits die tddliche Dosis fflr
die homologen Antigene zu bestimmen, andererseits eine Reihe
von Tieren mit subletalen Dosen zu behandeln. Bei den
letzteren muBte nach weiteren 24 Stunden die Empfindlichkeit
einerseits gegenflber dem zur Antianaphylaktisierung ver-
wandten EiweiB, andererseits gegenflber dem anderen bestimmt
werden. Wir stellten unsere Versuche mit normalen Meer¬
schweinchen von 200—220 g Korpergewicht an. Die Tiere
wurden gleichzeitig intraperitoneal mit je 0,4 ccm Antihammel-
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392
Taizo Kumagai und Odaira,
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eiweiB-Kaninchenserum und AntimenscheneiweiB - Kaninchen-
serum geimpft. Nacbdem bei den so passiv prftparierten Tieren
die tddliche Dosis der Antigene nach 24 Stunden ermittelt
war, warden subletale Dosen bzw. die intravenbs gerade
tddliche Dosis prftparierten Tieren intraperitoneal zur Er-
zeugung der Antianaphylaxie eingespritzt. Die Prflfung auf
Antianaphylaxie erfolgte nacb weiteren 24 Stunden. Im nach-
stehenden bringen wir zwei entsprechende Versuchsreihen.
Eine Eeihe von Meerschweinchen erhalten zur paesiven Praparierung
die in den Tabellen angegebenen Mengen von Antihammel- bzw. Anti-
menschenserum intraperitoneal. Die Phifung auf Anaphylaxie nach 24
Stunden bei den so vorbehandelten Tieren mit jedem der beiden ent-
sprechenden Antigene zeigt die folgende Tabelle.
10. I. 1912. Bestimmung der tdd lichen Dosis von Hammelserum bei passiv
praparierten Tieren.
Meer-
schw. No.
Qewicht
in g
Kombinierte Praparierung
intraperitoneal
Reinjekt. nach
24 Std. intrav.
Resultat
213
217
Besti
200
210
immung
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antiham mel-Kan .-Ser.
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 An tiham mel-Kan.-Ser.
der todlichen Dosis von Me
praparierten Tierer
0,025 Hammel¬
serum
0,025 Hammel¬
serum
mschenserum b
Amaphylaxie,
tot *)
ei passiv
Meer-
schw.-No.
Gewicht
in g
Kombinierte Praparierung Reinjekt. nach
intraperitoneal 24 Std. intrav.
i
i
Resultat
206
214
Aus
230 1
1
210
i
dieser
0,4 Ajitimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
Tabelle ergibt es sich,
0,025 Mensch.-
1 Serum
|0,01 Menschen-
1 serum
daB bei den
Anaphvlaxie,
lebt *
tot
kombiniert
prftparierten Tieren 0,05 Hammelserum bzw. 0,025
Menschenser u m die sicher todliche Dosis nach 24 Stunden
darstellte.
Nunmehr wurde einer groBeren Zahl von Meerschweinchen die
intravenos sicher todliche Dosis von 0,05 Hammelserum intraperitonal ge-
geben, und nach weiteren 24 Stunden wurde auf Antianaphylaxie gepriift,
einerseits mit Menschenserum, andererseits mit Hammelsemm. Das Resultat
ist aus der folgenden Tabelle ersichtlich.
1) Tot ohne weitere Angaben bedeutet stets ty pise her Tod in
wenigen Minutcn.
Gck 'gle
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Die Spezifizitat der passiven Anaphylaxie etc.
393
Meerschw.
No.
Gewieht in g
Kombinierte Praparierung
intraperitoneal
An tianaphylakti-
sierung n. 24 Std.
intraperitoneal
mit in travends
todlicher Dosis
Reinjektion
mit Hammel¬
serum intrav.
Resultat
Dosis
Mul¬
tipla 1 )
216
220
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
0,05 Hammel-Ser.
40
ohne Sympt.,
lebt
212
200
0,4 Antimen schen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
dgl.
5,0
dgl.
ei
1|
to
.5
•g
Kombinierte Praparierang
intraperitoneal
Antianaphvlakti-
sierung n. §4 Std.
intraperitoneal
mit intravenbs
todlicher Dosis
Reiniektion
mit Menseh.-
Ser. intrav.
Eesultat
XT'
S
«
o
Dosis
Mul¬
tipla
208
200
!0,4 An timen schen-Kan .-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
0,05 Hammel-Ser.
0,05
2
krank, lebt
209
170
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
dgl.
0,125
5
schwer krank,
lebt
215
180
0,4 Antimenschen-EIan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
dgl.
0,125
i 5
i
!
typ. Krampfe,
m T tot
218
200
0,4 Antimenschen-EAn.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
dgl.
0,25
10
typ. Anaphy-
lazie, n. o' tot
Die mit Hammelserum reinjizierten Tiere
sind gegenflber dem Hammelserum vollkommen
antian aph ylaktisch geworden, und vertragen
24 Stunden sp&ter ohne jegliche SymptQme selbst
die hundertfach todliche D o s i s. Dagegenzeigt
sich gegenflber dem Menschenserum, mit dem ja
auch diePr&parierung, nichtaberdieAnti-
anaphylaktisierung vorgenommen worden war,
keine entsprechende Antianaphylaxie. Die Tiere
erliegen schon dem fflnffachen Multiplum der tfldlichen Dosis.
Gegenflber dem doppelten Multiplum besteht allerdings auch
hier wiederum wie bei der aktiven Anaphylaxie eine un-
spezifische geringfflgige Resistenz.
Diese vermag freilich, wenn eine genaue quantitative
Auswertung der Anaphylaxie nicht vorgenommen wird, bis
zu einem gewissen Grade die spezifische Antianaphylaxie zu
verdecken.
1) D. h. Multipla der todlichen Dosis.
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394
Taizo Kumagai und Odaira,
Die strikte Spezifizit&t auch der passiven Anaphylaxie
ist aber bei quantitativer Auswertung gleichwohl unverkenn-
bar. Dem vorigen Versuche entspricht der folgende, der in-
sofern ein Spiegelbild des ersteren darstellt, als die antianaphy-
laktisierende Reinjektion mit Menschenserum vorgenommen
worde und 24 Stunden spfiter zur Prflfung auf Antianaphylaxie
Hammelserum bzw. Menschenserum gegeben wurde.
15. XII. 1911. Titrierung der tddlichen Dosis von Hammelserum
bei passiv praparierten Tieren.
Meer-
schw. No.
Gewicht
in g
Kombinierte Praparierung
intraperitoneal
Reinjektion nach
24 Stunden intravenos
mit Hammelserum
Ee-
sultat
145
210
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 An tihara mel-Kan.-Ser.
0,02 j
lebt
j
180
180
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
0,05
tot
15. XH. 1911. Titrierung der tddlichen Dosis von Menschenserum
' bei passiv praparierten Tieren.
Meer-
schw. No.
Gewicht
in g
1
Kombinierte Praparierung
intraperitoneal
Reinjektion nach
24 Stunden intravenbs
mit Menschenserum
Re-
sultat
149
200
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
0,01 Menschenserum
lebt
148
210
1
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
0.05 Menschenserum
tot
Titrierung der tddlichen Dosis bei antianaphylaktisierten Tieren.
*
A
sc
.a i
§
Kombinierte Praparierung
intraperitoneal
Antianaphylakti-
sierung n. 24 Std.
intraperitoneal
mit intravenos
Remiektion
n. 24 Std. mit
Hammel¬
serum intrav.
Resultat
s
a?
o
todlicher Dosis
Dosis
Multipla
147
220 0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
|0,4 Antihammel-Kan.-Ser. |
0,05 Mensch.-Ser.
0,1
2
krank, lebt
146
220 0,4 An ti men schen -Kan. - Ser.
;0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
dgl.
0,15
3
schwerkrank,
lebt
154 ,200 0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
| j0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
dgl.
0,5
10
typ. Anaphy¬
laxie, n. o'tot
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Die Spezifizitat der passiven Anaphylaxie etc.
395
£
151
153
Gewicht in g
Kombinierte Praparierung
intraperitoneal
Antianaphylakti¬
sierung n. §4 Std.
intraperitoneal
mit intravenos
todlicher Dosis
Beinjektion
n. 24 Std. mit
Menschen-
serum intrav.
Resultat
Dosis
Multipla
180
190
1
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser,
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
0,4 Antimenschen-Kan.-Ser.
0,4 Antihammel-Kan.-Ser.
0,05 Mensch.-Ser.
dgl.
1.0
2,5
20
50
lebt, ohne
Symptome
dgl-
Das Resultat dieses Versuches steht in vollkommener
Uebereinstimmung mit dem vorhergehenden. Die diesmal mit
Menschenserum antianaphylaktisierten Tiere sind unempfindlich
geworden gegenfiber Menschenserum, sicher in der mehr als
50-fach todlichen Dosis. Von Hammelserum aber bewirkt
schon die 3-fach todliche Dosis eine Erkrankung und die
10-fach tfidliche totet sicher.
Uebersichtstabelle.
Simultan mit Antiharamel-Kaninchenserum
und Antimenschen-Kaninchenserum praparierte Tiere
Antianaphy¬
laktisierung
Hammelserum
1
Hammelserum Menschenserum
Men schen serum
Reinjektion
Hammelserum
Menschenser. Hammelserum
Menschenserum
Bchutzkraft
>100
2-5 3-10
| >50
Fassen wir die Resultate dieser Versuche zu-
sammen, so ergibt es sich, daB bei gemischter
PrSparierung und nachheriger Antianaphylakti-
sierung mit einem der homologen Antigene eine
Antianaphylaxie strengspezifischnur gegenfiber
diesen Antigenen eintritt. Ein geringffigiger
Schutz, der als unspezifische Resistenz zu deuten
ist, besteht allerdings auch gegeniiber dem an-
deren Antigen.
Damit ist erwiesen, daB ebenso wie die aktive Ana¬
phylaxie auch die passive strong spezifisch ist.
Diesen Versuchen fiber die vfillige Antianaphylaktisierung
und deren Spezifizitat gerade bei passiv prfiparierten Tieren
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396
Taizo Kumagai und Odaira,
muB eine absolute Beweiskraft fflr die Antikflrper-
absorptionstheorie zugeschrieben werden.
Schon lange vor der Zeit, da das Anaphylaxiephfinomen
bekannt war, haben Schmidt-Mfihlbeim und Fano
ein Vergiftungsbild durch parenterale Peptonzufubr beim
normalen Tier beschrieben, das dem anaphylaktischen vdllig
gleich ist. Auch Podbielski hat auf diese Analogic
hingewiesen. Vor allem aber waren es dann B i e d 1 und
Kraus, die sogar eine Wesensgleichheit der Anaphylaxie
und Peptonvergiftung annahmen; und zwar vor allem auf
Grund der Tatsache, daB prfiparierte und mit Pepton behan-
delte Tiere antianaphylaktisch gegen das betreffende EiweiB
sein sollen und umgekehrt prfiparierte mit dem homologen
EiweiB antianapbylaktisierte Tiere unempiindlich sein sollen
gegenflber Pepton. Es erscbien uns nun theoretisch von
Wichtigkeit, auch hier festzustellen, ob tatsfichlich eine voll-
kommene der Antianaphylaxie entsprechende Unempfind-
lichkeit besteht oder nur die schon in den frflheren Ver-
suchen hervorgetretene Resistenz gegenflber einem geringen
Multiplum der tddlichen Dosis. Derartige Versuche erschienen
auch deswegen notwendig, weil bisher genaue quantitative
Angaben flber die Antianaphylaxie im Vergleich zum Pepton-
schutz vflllig fehlten. Wir haben diese Versuche sowohl in
der Anordnung der aktiven wie in der der passiven Ana¬
phylaxie angestellt. Im ersteren Fall wurde beim mit Hammel-
serum aktiv prfiparierten Tiere Dach Ablauf des Inkubations-
stadiums einerseits die tfldliche Dosis des Hammelserums be-
stimmt, andererseits wurden die Tiere mit einer untertodlichen
Dosis von Pepton behandelt und am nfichsten Tage ihre
Empfmdlichkeit gegenflber Hammelserum geprflft. Bei den
Versuchen mit passiv prfiparierten Tieren wurde 24 Stunden
nach der intraperitonealen Prfiparierung mit Antihammel-
eiweiB-Kaninchenserum, einerseits Hammelserum, anderer¬
seits Pepton in untertodlicher Dosis gegeben und nach
24 Stunden der Zustand der Antianaphylaxie gegenflber
Hammelserum und Pepton bei jeder der beiden (mit Hammel¬
serum bzw. Pepton) antianaphylaktisierten Gruppen von Tieren
bestimnit.
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Die Spezifizitat der passiven Anaphylaxie etc.
397
Versuche bei aktiv pr&parierten Tieren.
Am 18. XI. wird eine Beihe von Meerschweinchen mit je 0,02 Hammel-
serum subkutan vorbehandelt. Reinktion zur Ermittelung der todlichen
Dosis am 4. XII. Das Reaultat zeigt die folgende Tabelle.
Meerschw.
No.
Gewicht
in g
Dosis der Reinjektion
pro 200 g
Reeultat
0. 58
250
0,05
tot in 2'
0. 51
320
0,025
tot in 3'
0. 55
330
0,025
tot in l 1 /,'
0. 62
280
0,025
tot in l 1 /,'
0. 47
330
0,025
tot in 2' *
0. 53
270
0,01
keine Erscheinung, lebt
0. 59
260
0,01
keine Erscheinung, lebt
0. 65
300
0.01
leichte Anaphylaxie
Die sicher tddliche Dosis des Hammelserums bei der
Reinjektion betr> also 0,025. Am Tage vorher bat bereits
eine Reihe der prfiparierten Meerschweinchen die gerade unter-
tddliche Dosis von Pepton intravends erhalten, n&mlich 0,03
pro 100 g Tier (die tddliche Dosis betr> 0,04 pro 100 g [Witte-
Pepton]). Die Auswertung der tddlichen Dosis von Hammel-
sernm bei diesen mit Hammelserum prftparierten und mit Pepton
antianaphylaktisierten Tieren zeigt die folgende Tabelle.
Meerschw.
No.
Gewicht
in g
Antianaphylakti-
sierung mit Pepton
ip.
Reinjekti
24 Std.mit
serui
Dosis
on nach
Hammel-
n iv.
Multipla
Besultat
0. 60
230
0,03 Proz.
0,025
1
krank, lebt
0. 61
220
0,03 „
0,05
2
krank, lebt
0. 49
370
0,03 „
0,075
3
tot nach 5'
0. 48
330 i
0,03 „
0,075
3
tot nach 3'
0. 56
320
0,03 „
0,1
4
tot nach 4'
E8 ergibt sich, dafi die pr&parierten mit
Pepton antianaphylaktisierten Tiere im Ver-
gleich zu den nur pr&parierten Kontrollen einen
geringen Schutz zeigen. D och han delt es sich
hier wiederum nicht um eine echte spezifische
Antianaphylaxie von einigermafien erheblichem
Grad, sondern nur um eine Resistenz, die gerade
noch gegenflber der doppelten tddlichen Dosis
zum Ausdruck kommt.
Meerschweinchen No. 60 und 61, die, mit Pepton behandelt, ebcn noch
die einfache bzw. doppelte Dosis des Hammelsemms iiberstanden, wurden
nach weiteren 24 Stunden noch einmal mit Pepton intravenos gespritzt.
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398
Taizo Kumagai und Odaira,
Meerschweinchen, No. 60 erhalt 24 Stunden nach der Reinjektion von
0,025 Hammelserum die 5-fach todliche Peptondosis intravenos. Tier bleibt
am Leben. Meerschweinchen No. 61 erhalt nach der Reinjektion mit
0,05 Hammelserum die 10-fache Dosis Pepton. Das Tier stirbt akut unter
Krampfen.
, 1
Antianaphy¬
laktisierung
mit Pepton
ip.
Reinjektion mit
Reinjektion mit
Meerschw.
No.
Ge-
wicht
Hammelserum
nach 24 Std.
Pepton nach
abermals 24 Std.
Resultat
in g
Dosis'
Multipla
1 Dosis | Multipla
0. 60
230
0,03 Proz.
0,025
i
0,75
10
tot
0. 61
230
i
0,03 „
0,05
2
0,37
5
lebt
Also selbst bei einer doppelten Antianaphylaktisierung,
d. h. mit Pepton einerseits und mit dem homologen Antigen
andererseits, ist der nachtragliche Schutz gegenfiber Pepton
nur ein relativ geringer. Der im Vergleich zur echten
Antianaphylaxie geringfflgige Schutz, den das
Pepton gegeniiber der Reinjektion bei pr&pa-
rierten Tieren bedingt, gestattet nicht ohne
weiteres Schliisse zu ziehen beztiglich einer
Wesensgleichheit der beiden Prozesse. Die dies-
bezflglichen Behauptungen sind jedenfalls in den
Ergebnissen der Versuche fiber die Antianaphy-
laxie nicht genfigend begrfindet 1 ).
Noch eklatanter tritt das hervor bei den passir pra-
parierten Meerschweinchen. Die Prfiparierung geschah mit je
0,5 Antihammel - Kaninchenserum intraperitoneal. Die Be-
stimmung der tddlichen Dosis bei den passiv prfiparierten
Tieren, sowie im Anschlufi daran die gegentiber Pepton bei
normalen Tieren zeigen die folgenden beiden Tabellen.
Titrierung der tddlichen Dosis Hammelserum bei passiv priiparierten Tieren.
9. XII. 11.
Meerschw.
No.
Gewicht
in g
Praparierung mit Anti-
hammel-Kaninchen-
serum intraperitoneal
Reinjektion
nach 24 Std. mit
Hammelserum
Resultat
89
220
0,5
0,001
lebt
87
240
0,5
0,005
tot
90
230
0.5
0,025
lebt
1) Wie wenig aber das weitere vermeintliche Argument, niimlich die
Aehnlichkeit der Symptome, zu bedeuten hat, darauf haben neuerdings
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Die Spezifizitat der passiven Anaphvlaxie etc. 399
Titrierung der todlichen Dosis von Pepton bei normalen Tieren.
Meerschweinchen
No.
Gewicht
in g
Intravenoee Injektion von Pepton I
pro 200 g |
Resultat
115
220
0,1
lebt
113
190
0,15
\
114
190
0,15
116
210
0,225
> tot
117
210
0,3
|
118
210
0,3
j
Es ergibt sich als akut tddliche Dosis fflr das Hammel-
serum 0,005, flir das Pepton 0,15. Die giftige Wirkung des
Hammelserums einerseits, des Peptons andererseits bei den
passiv pr&parierten und mit der intravenos todlichen Dosis
intraperitoneal antianaphylaktisierten Meerschweinchen zeigt die
folgende Tabelle.
9. XII. 11.
Meerschw.
No.
Gewicht
in g
Praparierung
mit
Antiham mel-
Kan.-Serum
intraperiton.
Antianaphylak-
tisierung in trap,
mit intravenos
tddlich. Dosis des
Hammelserums
1
HI
i
1
220
j
0,5
0,005
93
200
0,5
0,005
94
170
0.5
0.005
109
220
0:5
0.005
106
160
0.5
0.0U5
112 | 230 |
0,5
0,005
Reinjektion
mit Hainmelserum
nach 24
Stunden
Resultat
intravenos !
Dosis
Multipla
0,05
1 |
! 10 !
ohne Sympt..
1
lebt
0,1
20
krank, erholt
sich, lebt
0,15
0.25
0.5
1,0 1
30
50
100
200
lleichte Ana-
; phvlaxie,
) lebt
1 *
S
JS ^
V tD
<D*
©
«p«'tsa
Kan.-Serum
intraperiton.
licher Dosis
des Hammel¬
serums
Injektion von
Peptou intravenos
nach 24 Stunden
Dosis |
pro 200 g !
Multipla
Resultat
100 170
10-11170
103 I 170
90 i 180
95 ! ISO
97 190
101 190
108 210
105 200
0,5
0,5
0.5
0,5
0,5
0,5
0,5
0.5
0,5
0,005
0,005
0,005
0,005
0,005
0,005
0.005
0,005
0,005
0,1
0,15
0,15
0.15
0.225
0,225
0,3
0,3
0,3
1
1
1
1,5
1,5
2,0
2,0
2,0
jleicht krank, lebt
leichte Kriimpfe,
| lebt
\ schwer krank,
( lebt
tot nach 3 Min.
schwer krank, lebt
tot nach 3 Min.
tot nach 4 Min.
erst Friedberger und Moreschi (Berl. klin. Wochenschr.) hinge-
wiesen.
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400
Taizo Kumagai und Odaira,
#
Aus der Tabelle ergibt sich, dafi durch die Antianaphy-
laktisierung mit Hammelserum eine vollkommene Antianaphy-
laxie selbst gegendber der 200-fach tddlichen Dosis erzielt
wird. Dagegen ist der Schutz, den die passiv mit Antihammel-
serum prfiparierten und mit Hammelserum antianapbylaktisierten
Tiere gegenflber Pepton aufweisen, ein minimaler. Er dber-
steigt nicht die einfach tddliche Dosis. Esistohne weiteres
klar, dafi es sich bei einem Verhfiltnis von 1 zu
mehr als 200 nicht um den gleichen Prozefi in
beiden Fallen handelt.
In der folgenden Versuchsreihe wurden mit Antihammel-
serum passiv pr&parierte Tiere mit Pepton „antianaphylaktisiert“
und bei diesen Tieren nachher die Empfindlichkeit fdr Hammel¬
serum im Vergleich zur Kontrolle ermittelt. Die tddliche
Dosis von Hammelserum bei den passiv pr&parierten Tieren
betrug, wie die nachfolgende Tabelle ergibt, 0,01. Bei den
zunfichst mit 0,1 Pepton intraperitoneal „antianaphylaktisierten“
Tieren ergibt sich die Empfindlichkeit gegendber Hammel¬
serum wiederum aus der nachstehendeu Tabelle.
Titrierung der todl. Dosis von Hammelserum bei passiv praparierten Tieren.
10. I. 1912.
Meerschw.
Gewicht 1
Praparierung mit Anti-
Reinjektion
Resultat
No.
in g |
hammel-Kan.-Herum ip.
mit Hammelserum
220
200
0,5
0,01
tot
219
230
0,5
0,005
lebt
Meerechw.
No.
1
to,
Praparie¬
rung mit;
Anti-
Antianaphylak-
tisierune nach
24 Stunaen mit
Reinjektion
nach 24 Stunden mit
Hammelserum intrav.
Resultat
<£~
hammel¬
serum ip.
Pepton intra¬
peritoneal
Dosis
pro 200 g
Multipla
194
200
0,5
0,1
0,02
2
keine Erschei-
nung, lebt
204
200
0,5
0,1
0,04
4
krank, lebt
199
220
0,5
0,1
0,05
5 1
tot nach 2 Min.
190
, 190
I 0,5
0,1
0,1
10
tot nach 5 Min.
Dieser Versuch lehrt uns, dafi mit Antihammelserum
praparierte und mit Pepton „antianaphylaktisierte“ Tiere gegen-
dber dem homologen Hammelserum in der 5-fach tddlichen
Dosis bereits wieder vollkommen empfindlich sind. Auch
hier besteht also nur eine geringfdgige Resistenz
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Die Spezifizitat der passiven Anaphylaxie etc.
401
von aspezifischem Charakter, die mit dem kolos-
salen antianaphylaktischen Schutz, wie er dnrch
dieAnaphylaktisierungmitdemhomologenEiweiB
zustandekommt, garnichtverglichenwerdenkann.
In einer weiteren Versnchsreihe haben wir dann bei mit
Hammelsernm prftparierten und mit Pepton antianaphylakti-
sierten Tieren nicht den Schutz gegenflber dem homologen
Hammelserum, sondern gegenflber Pepton geprQft. ZunSchst
war die tftdliche Dosis des Peptons bei normalen Tieren
einerseits und bei passiv mit Kaninchen - Antihammelserum
pr&parierten Tieren andererseits zu bestimmen. Die beiden
Tabellen zeigen, daB ein wesentlicher Unterschied bezflglicb
der Peptonempfindlichkeit nicht besteht.
Titrierung der tddlichen Dosis von Witte-Pepton bei normalen Tieren.
Meerschweinchen
No.
Gewicht
in g
Intravendse Injektion von
Witte-Pepton pro 100 g
Resultat
K. 152
210
0,1
tot
0. 231
170
0,1
tot
0.230
180
0,075
lebt
0. 226
220
0,075
lebt
Titrierung der tddlichen Dosis von Witte-Pepton bei passiv praparierten Tieren.
Meerschw.
Gewicht
Praparierung mit Anti-
Pepton nach 48 Std.
Resultat
No.
in g
hammelserum intrap.
intravenos pro 100 g
0.191
200
0,5
0,075
tot
0.198
220
0,5
0,05
lebt
Die mit Antihammelserum passiv pr&parierten Tiere wurden
mit der intravends tddlichen Peptondosis intraperitoneal „anti-
anaphylaktisiert“, und nach 24 Stunden wurde die tddliche
Peptondosis (intravends) bei diesen Tieren ermittelt. Ein
nennenswerter Effekt der Antianaphylaktisierung durch das
Pepton gegenflber dem Pepton war nicht zu erkennen.
■g .
'u 50
Praparie¬
rung
Antianaphylak¬
tisierung nach
Eeinjektion
nach 24 Stunden mit
gjg
•H
C3
mit Anti¬
24 Std. intrap.
Pepton intravenos
Resultat
<r
hammel¬
mit iv. todlicher
Dosis
Multipla
S
serum ip.
Dosis von Pepton
pro 100 g
195
200
0,5
• poop
0,2
2
tot nach 3 Min.
193
200
0,5
0,1
1
tot nach 5 Min.
203
250
0,5
0,1
1
tot nach 3 Min.
197
200
0,5
0,075
•u
tot nach 3 Min.
201
180
0,5
0,1
0,05
V.
krank, lebt
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402 Kumagai u. Odaira, Spezifizitat der passiven Anaphylaxie etc.
In der nachstehenden Uebersichtstabelle sind noch einmal
die Resultate fiber das Verhfiltnis des Hammelserums und des
Peptons bei der Antianaphylaxie gegenfibergestellt. Diese
Tabelle zeigt uns, daB die mit Hammelserum passiy prfipa-
rierten und mit Hammelserum antianaphylaktisierten Tiere
einen absoluten Schutz gegenfiber dem Hammelserum zeigen.
Die mit Hammelserum antianaphylaktisierten Tiere haben da-
gegen gegenfiber dem Pepton nur eine sehr minimale Resi-
stenz, und ebenso haben die mit Pepton ^antianaphylaktisierten"
Tiere eine geringffigige Resistenz gegenfiber' dem Hammel¬
serum. Bei „Antianaphylaktisierung“ mit Pepton und Reinjektion
von Pepton tritt ein deutlicher Schutz fiberhaupt nicht in
Erscheinung.
Uebersichtstabelle.
Passlv mit Antihammel-Kaninchenserum praparierte Tiere
Antianaphy- :
laktisierung | Hammelserum
Hammelserum
Pepton
Pepton
Reinjektion Hammelserum
Pepton
Hammelserum
Pepton
Schutzkraft > 200
i
4
i
Zusammenfassung.
1) In Uebereinstimmung mit den Resultaten der vorher-
gehenden Arbeit von Szymanowski ergibt sich, dafi auch
bei passiv prfiparierten Tieren die Antianaphylaxie streng
spezifisch ist.
Unsere Versuche zeigen erneut die Richtigkeit der Theorie
Friedbergers fiber die Entstehung der Antianaphylaxie,
als Anaphylaxie refracta dosi durch Antikorperabsattigung.
2) Beziehung zwischen Peptonschutz und Antianaphylaxie
besteht im Gegensatz zu den Angaben von Biedl und
Kraus, sowie Bessau nicht in der Weise, dafi man daraus
auf eine Wesensgleichheit der Peptonvergiftung und Ana¬
phylaxie schlieBen dfirfte.
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Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Lurk, Beziehungen der Antianaphylaxie zum Anaphylatoxinschutz. 403
D. Die Beziehungen der Antianaphylaxie zum Anaphylatoxin-
sehutz und zur Vergiftung durch [3-Imidazolylftthylamin.
Von Dr. A. Lura,
Assistent der medizinischen Klinik (Professor Forlanini), Pavia.
Im AnschluB an die in der yoraufgegangenen Arbeit mit-
geteilten Versuche von Kumagai und Odaira fiber die
Beziehungen der Antianaphylaxie zum Peptonschutz habe ich
untersucht, welche sohtttzenden Wechselwirkungen zwischen
aktiver Anaphylaxie und Anaphylatoxinvergiftung
sowie der Vergiftung mit p - Imidazolyl&thylamin bestehen.
Des weiteren wurde untersucht, wie sich Tiere, die eine
Anaphylatoxinvergiftung fiberstanden haben, gegenfiber Ana¬
phylatoxin einerseits und p-Imidazolyl&thylamin andererseits
verhalten.
Aktire Anaphylaxie.
L Beatimmung der tddliohen Dosis von Anaphylatoxin bei
mit Hammelserum aktiv prSparierten und mit Hammelserom
antianaphylaktisierten Tieren.
Es wurde eine Reihe von Meerschweinchen mit je 0,02 Hammelserum
subkutan prapariert. Nach 17 Tagen ergab die Titrierung mit Hammel¬
serum zur Ermittlung der todlichen Dosis 0,015 bei intravenoser Injektion,
wie das die nacbstehende Tabelle zeigt.
5. XII. 11.
Meerschw.
No.
Gewicht
in g
Dosis der
Reinjektion
Resultat
L. 90
220
0,02
typische Anaphylaxie, naeh 5' tot
L. 95
230
0,015
typische Anaphylaxie, nach 5' tot
L. 87
250
0,01
leichte Symptome, lebt
L. 78
210
0,01
d g i.
Nunmehr wurde einer Reihe der prSparierten Tiere zur
Antianaphylaktisierung 0,01 Hammelserum intraperitoneal ge-
geben und 24 Stunden spater mit Hammelserum einerseits
und mit Prodigiosus-Anaphylatoxin andererseits geprfift, in-
wieweit ein Schutz eingetreten war. Das Prodigiosus-Ana¬
phylatoxin war in der ublichen Weise mit Meerschweinchen-
serum hergestellt worden (1 Oese Prodigiosus pro ccm Serum).
Die Giftigkeit des Anaphylatoxins fur normale Tiere zeigt die
folgende Tabelle.
Zeitschr. f. ImmunitStsforschung. Orig. Bd. XIV. 28
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Gck igle
Original fro-m
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
404
A. Lurk,
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Meerechw.
No.
Gewicht
in g
Anaphyla-
toxindosis
Besultat
L. 178
230
2,0
lebt
L. 180
230
3,0
typische Anaphylaxie, nach 3' tot
Das Verhalten des Anaphylatoxins bei den mit Haramel-
sernm aktiv pr&parierten und mit Hammelserum antianaphy-
laktisierten Tieren zeigt die nachstehende Tabelle. t
Meerechw.
No.
1*?
La
O 60
* a
O
a
Praparierung
mit Hammel¬
Antianaphy-
laktisierung
mit Hammel¬
serum ip.
Reinjektion nach
24 Std. iv. mit
Besultat
serum
subkutan
Doeis
Mul¬
tipla 1 2 )
L. 71
230
0.02
0,01
0,1 Hamm.-S.
7,5
lebt*)
L. 76
240
0,02
0,01
0,15 ,.
10
lebt
L. 79
230
0,02
0,01
0,2
15
tot
L. 80
j
230
j
0,02
! 0,01
3,0 Anaphyl.
1
schw. Anaphyl.,
nach 24 Sta. tot
L. 82
1230
0,02
i 0,01
4,0 „
l V,
nach 3' tot
Es wurde ein weiterer Versuch unter analogen Bedingungen
angestellt, nur waren die Meerschweinchen 25 Tage vorher pr&-
pariert worden and die tddliche Dosis des Hammelserums betrug
0,02 fQr die pr&parierten Tiere. Die akut todliche Dosis des
Prodigiosus-Anaphylatoxins fQr normale Tiere war 2,0 und die
Dosis fQr die aktiv pr&parierten Tiere war die gleiche.
6. XII. n.
*
A .
bC
C
Praparie¬
rung mit
Antiana-
phylakti-
sierung
mit
Reinjektion nach 24 Std.
intravenos mit
Resultat
O
&
Harnmel-
Multipla
s
%
3
serum
subkutan
Hammel¬
serum ip.
Dosis
der todlichen
Dosis
L. 11
210
0,02
i
0,01
0,5Hamm.-S.
25
lebt
L. 3
180
0,02
0,01
2,0 Anaphyl.
1
I
schwere Anaphyl.,
nach 4 Std. tot
L. 13
200
0,02
0,01
3,0 „
17 ,
typische Anaphyl.,
nach 3' tot
L. 9
245
0,02
0,01
4,0 „
2
typische Anaphyl.,
nach 3' tot
1) d. h. Multipla der todlichen Dosis.
2) Am niichsten Tag wurde das Meerschweinchen L. 71 mit 0,75
Hammelserum, = 50-fach todliche Dosis, wieder injiziert. Das Tier bekam
Kriimpfe, starb aber nicht.
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Die Beziehungen der Antianaphylaxie zum Anaphylatoxinachutz. 405
AusdiesenbeidenVersuchsreihenergibtsich,
daB die mit Hammelserum antianaphylakti-
sierten Tiere eine bedeutende Antianaphylaxie
gegenflber dem homologen EiweiB aufweisen. In
der zweiten Versuchsreihe tOtet zum min-
desten die 25-fache, son st tSdliche Dosis yon
Hammelserum das mit Hammelserum antiana-
phylaktisierte Meerschweinchen nicht. Dagegen
ist der Schutz, der durch die Antianaphylakti-
sierung mit Hammelserum gegenflber dem Pro-
digiosus-Anaphylatoxin erreicht wird, ein ganz
minimaler. Bei der tfldlichen Dosis und bei 1,3
der tddlichen Dosis haben wir nichts weiter er¬
reicht als eine geringe VerzOgerung der giftigen
Wirkung. Gegenflber der l 1 / 2 -fachen tddlichen
Dosis besteht bereits keine Spur von Schutz-
wirkung mehr. Diese Befunde stehen im Gegensatz mit
den Angaben von Sachs und Ritz sowie von Bessau auf
Grund entsprechender Versuche.
Wir mdchten speziell bei Bessau die aus seinen Ver-
suchen gezogene, unseres Erachtens irrige SchluBfolgerung
darauf zurflckfflhren, daft er gerade nur die knappe Grenz-
dosis des Anaphylatoxins verwandt hat und so eine gering-
fligige Resistenz irrtflmlich fflr identisch mit der Antianaphy¬
laxie gehalten hat. DaB auch in seinen Versuchen nur eine
minimale Resistenz vorgelegen haben kann, dafQr spricht
schon der Umstand, daB seine antianaphylaktisierten Tiere bei
der Anaphylatoxindosis zwar mit dem Leben davon kamen,
aber doch erkrankten.
2. Bestimmung der tddllohen Beiry ektionsdosis bei aktiv
praparierten und mit Anaphylatoxin antianaphylaktisierten"
Meersehweinehen.
Es wurde nun ermittelt, wie sich mit Hammelserum aktiv
pr&parierte Tiere gegenflber der Reinjektion mit dem homo¬
logen Serum verhalten, nachdem die Tiere eine subletale Dosis
von Anaphylatoxin erhalten hatten. Die Tiere waren 20 Tage
zuvor mit 0,02 Hammelserum subkutan behandelt worden.
Die tddliche Dosis des Hammelserums einerseits und des
28 *
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406
A. Lurk,
Anaphylatoxins andererseits ergibt sich aus der nachstehenden
Tabelle.
9. XII. 11. TitrieruDg der todlichen Dosis Ton Haramelserum bei mit
Hammelserum praparierten Here.
Meersehw.
No.
Gewicht
in g
Doeis der
Keinjektion
Resultat
L. 91
240
0,01
lebt
L. 92
250
0,02
typische Anaphylaxie, nach 3' tot
Titrierung der tddlichen Dosis von Prodigioeus-Anaphylatoxin bei
normalen und mit Hammelserum vorbehandelten Tieren.
Meersehw.
No.
Gewicht
in g
Injiziert an
Anaphyla-
toxindosis
Besultat
L. 179
190
normaL Tier
2.0
typische Anaphyl., n. 3' tot
L. 178
180
9f 7J
1,0
lebt
L. 81
L. 97
190
190
vorbeh. Tier
ff 9*
2,0
1,0
tyjpische Anaphyl., n. 3' tot
Ein Teil der Tiere wurde non mit ca. Vs der tddlichen Dosis
von Prodigiosus-Anaphylatoxin intraperitoneal behandelt (mehr
als 7$ der tddlichen Dosis kann deshalb nicht gut gegeben
werden, weil die H&lfte der aknt tddlichen Dosis die Tiere
doch snbakut fast regelmftCig tdtet). Die Wirkung des
Hammelserums bei den homolog pr&parierten und mit Ana-
phylatoxin antianaphylaktisierten Tieren zeigt die
folgende Tabelle.
i J
g g !„Antianaphy-
2 | g laktisier. u mit
V § g Prodigiosus-
§«W So I anaphylatox.
-g j intraperiton.
j Keinjektion
•£? fef}
'nach 24 Std. mit
i>gi
4
*5 a
O
Hammelserum
Dosis | Multipla
Resultat
L.88
250
0,02 0,75
0,02
1
typ. Anaphylax., n. 4' tot
L.96
250
0,02 0,75
0,02
1
typ. Anaphylax., n. 15' tot
Es ergibt sich aus dieser Tabelle, daB durch
die Behandlung mit Prodigiosus-Anaphylatoxin
nicht einmal ein Schutz gegenflber der einfach
tddlichen Dosis des Hammelserums bei homolog
praparierten Tieren erzielt wird.
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Die Beziehungen der Antianaphylaxie zum Anaphylatoxinschutz. 407
3. Bestimmung der tddliohen Dosis von p-Imldaaolyl&thylamin
bei aktiv pr&parierten und mit homologem Seram antiana-
phylaktiaierten Meersohweinohen.
In einer weiteren Versuchsreihe wnrde bei aktiv mit
Hammelserum pr&parierten und mit Hammelserum antiana-
phylaktisch gemachten Tieren 24 Stunden sp&ter die giftige
Wirkung des p-Imidazolyiathylamin ausgewertet.
1. Bestimmung der todlichen Dosis des Hammelserums
bei pr&parierten Tieren (vgl. Tabelle p. 403).
2. Bestimmung der tddlichen Dosis des p-Imidazolyl-
Sthylamin bei mit Hammelserum pr&parierten Tieren.
5. XII. 11.
Meerschw.
No.
Gewicht
in g
Dosis des S-Imid-
azolylathylamins
Resultat
L. 84
230
0,0001
typische Symptome, nach 3' tot
leot
L. 80
230
0,00005
Die tQdliche Dosis des P-Imidazolyl&thylamins bei den mit
Hammelserum pr&parierten und mit Hammelserum antiana-
pbylaktisierten Tieren zeigt die folgende Tabelle.
5. XII. 11.
t£
+3
JS
V bJD
ta
o
Praparie-
rung mit
Hammel¬
serum
Antianaphy-
laktisierung
mit Hammel¬
serum intra-
Reinjektion
nach 24 Stunden
mit f3-Imidazolyl-
iithylamin
Resultat
s
subkutan
peritoneal
Dosis
Multipla
L. 72
230
0,02
0,01
0,0001
1
tot nach 3 Min.
L.100
240
0,02
0,01
0,0001
1
del.
schwere Symptome,
lebt
L. 74j
230
0,02
0,01
0,000005
7 ,
Fur die Kontrolle s. Tabelle p. 403, 404.
Es ergibt sich, dafi ein Schutz gegen&ber dem
P-Imidazolyl&thylamin durch die Antianaphylak-
tisierung mit Hammelserum bei mit Hammel¬
serum pr&parierten Meerschweinchen nicht ein-
tritt.
Fassen wir das Resultat aller der vorstehen-
den Versuche, die mit aktiv anaphylaktisierten
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408
A. Lurk,
Tieren angestellt worden sind, zusammen, so er-
gibt sich, dafi weder durch die Antianaphylakti-
sierung mit dem Hamm el serum fttrdasAnaphyla-
toxin, noch umgekehrt durch die „Antianaphylak-
tisierung“ mit Anaphylatoxin fflr dasHammelserum
ein Schutz erzielt wird, noch auch bei durch
Hammelserum antianaphylaktischen Tieren die
p-Imidazolylathylamin-Vergiftung irgendwiebe-
einfluBt ist. Allein durch die Antianaphylaktisierung mit
Hammelserum war bei den homolog prfiparierten Tieren eine
Antianaphylaxie fflr Hammelserum, und zwar eine ganz erheb-
liche, zum mindesten gegenflber der 25-fach tfldlichen Dosis,
eingetreten.
4. Bestlmmung der tddliohen Dosis von Anaphylatoxin bei
mit Anaphylatoxin „antianaphylaktisierten u Tieren.
A. Homologes Anaphylatoxin.
Nunmehr untersuchten wir, ob bei normaleu Tieren,
die mit untertfldlichen Dosen von Anaphylatoxin behandelt
sind, ein Schutz gegen das homologe bzw. gegen ein hetero-
loges Anaphylatoxin eintritt. Hier haben Ritz und Sachs
bereits einen Schutz beobachtet. Zun&chst bestimmten wir
von einem in der flblichen Weise hergestellten Prodigiosus-
Anaphylatoxin die tfldliche Dosis. Das Resultat ergibt sich
aus der nachstehenden Tabelle.
14 XII. 11. Titrierung der todlichen‘Dosis von Prodigiosus-
Anaphylatoxin bei normalen Tieren.
Meerechw.
No.
Gewicht
in g
j
Resultat
L. 199
190
2,0
typisehe Anaphylaxie, nach 3' tot
L. 200
190
1,0
lebt
Es wurde dann eine Reihe von Meerschweinchen mit 1 / i
der tfldlichen Dosis behandelt, und 24 Stunden sp&ter wurde
bei diesen Tieren die tfldliche Dosis Anaphylatoxin im Ver-
gleiche zur Kontrolle ermittelt.
Dieses Anaphylatoxin besaB die aus nachstehender Tabelle
ersichtliche Giftigkeit.
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Die Beziehungen der Antianaphylaxie zum Anaphylatoxinschutz. 409
15. XII . 11. Titrierung der todlichen Dosis von Prodigiosus-Anaphylatoxin.
Meerschw.
No.
Gewicht
in g
Resultat
L. 207
250
3,0
leichte Symptome, lebt
L. 208
260
4,0
typische Anaphylaxie, nach 5' tot
14. XII. 11.
*
k o
tc
3
a
„Antianaphylak-
tisierung** mit
Prodigiosus-
Anaphylatoxin
Reinjektion
nach 24 Std. mit Pro¬
digiosus-Anaphylatoxin
Resultat
intravenoB
s
$
intraperitoneal
Dosis
Multipla
L. 204
260
0,5
5,0
174
typische Anaphylaxie,
tot nach 3 Min.
L. 205
260
0,5
4,0
1
typische Anaphylaxie,
tot nach 4 Min.
L. 202
190
0,5
3,5
7 4
schwere Anaphylaxie,
tot nach 12 Btd.
Es ergibt sich aus dieser Tabelle, daB durch
die Vorbehandlung normaler Tiere mit unter-
tddlichen Dosen von Anaphylatoxin 24 Stunden
sp&ter kein Schutz gegenflber der tOdlichen Dosis
des homologen Anaphylatoxins erreicht wird 1 ).
B. Heterologes Anaphylatoxin.
In einer weiteren Versuchsreihe geschah die Vorbehandlung
der normalen Tiere wiederum mit 1 / i tddlicher Dosis Prodigiosus-
Anaphylatoxin, die Reinjektion aber mit Typhusanaphylatoxin
mit Meerschweinchenserum bereitet (1 Oese pro ccm Serum).
1. Bestimmung der todlichen Dosis des Anaphylatoxins
aus Prodigiosus, sowie des Anaphylatoxins aus Typhus.
19. XI. 11. Titrierung der tfldlichen Dosis von Prodigiosus-Anaphylatoxin
bei normalen Tieren.
Meerschweinchen
No.
Gewicht
in g
Dosis
*
Resultat
L. 219
190
2,0
nach 4 Minuten tot
L. 220
190
1,0
lebt
1) Nach einem langeren Interval! (ca. 14 Tage) hat Fried her ger
(diese Zeitschr., Bd. 4, Heft 5) erne gewisse Schutzwirkung gesehen, die
er als echte Immunitat auffaBte.
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410 A. Lurk,
Titrierung der tddlicfaen Dosis von Typhus-Anaphylatorin bei normalen Tieren.
Meerschw.
No.
Gewicht
in g
Dosis
Resultat
L. 241
240
2,0 i
lebt
L.242
260
3,0
typische Anaphylaxie, nach 5' tot
2. Auswertung der tOdlichen Dosis des Typhusanaphyla-
toxins bei den mit Prodigiosnsanaphyiatoxin 24 Standee
vorher prftparierten Tieren.
19. XII. 1911.
*
.
£ o
g*
bC
.3
■s
„Antianaphylak-
tisierung“
mit Prodigiosus-
Anaphylatoxin
Beiniektion nach
24 Stef, mit Typhus-
Anaphylatoxin
in tra vends
Resultat
a
i
intraperitoneal
Dosis
Multipla
L.240
260
0,5
3,0
1
typische Anaphylaxie, nach
5 Min. tot
L.237
270
1
0,5
3,0
1
schwere Anaphylaxie, nach
5 Std. tot
L.238
270
0,5
2,0
*/.
schwere Symptome, lebt
Resultat: Die mit Prodigiosus-Anaphylatoxin
gespritzten Tiere sind 24 Stunden spftter fflr
Typhus-Anaphylatoxin etwa genau so empfind-
lich wie normale Kontrollen.
Die abweichenden Resultate von Sachs und Ritz sind
wohl daranf zurflckzufflhren, daft sie bereits nach 20—45 Mi-
nuten die zweite Anaphylatoxininjektion vornahmen.
6. Bestinxmtmg der tddliohen Dosis von fS-Imidasolyl&thylamin
bei mit Anaphylatoxin „anaphylaktisierten u Meersohweinohen.
Schliefilich wurde noch bei mit Anaphylatoxin in sub-
letaler Dosis behandelten normalen Tieren 24 Stnnden spftter
die tOdliche Dosis des ^-Imidazolylftthylamins ermittelt. Das
Resultat zeigen die folgenden Tabellen.
14. XII. 1911.
i .
t*
.s
M
„Antianaphylak-
tisierung“
mit Prodigiosus-
Beiniektion nach
24 Std. mit B-Imid-
azolylathylamin
Resultat
£
'S
Amaphylatoxin
intravenos
a
o
intraperitoneal
Dosis
Multipla
L.208
290
0,5
0,00015
I*/,
typische Symptome, nach
3 Min. tot
00
290
0,5
0,0001
1
typische Symptome, nach
2 Min, tot
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Die Beziehungen der Antianaphylaxie zum Anaphylatoxin schutz. 411
6. Bestimmung der tddliohen Dosis von P-Imidazolyl&thylamin.
bei mit der gleiohen Substanz „ antianaphylaktisierten “ Meer-
sohweinohen.
Anhangsweise sei noch bemerkt, dafi mit subletalen
Dosen von p - Imidazolyl&thylamin behandelte Tiere aucb
gegenflber der einfach todlichen Dosis ron p-Imidazolyl&thyl-
amin keinen Schutz anfweisen. Als Beispiel sei der nach*
stebende Versuch angefflhrt.
7 . xn. 1911.
Meer-
6chw. No.
^3
A
be
Injiziert mit p-Imid-
azolylathylamin
Nach 24 Std. reinjiziert
mit p-Imidazolylathylamin
Resultat
5-
intravenofl
Dosis
Multipla
L. 74
230
0,00005
0,0001
i
nach 5 Min. tot
Zu dem gleichen Resultat bezflglich des p - Imidazolyl-
athylamins waren Gbrigens scbon Dale und Laid law 1 ) ge-
kommen.
Zusammenfassung.
1) Pr&parierte und dann mit dem homologen EiweiB
antianaphylaktisierte Tiere zeigen im Gegensatz zn Bessaus
Angaben keine Antianaphylaxie gegeniiber Anaphylatoxin.
2) Pr&parierte nnd dann mit nntertddlichen Dosen von
Anaphylatoxin behandelte Tiere bewahren ihre Empfindlichkeit
gegenflber dem EiweiB der Pr&parierung.
3) Tiere, die wie unter 1 antianaphylaktisiert sind, bleiben
empf&nglich fflr p-lmidazolylflthylamin wie normale.
4) Tiere, die mit nntertddlichen Dosen von Anaphylatoxin
vorbehandelt sind, sind nach 24 Stnnden gegenflber dem
Anaphylatoxin aus homologem wie heterologem EiweiB so
empf&nglich wie normale.
5) Untertodliche Dosen von p-Imidazolyl&thylamin ver-
leihen keinen Schutz gegen dieselbe Snbstanz.
Die Zusammenfassung der einzelnen Ab-
schnitte dieser Arbeit siehe p. 391, 402, 411.
1) Journ. of Physiologic, Vol. 41, 1910.
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412
Hideyo Noguchi,
Nachdruck verboten.
[Aus dem Laboratorium des Rockefeller Institute for Medical
Research, New York.]
Knlturelle and immunlsatorische Dlfferenxierung zwlscben
Spirochaeta pallida, Spirochaeta refrlngens, Spirochaeta
mlcrodentlum and Spirochaeta macrodentlnm.
Von Prof. Dr. Hideyo Noguchi.
(Eingegangen bei der Redaktion am 27. Mai 1912.)
DaB es gewisse Arten von Spirochaeta gibt, welche der
Spirochaeta pallida morphologisch Hufierst nahe stehen, ist
eine Tatsache, die von zahlreichen Forschern schon dfters
betont wurde. Der kleinere Typus der Mundspiroch&te, die
Spirochaeta dentium Koch, ist vom Standpunkt der Diffe-
rentialdiagnose zweifellos der schwierigste. Meiner Erfahrnng
nach mehren sich diese Schwierigkeiten noch, wenn man es
mit einer Reinkultur dieses Mikroorganismus zu tun hat, da
eben durch die Reinzflchtung die Morphologic gleichm&Biger,
auch derjenigen der in syphilitischen L&sionen gefundenen
Spirochaeta pallida fchnlicher wird. Merkmale, die beiden
Arten gemeinsam sind, wie die grazids rotierende Bewegung,
die schwache Refraktionskraft, die Regelm&Bigkeit der oft
ganz tiefen Windungen, die ftuBerst schwache Affinit&t zu
verschiedenen Farbstoffen, die DurchschnittslSnge und -breite
der Individuen, machen es oft einem Beobachter schlechter-
dings unmdglich, darfiber zu entscheiden, ob er die Spiro¬
chaeta pallida oder dentium vor sich habe. Es ist wohl wahr,
daB die Spirochaeta dentium gewdhnlich in einem bestimmten
LSngenabschnitt zahlreichere Windungen hat, als die Spiro¬
chaeta pallida, immerhin ist dies, wie ich beobachtet habe,
nicht regelmfiBig der Fall; so ist z. B. die Zahl der auf einen
bestimmten L&ngenabschnitt der Spirochfite entfallenden Win¬
dungen bei verschiedenen St&mmen der Spirochaeta pallida
ziemlich variabel, auch sieht man nicht so selten einen Pallida-
stamm mit engeren Windungen, und ich zweifle nicht im ge-
ringsten, daB auch andere Forscher analoge Befunde erheben
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Kulturelle und immunisatorische Differenzierung etc. 413
k5nnten. Es ist eben nicht mdglich, die Identit&t eines be-
stimmten Mikroorganismus lediglich auf Grund morpho-
logischer und ffirberischer Eigentflmlichkeiten festzulegen, so-
lange man mit der Existenz anderer Mikroben, die in diesem
Sinne Shnliche Eigenschaften haben, zu recbnen hat; es ist
verfrfiht, und nicht bindend, eine im Wege des Kultur-
verfahrens gezflchtete Spirochftte als „Spirochaeta pallida“ zu
■* registrieren, lediglich weil sie gewisse Eigenschaften mit der
als Pallida bekannten Art gemein hat: man mull die Mflglich-
keit, daB es sich urn eine Spirochaeta dentium flberhaupt
handeln kdnne, schon vorher ausgeschlossen haben, ehe man
anderweit folgert, es handle sich im gegebenen Falle um eine
Pallida. Mein Interesse, vergleichende Studien an Spirochaeta
pallida und verschiedenen anderen Spirochfitenarten zu unter-
nehmen, wurde haupts&chlich erregt, als ich zwischen der von
Mflhlens und W. H. Hoffmann geztlchteten und als
Pallida bezeichneten Spiroch&tenart und meinen eigenen
Pallidast&mmen (6 verschiedene aus Kaninchenhoden und 6
direkt aus Menschen) ganz frappante Unterschiede beztlglich
bestimmter Eigenschaften der Reinkulturen bemerkte 1 ). Diese
grundlegenden Verschiedenheiten sind: 1) Von den von
Mflhlens und W. H. Hoffmann gezflchteten Spirochaten-
stSmmen wird ein eigenartiger penetranter Geruch produziert,
1) Es muB betont werden, daB Muhlens und Hoffmann sich
nach dem Vorgange Schereschewskys erstarrten Pferdeserums als
Nahrbodens bedienten, wahrend ich fiir die Zuchtung der Pallida vom
Kaninchenmaterial ein fliissiges, fiir die Zuchtung von Menschenmaterial
hingegen ein festes Kulturmedium verwendete. Sowohl die Zusammen-
setzung der Medien als auch die Kulturmethode weichen ganzlich von-
einander ab. Es scheint sehr wesentlich zu sein, daB man zur Erzielung
des Erstwachstums der Pallida beim Ausgang von Kaninchenmaterial
keinen festen und beim Ausgang von Menschenmaterial keinen fliissigen
Nahrboden verwende, insbesondere ist hervorzuheben. daB im Fall der
Verwendung von Menschenmaterial zur Erzielung des Erstwachstums der
Pallida — wie Chancre- Oder Kondylomgewebe — wegen dee Reichtums
dieser Gebilde an begleitenden Bakterien, sich ein fliissiges Kulturmedium
ganz und gar nicht eignen wiirde. Ebensowenig ist, meinen bisherigen
Erfahrungen nach, ein fester Nahrboden (selbet mit Zusatz von frischem
Gewebe) zum Erhalten eines Initialwachstums aus Kaninchenhodensyphilis
sonderlich geeignet, obwohl es vor kurzem Tomascewski gelungen war,
auf diesem Wege eine Mischkultur der Pallida zu erhalten.
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Hideyo Noguchi,
der meinen St&mmen vOllig fehlt 2) Die St&mme der ge-
nannten Autoren wachsen in einem geeigneten Kulturmedium
(Pferdeserumagar) auch ohne das Hinzuffigen sterilen frischen
Gewebes gut, wahrend meine Stfimme ohne Gewebestflcke gar
nicht wachsen. 3) Die Kolonien ihrer St&mme sind deutlicher
umgrenzt, auch grober als die in meinen St&mmen, welche
meist nahezu transparent, diffus und strikte anaerob wachsen.
4) Meine St&mme wachsen weder im Schereschewskyschen
noch im Milhlensschen Nahrboden.
Um diese Unterschiede zu eriautern, habe ich mehrere
verschiedene St&mme der Spirochaeta dentium, drei St&mme
der sogenannten mittleren Form (E. Hoffmann und v. Pro-
wazek) der Mundspiroch&te und einen Stamm der Spiro¬
chaeta refringens in Reinkultur zwecks vergleichender Studien
geziichtet. Hierbei wurden der kleinere und der mittlere Typus
der Mundspiroch&ten znm ersten Male voneinander in Rein¬
kultur getrennt, und ich schlug die Namen Spirochaeta (Tre¬
ponema) microdentium bzw. Spirochaeta (Treponema) macro-
dentium vor. Demnach wtlrde die so benannte Spirochaeta
microdentium mit der ^Spirochaeta dentium Koch", die
macrodentium mit der sonst als „mittlere Form" bezeichneten,
zusammenfallen. Da es noch so ungewifi ist, ob die Spiro¬
chaeta buccalis zur Gattung Treponema oder zu Spirochaeta
im engeren Sinne gehOrt, habe ich sie noch nicht mit in
diesem Zusammenhange studiert. Die Spirochaeta micro¬
dentium wie die Spriochaeta macrodentium gehoren meiner
Ueberzeugung nach beide zu der Gattung Treponema. Natflr-
lich wird man in dem Malle, wie unsere Kenntnis der anderen
SpirochStenarten allmahlich durch Studien an Reinkulturen
fortschreitet, die Nomenklatur wohl modifizieren. Folgende
Merkmale lassen sich nnn durch das Studium der Reinkulturen
von Spirochaeta microdentium, Spirochaeta macrodentium und
Spirochaeta refringens flir die Differentialdiagnose aufstellen.
Die Spirochaeta microdentium (Spirochaeta dentium Koch)
ist in Reinkultur von der Spirochaeta pallida durch ihre
F&higkeit, einen besonderen penetranten Geruch
zu produzieren, unterschiedlich, auBerdem auch
durch ihre FShigkeit, in Serum- oder in Ascites-
agar, ohne das Hinzufugen von frischem Gewebe,
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KuItureUe und immunisatorische Differenzierung etc.
415
za wachsen. Die einzelnen Kolonieo sind dichter und deut-
licher gesondert, als die der Spirochaeta pallida. Sie ist weniger
obligat anafirob als die Pallida und wfichst in Kulturrdhrchen
bis zu 3 cm unterhalb der Oberflfiche des Kulturmediums
hinauf. In ihren morphologischen Eigenschaften und den
f&rberischen Eigentflmlichkeiten ist sie nur schwierig von der
Pallida zu unterscheiden, wfihrend allerdings in einer ge-
wissen Periode ihres Wachstums und unter gewissen be-
sonderen Kulturbedingungen Unterschiede bestehen. Im Hoden-
gewebe des Kaninchens bringt sie eine Induration hervor,
ebenso in der Haut des Affen, doch schwindet diese meist
binnen einer Woche nach der Inokulation. Untersucht man
diese Induration wenige Tage nach stattgehabter Einimpfung
der Kulturen, so findet man in ihnen keine Spirochfiten mehr.
Die Spirochaeta macrodentium ist etwas grbber als die
Pallida, ihre Windungen sind seichter und weniger regel-
mafiig als die der Pallida. Ihre Bewegung ist aktiv und zeigt
an von anderweiten Hindernissen freien Stellen des Pr¶tes
eine gewisse Vibration. Sie ffirbt sich leicht mit der Giemsa-
Losung und erscheint rotlich purpurn. Dem Aussehen nach
ist sie im grofien und ganzen leichter von der Spirochaeta
pallida abzugrenzen. Unter ungflnstigen Kulturbedingungen
erscheinen viele Formen mit unregelmfiBigen Windungen. Sie
wfichst im Serum- oder Ascitesagar nur in Gegenwart frischen
sterilen Gewebes. Das Wachstum ist langsam und diffus und
zeigt eine weitgehende Aehnlichkeit mit dem der Pallidakultur.
Die Spirochaeta refringens bietet nur geringe differentielle
Schwierigkeiten, da sie viel grober ist und auch viel weniger
Windungen besitzt als die Pallida. Ihre Bewegung ist recht
lebhaft, wfihrend derselben verandern sich die Windungen
des Spirochfitenleibes. An geffirbten Exemplaren erscheinen
die Windungen mehr leichtwellig, zuweilen nahezu gestreckt.
Refringens ffirbt sich rStlich-violett mit der Giemsa-L5sung.
Die Kolonien sind nahezu durchsichtig und ganz diffus. Diese
Spirochfitenart wfichst auch ohne das HinzufOgen frischen
sterilen Gewebes zum Kulturmedium und produziert gar
keinen Geruch. — Ich will noch hinzufflgen, daB die Spiro¬
chaeta microdentium, die macrodentium und die refringens
alle einen schon ausgebildeten feinen Endfortsatz haben, ent-
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416
Hideyo Noguchi,
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weder nur an einem Oder an beiden Enden und daft diese
meist scbon gewundenen Endfortsatze an Lange variieren.
Bei der Refringens sind sie ganz besonders auffallend. Von
einer undulierenden Membran ist an keiner der erwahnten
Spirochatenarten etwas zu bemerken.
Aus der soeben gegebenen kurzen Beschreibung wird man
ersehen, daB keine dieser Spirochatenarten der Differential-
diagnose ihrer Reinkulturen Scbwierigkeiten entgegensetzt.
Eine jede Art hat gewisse charakteristische Merkmale, durch
welche sie von den flbrigen unterschieden werden kann.
Diese Unterscheidung wurde natflrlich nur m5glich gemacbt
durch ein vergleichendes Studium in Reinkulturen geztichteter
Stamme, nicht aber durch ihre morphologischen und f&rbe-
rischen Eigentflmlichkeiten allein. AuBer der Pathogenitat,
die nur der Pallida zukommt, erwies sich die Natur bio-
chemischer Verftnderungen in der Kultur, insbesondere das
Auftreten eines charakteristischen Geruches, als ein wichtiges
und leicht auffallendes Merkmal zum Unterscheiden der beiden
sich sonst gerade am meisten gleichenden Spirochatenarten,
der Spirochaeta pallida und der Spirochaeta microdentium.
Aus obiger Darstellung verschiedener Tatsachen geht
deutlich hervor, daB die Spirochatenstamme von MQhlens
und W. H. Hoffmann zu derselben Species gehSren, zu
welcher auch die Spirochaeta microdentium gehdrt. Wie aber
war es mSglich, dieselbe Art von Spirochaeta so oft nachein-
ander zu erhalten? Ist diese Spirochate haufiger Begleiter
syphilitischer Lasionen, von den in der Mundh5hle lokalisierten
abgesehen? Ich kann nicht verstehen, weshalb es mir nicht
mbglich war, diesen Mikroorganismus auch nur einmal wahrend
meiner Arbeiten zu erhalten, obschon ich doch meine zahl-
reichen Kulturen von einer groBen Menge von Schankern und
Kondylomen zttchtete, wahrend Miihlens .und W. H. Hoff¬
mann nicht einmal einen einzigen Stamm jener Spirochaten-
art isolieren konnteu, zu der alle meine Pallidastamme ge-
h6ren. W. H. Hoffmann berichtet des weiteren einen Fall
von erfolgreicher Erzeugung einer Orchitis durch Ueber-
impfung seiner Spirochatenkulturen auf das Kaninchen, und
zwar im Gegensatz zu Miihlens, der trotz zahlreicher Ver-
suche ein derartiges Resultat nie erreichen konnte, und dies
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Kulturelle und immunisatorische Differenzierung etc. 417
veranlaBte E. Hoffmann zu der Annahme, daB die Eulturen
von W. H. Hoffmann die Pallida sowohl als eine andere,
einen Geruch produzierende Spiroch&tenart enthalten haben
mdgen. Immerhin scbeint diese Annahme an Stiltze zu ver-
lieren, wenn man sich der Tatsache erinnert, daB die geruch*
lose Spiroch&tenart niemals in dem Pferdesernmagar allein,
der doch von W. H. Hoffmann gebrancht wurde, wachsen
kann. Die Behanptung W. H. Hoffmanns, daB seine
Spiroch&te bei der Wassermannschen Reaktion als „Anti¬
gen u gebraucht werden kann, ist auch nicht mehr geeignet,
uns davon zu fiberzeugen, daB seine Spiroch&te wirklich die
Pallida sei, da ja beispielsweise die Ansicht, daB die lipoiden
Bestandteile eines Rinderherzens das „Antigen“ darstellten,
Qberzeugend wirken kann; denn die Wassermannsche
Reaktion ist gar nicht ein durch die Antigen-AntikOrper-
verbindung bedingtes Ph&nomen. Ich habe eine ausgedehnte
Versuchsreihe von Komplementbindungsreaktionen an syphi-
litischen Blntsera angestellt, wobei ich mich des Extraktes
syphilitischer Kaninchenhoden (die enorme Mengen von Spiro-
chaeta pallida enthielten), ferner reiner Pallidakulturen und
auch reiner, aus tierischen Geweben dargestellter aceton-
unldslicher Lipoide, welch letztere durch Titration sich als
zur „Antigenwirkung“ geeignet erwiesen hatten, als Antigen
bediente, und meine Versuche haben mir best&tigt, daB aus-
schliefilich die reinen Lipoide verl&Bliche Wassermann-
Reaktion lieferten. Die Pallidaextrakte, gleichgflltig, ob von
syphilitischem Hoden oder aus der Reinkultur stammend,
lieferten ungenflgende Resultate, da sie meist zu schwach
waren, urn als „Antigen tt bei der Reaktion wirken zu kbnnen.
Die aus normalen Hoden hergestellten Kontrollextrakte
rangierten bezflglich der Brauchbarkeit als „Antigen u durch-
schnittlich ebenso, waren zuweilen sogar etwas starker. Ebenso
wenig lieB sich sagen, daB das Hinzufflgen dieser Pallida¬
extrakte zu dem „Lipoidantigen“ die Deutlichkeit der Reaktion
in irgendeiner Weise verscharft hatte. In ahnlicher Weise
hat auch Nichols mit Extrakten, die aus Spirochaeta pallida
und Spirochaeta pertenuis enthaltenden Kaninchenhoden her-
gestellt worden waren, bezflglich der r Antigenwirkung“ der-
selben ganz negative Resultate bekommen.
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418 Noguchi, Kulturelle und immunisatorische Differenzierung etc.
Wfihrend indes der Pallidaextrakt aus Reinkulturen sich
bei seiner EinfQhrung in das System der Wassermannschen
Reaktion gar nicht als Antigen verhfilt, zeigt er allerdings
markante Antigen ei gen schaften bei einer spezifischen allergiscben
Hantreaktion in den gegen Pallida hyperimmunisierten Ka-
ninchen nnd in gewissen Fallen von menschlicher Syphilis.
Weiterhin bindet er Komplement mit den Immunsera von
Tieren (Kaninchen), welche wiederholt mit getQteten Gewebe-
pallida (namentlich aus Kaninchenhoden) behandelt wurden.
Solche Immunsera geben keine Komplementbindung mit dem
„Lipoidantigen u oder den Extrakten aus Reinkulturen von
anderen Spirochatenarten. Er verhalt sich also in dieser
Kombination allerdings als Antigen und erweist dadurch seine
Identitat mit den im Gewebe befindlichen Pallidae.
Die soeben skizzierten Ergebnisse verdeutlichen einmal
den markanten Unterschied, welcher zwischen der von M fihlens
und W. H. Hoffmann als Pallida angesprochenen Spirochate
und den von mir als Pallida gezfichteten Reinkulturen be-
steht, andererseits zeigen sie, daB die erst erwahnten Spiro-
chatenkulturen jener Autoren unmdglich klar von denen der
Spirochaeta microdentium abgegrenzt werden konnen.
Meine vergleichenden Studien verschiedener in Frage
kommender Spirochatenarten, die auch recht haufig in spezi¬
fischen syphilitischen Lasionen als Nebenbefund anzutreffen
sind, mittels Reinkultur habe ich in diesem Artikel nur kurz
resumiert 1 ); mfigen die Erorterungen auch dazu beitragen,
die systematische Bestimmung einer in Reinkultur isolierten
Spiroch&tenart in einem gegebenen Falle zu erleichtern.
Zusammenfassung.
Die Arbeit enthalt einen Bericht der Untersuchungen
fiber Differenzierung verschiedener Spirochatenarten auf kul-
turellem und immunisatorischem Wege. Mittels Komplement¬
bindung reagieren Pallidaextrakte im Verein mit Immunsera
von mit Gewebepallida vorbehandelten Kaninchen, wfihrend die
1) Fiir die eingehende Beschreibung der Kulturmethoden, Morphologie,
Biologie, Tierversuche etc. der einzelnen Spirochiiten verweise ich den
Leser auf meine einschliigigen Originalmitteilungen.
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& Seligmann, Beitrage zur Anaphylaxie-Forschung. 419
gleichen Immunsera mit „Lipoidantigen“ oder Extrakten aus
anderen Spirochfttenarten negativ reagieren.
Literatnr.
Bruchner et Galaseco, Compt. rend. Soc. Biol., T. 68, 1910, p. 684.
Hoffmann, Erich, Aetiologie der Syphilis. Handb. d. Haut- u. Ge-
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Hoffmann, W. H., Zeitschr. f. Hyg., Bd. 68, 1911, p. 27. — Deutsche
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Noguchi, Joura. Amer. Med. Assoc., 1911, July 8, p. 102. — Munch, med.
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Schereschewsky, Deutsche med. Wochenschr., Bd. 35, 1909, p. 1665,
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Nobl und Fluss, Wien. klin. Wochenschr., Bd. 25, 1912, p. 475.
Noguchi, Joum. exp. Med., Vol. 14,1911, p. 557. — Munch, med. Wochen-
schrift, 1911, No. 45, p. 2372.
Orleman-Bobinson, Observations on Noguchi’s luetin reaction in
dermatology. Joum. Cutaneous Diseases, 1912.
Nachdruck verboten.
[Aus dem Untersuchungsamt der Stadt Berlin (Geh. Rat Pros-
kauer). Hygienisch-bakteriolog. Abteilung (Prof. Sobernheim).]
Beitrage zur Anaphylaxie-Forschung.
Von Dr. E. Seligmann.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 4. Juni 1912.)
L Ueber Papainanaphylaade.
Angaben, eine Ueberempfindlicbkeit gegen Papain be-
treffend, finden sich bei Pozerski 1 ). Dieser Autor fand,
dad Meerschweinchen, denen er wiederholt Papain subkutan
1) Compt. rend. Soc. BioL, T. 64, 1908, No. 14 et 18.
Zeitschr. f. Immunitiitsfomhung. Orig. Bd. XIV. 29
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420
E. Seligmann,
injiziert hatte, h&ufig nach der 4. oder 5. Injektion subakut
in Stunden bzw. Tagen zugrunde gingen. Als cbarakteristischen
Sektionsbefund erw&hnt er Kongestionen der Unterleibsorgane.
Weitere Mitteilungen liegen nicht vor.
Ich habe vor einigen Jahren begonnen, eine Reihe von
Fermenten daraufhin zu untersuchen, ob sie imstande sind,
spezifische Ueberempfindlichkeit auszulosen. Geprflft wurden
unter den verscbiedensten Bedingungen der Vorbehandlnng
Lab, Pepsin und Papain. Die ersten zwei Fermente zeigten
keine sensibilisierenden Eigenschaften beim Meerschweinchen;
wohl aber gelang es beim Papain (Marke Riedel, Succus 1: 80)
regelm&fiig, durcb einmalige subkutane Vorbehandlung einen
typischen anaphylaktischen Zustand auszulosen. Die Tiere
gingen bei der intravendsen Reinjektion nach etwa 3 Wochen
unter den bekannten klinischen und anatomischen Erschei-
nungen des anaphylaktischen Shocks zugrunde (100 Proz. Todes-
falle). Auch die anderen fflr die Anaphylaxie charakteristischen
Eigenschaften lieBen sich nachweisen: Antianaphylaxie nach
subletalen Dosen; passive Uebertragbarkeit der Anaphylaxie;
Bildung eines Giftes durch die Einwirkung von anaphylak-
tischem und normalem Meerschweinchenserum (inaktiviertes
Serum war unwirksam), kurz alle Kennzeichen der EiweiB-
anaphylaxie waren auch hier vorhanden.
Das Papain (Succus 1:80) stellt nun chemisch ein wenig
reines Prfiparat dar, es ist nichts anderes als ein Pflanzensaft,
der Papain enthalt und der EiweiBreaktionen gibt. Man ist
daher wohl berechtigt, das Phanomen der Anaphylaxie auf das
Pflanzeneiweifi der Papainlbsung zurtickzufflhren, und nicht
genotigt, eine Fermentanapbylaxie anzunehmen. Die Trennung
von Papain und EiweiB ist ja bisher leider noch nicht mSglich,
so daB eine sichere Entscheidung noch aussteht; F&llungs-
reaktionen haben mir eindeutige Resultate nicht gegeben;
auch der Versuch, durch Schiitteln inaktiviertes Papain*) zum
Sensibilisieren zu benutzen, fflhrte nicht zum Ziele. Der
Schuttelschaum sensibilisierte in der gleichen Weise wie un-
behandeltes Papain; allerdings war er durch das Schtltteln auch
1) In Analogie zur Schiittelinaktivierung des Lab (S. nnd S.Schmidt-
Nielsen, Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd. 60, 1909, und M. Jacoby,
Biochem. Zeitschr., Bd. 34, 1911).
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Beitrage zur Anaphylaxie-Forschung.
421
in seiner Verdauungskraft nicht bis zum Verluste geschSdigt
worden. Gegen die Bedeutung des Fermentes in diesen
Versuchen sprechen noch die Beobachtungen Pozerskis,
der bei Immunisierung von Kaninchen zwar Prfizipitine und
komplementbindende Antikbrper, aber kein Antipapain er-
zeugen konnte. Daffir spricht vielleicht eine Beobachtnng
von mir, daB n&mlich sehr alte Lbsungen oft zur Reinjektion
unbrauchbar sind.
Wie dem aber auch sei, die Papainanaphylaxie ist eine
ffir die Erforschung von Ueberempfindlichkeitsproblemen sehr
geeignete Methode, so daB wir sie stets zu unseren Nach-
prfifungen und zum Studium neuer Fragen verwertet haben,
so auch bei den folgenden Versuchen.
2. Ueber Antitrypsin and Anaphylaxis.
Den Studien fiber Ferraentanaphylaxie gingen parallel
Versuche fiber den Zusammenhang von Antifermenten mit
den Ueberempfindlichkeitsphfinomenen. Gerade da der ana-
phylaktische Vorgang in neuerer Zeit vielfach als ein paren-
teraler VerdauungsprozeB aufgefaBt wird, lag der Gedanke an
das Auftreten hemmender EiweiBspaltprodukte (Antitrypsine)
im Shock nahe. Nun hat vor einiger Zeit Rusznidk 1 ) von
dem gleichem Gesichtspunkte aus Versuche angestellt und
verbffentlicht, in denen er tatsachlich eine Vermehrung der
Antitrypsine nachgewiesen zu haben glaubt. Er verglich quan-
titativ den Antitrypsingehalt normal er Meerschweinchen-
sera und solcher, die wfihrend des Shocks entnommen waren,
und fand stets eine erhbhte Hemmungskraft bei den anaphylak-
tischen Tieren.
Meine eigenen Versuche, die unabhfingig von denen
Rusznidks unternommen waren, haben nicht zu diesem
Resultat gefuhrt. Meine Versuchsanordnung war folgende:
Ich verwandte 10 ccm Caseinum purissimum Grubler 1-prom, mit
Chloroformzusatz, als Ferment eine 2-prom. Losung von Trvpsinum Grubler,
und zwar in solchem Mengenverhiiltnis, dafi nach 30 Minuten wabrendem
Aufenthalt im Wasaerbad bei 37° vollkommene Verdauung eingetreten war,
so dafi nachfolgender Essigsaurezusatz keine Trubung unverdauten Kaseins
mehr ausloste. In einem Vorversuch wurde jedesmal die geringste hierzu
1) Deutsche med. Wochensehr., 1912, No. 4.
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E. Seligmann,
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fahige Trypsinldsung austitriert, zum Hauptvereuch die doppelte Dosis
gen ora men. Der Zusatz von Meerschweinchenserum erfolgte in fallenden
Mengen von 0,2 ccm abwarts bis zu 0.001 ccm.
Den anaphylaktischen Meerschweinchen warden vor der
Reinjektion kleine Mengen Blut aus der Carotis entnommen;
diese warden dann mit dem aus dem Herzen des eben im
Shock verendeten Tieres entnommenen Blute verglichen. Diese
Art des Vergleiches halte ich f(ir erforderlich wegen der
Schwanknngen im Antitrypsingehalt, die bei verschiedenen
Tieren vorkommen. Der Antitrypsingehalt der Meerschweinchen-
sera ist nnn im allgemeinen ein recht hoher, bis zu 0,01 und
0,005 ist er in unserer Versuchsanordnung, die sich Ubrigens
eng an die von Gross 1 ) angegebene anschlieCt, fast stets
nachweisbar gewesen. Ein Unterschied zwischen vor- und
nachanaphylaktischem Serum im Sinne Rusznidks wurde
niemals beobachtet, mitunter kam wohl das Umgekehrte vor,
d&B das Shockserum weniger kr&ftig die Trypsinverdauung
hemmte; doch waren die Differenzen nie sebr ausgepragt, in
den meisten Fallen flberhaupt nicht vorhanden. Unsere
Versuche fflhren daher zu dem Schlufi, daB eine
Vermehrung des Antitrypsingehaltes im ana¬
phylaktischen Shock nicht eintritt.
3. Ueber die Beeinfluasung der Anaphylazie durch die
tnberkuldse Infektion.
Infiziert man Meerschweinchen, die gleichzeitig mit Papain
sensibilisiert werden, mit tuberkulbsem Material — wir ver-
wandten Sputum — und prflft die sensibilisierten und tuber-
kulos gewordenen Tiere nach etwa 4—5 Wochen durch die
intravenOse Reinjektion mit Papain, so zeigen sie keine ana¬
phylaktischen Symptome bei Dosen, denen die nichtinfizierten,
nur sensibilisierten Kontrolltiere ausnahmslos in kflrzester
Zeit erliegen. Eine absolute Unempfanglichkeit besteht nicht,
immerhin ist die 5—10—20-fach todliche Dosis erforderlich,
um bei den tuberkulosen Tieren den Shock auszulosen. Und
auch dann verlauft er nicht immer in der bekannten fou-
droyanten Weise; die Tiere zeigen vielmehr h&ufig ausge-
1) Arch. f. exper. Pathol, u. Pharmakol., Bd. 58, 1907.
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Beitrage zur Anaphylaxie-Forechung.
423
sprocheue asthenische Erscheinungen, sie liegen mit zur Seite
gestreckten Extreraitaten auf dem Bauch, atmen angestrengt,
heben deu Kopf dann und wann und gehen subakut in Vs his
2 Stunden zugrunde. Nur die Tiere mit gering ausgebreiteter
Tuberkulose gehen gewbhnlich rascher zugrunde, bei ihnen
geniigt dann auch ein m&Biges Vielfaches der tddlichen Dosis
(3—5-fach). Je weiter der tuberkulSse ProzeB fortgeschritten
ist, um so schwerer ist der Shock auszuldsen, urn so grdBer
(20-fach und mehr) ist die erforderliche Papaindosis. Auch
bei Tieren, die erst infiziert wurden, nachdem der anaphylak-
tische Zustand ausgebildet war, erfolgte mit dem Auftreten
der tuberkuldsen Erkrankung ein Rfickgang der Ueberempfind-
lichkeit in genau den gieichen Formen, wie sie fQr die
gleichzeitige Sensibilisierung und Infizierung eben beschrieben
wurden.
Diese Versuche erinnern an Beobachtungen von Hartoch
und Sirenskij 1 ), die mit Naganatrypanosomen experimen-
tierten und fanden, daB im letzten Stadium der Erkrankung,
beim Eintreten eines fast vblligen Komplementschwundes,
die Reinjektion gleichfalls erfolglos bleibt. Sie fflhren das
Ausbleiben des anaphylaktischen Shocks bei diesen sensibili-
sierten und infizierten Tieren ursachlich auf den Komplement-
schwund zuriick, entsprechend der Annahme Friedbergers,
daB fflr die Abspaltung des anaphylaktischen Giftes in vivo
die Gegenwart von Komplement Bedingung ist. Hartoch
und Sirenskij haben nur mit einer Reinjektionsdosis ge-
arbeitet, die allerdings recht hoch war (1 ccm Pferdeserum);
immerhin bleibt die Frage offen, ob hier eine unspezifische
Resistenzerhdhung vorliegt oder eine absolute Reaktionslosig-
keit, die ja auch nicht spezifische Griinde haben whrde. Denn
Hartoch und Sirenskij nehmen an, daB der anaphylak-
tische Reaktionskdrper zwar vorhanden ist, aber durch den
Komplementmangel nicht zur Wirkung gelangt.
Nun ist bekannt, daB auch bei fortgeschrittenen tuber-
kulbsen Prozessen eine Komplementabnahme eintreten kann;
der Erkl&rungsversuch der genannten Autoren kbnnte daher
auch auf unsere Beobachtungen angewendet werden. Die
1) Zeitachr. f, Immunitatsf., Bd. 12, 1911.
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E. Sel igru an n ,
Titrierung des Komplementes im Hftmolyseversuch ergab
jedoch meistens einen vom normalen kaum abweichenden
Befund; gleichwohl wfire es aber mbglich, daB qualitative
KomplementverSnderungen vorbanden waren, die bei der
Hflmolyse uicht in die Erscheinung treten, fflr die Gift-
abspaltung aber doch schon von Bedeutung sind.
Die Entscheidung wurde daher auf andere Weise geftihrt;
wenn wirklich die SchSdigung des Komplementes Ursache fflr
die Reaktionslosigkeit war, so mufite die Gegenwart frischen
Komplementes genflgen, um dem latent vorhandenen Reaktions-
kdrper Wirksamkeit zu verleihen. Man brauchte daher nur
das Serum solcher Tiere auf normale Meerschweinchen zu
flbertragen und festzustellen, ob die Aktivierung im normalen
Tiere stattfindet. War Reaktionskdrper vorhanden, so muBte
sich beim normalen Tiere eine passive Anaphylaxie erzeugen
lassen. Der Versuch bewies das Gegenteil.
2 Scrien von Meerschweinchen, siimtlich am 16. II. 1912 mit 1,0 Pnpain-
losung eubkutan sensibilisiert. Serie A bleibt unbehandclt, Serie B wird
gleichzeitig durch tuberkuloses Sputum infiziert.
Am 19. III. wurde tin 3 Tieren der Serie B festgestellt, da6 die ana-
phylaktische Reaktionsfiihigkeit bei 3-fach todlicher Dosis ausblieb. Am
gleichen Tage werden 5 Meerschweinchen von Serie B und 3 von Serie A
entblutet.
Es erhiilt je ein normales Meerschweinchen 1: Serum von 2 Tieren der
Serie B intraperitoneal.
„ „ „ „ „ ,, 2: Serum von 3 Tieren der
Serie B intraperitoneal.
„ ,, „ „ „ „ 3: Serum von 1 Tier der
Serie A intraperitoneal.
„ „ „ „ „ „ 4: Serum von 2 Tieren der
Serie A intraperitoneal.
Xach 24 Stunden werden samtliche 4 Tiere intravenos mit 1,0 ccm
Papainlosung injiziert. Resultat:
Tier 1: keine Symptome.
Tier 2: keine Symptome.
Tier 3: leichte Symptome, erholt sich.
Tier 4: schwere Anaphylaxie, tot in 4 Minuten.
Wiederholungen dieser Versuchsanordnung gaben stets
das gleiche Resultat; eine sichere Uebertragung der Papain-
anaphylaxie durch das Mischserum selbst dreier tuberkuloser
Meerschweinchen gelang in keinem Falle, wahrend gesunde,
sensibilisierte Tiere geniigend Reaktionskorper enthielten, um
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bv Google
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Beitrage zur Anaphylaxie-Forschung.
425
durch Uebertragung des Serums von 2 Tieren regelmaBig
eine passive Sensibilisierung zu ermdglichen.
Es ist ja nicht ausgeschlossen, daB durch die Ueber¬
tragung noch groBerer Serummengen, die aber technisch auf
Schwierigkeiten stoBen whrde, sich schlieBlich doch eine
gewisse Ueberempfindlichkeit flbertragen laBt; das kOnnte
aber an dem prinzipiellen Ergebnis nichts kndern. Und dies
Ergebnis lautet: Die Verminderung der Ueber¬
empfindlichkeit beim anaphylaktischen, gleich-
zeitig tuberkulOseu Tier beruht auf einer Ab-
nahme der spezifischen Reaktionskorper, nicht
aber auf einem Mangel an Komplement.
Inwieweit dies Resultat auch auf die Beobachtungen von
Hartoch und Sirenskij anzuwenden ist, habe ich nicht
untersucht.
Eine exakte Erkl&rung der Interferenz von Anaphylaxie
und tuberkulOser Infektion vermag ich vorderhand nicht zu
geben; es liegen hier vielleicht ahnliche Zustandsverftnderungen
vor, wie sie von v. P i r q u e t J ) bei Masern beobachtet wurden.
Wahrend des Verlaufs der Masernerkrankung bei Kindern
verschwindet die Ueberempfindlichkeit gegen Tuberkulin, die
vorher und auch nachher wieder vorhanden ist.
Zusammenfassung.
1) Die Anaphylaxie gegen Papain unterscheidet sich in
nichts von der gewOhnlichen EiweiBanaphylaxie. Es handelt
sich wahrscheinlich nicht um eine Ueberempfindlichkeit gegen
das Ferment, sondern um eine PflanzeneiweiBanaphylaxie.
2) Eine Vermehrung des Antitrypsins findet. im Meer-
schweinchenserum als Folge der anaphylaktischen Vergiftung
nicht statt.
3) Tuberkulose Infektion fllhrt beim sensibilisierten Meer-
schweinchen zu einem weitgehenden Verlust der anaphylak¬
tischen Reaktionsfahigkeit. Dieser Verlust ist nicht durch
Komplementmangel bedingt, sondern durch die Abnahme der
ReaktionskOrper selbst.
1) Deutsche med. Wochenschr., 1908, p. 1297.
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426
Paul Th. Muller,
Nachdruck verboten.
[Aus dem Hygienischen Institut der Universit&t Graz.]
Quantitative Untersuchungen fiber Bakterienanaphylaxle.
(Ausgefiihrt mit Unterstiitzung der Dr. 0. Berz6-Stiftung.)
Von Prof. Dr. Patti Th. Mflller.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 4. Juni 1912.)
I. Einleltun^.
In zwei frfiheren Mitteilungen hatte ich fiber Versuche
berichtet, mit Streptokokken Anaphylaxie zu erzeugen. Die
Sensibilisierung der Versuchstiere war bei diesen Experimenten
nach der von Holobut empfohlenen Methode vorgenommen
worden, also mit oftmals wiederholten subkutanen oder intra-
peritonealen Einspritzungen der betreffenden Bakterien. Hier-
bei hatte sich das interessante Ergebnis herausgestellt, dafi
zur Sensibilisierung gegen die Streptokokkenleiber weit
grofiere Substanzmengen erforderlich waren, als sie Holobut
und spfiter Kraus und AmiradZibi bei ihren Versuchen
mit Bact typhi, coli und dysenteriae und dem Cholera-
vibrio fflr wirksam und ausreichend befunden batten. Die vor-
Untersucher
Bak-
terienart
Gesamt-
dosis l )
Dosis in mg
Trocken¬
substanz
Zahl
der
Tiere
Daron
tot
Davon
Krampfe
Holobut,
Kraus und
Amirad-
zibi
Cholera,
Typhus,
Coli, Dys¬
enteric
7io bzw. ®/ ]0
Oese
<0,24 mg
18
11
= 61%;
13
= 72%
Muller
Strepto¬
kokken
a) 13 ccm
Bouillon +1
Agarflasche
b) 4,5 ccm
Bouillon +
*U Agarfl.
>4 mg
9
2
= 22%
1
= 11 of
M ii 11 e r
Strepto¬
kokken
3bzw.4Agar-
flaschen
15—20 mg
10
6
= 60%
4
= 40%
1) Bei der Berechnung der Bakteriendosen wurde 1 Oese = 2 mg
feuchter Bakteriensubstauz = 0,4 mg trockeuer Bakteriensubstanz (80 Proz.
Wassergehalt entsprechend) gleichgesetzt. 1 Agarflasche Streptokokken wurde
nach direkten Wagungen als 5 mg Trockensubstanz in Bechnung gestellt.
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Quantitative Untersuchungen iiber Bakterienanaphylaxie. 427
stehende Versuchstabelle laBt den Unterschied, der hiernach
zwischen den Streptokokken and den anderen aufgezfthlten
Bakterienarten zu bestehen scheint, sehr deutlich hervortreten.
Denn wfihrend bei der Sensibilisierung gegen Typhus-
bacillen, Bacterium coli, dysenteriae usw. die Einspritznng von
im ganzen etwa 0,24 mg trockener Bakteriensubstanz ge¬
nii gte, um bei der Reinjektion etwa 60 Proz. der Versuchs-
tiere unter anaphylaktischen Erscheinungen zu tOten, traten
bei den in der zweiten Querspalte aufgefflhrten Versuchen mit
Streptokokken nur 22 Proz. Todesfaile auf, trotzdem hier die
sensibilisierende Bakteriendosis mehr als 4 mg Trockensub-
stanz, also weit mehr als das 10-fache betragen hatte. Erst
als ich dann in der Folge die sensibilisierende
Dosis auf 15 — 20 mg Trockensubstanz, also auf mehr als
das 60-fache der von Holobut vorgeschlagenen Menge ge-
steigert hatte, ging auch hier die Mortalit&t auf 60 Proz.
hinauf.
Wie ich in meinen friiheren Mitteilungen ausgeftihrt hatte,
bestanden zwei verschiedene Moglichkeiten, wie dieses ab-
weichende Verhalten der Streptokokken zu erklftren sein
kdnnte. Entweder konnte es sich n&mlich um eine geringe
Sensibilisierungsf&higkeit dieser Mikroorganismen im
Vergleich zu Bact. typhi, coli usw. gehandelt haben; oder aber
es konnte die Abspaltung von Anaphylatoxin aus
ihnen grdfieren Schwierigkeiten begegnen, derart,
daB dasselbe aus den Streptokokkenleibern entweder in ge-
ringerer Menge oder langsamer in Freiheit gesetzt wird als
aus anderen Bakterien.
Fflr die erste dieser beiden MOglichkeiten wflrde die be-
kannte Tatsache sprechen, daB es tiberhaupt ziemlich schwierig
ist, wirksame Streptokokken-Immunsera herzustellen, daB also
die antigenetische Ffihigkeit der Streptokokken
auch in bezug auf die Erzeugung anderer Anti-
kdrper als der anaphylaktischen Reaktionsk5rper
eine verhaitnismafiig geriige zu sein scheint.
DaB es daher hier der Einverleibung weit grQBerer An-
tigendosen bedarf als bei anderen Mikroorganismen, um den-
selben sensibilisierenden Effekt zu erzielen, ware hiernach
leicht zu verstehen.
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428
Paul Th. Muller,
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Aber auch die zweite frfiher dargestellte Mdglichkeit
konnte wohl neben dieser ersten mit an dem Ergebnisse
unserer Streptokokkenversuche beteiligt seiu. Denn zweifellos
eignen sich ja die verschiedenen Bakterienarten verschieden
gut zur Darstellung des Anaphylatoxins, und es ist immerhiu
auffallend, daB es bei keinem unserer Versuche, weder mit
Hilfe von Normalserum noch von verschiedenen Streptokokken-
immunseren gelingen wollte, giftige Bakterienabgfisse zu ge-
winnen.
Aronson 1 ), der diese Versuche vor kurzen nachgeprfift
hat, konnte sie vollinhaltlich bestfitigen, indem auch er trotz
zahlreicher Experimente weder aus lebenden noch aus ge-
kochten Streptokokken ein akut wirkendes Toxin gewinnen
konnte. Glflcklicher waren in dieser Beziehung allerdings
Do Id und Aoki 2 ), denn diese Forscher erhielten bei 18 Ver-
suchen doch 7mal ein akut tfidliches Gift; aber auch sie
heben ausdrticklich hervor, „daB die Abspaltung des
Giftes aus Streptokokken bedeutend schwerer
als aus anderen Bakterien, z. B. den Pneumo-
kokken, erfolgt“, daB zur Gewinnung geniigender Gift-
mengen relativ groBere Quantitfiten der Bakteriensubstanz er-
forderlich sind, als sonst, und daB das Meerschweinchenserum
linger auf die Streptokokken einwirken muB, urn eine akut
tfidliche Giftdosis entstehen zu lassen. Hierzu wird man wohl
schlieBen dfirfen, daB das ungfinstige Ergebnis un¬
serer Versuche, mit Streptokokken aktiv zu
anaphylaktisieren, wohl zum Teil auch auf die
geringe Eignung dieser Mikroorganismen zur
Giftabspaltung zurttckzuffihren sein diirfte.
Im folgenden mochte ich nun fiber eine Reihe von Ver-
suchen berichten, die mit einigen bisher weniger hfiufig zu
Anaphylaxieversuchen verwendeten Bakterienarten angestellt
wurden, welche das Gemeinsame haben, daB sie sfimtlich zu
den nicht plasmolysierbaren Species im Sinne A. Fischers
gehoren. Zum Vergleich wurde auch eine Versuchsreihe mit
einer bereits wohlstudierten Bakterienart, mit dem Bact. typhi,
angesetzt. Besonderes Gewicht wurde bei diesen Versuchen
1) Perl. klin. Wochenschr., 1912, No. 5 und 6.
2) Zeitsehr. f. Imniunitiitsf., Bd. 13, 1912.
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Quantitative Untersuchungen iiber Bakterienanaphylaxie. 429
mit Riicksicht auf die neueren Arbeiten Friedbergers und
seiner Mitarbeiter darauf gelegt, daB sowohl bei der Sensi-
bilisierung wie bei der Reinjektion genau bestimmte Mengen
von Bakteriensubstanz zur Verwendung kamen. Zu diesem
Zwecke wurden Massenagarkulturen der betreifenden Mikro-
organismen mit physiologischer Kochsalzlbsung abgespfilt, die
dichte Bakterienaufschwemmung dann gekocht und in diesem
Zustande — ohne Zusatz eines Konservierungsmittels — zu
der ganzen Versuchsreihe benutzt. Mit einem aliquoten Teil
dieser Aufschwemmung, der mit destilliertem Wasser stark
verdflnnt, ausgiebig zentrifugiert und nach AbgieBen der klaren,
flberstehenden Fliissigkeit noch 2mal mit destilliertem Wasser
gewaschen worden war, wurde dann der Gehalt derselben an
trockener Bakteriensubstanz bestimmt.
Der Zweck dieser Versuche war der, festzustellen, ob
sich zwischen den einzelnen benutzten Bakterienarten —
Diphtheriebacillen, Milzbrandbacillen und Proteusbacillen —
betrSchtlichere Unterschiede in bezug auf das Eintreten des
anaphylaktischen Zustandes feststellen lassen und ob sich
etwa die eine oder andere der aufgezahlten Species ahnlich
verhalt, wie wir dies frtiher von den Streptokokken gesehen
haben. Aus diesem Grunde wurden die Versuchstiere —
wenigstens bei einem Teile der Experimente — in verschie-
dener Weise sensibilisiert. Eine Gruppe erhielt etwa 8 In-
jektionen kleiner Bakteriendosen derart, daB die gesamte in-
jizierte Menge nur etwa 0,5 mg betrug; eine zweite Gruppe
dagegen erhielt in derselben Weise etwa 40 mg trockener
Bakteriensubstanz eingespritzt, wahrend eine dritte Gruppe
nur eine einmalige Injektion von 10 mg bekam.
Die iibrigen Versuchsbedingungen sowie die Ergebnisse
sind aus den folgenden Abschnitten dieser Mitteilung ersichtlich.
n. Versuche mit Diphtheriebacillen.
1. Sensibilisierung mit groBen Dosen.
Der Belag einer groBeren Zahl von Agarflaschen mit
Kochsalzlbsung abgeschwemmt, 10 Minuten lang gekocht,
dann abzentrifugiert und nach AbgieBen der Fliissigkeit in
soviel Kochsalzlosung suspendiert, daB der Belag einer Flasche
auf 2 ccm kommt.
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430
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4 ccm der Suspension, mit destilliertem Wasser gewasohen, enthalten
0,034 g trockener Bakteriensubstanz.
Sensibilisierung yon 9 Meerschweinchen (subkutanl
7. IX. 1 corn
9. IX. 1 „
12. IX. 0.5 „
13. IX. 0,5 „ Injizierte Gesamtmenge = 5 ccm
14. IX. 0,5 „ = 0,0435 g = 43,5 mg trockener Bakterien
16. IX. 0,5 „
18. IX. 0,5 „
20. IX. 0,5 „
Die Reinjektion erfolgte mit 22 mg trockener Bakteriensub¬
stanz am 20. X., 23. X. und 24. X. Das injizierte Fliissigkeitsvolum
betrug 3,5 ccm.
I. Sensibilisierte Tiere.
20.X.
No. 1
No. 2
23. X.
No. 4
No. 5
No. 6
9°
39.0
8*6
39,2
39,4
39,2
9"’
37,6
38,4
8 50
37,6
() 30
36,0
36,0
866
funt. Krampfen.
39,2
9 4ft
35,4
35,0
9“
Sektion: Lun-
Noch auf dem
38.2
10 °
35,2
34.5
9 35
genbliilmng, im
Operations-
36,4
K,30
34,6
34,1
10' 5
Herzen tiiissiges
brett lebhafte
35,2
11 °
34,0
33,2
10 60
Blut. Magen u.
Abwehrbeweg-
34,0
11 : ’°
33,6
33,0
11 °
Darm diisterrot
ung, dann sehr
33,5
12 °
33,5
32,8
114°
verfiirbt.
matt, f
33,5
12 45
33 ,4
32.6
12 M
30,0
^30
33,4
31,9
l u
29.0
3°
33,9
31,2
2 °
26,4
4°
34,0
30.4
3°
t
Naehts
7° aljends
Keine
i-, keine ■
+, keine
Krampfe
iKnimpfe;Kr;iinpfe
1
Kontrolltiere.
23. X.
No. 1
24. X.
No. 2
No. 3
No. 4
91 °
38,7
q.o
38,6
39,8
39,8
9.5
38.6
920
36,4
935
37.4
9 30
38,2
9 M
37.2
945
38,0
10 15
36,6
9'°
35,9
37,0
37,0
1()'°
36.0
10*°
36,8
36,0
36.8
11°
35,8
U 16
37.0
36,3
34,0
11*°
36,3
12 10
38,0
37,6
f
1230
37,0
Bald nach der In-
1°
37,4
jektion sehr matt.
2 °
37,6
Liegt schliefilich
4°
38.2
a. d. Seite, krampf-
8 °
38,2
hafte Zuckungen.
Unmittelbar nach
der Injekt. leichte
Kriinipfe.
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Quantitative Untersuchungen iiber Bakterienanaphylaxie. 431
II. Sensibilisierte Tiere.
23. X.
No. 7
No. 3
24. X.
No. 8
No. 9
!!»
39,0
9 46
39,6
11 “
38,0
39,6
9 60
38,0 Krampfe
39,6
1140
36,6
38,0
10 16
35,0
37,8
12 “
34,6
12° f. Unmittelbar n.
11 °
32,0
1 °
33.6
der Injekt. leichte
1116
29,0
32,0
2 °
32,4
Krampfe, dann sehr
matt. Sektion: Blut
12 **
28,7
30,0
3°
32,0
146
26,5
26,6
4°
31,4
fliissig. Lunge leicht
geblknt. Darm und
Magen diisterrot
verfarbt.
230
25,8
t
5 so
8 °
8 80
30,0
27,0
t
Eeine
Krampfe
4°
t
Unmittelb. nach
der Injektion
Krampfe; dann
ziemlich mun
ter.
Uebersichtsta belle.
Diphtheriebacillen. (GroBe Dosen.) Reinjektion mit 22 mg.
Zahl der Tiere
Davon tot
Akuter Tod
(binnen % Std.)
Krampfe
9
9
= 100%
2
= 22,2 %
c
o"~
II
Kontrolltiere
1
0
2
4
= 25%
=0%
= 50°/
2. Sensibilisierung mit kleinen Dosen.
Benaibilisierung von 10 Meerechweinchen, subkutan. Verdiinnte, ge-
kocbte Bacillenaufschwemmung. 1 ccm = 0,116 mg.
2. X.
3. X.
4. X.
7. X. I je 0,5 ccm; injizierte
9. X. I Gesamtmenge: 0,464 mg
10. X.
12. X.
13. X.
Reinjektion 10. XI. mit 0,0177 und 0,0236 g Diphtheriebacillensubstanz.
Sensibiliaierte Tiere.
10 . XL
No. 1
No. 2
CO
6
Se
No. 4
0,0236 g
0,0236 g
0,0236 g
0,0236 g
9 T
39,1
9 1°
Krampfe, +
39,0
9 12
Krampfe, f
9 lB
40,0
9 30
Krampfe
38,8
945
35,6
sofort Krampfe, f
10 10
33,0
10 16
t
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432
Paul Th. Muller,
Kontrolltiere.
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0,0236 g
b
0,0236 g
0,0236 g
9 10
39,6
9 5
Kriimpfe, f
10 15
39,3
38,3
11 20
35,8
Kriimpfe, +
12 10
!
34,0
1030
33,8
1015
t
Sensibilisierte Tiere.
10. XI.
I No. 5
0,0177 g
No. 6
0,0177 g
No. 7
0,0177 g
13. XI.
1 No. 8
| 0,0177 g
No. 9
0,0177 g
QIO
39,1
38,6
8 45
38,1
10°
38,1
36,9
t
I 9°
36.0 !
38,5
10 10
37,6
3tj.2
39.0
9 30
37,0
36,4
11°
36,4
36,0
37.2
10°
38,8
36,2
11 30
36,3
36,0
36,6
11°
39,2
37.4
l 2 io
37,4
37X)
36,0
12°
39,6
38,6
12 :, °
37,8
37.2
36.0
keine
zu Begin n
1°
38,2
38,2
37,2
Kriimpfe,
leichte
bleibt am
bleibt am
bleibt am
bleibt am
Zuckungen,
Leb., kerne
Leb., keine
Leb., keine
Leben
bleibt am
j Kriimpfe
Kriimpfe
Kriimpfe
Leben
Sensibilisierung von 10 Meerschweinchen. (1 ccm = 0,078 mg Trocken
substanz.)
6. XII 0,5 eem
7. XII. 0,5 „
12. XII. 0,5 „
13. XII. 0,5 „
15. XII. 0,5 „
18. XII. 1 „
20. XII. 1 „
21. XII. 1 „
Injektion subkutan.
Gesamtmenge 0,429 mg
Troc ken bak terien
Reinjektion 26. I. und 27. I.
26. I.
No. 1
No. 2
No. 3
No. 4
27. I.
No. 5
2,4 mg
4,8 mg
7,2 mg
9,6 mg
19,2 mg
10 1S
39.8
10°
39,6
1 0 20
38,8
39.0
39,0
sofort
10 30
3S.3
Kriimpfe,
10“
38,0
t
leichte Kriimpfe
39.4
11“
39,4
37.2
35,0
sehr matt
12°
.
t
12 30
41,0
38,6
33,3
Jlto
41,0
39.6
34,2
920
40,2
39.4
35.2
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Quantitative Untersuchungen fiber Bakterienanaphylaxie. 433
27.1.
No. 6
12,0 mg
No. 7
14,4 mg
No. 8
16,8 mg
No. 9
16,8 mg
No. 10
14,4 mg
10 “
40,2
Hi®
39,4
39,1
11 “
39,2
10 “
39,4
38,8
H16
38,0
38,8
H60
38,8
12 °
36,6
37,9
12 °
Zuckungen
sofort
12 °
37,6
12 »o
36,2
34,8
12 10
33,5
Krampfe.
krank
12 “
36,9
34,2
12 “
32,4
t
12 80
35,0
jao
37,0
35,0
J30
33,0
12 “
t
216
38,4
36,0
2 “
33,8
3°
37,0
4°
34,8
Kontrolltiere.
26. I.
a
2,4 mg
b
4,8 mg
c
7,2 mg
d
9,6 mg
10 s
38,9
10 “
38,0
39,0
10 *°
Zuckungen
36,6
39,0
39,0
11 “
36,6
36,4
36,6
38,2
12 *°
40,0
37,4
37.0
32,8
1 *°
40,9
40,6
40,4
33,6
2 »o
40,4
40,2
39,5
34,2
Kontrolltiere.
27. I.
e
12,0 mg
!• f
14,4 mg j
| 16,mg
h
16,8 mg
i
19,2 mg
10 80
39,0
10 “
37.4
11 “
39,4
39,1
39,0
lpo
39,2
38,6
39,2
sofort
Krampfe
Krampfe,
12 °
36,2
Krampfe
Zuckungen
38,4
t
12 *°
36,5
t
34,7
37,0
12 “
37,5
+
36,7
^80
38,0
37,0
2 “
38,2
37,4
3. Sensibilisierung durch einmalige Injektion
mittlerer Dosen.
6 Meerechweinchen am 6 . II. mit 0,01 g trockener Diphtheriebacillen
sensibilisiert. Beinjektion am 21. III.
Kontrolltiere.
21. III.
7,0 a mg
b
10,5 mg
c
14,0 mg
9 s0
935
39,6
38,5
40,0
10 °
36,5
leichte Zuckungen
38.3
39,6
11 °
37,0
38,0
38,6
n .o
38,0
38,0
34,8
12 “
39,1
38,5
34.5
1 °
39,5
39,0
34,0
2 °
40,1
40,0
33,0
3*
6 °
32.0
t
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434
Paul Th. Muller,
Sensibiliaierte Here.
21 . m.
No. 1
3,5 mg
No. 2
7,0 mg
No. 3
8,4 mg
No. 4
10,5 mg
No. 5
10,5 mg
No. 6
14,0 mg
10 ®
10 ®
39,0
38,6
39,0
leichte
39,8
38,9
Starke
39,0
10 ®°
37,5
Zuckungen
37,2
38,5
Zuckungen
38,4
39,7
10 4 ®
38,4
35,9
38,5
+
36,7
37,3
ii®°
39,2
35,9
39,0
36,4
Zuckungen
36,0
12 “
39,8
36,5
39,8
36,4
33,4
1 °
40,8
39,6
39,9
38,0
33,0
3°
40,3
40,0
40,0
40,0
34,6
3“
39,4
39,8
40,3
lebt
in der Nacht
t
Uebersichtstabelle. Versuche mit Diphtheriebacillen.
Reinjek-
tiODB-
dosis
Bensibilifiienuig
Sensibilisierung
Kontrollen
mit groflen Doeen
mit kleinen Doeen
23,6 mg
No. 1
sofort t, Krampfe
a
sofort f, Krampfe
„ 2
sofort t. Krampfe
b
t 2 y
„ 3
f in 1®, Krampfe
c
sofort f, Krampfe
„ 4
sofort f, Krampfe
22,0 mg
No. 1
t nach > 12®
No. 1
lebt, leichte Kr. — 2,9 0
„ 2
+ nach 10®
„ 2
lebt. —2,7°
„ 4
t nach 7«\ Krampfe
sofort f, Krampfe
., 3
lebt —3,8°
„ 5
„ 4
t nach 2 l / t ®, Krampfe
„ 6
nach 6®
„ 7
f nach 9‘/ 4 ®
„ 3
•• nach 1®, Krampfe
„ 8
•• nach 6® Krampfe
„ 9
t nach 4*/,®, Krampfe
19,2 mg
No. 5
eofort Krampfe
i
sofort +> Krampfe
17,7 mg
No. 5
lebt —3,1°
„ 6
lebt —2,6°
„ 7
lebt. — 3,0 0
„ 8
lebt -2,1°
„ 9
lebt. —2,3°. Zuckung.
16,8 mg
No. 8
lebt —7,0°. Zuckung.
R
t in 17,®, Krampfe
lebt. —2,5°. Krampfe
„ 9
sofort f> Krampfe
h
14,4 mg
„ 7
lebt. —4,6°
f
t in 1®, Krampfe
14,0 mg
No. 6
f n. > 12®, Zuckungen
c
t in 87,®
12,0 mg
No. 6
©
o
1
<U
e
lebt —2,8°
10,5 mg
No. 4
No. 5
t nach */.®. Krampfe
lebt. —2,6°, +1,3°
b
lebt -2,0°
9,6 mg
8,4 mg
No. 3
No. 4
t in 1®
d
lebt. —6,2°
lebt —1,3°, +0,2°
7,2 mg
No. 3
lebt. —5,7°
c
lebt -2,0°
7,0 mg
No. 2
lebt —3,1°, +1,0°
a
lebt —3,1°
4,8 mg
3,5 mg
No. 1
No. 2
lebt. —1,8°
b
lebt. —2,6°, +1,6°
lebt —1,5°, +1,8°
2,4 mg
No. 1
lebt. —1,0°, +1,2°
a
lebt. —2,3°, +2°
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Gck 'gle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Quantitative Untersuchungen iiber Bakterienanaphylaxie. 435
m. Versuohe mit MilzbrandbaoQlen.
Belag von geimpften Agarflaschen, mit Kochsalzlosung
abgeschwemmt, 3 X 20 Minuten im Wasserbad gekocht, dann
abzentrifugiert und nach Abgiefien der Flflssigkeit in Karbol-
Kochsalzldsung suspendiert.
Senslbllisierung von Meerschvreinchen.
1. Grofie Dosen.
7. XI. 0,5 ccm
9. XI. 0,5 „
12. XI. 0,5 „
20. XI. 0,5 „
22. XI. 0,5 „
27. XI. 0,5 „
29. XI. 0,5 „
30. XI. 0,5 ,,
2. XII. 1,0 „
Injizierte Gesamtmenge:
5 ccm = 41,8 mg
Reinjektion 8. I. bzw. 11. I. und 15. I.
8. I.
No. 1 1 No. 2 No. 3
0,0198 g 0,0132 g 0,0132 g
No. 4
0,0132 g
ii. i.
No. 5
0,0066 g
9'5
'
38,8 sofort
i
1Q80
39,8
9' 7
Zuckungen,
H46
38,6
9* b
Kriimpfe 38,7 sofort
12°
37,4
9 !0
f Kriimpfe 38,4
i
1°
38,0
04°
t Kriimpfe
39,0
2°
39,0
10 40
32,6
sofort Kriimpfe,
3°
39,4
ll 46
33,0
t
123°
35,2
3°
37,3
1
Reinjektion mit einer neu hergestellteu Milzbrandaufschwemmung.
15.1.
No. 6
0,0036 g
No. 7
0,0060 g
No. 8
0,0036 g
No. 9
0,0048 g
No. 10
0,0048 g
030
10°
C- CD
GO O
CO CO
39.1
37,6
I
39,2
3S,8
38.4
10“
Kriimpfe
33,8
1
34.2
36,4
37,0
37,6
ll 15
35.6
33,0
35,0
36,3
Kriimpfe
12 15
37^
30,2
35,8
35,2
35.S
1°
30,8
37,1
37,5
37,4
Zeitschr. f. Immunit;it*for»chung. Orig. Bd. XIV. 30
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Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
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436 Paul Th. Muller,
Kontrolltiere. (Alte Milzbrandaufschwemmung.)
8 . 1 .
No.l
0,0198 g
No. 2
0,0132 g
No. 3
0,0132 g
No 4
0,0099 g
9 16
I 39,2
38,6
39,7
945
i
J?
-+
38,0 Krampfe,
9 M
Lungenblahung,
krank
36,8
39,0
Herz schlfigt welter
Krampfe
10 18
35,2
38,3
sehr matt
11 °
34,4
34,0
32,0
11 **
33,0
33,0
moribund,
12 18
32,0
32,4
t
3°
36,2
35,8
Kontrollen. (Alte Milzbrandaufschwemmung.)
11 .L
No. 5
0,0066 g
No. 6
0,0049 g
No. 7
0,0033 g
10 8
10 10
39,2
Krampfe, +
39,4
39,0
Hu
n .o
36,8
34,8
37,4
12 °
34,9
34,9
1 °
35,2
36,2
2 °
36,6
38,0
3 ,s
38,7
39,0
(Neue Aufschwemmung.)
15.1.
No. 8
0,0066 g
No. 9
0,0033 g
No. 10
0,0049 g
9*°
39,0
38,4
930
37,0
10 °
33,4
37,0
10 ”
30,3
34,6
10 48
28,8
33,7
39,0
11 “
24,8
32,8
37,5 sofort
12 15
24,8
35,9
! Krampfe. +
1 °
t
36,9
1
2. Kleine Dosen.
Sensibilisierende Injektion an denselben Tagen wie bei den Tieren
mit „grofien Dosen* 1 . Gesamte Bakterienmenge: 0,42 mg Trockensubstanz.
Reinjektion 8 . I. bzw. 11 . I. (Alte Milzbrandaufschwemmung.)
8 . 1 .
No. 1 1
0,0132 g
1 No. 2
0,0132 g
No. 3
0,0132 g
10 10
39,0
39,5
io»
37,0
37,0
39,8
10’ 8
Krampfe, +
Krampfe, +
Krampfe, +
Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Quantitative Untersuchungen fiber Bakterienanaphylaxie. 437
11.1.
No. 4
0,0008 g
No. 5
0,0098 g
No. 6
0,0066 g
No. 7
0,0049 g
No. 8
0,0033 g
QM
10°
10»
10‘°
10“
11°
ll«tt
ll 80
11“
12°
39,0
37,9
Krampfe, +
38.5
37,4
32.6
t
39,0
37,0
sofort krank,
t
39,0
38,0
t
39,8
36,0
schwer krank,
t
3. Sensibilisierung durch einmalige Injektion
mittlerer Dosen.
Kontrolltiere.
13. III.
a
2,9 mg
b
5,9 mg
c
5,9 mg
d
83 mg
e
11,8 mg
9 1°
9 80
9 A0
10°
39,6
38,5
36,0
38.7
36.8
36,0
33,0
38,8
39,5
10 80
11“
33,0
28,0
37,8
Krampfe, f
39,0
Zuckungen,f
12°
12 s0
1°
2°
3°
32,4
30.8
28,0
25,0
24.8
in der Nacht f
28,0
28,0
25,0
t
Krampfe, +
Sensibilisierte Here.
Am 6. II. 0,01 g trockener Milzbrandbacillus aubkutan. Reinjektion 13. HI.
H No. 1
« 13 mg
fH
No. 2
2,9 mg
No. 3
2,9 mg
No. 4
4,8 mg
No. 5
4,8 mg
No. 6
5,9 mg
No. 7
5,9 mg
No. 8
7,1 mg
9“
9 80 j
10° !
10 s
11* | 38,8
11“: 36,7
12“ 1 36,0
12 80 37,0
l 80 373
2° 38,0
3° 38,8
lebt
38,4
sofort f
(Krampfe)
38.5
38,0
35,3
35,0
29.6
28.5
30.5
30,8
31,0
lebt
39,1
38,0
Kr&mpfe,
38,0
363
Zuckungen,
t
38,8
sofort
Krampfe,
t
38,8
sofort
Krampfe,
t
38,4
sofort
Krampfe,
t
30*
Digitized by Gougle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
438
Paul Th. Muller,
Uebersiehtstabelle. Versuche mit Milzbrandbncillen.
Beinjek-
tions-
dosis
Sensibilisierung
mit grofien Dosen
Sensibilisierung
mit klernen Dosen
Kontrollen
19,8 mg
13,2 mg
13,2 mg
13,2 mg
No. 1
„ 2 1
„ 3
„ 4
sofort f
sofort f, Kriimpfe
Krampfe, lebt. —5,8°
sofort Krampfe, f
No. 1
„ 2 !
„ 3
sofort Krampfe, f
sofort Krampfe, f
sofort Krampfe, f
No. 1 l
„ 2
„ 3
sofort t
Kriimpfe, lebt. —6,6°
Krampfe, lebt. —7,3°
11,8 mg
9,8 mg
9,8 mg
No. 4
„ 5
sofort Krampfe, +
+ nach l h
e
No. 4
+ nach •/.**, Krampfe
t nach 2 l / t h
8,8 mg
l>\ “g
6,6 mg
6,6 mg
No. 5
„ 7
sofort f, Krampfe
lebt. 2,4 0
lebt. — 8,9 0
No. 6
sofort krank, +
d
No. 5
No. 8
t nach V» h > Krampfe
sofort Kriimpfe, f
f nach 3 A / 2 h
5.9 mg
4.9 mg
4,8 mg
No. 6
No. 7
No. 9
,, 10
No. 4
sofort Krampfe
sofort Krampfe
lebt. — 3,6 0
lebt, —2,0°
f iu l h , Krampfe
No. 7
sofort f
b
c
No. 6
„ io
t nach 5 k
t nach 2 h , Krampfe
lebt. —4,6°
sofort Kriimpfe, +
3,6 mg
No. 5
No. 6
t in l h , Kriimpfe
Krampfe, lebt. — 4,9 0
No. 8
sofort krank, f
in l h
3,6 mg
3,3 mg
3,3 mg
2,9 mg
1,2 mg
No. 8
No. 2
No. 3
lebt. —4,2°
sofort f, Kriimpfe
lebt. —10°
lebt. — 2,8°
No. 7
„ 9
a
lebt. —4,1°
lebt. — 5,6°
nach > 12 h
IV. Versuche mit Proteusbacillen.
Sensibilisierung durch einmalige Injektion von 0,01 g troekener
Baktenen 6. II. Reinjektion 14. III.
•-H
nH
No. 1
No. 2
No. 3
No. 4
No. 5
No. 6
No. 7
r— (
6,1 mg
9,0 mg
6,1 mg
12,2 mg
10,5 mg
3,0 mg |
3,0 mg
040
38,0
05°
37,0
38,5
39,0
38,9
10°
Zuckungen
37,7
Zuckungen
sofort +,
■Uj
£
Z
X'
38,8
10 35
34,0
38,4
Kriimpfe
Kriimpfe
leichte
Krampfe,f
38,0
H46
33,8
28,8
sofort f,
Kriimpfe
leichte
Zuckungen
12°
33,6
26,0
36,4
1°
34,0
24,0
35,0
2 30
33,2
t
32,0
4°
| 29,8
in derXachtf
31,0
1
inderNacht +
Digitized by
Go 'gle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Quantitative Untersuchungen liber Bakterienanaphylaxie. 439
14. III.
No. 8
9,0 mg
' No. 9
| 4,5 mg
No. 10
15,0 mg
No. 11
18,3 mg
io»
11°
39,4
sofort f,
Krampfe
3S,5
39,2
38,8
1130
leichte Zuckungen
sofort f,
sofort f,
12 5
35.0
Kriimpfe
Krampfe
1°
2°
34,0
33.2
33,4
in der Nacht +
Kontrolltiere.
14. III.
a
6,1 mg
b
12,2 mg
c
18,3 mg
14. III.
e
4,5 mg
f
6,1 mg
9 80
39,2
3*°
38,6
38,2
94°
36,8
39,0
38,4
440
36,7
37,2
38,1
10°
37,0
38,2
38,0
Zuckungen
11°
36,7
36,3
36,7
5°
38,2
36,8
36,6
12°
37,8
34,3
34,7
6°
39,0
37,0
38,0
1°
37,7
34,5
32,4
15. III.
lebt
lebt
lebt
2°
34,2
33,2
27,5
fin der Nacht
fin der Nacht
fin der Nacht
14. III.
9,0 g mg
h
12,2 mg
i
15,0 mg
j
15,0 mg
k
15,0 mg
1
18,3 mg
14 . m.
m
18,3 mg
4 #
38,3
38,0
38.0
146
35,3
Krampfe
Kriimpfe
Krampfe
410
37,6
37,0
38.0
546
35,3
5°
36,5
38,9
35,9
36,6
38,8
^ 38,1
6*5
33,0
Kriimpfe
t in der
6°
36,1
34,2
35,9
36,0
sofort f,
34,4
Nacht
6 80
36,8
34,2
35,1
33,8
Krampfe
33,2
15. III.
lebt
r in der
t in der
f in der
f in der
Nacht
1 |
Nacht
Nacht
Nacht
Uebersichtstabelle. Vereuche mit Proteusbacillen.
Reinjektions-
dosis
Sensibilisierte Tiere
Kontoll tiere
18,3 mg
No. 11
sofort f, Krampfe
c
•* in>12 h , Zuckungen
1
■* in > 12 h , Krampfe
m
in > 12 h , Kriimpfe
15,0 mg
No. 10
sofort f, Krampfe
i
sofort, Krampfe
i,
f in > 12 b
in>12 h , Krampfe
Digitized by
Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
440
Paul Th. Muller,
Reiniektions-
dosis
Sensibilisierte Tiere
Kontrolltiere
12,2 mg
No. 4 1
sofort f, Krampfe
b
t in > 12 h
h
f in > 12 h , Krampfe
10,5 mg
No. 5
sofort f, Krampfe
9,0 mg
No. 2
v 8
No. 1
f in 4 l / f \ Zuckungen
sofort j, Krampfe
g
lebt. — 2.2 4 Zuckungen
6,1 mg
f in > 12 h , Zuckungen
a
f in > 12 b
,, 3
No. 9
sofort +, Krampfe
lebt. —1,5°, Zuckungen
4,5 mg
jt in > 12* 1 , Zuckungen
e
lebt. —1,4°
3,0 mg
No. 6
+ in V* 11 . Krampfe
It in > 12 h , Zuckungen
,, 7
d
lebt. —1,9°
V. Versuohe mit TyphnsbaoUlen.
Sensibilisierung mit kleinen Dosen.
Gekochte Emulsion von Typhusbacillen. 0,5 ccm = 0,059 mg trockener
Bakterien. 9 Meerschweinchen.
9. IX.
12. IX.
13. IX.
14. IX.
16. IX.
18. IX.
20. IX.
26. IX.
Subkutane Injektion mit je
0,5 ccm der Emulsion.
Gesamtmenge 4 ccm = 0.472 mg
trockener Bakteriensubstanz.
Die Reinjektion erfolgt mit 23,6 mg trockener Bakteriensubstanz in
einem Volum von 2 ccm am 31. X.
No. 1
No. 2
No. 3
No. 4
No. 5
No. 6
No.7j
No. 8'
i
No. 9
8 8°
39,0
39,0!
8 40
37,6
1
37,4
8 4&
liegt auf
39,2
I 1
8 56
der Seite,
; 37,4
39,6
! I
9 10
Kriimpfe,
Kriimpfe,
38,0
38,2
35,0
9 I5
t
t in
Krampfe,
Kriimpfe,
39,6
9>o
wenigen
wenigen
t
t
Kriimpfe,
g«
Minuten
Minuten
t
39,5
38,8
9*°
i
Kriimpfe,
30,2
36,2
10°
1
t
34,2
39,6
10 34
29,0
28,0
Kriimpfe,
11°
t
ipo
t
12°
1
12 s4
i
t
Digitized by
Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Quantitative Untersuchungen fiber Bakterienanaphylaxie. 441
Kontrolltiere.
a
b
c
94°
39,8
40,1
945
38,8
38,0
39,9
10“
36,6
36,6
37,0
11°
33,8
33,8
Krampfe,
12°
31,0
Blutabgang aus dem After,
Bchmerznafte Auftreibung
dee Abdomens, nachmit-
tags 2 Uhr +
30.4
liegt auf der Seite,
nachm. 4 Uhr +
Zuckungen, +
Sensibilisierung von 10 Meerschweinchen mit gekochter Typhus-
emulsion. 1 ccm = 0,118 mg Trockenbakterien.
5. XII. 0,5 ccm
6. XII. 0,5 „
7. XII. 0,5 „
12. XII. 0,5 „
13. XII. 0,5 „
15. XII. 0,5 „
18. XII. 1,0 „
20. XII. 1,0 „
Subkutane Injektion.
Gesamtmenge 5 ccm = 0,590 mg
trockener Bakteriensubstanz.
Reinjektion am 22. I. und 24. I.
22. I.
No. 1
15,4 mg
No. 2
15,4 mg
No. 3
15,4 mg
No. 4
11,6 mg
10°
10 7
10”
10“
ll 7
12°
1°
39,4
38,8
sofort Krampfe,
t
1
39,4
38,2
Kriimpfe
35,0
32,0
liegt auf derSeite
26,0
t
39,4
sofort Krampfe,
t
39,0
sofort Kriimpfe,
+
24. I.
No. 5
7,7 mg
No. 6
7,7 mg
No. 7
7,7 mg
No. 8
7,7 mg
10°
10“
39,5
38,8
39,4
!
10“
10'°
37,4
Tier matt,
Krampfe
38,6
sofort Krampfe
39,4
39,0 !
sofort Kriimpfe
35,9 1
39,6
11°
33,4
35,0
37.S
Husten, Kriimpfe
1180
12°
t
t
t
1
37.0
liegt auf derSeite
t
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442 Paul Th. Miiller,
Kon troll tiere.
22. I.
a
15,4 mg
b
15,4 mg
c
11,5 mg
24. I.
d
7,7 mg
e
7,7 mg
f
7,7 mg
944
39,0
39,0
39,4
10°
39,0
38,6
95°
37,0
37,4
10*
37,2
leichte
10™
37,8
Zuckungen
matt,
10™
34,4
36,8
37,6
10 46
Kriimpfe
38,0
38,7
10 48
33,8
36,0
11°
36,4
37,0
37.8
His
33,0
34,8
34,8
11"
35,0
36,6
37,4
12°
31,0
33,0
33,0
1°
32,0
36,0
33,8
1°
30,4
28,8
31,4
2°
29,0
38,5
31,8
3°
t
t
t
4°
t
krank,
t
bleibt leb.
24. I.
g
8,2 mg
h
10,2 mg
i
12,3 mg
14,3 J mg
k
16,4 mg
94#
39,0
9*
37,8
38,0
10°
Zuckungen
37,0
38,0
39,2
Kr&mpfe
11°
35,0
34,o
36,8
37,6
38,8
12°
30,2
33,6
35,2
.'14,0
sofort Krampfe
1°
t
32,0
34.0
32,2
t
2°
t
29,0
31,8
t
t
Uebersichtstabelle. Vereuche mitTyphusbacillen.
Beinjektions*
Sensibilisierung
Kontrollen
dosifl
mit kleinen Dosen
23,6 mg
No. 1
a
t in 4 1 *
„ 2
b
t in 6“
„ 3
„ 4
sofort t, Krampfe
c
t in l'/ 4 b , Kriimpfe
yy 5
„ 6
„ 7
-
• in 4 h
„ 8
*
in 2“
„ 9
sofort f, Krampfe
16,4 mg
k
sofort f, Krampfe
15,4 mg
No. 1
sofort Krampfe
a
t in 5 h , Zuckungen
„ 2
t in 3\ Krampfe
b
t in 5 h , Zuckungen
14,35 mg
yy 3
sofort f, Krampfe
j
f in 5 h
12,3 mg
i
t in 5 h
11,6 mg
No. 4
sofort Kriimpfe
c
f in 5“
10,2 mg
h
f in 5\ Krampfe
8,2 mg
g
f in 2 1 / i h , Zuckungen
7,7 mg
No. 5
+ in l l /, h , Krampfe
d
f in 6 h , Kriimpfe
„ 6
j in l h , Krampfe
e
lebt. —2,6°
„ 7 !
t in l h , Krampfe
f
t in 5 b
„ 8 |
t in l 8 /4 b , Krampfe
»y Google
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Quantitative Untersuchungen iiber Bakterienanaphvlaxie. 443
VI. Ergebnisse.
Als ein sofort in die Augen springendes Ergebnis dieser
Versuche kann die Tatsache angesehen werden, daB es ge-
lang, mit alien vier verwendeten Bakterienarten
auch bei normalen, unvorbehandelten Tieren
deutliche anaphylaktische Erscheinungen her-
vorzurufen. Diese SuBerten sich bei einem Teil der Meer-
schweinchen in den Symptomen des akuten, sofort zum Tode
fuhrenden Shocks mit Kr&mpfen und typischer Luugenbl&hung,
bei anderen in einem mehr chronischen Vergiftnngsbilde mit
vorubergehenden Krfirapfeanfallen oder nur leichten Zuckungen
und mehr oder minder ausgepragtem Temperatursturz. Unsere
Versuche bringen somit eine vollkommene Bestatigung der
vor kurzem von Friedberger und Mita 1 ) sowie Seitz*)
gemachten Mitteilungen.
Vergleicht man nun die Giftigkeit der verschiedenen
Bakterienarten bzw. ihre Fahigkeit, im normalen tierischen
Organismus Gift abzuspalteu, indem man zusammenstellt, wie-
viel Prozent der Tiere bei einer Dosis von 19—7 mg trockener
Bakteriensubstanz zugrunde gingen, so erhalt man folgende
Zahlen:
Dosis: 19—7 mg.
Diphtheriebacil ien
Milzbrandbacillen
Typhusbacillen
Proteusbacillen
30 Proz.
66 „
co
t
t
t
t
Daraus geht hervor, daB also in dieser Beziehung ziem-
lich betrachtliche Differenzen bestehen, eine Tatsache, die
ttbrigens auch Friedberger und seinen Mitarbeitern bei
ihren Studien tiber Bakterienanaphylaxie begegnet war.
Ein weiteres nicht uninteressantes Ergebnis mag aus der
folgenden Uebersichtstabelle abgelesen werden. In derselben
sind die Versuche in der Weise zusammengefaBt, daB fur jede
Bakterienart zwei Gruppen gebildet wurden, deren eine die
Tiere mit grbBerer, die andere dagegen mit kleinerer Re-
injektionsdosis enthalt. Fiir jede dieser Gruppen findet sich
nun angegeben, wieviel Prozent der Tiere ttberhaupt zugrunde
1) Friedberger, Centralbl. f. Bakt., Ref., 1911, Beiheft; Fried¬
berger und Mita, diese Zeitschr., Bd. 10, Heft 4.
2) Ibid., Bd. 11, 1911.
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Gck igle
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444
Paul Th. Muller
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Uebersichtstabelle I.
Bakterienart
Sensibilisierte Tiere
Kontrolltiere
Reinjektionsdosis
Reinjektionsdosis
Diphtheriebacillen
sofort f
iiberhaupt f
Krampfe
23,6—16,8 mg
28%
71 „
62 „
1
14,4—2,4 mg
0%
25 „
16 „
i
23,6—16,8 mg
30%
60 „
70 „
14,4—2,4 mg
0%
22 „
11 »
Miizbrandbacillen
sofort f
iiberhaupt + 1
Krampfe
Il3,2—6,6 mg
! 66%
I 75 „
66 „
5,9—2,9 mg
41 %
58 „ i
50 „
13,2—6,6 mg
14%
71 „
71 „
5,9—2,9 mg
14%
57 „
28 „
Proteusbacillen
sofort f
iiberhaupt f
Krampfe
18,3—9,0 mg
83%
100 „
83 „
6,1—3,0 mg
20%
100 „
20 „
18,3—9,0 mg
11%
88 „
77 „
6,1—3,0 mg
25 „
Typhusbacillen
sofort f
iiberhaupt f
Krampfe
23,6—15,4 mg
75%
100 „
75 „
14,3-7,7 mg
20%
100 „
100 „
23,6—15,4 mg
17%
100 „
50 „ |
14,3-7,7 mg
0 %
37 „
37 „
gegangen waren, wieviel Prozent im akuten Shock — bis
etwa 5 Minuten nach der Einspritzung — gestorben waren
und wieviel Prozent Kr£mpfe gezeigt hatten. Es ist selbst-
verst&ndlich und braucht wohl nicht besonders hervorgehoben
zu werden, daB derartige Berechnungen bei einem immerhin
doch nicht allzugroBen Versuchsmateriale nur den Wert einer
allgemeinen Orientierung haben konnen, und dafi nur groBe
Differenzen beachtet zu werden verdienen. In einer weiteren
kleinen Tabelle sind tibrigens auch noch die Prozentzahlen
angegeben, welche man erh<, wenn die gesamten Versuchs-
tiere, die mit einer Bakterienart behandelt wurden, in eine
einzige Gruppe zusammengefaBt werden.
Uebersichtstabelle II.
Reinjektionsdosis
Sensibilisierte Tiere
Kontrolltiere
Diphtheriebacillen
23—2,4 mg
M i 1 z bran d bacillen
19,8—2,9 mg
Typhusbacillen
23,6—7,7 mg
Proteusbacillen
13,3—3,0 mg
1
gestorben : 54 °/ 0
; akuter Tod: 18 „
gestorben : 68 „
akuter Tod: 52 „
gestorben: 100 „
akuter Tod: 58 „
gestorben: 100 „
akuter Tod: 54 „
gestorben: 42 %
akuter Tod: 16 „
gestorben : 66 ,,
akuter Tod: 20 „
gestorben : 93 „
akuter Tod: 7 ,.
gestorben : 69 „
akuter Tod: 7 „
Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Quantitative Untersuchungen iiber Bakterienanaphylaxie. 445
Betrachten wir nun die einzelnen Bakterienarten, so ergibt
sich aus dem Vergleich der Ergebnisse der sensibilisierten und
der Kontrolltiere folgendes.
1. Diphtheriebacillen. Wir sehen, dafi bei den ge-
wahlten Reinjektionsdosen, die sich zwischen 23 und 2 mg
trockener Bakteriensubstanz bewegen, kein erheblicher Unter-
schied gegenflber den Kontrolltieren zu verzeichnen war. So-
wohl die Gesamtmortalitat wie die Sterblichkeit im akuten
anaphylaktischen Shock war bei den „sensibilisierten u Tieren
nur unerheblich hQher, so dafi der Grad der Sensibili-
siernng bei ihnen also nur als ein sehr geringer bezeichnet
werden kann.
2. MilzbrandbacillenundTyphusbacillen. Ganz
anders waren dagegen die Versuchsergebnisse bei diesen beiden
Bakterienarten. Ein betrfichtlicher Unterschied zwischen sensi¬
bilisierten und Normaltieren ist hier unverkennbar. Auf-
fallenderweise kommt derselbe aber nur in den
Prozentzahlen des akuten tSdlichen Shocks, nicht
aber in der Gesamtmortalitat zum Ausdruck.
Denn die Zahl der Todesfaile fiberhaupt ist bei beiden Gruppen
von Versuchstieren so ziemlich die gleiche, nur starben von
den sensibilisierten Tieren ganz erheblich viel mehr im akuten
Shock, als von normalen Tieren, so dafi also der Effekt
der Sensibilisierung hier nur in einer a Her dings
sehr wesentlichen Beschleunigung des tbdlichen
Ablaufs der Vergiftung zu bestehen scheint.
3. Proteusbacillen. Auch hier finden wir einen sehr
ausgepragten Unterschied zwischen sensibilisierten und Kon¬
trolltieren. Derselbe erstreckt sich aber diesmal nicht nur auf
die Haufigkeit des todlichen Shocks, sondern auch auf die Ge-
samtsterblichkeit; immerhin ist aber auch hier die Differenz
bei den Prozentzahlen des akuten Shocks relativ viel starker aus-
gepragt als bei denen der Gesamtsterblichkeit, indem dieersteren
(nach Tabelle II) im Durchschnitt etwa 8mal, die letzteren
dagegen nur etwa l,4mal so hoch sind wie bei den Kontroll¬
tieren. Auch hier scheint also der Haupteffekt der
Sensibilisierung in dem beschleunigten Verlauf
der Intoxikation zu bestehen.
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Gck igle
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446
Paul Th. Muller,
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Uebrigens ergibt sich genau das gleiche Resultat auch
aus der Betrachtung der etwas spezialisierteren Tabelle I.
Berechnet man aus der Tabelle die Verhaltniszablen, die
sich durch Division der entsprechenden Prozentwerte bei
den sensibilisierten und normalen Tieren ergeben, so erh<
man folgende kleine Zusammenstellung:
Verhiiltnis:
8en8ibilisierte _.
-. — Tiere
norm ale
Gesamtsterblichkeit
Akuter Tod
Diphtherie: 23—16 mg
1,2
0,93
14-2 „
1,1
Milzbrand: 13—6 „
1,0
4.7
6-3 „
1,0
2.0
Typhus: 23—15 „
1,0
4,4
14-7 „
1,1
>20,0
Proteus: 18—9 „
1.1
7.5
6—3 „
4,0
>20.0
Auch hieraus ist zu entnehraen, daB die Gesamtsterb-
lichkeit bei normalen und sensibilisierten Tieren in unseren
Versuchen fast die gleiche war, weshalb denn die berechneten
Verhaltniszahlen hier alle — mit einer einzigen Ausnahme
— fast genau gleich eins sind. Dagegen sind diese Quotienten
die fur akuten Todesfaile im anaphylaktischen Shock — wenn
man von den Diphtheriebacillen absieht —, durchweg bei
weitem groGer als 1, eiue Tatsache, die noch augenfailiger
demonstriert, daB die Sensibilisierung der Versuchstiere in
unserem Falle hauptsachlich in dem haufigeren Auftreten der
akuten Vergiftungserscheinungen, also in der Beschleunigung
des auch bei den normalen Tieren todlichen Krankheitsver-
laufes zum Ausdruck kam.
Es diirfte nicht allzu schwierig sein, sich diese, wie mir
scheint, nicht uninteressante Tatsache zurechtzulegen und mit
den herrschenden Anschauungen iiber das Wesen der Anaphylaxie
in Einklang zu bringen. Nimmt man namlich an, daB es sich
hierbei am die Steigerung eines schon im normalen Organismus
sich abspielenden Vorganges handelt, der zur Befreiung, Ab-
spaltung bzw. Entstehung eines peptonartig wirkenden Giftes
fiihrt, so wird man erwarten dflrfen, daB diese Steigerung
Gck igle
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Quantitative Untersuchungen iiber Bakterienanaphylaxie. 447
beim sensibilisierten Tier sich unter Umst&nden
weniger darin Sufiern wird, dafi eine grofiere
Giftquan tit&t aus dem gegebenen Materiale —
d. i. einer bestimmten Bakterien- und Serummenge — ent-
steht, als darin, dafi die maximale Giftmenge,
die sich unter den obwaltenden Bedingungen zu
bilden vermag, rascber in Freiheit gesetzt wird.
Es ist einleuchtend, dafi diese raschere Giftproduktion auch
in einem rascheren Verlauf des Vergiftungsprozesses zum
Ausdruck kommen wird, und dafi insbesondere dann, wenn
Giftabspaltung „explosionsartig“ erfolgt, auch ein akut tdd-
licher Shock zustande kommen wird. So wird es also ganz
gut verstandlich, dafi bei einer Reihe unserer Versuchstiere
die Sensibilisierung nur darin zum Ausdruck
kommt, dafi der sonst mehr chronische Verlauf
der Vergiftung in einen akuten momentan zum
Tode fiihrenden umgewandelt wird.
Dafi nebenbei auch die Zahl der Gesamttodesf&lle
— am deutlichsten bei den Versuchen mit Proteusbacillen —
erhoht erscheint, ist als Konsequenz dieses Verhaltens aufzu-
fassen, wenn man bedenkt, dafi der Organismus zweifellos
iiber gewisse Entgiftungsmoglichkeiten verfiigt, die imstande
sind, wenigstens einen Teil des entstehenden Giftes unschad-
lich zu machen. Denn dafi diese Entgiftungsvorgange bei
langsamerem Verlauf derlntoxikationdeutlicher
hervortreten werden und daher eher imstande
sein werden, den tQdlichen Ausgang abzuwenden,
als wenn das Gift plotzlich in grofien Mengen gebildet wird,
wie bei den vorbehandelten Tieren, ist nicht schwer zu ver-
stehen. Den Normaltieren ist eben offenbar mehr Zeit ge-
lassen, ihre Entgiftungsmechanismen in Tatigkeit zu setzen,
als den sensibilisierten Tieren, und dies wird sich denn auch
in ihrer geringeren Gesamtsterblichkeit bei einem Teil unserer
Versuche ausgesprochen haben.
Zusammenfassung.
Bei vergleichenden Versuchen mit Diphtherie-, Milzbrand-,
Proteus- und Typhusbacillen ergab sich, dafi alle 4 Arten auch
bei normalen Tieren Vergiftungserscheinungen vom Charakter
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448
G. Izar und C. Pa tan 6 ,
des anaphylaktischen Shocks zu erzeugen vermochten, wobei
jedoch die Giftwirkungen je nach der Bakterienspecies
verschieden intensiv waren. Bei sensibilisierten Tieren
kam der Haupteffekt der Vorbehandlung darin zum Ausdrock,
daB der sonst mehr chronische, wenn auch zum
Tode fflhrende Verlauf der Vergiftung in einen
akuten, moraentan tddlichen Shock umgewandelt
w u r d e.
Naclidruck verboten.
[Aus dem Institut fiir spezielle Pathologie innerer Krankheiten
der k. Universit&t Catania. Vorstand: Prof. M. Ascoli.]
Znr Kenntnis der toxlschen Wirkung Ton Organextrakten 1 ).
Von Doz. Dr. G. Izar nnd O. Patane.
(Eingegangen bei der Redaktion am 5. Juni 1912.)
Frfihere Untersuchungen 2 3 4 5 ) haben ergeben, daB 2-stflndiges
Erhitzen auf 37° oder 1-stQndiges auf 50° von w&sserigen
Emulsionen methylalkoholischer Organextrakte denselben stark
toxische Eigenschaften verleiht, bzw. ihre prim&re Toxizitfit
erhbht.
In Fortsetzung dieser Untersuchungen und in der Absicht,
die Beziehungen zwischen der Giftigkeit der methylalkoholischen
Extrakte zu jener der w&sserigen zu studieren, haben wir die
Wirkung methylalkoholischer Lungenextrakte geprflft, da die
ktirzlich von Roger 8 ), Dold*), Cesa-Bianchi 6 ) ein-
gehend untersuchten wfisserigen Extrakte dieses Organes ganz
besonders giftig sich erweisen.
1) Mitgeteilt in der Accad. Gioenia di Scienze naturali in Catania;
Sitzungen vom November 1911.
2) G. Izar, Munch, med. Wochenschr., 1911, No. 25; Berl. klin.
Wochenschr., 1911, No. 39. G. Izar und A. Fagiuoli, Diese Zeitechr.,
Bd. 13, 1912, p. 31.
3) Presse m£d., 1911, No. 71.
4) Deutsche med. Wochenschr., 1911, No. 36; Zeitschr. f. Immunitats-
forschung, Bd. 10, p. 53.
5) Pathologica, 1911, No. 59, 61, 62, 65, 69.
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung von Organextrakten. 449
Die Bereitung der metbylalkoholischen Extrakte erfolgte
nach der frQher 1 2 ) benutzten Technik.
WieausVersuchsreihelhervorgeht, erweisen
sich methylalkoholische Lungenextrakte, auch
nach vorausgehender Erw&rmung, vollst&ndig
nngiftig. Sowohl Kaninchen als Tauben vertragen enorme
Mengen, sei es erhitzter als nicht erhitzter Extrakte anstands-
los; sehr hohe Mengen rufen die gleichen Erscheinungen
hervor, welche die mit gleicher Menge mit Kochsalzldsung
gleich verdtinnten Ldsungsmittels (Methylalkohol) injizierten
Kontrolltiere aufweisen. Nicht einmal bei Benutzung auf
V 2 —V 8 —Vs ihres Volumens eingeengter Extrakte sahen wir
toxische Erscheinnngen.
Versuchsreihe I.
7. II. 5 g Taubenlungenpulver mit 25ccm Methylalkohol (Kahlbaum)
24 Stunden bei 50° extrahiert. Filtration nach Erkalten.
1 ccm Methylalkoholextrakt in 4 ccm 0,85-proz. NaCl-Ldsung
emulsioniert. 1 Stunde auf 50° erhitzt
Taube No. 210, 410 g, 1 ccm Emuls. iv.*) keinerlei Symptome
»> » 211, 310,, 2 ,, ,, ,, I, ,,
8. II. Derselbe Extrakt auf die Halfte bei 50° eingeengt und filtriert
Emulsionierung und Erhitzung wie oben.
Taube No. 212, 345 g, 1 ccm Emuls. iv. keinerlei Symptome
„ „ 213, 280 „ 2 „ „ „
» » 214, 260 „ 3 „ ,, ,, ,, „
4. XII. 10 g Kaninchenlungenpulver + 50 ccm Methylalkohol (Kahlbaum).
24 Stunden bei 50°. Filtration nach Erkalten.
5 ccm methylalkoholischer Extrakt + 20 ccm 0,85-proz. NaCl-
Lfisung 1 Stunde auf 50° erhitzt.
Kan. No. 54 A, 900 g, 5 ccm Emuls. iv. keinerlei Symptome
,, ,, 55 A, 870,, 10 ,, ,, ,, „ ,,
5. XII. Derselbe Extrakt a, auf die Halfte bei 50° eingeengt und filtriert
Emulsion und Erhitzung wie oben.
Kan. No. 66 A, 850 g, 5 ccm Emuls. iv. keinerlei Symptome
,, ,, 67 A, 930 ,, 10 ., ,, „ ,, ,,
„ „ 68 A, 1010 „ 15 „ „ „ leichte Krampfe.
6. XII. Derselbe Extrakt auf 1 / t und */& seines Volumens bei 50° eingeengt
und filtriert. Emulsion und Erhitzung wie oben.
Kan. No. 74 A, 1000 g, 10 ccm Emulsion
(Extrakt auf l L eingeengt) iv. keinerlei Symptome
Kan. No. 75 A, 1SJ00 g, 15 ccm Emulsion
(Extrakt auf 1 / 5 eingeengt) iv. keinerlei Symptome
1) Munch, med. Wochenschr., 1910, No. 41.
2) intravenos.
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450
G. Izar und C. Patan6,
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Nach Feststellung dieses verschiedenen Verhaltens prtiften
wir, welche Wirkung das Erhitzen, welches die Emulsionen
der Methylalkoholextrakte anderer Organe erwiesenermaCen J )
so kr&ftig aktiviert, auf die wasserigen Lungenextrakte austibt.
Technik. Die Lungen wurden durch Entbluten getoteten Tieren so-
fort nach dera Tode entnommen; mit 0,85-proz. NaCl-Losung sorgfiiltig
abgespiilt; mit einem Tuche abgewischt, gewogen, mit der Schere fein
zerschnitten und im Morser zerrieben; darauf erfolgte Zusatz von 1—2
Volumina Kochsalzlosung, kriiftiges Schiitteln und sofortiges Kolieren durch
Gaze (mitunter durch befeuchtetes Filtrierpapier) und Zentrifugieren.
Als Versuchstiere benutzten wir an fangs Kaninchen. Spater sahen
wir uns nach billigeren und leichter in groBer Anzahl beschaffbaren Tier-
arten um und wiihlten die Taube und den Sperling, welche sich zu diesen
Untersuchungen sehr gut eignen, sowohl wegen der Leichtigkeit, mit der bei
denselben die venosen Injektionen (in die Fliigelvenen) ausfiihrbar Bind,
als auch wegen der Schnelligkeit, mit welcher die toxisohen Erscheinungen
der Einspritzung der Extrakte folgen. Der Frosch bietet hingegen eine viel
langere Reaktionszeit (das 3—4-fache der tddlichen Minimaldosis totet den
Frosch erst in 20—30—60 Minuten), ein Um stand, w T elcher bei Serien-
versuchen, in welchen jede Serie nach dem Ausfalle der vorausgehenden ein-
zustellen ist, schwer ins Gewicht fiillt, weshalb wir vom Frosche absahen.
WSsserige Lungenextrakte von Tauben und
Spatzen sind fur Tauben und Spatzen stark giftig.
Die Symptome sind fur die Taube den von den Sauge-
tieren gebotenen fihnlich, aber ganz besonders charakteristisch,
sei es weil die Gleichgewichtsstorungen bei diesen zwei-
fiiBigen Tieren deutlicher hervortreten, sei es weil bei der
Zahmheit derselben das Krankkeitsbild vollkommen und un-
getriibt zum Ausdruck kommt.
Multipla der todlichen Minimaldosis toten die Tiere in
wenigen Sekunden mit Erscheinungen allgemeiner Paralyse.
Bei intravenoser Einspritzung der todlichen Minimaldosis ver-
hiilt sich das Tier zunachst einige Sekunden bis 3—5 Minuten
ruhig, wie verbliifft, ohne sich zu bewegen. Darauf wird
es unruhig, dreht den Kopf, zeigt Rollbewegungen. Dieser
kurzen Periode folgt ein paretisches Stadium, in welchem das
Tier taumelt, nach hinten umzufallen neigt, Fltigel und Schwanz
senkt, um sich darauf zu stutzen, zurflckgeht und endlich auf
den Riicken niederfsllt. Es setzt jetzt eine erste Krampf-
1) Izar sowie Izar und Fagiuoli, loc. cit.
Go^ 'gle
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung von Organextrakten. 451
periode mit tonisch-klonischen KrSmpfen der FQfie and Flttgel,
Tachypno6 ein; in einer zweiten Erampfperiode fiberwiegen
die tonischen Erscheinnngen (die FttBe starr ausgestreckt,
Opisthotonus, tonische, mitunter tonisch-klonische Krkmpfe der
Flttgel, oft von Schreien unterbrochene Atmung mit apnoischen
Perioden und Zwerchfellkrampf); 3—4 tiefe Inspirationen mit
offenem Schnabel, mit krampfhaften Bewegungen der Flttgel
und Verlust des Cornealreflexes schlieCen das Bild.
Subletale Dosen lassen die Tiere fttr einige Zeit verblflfft
und tachypnoisch; ttfters treten leichte tonisch-klonische
Krttmpfe auf.
Bei der Sektion findet man Hyperttmie der inneren Organe
und meistens, aber nicht immer, das Blut flttssig (bis 45 Min.
und darttber nach dem Tode).
Das gleiche Bild bietet der Spatz; bei diesem scheuen
Vttgelchen erschwert aber die Reaktion auf ttuttere Reize die
klare Beobachtung der Vergiftungserscheinungen. Die Sym-
ptomatologie entwickelt sich reiner, wenn man den Kttfig
bedeckt und die Tiere im Dunkeln beobachtet.
Beim Frosch sind die Erscheinungen viel bescheidener;
die Injektion von Multipla der todlichen Dosis beantwortet
er erst nach 20—60 Minuten mit allgemeiner Parese und
Dyspnoe; bald darauf tritt eine kurze, mitunter fehlende,
Periode tonisch-klonischer Zuckungen auf, welcher jene der
tonischen KrSmpfe (Streckung der Extremitaten, Opisthotonus,
starke Dyspnoe) folgt; und das Tier geht ein.
Merkwttrdig ist es, was fttr enorme Giftmengen die Lunge
enthalten kann. So gelang es uns z. B. nicht, eine Kaninchen-
oder Taubenlunge durch sukzessive Extraktion mit mehreren
Litem NaCl-L5sung zu erschopfen; der letzte Extrakt zeigte
sich nur etwas schwttcher wirksam (Versuchsreihen II). In
anderen Fallen erweist sich hingegen sogar der erste Extrakt
ungiftig.
Versuchsreihe II.
29.1. 30 g Taubenlungen werden im Morser mit 60 ccm 0,85-proz. NaCl-
Losung zerrieben. Filtration durch Gaze, Zentrifugation = Extr. I.
Der Gazeriickstand wird nacheinander mit 700, 400, 500, 60 ccm
NaCl-Losung kraftig geschiittelt und jeweils sofort wieder auf Graze-
filter gesammelt. Die Aufschwemmung in 400 ccm 12 Stunden im
Zeitschr. f. ImmunitStsforschung. Oriff. Bd. XIV. 31
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452
G. Izar und C. Patan6.
Eisschrank aufbewahrt. Die letzte Kolatur von 60 ccm (Extr. II)
zentrifugiert.
Riickstand von Extrakt II wird weiter mit 50 ccm NaCl-Losung
extrahiert = Extrakt III.
Priifung der Giftigkeit der Extrakte.
Extrakt I:
Taube No. 154, 295 g, 1 ccm Extr. verd. auf l / 8 iv. keinerJei Sympt.
., „ 157, 420 „ 1,4 „ „ „ „ „ leichte Kr&mpfe
yi Tf 155, 295 „ 1,5 ,, «, tt t* f f „ i* 1
„ 156, 400 „ 2,0 „ „ „ „ „ „ t 3'
Letale Dosis *) = Vieoo-
Extrakt II:
Taube No. 181, 215 g, 2 ccm Extr. verd. auf 1 / 4 iv. f V
Letale Dosis = V 48 o*
Extrakt III:
Taube No. 182, 275 g, 2 ccm Extr. verd. auf 1 / A iv. f V
Letale Dosis = V 6N0 .
16.11.9,75 g Kaninchenlungen werden im Morser mit 25 ccm 0,85-proz.
NaCl-Losung extrahiert = Extrakt I.
Riickstand mit 3000 ccm NaCl-Losung wie oben behandelt, im
Eisschrank 12 Stunden mit weiteren 2000 ccm NaCl-Losung auf¬
bewahrt und ferner noch mit 25 ccm NaCl-Losung rasch extrahiert
== Extrakt II.
Priifung der Giftigkeit der Extrakte.
Extrakt I:
Kan. No. 75, 410 g, 1 ccm Extr. verd. auf V, iv. + 1'
„ „ 7(3, 440 „ 1 „ „ „ „ ‘/, „ keinerlei Sympt.
Letale Dosis = V 4I0 .
Extrakt II:
Kaninchen No. 77, 450 g, 1 ccm Extrakt iv.
„ „ 78, 480 „ 3 „ „ „
» » 79, 520 „ 3 „ „ ,,
tt it 540 „ 5 ,, t, tf
Letale Do6is =
keinerlei Sympt
t 5'
leichte Kriimpfe
t 5'
Ferner haben wir geprfift, ob der Giftgehalt der mittels
kiinstlicber Zirkulation mit Kocbsalzlosung gewaschenen Lunge
geringer ist
Dieser Versuch ergab das paradoxe Ergebnis, daB die
Giftigkeit blutleer gewaschener Lungen nicht
nur nicht geringer, sondern im Gegenteil deut-
lich groBer ist als jene des nicht gewaschenen
kontralateralen Organs.
1) Das heifit 1 ccm Extrakt totet ca. 1000 g Taubengewicht.
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung von Organextrakten. 453
Versuchsreihe III.
4. XI. Kan. No. 86, 1300 g.
Sofort nach der Entblutung wird die rechte Lunge mittelst kiinst-
licher Zirkulation durch die Art. pulm. d. mit Kochsalzlosung
gewaschen; die linke Lunge bleibt ungewaschen.
Extrakt aus der rechten, gewaschenen Lunge (4,8 g Lungenbrei + 9,6 ccm
0,85-proz. NaCl-Losung):
Kan. No. 87, 950 g, 1 ccm Extr. verd. auf V* iv. f I'
„ 88,900 „ 1 „ „ „ „ Vs „ t 1'
„ ., 89,920 „ 1 „ „ „ „ V 4 „ leichte Krampfe
„ „ 90,990 „ 1 „ „ „ „ V 8 „ schwere Krampfe, lebt
Letale Dosis = 1 /^ 00 .
Extrakt aus der linken, ungewaschenen Lunge (2,5 g Lungenbrei + 5 ccm
0,85-proz. NaCl-Losung):
Kan. No. 91, 940 g, 1 ccm Extr. verd. auf V* iv. keinerlei Symptome
„ „ 92,900 „ 1 „ „ „ „ V, „ t 1'
,, „ 93,930,, 1,5 „ „ „ „ Vs » leichte Krampfe
Letale Dosis = l / 90Q .
7. XII. Kan. No. 80, 1500 g. Lungen wie die obigen behandelt.
Extrakt aus der linken, gewaschenen Lunge (1,8 g Lungenbrei + 3,6 ccm
0,85-proz. NaCl-Losung):
Kan. No. 1, 860 g, 2 ccm Extrakt iv. f 1'
„ „ 3, 770 „ 1 „ „ „ f 90"
Letale Dosis = 1 / 710 .
Extrakt aus der rechten, ungewaschenen Lunge (2,5 g Lungenbrei + 5 ccm
0,85-proz. NaCl-Losung):
Kan. No. 2, 750 g, 1 ccm Extrakt iv. keinerlei Symptome
,, „ 5, 730 „ 2 „ „ „ t 5'
„ „ 4, 720 „ 1,5 „ „ „ leichte Krampfe
Letale Dosis = 1 / 365 .
7. XII. Kan. No. 46, 1100 g. Lungen wie die obigen behandelt.
Extrakt aus der linken, gewaschenen Lunge (2,92 g Lungenbrei + 5,84 ccm
0,85-proz. NaCl-Losung):
Kan. No. 94, 730 g, 0,3 ccm Extrakt iv. schwere Symptome, lebt
„ ,, 95, *30 „ 0,5 ,, „ „ f 2'
Letale Dosis = Vuso-
Extrakt aus der rechten, ungewaschenen Lunge (3,5 g Lungenbrei + 7 ccm
0,85-proz. NaCl-Losung):
Kan. No. 98, 790 g, 1,0 ccm Extrakt iv. keinerlei Symptome
„ „ 99, 860 „ 1,5 „ „ ,, schwere Kriimpfe, lebt
„ „ 1W, 7SO „ 1.5 „ „ „ f 3'
Letale Dosis = Vsjo*
10. XII. Kan. No. S4, 1400 g. Lungen wie die obigen behandelt.
Extrakt aus der rechten, gewaschenen Lunge:
Kan. No. 9, 1200 g, 0,4 ccm Extrakt iv. f 1'
Letale Dosis < V 30 oo-
31 *
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454
G. Izar und C. Patan6,
Extrakt aus der linken, ungewasehenen Lunge:
Kan. No. 7, 875 g, 2,0 ccm Extrakt iv. f 50"
„ „ 8, 2170 „ 2,0 „ „ „ t 3'
„ „ 6, 860 „ 0,5 „ „ „ leichte Kriimpfe
Letale Dosis < */, og5 .
Dold and Cesa Bianchi fanden, daB Lungenextrakte
fremder Tierspecies weniger giftig sind als arteigene; wie
aus Versuchsreihe IV hervorgeht, ist dieser Unterschied bei
Heranziehung von Extrakten verschiedener Tierklassen noch
viel ausgesprochener.
Versuchsreihe IV.
3. XI. 6,4 g Taubenlungenbrei in 25,6 ccm NaCl-Losung aufgeschwemmt
«
99
(Filtration und Zentrifugation):
Taube No. 14, 330 g, 2,0 ccm Extrakt iv.
16, 290 „ 1,0 „ „ „
17, 240 „ 0,5 „ „ „
15, 370 „
19 11 2' 0,25 ccm Extrakt iv.
19*22'0,8 „ „ „
19* 37' 1 8
Kan. No. 86 A, 1030 g, 5 ccm Extrakt iv.
,, „ 87 A, 730 „ 7 „ ., ,,
99
99
99
V,« t 1'
•/wo t 1' 15"
v» t v
V M go keinerlei Symptome
V«, dgl.
I? 05
“ /aofl
t 3'
keinerlei Symptome
dgl.
8 g Taubenlungenbrei + 15 ccm NaCl-Losung (Filtration und
Zentrifugation):
Taube No. 22, 205 g, 0,5 ccm
Extrakt
“ ‘/no
t 4'
„ » 23, 235 „ 0,3 „
99
99 == / 786
keinerlei Symptome
„ „ 26, 230 „ 0,46 „
99
_ 1 /
99 / 600
leichte Kriimpfe
» v 25, 395 ,, 1,0 „
99
_ 1/
99 -
t 4*
Kan. No. 89 A, 760 „ 5,0 „
99
— V
*> - / 16S
keinerlei Symptome
„ „ 90 A, 530 „ 7,0 „
99
- 1/
99 - /17 R
dgl.
23. XI. 20 g Kaninchenlungenbrei + GO ccm NaCl-Losung (Filtration
und Zentrifugation):
Kan. No. 60, 880 g, 2 ccm Extrakt iv. = 1 / 440 f 1'
Taube No. 1, 300 „ 2 „ ,, „ = l / 1&0 keinerlei Symptome
1. XII. 0,1 g Kaninchenlungenpulver + 10 ccm NaCl-Losung (Filtration
und Zentrifugation):
Kan. No. 83, 935 g, 1 ccm Extrakt iv. = V«.ys t 6'
Taube No. 3, 210 „ 2 „ „ „ «= V 105 keinerlei Symptome
2. XII. 0,1 g Kaninchenlungenpulver + 10 ccm NaCl-Losung (Filtration
und Zentrifugation):
Kan. No. 90, 1955 g, 1,0 ccm Extrakt iv. = l / im + 4 s
Taube No. 12, 325 „ 3,25 „ „ „ = Vioo keinerlei Symptome
7. XII. Kaninchenlungenpulverextrakt (0,1 ccm Kaninchenlungenpulver -f
5 ccm NaCl-Losung) (Filtration und Zentrifugation):
Kan. No. 100, 1055 g, 1,0 ccm Extrakt iv. = l l lO00 t 2'
Frosch No. 1, 20 „ 0.2 „ „ „ = 7 h>o keinerlei Symptome
„ „ 2, 18 „ 0.5 „ „ „ = dgl.
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung von Organextrakten. 455
10. XII. 0,2 g Froschlungen (8 Froschlungen + 2 ccm NaCl-Losung)
(Filtration und Zentrifugation):
Frosch No. 8, 23 g, 17 h 57' 0,5 ccm Extrakt intravends
18 h 40' Paralyse, tonische Krampfe
19 h t
Frosch No. 9, 24 g, 0,2 ccm Extrakt intravends
keinerlei Symptome bis 4 h spater
t gefundeii am nachsten Morgen
Frosch No. 10, 21 g, 0,5 ccm 2-proz. Kaninchenlungenpulverextrakt
keinerlei Symptome
Frosch No. 12, 22 g, 0,5 ccm 5-proz. Taubenlungenpulverextrakt
keinerlei Symptome
Kontrollprobe:
Kan. No. 14, 820 g, 1,0 ccm 2-proz. Kaninchenlungenpulverextrakt
keinerlei Symptome
Kan. No. 15, 950 g, 2,0 ccm 2-proz. Kaninchenlungenpulverextrakt
+ 3'
Taube No. 32, 350 g, 0,1 ccm 5-proz. Taubenlungenpulverextrakt
keinerlei Symptome
Taube No. 33, 370 g, 0,3 ccm 5-proz. Taubenlungenpulverextrakt
t 10'
8. XII. Froschlungenextrakt (0,18 g Lungenbrei + 1 ccm 0,85-proz. NaCl-
Losung) :
Frosch No. 3, 25 g, 0,15 ccm Extrakt intravenos
nach 60' tonische Krampfe
t nach 70'
Frosch No. 4, 20 g, 6,5 ccm Extrakt intravenos
nach 15' tonische Krampfe
f nach 25'
8. XII. Kaninchenlungenpulverextrakt (0,2 g Lungenpulver + 10 ccm
0,85-proz. NaCl-Ldsung):
Kan. No. 6, 850 g, 2,0 ccm Extrakt intravenos f 3'
Frosch No. 8, 20 „ 0,5 „ „ „ keinerlei Symptome
8. XU. Taubenlungenpulverextrakt (0,2 g Lungenpulver +10 ccm 0,85-proz.
NaCl-LOsung):
Taube No. 31, 300 g, 0,3 ccm Extrakt iv. = 1 / I000 f 10'
Frosch „ 6, 25 „ 0,5 „ „ ,, = l L 0 keinerlei Symptome
„ „ 7, 20 „ 0,5 „ 0,85-proz. NaCi-Los.
intravenos keinerlei Symptome
Kan. No. 3 a, 650 „ 3,0 „ Extrakt iv. = 7m dgl.
„ 4 a, 600 „ 6,0 „ „ „ = V l00 dgl.
27. XII. Kaninchenlungenpulverextrakt (3,5 g Lungenpulver + 7 ccm
0,85-proz. NaCl-Losung):
Kan. No. 6 a, 740 g, 1,0 ccm Extrakt intravenos f 1'
Frosch No. 30, 25 „ 0,5 „ „ „ keinerlei Symptome
„ „ 31, 28 „ 0,5 „ „ „ dgl.
„ „ 32, 29 „ 0,5 „ „ intraperit. dgl.
„ „ 33, 29 „ 0,5 „ „ „ dgl.
Bei der Taube ruft sogar das 20—40-fache Multiplum
der (auf das gleiche Gewicht Kaninchen berechneten) letalen
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Menge Kaninchenlungenextrakt keine Symptome hervor; des-
gleichen vertrSgt der Frosch anstandslos 10—20 Multipla der
ftir das gleiche Gewicht Taube Oder Kaninchen tOdlichen
Menge Extrakt von Tauben- Oder Kaninchenlunge (grOBere
Mengen konnten nicht geprfift werden, am das Volumen von
0,5 ccm nicht zu flberschreiten). Was die WiderstandsfShigkeit
des Kaninchens gegentiber w&sserigen Extrakten von Tauben-
lungen anbelangt, vertrug die Mehrzahl der Tiere symptomlos
die venSse Einspritzung von 9—20 tddlichen Mengen; 2 Kanin¬
chen aber verendeten einige Stundcn nach der Einspritzung der
15-fachen letalen Dosis unter Erscheinungen, die den von mit
wSsserigen Kaninchenlungenextrakten behandelten Kaninchen
gebotenen t&uschend ahnlich waren.
Kurzdauernde Autolyse der wSsserigen Ex-
trakte im Wasserbade bei 37° ist mitunter (aber
nicht konstant) imstande, ihre Giftigkeit kr&ftig zu
steigern.
Versuchsreihe V.
16. XII. Taubenlungenextrakt (5 g TaubenlungCDbrei + 10 ccm 0,85-proz.
NaCl-Losung), filtriert und zentrifugiert:
Taube No. 44, 260 g, 2,0 ccm Extr. verd. auf */, iv. + 1'
>i n "15 1 3S0 » b,5 ,, „ „ „ */t » t 2'
„ „ 46, 205 „ 0,5 „ „ „ „ '/. „ keinerlei Symptome
„ „ 47, 295 „ 1,0 „ „ „ „ */ 4 „ dgl.
,, » 43, 405 ,, 2,0 ,, ,, „ „ V, ,, dgl.
Letale Dosis < l /. eo > ‘/ w0 .
Der Extrakt wird im Brutschrank bei 37° autolysiert. Nach 7 Std.
erneute Bestimmung der Giftigkeit:
Taube No. 49, 360 g, 2,0 ccm Extr. verd. auf 1 / i iv.
•> ii 50, 230 ,, 1,3 ,, „ „ ,, „ ,,
r.i 0(iA -i n
yy yy yy Ay'S yy yy yy yy yy yy
R9 9(»^ 0 4
yy yy uu y yy vy y * yy yy n yy yy yy
Letale Dosis < */ 1&B0 .
t 1'
t 1'
keinerlei Symptome
Nach 9 Std. Autolyse:
Taube No. 53, 205 g, 0,25 ccm Extr. verd. auf l / A iv. keinerlei Symptome
yy >♦ 53 300 ,, 0,5 „ „ „ „ yy yy 1* I
1x3tale Dosis < l / 1B40 > l / Ws0 .
18. XII. Taubenlungenextrakt (3 g Taubenlungenbrei
NaCl-Losung):
Taube No. 5*1, 375 g, 1 ccm Extr. verd. auf V 2 iv.
57 ‘U 5 1 i/
yy yy ° 17 A Jy ” » yy '3 yy
yy yy 55, 365 ,, 1 ,, ,, ,, ,, V 4 iy
yy yy 56, 355 ,, 1 ,, ,, ,, „ 1 / fl ,,
Letale Dosis < , / l0M > V 1400 -
+ 6 ccm 0,85-proz.
t V
t V
leichte Kriimpfe
keinerlei Symptome
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung tod Organextrakten. 457
Der Extrakt wird im Brutschrank bei 37® autolysiert. Nach 7 Std.
Autolyse:
Taube No. 61, 300 g, 0,9 ccm Extr. verd. auf */ 4 iv. keinerlei Symptome
„ „ 62,280 „ 0,8 „ „ „ „ V, ,, schwere Krampfe, lebt
Letale Dosis > l / l0ta .
19. XII. TaubenluBgenextrakt (1,27 g Taubenlungenbrei + 5 ccm 0,85-proz.
NaCl-Loeung):
Taube No. 63, 305 g, 1,0 ccm Extr. verd. auf 7, iv.
>> >» 350 „ 1,2 ,, ,, ,, ,, 1 / 3 ,,
„ „ 66,245 „ 0,8 „ „ „ „ */« ..
,, „ 65, 325 „ 1,1 ,, „ „ „ l / e „
Letale Dosis ^ 7s7b ^ Viws*
Der Extrakt wird im Brutechrank bei 37® autolysiert. Nach 7 Std.
Autolyse:
Taube No. 67, 295 g, 1,0 ccm Extr. verd. auf V 4 iv. t 5'
„ „ 69,300 „ 1,0 „ „ „ „ */* „ keine Symptome
i> >j 340,, 1,2 ,, ,, ,, ,, 7# ,, leichte Krampfe
Letale Dosis V, ,go ^ Vitoo*
I. Taubenlungenextrakt (4 g Taubenlungenbrei + 8 ccm 0,85-proz.
NaCl-Losung):
Taube No. 108, 260 g, 1,75 ccm Extr. verd. auf 7* iv. f 1'
t 2'
schwere Krampfe, lebt
keinerlei Symptome
22
104, 310 „ 1,0
109, 335 „ 0,8
106. 295 „ 1,5
99
99
99
» /i
99
99
99
99
„ 7,
99
99
99
99
99 99
*9
99
99
99
99 99
99
99
99
99
99 99
99
t 1'
schwere Krampfe, lebt
dgL
keinerlei Symptom
dgL
105, 310 „ 1,5
107, 310 „ 1,0
Letale Dosis < l / 3l0 > 7 400 .
Der Extrakt wird im Wasserbad teils bei 37°, toils bei 41 0 autolysiert.
Autolyse bei 37°:
2 h Aut. Taube No. 110,330 g, 1,5 ccm\-p ►' , schwere Sympt., lebt L.D. > V 440
4 h „ „ „ 112,275,, 1,3 „ 11 " I leichte Krampfe „ > 7*, 0
7“
7 b
7"
127,315 „ 1,7
128,260 „ 1,7
, „ ,,129,320,, 2,0
Autolyse bei 41°:
keinerlei Symptome
99
99
III I { i* }l.D. >7*7, <‘/»
2 h Aut Taube No. Ill, 310 g, 1,5 ccm)
4 h
7 b
„ 130 a, 340 „ 2,0
7“
99
99
99
/leichte Krampfe L.D. > 1 / 400
t Q '—^Sl* 99 ^ >1 is90
> Z* \ schwere Krampfe, lebt\ L.D. > V 410
Wilt 1' / >VsiO
10 ccm des Extraktes, 7 Std. bei 37 0 autolysiert, werden stark zentri-
fugiert. Bodensatz in 5 ccm Chlornatriumlosung emulsioniert:
Taube No. 123, 325 g, 2,5 ccm AbguU iv. keinerlei Symptome
„ „ 124, 325 „ 0,6 „ Emulsion iv. t 1' Letale Dosis < V 2 -o
Kan. „ 50, 1095,, 4,0 „ „ „ f 10' „ „ <7,35
10 ccm des Extraktes, 7 Std. bei 41 0 autolysiert, werden wie oben
behandelt:
Taube No. 125, 220 g, 2,0 ccm AbgufJ iv. keinerlei Svmptome
„ „ 126, 340 „ 0,7 „ Emulsion iv. f 4' Letale Dosis < 7 240
Kan. „ 51, 1370 „ 4,0 „ „ „ schwere Krampfe, lebt.
Letale Dosis < V 170
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Hervorgehoben zu werden verdient der Umstand, daB
mitderAutolysedieBildungeinesNiederschlages
einhergeht, in welchen, wie durch Zentrifugierung leicht
nachweisbar ist, das Gift quantitativ fibergeht, wfihrend
von der obenstehenden Flfissigkeit auch sehr hohe Mengen
atoxiscb sind.
t 1'
f 25'
t 1'
keinerlei Symptome
dgl.
11. L Taubenlungenextrakt (20 g Taubenlungenbrei + 40 g 0,85-proz.
NaCl-Losung).
Taube No. 80, 330 g, 1 com Extr. verd. auf J /i iv.
f , „ 83, 310 „ 0,8 „ „ „ „ V, „
yy 84, 340 ,, 1 ,, „ jj ,, 1 / 1 ,«
„ 82, 320 „ 1 „ „ „ „ \ ? „
77 77 81, 320 ,, 0,5 „ ,, „ „ Vj 77
Letale Dosis < l / 840 > \/ 640 .
Der Extrakt wird im Wasserbad bei 37° autolysiert.
Zeit der Autolyse:
30', Taube No.85,280g, 0,75ccm Extr. verd. auf 1 / l iv. keinerlei Sympt.
Letale Dosis > l / 970 .
3Std.30', Taube No. 86, 350 g, 0,9 ccm Extr. verd. auf l / l iv. schwere Kr., lebt
Letale Dosis > 1 / 9QQ .
6 „ Taube No. 87, 390 g, 1 ccm Extr. verd. auf 1 / l iv.
„ „ 88, 390 „ 0,6 „ „ „ ,; V,
i7 11 91, 450 ,, 0,4 „ „ „ ,, /j ,,
11 ii 90, 3/0 ,, 0,3 „ ,, ,, „ V, „
„ „ 89, 420 „ 0,2 „ „ „ „ V, ii
Letale Dosis < l / im > Vino-
1 ccm Extrakt, nach 6 Stunden Autolyse, wird stark zentrifugiert.
Bodensatz in 1 ccm 0,85-proz. NaCl-Losung emulsioniert.
Priifung der Giftigkeit der Emulsion und der Abgusse.
Taube No. 98, 270 g, 0,5 ccm Emuls. iv. f 4'
„ „ 99, 200 „ 0,25 „ „ „ schw. Krampf., lebt/ > l / J00 .
„ „ 100, 230 „ 0,6 „ Abgusse „ keinerlei Symptome.
o*
f 2'
t 3'
schwere Kr., lebt
lL.D.<‘/ fiS0
25. I. Taubenlungenextrakt (27 g Taubenlungenbrei + 27 ccm 0,85-proz.
NaCl-L5sung).
Taube No. 136, 290 g, 0,5 ccm Extrakt intravenos f 4"
—
ii ii * ±
„ „ 139, 260 „ 0,35 „
„ „ 138, 290 „ 0,3
,ii __ii j"' , i?YYif ii
ii
ii
ii
137, 280 „ 0,1
Kan. No. 51, 1080 „ 3,0
Letale Doeis < ’/ n0 > l ! wi .
Nach 15' Autolyse im Wasserbad bei 41°:
Taube No. 140, 330 g, 0,35 ccm Extrakt intravenos f 1'
keinerlei Symptome
dgl.
„ 141, 450 „ 0,4 „
„ 142, 320 „ 0,15 „
Letale Dosis < l / nti > */,.
t 1'
keinerlei Symptome
Gck igle
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung von Organextrakten. 459
Nach 4 Std. Autolyse im Wasserbad bei 41°:
Taube No. 143, 450 g, 0,25 ccm Extrakt intravenos t 2'
„ „ 144, 370 „ 0,15 „ „ „ keinerlei Symptome
Kan. No. 52,1340 „ 1,3 „ „ „ dgl.
„ „ 53,1430 „ 2,25 „ „ „ ,,
Letale Dosis < 1 / 1900 > */*«, 5 -
30. I. Taubenlungenextrakt (15 g Taubenlungenbrei + 30 ccm 0,85-proz.
NaCl-Losung).
Sofort:
Taube No. 169,270 g, 1,15 ccm Extr. verd. auf '/. iv. + 1'
„ „ 170,260 ,, 0,9 „ „ „ „ ‘4 „ keinerlei Symptome
Letale Dosis <‘/ 1870 > 7 JSS& .
Nach 15' Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 171, 255 g, 1 ccm Extr. verd. auf 7* iv- keinerlei Symptome
Letale Dosi6 > 1 /', 040 .
Nach 2 Std. Autolyse im Wasserbad bei 37°:
Taube No. 172, 380 g, 1,3 ccm Extr. verd. auf 1 /„ iv. keinerlei Symptome
Letale Dosis > Vtseo*
Nach 2 Std. Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 173, 370 g, 1,3 ccm Extr. verd. auf V*iv. t 2'
„ „ 174, 330 „ 0,6 „ 7' 8 „ f V
„ „ 175, 365 „ 0,3 „ „ „ „ 7a » leichte Krampfe
Letale Dosis < '/ uoo > 7 fl;oo .
Nach 4 Std. Autolyse im Wasserbad bei 37°:
Taube No. 176, 315 g, 1 ccm Extr. verd. auf */ 8 iv. keinerlei Symptome
Letale Dosis > V, 610 -
Nach 4 Std. Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 177, 360 g, 0,15 ccm Extr. verd. auf 7 8 leichte Krampfe
„ „ 178, 330 „ 0,3 „ „ ,. „ 7, „ schwere Kr., lebt
Letale Dosis > V M00 .
6. II, Taubenlungenextrakt (16 g Taubenlungenbrei + 32 ccm 0,85-proz.
NaCl-Losung).
Taube No. 187, 280 g, 1,5 ccm Extr. verd. auf 7, iv. f 30"
„ „ 186, 230 „ 1,0 „ „ „ „ 7, „ schwere Kr., lebt
„ „ 185, 290 „ 1,5 „ „ „ „ 7t » keinerlei Symptome
Letale Dosis < */,„ > 7„ 0 .
Nach 30' Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 188, 230 g, 0,8 ccm Extrakt intravenos keinerlei Symptome
Letale Dosis > 7, 60 *
Nach 1 Std. Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 189, 225 g, 0,75 ccm Extrakt intravenos leichte Krampfe
Letale Dosis > l / l00 .
Nach 2 Std. Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 190. 420 g, 1,4 ccm Extrakt intravenos + 5'
„ „ 191, 315 „ 0,3 „ „ „ f 1'
Letale Dosis > l / l0ia .
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460
G. Izar und C. Patan£,
4
7. II. Taubenlungenextrakt (10 g Taubenlungenbrei
NaCl-Losung).
Taube No. 195, 295 g, 3,0 ccm Extr. verd. auf V 3 iv.
„ „ 19G, 300 „ 2,5 „ „ „ „ V 3 „
„ „ 194, 295 „ 2,0 „ ,, „ „ 1 V „
„ „ 193,340 „ 2,0 „ „ „ „ «/ 4 »
Letale Dosis < 7 aoo > V 460 -
Nach 1 Std. Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 204, 445 g, 1,9 ccra Extr. verd. auf */ 3 iv.
205, 455 „ 0,75 „
i/
Letale Dosis <V TO o > Vmic
Nach 3 Std. Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 206, 305 g, 0,5 ccm Extr. verd. auf V 3 iv.
Letale Dosis >
+ 20 g 0,85-proz.
t 2'
t 30'
leichte Krampfe
keinerlei Symptome
f 50"
keinerlei Symptorae
keinerlei Symptome
Nach 4 Std. Autolyse im Wasserbad bei 53°:
Taube No. 207, 455 g, 1,5 ccm Extr. verd. auf V B iv. leichte Kriimpfe
Letale Dosis > i / 900 .
12. II. Kaninchenlungenextrakt (9 g Kaninchenlungenbrei + 18 ccm 0,85-
proz. NaCl-Losung).
Kan. No. 61, 400 g, 2 ccm Extr. verd. auf 7, iv. + 1'
,, 02, 410 „ 1 „ „ „ „ V, „ t V
„ „ 63, 420 „ 1,5 „ „ „ „ V, „ t 2'
„ „ 60, 400 „ 1 „ „ „ „ 7* „ leichte Symptome
Letale Dosis < l j M0 > 1 / 7(
Nach 120' Autolyse bei 53°:
Kan. No. 67, 540 g, 2 ccm Extr. verd. auf l / 4 iv. keinerlei Symptome
Letale Dosis > Vioso-
Nach 180' Autolyse bei 53°:
Kan. No. 68, 540 g, 2 ccm Extr. verd. auf l / 4 iv. keinerlei Symptorae
Letale Dosis > l / l0uo .
Nach 240' Autolyse bei 53°:
Kan. No. 69, 450 g, 1.7 ccm Extr. verd. auf V 4 iv. + 10'
,, ,, ^0, 440 ,, 1,6 |, ,, ,, ,, / 6 ,, schw ere Kr., lebt
Letale Dosis <z Vio&o 1 /s 257 *
Nach 300' Autolyse bei 53°:
Kan. No. 71, 520 g, 2 ccm Extr. verd. auf 1 / 6 iv. + 2'
„ „ 72, 540 „ 2 „ „ „ „ 1 / fl „ keinerlei Symptome
Letale Dosis < V 1S00 > 7 16?0 -
Nach 360' Autolyse bei 53°:
Kan. No. 73, 430 g, 1,6 ccm Extr. verd. auf V 6 iv. keinerlei Symptome
Letale Dosis > View
11. II. Taubenlungenextrakt (15 g Taubenlungenbrei + 30 ccm 0,85-proz.
NaCl-Losung).
Taube No. 228, 360 g, 1,2 ccm Extr. verd. auf 1 / l iv. f 30"
„ „ 227,400,, 1,4 „ „ „ „ V 2 v keinerlei Symptome
„ „ 226, 390 „ 1,3 „ „ „ „ V s „ dgl.
>> ?> 225, 360 ,, 1,2 ,, ,, ,, ,, 7g tj »
Letale Dosis <d Idqq /s 7 o*
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung von Organextrakten. 461
15' TaubeNo.229,
360g, l,2ccmExtr. verd.auf
1 ,iv
30'
yy
yy
230,
365 „
h2
yy
yy
yy
yy
i
2 yy
iO
yy
231,
375 „
1,2
yy
yy
yy
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JB
yy
yy
232,
370 „
1,2
yy
yy
yy
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40'
yy
yy
233,
390 „
1,3
yy
yy
yy
yy
v„,,
a
jD
yy
yy
234,
400 „
1,4
yy
yy
yy
yy
Vs ,,
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QJ
yy
yy
235,
390 „
1,3
yy
yy
yy
Vs „
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2,
yy
yy
236,
365 .,
1,2
yy
yy
yy
yy
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yy
237,
395 „
1,3
yy
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yy
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238,
400 „
1,4
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90'
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239,
400 „
1,4
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yy
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V
120'
yy
yy
240,
3<0 ,,
1.2
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240'
yy
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241,
390 „
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242,
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yy
243% 390 „
1,3
yy
yy
yy
yy
V, „
keinerlei Svmpt. L.D.
11?" ' Il.d.
keinerlei Svmpt. {
t 10“ * \
t 2' (l.D.
t 2' j
keinerlei Svmpt. J
It n
leichte KrampfeJ^'* 1 ^
dgl. L.D.
„ L.D.
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tj : | LJ3 -
leichte Kriimpfe |
-- > 1 /ooo
^ Vs.io
•' > /noo
^ Vtsoo
-- > />«00
*/l995
V109S
' > /»100
-- > Vnoo
Urn zu entscheiden, ob die Giftigkeitszunahme, besonders
in den Versuchen mit protrahierter Autolyse, nicht mit der
Entwicklung von Keimen in Zusammenhang steht, baben wir
die Extrakte bei 53° autolysiert, bei welcher Temperatur, wie
die Untersuchungen von Bellazzi 1 ) aus unserem Institute
gezeigt haben, die Entwicklung von Keimen praktisch unter-
druckt ist; das Resultat der Versuche blieb unverSndert (vgl.
Versuchsreihe V).
Die von der Autolyse bewirkte Erh6 hung der Giftig-
keit findet nicht allm&hlich, sondern pldtzlich nach von
Fall zu Fall verschiedenem Zeitraume statt: nimmt man Be-
stimmungen der Giftigkeit der Extrakte in kurzen Intervallen
vor, so erscheint auf einmal der Titer z. B. auf die Halfte ge-
sunken, nimmt dann noch fGr kurze Zeit ab, nach welcher er
nunmehr (in den von uns geprtiften Zeitgrenzen) unverSndert
auf dem erreichten Niveau verbleibt.
Weiterhin haben wir untersucht, ob diese erhdhte ToxizitSt
sich auch auf Tiere verschiedener Klassen erstreckt. Dies ist
aber (Versuchsreihe V) nicht der Fall; die (relative) Art-
und Klassenspezifizitkt bleibt, wenigstens inder
Mehrzahl der Ffille, auch bei andauernder Auto¬
lyse bestehen.
In weiteren Versuchen (Versuchsreihe VI) haben wir das
schon fflr die methylalkoholischen Extrakte festgestellte Ver-
halten 2 ) best&tigen kdnnen: die vorherige Einspritzung
konzentrierter Kochsalzldsung verleiht den Ver-
suchstieren gegen die folgende Injektion einer
1) Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd. 57.
2) Izar und Fagiuoli, loc. cit.
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462
G. lzar und C. Patan6,
oder mehrerer letaler Extraktmen gen mehr oder
weniger vollst&ndigen Schutz.
Versuchsreihe VI.
18. XI. 3 g Meersehweinchenlungenbrei + 6 ccra 0,85-proz. Kochsalzlosung.
Filtration, Zentrifugation.
Kan. No. 49, 1550 g. 2 com Extrakt iv. + 4'
Kan. No. 50, 1160 g.
18 b 23—25' 2 ccm ges. NaCl-Losung iv.
18 h 25'30" 1,5 ccm Extr. iv.
Keinerlei Symptome.
Kan. No. 52, 1430 g.
19 h 45—47' 2 ccm ges. NaCl-Losung iv. leichte Kriimpfe.
19 h 48' Tier munter.
19 b 48'25" 2 ccm Extrakt iv.
Keinerlei Symptome.
20. XI. 4,7 g Kaninchenlungenbrei + 45 ccm NaCl-Losung,
Zentrifugation.
Kan. No. 61, 1600 g, 5 ccm Extr. iv. = l / B20
„ ., 62, 1500 „ 7 „ „ „ = Vtu
„ „ 63, 1800 „
20 h 13—15' 2 ccm Misehung iv. 1 )
Filtration und
starke Kriimpfe, wiedererh.
t 25'
20 h 16' 9 „ Extrakt iv. = */ 2Ur
Kan. No. 64, 1600 g.
20 h 5—7' 2 ccm Misehung iv.
20 h 8' 7 „ Extrakt iv. = V llg
Kan. No. 58 A, 1900 g.
20 h 30' 2 ccm Misehung iv.
20 b 34' 13,5 „ Extrakt iv. = l hu
Kan. No. 59 A, 1700 g.
20* 1 58' 2 ccm Misehung iv.
2l b T 16 Extrakt iv.
sehr leichte Kriimpfe
leichte Knimpfe, Tier lebt
leichte Kriimpfe, Tier lebt
keinerlei Symptome
schw. Sympt., erholt sich
keinerlei Symptome
leichte Sympt., erholt sich
= V
/ 10<J
22. XI. 6 g Kaninchenlungenbrei + 17 ccm NaCl-Losung. Filtration und
Zentrifugation.
naeh
i. 67, 1250 g,
, 2 ccm Extrakt iv.
=
i/
' 025
t
20"
66, 1450 „
L6 „
77 77
=
‘ *Oty
t
25'
64, 1750 „
0,7 „
77 77
=
1 i
i 2500
t
30"
65, 1825 „
0,3 „
77 77
—
/ tjOSS
t
2‘
61 b, 1800
g, 1,6 ccm
Misehung
iv
2‘ 0,26 ccm
Extrakt iv.
=
1/
t
2‘
i. 64 b, 1800
g, 2,5 ccm
Misehung
iv
30" 0,26 ccm Extrakt iv.
=
1 f
iQ 913
t
2‘
24. XI. 20 g Kaninchenlungenbrei + 60 ccm NaCl-Losung. Filtration und
Zentrifugation.
Kan. No. 72, 890 g, 0,1 ccm Extrakt iv. = \‘ stm
„ „ 74, 780 „ 0,2 „ „ „ = l / ss00
„ „ 73, 710 „ 1,0 „ Misehung iv.
nach 1' 0,2 ccm Extrakt = 1 / 3050 leichte Kriimpfe, Tier erholt sich
keinerlei Phiinomene
t 3'
1) Gesiittigte NaCl-Losung + 1 Proz. CaCl,.
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung von Organextrakten. 403
In vitro wird die Giftigkeit, sei es autoly-
sierteralsnichtautolysierterExtrakte, wiedurch
Znsatz kleinster Mengen n. 1 / 10 CaCl 2 -LQsung 1 )
neutralisiert; nicht herabgesetzt wird sie hin-
gegen durch Zusatz von oxalsaurem Katrium,
sowie einer Squivalenten Mischung desselben mit
Chlorcalcium; vielleicht finden dieBefnnde von Blaizot 2 )
darin ihre Erkl&rung.
Versuchsreihe VII.
11.1. Taubenlungenextrakt (20 g Lungenbrei + 40 ccra 0,85-proz. NaCl-
Losung).
Taube No. 80, 330 g, 1 ccm Extr. verd. auf 1 / 1 iv. t V
„ „ 82, 320 „ 1 „ „ „ „ 1 / 1 „ keinerlei Symptome
» » 83, 310 „ 0,8 „ „ „ „ V, » t 25'
„ „ 84, 340 „ 1 „ „ „ „ V, „ t 1'
„ „ 93, 250 „ 1,4 „ Mischung von 1 ccm
Extr. + 0,4 ccm n. */, 0 CaC^-Los. 2 h bei 37 0 erh., iv. keinerlei Symptome
Taube No. 92, 270 g, 1,8 ccm Mischung von 1 ccm
Extr. + 0,4 ccm n. Vio’GiCL-Los. + 0,4 ccm
n. Vio Kaliumoxalat 2 a bei 37° gehalten iv. t 1'
11.1. Derselbe Taubenlungenextrakt 6 h bei 37 0 autolysiert.
Taube No. 87, 390 g, 1 ccm Extrakt iv. j 2*
„ „ 88, 390 „ 0,6 „ „ „ t 2'
„ „ 91, 450 „ 0.4 „ ,. „ t 4'
„ „ 90, 370 „ 0,3 „ ,, „ schw. Krampfe, lebt
„ „ 89, 420 „ 0,2 „ „ „ leichte Krampfe
., „ 94, 365 „ 0,7 „ Mischung von 1 ccm
Extr. + 0,4 ccm n. x j l0 CaCl,-Los. sof. inj. iv. leichte Krampfe
Taube No. 95, 270 g, 0,5 ccm obiger Mischung +
0,15 ccm n. l j 10 Kaliumoxalatlosung, nach 30'
Kontakt iv. t 3'
22.1. Taubenlungenextrakt (18 g Lungenbrei + 36 ccm 0,85-proz. NaCl-
Losung).
Taube No. 104, 310 g, 1 ccm Extr. verd. auf 1 / 1 iv. f V
„ ,. 108, 260 „ 1,75 ,. „ „ „ '/, ,, f 1'
„ „ 105, 310 „ 1,5 „ „ „ „ „ „ f 5'
„ „ 107, 310,, 1 „ „ „ „ „ „ keinerlei Symptome
,, „ 115, 265 „ 1,8 „ Mischung von 1 ccm
Extr. + 0,8 ccm n. 1 / l0 CaCl^-Los. (5' Kontakt) iv. keinerlei Symptome
Taube No. 116, 255 g, 1,8 ccm Mischung wie oben
bereitet (sofort nach Bereitung) iv. keinerlei Symptome
Taube No. 117, 190 g, 1,6 ccm Mischung von 1 ccm
Extr. + 0,6 ccm n. 7 10 CaCl^-Los. (5' Kontakt) iv. leichte Kriimpfe
1) Im Gange befindliche Untersuchungen mit verschiedenen Ca-, Ba-,
Str.-Salzen weisen darauf hin, daB die neutralisierende AVirkung den
Kationen zukommt.
2) C. r. Soc. de Biol., T. 71, 1911, p. 34.
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464
G. lzar und C. Patan6,
Taube No. 114, 290 g 1,4 ecm Mischung von 1 ccm
Extr. + 0,4 ccm n. V l0 CaC4-Los. (5' Kontakt) iv.
Taube No. 118, 300 g, 2,6 ccm Mischung von 1 ccm
Extr. + 0,8 ccm n. Vio CaGI^-Los. 4- (nach lO'
Kontakt) 0,8 ccm n. V,o Kahumoxalat iv.
Taube No. 119, 290 g, 2,6 ccm Mischung von 1 ccm
Extr. + 0,8 ccm n. 1 / 10 Kaliumoxalat + (nach 10'
Kontakt) 0,8 ccm n. Vio CaC4-Lbsung iv.
Taube No. 120, 290 g, 2,6 ccm Misch. von 0,8 ccm
n. V 10 CaC4-Los. + 0,8 ccm n. l /io Kalium¬
oxalat + (nach 10' Kontakt) 1 ccm Extr. iv.
t 30"
schw. Kriimpfe, lebt
t V
t r
7. II. Taubenlungenextrakt l h bei 53° autolysiert
■ Taube No. 204. 445 g, 1,9 ccm Extr. verd. auf
% iv * = 0»43/i«o t 5"
Taube No. 205, 455 g, 0,75 ccm Extr. verd. auf
l L iv. = 0,17/ I0(L keinerlei Symptome
Taube No. 208, 310 g, 1,5 ccm Extrakt verd. auf
1 / 3 mit n. , / l0 CaC4“Lb sun g Paralyse, lebt
11. II. Taubenlungenextrakt 40 i bei 53° autolysiert.
Taube No. 233, 390 g, 1,3 ccm Extr. verd. auf V 4 iv.
234 4()0 1 4 i/
V ,, ,, „ „ „ ,,
,, ,, 255, 390 „ 1,3 ,, „ „ „ 1 / <: . „
°3() 363 19 i/
*t V )> ff ft I s
,, „ 245. 270 „ 1,1 „ Mischung von 1 ccm
Extrakt -f- 3 ccm n. l j l0 CaCL-Losung iv.
Taube No. 244, 290 g, 1,1 ccm Mischung von
1 ccm Extr. -f 2 ccm n. Vio CaC4-Eosung +
1 ccm 0,85-proz. NaCl-Losung iv.
Taube No. 246, 270 g, 1,1 ccm Mischung von 1 ccm
Extrakt + 0,5 ccm n. Vio CaC4-Los. + 2,5 ccm
0,85-proz. NaCl-Losung iv.
t 10"
t 2'
+ 2 '
keinerlei Symptome
keinerlei Symptome
keinerlei Symptome
t 50"
10. II. 30 g Taubenlungenbrei 4- 30 ccm 0,85-proz. NaCl-Losung. Filtration
durch Gaze, Zentrifugation.
Taube No. 215, 305 g, 1 ccm Extr. verd. auf 1 f A iv. t P
„ „ 217, 300 „ 1 „ „ „ „ V 5 „ f 2'
„ „ 216, 300 „ 1 „ „ „ „ V* „ keinerlei Symptome
In 4 Reagenzgliisern werden mit je 0,5 ccm Taubenlungenextrakt ver-
schiedene Mengen n. Vio CaC4-Lo9ung versetzt uud mit 0,85-proz. NaCl-
Losung auf 2 ccm aufgefiillt. Sofort nach der Bereitung werden die Ge-
mische verschiedener Tauben iv. injiziert.
6
Tauben¬
lungen¬
extrakt
ccm
SkcC
! Losung
ccm
0,85-proz.
NaCl-
Losung
ccm
• , 0) |
.£ its
I ft) wr
“c^ i.a 60
'O G.H ' c
6 £ s
X “ p
Eingespritzte
Fliissigkeits-
volumen
ccm
Ausgang
i
0,5
1,5
i
218 ! 210
j l
keinerlei Sympt.
ii
0.5
1
0.5
219 1320
! 1.4
dgl.
hi
0,5
0,5
1,0
220 ! 320 !
1,4
IV
0,5
0,1
1,4
221 I 330
1,5
f 5'
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Zur Kenntnis der toxischen Wirkung von Organextr&kten. 465
Wie wir schon fflr die methylalkoholischen Extrakte nach-
gewiesen haben and flbrigens schon Cesa-Bianchi 1 2 ) kurz
bemerkt hat, bewirkt die Einspritzung wfisseriger
Lungenextrakte starke Abnahme des Komple-
mentgehaltes des Blutserums (Versuchsreihe VIII).
VersuchBreihe VIII.
6
£
S
■s
a
A Behandlung
s =|s
Jill
5 aj o2h
S o. > u
0 P 0_22
Hamolyse mit Komplementmengen
in 2,5 ccm Volumen 9 )
Kesultat
0
0
O
£ 5 o-o
sm'-s-o
s 5.11
eg +3 M
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
61
i
1600 5 ccm Kan.-Lungenextrakt iv.
(Versuch 20. XI.)
vor
++”)
+ ++ 3 * )
+ + +
d-d-d-
d-d-d-
IschwereSympt,
j erholt sich
nach
± 3 )
d- 3 )
+
+ +
62
1
1500 7 ccm Kan.-Lungenextrakt iv.
: (Versuch 20. XI.)
vor
nach
++
+++
±
+ + +
d-
d-d-d-
d-d-
d-d-d-
+ +
}t 25'
G4a
17500,7 ccm Kan.-Lungenextrakt
j iv. (Versuch 22. XL)
vor
nach
+ + +
±
++ +
+
+ + +
+
d-d-d-
d-d-
d- d- d-
d-d-
J f 30“
65
1825 0,3 ccm Kan.-Lungenextrakt
1 j iv. (Versuch 22. XL)
vor
++
++ +
+ + + d-d-d-
d-d-d-
}t 2'
nach 1
i
±
+
d-d-
d-d-d-
d-d-d-
66
14501,6 ccm Kan.-Lungenextrakt
j iv. (Versuch 22. XI.)
1
vor
+
+ +
d-d-
d-d-d-
d- d- d-
:J 1 25 “
i
nach
db
±
±
±
d-
67
1250 2 ccm Kan.-Lungenextrakt iv.
(Versuch 22. XL)
j vor
+ + +
+ + +
d-d-d- d-d-d-
+ + + l 4. ono
nach
±
1 ±
±
±
±
Zusammenfassung.
Metbylalkoholische Lungenextrakte erweisen sich, auch
nach vorausgehender Erwfirmung, ungiftig.
Blutleer gewaschene Lungen ergeben giftigere Extrakte
als nicht gewaschene.
Kurzdauernde Autolyse bei 37° und bei 53° bewirkt un-
konstant in deutlicher und kritischer Weise Zunahme der
Giftigkeit der Extrakte; das Gift geht bei der Autolyse voll-
standig in den sich bildenden Niederschlag fiber.
1) Pathologies, L c.
2) 1 ccm 5-proz. Blutkorperchenaufschwemmung + 0,2 ccm l / 3 o verd.
Kaninchen-Rinderambozeptor (= 50 Ambozeptoreinheiten) + 0,85 -proz.
NaCl-Losung bis 2,5 ccm.
3) ± = Kuppe; + = geringe Hiimolyse; ++ = fast komplctte
Hiimolyse; + + + = komplctte Hiimolyse.
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466 Hanna Hirschfeld und Ludwig Hirschfeld,
Durch vorherige Einspritzung konzentrierter Kochsalz-
ldsung werden die Versuchstiere gegen die folgende Injektion
einer oder mehrerer tddlicber Men gen Extrakt mehr oder
weniger vollst&ndig geschfltzt; in vitro wird die Giftigkeit der
Extrakte dnrch Zusatz kleinster Mengen n. Vio CaCl*, nicht
aber durch Zusatz von oxalsaurem Na oder einer Squivalenten
Mischung desselben mit Chlorcalcium aufgehoben.
Nachdruck verbottn .
[Aus der Kinderklinik (Direktor: Prof. F e e r) und dem Hygiene-
institut (Direktor: Prof. Silberschmidt) der Universit&t Zurich.]
Ueber vasokonstringierende Snbstanzen im ana¬
phylaktischen Shock nnd bei der Anaphylatoxinvergjftung.
Von
Dr. Hanna Hirschfeld und Dr. Ludwig Hirschfeld,
Assistenten.
Mit 27 Kurven im Text.
(Eingegangen bei der Redaktion am 10. Juni 1912.)
Durch Biedl und Kraus ist die periphere Genese der
Blutdrucksenkung bei anaphylaktischen Hunden sichergestellt
worden. Bei Meerschweinchen ist das Krankheitsbild des akuten
anaphylaktischen Shocks viel komplizierter. Der Bronchial-
krampf ist nach Auer und Lewis 1 ), Biedl und Kraus 2 )
sicher peripheren Ursprungs. Dafiir sprechen auch die Versuche
von Schflrer und Strasmann 3 ), sowie L6wit 4 ) mit ent-
hirnten Meerschweinchen. Ueber die Beeinflussung des sympa-
thischen Systems beim anaphylaktischen Shock der Meerschwein¬
chen sind dagegen die Ansichten noch nicht geklart. Es tritt
zuerst ein Blutdruckaufstieg ein, dem eine Blutdrucksenkung
folgt [Auer und Lewis, Friedberger und Grbber,
1) Journ. of exper. Med. Assoc., 1910, Vol. 2.
2) Handbuch der Technik der Immunitatsforschung von Kraus und
Levaditi, sowie zahlreiche Arbeiten in Zeitschr. f. lmmunitiitsf.
3) Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 12.
4) Arch. f. exper. Pathol, u. Pharmakol., Bd. 68, 1912.
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Yasokonstringierende Substanzen im anaphylaktischen Shock. 467
Friedberger und Hartoch 1 )]. Biedl und Kraus 2 ), so-
wie Braun nehmen an, daB der Blutabfall keine prim Sre fiir
die Ueberempfindlichkeit der Meerschweinchen charakteristische
Erscheinung ist, sondern lediglich das Zeichen des eingetretenen
Todes. Die prim&re Blutdrucksteigerung war man geneigt, als
eine asphyktische aufzufassen (Auer und Lewis, Fried¬
berger). Wie Lb wit jedoch zeigen konnte, beginnt der
Druckanstieg zu einer Zeit, wo deutliche Zeichen einer
Ventilationsverringerung und einer beginnenden Dyspnoe
noch nicht bestehen. Bei enthirnten Meerschweinchen ver-
miBte L 6 w i t die Blutdrucksteigerung. Durch Adrenalin-
injektion konnte der gefallene Blutdruck wieder in die Hdhe
gebracht werden, so daB L6wit geneigt ist, aufier dem peri-
pheren auch einen zentralen Angriffspunkt anzunehmen.
Wir sehen demnach, daB das anaphylaktische Gift beim
Meerschweinchen mehrere Angriffspunkte hat, und daB gerade
die Beeinflussung des Vasomotorenapparates, welcher vor
allem beim langsamen Tode der Meerschweinchen im Vorder-
grunde der Erscheinungen steht, einer nSheren Untersuchung
noch bedarf. L. Hirschfeld und Modrakowski 3 ) ver-
suchten die bei der Ueberempfindlichkeit wirkenden Gifte mit
pharmakologisch mehr einheitlichen Systemen zu untersuchen,
und zwar wahlten sie zur Priifung die iiberlebenden Frosch-
gefaBe, wie sie fiir die Wertbestimmung des Adrenalins von
Lowen 4 ) zuerst angegeben und dann von Trendelen¬
burg 5 ) ausgebildet und allgemein eingefiihrt wurden.
Hirschfeld und Modrakowski haben mit Erythro-
cyten gearbeitet und konnten feststellen, daB nicht bloB
der spezifische Abbau der roten Blutkbrperchen vasokon-
striktorisch wirksame Substanzen liefert, sondern auch die
Produkte der mechanischen Zerstbrung (durch destilliertes
Wasser). Diese Versuche konnten demnach fiir das Problem
der Anaphylaxie, bei welcher das Gift als Produkt von auf-
einander spezifisch eingestellten Substanzen entsteht, nicht
1) Zeitschr. £. Iramunitiitsf., 1911.
2) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 11.
3) Miinch. med. Wochenschr., 1911.
4) Arch. f. exper. Pathol, u. Pharmakol., 1902.
5) Arch. f. exper. Pathol, u. Pharmakol., 1910.
Zeitschr. f. Immunitatsforschung. Orig. Bd. XIV. 32
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468 Hanna Hirschfeld und Ludwig Hirschfeld,
verwertet werden, sie bildeten lediglich eine Bestatigung der
von O’Connor 1 ) zuerst begrflndeten Ansicht flber die Sub-
stanzen, die geeignet sind, auf FroschgefSBe kon stringier end
zu wirken. O’Connor fand n&mlich, daB die Wirkung des
Serums auf Froschgef&fie nicht auf dessen Adrenalingehalt
beruht, sondern auf Substanzen, die erst bei der Gerinnung
entstehen, und es scheint ihm bereits der Nachweis gelungen
zu sein, daft die Zerfallsprodukte der Blutbl&ttchen, welche
bei der Gerinnung eine Rolle spielen, ebenfalls vaso-
konstringierend wirken. Das Plasma wies im Gegensatz zum
Serum, welches bei der Basedowschen Krankheit eine
starke vasokonstringierende Wirkung ausiibt, in keinem der
von O’Connor untersuchten F&lle einen erhobten Gehalt
an vasokonstringierenden Substanzen auf, so daB O’Connor
die Forderung aufgestellt hat, neben dem Serum das Plasma
auf diese Substanzen zu untersuchen.
Die Untersuchungen (iber die Wirksamkeit der Zerfalls¬
produkte anderer Zellen (die dazu benutzten Organe muBten
selbstverstfindlich blutfrei gemacht werden), liegen in aus-
reichendera MaBe nicht vor. Man kann daher den jetzigen
Stand der Frage so prazisieren, daB, abgesehen von Adrenalin,
Substanzen, die bei der Gerinnung auftreten, Zerfallsprodukte
der Blutblfittchen und roter Blutkorperchen, manche EiweiB-
abbauprodukte, wie z. B. Pepton 2 3 ). sowie nach Sammelson 8 )
manche Alkaloide und gallensaure Salze auf Froschgef&Be vaso-
konstringierend wirken. Fiir die Art der Wirksamkeit kommt
sowohl die Dauer wie die Konzentration der betreffenden
Substanz in Betracht 4 ) (Ogawa). Aus der Art der Wirkung
einer bestimmten Substanz auf iiberlebende FroschgefBBe
(vasokonstringierend oder dilatierend) lassen sich auch keine
SchluBfolgerungen auf die Art der Wirksamkeit im Korper
der SBugetiere schlieBen. So wirkt z. B. Pepton auf Frosch-
1) Munch, med. Wochenschr., 1911; Arch. f. exper. Pathol, u.
Pharmakol.. Bd. G7, 1912.
2) Weichardt und Schittenhelm (Miinch. med. Wochenschr.,
1912) stellcn bereits systematische Untersuchungen iiber die Wirkung der
Eiweifiabbauprodukte auf herausgeschnittenen Uterus und iihnliche Objekte
in Aussicht.
3) Arch. f. exper. Pathol, u. Pharmakol., Bd. G6, 1911.
4) 1. c.
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Vasokonstringierende Substanzen im anaphylaktischen Shock. 469
gefSBe vasokonstringierend (Hirschfeld und Modra*
kowski), bei Hunden dagegen bewirkt es bekanntlich eine
Vasodilatation. Wir verweisen auf die unl&ngst erschienene
Arbeit von Ogawa 1 ), der vergleichende Untersuchnngen bei
verschiedenen Gef&Ben verschiedener Herkunft anstellte und
fand, daB gerade die von ihm nachgewiesene Wirkung des
Adrenalins auf die Gefafierweiterer im Froschpr¶t mehr
in den Hintergrund tritt. Wenn wir daher finden, daB eine
bestimmte Substanz bei dem Frosch Vasokonstriktion bewirkt,
so kbnnen wir daraus nur schlieBen, dafi diese
Substanz Beziehungen zu den sym pa th i sche n
Endigungen bz w. zu der Gefafimuskulatur be-
sitzt, nicht aber, daB sie im KOrper des S&uge-
tieres unbedingt dieselbe konstringierende
Wirkung entfaltet.
Die Methode schien uns zur Untersuchung der Beziehungen
der Anaphylaxie zum Vasomotorensystem geeignet zu sein, denn
obgleich das Krankheitsbild des akuten Shocks bei Meerschwein-
chen durch Bronchialkrampf beherrscht wird, also eine vago-
tonische Erscheinung darstellt, so deutet doch die Erhdhung und
nachtragliche Herabsetzung des Blutdruckes,der nach Pfeiffer
damit in Zusammenhang stehende Temperatursturz, sowie einige
klinische Erscheinungen mancher als Anaphylaxie aufgefafiten
Zustande (Urticaria und Oedeme bei Serumkrankheit etc.)
darauf hin, daB Beziehungen zum Vasomotorensysteme
existieren, die aber gerade beim Meerschweinchen im Shock
mehr in den Hintergrund gedrangt werden. Unsere Unter-
suchungen erstrecken sich in erster Linie auf Meerschwein¬
chen, bei welchem die aktive Ueberempfindlichkeit mit
Leichtigkeit sich mit der tiblichen Methodik hervorrufen laBt.
In zweiter Linie wurden die passiv anaphylaktisch gemachten,
sowie die durch Anaphylatoxineinfuhrung getoteten Meer¬
schweinchen untersucht, ebenso einige F&lle von Anaphylaxie
bei Kaninchen und Serumkrankheit bei Kindern. Die Vor-
behandlung der Meerschweinchen (2—300 g) geschah in s5mt-
lichen Fallen durch subkutane Einffihrung von V20 Hammel-
serum. Die den Shock auslosende Serumeinfiihrung (0,2 ccm)
geschah in die Jugularis. Die im Shock gestorbenen Meer-
1 ) Arch. f. exper. Pathol, u. Pharmakol., 1912.
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470 Hanna Hirschfeld und Ludwig Hirschfeld,
schweinchen wurden sofort aufgespannt und aus dem rechten
Ventrikel durch Punktion mit einer sterilen Glaskapillare das
Blut entnommen, teils aus Serum, teils mit Natriumoxalat
bzw. Hirudin vermischt als Plasma gewonnen. Die Kontroll-
tiere wurden durch Nackenschlag getotet, das Blut ebenfalls
aus dem rechten Ventrikel gewonnen. Es l&Bt sich bei den
im Shock gestorbenen Meerschweinchen auBerordentlich wenig
Blut gewinnen, da das meiste Blutquantum im Splanchnicus-
gebiet zurtickbleibt Es wurde scharf darauf geachtet, daB
sowohl das Serum wie Plasma nicht h&moglobinhaltig war,
und daB das Plasma vollkommen ungeronnen war.
Die Sera, so wie Plasmen wurden am Vormittag gewonnen
und einige Stunden spater verarbeitet. Die im akuten Shock
gestorbenen Meerschweinchen boten das gewShnliche Bild der
Lungenblahung und schlagendes Herz. Einige Ffille, die nach
eingetretenem Temperatursturz getotet wurden, sind in den
Protokollen vermerkt.
Methodik der GeffiBdurchleitung.
Wir benutzten aus Ungarn bezogene, extragroBe Ranae esculentae,
die wir nach Angaben von Lowen und Trendelenburg praparierten.
Nach Zerstorung von Him und Riiekenmark wurde die vordere Bauch-
wand des Frosches mit der Vena pulmonalis nach unten geklappt und
eine Kaniile in die Vene eingefuhrt. Die GefiiBverbindungen zur Blase
wurden unterbunden, um Rectum, sowie um die beiden Nierenureteren,
wurden Massenligaturen gelegt, dann siimtliche Eingeweide entfernt und
eine Kaniile in die Aorta unmittelbar fiber die Teilungsstelle in die Arteria
iliacae eingefiihrt. Die Kaniile wurde vermittels eines Gummischlauches
mit einem GefiiB mit Ringerscher Losung verbunden. Durch Regelung
des Druckes w T urde die AusfluBgeschwindigkeit bei den meisten Versuchen
auf ca. 30—50 Tropfen gehalten. Die zu untersuchende Fliissigkeit wird
mittels einer Pravazschen Spritze in ein seitlich eingebrachtes T-Rohr
eingefuhrt. Die Beeinflussung der Tropfenzahl hiingt ceteris paribus
von der Empfindlichkeit des Froschpraparates, sowie von der zu unter-
suchenden Substanz ab und sie variiert daher von der Entfemung der
Pravazschen Spritze, von der Breite der zufiihrenden Rohre etc. Es
ist daher unstatthaft, Werte, die von verschiedenen Untersuchem ge¬
wonnen werden, direkt miteinander zu vergleicheu. Man mufi bei
jedem einzelnen Froschpriiparat das zu untersuchende Serum bzw.
Plasma mit einem normalen vergleichen. Die Empfindlichkeit des Pra-
parates steigt in den ersten 1V 2 —2 Stunden, um dann ungefiihr konstant
zu bleiben. Man pflegt daher mit der Benutzung des Praparates zu
warten und spiilt den Frosch mindestens l l / 3 Stunden mit Ringer-
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Vasokonstringierende Substanzen im anaphylaktischen Shock. 471
Lo^ung durch. Xach unseren Beobachtungen liiBt sich oft auch dann eine
Erhohung der Empfindlichkeit konstatieren, die am meisten ausgesprochen
ist, wenn man ein stark wirksames Serum oder Plasma eingefiihrt hat. Wir
haben daher in den meisten Versuchen auch am SchluB dieselben Kontroll-
fliissigkeiten durchgeleitet. Es ist auch notwendig, nach jeder einzelnen
Durchleitung einige Zeit zu warten, da die GefiiBe sich in der ersten Zeit
in einem reizbareren Zustande befinden. Wir haben in der Regel zwischen
den einzelnen Versuchen mindestens l / 2 Stunde gewartet. Trendelen¬
burg gibt an, daB man auch nach 24 Stunden und mehr die Frosch-
priiparate benutzen kann. Bei uns waren jedoch die Frosche meistens
nicht lunger als 1 Tag zu gebrauchen, da am niichsten Tag die Tropfenzahl
pro Minute auch nur bei JRinger-Durchspulung ziemlichen Schwankungen
unterworfen war. Das zu untersuchende Serum bzw. Plasma wurde in
den in den Protokollen angegebenen Konzentrationen in der Menge von
1 ccm eingefiihrt; die Bezeichnungen unterhalb der Kurven sind mit
Zahlen versehen, welche die Reihenfolge angeben, in welcher wir die
Fliissigkeiten eingefiihrt haben. Zuerst wurde meistens das Plasma, dann
das Serum untersucht. Die mit den gleichen Zahlen bezeichneten Kurven
(1 und la etc.) wurden am gleichen Frosehpriiparat gewonnen.
Versuche mit der aktiven Anaphylaxie.
(Kurven 1—9.)
Wir haben insgesamt 11 Falle von aktiver Uebereropfind-
lichkeit bei Meerschweinchen untersucht. Die genauen Angaben
finden sich in der entsprechenden Kurve. Bei geringen
Tropfenzahlunterschieden ist es oft schwer, eine norraale
Variationsbreite in der Wirksamkeit auszuschlieBen. Fiir die
Beurteilung der vasokonstringierenden Wirkung ist nicht bloB
die Tropfenzahl, sondern auch die Nachhaltigkeit zu beriick-
sichtigen. Wenn wir Differenzen von 6 Tropfen pro Minute
gegeniiber den Kontrollen als noch zweifelhaft, 8 Tropfen als
bereits positiv bezeichnen, so mbchten wir unter gleichzeitiger
Beriicksichtigung der Gestalt der Kurve unsere Versuche
folgendermaBen kurz zusammenfassen.
Plasma Serum
Meerschweinchen I
positiv
positiv
V
li
positiv
positiv
yj
ill
nicht untersucht
zweifelhaft
M
IV
zweifelhaft
positiv
V
positiv
negativ
VI
positiv
negativ
VII
positiv
nicht untersucht
jj
vra
zweifelhaft
zweifelhaft
IX
positiv
nicht untersucht
jy
X
negativ
zweifelhaft
yy
XI
positiv
negativ
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472
Hanna Hirschfeld und Ludwig Hirschfeld,
Das Plasma hat sich demnach insgesamt in 7 von 10
untersuchten Plasmen als positiv erwiesen, das Serum dagegen
nur in 3 Fallen. Beim Meerschweinchen IV war das Serum
positiv bei zweifelhaftem Plasma, beim Meerschweinchen VIII
Kurve 1. Kurve la.
Kurve 1. 3. I. 12. 1) — Normales Meerschweinchen-Oxalatplasma
(1 :5). 2) — Oxalatplasma 1:5 des im anaphylaktischen Shock gestorbenen
Meerschweinchens No. 1.
Kurve la. 3. I. 12. 1) — Normales Meerschweinchenserum (1:5),
zuerst untersucht. 2) — Serum des im anaphylaktischen Shock gestorbenen
Meerschweinchens No. 1 (1:5), Sensibilisierung am 10. XII. 3)-Serum
eines normalen Meerschweinchens (untersucht nach deni anaphylaktischen
Serum).
Kurve 2. Kurve 2 a.
Kurve 2. 6. I. 12. 1) - Normales Meerschweinchen-Oxalatplasma
1 :3 (0,5 ecmb 2) — Oxalatplasma 1 : 5 (0,5 ccm) des im anaphylaktischen
Shock gestorbenen Meerschweinchens No. 2 (vorbehandelt am 10. XII. 11).
Kurve 2 a. 6. I. 12. 1) - Normales Meerschweinchenserum 1:10.
2) — Serum 1:10 des im anaphylaktischen Shock gestorbenen Meer¬
schweinchens No. 2.
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Vasokonstringierende Substanzen im anaphylaktischen Shock. 473
und X war die Wirkung des Serums und des Plasmas zweifel-
haft bis negativ. Bei Meerschweinchen I und II war sowohl
das Serum wie das Plasma positiv, in 3 Fallen (Meerschwein¬
chen V, VI und XI) war das Plasma positiv, wShrend das
Serum keinerlei Wirkung entfaltete. Wir finden in diesen
Kurve B. Kurve 3 a.
Kurve 3. 23. I. 12. 1) — Normales Meerschweinchenplasma 1:3.
2 ) — Oxalatplasma 1:3 des Meerschweinchens No. 4.
Kurve 3 a. 23. I. 12. 1) — Normales Meerschweinchenserum 1:5.
2) — Serum 1:5 des am 8. I. sensibilisierten Meerschweinchens No. 3
(Meerechweinchen paretisch, ohne Krampfe, erholt sich, */ 4 Stunde spater
§ etotet durch Nackenschlag). 3) .Normales Serum 1:5. 4) — Serum
es am 8. I. sensibilisierten Meerschweinchens No. 4, welches in Aether-
narkose im anaphylaktischen Shock starb; keine Krampfe, Lungenbefund
typisch.
Kurve 4. Kurve 4 a.
Kurve 4. 31. I. 12. 1) — Normales Meerschweinchen-Oxalatplasma
1:4. 2) —- Oxalatplasma 1:4 des im anaphylaktischen Shock gestorbenen
Meerschweinchens No. 5. 3) * Plasma ernes normalen Kaninchens 1:4.
Kurve 4 a. 31. I. 12. 1) — Normales Meerschweinchenserum 1:5*
2) —- Serum 1:5 des im anaphylaktischen Shock gestorbenen Meer¬
schweinchens No. 5 (Sensibilisierung am 8. I.).
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474
Hanna Hirschfeld und Ludwig Hirschfeld,
Kurve 5. Kurve 5 a.
Kurve 5. 2. II. 12. 1) — Normales Meerschweinchen-Oxalatplasma.
2 ) — Oxalatplasma des ira anaphylaktischen Shock gestorbenen Meer¬
schweinchens No. 6. 3) Normales Meerschweinchenplasma.
Kurve 5 a. 2. II. 12. 1) - Xormales Meerschweinchensemm 1:5.
2} — Serum des im anaphvlaktischen Shock gestorl>enen Meerschweinchens
^So. 6 (Sensibilisierung am 8. 1.).
Kurve 6 l ). Kurve 6 a.
Kurve 6. 9. II. 12. 1) — Normales Meerschweinchenplasma (Oxalat).
2 ] — Plasma des im anaphylaktischen Shock gestorbenen Meerschweinchens
>»o. 7 (Sensibilisierung am 8. I.); intravenose Injektion von 0,6 Hammel-
6 erum am 9. II. 3) Plasma des im anaphylaktischen Shock gestorbenen
Meerschweinchens No. 8 (Sensibilisierung wie vorher); Injektion 1 / s0 ccm
Hammelserum intravenos. 4) — Normales Meerschweinchenplasma am
Schlufi. 5) Plasma No. 8 jetzt nochmals untersucht, ergab folgende Zahlen:
52, 52; Injektion: 45, 38, 36, 39, 42, 45, 49, 4S, 50.
Kurve 6a. 9. II. 12. 1)- Serum 1:5 des im anaphylaktischen
Shock gestorbenen Meerschweinchens No. 8 (Sensibilisierung am 8.1.); In¬
jektion 7 30 ccm Hammelserum. 2)-Normales Meerschweinchensemm 1:5.
1) Es trat eine Erhohung der Empfindlichkeit der Froschpraparate
auf. Wir werden in der Zusammenfassung die Kurve 2 mit Kurve 1 und
Kurve 3 mit Kurve 4 vergleichen.
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Vasokonstringierende Substanzen im anaphylaktischen Shock. 475
Fallen die Verhfiltnisse gerade umgekehrt liegend, wie z. B.
bei der Basedowschen Krankheit, bei welcher das Serum,
nicht aber das Plasma wirksam ist.
Kurve 7. Kurve 8.
Kurve 7. 17. II. 12. 1)-Normales Meerschweinchcn-Hirudinplasma
1:5. 2) -Hirudinplasma des am 30.1. mit Pferdeserum sensibilisierten,
im Shock gestorbenen Meerschweinchens No. 9.
Kurve 8. 5. III. 12. 1) — Normales Meerschweinchenserum 1:5.
2)-Serum 1:5 des im akuten Shock gestorbenen Meerschweinchens No. 10
(Sensibilisierung am 30.1.). 3) — Plasma dieses Tieres 1:5. 4) Nor-
males Meerschweinchenplasma 1: 5.
Kurve 9. Kurve 9 a.
Kurve 9. 6. III. 12. 1) — Normales Meerschweinchen-Hirudinplasma
1:3. 2) Hirudin plasma 1:3 des am 30. I. sensibilisierten Meerscnwein-
chens No. 11. 3) Normales Meerschweinchenplasma am Schlufi.
Kurve 9 a. 6. III. 12. 1) — Normales Meerschweinchenserum 1:5.
2) — Serum 1:5 des am 30. I. sensibilisierten Meerschweinchens No. 11.
Versuohe mit der pasaiven Ueberempfludlichkeft.
(Kurven 10—12.)
Wir haben 5 Tiere untersucht, und zwar war das Meer-
schweinchen XII mit einem st&rkeren Pr&zipitin behandelt,
die tibrigen mit einem schw&cheren, Meerschweinchen XIII,
XIV, XVI sind nicht akut gestorben, sondern wurden nach
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476 Ha nna Hirschfeld und Ludwig Hirschield,
dem eingetretenen Temperatursturz durch Nackenschlag getotet.
Die Kurven zeigen, daB lediglich Meerschweinchen XII sowohl
im Plasma wie im Serum starke vasokonstringierende Sub-
stanzen enthielt Meerschweinchen XIII und XIV kflnnen wir
als negativ, Plasma von XVI als zweifelhaft betrachten. XV
wies ein negatives Plasma und ein schwach positives bis
zweifelhaftes Serum auf. Ob diese negativen Ergebnisse zum
Teil an der Eigenschaft des injizierten Kaninchenserums lagen,
vermOgen wir nicht zu sagen.
Wenn wir die Ergebnisse kurz zusammenfassen, so finden
wir, daB das Plasma, seltener das Serum, beim Meerschwein-
Kurve 10.
Kurve 10 a.
Kurve 10. 17. II. 12. 1) — Hirudinplasma 1:5 des mit Kaninchen-
prazipitin vorbehandelten, im anaphylaktischen Shock gestorbenen Meer-
schweinchens No. 12 (Kaninchenprazipitin 0,2 com priizipitiert mit Vjoooo
Hammelsenun sehr stark, mit Vjooooo Triibung; passive Uebertragung durcn
intraperitoneale Injektion von 1 ccm 1 Tag vorher). 2) — Normales Meer-
schweinchen-Hirudinplasma 1:5.
Kurve 10 a. 17. II. 12. 1) — Normales Meerschweinchenserum 1: 5.
2) — Serum des passiv anaphylaktischen Meerschweinchens No. 12.
Kurve 11. 12. IV. 12. 1) - Nor¬
males Meerschweinchen-Hirudinplasma
1:6. 2) Plasma 1:6 des Meer¬
schweinchens No. 13, das am 11. IV.
2 ccm Kaninchenprazipitin (wie No. 15)
intraperitoneal bekommt, am 12. IV.
0,4 ccm Hammelserum. 3)-Plasma
1:6 des ebenso wie das vorhergehende
behandelten Meerschweinchens No. 14;
beide Meerschweinchen starben nicht im Shock, sondern reagierten mit
Temperatursturz. 45 Min. nach der Injektion Temp. 34°. Getotet durch
Nackenschlag. Diese Sera wirken ganz analog — negativ.
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Vasokonstringierende Substanzen im anaphylaktischen Shock. 477
chen, die im akuten anaphylaktischen Shock sterben, manch-
mal einen erhShten Gehalt an Substanzen aufweisen, die Be*
ziehungen zum peripberen Vasomotorenapparat haben.
Kurve 12. Kurve 12 a.
Kurve 12. 26. IV. 12. 1) — Normales Meerschweinchen-Hirudin-
plasma 1:4. 2)-Hirudinplasma des Meerschweinchens No. 15 (250 g),
welches am 25. IV. ein schwaehes Hammelpriizipitinserum intraperitoneal
bekommen hat (0,2 Antiserum gibt bis zu 0,0001 Antigen eine schwache
Triibung); stirbt rasch unter Kriimpfen. 3) — Hirudinplasma des Meer¬
schweinchen No. 16, das vorbehandelt ist wie das vorhergehende. Stirbt
nicht. Temperaturabfall auf 33° nach 20 Min. Durch Nackenschlag getotet.
Kurve 12 a. 26. IV. 12. 1)-Normales Meersehweinchenserum 1:5.
2)- Serum 1:5 des Meerschweinchens No. 15. 3) Normales Meer-
schweinchenserum 1: 5 am Schlufi.
Wir m&chten ganz besonders noch einmal hervorheben,
daB wir entweder vor Oder nach, meistens aber sowohl vor
wie nach der Untersuchung des fraglichen Serums bzw. Plasmas
das nicht wirksame Serum von normalen Meerschweinchen
prflften, so daB Differenzen in der Empfindlichkeit der Frosch-
gefaBe als Fehlerquelle kaum in Betracht kommen. Dazu
kommt noch, daB in keinem unserer Versuche das normale
Serum oder Plasma st&rkere Wirkung ausilbte als das ana-
phylaktische, so daB wir nicht annehmen konnen, daB unsere
positiven Befunde trotz mehrerer negativen F&lle zufailig sind.
Ueber die Natur der Substanzen, die die Vasokonstriktion
bewirkten, lassen sich lediglich Vermutungen aussprechen.
Wir mochten aber nicht verfehlen, auf einige Zusammenh&nge
hinzuweisen. So fanden Friedemann und Isaak 1 ) in
ihrer grundlegenden Arbeit, daB die ilberempfindlichen Tiere
mehr Stickstoff ausscheiden als ihnen parenteral zugeflihrt
wird, daB demnach das korpereigene EiweiB eingeschmolzen
1) Zeitschr. f. exp. Pathol, u. Thcr., 1909.
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478
Hanna Hirschfeld und Ludwig Hirschfeld,
wird, eine Auffassung, die neuerdings von Pfeiffer 1 ) geteilt
wird. Die Versuche von Friedemann und Isaak fanden
ihre Bestatigung in der unl&ngst erschienenen Arbeit von
Ruszni&k 2 ), nach welchem der Antitrypsingehalt des Serums,
der den Korperzerfall anzeigen soil, beim Meerschweinchen
im anaphylaktischen Shock erhoht ist. Nun ist nach den
Untersucliungen von O’Connor, welche in der Arbeit von
Hirschfeld und Modrakowski ihre Bestatigung fanden,
wahrscheinlich, daB gerade die Zellzerfalls- und EiweiBabbau-
produkte (z. B. Peptou) vasokonstriktorisch wirksame Sub-
stanzen darstellen, so daB man unsere Resultate als eine Be¬
statigung der Auffassung betrachten konnte, daB der EiweiB-
zerfall in vivo mit der Erliohung an vasokonstringierenden
Substanzen Hand in Hand gehe.
Zur Erklarung der Tatsache, daB das Plasma in manchen
Fallen wirksam war, wo das Serum sicli negativ verhielt,
konnten vielleicht Gerinnungsvorgiinge, die bei den iiber-
empfindlichen Tieren angetroffen werden, herangezogen werden.
Das Blut ist im Shock beim Meerschweinchen, wie Fried-
berger fand, schwerer gerinnbar, nach Sirenskij 3 ) ver-
schwindet im Shock hauptsSchlich das Fibrinferment. Man
konnte daran denken, daB intra vitam in bestimmten GefSB-
bezirken doch partielle Gerinnungsvorgiinge zustande kommen
und daB die Produkte der Gerinnung das noch fliissig ge-
wonnene Plasma wirksam machen, w&hrend diese Unterschiede
in den Seren, bei welchen die Gerinnungsvorgange sowohl bei
normalen wie bei anaphylaktischen Tieren zum AbschluB gelangt
sind, verschwinden 4 ).
Die negativen Befunde bei Meerschweinchen, die im Shock
sterben, sind vielleicht so zu erklSren, daB die vasokonstrin-
gierenden Substanzen lediglich in bestimmten Stadien des
Shocks auftreten, ahnlich wie die Blutdrucksteigerung schnell
1) Zeitschr. f. Immunitiitsforsch., 1911.
2) Deutsche med. Wochenschr., 1912.
3) Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 12, 1912.
4) No If diskutiert bei der Peptonvergiftung den Zusammenhang der
Gerinnung mit dem Druckabfall; er nimmt an, daB die Gerinnsel sich an
den GefaBendothelien — vor allem der PulmonalgefiiBe — niederschlagen,
was den Druckabfall zur Folge haben soli.
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Vasokonstringierende Substanzen irn anaphvlaktischen Shock. 479
aufhort, um einer Blutdrucksenkung Platz zu machen (Auer
und Lewis, Friedberger und Hartoch.Lowit etc.). Nun
ist die Untersuchung der einzelnen Stadien des Shocks beim
Meerschweinchen wegen des rapiden Verlaufs unmbglich. Es
ware aber sehr lohnend, diese Vorgange (vasokonstringierende
Eigenschaften, Gerinnbarkeit und Antitrypsingehalt des Blutes)
bei Hunden, bei welchen die Verhaltnisse klarer zutage liegen
(absolute Ungerinnbarkeit des Blutes im Shock, dazu die Mog-
lichkeit der Blutgewinnung bei verschiedenen H6hen des Blut-
druckes), zu untersuchen.
Anaphylatoxinversuch e.
(Kurven 13-17.)
Wir haben auch die Sera und Plasmen der durch Ana-
phylatoxin getoteten Meerschweinchen untersucht. Die Ver-
suchsanordnung ist hier eine sehr vorteilhafte, weil man das
eingespritzte Gift auf seine Wirksamkeit priifen und dadurch
die Frage entscheiden kann, ob ein aus dem Zusammenwirken
des frischen Meerschweinchenserums mit bestimmten Sub¬
stanzen (in diesem Falle Bakterien) dargestelltes Gift die
Wirksamkeit bedingt, Oder ob das Gift eine Reihe von
Stbrungen im Tierorganismus veranlafit, als deren Folge solche
Substanzen entstehen, die geeignet sind, die Vasomotoren zu
beeinflussen. Wir benutzten die nach Friedberger aus
Kurve 13.
Kiirve 13. 10.1. 12. 1) -Normales Meerschweinchenserum 1 : 5 am
Anfang. 2) ••• In vitro dargestclltes Anaphylatoxin 1: 5. 3) — Serum 1:5
des durch Anaphylatoxin getoteten Meerschweinchens No. 17. 4) — Nor¬
males Meerschweinchenserum 1:5 am Schluti.
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480 Hanna Hirschfeld und Ludwig Hirschfeld,
lebenden Prodigiosus, bzw. Typhusbacillen dargestellten Ana-
phylatoxine (eine 24-stdndige Agarkultur, verrieben in 2 ccm
physiologischer Kochsalzlosung, wird mit 4 ccm frischen Meer-
schweinchenserums vermischt, 1 Stunde im Brutschrank
und ca. 20 Stunden im Eisschrank stehen gelassen). Wir
Kurve 14.
Kurve 14. 22. I. 12. 1) — Oxalatplasma des mit 3 ccm Anaphyla-
toxin getoteten Meerschweinchens No. 18. 2) — Scrum 1 :5 desselben
Tieres (sowohl Serum wie Plasma etwas rot, jedoch nicht so stark, daB man
die intensive Wirkung lediglieh darauf zuruckfiihren konnte). 3) Ana-
phylatoxin 1:5 in vitro dargesteilt. 4) - Norm ales Mcerschweinchen-
serurn 1:5.
Kurve 15. Kurve 15 a.
Kurve 15. 30. IV. 12. 1) — Norm ales Meerschweinchen - Hirudin-
plasma 1:4. 2) - Hirudinplasma 1 :4 des durcli intravenose Injektion
von 4 ccm Anaphylatoxin getoteten Meerschweinehens No. 19. 3) — Hirudin-
plasma 1:4 des durch intravenose Injektion von 3 ccm Anaphylatoxin ge¬
toteten Meerschweinchens No. 20 (bei beiden Tod in 1 Min. unterKriimpfen),
4) Normales Mtersckweinchen-Hirudinplasma 1:4 am Sehluft.
Kurve 15 a. 30. IV. 12. 1) - Normales Meerschweinchenserum 1:5.
2) - :<erum 1 : 5 des durch 4 ccm Anaphylatoxin getoteten Meerschwein¬
chens No. 19. 3)-8erum 1:5 des durch 3 ccm Anaphylatoxin getoteten
Meerschweinchens No. 20. 4) Normales Meerschweinchenserum 1:5
am SchluB. 5) In vitro dargestclltes Anaphylatoxin 1:5 iibte gar keine
Wirkung aus.
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Vasokonstringierende Substanzen im anaphylaktischen Shock. 481
haben insgesamt 7 FSlle von Anaphylatoxinvergiftung beim
Meerschweinchen gepriift. In 2 Fallen, Meerschweinchen XXII
und XXIII, sind die Meerschweinchen nicht gestorben, sondern
wurden in den in den Protokollen angegebenen Zeiten durch
Nackenschlag getotet. Auch in dieser Versuchsreihe konnten
wir neben den negativen (Meerschweinchen XIX akut ge¬
storben , Meerschweinchen XXII und XXIII getotet) auch
positive Befunde erheben (Meerschweinchen XVII, XVIII und
XX), wahrend das Meerschweinchen XXI rait 7 Tropfen
Differenz als zweifelhaft betrachtet werden kann. Bei den
Meerschweinchen XVII, XVIII und XX, die gut positiv waren,
haben wir gleichzeitig das zur Injektion benutzte Anaphyla-
toxin geprflft, welches, wie die Kurven zeigen, in Verdflnnungen
1:5 und 1:10 sich vom normalen Meerschweinchenserum nicht
unterschied.
Kurve 16.
Kurve 17.
Kurve 16. 3. V. 12. 1) - Norm ales Meerschweinchen-Hirudin-
plasma 1:4. 2) — Hirudinplasma 1:4 des durch 3 ccm Anaphylatoxin
(intravenos) getbteten Meersehweinchens No. 21 (Tod nach V 2 Min. unter
Krampfen). 3) — Hirudinplasma 1 : 4 des Meersehweinchens No. 22,
welches 2 ccm Anaphylatoxin intravenos bekommen hat (sofort schwere
Kriimpfe, dann Paresen, rasche Erholung; nach 5 Min. durch Nackenschlag
getotet, Lunge nicht starr). 4) Normales Meerschweinchenplasma 1:4
am Schlufi ergab folgende Zahlen: Ringer 35—35; Injektion: 34, 31, 30,
30, 31, 32, 34, 34.
Kurve 17. 25. V. 12. 1) — Normales Meerschweinchen -Hirudin-
plasma 1:4. 2) — Hirudinplasma 1: 4 des durch 3 l / 2 ccm Anaphylatoxin
getoteten Meersehweinchens No. 23. Schwere Krarapfe, Erholung. Getotet
durch Nackenschlag. 3) —- Normales Meerschweinchenserum 1:5. 4)-
Serum 1:5 des mit Anaphylatoxin getoteten Meersehweinchens No. 22.
Wir raiissen somit konstatieren, daB aus dem Zu-
sammenwirken der in vitro dargestellten Gifte
rait dem OgranisrausStoffevoneinervielgr6Beren
physiologischen Dignitat wenigstens in bezug
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482 Hanna Hirschfeld und Ludwig Hirsehfeld,
auf den peripheren Vasoraotorenapparat ent-
stehen als das eingeftthrte Gift selbst 1 ).
Diese Befunde konnen mit den von Popielski 2 3 ) ent-
wickelten Anschauungen in Einklang gebracht werden. Po¬
pielski nimmt an, daB eine ganze Reihe von Giften,
die pharmakologisch einen bestimmten Symptomenkomplex
hervorrufen, vor allem durch eine starke Blutdrncksenkung
charakterisiert, dadurch wirken, daB im Korper aus den Ele-
menten des Blutes ein Gift, Vasodilatin genannt, entsteht,
welches die Gef&Be erweitert. In unseren Anaphylatoxinver-
suchen haben wir das Beispiel, daB tats&chlich unter dem Ein-
fluB einer an sich fiir die Vasomotoren indifferenten Substanz
das Blut des Tieres eine VerSnderung erleidet, welche es be-
fahigt, mit den Vasomotoren zu reagieren. Allerdings ist die
Wirkung in bezug auf die FroschgefaBe eine konstringierende.
Unsere Versuche mit Anaphylaxie bei Kaninchen waren
wenig zahlreich und durchweg negativ. Die Vor- und Nach-
behandlung geschah mit Blut, der Verlauf des Shocks war
protrahiert, keines der Tiere ist gestorben.
3 Falle von Serumkrankheit der Kinder waren ebenfalls
negativ.
Der fur die Ueberempfindlichkeit charakteristische Tem-
peratursturz wird von Pfeiffer 8 ) als die Folge der Blut-
drucksenkung aufgefaBt, da BaCl 2 , welches die GefaBmuskulatur
zur Kontraktion bringt, auch den Temperatursturz verhindert.
Nach Friedemann und Davidson 4 ) reagieren die fiber-
empfindlichen Tiere auf Kochsalzeinspritzung mit einem
starkeren Fieber als die normalen. Freund 5 * ) stellte fest,
daB Kochsalz das Fieber durch Reizung der sympathischen
Endigungen (vielleicht durch Mobilisierung des Adrenalins) be-
wirkte. Durch Untersuchungen von Friedemann und
1) Diese Befunde scheinen uns auch in Riicksicht auf die unlangst von
Weichardt und Schittenhelm (Miinch. med. Wochenschr.) publi-
zierten Untersuchungen iiber die Praexistenz giftiger Komponenten im
Eiweifimolekiil von Bedeutung.
2) Centralbl. f. Physiol., Bd. 24, No. 24.
3) Zeitschr. f. lmmunitiitsf., Bd. 11.
4) Archiv f. Hygiene, Bd. 71, 1909.
5) Miinch. med. Wochenschr., 1911; Verh. d. Heidelberger naturf.
Gesellsch.; Arch. f. exp. Pathol, und Pharmakol., Bd. 65, 1911.
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Vasokonstrmgierende Substanzen im anaphylaktischen Shock. 483
Isaak 1 ) fiber das Fieber flberempfindlicher Tiere, durch
Grafe und Freund 2 ) fiber das Kochsalzfieber ist die Tat-
sache der Einschmelzung des KOrpereiweifies bei den be-
treffenden Fieberarten sichergestellt worden.
Wir wissen andererseits, daB der Zell- und EiweiBzerfall
auf FroschgeffiBe konstriktorisch wirksamste Substanzen liefert
(O’Connor, Hirschfeld und Modrakowski). Es liegt
daher die Mdglichkeit vor, daB solche Substanzen, die durch
ihre Wirkung auf FroschgeffiBe ihre Affinitfit zum sympathischen
System dokumentieren, unter gewissen Bedingungen auch Fieber
zu erzeugen imstande sein werden, daB also das Fieber durch
Zerfallsprodukte (also auch das Resorption sfieber, Fieber bei
Malaria, paroxysmaler Hfimoglobinurie, durch Zerfallsprodukte
der Blutplfittchen [Freund], das Kachexiefieber etc.) dem
Adrenalinfieber gleichzusetzen seL
Wir haben daher bei einigen Fallen von Kochsalzfieber
das Serum und Plasma auf ihre Wirkung auf FroschgeffiBe
untersucht, von dem oben erwfihnten Gedanken ausgehend,
daB das Kochsalz erst sekundfir, durch die bei der Ein¬
schmelzung des kfirpereigenen EiweiBes auftretenden mit
Sympathicus reagierenden Substanzen, das Fieber bewirken
kdnnte. Unsere Versuche waren bei normalen und fiber-
empfindlichen Kaninchen, bei welchen wir durch Kochsalzein-
spritzung Fieber erzeugten, sowie bei zwei Sfiuglingen, negativ.
Auch ein tuberkulfises Meerschweinchen, welches nach intra-
venfiser Einspritzung von Alttuberkulin getfitet wurde, sowie die
oben erwfihnten Ffille von Meerschweinchen, die nicht akut ge-
storben sind, sondernnacheingetretenemTemperatursturzgetOtet
wurden, hatten ebenfalls negatives Serum und Plasma. Trotz
dieser negativen Ergebnisse mSchten wir die Mdglichkeit nicht
ganz von der Hand weisen, daB EiweiBzerfallsprodukte, die
unter Umstfinden durch ihre Wirkung auf flberlebende Frosch¬
geffiBe erkannt werden, ffir die Erklfirung der Temperatur-
reaktionen bei den fiberempfindlichen Tieren mit in Be-
tracht kommen, daB sie aber vielleicht gerade dadurch, daB
sie gewirkt haben, verbraucht und dem Nachweis entzogen
1) 1. c.
2) Arch. f. exp. Pathol, und Pharmakol., Bd. 67, 1911.
Zeitschr. U ImmunitMtifonchunf. Oris. Bd. 21V. 33
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484 H. und L. Hirschfeld, Vasokonstringierende Substanzen etc.
werden, ahnlich wie das intravenOs eingefflhrte, beziehungs-
weise st&ndig in den Nebennieren produzierte Adrenalin in
peripheren Gef&Ben mit den uns bis jetzt zur Verfflgung
stehendenMethoden nicht nachgewiesen werden kann (O’Con¬
nor 1 ), Falta und Flemming*).
Zusammenfassung.
1) Es wurden bei im anaphylaktischen Shock gestorbenen
Meerschweinchen Substanzen nachgewiesen, die auf ftberlebende
FroschgefaBe konstringierend wirken. Diese erbOhte konstrin-
gierende Wirkung lieB sich lediglich in einem Teil der Falle
konstatieren, und zwar sowohl im Plasma wie im Serum, in
einigen Fallen lediglich im Plasma. Es wird hypothetisch die
Moglichkeit erOrtert, daB diese Substanzen den bei den
tiberempfindlichen Tieren stattfindenden erhOhten EiweiB-
zerfall Oder auch intra vitam stattgefundene intravaskulare
Gerinnungsvorg&nge anzeigen und daB sie im Tierorganismus
durch Beeinflussung des sympathischen Systems die Tem-
peraturreaktionen der flberempfindlichen Tiere mit verschulden.
Experimentell konnte bei den nach dem eingetretenen Tem-
peraturabfall getoteten Tieren sowie beim Kochsalzfieber keine
ErhShung der vasokonstringierenden Substanzen konstatiert
werden.
2) Bei den durch intravenose Anaphylatoxineinffihrung
getoteten Meerschweinchen konnte mehrfach eine erhOhte vaso-
konstringierende Wirkung nachgewiesen werden, obgleich das
Anaphylatoxin selbst fiir FroschgefaBe unwirksam war. Die ffir
die Vasomotoren wirksamen Substanzen sind demnach nicht
im Anaphylatoxin enthalten, sondern entstehen erst in dem
durch Anaphylatoxin vergifteten Tier.
1) 1. c.
2) Munch, med. Wochenschr., 1911, No. 50.
Frommannsche Buchdruckerei (Hermann Pohle) in Jen*. — 4561
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Zeitschrift £ ImmniiiUtsforsotmag. Original! BiM No. 5.
Nachdruck verboten.
[Aus dem Hygienischen Institut der Universit&t Helsingfors.]
Zum Mechanism us der Bakterienyerankernng an das
Leukocytenprotoplasma.
Von Max Oker-Blom.
(Eingegangen bei der Redaktion am 3. Juni 1912.)
Der Akt der Verankerung des phagocytablen Objektes
bzw. der Bakterien an das weiBe Blutkbrperchen, welcher
Akt ja die erste Phase der phagocytSren Erscheinungen dar-
stellt, wird nunmehr recht allgemein [Marchand, Hek-
toen, Levaditi, Innmann 1 )] fflr einen physikalisch-che-
mischen Vorgang gehalten. Mehrere Erfahrungen haben ge-
lehrt, daB es eine von den Opsoninen unabhSngige spontane
Phagocytose gibt, und bei genauer Analyse der Versuchs-
ergebnisse hat sich erwiesen, daB die Wirkung der Opsonine
lediglich als ein den phagocytSren Vorgang begunstigender Ein-
fluB aufzufassen ist. Durch mehrere Versuche hat sich heraus-
gestellt, daB weder die Erhaltung der VitalitSt der Phago-
cyten, noch die Vernichtung der VitalitSt der Bakterien Be-
dingung der Verankerung der letzteren an den Leib des
Leukocyten ist. Der Vorgang erfordert keineswegs das Ein-
greifen der LebenstStigkeit der weiBen Blutkorperchen.
Hamburger und Hekma 2 ) haben den Versuch ge-
macht, dem EinfluB verschiedener Ionen auf den phagocytSren
Vorgang nSher zu treten. Uns interessieren hier lediglich
die Untersuchungeu ilber den EinfluB der Konzentration der
OH-Ionen des Serums bzw. des Mediums auf die Phago¬
cytose. Als phagocytables Objekt wurden fein zerteilte
Kohlenpartikelchen angewandt; das Medium, das entweder
aus Serum oder aus 0,9-proz. NaCl-Losung bestand, wurde
1) Kraus und Levaditi, Handbuch der Technik und Methodik
der Immunitiitsforscbung, Bd. 2, 1909, p. 359 u. Erg.-Bd. 1, 1911, p. 1G9.
2) Hamburger und Hekma, Quantitative Studien iiber Phago¬
cytose. III. Biochem. Zeitscbr., Bd. 9, 1908, p. 282.
Zeitschr. f. IciraunitaUforschung. Orig. Bd. XIV. 34
ty Google
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486
Max Oker-Blom,
durch Hinzuffigung von n/ 20 H 2 S0 4 Oder n/ 20 NaOH in bezug
auf seinen Gehalt an OH-Ionen verfindert. So viel man nach
den Angaben 1 ) fiber die Versuchsanordnung beurteilen kann,
wurde den resp. mit Sfiure oder Alkali versetzten Fltissig-
keiten Gelegenheit gegeben, eine Zeitlang auf die Leuko-
cyten einzuwirken, ehe diesen Kohle zum phagocytieren dar-
geboten wurde. Eine eventuelle Einwirkung von seiten der
Sfiure und des Alkalis auf den phagocytfiren Vorgang wird
wohl daher in erster Linie zu einem Teil jedenfalls als eine
Umstimmung der weiBen Blutkorperchen fttr die betreffende
Aufgabe zu gelten haben. Hierauf wird spfiter zurfick-
zukommen sein.
Die Autoren kamen zu dem SchluBergebnis, daB jede
Aenderung des OH-Ionengehalts des Serums auf die Phago-
cytose nachteilig wirkt. Schon eine Verminderung der Alkali-
nitat des Serums — die ffir das normale Serum auf etwa Vso
normal angeschlagen wird — um 5 Proz. hat eine deutlich
nachweisbare Abnahme der Phagocytose zur Folge. Eine
kflnstlich hervorgerufene Steigerung der Alkalinitfit ffihrt
ebenfalls zu einer, obgleich unbedeutenderen, Herabsetzung
des phagocytfiren Vermfigens der Leukocyten. Die Wirkungen
von Saure und Alkali werden noch mehr ausgesprochen, wenn
statt Serums, eine 0,9-proz. NaCl-Losung als Medium angewandt
wird, ein Umstand, der darauf zurflckgeffihrt wird, daB beim
Hinzuffigen von NaOH zum Serum nur ein Teil der ver-
mehrten OH-Ionen im Serum bestehen bleibt, w&hrend ein
anderer Teil mit den EiweiBkorpern des Serums Verbindungen
eingeht, die keine freien OH-Ionen enthalten. In derselben
Art dfirfte wohl auch die Sfiure grfiBtenteils von den Serum-
eiweiBkfirpern gebunden und der direkten Einwirkung auf
die Phagocyten entzogen werden. Bei Hinzuffigung der Stoffe
zu der Kochsalzlosung kfinnen dagegen die betreffenden Ionen
unbehindert ihren EinfluB auf die Phagocytose ausfiben.
Auch Bechhold 2 ) gibt an, daB, wenn die Konzentration
des Mediums genfigend groB (n/ 100 , n/ 200 , n/ 400 , n/ 800 ) ist, um
Verletzungen der weiBen Blutkfirperchen zu bewirken, die
Phagocytose davon ungunstig beeinfluBt wird.
1) L c. p. 276.
2 ) Bechhold. Munch, med. Woehenschr., 1908, p. 1177.
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasraa.
487
Schon etwas frflher war N o g u c h i *) zu etwa dem gleichen
Ergebnis gekommen, als er die Verfinderungen der opsonischen
Wirkung in ihrer Abhangigkeit von der Reaktion des Mediums
studierte. Er fand nfimlich, daB eine neutrale Reaktion des
Serums fttr den phagocytaren Vorgang die vorteilhafteste ist.
Werden mebr wie 1,6 ccm n/ 20 NaOH resp. 0,5 ccm n/ 20
HjS0 4 zu 5 ccm Serum hinzugeffigt, so kommt keine Phago-
cytose mehr zum Vorschein. Obgleich keine besondere An-
gabe darQber zu finden ist, in welcber Reihenfolge einer-
seits die Leukocyten, andererseits die Bakterien der Wirkung
dieser in ihrer Reaktion kflnstlich veranderten Sera ausgesetzt
wurden, so ist wohl anzunehmen, daB in diesen Versuchen
jedenfalls nicht die Bakterien allein erst der betreffenden Be-
handlung unterworfen wurden.
Indessen hat Noguchi auch den Versuch gemacht, zu
eruieren, inwieweit die Phagocytose davon beeinfluBt wird, daB
die Bakterien der Einwirkung in ihrer Alkalinitat abgestufter
Sera ausgesetzt werden, ehe sie den Leukocyten dargeboten
werden. Die betreffenden Versuche scheinen zu dem Ergebnis
geftihrt zu haben, daB, wenn die Bakterien einer Konzentration
von Alkali Oder Saure im Serum ausgesetzt werden, welche
— bei direkter Einwirkung auf die Leukocyten — die Phago¬
cytose aufheben wfirde, eine Aufnahme der Bakterien seitens
der Leukocyten nicht mehr stattfindet, wenn auch die ersteren
nach der genannten Behandlung wieder ausgewaschen worden
sind.
Aus den Untersuchungen von Noguchi, wie auch aus
denen von Hamburger und Hekma scheint also hervor-
zugehen, daB jede Veranderung der natQrlichen Alkalinitat
des Serums einen unvorteilhaften EinfluB auf den phagocytaren
Vorgang hat.
Ehe ich die Ergebnisse der nachstehend geschilderten
Versuche anfflhre, mag es angezeigt sein, den Gedankengang
anzugeben, der die Versuchsanordnung geleitet hat.
1) Noguchi, On the influence of the reaction and of des9iccation
upon opsonins. Studies from the Rockefeller Institut for Medical Research,
Vol. 7, 1907, p. 455.
34*
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488
Max Oker- Blom,
Michael is 1 ) hat die Erscheinungen der Adsorption und ganz be-
sonders die dabei sich beteiligenden elektrochemischen Kriifte mit Erfolg
fur die Deutung der Wirkungen der Priizipitine und Agglutinine heran-
gezogen und in dieser Art den Mechanismus der resp. Vorgiinge der Prii-
zipitation und Agglutination gewissermaSen unserern Fassungsvermogen
zugiinglicher gemacht. Els scheint mir, dafi die erste Phase der Phago-
cytose, da9 Ankleben der Bakterien an den Leib des Leukocyten, ebenfalls
ein Vorgang ist, in bezug auf welchen die physikalische Chemie einen ge-
wissen Einblick in die Geheimnisse des betreffenden Vorganges gestatten
kon nte. Die Frage ist aber wie?
Bekanntlich sind es die mit polymorphem Kern versehenen Leuko¬
cyten, welche vor allem andcren die Phagocytose ausiiben. Der Kern
dieser Leukocyten ist stark basophil; er wird von basischen Farbstoffen
gefiirbt, d. h. er hat eine besondcre Neigung, den basischen Anted, das
clektropositivc farbetragende Ion des E'arbstoffes an sich zu ziehen und
zu binden. Der Kern des Leukocyten zeigt somit gewissermaSen „elektro-
negative Eigenschaften 44 -
Das Protoplasma des polymorphkernigen Leukocyten dagegen ist
deutlich acidophil, es hat ein ausgesprochenes Verlangen, den das Siiure-
lon entsprechenden Anteil des Farbst-offes anzuziehen und an sich zu
fesseln. Das Piotoplasma des Phagocyten par excellence besitzt also
irgcndwelche „elektropositive Eigenschafteiv 4 , welche darin zum Ausdruck
kommen, daB es elektronegativ geladene materielle Teilchen an sich zu
ziehen strebt.
In Wasser aufgeschwemmte Bakterien laden sich, dem Wasser gegen-
iiber, negativ elektrisch. Diese Negativitiit erscheint sogar noch groBer,
falls dem Wasser etwas Alkali zugesetzt wird. Eine in das alkalische
Blut eingedrungene Baktcrie sollte somit theorctisch mit einer verhaltnis-
miiBig ausgesprochenen elektronegativen Ladung auftreten. Die mit elek-
trischen Ladungen verschiedenen Vorzeichens armierten korpuskuliiren
Elemente mussen aber eine Anziehung aufeinander ausiiben; der ins Blut
eingedrungene, negativ geladene Mikroorganismus stellt unter diesen Ver-
hiiltnissen fur das mit elektropositiven Eligenschaften ausgestattete Proto-
plasma des Leukocyten ein „gefundenes Fresscn* 4 dar.
Gleichviel, ob wir uns die Anziehungskrafte zwischen Leukocvten-
protoplasma und Bakterie als von besonderen „chemischen Affinitaten“ be-
dingt ansehen und die erste Phase der Phagocytose somit als einen „chemo-
taktisehen Vorgang 44 auffassen, oder uns die betreffende Erscheinung als
eine physikalische Adsorption 44 vorstellen wollen; irgendeine Art von
„Anziehung“ diirfte die mit verschiedenen elektrischen Ladungen ver¬
sehenen Kontrahenten mitemander in Kontakt bringen, wobei unter
anderem die resp. Ladungen gewissermaBen eine entsprechcnde Aus-
gleichung erfahren. Diese Ausgleichung bzw. Herabsetzung der be-
treff'enden elektrischen Potentialdifferenzen beim Zusarnmentrefi’en der ge-
1 ) Michaelis, Die Agglutination, p. 421 in v. Koranvis und
Eichters Handbuch, Physikalische Chemie und Medizin, 1907.
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Bakterienverankerung an da 8 Leukocytenprotoplasma. 489
nannten korpuskularen Elemente kann dabei nicht umhin, einen be-
stimmten EinfluB auf die Oberflachenspannung an der Grenzflache
zwischen diesem und der umgebenden Fliissigkeit herbeizufiihren. Und
zwar diirfte dieser EinfluB zu einer Erhohung der Oberflachenspannung
fiihren, die nunmehr die Grenzflache zwischen den korpuskularen Ele-
menten und der umgebenden Fliissigkeit zu reduzieren sfcrebt; d. h. es
kommfc ein Faktor zur Entfaltung, der fur den Yorgang selbst von be-
sonderer Bedeutung ist, ein Faktor, der das Ankleben der Bakterie an den
Leukocyten, das Eintreten einer Agglomeration der beiden Kontrahenten
noch befordern muB, etwa so, wie es Michaelis betreffend die Agglu¬
tination der Bakterien unter sich auseinandergesetzt hat.
Wenn diese Argumentation dem tatsachlichen Verhalten entspricht,
so miiBten solche MaBnahmen, welche die elektrischen Ladungen der be-
treffenden Kontrahenten in der einen oder anderen Richtung beeinflussen,
auch in einer bestimmten, vorauszusehenden Wirkung auf die Phagocytose
zum Ausdruck kommen. Es miiBte sowohl eine kiinstlich hervorgerufene
Steigerung der „elektropositiven Eigen9chaften“ des Leukocytenprotoplasmas,
als auch eine Hebung der ,,elektronegativen Eigenschaften“ der Bakterie
zu einer Erhohung der Neigung des ersteren, diese an sich zu ziehen, d. h.
zu einer Steigerung der Phagocytose fiihren. Umgekehrt miiBte eine
kiinstlich herbeigefiihrte Abflachung der herrschenden Potentialdifferenzcn
zwischen Leukocyt und Bakterie eine Abnahme der Phagocytose zur Folge
haben.
Dies alles vorausgesetzt, kann es nicht gleichgiiltig sein, wie und in
welcher Reihenfolge einem, auf seine Wirkung in der fraglichen Be-
ziehung zu priifenden Stoff Gelegenheit gegeben w T ird, einerseits auf die
Leukocyten, andererseits auf die Bakterien einzuwirken. Wenn — wie es
in der Forschung iiber die opsonische Wirkung der Sera im allgemeinen
iibhch ist — der auf semen EinfluB zu prufende Stoff auf einmal, so¬
wohl mit den Leukocyten, als auch mit den Bakterien gemischt wird, so
kann er eventuell die Ladung jener abschwachen, diejenige dieser aber
verstarken, und das Endergebnis wird dann schlieBlich davon abhangen,
auf welche der cellularen Elemente der zugefiigte Stoff einen bedeutenderen
EinfluB in der betreffenden Hinsicht auszuiiben kommt. Hierbei kann
auch der Fall eintreffen, daB die Wirkungen des Stoffes einerseits auf die
Leukocyten, andererseits auf die Bakterien einander aufheben, ohne in
irgendwelchen Veranderungen der Anziehungskriifte resp. der Phagocytose
zum Ausdruck zu kommen.
Auch ist es erforderlich, die verschiedenen Phasen der Wirkung eines
zugesetzten Stofles auf die zelligen Elemente auseinanderzuhalten. Fiigen
wir z. B. zu einer Aufschwemmung von Staphylokokken in physiologiseher
Kochsalzlosung etwas Saure hinzu, so wird zunachst die Negativitiit der
Bakterien der umgebenden Fliissigkeit gegeniiber abgeschwacht, was darauf
zuriickzufiihren ist, daB die etwa an der Oberflache der Bakterien vor-
handenen H-Ionen von der Dissoziationstension reap, vom Losungsdruck
der frei in der Fliissigkeit befindlichen ebensolchen Ionen nunmehr zuriick-
gedrangt werden. Die Bakterien diirften in dem sauer gewordenen Vehikel
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490
Max Oker-Blom,
vorliiufig ernen mehr basischen Charakter annehmen: erste Phase der
Saurewirkung auf die Bakterien.
Nach einiger Zeit diirfte es sodann zu einem gewissen Gleichgewicht
zwischen den Bakterien korpern und der umgebenden Fliissigkeit kommen,
indem jene von der Siiure etwas aufnehraen, entweder so, daB eine physi-
kalische Adsorption an der Oberflache des Bakterienleibes stattfindet, Oder
daB die Siiure auf Grand ihres pravalierenden osmotischen Drackes in der
Fliissigkeit in den Bakterienleib eindringt. Es diirfte sich also eine
sekundare Abflachung der in der ersten Phase sehon bewirkten Ver-
andening der Potentialdifferenz an der Grenzflache zwischen Bakterienleib
und Vehikel eintreten: zweite Phase der Saurewirkung.
Werden die so behandelten Bakterien sodann mit der Leukocyten-
aufschwemmung zusammengebracht, wobei sie in ein jneist wohl starker
alkalisches Medium geraten, so diirften sie nunmehr mit einer Elektro-
negativitiit auftreten, die im Vergleich mit ihrer urspriinglichen Ladung
verstiirkt erscheint: dritte Phase der Saurewirkung auf die Bakterien. Die
„siiuregeladenen u Bakterien miiBten folglich mit einer verhiiltnismaBig ge-
steigerten Intensitiit von den Phagocyten begehrt bzw. angezogen werden.
Wollen wir nun auch die Phagocyten einer gleichartigen theoretischen
Betrachtung unterziehen, so muB zuniichst ausdriicklich betont werden,
daB diese zelligen Elemente vom Gesichtspunkte der elektrischen Ladungen
kaum als ganz einheitliche Gebilde angesehen werden konnen. Die folgende
Argumentierung bezieht sich daher lediglich auf das Protoplasma der
Phagocyten par excellence, welches ja, wie schon gesagt, mit ausgesprochen
„elektropositiven Eigenschaften“ begabt ist, d. h. eine Neigung zeigt, saure
bzw. negativ geladene materielle Teilchen an sich zu fesseln.
Fiigen wir gewaschenen Leukocyten Siiure zu, so verschieben wir,
wie betrefl’end die Bakterien schon hervorgehoben wurde, zuniichst ihre
etwaige Ladung in der Richtung gegen eine erhohte Positivitiit: erste Phase.
Wie dem auch sei, wir bieten dabei dem Protoplasma Gelegenheit, seine
Begierde nach sauren Stoften zu befriedigen, und bei einer gewissen Kon-
zentration der zugefiigten Siiure kann diese Begierde gesiittigt, ja eventuell
„iibersiittigt“ werden. Wenn so etwas geschieht, dann ist eine Umstimmung
in den elektrochemischen Neigungen des Protoplasmas eingetreten; es iibt
nicht mehr eine Anziehung auf negativ geladene materielle Teilchen aus;
es diirfte vielmehr jetzt sein Vermbgen, negativ geladene Bakterien an
seinen Leib zu fesseln, eingebiiBt oder jedenfalls abgeschwiicht haben:
zweite Phase der Saurewirkung auf die Phagocyten.
Die „elektropositiven Eigen schaf ten “ des Protoplasmas werden femer
noch mehr beeintriichtigt erscheinen, wenn die mit Siiure behandelten
Leukocyten nachher, beim Mischen ihrer Aufschwemmung mit der Bak-
terienaufschwemmung, oder mit irgendeiner anderen Fliissigkeit, in ein
Medium geraten, in welchem die Losungstension der Siiure, resp. ihrer
Ionen, niedriger ist, als in derjenigen Fliissigkeit, deren Wirkung sie eben
ausgesetzt gewesen waren. Die Neigung der mit Siiure behandelten Leuko¬
cyten, die Bakterien an sich zu ziehen, muB folglich als schwacher denn
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Bakterien verankerung an das Leukocytenprotoplasma. 491
normal sich herausstellen: dritte Phase der Saurewirkung auf die Leuko¬
cyten.
Hervorzuheben ist auch, theoretisch betrachtet, daB der EinfluB der
Saure auf das Protoplasma der Leukocyten in der uns interessierenden
Beziehung noch weiter gehen und die elektropositiven Eigenschaften
desselben eventuell in elektronegative iiberfiihren kann, so daB nachher
nur mit elektropositiver Ladung auftretende Bakterien von ihm angezogen
werden.
Wir finden somit, daB die Wirkung der Saure einerseits auf die
Bakterien, andererseits auf das Leukocytenprotoplasma in bezug auf die
zwischen beiden tiitigen Anziehungskrafte — die elektrischen Ladungen —
bis zu einem gewissen Grade verschieden ausfaUt.
In derselben Art kommen wir theoretisch zu der Auffassung, daB ein
Zusatz von Alkali schlieBlich die Neigung der Bakterien zu dem Leuko¬
cytenprotoplasma herabsetzen, dagegen die des Leukocyten zu den Bak¬
terien steigem muB, vorausgesetzt, daB enfcweder die eine oder die andere
Gattung der betreffenden Elemente, nicht aber beide in gleichem MaBe,
dieser Wirkung ausgesetzt werden.
Wird nun die Saure, bzw. das Alkali eben beim Zusammenmischen
der Leukocyten mit den Bakterien zugefiigt, so kdnnen sie ihre resp.
Wirkungen gleichzeitig auf die beiden verschiedenen zelligen Elemente in
zwei verschiedenen Richtungen entfalten, und es kommt dann in dem
EinfluB des betreffenden Stoffes auf die Phagocytose lediglich die algebra-
ische Summe dieser Wirkungen zum Ausdruck. Werden wiederum einer¬
seits die Leukocyten, andererseits die Bakterien in irgendeiner anderen
Reihenfolge der Wirkung eines zugefiigten Stoffes ausgesetzt, so kommt
es darauf an, in welcher Phase der Einwirkung von seiten dieses Stoffes
die resp. zelligen Elemente sich beim Zusammenmischen beflnden; und
die SchluBergebnisse der Versuche konnen in dieser Art in den ver-
schiedensten Richtungen beeinfluBt werden.
AuBer den oben beschriebenen Phasen der Einwirkung der Saure und
des Alkalis, konnen indessen theoretisch auch Zwischenstufen vorkommen,
wo die zelligen Elemente in ihren Wechselbeziehungen zu einander ver-
hiiltnismaBig indifferent erscheinen. Dies diirfte der Fall sein, wenn die
Leukocyten der Einwirkung von Saure bzw. die Bakterien der Vorbehand-
lung mit Alkali unterworfen werden. Auf die Einzelheiten kommen wir
bei Gelegenheit zuriick.
Es erhebt sich nunmehr die Frage, inwieweit die obigen
Spekulationen den tatsSchlichen Verh<nissen entsprechen,
oder vielmehr, ob die vorausgesetzten elektrischen Ladungen
der betreffenden Zellelemente, bzw. deren von den Versuchs-
bedingungen verursachte Verschiebungen in der einen oder
anderen Richtung die erste Phase der Phagocytose gewisser-
maBen zu erkliren vermogen. Die Absicht der folgenden
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492
Max Oker-Blom,
Versuche ist, des n&heren zu erforschen, welchen EinfluB die
SSure und das Alkali einerseits auf die Bakterien, andererseits
auf die Leukocyten in bezug auf die Gestaltung des phago-
cyt&ren Vorganges ausilben.
Die angewandten Leukocyten wurden dern Meerschweinchenblute ent-
nomraen. Da es fiir die Anfertigung der mikroskopischen Praparate nach
der untcn zu beschreibenden Methode von Belang war, mit einer moglichst
konzentrierten Leukocytenaufschweimnung zu arbeiten, so wurde folgender-
maBen vorgegangen: Nach dem ersten Zentrifugieren wird die iiber den
Blutkorperchen stehende Fliissigkeit bis auf eine etwa 2—3 mm hohe
Schicht abpipettiert. Nachher wird das untere Ende des vom Finger ge-
stiitzten Zentrifugierglaschens, am besten mit einem groBen Korkpfropfen,
recht kraftig beklopft. Hierbei springen die zu oberst liegenden Leuko¬
cyten in die iiber ihnen stehende Fliissigkeit empor, wiihrend die roten
Blutkorperchen dies in recht beschriinktem Malle tun. Sobald die Fliissig-
keitsschicht sich geniigend stark mit Formelementen gefiillt hat, wird sie
von den beiden Gliischen abpipettiert und nebst einer geniigenden Menge
NaCl-Losung behufs Waschung der Leukocyten in ein drittes Glaschen
iibertragen. Wiedemm wird vorsichtig zentrifugiert und nach Bedarf noch
einmal gewaschen. SchlieBlich wird die Leukocytenaufschwemmung durch
Abpipcttieren der iiber den Formelementen stehenden Fliissigkeit bis auf
ein beliebiges Volumen auf eine drei- bis vierfache Konzentration ihres
natiirlichen Vorkommens im Blute gebracht.
Als phagocytables Objekt diente in alien Versuchen ein sehr lebhaft
wachsender Staphylococcus aureus, von dem zu jeder Versuchsreihe eine
18—24 Stunden alte Agarkultur vorriitig gehalten wurde. Die Starke der
Bakteriensuspension, die je nach den Versuchsanordnungen etwas variierte,
wurde nach dem Vorsehlag von Far land durch Vergleichung mit einer
Testsuspension von Baryumsulfat je nach Bedarf abgestuft.
Beim Anstellen der Versuche wurde im groBen und ganzen die
Methodik von Wright und Douglas befolgt. Die in ihrer Reihenfolge
nebeneinander hiingenden Kapillaren wurden wiihrend der ganzen Briit-
zeit — wie es Boh me und Rosenow fur die GleichmiiBigkeit der Ver¬
suche vorteilhaft gefunden haben — durch eine besondere Vorrichtung in
stetiger, leise zitternder Bewegung gehalten. Die Temperatur des Thermo-
staten wurde auf 37,5° C erhalten. Die Briitzeit betrug — nur die
Serien XXIII und XXIV ausgenommen — in samtlichen Versuchen
30 Minuten. In jedem Versuch wurden 100 polymorphkernige Leuko¬
cyten beobachtet und die an sie verankerten Bakterien geziihlt.
Die mikroskopischen Praparate wurden in folgender Weise hergestellt:
Von der Kapillarpipette werden, je nach der Menge der Fliissigkeit, ein,
zwei oder drei ganz kleine Tropfchen in etwa 5 mm Entfernung von-
einander liings der Mittellinie des Objekttragers auf diesen abgesetzt.
Nachher wird ein anderes Objektglas, dessen eines Ende ganz plan und
scharf geschlifl’en sowie etwas schmaler als ein gewohnlicher Objekttrager
gemacht worden ist, schrag gegen den Objekttrager an eines der Tropfchen
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Bakterienverankerung an das Leukocytcnprotoplasma. 493
angesetzt, wobei dieses, dcr scharfen Kante des Glases folgend, sich quer
iiber den Objekttrager „liniert“. Das schriig gehaltene und behufs
„Linierung u des Tropfchens etwas hin und her bewegte Glas wird sodann
vom Objekttrager getrennt. In dieser Art werden samtliche Tropfchen
quer iiber den Objekttrager liniert und gestatten so leicht das Durch-
mustern des Praparates auf einem in frontaler und sagittaler Richtung
beweglichen Objekttisch.
Beim Trocknen des Praparates zieht sich eine etwas dickere Schicht
von roten Blutkorperchen nach den Randern der „Linien“ hin, die meisten
Leukocyten werden dagegen in der diinnen Mittelpartie des Praparates
angetroffen. GewiB findet man die Phagoeyten hier nicht so dicht an-
gehiiuft, wie in dem nach der Wrigthschen Methode angefertigten Pra-
parat; mit Hilfe des in zwei gegeneinander rechtwinkligen Richtungen
beweglichen Objekttisches gelingt das Aufsuchen derselben dennoch ohne
Schwierigkeit. Ein Yorteil scheint mir beim „Linieren“ darin zu liegen,
daG man auf einem einzigen Objekttrager mehrere — aus derselben Ka-
pillarpipette stamraende — Praparate herstellen kann.
Fiir das Gelingen der Praparate ist unbedingt erforderlich, dafi die
Objekttrager gut gereinigt und fettfrei sind. Eine weitere Bedingung fur
die Anwendung des Linierens ist jedoch die, dali die angewandte Leuko-
cytenaufschwemmung geniigend konzentriert ist. Wie diese Konzentration
zu erzielen ist, wurde oben schon hervorgehoben.
Die Praparate wurden in 6-proz. Sublimat fixiert, sowie mit Methylen-
blau (5 ccm konzentrierter alkoholischer Methylenblaulosung auf 100 Aqua)
gefarbt.
Wie schon oben bemerkt, wurde in den folgenden Ver-
suchen besonderes Gewicht darauf gelegt, die Einwirkungen
der resp. Agentien, S&ure Oder Alkali einerseits auf die Bak¬
terien, andererseits auf die Blutkorperchen soviel wie nur
mbglich auseinanderzuhalten. Zu diesem Zwecke wurden in
einigen Serien die Bakterien erst wahrend einer gewissen Zeit
der Einwirkung der resp. Fliissigkeiten ausgesetzt, ehe sie
den Leukocyten zum Phagocytieren dargeboten wurden. In
anderen Versuchen wurden zunfichst die Blutkorperchen allein
einer solchen Einwirkung von seiten der betreffenden FlQssig-
keiten ausgesetzt und erst dann mit den Bakterien zu-
sammengebracht. In einigen Serien wiederum wurden die
Bakterien fiir sich und die Leukocyten fiir sich der Ein¬
wirkung der resp. Fliissigkeiten ausgesetzt und sodann nach
dieser Vorbehandlung zusammengebracht. Endlich wurde
einerseits die Reaktion der schliefilichen Bakterien-BlutkSrper-
chenmischung entweder sauer Oder alkalisch belassen, je
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494
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nachdem dies von den Komponenten der Mischung bedingt
war, oder aber sie wurde eben beim Zusammenmischen der
Leukocyten und des phagocytablen Objektes absichtlich neu-
tralisiert. Um mit moglichst einfachen VerhSltnissen zu
arbeiten, wurden zun&chst raebrere Versuchsserien — mit Ver-
meidung von Serum — bloJJ mit verschieden konzentrierten
S&ure- oder Alkalilosungen angestellt. Hierzu dienten ab-
gestufte NormallOsungen von NaOH und H 2 S0 4 . Alle, sowohl
NaOH- wie H 2 S0 4 -Losungen erhielten hierzu noch 0,85 Proz.
NaCl.
In den Serien I—X werden zun&chst nur dieBakterien
einer solchen Vorbehandlung unterworfen.
Seric I. In 7 kleine Reagenzgliischen wurden je 3 Tropfen von
n/ I00 , n /?oo oder n /6oo NaOH-Losung, bzw. 0,85-proz. NaCl-Losung, resp.
n/ 500 , n / ?00 oder n/ JOO H 2 S0 4 -Losung gegeben. In jedes Glaschen wurden
sodann 3 Tropfen von der gut getnischten Bakteriensuspension zugefiigt,
und die resp. Mischungen etwas geschiittelt. Da diese Mischungen beinahe
gleichzeitig hergestellt wurden, das Aufsaugen der resp. Fliissigkeiten usw.
in die Kapillaren aber etwa 2 Minuten in Anspruch nahm, so wurde
die Einwirkungsdauer in den Versuchen dieser sowie einiger der folgenden
Serien etwas verschieden, wie aus den Tabellen genauer zu ersehen ist.
Nach einer Einwirkungszeit von 54 — 66 Minuten wurden die Bakterien
und die Leukocyten zusammengebracht; dabei wurden gleiche Teile von
der Blutkorperchenaufschwemmung, von der mit ihrer resp. Flussigkeit
versetzten Bakteriensuspension sowie — um Gleichartigkeit mit einigen spater
zu erorternden Versuchen zu erzielen — von einer Losung, welche in
bezug auf den jeweilig einwirkenden Stoff ebenso konzentriert war, wie
die betreffende Bakterien mischung, in die Kapillare aufgesogen. In dieser
Art war die Konzentration der auf ihren Einflufi zu untersuchenden
Flussigkeit, unter deren Einwirkung die Bakterien sich erst befunden
hatten, eine andere, als die der schiiefilichen Mischung von Bakterien und
Blutkorperchen.
Tabelle I.
Versuch
Bakterien vorbehandelt
Konzentration
der Bakterien-
Blutkornerchen-
Miscliung
Phagocytose-
zahl
Index
wahrend
mit
i
II
I + H
i
11
Mittel
i
54 Min.
n /-oo NaOH
n '., 00 NaOH
40
36
76
1,14
1,20
1,17
2
56
ff
**/ioo „
^/000 ff
38
34
72
1,09
1,13
1,11
3
58
1)
U / jooo ff
U jf,oo
39
38
77
1,11
1,27
1,18
4
GO
jj
physiol. NaCl
physiol. NaCl
35
30
65
1,00
1.00
1,00
5
G2
JJ
W 1000 H 2 S 0 4
^ / j ;*00 ^
60
62
122
1,71
2,07 j
1,88
G
64
ff
W 4 00 ff
600
61
65
126
1,94
2,17
1,91
7
66
ff
11 A; oo ff
n /n oo ff
61 i
1 56
116
1,74 j 1,87
1,77
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
495
Wir entnehmen der Tabelle I, wo je 100 Leukocyten in bezug auf
verankerte Bakterien in zwei, Parallelpraparaten (I und II) untersucht
wnrdeu, dafi die Versuehe 1 , 2 und 3, in denen die Bakterien etwa
1 Stunde lang der Einwirkung der resp. n/ 200 , n / 400 und n / 1000 NaOH-
Losungen ausgesetzt gewesen waren, ehe sie mit den Leukocyten zusammen-
gebracht wurden, etwas hohere PhagocytOBezahlen aufzuweisen haben, als
Versuch 4, wo der ganzeVorgang von Anfang an in physiologischer Koch-
salzlosung vor sich ging. Fiir jene betragt der Index im Mittel resp. 1,17,
1,11 und 1,18. Noch groBer fallen die Phagocytosezablen aus in den Ver-
suchen 5, 6 und 7, in denen die Bakterien vor der Zusammenmischung
mit den Blutkorperchen der Einwirkung der n/ 200 , n / 400 und n/ IOOO H,S0 4 -
Losungen ausgesetzt waren. Die Indices sind hier im Mittel fur die beiden
Parallelpraparate 1 , 88 , 1,91 und 1,77, d. h. die saurebehandelten Bakterien
werden von den Leukocyten mit entschieden groBercr Begierde gefesselt,
als in dem Kontrollversuch (No. 4), wo sich der Vorgang lediglich unter
dem EinfluB von NaCl abgespielt hat.
Ungeachtet der vielen Fehlerquellen bei den Untersuchungen, in denen
der phagocytare Vorgang zahlenmaflig verfolgt werden soli, erregt die un-
erwartet groBe Konstanz der Versuchsergebnisse der betreffenden Parallel¬
praparate, wie iiberhaupt einerseits die der NaOH-Versuehe unter sich,
andererseits die der HjSO^Versuehe unter sich, ein gewisses Vertrauen zu
den erzielten Resultaten.
Serie II. Auch in den Versuchen der Serie II zeigen die Ergeb-
nisse einerseits der NaOH-Versuche 1, 2 und 3 unter sich, wie andererseits
die der H,S0 4 -Versuche unter sich eine unverkennbare Uebereinstimmung,
wie es aus dem Vergleich der entsprechenden Phagocytosezahlen und der
resp. Indices erhellt. Betreffend die H f S0 4 -Versuche begegnet uns hier
etwa das gleiche Verhalten wie in der Serie I; die Indices erreichen
die Werte 1,85, 1,84 und 1,52. Anders steht es mit den Indices fur die
NaOH-Versuche, welche deutlich unter 1 stehen und in den Zahlen 0,80,
0,79 und 0,76 zum Ausdruck kommen. Zu bemerken ist, daB in der
Serie II die Einwirkung der resp. Agentia auf die Bakterien entschieden
lunger gedauert hatte, ehe diese den Leukocyten dargeboten wurden.
Tabelle II.
Versuch
Bakterien vorbehandelt
i Konzentration der
Bakterien-
Blutkorperchen-
Mischung
Phago-
cytose-
zahl
Index
wahrend
mit
i
90 Min.
n/ tB0 NaOH
n / 300 NaOH
170
0,80
2
92
11
D /400 11
n/ooo ii
167
0,79
3
94
11
**/iooo •>
^^1600 >>
160
0,76
4
96
11
physiol. NaCl
physiol. NaCl
212
1,00
5
98
11
11 /l 000 H,S0 4
H,b0 4
393
1,85
6
100
11
W 4 00 11
n '
11 ROO 11
391
1,84
7
102
11
War W) ii
n/ 3 oo *1
323
1,52
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Serie III. Die Versuchsergebnisse der Serie III bieten etwa das-
selbe Verhalten dar wie die der Serie I, wenngleich die Dauer der Ein-
wirkung der resp. Agentia auf die Bakterien hier noeh langer als in der
Serie II und etwa 3mal so lang als in der Serie I war. Zwischen den
Parallelpriiparaten der NaOH-Versuche herrseht auch hier eine gute Ueber-
einstimmung und die Indices 1,21, 1,22, und 1,11 bewegen sich binnen recht
engen Grenzen. In den H^SO^Versuchen koramen aber schon groBere
UnregelmaSigkeiten vor, ein Verhalten, das beira Durchmustern der Pra- 1
parate eine natiirliche Erklarung zu erhalten scheint Die nicht phago-
cytierten Bakterien, die in den vorigen Priiparaten im allgemeinen gut und
gleichmiiSig aufgeschwemmt gewesen waren, traten besonders in den Ver-
suchen 6 und 7 in stellenweise recht groSen Haufen auf; es war, mit einem
Worte, eine Agglutination der Bakterien eingetreten, die den phagocytiiren
Vorgang gewifi nicht unbeeinflufit gelassen hatte. Einerseits standen nicht
besonders viele einzeln auftretende Bakterien den Leukocyten zu Gebote,
andererseits hiiuften sich hier und da groBere Bakterienkomplexe urn einzelne
Leukocyten, so daB das Ziihlen der tatsachlich verankerten Bakterien schwer
zu bewerkstelligen war.
Tabelle III.
A
o
p
tn
u
Bakterien
vorbehandelt
Konzent ration
ider Baktericn-
Blutkorperch.-
Phagocytose-
zahl
Index
o
wiihrend
mit
Mischung
i
II
!i + ii
i i ii
i
Mit tel
i
150 Min.
n/, 00 NaOH
n /noo
138
146
2S4
1,19 1,23
1,21
2
152 „
*Vooo r
142
! 145
287
1,22 i 1,22
1,22
3
154 „
n /
1000 >>
t^/isoO »*
128
134
262
1,10 1,13
1 1.11
4
150 „
physiol. NaCl
pnysiol. NaCl
IK)
119
235
1,00 1,00
1,00
5
158 „
U.'Vooo H^0 4
1500
209
273
4S2
1,80 2,30
2,05
6
160 ,,
^400
i t^ noo
128
200
328
1.10 1,69
1,35
7
i 3t>2 „ |
200 1
11 /s 00
166 j
166 |
332
1,45 i 1,39
1 1,42
Indessen sind die Serien I, II und III, streng genommen, nicht so
recht ohne weiteres miteinander zu vergleichen. Urn eventuell von der Ein-
wirkungsdauer bedingte Veriinderungen des phagocytiiren Vorganges naher
zu verfolgen, wurde eine fortlaufende Serie angestellt, in der dieselbe Blut-
korperchenaufschwemmung wie auch dieselben unter dem EinfluB der resp.
NaOH- und H i S0 4 -Losungen stehenden Bakteriensuspensioncn nach ver-
schieden langer Einwirkungszeit miteinander zusammengebracht wurden.
Um sowohl die Leukocyten wie die Bakteriensuspensionen wiihrend der
langen Versuchsdauer, 22 Stunden, moglichst unverandert zu erhalten,
wurden die betreflenden Aufschwemmungen in der Zeit zwischen den Ver-
suchen im Eisschrank gehalten.
Die Ergebnisse der langen Serie IV (A, B, C) sind in den Tabellen
IV und V sowie IV und VII zusammengestellt. Durch Zufiigung der
Bakteriensuspension zu den resp. Losungen mit kleinen Zeitintervallen,
entsprechend der zum Manipulieren mit der Kapillarpipette erforderlichen
Zeit — etwa 2 Minuten — wurde erzielt, daB die Einwirkungsdauer fur
samtliche Versuche der resp. Subserien die gleiche wurde.
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
497
Tabelle IV.
Versuch i
Bakterien
vorbehandelt
mit
Konzentration
der Bakterien-
Blutkorperch.-
Mischung
Phagocytosezahl bei
Einwirkungsdauer von
Index
a
1'
b
l k 5'
c
3 h 25'
Mittel
a
b
C
Mittel
1
2
3
4
5
6
7
n/,oo NaOH
n /<oo »>
1000 11
physiol. NaCl
n /l000 ^2^0*
n /< 00 11
^ 200 11 1
n/too NaOH
n /eoo 11
! ^'1500 V
physiol. NaCl
n/isoo H s 80 4
n /«oo 11
n /soo 11
61
62
71
52
154
156
152
79
74
71
65
n.un-
ter-
sucht
67
88
95
58
; 146
144
1 123
69
75
79
58 (55)
150
150
137 j
1,17
1,19
1,36
1,00
2,96
3,00'
2,92
1,22
1,14
1.09
1,00
1
1,21
1.51
1,24
1,00
2.52
2.49 1
2,12
1,19
1,29
1,36
1,00
2,74
1 2,75
2,52
Serie IV A. Auch in den der Tabelle IV zugrunde licgenden Ver-
suchen, in denen die Bakterien vor dem Mischen mit den Leukocyten resp.
1 Minute, 1 St unde 5 Minuten und 3 Stunden 25 Minuten der Einwirkung
der NaOH- bzw. der H,S0 4 -Lbsungen ausgesetzt waren, finden wir in bezug
auf die Phagocytosezahl ein gleiches Verhalten, wie in den Serien I und III.
Fur alle drei Konzentrationen der NaOH-Versuche bewegt sich der Index
im Mittel zwischen 1,19 und 1,36, fur die entsprechenden H,S0 4 -Versuche
zeigt der Index Werte zwischen 2,52 und 2,75. Zwischen den Versuchs-
ergebnissen der Subserien a, b und c, die das Verhalten nach verschieden
langer Einwirkungsdauer der betreffenden Agentia auf die Bakterien zum
Ausdruck bringen, sind keine groSeren Verschiedenheiten zu beobachten.
Wenn wir das ganze Material der bisherigen Versuche
zusammenstellen (Tabelle V), so erhalten wir Mittelwerte,
welche in bezug auf die NaOH-Versuche sich auf die Be-
obachtung von 800 Leukocyten beziehen; fiir die H 2 S0 4 -Ver-
suche basieren sich die Werte auf die an 700 Leukocyten
verankerten Bakterien. Betretfend die Versuche, in denen der
phagocytare Vorgang sich die ganze Zeit ohne Gegenwart be-
sonderer Zus&tzte abspielte, mag hervorgehoben werden, daB
gewohnlich die doppelte Anzahl Leukocyten (in zwei Parallel-
versuchen) beobachtet wurde.
Wir entnehmen der Zusammenstellung der Tabelle V, daB
der Index fflr die resp. NaOH-Versuche sich zwischen den
recht engen Grenzen von 1,05 und 1,09 bewegt. Es sieht
demnach aus, als wflrde, wenn die Bakterien, ehe sie mit den
Leukocyten zusammengebracht werden, w&hrend einer Zeit von
1 Miuute bis zu etwa 3 Stunden der Einwirkung von NaOH
in der Konzentration von n/ 20 o, D /400 Dnd n/ 1000 ausgesetzt
werden, der phagocytare Vorgang dadurch ein wenig befordert.
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498
Max Oker-Blom,
Tabelle V.
Zusammenstellung der Ergcbni6se der Tabellen I—IV.
Versuch
Bakterien
vorbehandelt
mit
| Mittelwerte
Phagocy tosezahl |
Index
1
n/. 10# NaOH
' 92 !
1,07
2
H/4OO »
94 !
1,09
3
^ /j 000 * *
90 j
1,05
4
physiol. NaCl
80 !
1,00
5
^ ' 1 OOO ^‘2 ^^4
185 I
2,15
6
^ 400
164 j
1,91
7
00 v
149
1,62
Entschieden mehr ausgepragt tritt in derselben Beziehung
eine befordernde Wirkung von seiten der entsprechend kon-
zentrierten H 2 S0 4 -Losungen hervor, wenn die Bakterien der
Einwirkung dieser Losung wahrend einer ebenso langen Zeit
ausgesetzt werden, ehe sie den Leukocyten zum Phagocytieren
dargeboten werden. Fiir die drei Versuchsreihen mit den ver-
schieden konzentrierten SSureldsungen betragen die Indizes
2,15, 1,91 und 1,62 oder im Durchschnitt dieser Mittelwerte
1,89. Wir konnen somit sagen, daB unter den genannten
Versuchsbedingungen die Saure die Phagocytose sogar auf
das Doppelte von der sogenannten spontanen Phagocytose,
wie sie in der — hergebrachtermaBen als indifferent ange-
sehenen — physiologischen NaCl-Losung stattfindet, steigert.
Woher kommt nun diese Steigerung der Phagocytose
bzw. die Beforderung der Verankernng der Bakterien an das
Protoplasma der Leukocyten?
Wenn fQr die Verankerung der Bakterien an das Leuko-
cytenprotoplasma den elektrischen Ladungen der Kontrahenten
wirklich eine besondere Bedeutung zukommt — wie wir es
oben als plausibel vorausgesetzt haben —, so miissen in
der Tat die s&urebehandelten Bakterien von den Leukocyten
mit groBerer Begierde herangezogen werden als Bakterien,
die vorher nicht dem EinfluB der Saure ausgesetzt waren.
Nachdem die Bakterien eine Zeitlang in der Saurelfisung ge-
wesen sind, haben sie in irgendeiner Art — physikalische
Adsorption an der Oberflache der Bakterien, Eindringen der
Saure in den Bakterienkorper usw. — Saure aufgenommen;
sie befinden sich in der zweiten Phase der Saurewirkung, wie
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
499
der betreffende Zustand oben bezeichnet wurde. Wenn die
Bakterien sodann mit der Leukocytenaufschwemmung zu-
sammengebracht werden, so sinkt sogleich die SSurekonzen-
tration der Mischungsfliissigkeit; im Augenblick des Mischens
treten aber die Bakterien dann — im Vergleich mit der um-
gebenden Fliissigkeit — mit verhaitnismafiig ausgeprSgter
negativer elektrischer Ladung auf: dritte Phase der Einwirkung
der Saure auf die Bakterien. Die gesteigerte Elektronegativitat
der Bakterien ist ihrerseits geeignet, die Potentialdifferenz
zwischen diesen und dem mit elektropositiven Eigenschaften
begabten Leukocytenprotoplasma zu erhbhen, d. h. die zwischen
den Kontrahenten prasumierten Anziehungskr&fte zu steigern.
Inzwischen diirften auch die Leukocyten ihrerseits nicht
von der SSurewirkung unbeeinfluBt bleiben konnen, sowie sie
mit der Bakteriensuspension zusammengebracht werden. Die
erste Einwirkung der Saure auf die betreffenden Blutkorper-
chen ist wiederum geeignet, die etwaige Ladung des Leuko-
cytenprotoplasmas in positiver Richtung zu verschieben: erste
Phase der SSurewirkung auf die Leukocyten. Dies bedeutet,
dafi im Augenblicke des Zusammenmischens der sauren Bak¬
teriensuspension und der neutralen Blutkbrperchenaufschwem-
mung die Leukocyten verhaltnismSBig elektropositiv auftreten,
was ebenso zur VergroBerung der bestehenden Potential-
differenzen zwischen ihnen und den Bakterien ftihrt und
ebenfalls die Anziehungskrafte zwischen den Kontrahenten in
die H6he treibt.
Die die Phagocytose befbrdernde Wirkung der Saure —
wenn die Bakterien erst der Einwirkung derselben ausgesetzt
werden — lafit sich also mit Zuhilfenahme der elektrischen
Ladungsverhaltnisse der Leukocyten und der Bakterien bzw.
deijenigen Verschiebungen, welche diese Verhaltnisse seitens
der Saure erfahren, gut erklSren Oder sagen wir in qualita-
tiver Hinsicht verstehen.
Ehe wir der Einwirkung des Alkalis auf die Phagocytose
die Aufmerksamkeit zuwenden, sei noch der EinfluB der Saure
in der genannten Beziehung etwas weiter verfolgt. Zu diesem
Zwecke seien die in der Tabelle VI dargestellten Versuchs-
ergebnisse in Betracht gezogen, die mit den in der Tabelle IV
angefflhrten Versuchen zusammengehbren. Die Versuche der
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Tabellen IV und VI entstammen n&mlich einer und derselben
Versuchsserie (IV), wo samtliche Versuche mit derselben
Leukocytenaufschwemmung und denselben Bakteriensuspen-
sionen angestellt worden sind.
Tabelle VI.
Versueh
Bakterien
vorbehandelt
mit
Konzentration
der Bakterien-
Blutkorperch.-
Mischung
Phagocytosezahl bei
Einwirkung von
Index
d
8 h 45' 1
e
22 h
Mittel
d
e
Mittel
i
n/ ?00 NaOH
n/ 3m) NaOH
109
166
137
1,20
0,87
0,97
2
^/too J»
n /eoo yf
147
218
182
1,62
1,14
1,28
3
, (>oo J*
n ■
; 11 • 1 r.oo yy
118
220
169
1,30
1.15
1,20
4
physiol Nad
physiol. XaCl
91
192
141
1.00
1.00
1,00
5
WlOOO H 2 S0 4
1600
121
58
89
1,33
0,30
0,63
6
11 i
11 i 400 >>
^ /goo yy
114
76
95
1.25
0:40
0,67
7
^/soo y y
^ a 00 yy
72
91
81
0,80
0,47
0;57
Serie IV B. Die Saureversuche anlangend, ergibt sich aus der
Tabelle VI, daB die Indices fur die Subserie d, wo die Bakterien liber
8 Stunden der Einwirkung der Saure ausgesetzt gewesen, zwischen 1,33
und 0,80 liegen oder im Mittel 1,13, also nur wenig liber 1 betragen. In
der Subserie e mit der Einwirkungsdauer der Saure von 22 Stunden be-
wegen sich die Indices der betreffenden Versuche zwischen den Werten
0,30 und 0,47 und betragen im Mittel bloB 0,39. In diesen beiden Sub-
serien liegen die Indices der Saureversuche durchschnittlich zwischen 0,57
und 0,67. Vergleichen wir dies Ergebnis mit demjenigen der entsprechenden
Saureversuche in den Subserien a, b und c der Tabelle IV, so tritt ein
groBer Unterschied hervor. In diesen, wo die Einwirkungsdauer der Saure
auf die Bakterien eine kiirzere, 1 Minute bis 3 Stunden 25 Minuten ist,
betragt der durchschnittliche Index fur die Versuche 5, 6 und 7 etwa 1,62.
Der die Phagocytose befordernde EinfluB der Saure,
welcher in den Versuchen mit einer verhaitnismafiig kurzen
Einwirkungsdauer der Saure auf die Bakterien so schon zutage
trat, hat in den Versuchen mit besonders langer Einwirkungs¬
dauer nicht nur abgenommen, sondern er ist in dem Versuche
mit 22-stiindiger Einwirkung auf die Bakterien sogar in das
Gegenteil umgeschlagen und wirkt nunmehr irgendwie hinder-
lich auf den phagocytaren Vorgang. Die Ursache dieser Ver-
anderung ist nicht schwer zu erraten.
Es war schon in einigen friiheren Versuchen aufgefallen
und wurde beim Erortern der Ergebnisse der Tabelle III auch
hervorgehoben, daB die bei langer dauernder Einwirkung der
Go^ 'gle
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
501
S&ure auf die fiakterien eiotreteode Agglutination der letzteren
den phagocytHren Vorgang beeintr&chtigt. Dies tritt besonders
deutlich hervor in den Subserien d und e der Tabelle VI, wo
die Bakterien wShrend 8 Stunden 25 Minuten bzw. w&hrend
22 Stunden der Einwirkung der S&ure ausgesetzt waren, ebe
sie mit den Leukocyten zusammengebracht wurden. In den
betreffenden Pr¶ten findet man nur ganz ausnahmsweise
einzelne freie Staphylokokken hier und da zwischen den Blut-
kbrperchen; die meisten Bakterien liegen zu groBen Haufen
zusammengeballt. Es leuchtet ein, dafi unter solchen Um-
standen die Bedingungen fiir eine gleichm&Bige Phagocytose
nicht mehr vorhanden sind, da ja Bakterien nicht mehr alien
Leukocyten in gleich hohem Grade zu Gebote stehen.
Beim Durchmustern der Praparate solcher Versuche findet
man auch, daB die meisten Leukocyten leer sind; an anderen
dagegen konnen oft Unmassen von Staphylokokken verankert
sein. Dies Verhalten erschwert die Z&hlung der Bakterien
und ist somit geeignet, die GleichmSBigkeit der erzielten Er-
gebnisse in unvorteilhafter Weise zu beeinflussen. Unbestreit-
bar ist aber klar, daB die einmal schon eingetretene Agglu¬
tination der Bakterien fiir die regelrechte Verankerung der-
selben an das Leukocytenplasma gewissermaBen hinderlich ist,
wie dies besonders mit den n/ 40 o und n/ 200 H 2 S0 4 -Losungen
bei linger dauernder Einwirkung der S&ure auf die Bakterien
deutlich zum Vorschein kommt. Eine Zusammenstellung der
Mittelwerte der Phagocytosezahlen und der Indizes der resp.
NaOH-Versuche und der H 2 S0 4 -Versuche — wie sie in der
Tabelle VII durchgefiihrt ist — verdeutlicht das oben Gesagte.
Tabelle VII.
Mittelwerte bei einer
Einwirkungsdauer von
a
b
c
d
e
i'
65'
3 b 25'
8 h 45'
22 b
NaOH-Versuche JPbagocytosezahl
N aCl-Versuche Phagocytosezahl
H,S0 4 -Versuche j^ocytosezahl
65
1.24
52
154
2,91
75
1,15
65 i
J
83
1,32
5S
138
2,38
126
1.37
91
102
1,13
205
1,05
192
75
0,39
Zetachr. L lmmunitlitsforschung. Orig. Bd. XIV. 35
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502
Max Oker-Blom,
Im ganzen liefert das Verhalten der Phagocytosezahlen
selber in den Versuchen rnit verschieden langer Einwirkungs-
dauer der betreffenden Flflssigkeit auf die Bakterien ein
besseres Bild von dem EinfluB der resp. Agentien auf den
phagocytaren Vorgang als die entsprechenden Indices, welche
letztere noch von den eventuellen Veranderungen der Phago¬
cytosezahlen in den NaCl-Versuchen beeinfiufit werden. Wir
sehen, daB die Phagocytosezahlen in den Saureversuchen mit
der Einwirkungsdauer allmahlich abnehmen, wie es die Zahlen
154, 138, 102 und 75 zeigen. Es kann somit als festgestellt
angesehen werden, daB mit dem Eintreten der Agglutination,
welche in den Saureversuchen mit der Zeit vor sich geht, die
Verankerung der Bakterien an das Leukocytenprotoplasma
erschwert wird.
Andererseits konnte es auch moglich sein, daB die Agglu¬
tination den phagocytaren Vorgang befordert, wenn die Bak¬
terien eben in der Agglutination begriffen sind, als sie den
Leukocyten zum Phagocytieren dargeboten werden. Vielleicht
kbnnte die ungewohnlich starke Zunahme der Phagocytose
mit steigender Konzentration der auf die Bakterien ein-
wirkenden Saurelosung in den Versuchen 5, 6 und 7 der
Serie V, Tabelle VIII, in dieser Richtung sprechen.
Tabelle VIII.
Versuch
Bakterien
vorbohandelt
Konzentration
der Bakterien-
Blutkorperch.-
Mischung
Phagocvtose-
zahl
Index
wiihrend
mit
i
11
I+II
1
11
Mittel
il
GO Min.
n/ >00 NaOH
n/ 400 NaOH
198
249
442
0,74
0,86
0.80
2 1
62
»
^ /400
11 > 800 11
198
818
506
0.74
1,09
0,92
3
64
1000 11
1 ^ 2000 11
258
843
596
0.99
1.19
1,09
4 i
66
physiol. NaCl
1 physiol. NaCl
262
288
550
1,00
1.00
1,00
51
68
n /l0 oo
1 20U0 H.,S0 4
1 448
559
1002
1.69
1,94
1,82
6 i
70
n /iQO 11
in/
11 ROO V
, 586
677
1268
2.25
2.00
2,12
7 !
72
»
/? 00 11
i 11 / 400 11
1 728
970
1493
2,76
3.37
3,06
Seric V. In diesen Versuchen war allerdings der Konzentrations-
unterschied zwischen der Fliissigkeit, deren Einwirkung die Bakterien aus-
gesetzt waren, und der sehlieBliehen Misehung, in der die Phagocytose sich
vollzog, grower als in den vorigen Versuchen. Auf die Frage von einera
etwaigen EinfluB seitens der Agglutination der Bakterien eben wiihrend
der Zeit der stattfnidenden Phagocytose wird unten noch zuriick-
zukommen sein.
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
503
Es fragt sich dann weiter, inwiefern das Alkali einen
besonderen EinfluB auf den phagocytaren Vorgang auszutlben
vermag, wenn die Bakterien vor der Vermischung mit den
Leukocyten seiner Einwirkung ausgesetzt werden. Aus dem
in den Tabellen I, II, III, IV und VI vorgefilhrten Material
ist ersichtlich, daB der Index fQr die NaOH-Versuche — die
Ergebnisse der Tabelle II ausgenommen — tiberall etwas
iiber 1 betragt. Es scheint also, als ob das Alkali in den
betreffenden geringen Konzentrationen von resp. n/ 10 o<b n/ 400
und n/ 20 o — wenn die Bakterien im voraus der Wirkung der
Losungen ausgesetzt werden — einen geringen befOrdernden
EinfluB auf die Phagocytose ausiibte. Diese Vermutung wird
noch gestiitzt durch die mit der Dauer der Einwirkungszeit
steigenden Phagocytosezahlen, die in der langen Serie IV A
und B (Tabelle IV und VI, deren Ergebnisse in der Tabelle VII
zusammengestellt sind) zum Vorschein kommen.
In Uebereinstimmung mit den Auseinandersetzungen im
Anfang dieses Artikels miissen wir dies Verhalten theoretisch
etwa folgendermaBen begriinden. Wenn die Bakterien in die
NaOH-Losung gebracht werden, so wird ihre natiirliche Nega-
tivitat zunSchst etwas erh6ht: erste Phase der Alkaliwirkung.
Allmahlich wird aber diese Negativitat — durch Adsorption
von Alkali oder irgendwie sonst — vom Alkali zuriickgedrangt
bzw. in positiver Richtung verschoben: zweite Phase der
Alkaliwirkung auf die Bakterien. Beim Vermischen der
alkalisierten Bakterien mit der Leukocytenaufschwemmung
sinkt sodann die Alkalinitat der Mischung, und die Bakterien
treten somit in dem Augenblick, wo der phagocytare Vorgang
zu beginnen hat, mit einer relativen Positivitat auf.
Wenn die Blutkorperchen durch griindliches Auswaschen von an-
haftendem Serum befreit sind, so diirfte die Leukocytenaufschwemmung
als ziemlich neutral angeschcn werden konnen. und die Leukocyten haben
sich mit ihrem Medium gewissermaSen ins Gleichgcwicht gesetzt. Sobnld
sie alsdann mit der alkalischcn Fliissigkeit der resp. Baktericnsuspension
in Beriihrung kommen, werden sie im sclben Augenblick verhiiltnismiifiig
elektronegativ crscheinen miissen. Zu der Zeit, wo die Bakterien den
Leukocyten zum Phagocytieren dargcboten werden, miiBten somit in den
NaOH-Vers lichen die Bakterien mit einer elektropositiven, die Leukocyten
mit einer elektronegativen Ladling auftreten, und die bestehendc Potential-
diderenz sodann eine gegenseitige Anziehung der Kontrahenten bewirken
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504
Max Oker-Blom,
sowie eine Vcrankerung der Bakterien an das Leukocytenprotoplasma herbei-
fiihren. Wenn die eben skizzierten Verhaltnisse der zwischen Leukocyten
und Bakterien wirkendcn Anziehungskrafte den tatsachlichen entsprechen,
so ist zu erwarten, dafl die Umetiramung der Bakterien durch das Alkali
— von einer urspriinglichen Elektronegativitat in eine Elektropositivitat —
schwieriger resp. langsamer zu erzielen sein wird als eine Erhohung der
schon vorhandenen Elektronegativitat der Bakterien, wie sie der Saure-
zusatz bewirkt. Ein Blick auf die Tabelle VII, wo die Mittelwerte der
resp. NaOH-Versuche derselben langen Serie nach verschiedener Ein-
wirkungsdauer des Alkali auf die Bakterien angegeben sind, liiUt das schon
theoretisch zu erwartende Ergebnis deutlich wiedererkennen. Es zeigt sieh,
dafi die Phagocytosezahl der NaOH-Versuche, die in der Subserie a, irn
Vergleich mit derjenigen der entspreehenden H^SO^Versuche (154), be-
Bonders niedrig (65) ist, je mit der Einwirkungszeit des Alkali in stetigem,
ganz allmahlichem Steigen begriffen ist, wie es die Zahlen 65, 75, S3, 126
und 205 dartun.
Die entsprechenden Indices der NaOH-Versuche zeigen nicht dieselbe
BegelmaBigkeit wie die Phagocytosezahlen, was darauf ziiriickzufiihren ist,
daft die NaCl-Versuche, mit denen jene verglichen werden, gewisse Un¬
regel mafiigkeiten darbieten, und daS in den NaCl-Versuchen mit langer
Einwirkungsdauer der resp. Fliissigkeit auf die Bakterien die Phagocytose¬
zahlen eben falls allmahlich zunehmen.
In den bisherigen NaOH-Versuchen begegneten uns keine solchen
storenden Ereignisse, wie die Agglutination der Bakterien in den Siiure-
versuchen eins darstellt, und der Einflufi des Alkalis auf die Bakterien
kann somit, ohne Beeintriichtigung von seiten anderer sekundarer Faktoren,
den phagocytaren Vorgang befordern.
Wir haben also gefunden, dafi sowohl H 2 S0 4 , wie auch
NaOH in Konzentrationen von n/ 200 , n/ 400 und n/ 1000 , falls die
Bakterien eine geeignet lange Zeit der Einwirkung dieser
Stoffe ausgesetzt und sodann mit den Leukocyten in Bertthrung
gebracht werden, die Phagocytose melir oder weniger befordert,
wenn das Medium, in welchem die Phagocytose vor sich gehen
soil, ohne noch vollst&ndig neutralisiert zu werden oder die
Reaktion zu wechseln, eine niedrigere Konzentration bekommt
als die Fliissigkeit, worin die Bakterien sich bisher befanden.
In Uebereinstimmung mit den oben erorterten theoretischen
Betrachtungen, scheinen die erzielten Ergebnisse darauf zu-
riickgefiihrt werden zu konnen, daB die betreffenden Stoffe
bei der gegebenen Reihenfolge, in welcher einerseits die
Bakterien, andererseits die Leukocyten ihrem EinfluB aus¬
gesetzt werden, die elektrischen Ladungen der resp. zelligen
Elemente in der Art verandern, daB die Potentialdifferenzen
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma. 505
zwischen den Kontrahenten bedeutender werden, welcher Um-
stand — wenn die tatigen Anziehungskrfifte hierbei eben in
den herrschenden Potentialdifferenzen stecken — mit kausaler
Notwendigkeit zu einer gesteigerten Verankerung der Bakterien
an das Leukocytenprotoplasma ftihren muB.
Eine Ausnahme von dicscr Regel machen indessen die NaOH-Versuche
der Serie II, in denen die Indices regelraafiig etwas unter 1 stehen. Es
wurde schon oben angodeutet, dafi die Bakterien, wenn sie der Einwirkung
des Alkalis ausgesetzt werden, auf einer bestimmten Stufe dieser Einwirkung
fiir den phagocytaren Vorgang gewissermaflen indifferent werden konnen.
Der erste Einflufi des Alkalis auf die von Hausc aus elektronegativ auf-
tretenden Bakterien ist wohl der, dafi sie zuniichst verhiiltnismafiig starker
elektronegativ erscheinen. Sodann mufi es gewifi zu allmiihlicher Neu¬
tralisation ihrer elcktronegativen Eigenschaften kommen, und die Bakterien
durchlaufen eine neutrale bis schwach elektropositive Stufe, ehe sie scbliefilich
geniigend alkalibcladen sind, um mit ausgepriigter Elektropositivitat auf-
treten zu konnen. Es kann ja sein, dafi die Dauer der Vorbehandlung in
der Serie II eben zur Entwicklung dieser intermediiiren Stufe gefuhrt hat,
und die Bakterien daher weniger intensiv von den Leukocyten begehrt
worden sind. Ein gleiches Verhalten finden wir auch hier und da in den
Tabellen VI und VIII.
Es dtirfte also einer im Augenblick des Zusamroenbringens
der beiden Kontrahenten erfolgenden Herabsetzung der Kon-
zentration des Mediums hinsichtlich des bisher auf die Bakterien
einwirkenden Stoffes eine grofie Bedeutung fflr das Zustande-
kommen bzw. fflr die Zunahme der Verankerung der Bakterien
an das Leukocytenprotoplasma zuzuschreiben sein. Wenn dies
richtig ist, so mflBte eine bei diesem -Zeitpunkte erfolgende
Herabsetzung der Konzentration des betreffenden Stoffes an-
n&hernd bis auf Null eine noch bedeutendere Steigerung der
Phagocytose zur Folge haben. Wie es sich hiermit verh<,
das wollen die Tabellen IX—XI zeigen.
Die lange Serie IV, deren Material zum Teil schon in
den Tabellen IV und VI angeftlhrt worden ist, wurde im
Hinblick auf die vorliegende Frage derart als Parallelversuche
angeordnet, daB Versuche mit neutralisiertem Medium
verglichen werden konnten mit solchen, wo die Konzentration
des Mediums durch das Zusammenbringen der Bakterien-
suspension mit der Leukocytenaufschwemmung nur weniger
herabgesetzt wurde. Da die betreffenden je parallel gehenden
Versuche nicht ganz gleichzeitig angestellt werden konnten,
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506
Max Oker-Blom,
ging immer der Versuch mit dem neutralisierten Medium dem
anderen voraus, so daB die Einwirkungsdauer des resp. Stoffes
in den ersten Versuchen durchgehend um 15 Minuten kflrzer
war als in den letzteren. Wenn sich aus diesem Zeitunter-
schied ein ungleich wirkender Faktor ergSbe, so wflrde er
also der Phagocytose derjenigen Versuche Vorschub leisten,
in denen das Medium nicht neutralisiert wurde.
Serie IV C. Die Neutralisierung wurde in der Art bewerkstelligt,
dafl in die Kapillarpipette in nachstehender Reihenfolge eingesogen wurden
gleiche Teile von Blutkorperehenaufschwemmung, Bakterien in z. B. n/ ?00
H 5 S0 4 , sowie entsprechend konzentrierte NaOH-Losung bzw. vice versa.
Inwieweit hierbei wirklich eine voile Neutralisierung erzielt wurde oder
nicht, wurde nicht besonders mit Reagentien gepriift. Da aber von dem
den Bakterien zugefiigten Stoff ein Teil entweder physikalisch oder sonstwie
gebunden sein diirfte, bo ist zu erwarten, daB die Neutralisation eher etwas
zu weit als zu wenig weit gegangen sein und somit in den Saureversuchen
zu einer unbedeutenden Alkalinitiit, in den Alkaliversuchen zu einer ge-
linden Aciditiit gefiihrt haben diirfte (Tabelle IX). Ich komme spater
hierauf zuriick.
Tabelle IX.
■Sj
I
0)
>
Bakterien
Bakterien-
Phagocytosezahl bei
vorbehandelt Blutkorperchen-
mit laufschweinmung
Kin wirkungsdauer von 1
b j c i d | e
50' 3 h 10'l8 h 30' f 22 b
Mittel
Index
e ! Mittel
!
1 !n/ too NaOH
2 j^/400 v
^ i n iooo y»
4 'physiol. NaCl
5 !n/iooo H^0 4
® 1^/400 »
^ i n /»00 »
| beim Zu-
Jsammenbnngen
) neutralisiert
| beim Zu-
[sammonbringen
J neutralisiert
2G2 I 363 284
05 I 58 91
263 I 683 318
475 I 558 j 176
426 | 399 I 142
In der Tabelle IX werden zunachst
221 1 429 514
232 j 666 ! 210
300 ! 366 3,40 7,40 5,65:1,56! 3,62
287 349 3,57 11,48 2,31 1,50| 3,45
272 295 4,03i 6.26 3,1211,41 2,92
192 101 1.00 1,001,001.00. 1,00
55, 331 4,12 11,78 3.49 0,29' 3,27
49 1 314 7,311 9,62 1,9310,26: 3,11
47 I 253 6,37j 6,88,1,57*0,25] 2,50
nur die Versuche mit neutrali-
siertem Medium an gefiihrt. Zu bemerken ist, daB als Vergleichsversuche
die in den Tabellen IV und VI schon angefiihrten Versuche mit physio-
logischer NaCl-Losung dienten, in denen die Einwirkungsdauer auf die
Bakterien also etwa 15 Minuten liinger war als in den entsprechenden Sub-
serien der Tabelle IX.
Sowohl in den Versuchen 1—3, in denen die Bakterien der Ein-
wirkung von Alkali, als auch in den Versuchen 5—7, in denen sie der
Behandlung mit Siiure ausgesetzt gewesen, wird im allgemeinen eine Er-
hohung der Phagocytose im Vergleich mit den Ergebnissen derjenigen
Versuche, in denen das Medium die ganze Zeit lediglich aus physiologischer
Kochsalzlosung bestand, beobaehtet. Eine Ausnahme von dieser Regel
machen die Versuche 5—7 der Subserie e, wo die Bakterien wahrend
22 Stunden der Einwirkung der Siiure ausgesetzt wurden.
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Bakterien veran kerung an das Leukocy ten protoplasma.
507
Abgesehen von den Phagocytosezahlen reap, den Indices dieser drei
Saureversuche der Subserie e, tritt der phagocytare Vorgang hier stellen-
weise mit ganz erstaunend hohen Werten auf. Schon in der Subserie b,
mit einer Einwirkungsdauer der resp. Agentien von 50 Minuten, weisen
die NaOH-Versuche die Indices 3,40—4,03 und die H t S0 4 -Versuche sogar
die Werte 4,12, 7,31 und 6,37 auf. Diese Werte bleiben indessen noch
ganz im Schatten im Vergleich mit den Indices fur die Subserie c, wo die
Bakterien wiihrend 3 Std. 10 Min. den betrefienden Agentien ausgesetzt
gewesen sind. Hier treten in den NaOH-Versuchen Indices auf, welche
die Hohe bis zu 7,40 und 11,48, in den H 1 S0 4 -Versuchen bis zu 9,62 und
11,78 erreichen. In der darauf folgenden Subserie d mit der Einwirkungs¬
dauer von 8 Std. 30 Min. nehmen die Indices schon wiederum recht be-
deutend ab, um schlieBlich in der Subserie e mit der Einwirkungsdauer
von etwa 22 Stunden recht anspruchslose und besonders in den Saure-
versuchen dieser Subserie ganz niedrige Werte anzunehmen.
Es wurde schon oben auf den den phagocytaren Vorgang beeintraeh-
tigenden EinfluB der Agglutination der Bakterien hingewiesen. Dieser
Faktor koramt hier zu einem sehr bedeutenden Ausdruck. Nicht nur in
den Siiureversuchen der Subserie d, noch mehr in denjenigen der Subserie e
findet man die freien Bakterien stark agglutiniert; dasselbe ist, obgleich in
etwas geringerem Grade, auch in den entsprechenden Alkaliversuchen der-
selben Subserien der Fall. Am schliminsten steht es in der genannten
Beziehung mit den Siiureversuchen der Subserie e, wo die Bedingungen
fur die Phagocytose durch die starke Agglutination der Bakterien zur Zeit
ihrer Vermischung mit den Leukocyten in besonders hohem Grade schon
vereitelt worden sind. In Anbetracht der groBen Veranderungen, welche
die resp. Indices in den Subserien mit verschieden langer Einwirkungs¬
dauer der betrefienden Agentien auf die Bakterien erfahren, gewahren die
Mittelwerte derselben fiir die verschiedenen Konzentrationen der gebrauchten
Losungen kein einheitliehes Bild von der Bedeutung dieser Konzentrationen
fur den in Kede stehenden Vorgang.
Dagegen bieten, wie aus der Tabelle X erhellt, die Mittelwerte je
dreier Versuche, einerseits mit NaOH, andererseits mit H t S0 4 , je fiir ent-
sprechend lange Einwirkungsdauer der betrefienden Stoffe auf die Bakterien,
ehe sie mit den Leukocyten in Beriihrung gelangen, eine gewisse Ueber-
sichtlichkeit iiber die betrefienden Vorgiinge.
Tabelle X.
Die Bakterien- und die Blut-
korperchenaufschwemmung beim
Zusammenbringen neutralisiert
Mittelwerte bei der Einwirkungs¬
dauer von
b
50'
3- C lO' |
d
8 h 30'
e
22 h
NaOH-Versuche
Phagocytosezahl
238
486
336
286
Index
3,67
8,38
3,69
1,49
NaCl-Versuche
Phagocytosezahl
65
58
91
192
H o S0 4 -Versuche
Phagocytosezahl
390
547
212
50
Index
5,93
9,43
2,33
0,26
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508
Max Oker-Blom,
Die drei mit verschieden konzentrierten NaOH-Losungen angestellten
Versuche lassen den Umfang der Phagocytose, je nach der verschieden
langen Vorbehandlung mit den betreffenden Losungen, in den reap. Zahlen
238, 486, 336 und 286 zum Ausdruck kommen; es ergibt sich, dafl die
Phagocytosezahl in dem Versuche, wo die Einwirtungsdauer etwa 3 Stunden
betragt, ihr Maximum erreicht hat; in den H 2 S0 4 -Versuchen, in denen die
Lebhaftigkeit der Phagocytose von den resp. Zahlen 390, 547, 212 und 50
angegeben wird, kommt ebenfalls ein Maximum in der Subserie c zum
Vorschein. Es scheint somit, unter den obigen Versuchsbedingungen,
irgendwo zwischen einer Einwirkungsdauer von etwa 1 Stunde und der
von 8 Stunden ein Optimum fur die Phagocytose zu bestehen, iiber dessen
nahere Lage diese Versuche jedenfalls keine genauere Auskunft geben.
Auficr von der Einwirkungsdauer der resp. Stoffe auf die Bakterien, diirfte
wohl dieses Optimum noch von der Konzentration der betrefienden Losungen
abhiingig sein. Das Material der Tabelle IX scheint in der Richtung zu
sprechen, daB das genannte Optimum bei der Vorbehandlung der Bakterien
mit einer konzentrierteren Losung von NaOH bzw. H,S0 4 schneller er¬
reicht wird und ebenfalls wiederum schneller voriibergeht, als wenn weniger
konzentrierte Losungen zur Anwendung kommen.
Es mag von Interesse sein, die Ergebnisse derjenigen Versuche
(Tabelle IX), in denen das Medium, beim Zusammenbringen der NaOH-,
bzw. H 2 S0 4 -behandelten Bakterien mit den Leukocyten, neutralisiert wurde,
mit den in bezug auf Einwirkungsdauer etwa entsprechenden Versuchen
(Tabelle IV und VI) direkt (d. h. ohne Vermittelung der Ergebnisse der
Nad-Versuche) zu vergleichen. Dieser Vergleich ist in der Tabelle XI
durchgefiihrt.
Tabelle XL
Mittelwerte der
Phagocytose-
zahlen der
Bakt. Blutk.-
Mischung
Einwirkungsdauer
a
1 '
b
50-65'
c
3 h 10-25'
d
8 h 30—45'
e
ca. 22 b
NaOH-Versuche
A alkalisch
65
75
i 83
126
205
B neutralis. 1
_
238
1 486
336
286
B/A
— 1
3,2
5,9
2,7
1,4
H,S0 4 -Versuche
A sauer
154
—
j 138
102
75
iB neutralis.
—
390
547
212
50
[B/A
—
—
4,0
2,1
0,7
Wie ersichtlich, bewirkt die Neutralisierung des Mediums (Versuche B)
eine hochgradige Steigerung der Phagocytose iiber dasjenige MaB hinaus,
welches schon bei einer Herabsetzung der Reaktion der Bakteriensuspension
auf etwa ein Drittel (Versuche A) zum Vorschein kommt. In den NaOH-
Versuchen wird in der B-Serie bei einer Einwirkungsdauer des Stoffes auf
die Bakterien von 50—65 Minuten (die Werte B/A) 3,2mal, bei Einwirkung
wiihrend 3 Stunden 10—25 Minuten 5,9mal, bei Einwirkung wiihrend
8 Stunden 30—45 Minuten 2,7mal, und bei etwa 22-stiindiger Einwirkung
l,4mal mehr, als bei alkalischer Reaktion des Mediums phagocytiert. In
den H 2 S0 4 -Versuchen betragen die Werte B/A fiir die Subserie c 4,0, fur
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma. 509
die Subserie d 2,1, wahrend in den Versuchen rait 22-stundiger EinwirkungB-
zeit des Stoffes auf die Bakterien in dem neutralisierten Medium weniger
als bei saurer Beaktion desselben phagocytiert wird.
Von dem zuletzt genannten Sachverhalte abgesehen, der
ja in besonders hohem Grade von sekund&ren Umstfinden be-
dingt wird, ergibt sich somit, dafi die neutrale Reaktion des
Mediums fflr die Phagocytose die vorteilbafteste ist, und wir
kdnnen folglich in dieser Beziehung der Auffassung von
Noguchi, Hamburger und Hekma vollstfindig bei-
stimmen. Damit ist aber keineswegs gesagt, dafi das Alkali
und die Sfiure den phagocyt&ren Vorgang nicht ihrerseits,
und zwar in einer besonderen Art zu befordern vermogen,
wie wir ja im obigen schon mehrmals zu beobachten Gelegen-
heit gehabt baben.
Bevor ich zu dem Studium des Einflusses iibergehe, den die Saure
und das Alkali in der hier in Bede stehenden Beziehung auf die Leuko-
cyten ausiiben, mogen noch ein paar Versuchsserien vorgefiihrt werden,
um zu zeigen, wie sich die Phagocytose gestaltet, wenn die Bakterien, vor
ihrer Beimischung zu den Leukocyten, mit konzentrierteren Losungen der
betreffenden Stoffe vorbehandelt werden.
Tabelle XII.
a
B
A
o
P
E
Bakterien
vorbehandelt
Konzentrat.
der Bak-
terien-Blut-
korperchen-
Mischung
Einwirkungs-
dauer 45 Min.
Bakterien
und Blut-
korperchen
aufschwem-
mung
Einwirkungs-
dauer 30 Min.
QJ
>
mit
Phago¬
cytose¬
zahl
Index
Phago¬
cytose¬
zahl
Index
1
2
3
4
5
6
7
physiol. NaCI
n/ioo H 2^0 4
n l 100 »
n /«o »
n/«o »
n/40 yy
n /jo yy
physiol. NaCI
n/ 600 H,S0 4
n/ 30 o yy
^/■»40 yy
n /iao yy
n '
M <i?o yy
n /eo yy
151
376
279
93
99
21
33
1,00
2,49
1,85
0,62
0,66
0,14
0,22
beim
Mischen
neutrali-
siert
151
351
317
172
312
254
484
1,00
2,33
2,10
1,14
2,07
1,68
3,21
Serie VI. In der Tabelle XII stellt die Phagocytosezahl der Ver-
suche 1, wo sich der Vorgang von Anfang bis zu Ende in physiologischer
Kochsalzlosung vollzieht, den Mittelwert der beiden Subserien A und B
dar und bezieht sich somit auf 200 bcobachtete Leukocyten. Um Ergeb-
nisse zu erhalten, die mit der Parallelserie B zu vergleichen wiiren, wurde
in der Subserie A beim Mischen der Bakteriensuspension mit der Blut-
kdrperchenaufschwemmung noch ein gleiches Volumen physiologischer Koch¬
salzlosung in die Pipette gesogen. Die Konzentration, unter der die Phago¬
cytose hier vor sich geht, entspricht somit dem Drittel derjenigen, unter
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510
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deren EinfluO die Bakterien vordem gewesen sind. Es verdient bemerkt
zu werden, daS die Fliissigkeit der Pipette in dem Versuche 7, der Kon-
zentration n/ 60 H,S0 4 entsprechend, beira Herausnehmen aus dem Thermo-
staten mififarben und braun war.
Es erhellt aus der Tabelle XII, Subserie A, dafl die Phagocytose, die
in den Versuchen 2 und 3 recht bedeutend iiber die in der physiologischen
Kochsalzlosung 6tattfindende steigt, sodann in den Versuchen 4 und 5, w r o
die Bakterien einer Saurekonzentration von n/ w resp. n/ ao ausgesetzt worden
sind, und wo die Phagocytose sich in einer Fliissigkeit zu vollziehen hat,
deren Konzentrationsgrad etwa n/ 240 resp. n/ 180 H 2 S0 4 betriigt, rasch ab-
nimmt, um schlieBlich in den Versuchen 6 und 7, wo die Konzentrationen
n/ 40 und n/ 20 bzw. n/ i70 und n/ rt0 H 3 S0 4 zur Einwirkung gelangen, auf
einen ganz winzigen Wert zu sinken. Oben wurde schon darauf hinge-
wiesen, date die von der Siiure bewirkte Agglutination der Bakterien die
Phagocytose in unliebsamer Weise zu beeintriichtigen vermag; so verhalt
es sich auch hier in den Versuchen 4—7, wo es beim Durchmustern der
Priiparate kaum mehr gelingt, einzeln oder in kleinen Gruppen von je drei
bis fiinf auftretende Kokken zu Gesicht zu bekommen.
Vergleichen wir hiermit die Ergebnisse der Subserie B, in denen die
Bakterienaufschwemniung beim Zusammenbringen mit den Leukocyten in
der Art neutralisiert wurde, date ein gleiches Volumen einer entsprechend
konzentrierten NaOH-Losung mit in die Pipette genommen wurde, so be-
gcgnen uns gewissermaflen recht bunte Verhaltnisse. In den Versuchen 2
und 3, wo die Konzentration der Saure n/ 200 und n/ 100 betriigt, scheint,
wie es die entsprechenden Indices 2,33 gegen 2,49 in der Subserie A,
sowie 2,10 gegen 1,85 zeigen, die Neutralisierung der Fliissigkeit beim
Zusammenbringen der Bakterien und Leukocyten zunachst keine groteere
Roile zu spielen. Betreflend die Versuche 4—7 mit den konzentrierteren
Siiurelosungen ist hervorzuheben, dafl die Neutralisation der Mischung die
Phagocytose bis auf das Doppelte, Dreifache und noch mehr steigert im
Verglcich mit demjenigen Ma6, welches bei bloBer Herabsetzung der
Konzentration der Mischung auf ein Drittel der urspriinglichen zur Be-
obachtung gelangt. LTntereinander verglichen, zeigen aber diese Versuche
ein recht wechselndes Verhalten, was in Anbetracht dessen, dafl Agglu¬
tination der Bakterien und Phagocytose hier neben- resp. vor- und hinter-
einander vor sich gehen, nicht besonders befremdend erscheinen diirfte.
Serie VII. In den Versuchen der Tabelle XIII waren die Bakterien
etwa 2 Stunden lang dem Einflusse der resp. Stoffe ausgesetzt, ehe sie den
Leukocyten dargeboten wurden. Die Versuchsergebnisse sind hier noch
ungleichmaBiger, als in der vorigen Tabelle, was in Anbetracht der langeren
Einwirkungsdauer der Agentien in steigender Konzentration, in der Natur
der Sache liegen diirfte. In den Versuchen 6 und 7 der Subserie A ist
auch hier ein starkes Niedergehen der Phagocytose zu bemerken, die in
den entsprechenden Versuchen der Subserie B, wo die Fliissigkeit beim
Mischen der Blutkorperchen mit den Bakterien neutralisiert wird, hierdurch
nicht mehr in demselben Matte, wie bei der kiirzeren Einwirkungsdauer
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511
Tabelle XIII.
Versuch ||
Bakterien
rorbehandelt
mit
A
B
Konzentrat.
der Bak¬
terien-Blut-
korperchen-
Mischung
j Einwirkungs-
dauer 2 h 15'
Blutkorper-
chen und
Bakterien-
aufschwem-
mung
Einwirkungs-
dauer 2 h
Phago-
cytose-
zahl
Index
Phago-
cytose-
zahl
Index
1
2
3
4
5
6
7
i
physiol. NaCl
oo H*S0 4
n /ioo >?
80 >> 1
**/oo n |
n Ao V
^/•20 jy 1
physiol. NaCl
n /«oo h,so 4
^ Aoo yy
n /?io yy
11 1 180 V
n f
11 ! i/o yy
^/«o yy
54
123
53
253
150
21
23
1,00
2,26
0,98
4.69
2.78
0.39
0,43
beim
Mischen
neutral i-
siert
54
104
77
90
72
83
75
1,00
1,93
1,43
1,67
1,33
1,54
1,39
in den betreffenden Versuchen der Tabelle XII, wieder in die Hohe ge-
trieben werden kann, und wir konnen kaum umhin, fiir die vielen Un¬
regel maBigkeiten der in der Tabelle XIII dargestellten Ergebnisse zum Teil
die stattfindende und bereits stattgefundene Agglutination der Bakterien
rerantwortlich zu machen.
SchlieBlich geben noch die Ergebnisse der Serien VIII—X, Tabellen
XIV—XVI Auskunft dariiber, wie sich die Phagocytose gestaltet, wenn
die Bakterien der Einwirkung starker konzentrierten NaOH-Losungen aus-
gesetzt werden, ehe sie den Leukocyten zum Phagocytieren dargeboten
werden.
SerieVIII. Es wurden die Bakterien wahrend etwa einer Stunde
dem EinfluB der resp. Losungen iiberlassen und sodann mit den Leuko¬
cyten zusammengebracht (Tabelle XIV).
Tabelle XIV.
Ver¬
such
Bakterien
vorbehandelt
mit
Konzentration der
Bak terien-Bl u t korperchen -
Mischung
Einwirkungs
Phago-
cytosezahl
dauer 1 Btd.
Index
1
physiol. NaCl
physiol. NaCl
153
1,00
2
n/ ?00 NaOH
n/ 4 «o NaOH
105
0,69
3
n/,00 m
n ?oo yy
85
0,56
4
<o yy
11 f 160 yy
82
0.54
5
^ Ao
w i?o yy
54
0,35
6
n/ f
1I; 40 yy !
yy :
56
0,37
7
n /?o yy !
n 40
31
0,20
Oben (s. p. 502 ff.) ist bereits dargetan worden, daB, wenn die Bakterien,
ehe sie mit den Leukocyten in Beriihrung kommen, der Einwirkung be-
sonders verdiinnter NaOH-Lbsungen (n/ I0i)0 —n/ 200 ) ausgesetzt werden —
falls die Konzentration des Alkalis beim Mischen der Bakterien und der
Blutkorperchen nur bis auf die Hiilfte oder das Drittel des urspriinglichen
MaBes herabgeht — die Phagocytose Werte annimmt. deren Index bald
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512
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etwas fiber, bald ein wenig unter 1 steht. Aus der Serie VIII ergibt sich
nun, dafi mit steigender Konzentration der angewandten NaOH-Losung
die Phagocytose in imraer geringerem Umfange vor sich geht, um bei
einer NaOH-Losung von der Konzentration n/ 20 bis auf nur 20 Proz. von
der in physiologischer Kochsalzlosung stattfindenden herabzugehen.
Zu einem ahnlichen Ergebnis fuhrt auch die Serie IX, wo die Ein-
wirkungszeit der verschieden konzentrierten NaOH-Losungen auf die
Bakterien ebenfalls etwa 1 Stunde betrug. In dieser Serie wurden die
Versuche in zwei Parallelserien nebeneinander angestellt; in der Subserie A
wurde die Konzentration der resp. NaOH-Ldsung beim Mischen der
Bakterien mit den Leukocyten bis auf ein Drittel herabgesetzt, in der
Subserie B wurde sie neutralisiert (Tabelle XV).
Nach einer ganz unbedeutenden Steigerung der Phagocytose bei den
mafiig konzentrierten Losungen (Subserie A, Versuch 3; Subserie B r
Versuch 2) sinkt der Index unaufhorlich, obgleich hier etwas langsamer
als in der vorigen Serie. Im Mittel betriigt der Index in der Subserie A
0,63, in der Subserie B 0,68.
Tabelle XV.
A
B
o
E
Bakterien
vorbehandelt
Konzentration
der Bakterien-
Blut-
korperchen-
Mischung
Einwirkungs-
dauer ca. 60'
Bakterien-
Blut-
Einwirkungs-
dauer ca. 45'
Cj
>
mit
Phago-
cytose-
zahl
Lidex
korperchen-
Mischung
Phago-
cytose-
zahl
Index
1
2
3
4
5
6
7
physiol. NaCl
n/ioo NaOH
n /100 >»
n/no
»>
n/ 4 » »
“'90 7?
physiol. NaCl
n/« 00 NaOH
n/ 8 oo 77
n 240 77
11 180 77
'^/|20 77
|n/„o 77
77
59
83
04
26
34
30
1,00
0,77
1,08
0.83
0,34
0,44
0,38
beim
Mischen
neutrali¬
siert
77
91
57
52
33
37
43
1,00
1,18
0,74
0,67
0,43
0,47
0,56
| Im Mittel:
0,63 '
! 1 0,68
Es fragt sich nun: woher kommt dies Verhalten? Dasselbe hat sich
schon friiher (s. oben p. 503) bemerkbar gemacht. Nachdem die Bakterien
eine gewisse Zeit der Einwirkung von NaOH ausgesetzt gewesen sind,
und sich gewissermaBen mit diesem Stoffe geladen haben, befinden sie
sich — nach oben gegebener Bezeichnung — in der zweiten Phase der
Alkaliwirkung. Kommen sie nun beim Zusammenbringen mit den Leuko¬
cyten in ein Medium, das in bezug auf Alkali weniger konzentriert ist,
als jene Losung, so miissen sie somit nun mit einer relativ ausgesprochenen
Elektropositivitlit auftreten; in dem Augenblicke dagegen, wo die Phago¬
cytose zu beginnen hat, geraten die Leukocyten in die erste Phase der
Alkaliwirkung, d. h. ihre naturliche Elektropositivitat wird zunachst etwas
zuriickgedrangt. Dies alles sollte nun dahin wirken, dafi die Potential-
diflerenzen zwischen Leukocyten und Bakterien gesteigert erscheinen und
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Bakterien verankerung an das Leukocytenprotoplasma.
513
— der oben dargelegten Voraussetzung entsprechend — den phagocytaren
Vorgan g befordern miiBten.
Etwas Derartiges scheint nun in den Serien VIII und IX nicht zum
Ausdruck zu kommen, es fragt sich, warum denn dies nicht der Fall ist
Wenn die zwischen den Kontrahenten herrschenden Potentialdifferenzen
fiir den phagocytaren Vorgang irgendeine Rolle spielen, drangt sich ge-
wissermafien der Gedanke vor, dafi die Einwirkung des Alkalis auf die
Bakterien zur Zeit ihrer Vermischung mit den Leukocyten noch nicht so
weit fortgeschritten ist, da6 sie — in vollem Mafie — in der zweiten Phase
dieser Einwirkung sich befinden. In der Tat haben ja hier die Bakterien
gewisse Zwischenstufen zu passieren, um die zweite Phase vollstandig zu
eneichen. Das Alkali hat zuniichst die natiirliche Elektronegativitat zu-
ruckzudriingen; die Bakterien miissen umgestimmt werden; sie miissen zu
diesem Zwecke zuniichst den neutralen Zustand annehmen und sodann
allmahlich sich den elektropositiven Charakter aneignen. Auf diesera
Wege gibt es gewiB mehrere Stufen, und es wird wohl einerseits von der
Konzentration der angewandten Losung, andererseits von der Einwirkungs-
dauer abhangen, welche Ladung, qualitativ und quantitativ, die Bakterien
beim Zusammentreffen mit den Leukocyten haben. Unter diesen vielen
Ladungsstufen wird es denn auch solche geben miissen, welche die Bakterien
den Leukocyten ziemlich w'enig begehrenswert erscheinen und folglich die
Phagocytose sehr bescheiden ausfallen lassen.
Eine Bestatigung dieser Vermutung liefert in einem gewissen MaSe
die folgende Serie, wo die Einwirkungsdauer der resp. NaOH-Losungen
auf die Bakterien etwa 4 1 /, Stunde betrug und wo — nach den Ergeb-
nissen zu urteilen — die zweite Phase der Alkaliwirkung eingetreten ist.
Serie X. In der Subserie A werden die Bakterien wahrend 4 Stunden
45 Minuten, in der Subserie B wahrend 4 Stunden 30 Minuten der Einwirkung
der NaOH-Losungen ausgesetzt, ehe sie den Leukocyten zum Phagocytieren
dargeboten werden. In jener wird die Alkaleszenz im Augenblick der
Mischung mit den Blutkorperchen bis auf ein Drittel der bisherigen Kon¬
zentration reduziert, in dieser wird sie neutralisiert (Tabelle XVI).
Tabelle XVI.
A
Bakterien
vorbehandelt
mit
Konzentration
der Bakterien-
Blut-
korperchen-
Mischung
Einwirkungs¬
dauer 4 h 45'
Phago¬
cytose-
zahl
Index
Bakterien-
Blut-
korperchen-
Mischung
1
physiol. NaCl
physiol.
NaCl
^ 11 700
NaOH
n/eoo NaOH
O
n 100
»4oo
4 Wro
n />40
yy
0
n .-■««
11 180
yy
O 11 40
yy
n 190
yy
(
11 '20
yy
n L
yy
57
70
65
93
153
120
63
1,00
1,23
1,14
1,03
2,70
2,11
1,11
beim
Mischen
neutrali¬
siert
B
Einwirkungs¬
dauer 4 h 30'
Phago-
cytose-
zahl
Index
57
1,00
121
2,11
73
1.28
85
1,50
85 1,50
61 ! 1,07
43 | 0,75
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In der Subserie A, wo die Konzentration der angewandten NaOH-
Losung beim Mischen von Bakterien und Leukocyten auf ein Drittel
herabgesetzt wird, bewirkt sie eine unverkennbare Begunstigung der Phago-
cytose, die mit steigender Konzentration der angewandten Losung bis zu
n/ eo immer zunimmt, wie es die entsprechenden Indices 1,23,1,14,1,63, 2,70
zeigen. Wir sind somit, bei den hier obwaltenden Versuchsbedingungen,
worunter die relativ lange Einwirkungsdauer von nicht unwesentiicher
Bedeutung sein diirfte, in der Lage, zu bestatigen, daS der phagocytare
Vorgang dadurch entschieden befordert wird, da6 die Bakterien geniigend
stark mit Alkali geladen werden, ehe sie mit den Leukocyten zusammen-
treffen.
Es erscheint aber etwas befremdend, dafi in den Versuchen 6 und 7,
wo noch stiirkere NaOH-Losungen zur Anwendung gelangen, die Phago-
cytose wiedemm abnimmt. Die Erkiarung dieses Riickganges des phago-
cytiiren Vorganges bei Anwendung von n/ 40 und besonders von n/ ?0 NaOH
liegt aber auf der Hand; die Bakterien sind in den betreffenden Praparaten
agglutiniert, weniger zwar in dem Versuch 6, ausgesprochen stark aber
im Versuch 7, ein Umstand, auf dessen beeintrachtigende Bedeutung fiir
die Phagocytose schon oben beim Erortern des gleichen Verhaltens in den
yaureversuchen hingewiesen worden ist.
In der Subserie B, wo das NaOH beim Zusammenbringen von
Bakterien und Blutkbrperchen neutralisiert wurde, macht sieh ein ent-
sprechendes Verhalten bemerkbar; jedenfalls erreicht hier der Index schneller
sein Maximum; er betriigt ini Versuch 2 2,11, urn von da ab mit steigender
Konzentration allmahlich abzunehmen. Die giinstige Einwirkung der Neu¬
tralisation der Mischung wurde auch schon nebst Andeutungen, wie dies
theoretisch zu begrunden ware, betreffend die gleichartigen Versuche in der
Serie IV C hervorgehoben. Nun ergibt sich in dessen, daft diese begiinstigende
Einwirkung vom Versuch 4 an nicht mehr zum Vorschein kommt. Die
Erkiarung dieses Verhaltens liegt wiederum in der Agglutination der
Bakterien, welche sogar schon in den Praparaten vom Versuch 3 zu be-
ginnen scheint und mit steigender Konzentration der angewandten NaOH-
Losung beim Zufiigen der neutralisierenden biinrc leicht hervorgemfen wird.
Aus einer Zusammenfassung der Resultate derjenigen
Versuche, in denen Bakterien fur sich — in dem vorliegenden
Falle Staphylokokken — der Einwirkung verschieden kon-
zentrierter NaOH-L8sungen und H 2 S0 4 -Losungen ausgesetzt
wurden, ehe sie mit den Leukocyten in Beriihrung kamen,
ergibt sich etwa folgendes.
Falls Bakterien erst mit n/ 10 oo—n /200 NaOH-Losungen be-
handelt und nachher mit einer Aufschwemmung von Leuko¬
cyten in physiologischer Kochsalzlosung zusammengebracht
werden, wobei die Konzentration der Mischung auf etwa
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
515
n/ 2000 — n/400 NaOH herabgeht, so werden die Bakterien je nach
der Einwirkungsdauer der betreffenden Losungen entweder
etwas schlechter, meistens aber etwas besser phagocytiert, als
wenn alles von Anfang bis zu Ende bloB in physiologischer
Kochsalzlosung vor sich geht. Wenn die Einwirkungsdauer
kurz ist, so ist die Phagocytosezahl im allgeraeinen geringer,
als wenn die Bakterien w&hrend l&ngerer Zeit, mehrerer
Stunden, dem EinfluB des Alkalis ausgesetzt gewesen sind.
Bei steigender Konzentration der NaOH-Losung nimmt der
phagocytare Vorgang jedenfalls allmShlich bedeutend ab, so
daB der entsprechende Index — wenn die Konzentration der
Lbsung, deren Einwirkung die Bakterien ausgesetzt werden,
etwa auf n/ 20 bzw. die der Bakterien-Blutkbrperchenmischung
auf etwa n/ 40 zu stehen koramt — auf einen ganz winzigen
Wert sinkt.
Wird aber die FlQssigkeit beim Zusammenbringen der
Bakterien und der Leukocyten neutralisiert, so zeigt sich, daB
die mit NaOH behandelten Bakterien entschieden besser als
in physiologischer Kochsalzlosung aufgeschwemmte Bakterien
phagocytiert werden. Fiir diejenigen Versuche, wo n/ 1000 —n/ 200
NaOH-Lbsungen zur Anwendung kamen, steigt die Pliago-
cytose unter diesen Bedingungen auf das 2 —5-fache (5,9)
desjenigen MaBes, welches bei bloBer Herabsetzung der Kon¬
zentration bis auf die Hfilfte bzw. das Drittel zum Vorschein
kommt. Dies tritt besonders dann deutlich hervor, wenn die
Einwirkung des NaOH auf die Bakterien etwas langer, drei
bis mehrere Stunden gedauert hat.
W r enn die Bakterien der Einwirkung von n/ 100 o—n /200
H 2 S0 4 -Losungen ausgesetzt und sodann zum Phagocytieren
dargeboten werden, so werden sie im allgemeinen mit groBerer
Begierde von den Leukocyten gefesselt, als wenn sie nicht
mit S&ure vorbehandelt worden sind. Mit steigender Kon¬
zentration der angewandten Saurelosung schiebt sich aber
ein die Phagocytose in mancherlei Hinsicht beeinilussender
Faktor ein, der in der eintretenden Agglutination der Bakterien
seinen Grund zu haben scheint. Wenn die Agglutination dem
phagocyttiren Vorgange nicht in den Weg kommt, so scheint
dieser mit steigender Konzentration der zur Vorbehandlung der
Bakterien gebrauchten Saurelosung zuzunehmen. Sind die
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Bakterien beim Zusammenbringen mit den Leukocyten teil-
weise schon agglutiniert, so wird die Phagocytose, je nach
dem schon erreichten Grade bzw. dem Fortschreiten der
Agglutination, beeintr&chtigt. Tritt die Agglutination aber
eben zur Zeit des Phagocytierens ein, so scheint sie denselben
in gewissem Malle befdrdern zu konnen.
Wird die Fliissigkeit beim Mischen der saurebehandelten
Bakterien und der Leukocyten neutralisiert, so wirkt dies auf
den phagocyt&ren Vorgang in hohem Grade fSrderlich ein,
solange keine schon eingetretene Agglutination der Bakterien
diese fbrdernde Wirkung hindert.
Auf die Frage, wie sich die Phagocytose gestaltet, wenn
die Leukocyten vor dem Zusammenbringen mit den Bak¬
terien der Ein wirkung der Saure Oder des Alkalis ausgesetzt
werden, indes ihnen die Bakterien dargeboten werden, ohne
vorher dem Einflull dieser Stoffe unterworfen gewesen zu
sein, beziehen sich die den Tabellen XVII—XIX zugrunde
liegenden Versuche.
Tabelle XVII.
Ver-
such
Leukocyten
vorbehandelt
mit
Konzentration
der Bakterien-
Blutkornerchen-
Miscnung
Pha^ocytosezahl nach
Einwirkung von
Index
10 Min.
II.
2Std.30Min.
i.
II.
i
n', 00 NaOH
n/ 400 NaOH
397
163
1,12
0,65
2
^/400
|^ 800 >»
370
207
1,10
0.82
3
^/lOOO
r* / 9000 M
—
226
—
0,89
4
physiol. NaCl phvsiol. NaCl
33G
257
1,00
1,00
5
WlOOO
n /»ooo
—
247
—
0,98
6
*^400 »
n/
“/boo
271
—
0,81
—
7
^/soo J)
n Aoo »
276
258
0,82
1,02
Serie XL Das Material der Tabelle XVII erlaubt kaum irgend-
welche Schlusse zu ziehen. In den Versuchen 1 und 2 der Subserie I,
wo die Leukocyten nur wiihrend 10 Minuten der Einwirkung des Alkalis
in der Konzentration von n/ aoo und n/ 400 ausgesetzt waren, scheint die
Phagocytose etwas besser als in der physiologischen Kochsalzlosung vor
sich zu gehen. Bei einer Einwirkungsdnuer derselben Losungen von
2 Stunden 30 Minuten erscheint sie wiederum weniger umfangreich. In
den Versuchen 6—7, wo die Leukocytenaufschwemmung vor dem Mischen
mit den Bakterien, mit entsprechenden H,S0 4 -Losungen versetzt worden
war, betriigt, der Index bei einer Einwirkungsdnuer von 10 Minuten 0,81
und 0,82; bei einer solchen von 2 Stunden 30 Minuten ist die Phagocytose
etwa derjenigen in physiologischer Kochsalzlosung gleich.
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
517
Etwas be8timmter kommt der EinfluB der betreffenden Stoffe auf die
Leukocyten in der fraglichen Beziehung zum Vorschein in der Tabelle XVII,
wo die Einwirkungsdauer bis auf 4 Stunden 45 Minuten ausgedehnt wurde.
Tabelle XVIII.
A
s
£
o
>
Leukocyten
vorbehandelt
mit
Konzentration
der Bakterien-
Blutkorperchen-
Mischung
Phagocytosezahl nach
Einwirkung von
Index
a
1'
b
75'
c
4 k 45' |
a
b
C
1 ’
n/ 200 NaOH
n/ 400 NaOH
86
127
178
0,63
0,93
1,30
2
W 400 '7
^/$O0 ?>
—
115
123
—
0,84
0,89
3
1000 »»
^ 1 '2 000
100
121
137
0,73
0,88
1,00
4 i
pnysiol. NaCl
physiol. NaCl
137
137
137
1.00
1,00
1.00
5
n/iooo H s S0 4
^/ 'J ()(H) Hj&0 4
165
143
203
1,20
1,04
1,48
6
^ 400 »
^J*(t 0 >>
204
138
212
1,49 1
1,00
1,55
7 1
W-joo »>
^ 400 V
152
162
271
1,11 j
1,18
1,99
Serie XII A. Um untereinander besser vergleichbare Indices zu
erhalteu, wurde in alien drei Subserien der Tabelle XVIII das Mittel der
Phagoevtosezahlen der Versuehe mit physiologischer Kochsalzlosung zum
Vergleich herangezogen. In diesen Versuchen, in denen die Konzentration
der resp. Fliissigkeit, deren Einwirkung die Leukocyten ausgesetzt waren,
beim Mischen mit den Bakterien auf die Halfte herabgesetzt wurde, zeigen
die Phagocytosezallien und die entsprechemlen Indices ein etwas ver-
sehiedenes Verhalten, je nachdem die Leukocyten eine ki’irzere oder
langere Zeit dieser Einwirkung unterworfen gewesen sind. Es scheint,
als ivenn eine selir kurze Einwirkungsdauer, 1 Minute, seitens der n/, M —
n, J000 NaOH-Lbsungen, wie es die Indices der Subserie a zeigen, den
Leukocyten hinsichtlich der Phagocytose nackteilig ware. Mit liingerer
Einwirkungsdauer bessern sich die Verhaltnisse so, da6 die Indices in
der Subserie b, Einwirkungsdauer 75 Minuten, sich 1 nahern, um in
der Subserie c, Einwirkungsdauer 4 Stunden 45 Minuten, sich durch-
sehnittlieh etwas liber 1 zu bewegen.
Die Einwirkung der entsprechend konzentrierten H a S0 4 -Losungen
auf die Leukocyten scheint — nach einer deutlicheren Zunahrne der
Phagocytose bei ganz kurzer Einwirkungsdauer von 1 Minute (Subserie a) —
bei einer Einwirkung von etwa 75 Minuten (Subserie b) eine weniger
vorteilhafte zu sein, um aber bei Einwirkung wahrend 4 Stunden 45 Minuten
winder eine bestimmtere Beforderung des phagocytiiren Vorganges hervor-
tre ten zu lassen.
Gewissermallen anders gestalten sich die Verhaltnisse, wenn die mit
Alkali oder Saure versetzten Leukocytenaufschwemrnungen beim Mischen
mit den Bakterien neutralisiert werden, wie es in der Serie XIL B,
Tabelle XIX, geschehen ist.
ZeiUchr. f. lmmuniUitsforschung. Grig. Bd. XIV. 36
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518
Max Oker-Blom,
Tabelle XIX.
Versuch
1
2
3
4
5
6
7
Leukocyten
vorbehandelt
mit
Bakterien-
Blutkorperchen-
Aufschwemmung
n/ l00 NaOH
| beim Mischen
/ 100 »
| neutralisiert
pnysiol. NaCl
)
n/iooo H,S0 4
\ beim Mischen
U U00 »
n / 200 »
J neutralisiert
Phagocytose-
zfliil von
Index
b
60'
c
4 h 30'
b
c
114
_
0,83
151
83
1,10
0,61
175
81
1,28
0,60
137
137
1,00
1,00
203
328
1,49
2,39
183
314
1,34
2,29
154
297
1.12
1,45
Serie XII B, Tabelle XIX, ist eine Parallelserie der Serie XII A,
unterscheidet sich aber von dieser darin, dafi die Reaktion der mit den
betreffenden Losungen versetzten Leukocytenaufschwemmungen beim
Mischen mit der Bakteriensuspension neutralisiert wurden. In bezug auf
die NaOH-Versuche ist hervorznheben, dafi die Neutralisation der
Mischung, nachdem die Leukocyten wahrend 1 Stunde der Einwirkung
der resp. Losungen ausgesetzt gewesen sind (Subserie b), die Phagocytose
etwas zu befordern scheint. Sind die Leukocyten aber wahrend 4 Stunden
30 Minuten dieser Einwirkung unterworfen gewesen (Subserie c), so be-
wirkt die Neutralisierung der Mischung ein deutliches Herabgehen der
Phagocytose.
In den Versuchen mit H. 2 S0 4 -Losungen hat die Neutralisierung in
beiden Subscrien eine befordernde Wirkung auf den betreffenden Vorgang,
was besonders in der Subserie c mit der 4 Stunden 30 Minuten dauernden
Einwirkungszeit zum Vorschein kommt. Das eben Gesagte kommt noch
besser zum Ausdruck in der Tabelle XX, wo die Ergebnisse der ganzen
Serie XII A und B bzw. das Material aus den Tabellen XVIII und XIX
ubersichtlich zusammengestellt worden sind.
Tabelle XX.
Mittelwerte der Phago-
cytosezahlen der
Bakterien-
Blutkorperchen-
Miscnung
Einwirkungsdauer
a
1'
b |
60-75'
c
4 h 30-45'
NaOH-Vereuche
A alkalisch
93
123
146
B neutralisiert
—
147
82
B/A
1,19
0,56
H 2 80 4 -Versuche
A sauer
174
148
229
B neutralisiert
—
180
313
B/A
—
1,22
1,37
Die Tabelle gestattet uberdies noch einen Vergleich zwischen der die
Phagocytose beeinflussenden Wirkung einerseits einer blofien Herabsetzung
der Konzentration der mit Alkali oder Saure versetzten Blutkoq>erauf*
schvveminung und andererseits der Neutralisierung derselben bei ihrer
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma. 519
Vermischung mit der Bakteriensuspension (die Werte B/A). In den Alkali-
versuchen wirkt die voile Neutralisation giinstiger bei einer Einwirkungs-
dauer von etwa 1 Stunde, wahrend sie entschieden nachteilig wirkt, wenn
die Leukocyten vorher schon iiber 4 Stunden der Einwirkung der NaOH-
Losungen ausgesetzt gewesen sind. In den Saureversuchen geht der
phagocytare Vorgang, wenn die Leukocyten wahrend 4 Stunden 30 Minuten
dem EinfluB der Saure ausgesetzt gewesen sind (Subserie c), ehe die
Neutralisation geschieht und die Phagocytose zur Entfaltung gelangen
kann, in reicherem Umfange vor sich, als wenn die Einwirkungsdauer
nur 1 Stunde betragt (Subserie b).
Tabelle XXI.
Mittelwerte der Indices aus den
Tabellen XVII-X1X
Mischung
nicht
neutralisiert
| neutralisiert
NaOH-Versuche
n/,oo
0,97
0.83
^/iOO
0,91
0,86
^/1000
0,87
0.94
im Mittel
0,92
0,88
H,S0 4 -Versuche
n /iooo
1,19
1,94
n / 1
J V400
1.21
1,81
2 on
1.22
1,48
1
im Mittel |
1,21 !
1,74
Tabelle XXI gibt ein Gesamtbild von dem EinfluB der verschieden
konzentrierten NaOH- und H 2 S0 4 -Losungen auf die Leukocyten in der
uns hier interessierenden Beziehung, und zwar einerseits fur den Fall, daB
die Konzentration dieser Fliissigkeiten beim Mischen mit der Bakterien¬
suspension nur auf die Hiilfte herabgesetzt wird, andererseits fiir den Fall,
daB eine vollstandige Neutralisation erfolgt. Der Tabelle laBt sich ent-
nehmen, daB das Alkali in n/ 1000 —n/ ?00 -Losung die Phagocytose im all-
gemeinen etwas herabsetzt, was ungefahr glcich deutlich zum Vorschein
koramt, wenn der Vorgang bei schwach alkalischer, als wenn er bei
neutraler Reaktion vor sich geht; im Mittel betragt der Index fiir die
ersteren Versuche 0,92, fiir die letzteren 0,88.
Entschieden kriiftiger scheint die Saure auf die Leukocyten dahin
wirken zu konnen, daB ihr phagocytares Vermogen gesteigert wird. In
denjenigen Versuchen, wo der Sauregrad der einwirkenden Fliissigkeit im
Augenblicke des Zusammenbringens mit der Bakteriensuspension nur auf
die Halfte reduziert >vurde, zeigen die Indices fiir alle drei betreffende
Konzentrationen sehr iibereinstimmende Werte. im Mittel 1,21. Bei voll-
stiindiger Neutralisation steigen die Indices am meisten, wenn die ur-
spriingliche Konzentration der H 2 S0 4 -Ldsung n/ IOOO , weniger, wenn die¬
sel be n/ 400 und am wenigsten, wenn sie n/ ?00 betragt, und kommen in den
Zahlen 1,94, 1,81 und 1,48 zum Ausdruck; im Mittel betriigt der Index
in den Saureversuchen 1,74.
3G*
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520
Max Oker-Blom,
Wenn die Resultate derjenigen Versuche zusamroengefaBt
werden, in denen die Leukocyten der Einwirkung von n/ 100 o»
n/ 400 und n/j 0 o NaOH- bzw. H 2 S0 4 -Losungen ausgesetzt worden
sind, ehe ihnen die Bakterien zum Phagocytieren dargeboten
werden, so ergibt sich etwa folgendes.
Durch Einwirkung verdiinnter NaOH-und H 2 S0 4 -Losungen
auf die Leukocyten kann das PhagocytiervermOgen der letzteren
in der einen Oder anderen Richtung verSndert werden. Es ist
somit mdglich, einerseits durch Alkali, andererseits durch
Saure die phagocytaren Eigenschaften der Leukocyten zu
schwachen oder auch zu verstarken, bzw. ihre in dem Phago¬
cytieren zum Ausdruck kommenden Anziehungskrafte gegen-
(iber den Bakterien bis zu einem gewissen Grade umzu-
stimmen. Wenn wir das Material einerseits der Tabellen X
und XI, andererseits der Tabelle XX vergleichen, so finden
wir, daB die Leukocyten jedenfalls in entschieden geringerem
Grade und auch langsamer von den betreffenden Stoffen in
einer fur den phagocytaren Vorgang bedeutungsvollen Art
beeinfluBt werden, als die Bakterien.
Behufs einer theoretischen Begriindung der Ergebnisse,
welche durch Vorbehandlung der Leukocyten mit den be¬
treffenden Stoffen erzielt worden sind, wird es folglich un-
umganglich notwendig sein, auch die Rolle der eventuell ver-
anderten Eigenschaften der Bakterien bei der Gestaltung des
phagocytaren Vorganges gebiihrend zu beriicksichtigen.
Wenn die Leukocyten eine geniigend lange Zeit der Ein¬
wirkung des Alkalis ausgesetzt gewesen sind, so dflrften sie
sich gewissermaBen mit Alkali beladen haben: zweite Phase
der Alkaliwirkung auf die Leukocyten. Geraten sie nachher
in eine Fltissigkeit, die in bezug auf Alkali weniger konzen-
triert ist, so treten sie mit einer verhaltnismaBig hochgradigen
Elektropositivitat auf. Wenn die Bakterien mit alkalischer
Blutkbrperaufschwemmung zusammengebracht werden, so wird
ihre elektronegative Ladung zu der Zeit, wo die Phagocytose
sich zu entwickeln beginnt, etwas erhdlit. In demselben
Augenblick durften somit die zwischen den Kontrahenten
herrschenden Potentialdifferenzen gesteigert erscheinen und
den phagocytaren Vorgang also befordern miissen. So scheint
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Bakterien verankerung an dae Leukocytenprotoplasma.
521
es sich in der Tat oft zu verhalten. Indessen trifft dies nicht
immer zu, und es fragt sich: warum denn nicht?
Betreffend diejenigen Versuche, in denen die Leukocyten
nur wahrend verhaltnismaBig kurzer Zeit der Einwirkung
von Alkali ausgesetzt gewesen sind, kflnnte man gewiB mit
folgender Annahme zurecht kommen. Wenn die Leuko¬
cyten in der uns hier interessierenden Beziehung tatsSchlich
sehr langsam vom Alkali beeinfluBt werden, so befinden sie
sich zu der Zeit, wo ihnen die Bakterien zum Phagocytieren
dargeboten werden, in der ersten Phase der Alkaliwirkung;
ihre in der urspriinglichen Leukocytenaufschwemmung ins
Gleichgewicht gekommene Elektropositivitat befindet sich so-
mit nun in negativer Richtung verschoben, weshalb die sich
nach der Mischung mit den Bakterien zwischen den Kon-
trahenten einstellenden Potentialdifferenzen als verhaltnismaBig
unbedeutend auftreten und folglich auch zur Entwickelung
einer nur wenig ausgiebigen Phagocytose fiihren.
Klarer liegen die Verhaltnisse in bezug auf die Saure-
versuche. Es leuchtet ein, daB, wenn die Leukocyten der
Einwirkung der Saure ausgesetzt werden, ihre natflrliche
Elektropositivitat allmahlich in negativer Richtung verschoben
wird bzw. ihre hier in Betracht kommenden Eigenschaften
eine Umstimmung erfahren, so daB sie nachher sogar geneigt
sein konnen, elektropositiv geladene materielle Teilchen an-
zuziehen. So beschaffen diirften aber die Bakterien in dem
Augenblicke sein, wo sie zur Zeit des Zusammenmischens
der resp. Aufschwemmungen mit der Saure in Berflhrung
geraten; sie werden folglich von den Leukocyten nun begierig
angezogen. DaB die Bakterien von den mit Saure behandelten
Leukocyten noch besser phagocytiert werden, wenn die Fliissig-
keit beim Zusammenbringen der Kontrahenten neutralisiert
wird, dies kann seinen Grund darin haben, daB die unter
Einwirkung der Saure erworbene Elektronegativitat der Leuko¬
cyten bei plotzlicher Umwandlung des sauren Vehikels in ein
neutrales nunmehr in noch hbherem Grade zur Geltung kommt.
Ich verweise nur auf die resp. Mittelwerte fiir die Indices in
den Saureversuchen (Tabelle XXI), wo der Index im ersteren
Falle (bei bloBer Herabsetzung des Sauregrades) 1,21, im
letzteren Falle (bei vollstandiger Neutralisation) 1,74 betragt.
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522
Max Oker-Blom,
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Unter alien Umst&nden steht es fest, dafi man durch
Vorbehandeln der Leukocyten entweder mit S&ure Oder mit
Alkali den nachher einsetzenden phagocyt&ren Vorgang in
verschiedener Richtung beeinflussen kann. Die Vorbehandlung
der Leukocyten scheint aber jedenfalls in bezug auf den Um-
fang der zu erwartenden Phagocytose von geringerer Be-
deutung als die der Bakterien zu sein.
Nachdem die Einwirkung des Alkalis und der Saure
einerseits auf die Bakterien, andererseits auf die Leukocyten
ffir sich in der uns hier interessierenden Beziehung unter-
sucht worden ist, erscheint es angezeigt, zu prflfen, wie der
phagocytare Vorgang beeinfluBt wird, wenn beide Kontrahenten
vor ihrer Vermischung miteinander der Einwirkung desselben
Stoffes Oder die Leukocyten derjenigen des Alkalis und die
Bakterien derjenigen der S&ure oder umgekehrt unterworfen
werden.
Nach den oben dargelegten Ergebnissen ware zu erwarten, dab die
init Alkali vorbehandelten Leukocyten mit Saure behandclte Bakterien
begieriger phagocytieren sollten als solehe Bakterien, die mit Alkali be-
handelt worden sind, und dab wiederum mit Saure behandelte Leukocyten
fur Bakterien, welche mit Alkali beliandelt sind, einen begehrenswerteren
Verankerungsplatz darstellen sollten, als fur solehe Bakterien, die einer
Vorbehandlung mit Siiure unterworfen worden sind.
Serie VIII. Zum Zwecke einer Priifung dieser Verhaltnisse wurden
Leukocyten fiir sich und Bakterien fur sich wahrend 2 Std. 30 Min. der
Einwirkung von n/., 00 NaOH, physiologischer NaCl oder n/ aoo H 2 S0 4 aus-
gesetzt. Nachher wurden die drei verschiedenartig behandelten Leuko-
cytenaufschwemmungen je mit den verschiedenartig behandelten Bakterien-
suspensionen zusammengemischt. Die Keaktion der Mischung — nach
den Mischungsverlialtnissen zu beurteilen — in den resp. 9 Kombinationen,
wie aueh die erzielten Indices sind aus der Tabelle XXII ersichtlich.
Tabelle XXII.
Bakterien
Leukocyten vorbehandelt mit
vorbehandelt
mit
A
n/ JOO NaOH
B
physiol. NaCl
C
n/ too H,S0 4
a) n/ 10# NaOH
Index
Reakt. d. Misch.
A a) 2,14
n/,oo NaOH
Ba) 1,33
n/ 400 NaOH
Ca) 1,26
neutral
b) physiol. NaCl
Index
Reakt. d. Misch.
Ab) 0,53
n / 4 o« NaOH
Bb) 1,00
neutral
Cb) 0,83
0/400 S 2 S0 4
c) n/, 0# H 5 S0 4 .
Index
Reakt. d. Misch.
Ac) 6,07
neutral
Be) 3.G9
®/400 H,fe0 4 |
Cc) 2,10
n /*oo H,S0 4
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
523
Was zunachst die A-Reihe betrifft, so ergibt sich, dafi die mit Alkali
behandelten Leukocyten tatsachlich mit Saure behandelte Bakterien viel
begieriger als mit Alkali behandelte phagocytieren, ein Verhaltnis, welches
in den resp. Indices 6,07 (Ac) und 2,14 (A a) zum Ausdruck kommt.
Anders verhalt sich die C-Reihe; aus der Tabelle geht hervor, daB die
saurebehandelten Leukocyten in grofierem Umfange saurebehandelte Bak¬
terien gefesselt haben, was also unserer Erwartung zuwiderlauft. Indessen
liefert aber ein Blick auf die B-Reihe gewissermaBen die Erklarung fiir
dies Verhalten; auch die einfach in physiologischer Kochsalzlosung ge-
wesenen Leukocyten phagocytieren hier siiurebchandelte Bakterien besonders
energisch. Die Einwirkungszeit der betreffenden Losungen auf die zelligen
Elemente betrug in dieser Serie 2 Std. 30 Min.; die saurebehandelten
Bakterien waren beim Zusammenmischen mit den Leukocyten schon im
Begriff, der Agglutination anheimzufallen, die sich sodann gleichzeitig mit
dem phagocytaren Vorgang vollzog. Beim Durchmustern der Praparate
findet man tatsachlich, daB die ganze horizontale c-Reihe freie Bakterien
lediglich in grofien Haufen, dagegen keine einzelnen solchen mehr auf-
zuweisen hat.
Ganz dasselbe Verhalten zeigt auch die
Serie XIV, wo die Einwirkungsdauer der resp. Losungen auf so-
wohl Leukocyten wie Bakterien 3 Std. 13 Min. betrug. Im ubrigen sind
die Versuchsbedingungen (Tabelle XXIII) hier dieselben wie in der
vorigen Serie.
Tabelle XXIII.
Bakterien
Leukocyten vorbehandelt mit
vorbehandelt
mit
A 1
n/aoo NaOH |
B
physiol. NaCl
C
n /»00 ^|®0 4
a) %oo NaOH
Index
Reakt. d. Misch.
A a) 2,61
n/ so o NaOH
Ba) 1,47
n/ 400 NaOH
Ca) 175
neutral
b) physiol. NaCl
Index
Reakt. d. Misch.
A b) 0,54
n/ 400 NaOH
Bb) 1,00
neutral
Cb) 0,67
n /«oo H,«0 4
c) n/ aoo H,S0 4
Index
Reakt. d. Misch.
Ac) 3,65
neutral
Be) 2,13
%oo 0,80,
Ce) 2,89
% oo HfSO.
Die Mittelwerte der resp. Indices aus den Tabellen XXII und XXIII
sind in der Tabelle XXIV zusammengestellt. AuBer dem, was oben schon
gesagt wurde betreffs der erwarteten verhaltnismafiig grofien Anziehung
Tabelle XXIV.
Index im Mittel
aus Tabelle XXII und XXIII
A
B
C
a
2,37
!
1,40
1,50
b
0,53
1,00
0,74
c
4,86
2,91
2,49
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524
Max Oker-Blom,
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zwischen Leukocyten und Bakterien, von denen die einen deni Alkali, die
anderen dor Saure ausgesetzt gewesen sind, geht aus der Tabelle hervor,
dafi aueh die mit Alkali behandelten Bakterien von alien drei, verschieden-
artig behandelten Leukocytenkategorien besser phagocytiert werden als
Bakterien, welche lediglich in Kochsalzlbsung gewesen sind. Dies trifft
also nicht nur fiir die Kombination B a und C a, sondern aueh fiir die
Kombination A a, alkalibehandelte Leukocyten und ebenso behandelte
Bakterien, zu. In alien diesen Beziehungen ist die Uebereinstimmung der
Ergebnisse der Serien XIII und XIV selir gut.
Um den Einflufi der Agglutination auf die Bakterien, sowie die
stbrende Wirkung des hicrvon herriihrenden Faktors auf den phagoeytiiren
Vorgang zu vemieiden, wurde in den Serien XV und XVI die Einwirkungs-
zeit der betreffenden Flussigkeiten auf die Bakterien eingeschriinkt.
Serie XV. Die Leukocyten wurden hier wiihrend 2 Stunden, die
Bakterien dagegen nur wiihrend 30 Minuten der Einwirkung der betref¬
fenden Stoffe unterworfen. Die zur Amvendung gekornmenen Konzen-
trationen von Alkali und Siiure betrugen hier n/ 100 (Tabelle XXV).
Tabelle XXV.
Bakterien
Leukocyten vorbehandelt mit
vorbehandelt
mit
A
n/,oo NaOH
B ! c
physiol. NaCl n/ ltf0 H.,S0 4
a) n/ l0o NaOH
Index
Reakt. d. Misch.
A a) 0.51
n/ 140 NaOH
Ba) 0,83
n/too NaOH
Ca) 1,17
neutral
b) physiol. NaCl
Index
Reakt. d. Misch.
Ab) 0,64
n ' 500 NaOH
Bb) 1,00
neutral
Cb) 0.57
^■'?oo HjbO (
c) n/ I0# H,S0 4
Index
Reakt. d. Misch.
Ac) 1,27
| neutral
Be) 0,75
i “/too H * S0 4
Cc) 0,53
11 /, 00 H,^0 4
In dieser Serie finden wir unser Erwarten in bezug auf den Umfang
der Phagocytose bei verschiedenen weehselnden Kombinationen der ver-
schiedenartig behandelten Leukocyten und Bakterien besonders gut be-
stiitigt: die grollten Indices werden in den Kombinationen Ac und Ca
angetroffen.
Serie XVI. Die Leukocyten wurden 21 Stunden lang, jlie Bakterien
etwa wiihrend 1 Stunde der Einwirkung der betreffenden Losungen aus-
gesetzt. In alien anderen Beziehungen sind die Versuehsbedingungen
denen der vorigen Serie glcich (Tabelle XXVI).
In dieser Serie, wo die Bakterien wiihrend 1 Stunde der Einwirkung
der Losungen ausgesetzt gewesen sind, zeigt die gauze c-Reihe besonders
hohe Werte, welches Verhalten — wie es aueh der mikroskopische Befund
bestiitigt — gewisserrnaben auf die wiihrend der Phagocytose vor sich
gehende Agglutination der Bakterien zuruckzufuhren ist. Enter solchen
Bedingungen hat die Kombination Cc einen grolleren Index aufzuweisen
als die Kombination Ca. Hiervon abgesehen, ist nicht zu verkennen,
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
525
Tabelle XXVI.
Bakterien !
Leukocyten vorbehandelt mit
vorbehandelt |
A
B
C
mit
n'.oo NaOH
physiol. NaCl
n/,oo H 3 SO,
a ) n /ioo NaOH
Index
Reakt. d. Misch.
A a) 1,02
n/ 100 NaOH
Ba) 1,02
«Iwo NaOH
Ca) 1,59
neutral
b) physiol. NaCl
Index
Reakt d. Misch.
lAb) 0,84
n/ S( „ NaOH
Bb) 1.00
neutral
Cb) 1,08
n/ 3 oo H 7 S0 4
c) ii/,oo H,S0 4
1
Index
Reakt. d. Misch.
A c) 2,15
neutral
Be) 1,71
n/ 20 o H,SO t
Cc) 2,11
n/,oo H,S0 4
daft die alkalibehamlelten Leukocyten und die saurebehandelten Bakterien,
sowie andererseits die saurebehandelten Leukocyten und die alkalibehan-
delten Bakterien besser einander aufsuchen, als es in den iibrigen Kom-
binationen der Fall ist.
Tabelle XXVII.
Index im Mittel
aus Tabelle XXV und XXVI
A
B j
1
C
a
0,71
! 0,92
1..58
b
0.74
LOO
0,82
c
1,71
123
1,32
Das soeben (iesagte kommt aueh in der Tabelle XXVII, welehe die
Mittelwerte der resp. Indices der Tabellen XXV und XXVI zoigt, zum Aus-
druck. Leider gelingt es nicht iinrner, die Zeit fur die gegenseitige Ein-
wirkung der Kontrahenten im Thennostaten so zu bemessen, daft einer-
seits die Agglutination der Bakterien vermieden, andererseits der Siiure
Zeit gegeben wird, geniigend lange auf die Bakterien einzuwirken, ehe
diese den Leukoevten zum Phagooytieren dargeboten werden.
Als SchluBergebnis geht aus den Serien XIII, XIV und
XV, XVI vollkommen tibereinstimmend eins hervor, namlich,
daB die Kombination von alkalibehandelten Leukocyten und
saurebehandelten Bakterien die reichlichste Phagocytose be-
dingt. Also: obgleich wir imstande sind, durch Behandlung
einerseits der Leukocyten, andererseits der Bakterien mit
Alkali oder Saure, ihre naturgemaBen Affinitaten zueinander
zu beeinflussen, ja sogar dieselben gewissermaBen uinzustimmen,
so ist es fiir die Entwicklung des phagocytaren Vorganges
jedoch am vorteilhaftesten, die genannte Behandlung derart
vorzunehmen, daB die naturlichen gegenseitigen Neigungen
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526
Max Oker-Blom,
der betreffenden zelligen Elemente, also einerseits die Elektro-
positivit&t der Leukocyten (durch Vorbehandlung dieser letzteren
mit Alkali), andererseits die elektronegativen Eigenschaften
der Bakterien (durch deren Behaudlung mit S&ure) verstfirkt
werden, ehe die beiden Kontrahenten schliefilich in Wechsel-
beziehung zu einander gebracht werden.
Aus den Tabellen XXII und XIII bzw. aus der Tabelle XXIV
ist ersichtlich, daB in alien Subserien A, B und C die a-Reihe,
wo die Bakterien der Einwirkung von Alkali unterworfen ge-
wesen sind, hohere Indices aufweist als die b-Reihe, wo die
Bakterien einfach in physiologischer Kochsalzlosung verweilt
haben. Fflr die Subserien B und C ist dieses Verhalten ohne
weiteres zu verstehen. Anders liegt die Sache betreffend die
Subserie A. Eigentlich ware zu erwarten, daB alkalibehandelte
Leukocyten weniger begierig alkalibehandelte Bakterien als
bloB mit NaCl behandelte solche phagocytieren wflrden. Nach
dem, was uber die Wirkung des Alkalis auf die Bakterien
auseinandergesetzt worden ist, kann es aber kaum wunder
nehmen, daB das tatsachliche Resultat so ausfallt, wie die
betreffenden Tabellen zeigen. In Anbetracht der vielen Stufen,
welche die Bakterien unter der Einwirkung des Alkalis durch-
zumachen haben, kann es auch solcherart geladene Bakterien
geben, welche von den alkalibehandelten Leukocyten begieriger
angezogen werden als NaCl-Bakterien. Es ist kaum moglich,
immer in casu zu beurteilen, wie die Sachen in bezug auf die
vorausgesetzten VerSnderungen der elektrischen Ladungen der
Kontrahenten sich tatsachlich verhalten, und wie sie dem-
entsprechend den phagocyt&ren Vorgang beeinflussen.
Es kommt aber noch ein Moment hinzu. Die alkali¬
behandelten Bakterien werden sehr leicht agglutiniert, sobald
sie mit S&ure neutralisiert werden, ein Umstand, der — wie
schon mehrmals hervorgehoben — bei der mikroskopischen
Untersuchung der PrSparate leicht zu konstatieren ’ist, und
der den phagocytaren Vorgang unter Umst&nden zu befbrdern
scheint
Beim Vergleichen der Versuchsergebnisse bei Vorbehand¬
lung einerseits der Bakterien, andererseits der Leukocyten
mit Alkali Oder Saure, ehe der phagocytare Vorgang eingeleitet
wird, linden wir, daB die betreffenden Stoffe bei Einwirkung
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Bakterien verankerung an das Leukocytenprotoplasma.
527
auf die Bakterien im allgemeinen einen grOBeren EinfluB auf
die Gestaltung der Phagocytose ausiiben, als wenn sie haupt-
s&chlich nnr auf die Leukocyten einzuwirken kommen. Wir
k8nnen somit kaum umhin, uns die Sache so vorzustellen,
daB diejenigen „opsonischen WirkuDgen“, welche von NaOH
und H 2 S0 4 hervorgerufen werden, sich in erster Linie an dem
Bakterienkdrper geltend machen.
Der Ansicht von Hamburger und Hekma, sowie von
Noguchi, dafi die Phagocytose in neutraler Losung am
besten vor sich geht, kann ich auf Grund der von mir ge-
wonnenen Resultate insoweit beistimmen, als dieselbe unter
Umst&nden in der neutralen Losung ausgiebiger als in der
sauren Oder alkalischen sich entwickelt; ein noch vorteilhafterer
EinfluB auf den phagocyt&ren Vorgang wird aber dadurch
erzielt, daB die Bakterien vor dem Zusammentreffen mit den
Leukocyten der Einwirkung des Alkalis oder besonders der
S&ure ausgesetzt werden und sodann erst, eben beim Mischen
mit den Leukocyten, in ein neutrales Medium geraten.
Die bisher geschilderten Versuche beziehen sich — wie
aus der obigen Darstellung hervorgeht — auf den EinfluB,
welchen Alkali und SSure, bei Nichtanwesenheit von Serum,
auf den phagocytaren Vorgang ausiiben. Es erflbrigt sich
noch zu prflfen, inwiefern die bei diesen Versuchen gefundenen
Verhaltnisse auch fiir den Fall zutreffen, daB Serum bzw.
dessen osmotisch wirkende Faktoren zugegen sind. Zu diesem
Zwecke wurden entweder die Leukocyten oder die Bakterien
eine kflrzere oder ISngere Zeit vor ihrer Zusammenmischung
mit Serum versetzt. Sodann wurde dem Alkali oder der
S&ure Gelegenheit geboten, entweder auf jene oder auf diese
einzuwirken bzw. die Alkaleszenz des Serums durch Zusatz
von SSure oder Alkali in der einen oder anderen Richtung
verschoben, sowie der EinfluB dieser ver&nderten Bedingungen
auf den phagocytSren Vorgang studiert.
Es sei zuniichst der Fall in Betracht gezogen, daB die Leukocyten
einige Zeit, bevor sie mit den Bakterien zusammengebraeht werden, mit
Serum versetzt, die Bakterien dagegen der Einwirkung entweder von
Alkali oder von physiologischer Kochsalzlbsung oder von Siiure unter-
worfen worden sind.
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628
Max Oker-Blom,
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Serie XVII. Die urspriingliehe Leukocytcnaufschwemmung wurde
zu gleichen Teilen mit Mecrschweinchenserum versetzt und die Mischung
auf Eis gestellt; 20 Stunden spiiter wurden ihnen zum Phiigocytieren
Bakterien dargeboten, die reap. 1 Stunde, 1 Stunde 30 Minuten und
2 St linden der Eimvirkung von n/ 400 NaOH, physiologischer Kochsalz-
losung odor n/ 400 H t S0 4 unterworfen wordcn waren. Die Beaktion der
Baktericususpension wurde im Augenblieke der Mischung durch ein
glciches Voluin der entgegengesetzten, entsprechend konzentrierten Losung
neutralisiert. Die Versuchsergeiuiis.se sind in der Tabelle XXVIII wieder-
gegeben.
Tabelle XXVIII.
Versueh
Bakterien
vorbehandelt
mit
Phagocytosezahl bei
Eimvirkung von
1
Index
A
1 "
15
l h 30'
C i
2 - !
A
! B
C
i
n /400 NaOH
4« 2
883
500
1,20
2,02
0,89
2
physiol. NaCl ,
401
437
508
1,00
1,00
1,00
3
n / 400 H-2 S0 4 1
487 j
735
437
1,21
1,68
0,77
Aus der Tabelle labt sich entnchmen, dab schon bei einer 1-stiindigen
Eimvirkung dor betreffenden Lbsungen auf die Bakterien die alkali-
behandelten und die saurebehandelten Bakterien besser phagoeytiert werden
als die in physiologischer Kochsalzldsung gewesenen. In noch hbherem
Grade trifft dies zu in der Subserie B, wo die Einwirkungszeit 1 Stunde
30 Minuten betragt. In der Subserie C mit der Einwirkungsdauer von
2 Stunden sinkt der Index schon unter 1. Die Erklarung dieses Ver-
haltens ergibt sich wiederum gcwisserinaben aus dein mikroskopischen
Befunde; in der Subserie C sind niiinlich die mit Alkali oder Saure vor-
behandelten Bakterien (Versueh 1 und 3) etwas agglutiniert, weshalb die
Bedingungen fur die Phagocytose nicht inehr ebenso vorteilhaft sind wie
irn Versueh 2.
Serie XV I II. Die Leukocyten wurden 3 Stunden vor der Mischung
mit den Bakterien mit Serum versetzt; die Bakterien wahrend etwa
45 Minuten der Eimvirkung der reap. Lbsungen unterworfen, welche
letztercn hier konzentrierter waren als in der vorigen Serie. Das Medium
wurde beim Mischen der Leukocyten und Bakterien wie oben neutrali¬
siert (Tabelle XXIXj.
Tabelle XXIX.
Versueh
Bakterien
vorbehandelt mit
Phagocytosezahl
Mittel
-
A
B 1 C
Phagocytosezahl
Index
1
n/, 0 „ NaOH
870
803 I 686
786
1,43
2
physiol. NaCI
572
555 j 524
550
1,00
3
H /ioo ^ 2 ®^ 4
528
| 561 | 756
615
1,12
Gck igle
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
529
Aueh hier findcn wir, wie aus den Mittelwerten der drei Parallel-
versuche* hervorgeht, etwa das gleiche Verhalten wie in der Serie XVII.
Die alkali- und ebenso die siiurebehandelten Bakterien werden besser
phagocytiert als die einfach in Kochsalzlosung gewesenen. Besonders
werden die Alkalibakterien gut phagocytiert; im mikroskopischen Bilde
zeigt sich wiederum, dab die Bakterien in den NaOH-Versuchen am
moisten agglutiniert sind. In den Saureversuchen sind sie weniger agglu-
tiniert; man findet hier noch einzelne freie Bakterien. Es verdient be¬
sonders hervorgehoben zu werden, dab aueh bei Gegenwart von Serum
die alkalibehandelten Bakterien beim Neutralisieren mit entsprechend kon-
zentrierter Siiure sehr leicht agglutiniert werden.
Es seien noch zwei Serien angefuhrt, welehc die Ergebnisse der
Serien XVII und XVIII bestiitigen, dazu aber noch geeignet sind, zu
zeigen, welche hohen Werte die bei Gegenwart von Serum stattfindende
Phagocyto.se erreicht im Vergleich mit derjenigen, die bei Weehselwirkung
von gewasehenen Leukocyten in physiologischer Kochsalzlosung und Bak¬
terien in ebensolcher Fliissigkeit vor sich geht.
Serie XIX. Die Leukocytenaufsckwemmung war wahrend 24 Stun-
den mit dem gleichen Quantum Serum versetzt (Versuche 1—3), die
Bakterien etwa 1 Stunde lang der Einwirkung dor resp. Lbsungen unter-
worfen. Im Versuch 4 ist entsprechend konzentrierte Leukocytenauf-
schwemmung und Bakteriensuspension in physiologischer Kochsalzlosung
zusammengebracht worden. Die Indices beziehen sich auf die Phago-
cvtosezahl eben dieses Versuches (Tabelle XXX).
Tabelle XXX.
Versuch
1
Bakterien
vorbehandelt mit
1
Konzentration der
Bakt.-Blutkorperch.-
Mischung
Phagocytose-
zahl
Index
i
i ;
n/ioo NaOH
Ser./., + n/ too NaOH
2
489
8,01
2
physiol. NaCl
Ser.,/ 4
352
5,77
3
4
n/,oo H ,.S0 t
Ser./, + n - 100 H,SO t
2
physiol. NaCl
3G8
(51
;
6,03
| i.oo
Aueh hier werden die mit NaOH behandelten Bakterien am boston,
<lanach die mit H.,S0 4 behandelten, am wenigsten die in physiologischer
NaCl-Lbsung gewesenen Bakterien phagocytiert. Im Vergleich mit der
ohne irgendwelche besondere Vorbehandlung der Bakterien stattlindenden
spontanen Phagooytose im Versuch 4 sehen wir sie in den Versuehen 2,
3 und 1 in eincm resp. 3.77, 0,03 und 8,01 mal grbbcrem Umfange sich
abspielen. Noch viol hohere Werte erreichen sie in der
Serie XX. Die Leukocyten sind hier wahrend 43 Minuten mit
Serum versetzt; die Bakterien etwa ebenso lange der Einwirkung der be-
treftenden Lbsungen ausgesetzt gewesen.
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530
Max Oker-Blom,
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Tabelle XXXI.
Versuch
Bakterien
vorbehandelt mit
Konzentration der
Bakt.-Blutkorperch.-
Mischung
Phagocytose-
0
Index
i
n/,oo NaOH
Ser./, + n/ l00 NaOH
2
985
17,8
2
physiol. NaCl
Ser./ 4
Scr.L -f* n oon H,SO.
m
14,7
3
n /jOO ^*^^4
2
1412
25,7
4
—
physiol. NaCl
55
1,00
Die Phagocytose nimmt hier, unter dern Eifluft des Serums, im Ver-
gleieh mit der spontanen ganz ungewohnlich hohe Werte an. Unter-
einander verglichen zeigen die Indices wiederum, dab die mit Alkali oder
Siiure behandelten Bakterien besser, als die einfach in Kochsalz gewesenen,
phagocytiert werden.
Wenn wir von den Phagocytosezahlen, die beim Phago-
cytieren von kQnstlich behandelten Bakterien bei Gegenwart von
Serum erhalten werden, absehen und lediglich diejenigen ins
Auge fassen, die wir erzielen, wenn gleiche Teile Leukocyten-
aufschwemmung, Serum und Bakteriensuspension zusammen-
gefiihrt werden, so zeigen sie ja im allgemeinen einen Index, der
sich etwa zwischen 4 und 6 bis 8 und 10 bewegt. Es mag nun
von Interesse sein, zu erfahren, welche H6he der Index bei
Nichtgegenwart von Serum erreichen kann, falls die Leuko-
cyten und die Bakterien vor dem Zusammenbringen kQnstlich
beeinfluBt werden.
Es wurde oben dargetan, daB durch kUnstliche Behandlung
besonders der Bakterien, ehe der phagocytare Vorgang ein-
geleitet wird, der auf diesen Vorgang bezOgliche Index ohne
Schwierigkeit bis zum 2-, 3-, 4-facben Betrag der sozusagen
normalen spontanen Phagocytose gesteigert werden kann. Es
ist aber auch nicht unmogiich, Werte zu erzwingen, welche —
wie aus den Tabellen IX, X und XII zu ersehen ist — die
Hohe von 6, 8, 9, ja sogar Qber 11 erreichen. Wir kQnnen
somit sagen, daB es durch kUnstliche Vorbehandlung in erster
Linie der Bakterien, bis zu einem gewissen Grade aber auch
der Leukocyten moglich ist, die Phagocytose dermaBen zu
befordern, daB sie Werte von annShernd gleicher H6he an-
nimmt, wie bei der unter dem EinfluB der tfitigen Prinzipien
des normalen Serums stattfindenden Phagocytose. Und wie
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma. 531
soeben (Tabelle XXXI) dargetan worden ist, laBt sich in der-
selben Art auch die vom Serum bewirkte Phagocytose beein-
flussen.
Einige Serien seien dann noch angefiihrt, um zu zeigen, inwieweit
die Phagocytose von Veranderungen des Alkaleszenzgrades des Mediums
der Leukocyten beeinfluBt wird.
Serie XXI. Die Leukocyten wurden wahrend 20 Stunden der
Einwirkung von verschieden konzentrierten NaOH-Losungen resp. phy-
siologischer Kochsalzlosung oder Serum ausgesetzt. Die Bakterien wurden,
einfach in Kochsalzlosung aufgeschwemmt, in Anwendung gebracht.
Tabelle XXXII.
Vereuch
Leukocyten
vorbehanaelt mit
Konzentration der
Bakt.-Blutkorperch.-
Mischung
Phagocytose-
zahl
Index
1
physiol. Nad
physioL NaCl
410
1,00
2
n/ w0 NaOH
n/ 400 NaOH
377
0,92
3
n /ioo »
n/?oo »
180
0,44
4
jj/GO »
^/i»o >J
146
0,36
5
Serum/,
Serum/ 4
1689
4,12
Wie aus der Tabelle XXXII ersichtlich ist, bewirken die n/ 200 bis
n/ 0O NaOH-Losungen, als Medium gebraucht, mit steigender Konzentration
ein deutliches Zuriickgehen der Phagocytose, was ja schon auf Grund
einiger der obigen Serien zu erwarten war. Im Vergleich mit dem Ver-
such 1, wo alles sich einfach in physiologischer Kochsalzlosung abspielt,
zeigt der Versuch 5, wo die Leukocytenaufschwemmung mit dem gleichen
Volum Serum versetzt worden war, und wo die schlieflliche Bakterien-
Blutkorperchen-Mischung einen Teil Serum auf 4 Teile Fliissigkeit ent-
hielt, eine etwa 4-fach reichlichere Phagocytose.
Im groBen und ganzen sind ja die Yersuche in vitro nicht besonders
geeignet, unseren Bemiihungen, die Bedeutung der Veranderungen des
Alkaleszenzgrades des Serums fur die Gestaltung der Phagocytose im
lebenden Organismus zu eruieren, Vorschub zu leisten. Bei alien Ver-
suchen, den Alkaleszenzgrad zu steigern oder zu vermindern, laBt sich
nicht vermeiden, daB die Konzentration der Serumbestandteile auch sonst
recht stark beeinfluBt wird. Das Medium, worin der phagocytare Vor-
gang sich vollzieht, wird wohl in bezug auf die hierfiir spezifischen Semm-
bestandteile in den meisten Yersuchen um das 3—6-fache verdiinnt sein.
Serie XXII. Das Serum wurde zu gleichen Teilen mit verschieden
konzentrierten NaOH- bzw. HjSO^Ldsungen versetzt, sodann wurden von
der resp. Mischung, der Leukocytenaufschwemmung und von der Bak-
teriensuspension in Kochsalzlosung gleiche Teile in die Kapillarpipette
emporgesogen. Die Tabelle XXXHI gibt nahere Auskunft iiber die resp.
Serummischungen, wie auch dariiber, wie das Medium, in welchem die
Phagocytose sich zu vollziehen hatte, zusammengesetzt war.
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532
Max Oker-Blora,
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Tabelle XXXIII.
m
o
p
Serum 1
versetzt mit
ua ,
Konzentration der
Bakt.-Blut kbrperch.-
Mischung
Phago-
cytose-
zahl
Index berechnet
nach
2
S .
> ;
Versuch
7
Versuch
14
Ser. + n/. >0 NaOH
|
0,29
3,86
i
n/. >0 NaOH
G
Ser. -f n' NaOH
193
2
n /a o »
0
Ser. -f ii' 40 NaOH
224
0,33
4,48
3
n Uo yy
(3
Ser. + n/ fo NaOH
474
0,71
9,48
4
n ■
11 so yy
b
Ser. + n/ 10A NaOH
431
O
O
8,62
5
n/ 100 NaOH
<j
Ser. -f- n oon NaOH
812
1,21
16,24
6
!
n/,oo yy
G
Serum
635
0,95
12,70
7
physiol. NaCl
6
669
1,00
13,38
8
n/„* 0 H 2 S0 4
i Ser. + n/, >00 _H ? _PO 4
0
815
1,22
16,30
9
n /ioo yy
Ser. + 11 I00 H,S0 4
G
772
1,15
15,44
10
/ r } o yy
Ser. + n/. 0 H,S0 4
1 G
417
0,62
8,34
11
40 '>
) Ser. 4- n 40 H.,S0 4
G
363
0,54
7,26
12
11 30 >*
Ser. + n H.,S0 4
1 0
307
0,46
6.14
13
n /»o yy
1 Ser. + n/, 0 H,SQ 4
i;
1
259
0,39
5,18
14
physiol. XaCI
(kein Serum)
physiol. NaCl
50
1
1,00
In diesen Vorsuchen wird somit die Konzentration cler Serumbestand-
teile (lurch das eingeschlagene Vorgehen auf den 6. Toil herabgesetzt. Die
Versetzung des urspriingliehen Serums mit n./ l00 NaOH- wie auch n/ 100
H t S0 4 -Ld.sung hat keinen naehteiligcn EinfluB auf den phagoevtaren Yor-
gang. Stiirkere Konzentrationen wirken aber deutlich hinderlieh; die Siiure
und das Alkali scheinen hierbei in cntspreehenden Konzentrationen etwa
gleich schadlich zu wirken. Wie schon inehrmals hervorgehoben, spiel t,
wie die Durchnnistcrung der Priiparate deutlich ergibt, auch in diosen
Versuchen die Agglutination der Bakterien eine bedeutungsvolle Kolle fur
die Gestalt ling der Phagoeytose. Die Versuche sind somit in bezug auf
die Frage von der Bcdeutung der Yerschielmng des Alkaleszenzgrades des
Serums fiir die zwisohen den Leukocyten und den Bakterien tiitigen An-
ziehungskrafte nicht ganz eindeutig, und kbnnen — often gestanden —
somit nicht al$ in alien Stiicken rein angesehen werden.
Gck 'gle
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Bakterienverankening an das Leukocytenprotoplasma. 533
Dasselbe gilt auch betreffs der zwei letzten Serien, wo es darauf
ankam, zu erfahren, ob das Yerweilen der Bakterien im Serum wahrend
einer gewissen Zeit, ehe sie mit den Leukocyten in Beriihrung gebracht
werden, fur den phagocytaren Vorgang von Bedeutung ist.
Serie XXIII. Eine frische Bakterienaufschwemmung wurde zu
gleichen Teilen mit Serum versetzt; nach verschieden langer Zeit wurden
sodann gleiche Teile dieser Bakterienmischung und der frisch bereiteten
Leukocytenaufschwemmung in der Kapillarpipette gemischt. Damit die
Briitzeit so wenig wie moglich den Einflufi der verschieden langen Vor-
behaudlung der Bakterien verwisehen sollte, wurde sie in alien Versuchen
dieser und der folgenden Serie nur auf 10Minuten bemessen (Tabelle XXXIV).
Tabelle XXXIV.
Konzentration der Bakterien-
Blutkorperchen-Mischung
Bakterien vorbehandelt mit Serum/,
wahrend
gleich Serum/ 4
i'
3'
7'
15'
23'
40'
60'
Phagocytosezahl
408
462
466
408
455
527
751
Wir finden, dafl die Phagocytose nicht besonders davon beeinfluflt
wird, dafl die Bakterien entweder nur ein paar Minuten oder wiederum
etwa 15—23 Minuten lang mit dem Serum vorbehandelt werden. Bei
langerer Einwirkungsdauer des Serums auf die Bakterien, 40—60 Minuten,
wird der Vorgang jedenfalls ergiebiger. In diesen zwei letzten Versuchen
der Serie, und besonders in dem allerletzten, kam wiederum eine deutliche
Agglutination der Bakterien vor, welche sich wohl hauptsachlich zu gleicher
£eit mit der eben vor sich gehenden Phagocytose entwickelt, und somit
zum Aufschwung dieses Vorganges beigetragen hatte.
Serie XXIV. Die Versuchsbedingungen waren hier dieselben wie
in der vorigen Serie, blofl mit dem Unterschiede, dafl die Vorbehandlung
der Bakterien langer ausgedehnt wurde. Die Briitzeit betrug 10 Minuten.
TabeUe XXXV.
Konzentration der Bakterien-
Blutkdrperchen-Mischung
gleich Serum/ 4
Bakterien vorbehandelt mit
Serum/, wahrend
i'
3 h
7"
Phagocytosezahl im Mittel aus zwei
Versuchen
Die Versuchsergebnisse dieser 1
138
Serie sind
etwa 1100
kaiim unteri
etwa 3000
rinander ver-
gleichbar, denn die Bakterien waren in den zwei spiiteren Versuchen, mit 3-
resp. 7-stiindiger vorausgchender Serumbehandlung (Tabelle XXXV), schon
vor dem Zusannncnbringen mit den Leukocyten agglutiniert. Es konnte
dann nicht vermieden werden, dafl in diesen Versuchen grofle Bakterien-
haufen in die Kapillare gerieten und die Entwdcklung der Phagocytose in
Ztitschr. f. ImmunitiU*forschung. Orig. Bd. XIV. 37
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534
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ihrer eigenen Art beeinflufiten. Es wurde friiher betreffs der Versuche,
in denen kein Serum zugegen war, hervorgehoben, daB eine schon ein-
getretene Agglutination der zum Phagocytieren dargebotenen Bakterien
die Phagocytose cher zu beeintraehtigen als zu steigern geeignet sein
diirfte. Hier tritt nun, bei Anwesenheit von Serum, das Gegentcil ein
und es liegt vielleicht hierin ein prinzipieller Untersehied zwischen dem
nur mit Hilfe von Saure und Alkali sieh vollziehenden, und dem unter
Mitwirkung der Serumbestandteile stattfindenden phagocytaren Vor-
gang. Man bemerkt in den Priiparaten, die der langen Vorbehandlung
der Bakterien entsprechen, daB Massen von Bakterien sieh den Leuko-
cyten und Leukocytengruppen angesehlossen haben, so daB die Zilhlung
der wirklieh sozusagen individuell verankerten Bakterien fast ausge-
sehlossen ist.
Eine Zusammenfassung der mit Serum angestellten Ver-
suche ergibt etwa folgendes.
Mit Alkali oder S&ure behandelte Bakterien werden auch
in Gegenwart von Serum von den Leukocyten besser phago-
cytiert, als Bakterien, die einer solchen Vorbehandlung nicht
unterworfen gewesen sind.
Kleinere Verschiebungen des Alkaleszenzgrades des bei
der Mischung der betreffenden Komponenten schon mehrfach
verdQnnten Serums haben keine grOBere Bedeutung fiir die
Gestaltung der Phagocytose. Wenn das Serum aber mit
st&rkeren Konzentrationen entweder von NaOH Oder von
H 2 S0 4 versetzt wird, so wird die Phagocytose, je nach der
Konzentration der angewandten Fliissigkeit, in geringerem
oder hbherem Grade beeintrSchtigt. Hierbei scheint die
Agglutination der Bakterien eine unverkennbare Rolle zu
spielen.
Wenn die Bakterien wiihrend verschieden langer Zeit
mit Serum vorbehandelt werden, so tritt mit langerer Ein-
wirkungsdauer des Serums eine Steigerung der Phagocytose
ein, wobei wiederum der Agglutination der Bakterien Ge-
legenheit geboten wird, den phagocytaren Vorgang zu beein-
flussen, was hier meistens in einer Zunahme der Phagocytose
zum Ausdruck kommt. Dies kann auch dann der Fall werden,
wenn die Agglutination schon vor dem Zusammenbringen der
Kontrahenten zur Entwicklung gekommen ist.
Von diesem zuletzt erwahnten Umstand abgesehen, zeigen
die Versuche, in denen Serum mitbeteiligt war, etwa das-
Gck igle
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma. 535
selbe Verhalten, wie diejenigen, wo die Phagocytose sich
ohne Mitwirkung dieses Faktors abgespielt hat, und es laBt
sich hieraus folgern, daB die Vorbehandlung der Bakterien
entweder mit S&ure Oder mit Alkali fflr die opsonische Tatig-
keit des Serums ebenfalls von Belang bzw. geeignet ist, den
betreffenden Vorgang zu befordern.
Es wurde oben der EinfluB einer etwaigen Vorbehandlung der
Bakterien auf den phagocytaren Vorgang darauf zuriickgefiihrt, daB diese
die zugefiigten Stoffe, H^S0 4 bzw. NaOH, irgendwie aufnehmen. Um das
Zutreffen dieser Voraussetzung zu priifen, wurden folgende Versuche
angestellt.
Von einer 48 Stunden alten Agarkultur yon Staphylococcus aureus
wurde zunachst eine gleichmaBige, recht konzentrierte Suspension in
1,70-proz. (2X0,85-proz.) NaCl-Lbsung bereitet. Von dieser Standard-
suspension wurden sodann durch Verdiinnung mit gleichen Teilen von
reap. n/ 100 H^S0 4 , Aqua destillata und n/ l00 NaOH, drei Bakterien-
aufschwemmmungen hergestellt, sowie deren Aciditat bzw. Alkaieszenz
nach bestimmten Zeitraumen durch Titrierung mit n/ l00 NaOH bzw.
n/ l0O H,S0 4 ermittelt. Als Indikator diente Phenolphtalein; das Titrieren
wurde einfach in 10 ccm der Suspension bewerkstelligt, also ohne daB
die Bakterien durch Zentrifugieren weggeschafft worden waren.
Einwirkungsdauer
Die Standardsuspension, versetzt mit gleichen Teilen
n/ioo H,S0 4
Aqua dest.
n/ 100 NaOH
Sogleich
4,8 n/ IOO H,S0 4
0,2 n/ 100 HjS0 4
4,6 n/ I00 NaOH
Nach 30 Min.
4,6 „
0.2 „
4,3 „ „
„ 60 „
4,4 ,, ,,
0.2 „
4 1
n ff
„ 4 Std. 30 Min.
4,5 ,, ,,
0,2
4,0 „
v 8 „
4,5 ,, ,,
0,2 „
3,8 „ ,,
Wir finden, daB sowohl Saure als auch Alkali aus den Bakterien-
suspensionen verschwindet bzw. irgendwie gebunden wird. Die Abnahme
des Sauregehaltes scheint jedoch schon nach einigen Stunden aufzuhbren,
indes Alkali langere Zeit hindurch fortwahrend gebunden wird. Nach
etwa 4—8 Stunden ist der Sauregehalt der mit H,S0 4 versetzten Sus¬
pension schon wieder ein wenig groBer als etwas vorher, und wir kdnnen
kaum umhin, dies der Saureproduktion der Bakterien selbst zuzuschreiben.
Derselbe Umstand mufl wohl auch zur Erklarung der langere Zeit fort-
schreitenden Abnahme der Alkaieszenz der mit NaOH versetzten Bakterien-
suspension herangezogen werden. Wohl scheint die mittlere Siiule der
Tabelle keine Andeutung in der genannten Richtung zu gewiihren.
In dem folgenden Versuch wurde die Standardsuspension noch be-
deutend starker gemacht, um eventuelle Wirkungen deutlicher zum Vor-
schein zu bringen.
37*
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Ei n wirk un gsdauer
Die Standardsuspension, versetzt mit gleichen Teilen
n /ioo H,SO t
Aqua dest.
n/ l00 NaOH
Sogleich
Naeh 2 Std.
„ 6 Std. 30 Min.
„ 22 „
4 (> „
5.2 n/ I00 H,80 4
4,4 | t ,,
4,1 „ „
4,0 „
4.3 „ ,,
0,25 H.S0 4
0,20 „
0,20 „
0,25 „
0,30 „
4.4 n/ 100 NaOH
i 3,5 „ ,,
3,2 „
2.5 „ ,,
Auch hier tritt dasselbe Verhalten hervor, nur sind die Ver
iinderungen der Aciditat und der Alkaleszenz noch ausgesprochener,
was auf den grobercn Bakterienreiehtum der angewandten Suspensionen
zuriickzufuhren ist. Im Laufe von 22 Stunden ist die Aciditat der mit
£L,S0 4 versetzten Suspension von 5,2 auf 1,0 gesunken, um jedoch nachher
wiedtT cine Steigerung zu erfahren; letzteres Verhalten diirfte wohl wiederum
in der allmiiklichen Saureproduktion der Bakterien selbst begriindet sein.
Eine Andeutung in dieser Richtung sehen wir ja auch in der mittleren
Kolumne, die sieh auf das Verweilen der Bakterien in physiologischer
Kochsalzldsung bezieht. Das NaOH nimmt in der betreffenden Bakterien-
suspension ebenfalls sehr deutlich ab, und diese Abnahme schreitet wahrend
der ganzen Vcrsuchszeit, etwa 2 Tage, fort, wobei die Saureproduktion
der Bakterien selbst gewib eine Rolle spielen diirfte.
Es ergibt sieh somit, dab die Bakterien tatsaehlieh befiihigt sind,
aus dem Medium sowohl Siiure als auch Alkali aufzunehmen. Wie dieser
Vorgang zu deuten ist, mub freilich vorlaufig dahingestellt werden. Der
Umstand, dab die Titrierung der zugefiigten Siiure bzw. des Alkalis bei
Gegenwart der Bakterien Werte ergibt, welche zeigen, dab ein Teil der
resp. Stoffe aus der Suspension geschwunden ist, scheint in der Richtung
zu sprechon, dab diese Stoffe nicht einfach mechanisch an der Oberflache
der Bakterienhulle adsorbiert seien; wiire dies der Fall, dann ware viel-
mehr zu erwarten, dab die TitrierfUissigkeit die oberflachlich adsorbierten
Stoffe chemisch binden wiirde, wobei eine Abnahme dieser in der Sus¬
pension kaum zura Vorschein kommen diirfte.
Wie dem auch sei, so lehren diese Versuche jedenfalls,
dafl sowohl S&ure als auch Alkali von dem Bakterienkdrper
irgendwie gefesselt wird. Die S&ure und das Alkali verhalten
sieh hierbei etwas verschieden, was ihre natiirliche Ursache
zu haben scheint.
Zusammenfassung.
Die erste Phase der Phagocytose, die Verankerung der
Bakterien an das Leukocytenprotoplasma, l&Bt sieh — wo sie
sieh ohne Mitwirkung des Serums vollzieht — durch Einwir-
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasraa. 537
kung besonderer chemiscber Stoffe einerseits auf die Bakterien,
andererseits auf die Leukocyten ehe diese beiden Kontrahenten
mit einander in Berfihrung gebracht werden, in verschiedener
Richtung beeinflussen.
Werden Staphylokokken (Staphyl. pyog. aur.) w&hrend
einiger Minuten bis einige Stunden der Einwirkung von sehr
verdflnnten (n/ 1000 — n/ 200 ) H 2 S0 4 -L6sungen, welche aufierdem
0,85 Proz. NaCl enthalten, ausgesetzt und nachher den aus-
gewaschenen Leukocythen zum Phagocytieren dargeboten, so
werden sie im allgemeinen begieriger phagocytiert, als wenn
sie vorher keiner besonderen Vorbehandlung unterworfen ge-
wesen sind, sondern einfach in physiologischer Kochsalzlosung
aufgeschwemmt, mit den Leukocyten zusammengebracht werden.
Dieser seitens der H 2 S0 4 -L6sungen auf die Phagocytose aus-
geiibte EinfluB nimmt mit der Einwirkungsdauer der SSure-
losung auf die Bakterien zu und erreicht nach einigen Stunden
ein Maximum, urn sodann wieder unbedeutender und schlieB-
lich dem phagocyt&ren Vorgang hinderlich zu werden. Inner-
halb gewisser Grenzen wird dies Maximum mit steigender
Konzentration der angewandten S&urelbsung schneller erreicht;
es geht aber ebenfalls rascher wieder vorflber und beeintrfich-
tigt nachher den Vorgang in einem um so hoheren MaBe.
Diese sekund&re BeeintrSchtigung der Phagocytose durch
die Vorbehandlung der Bakterien mit S&ure trifft dann zu,
wenn die S&ure eine Agglutination der Bakterien hervorge-
rufen hat, ehe diese den Leukocyten zum Phagocytieren dar¬
geboten werden; nach eingetretener Agglutination scheinen
die Bedingungen fiir eine gleichm&Bige Phagocytose nicht
mehr vorhanden zu sein. Andererseits scheint aber die
Agglutination den phagocytSren Vorgang auch befbrdern zu
konnen, und zwar dann, wenn sie sich eben zur Zeit der
stattfindenden Phagocytose vollzieht, ein Umstand, welcher
vielleicht dahin aufzufassen sein dflrfte, daB die beiden Vor-
gSnge, welche zu einer Zusainmenballung der betreifenden
korpuskulSren Elemente, sowohl gleicher, wie ungleicher Art,
fflhren, einander gewissermaBen sehr nahestehende Erschei-
nungen darstellen.
In derselben Art wirkt, bei Anwendung in entsprechenden
Verdflnnungen, auch das Alkali, wenn die Bakterien zuerst
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538
Max Oker-Blom,
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seinem EinfluB unterworfen und erst dann den Leukocyten
dargeboten werden. Hier niacht sich immerbin dann und
wann eine den phagocytSren Vorgang beeintr&chtigende Wir-
kung bemerkbar; dies scheint bei einer Einwirkungsdauer des
Alkalis von etwa 60— 90 Minuten zuzutreffen. Bei kflrzerer
Vorbehandlung, wie auch nach Vortibergang dieser negativen
Phase kommt aber die positive Wirkung zum Ausdruck, und
die Phagocytose kann nach geniigend langer Vorbehandlung
der Bakterien mit Alkali unter Umstanden etwa dieselbe Hohe
erreichen, wie bei der Vorbehandlung mit S&ure. Bei Vor¬
behandlung der Bakterien mit Alkali kommt es ebenfalls zu
einem Maximum, bzw. einem Optimum ftir die Phagocytose,
wonach der Vorgang sich allmahlich wieder weniger ausgiebig
gestaltet.
Wie es bei der Vorbehandlung der Bakterien mit SSure
der Fall ist, tritt auch bei entsprechender Anwendung des
Alkalis eine Agglutination ein, und zwar scheint diese sehr
leicht hervorgerufen zu werden, sobald die mit Alkali versetzte
Bakterienaufschwemmung mit Saure neutralisiert wird. Die
Agglutination der Bakterien laBt sodann den phagocyt&ren
Vorgang wiederum nicht unbeeinfluBt. Ist sie zur Zeit, wo die
Phagocytose einzusetzen hat, schon zu weit gediehen, so sind
die Bedingungen ftir eine gleichmaBige Phagocytose nicht
mehr vorhanden; diese wird dann nur zu einer geringfugigen
Verankerung von Bakterien ftihren. Tritt aber die Aggluti¬
nation der Bakterien neben und gleichzeitig mit dem phago-
cytaren Vorgang ein, dann scheint sie auf diese eine befordernde
Wirkung ausuben zu konnen.
Kommen die Bakterien, ohne jede Vorbehandlung, einfach
in physiologischer Kochsalzlosung aufgeschwemmt, zur An¬
wendung, indes die Leukocyten im voraus der Einwirkung
entweder von Saure oder von Alkali unterworfen werden, so
scheint die Phagocytose hierdurch meistens ebenfalls befordert
zu werden, obgleich unter Umstanden auch eine diesen Vor¬
gang herabsetzende Wirkung zu beobachten sein kann. Bei ge-
niigend langer Einwirkungsdauer ist eine befordernde Wirkung
jedenfalls durch Anwendung entsprechend konzentrierter S&ure-
losungen leichter zu erzielen, als wenn die Leukocyten der
Vorbehandlung mit Alkali ausgesetzt werden. Im Vergleich
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
539
mit der Bedeutung der Vorbehandlung der Bakterien mit
Saure bzw. Alkali ist die der entsprechenden Behandlung der
Leukocyten im allgemeinen geringfugiger. Man gewinnt den
Eindruck, daB der den phagocytaren Vorgang befdrdernde
resp. beeintr&chtigende EinfluB der angewandten Stoffe sich
irgendwie in erster Linie am Leib, bezw. an der Hfllle der
Bakterie entfaltet, und sodann sekundSr zu einer Anregung
resp. Herabsetzung der Phagocytose fflhrt.
Wenn sowohl die Leukocyten, als auch die Bakterien,
ehe sie mit einander in Beriihrung gebracht werden, einer
Vorbehandlung mit Sfiure Oder Alkali unterworfen werden, so
scheint die Phagocytose die hochsten Werte in den Fallen zu
erreichen, wo mit Alkali behandelte Leukocyten in die Lage
kommen, sSurebehandelte Bakterien an sich zu verankern;
danach kommt an die Reihe die Kombination von saure-
behandelten Leukocyten und alkalibehandelten Bakterien,
wahrend gleichartig behandelte Leukocyten und Bakterien sich
gegenseitig verhaltnismaBig wenig anziehen. Eine Voraus-
setzung dieses Verhaltens ist aber jedenfalls, daB die Einwirkung
besonders der Saure auf die Bakterien nicht so weit getrieben
wird, daB diese der Agglutination verfallen, da hierbei ganz
unberechenbare Resultate sich ergeben konnen, und eventuell
selbst die Kombination von Saure-Leukocyten und Saure-
Bakterien den hochsten Grad der Phagocytose erzielen kann.
Die genannte, die Phagocytose befordernde Wirkung
seitens der Saure und des Alkalis kommt zum hochsten Aus-
druck, wenn die genannten Stoffe beim Zusammenbringen von
Leukocyten und Bakterien neutralisiert werden. Ich kann
folglich in diesem Sinne der Ansicht von Noguchi, Ham¬
burger und He km a, daB die Phagocytose sich in neutralem
Medium am besten entwickelt, beistimmen. Dies ist aber
keineswegs gleichbedeutend damit, daB die Saure und das
Alkali unter alien Umstanden und auf alien Entwicklungs-
stufen der die Phagocytose beeinflussenden Faktoren diesem
Vorgange nachteilig w£ren. Das Gegenteil ist der Fall, wenn
den betreffenden Stoffen Gelegenheit gegeben wird, in zweck-
entsprechender Konzentration und wahrend zweckentsprechen-
der Zeitdauer auf die zellulSren Elemente und besonders auf die
Bakterien einzuwirken, ehe die Kontrahenten einander begegnen.
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540
Max Oker-Blom,
Ferner hat sich herausgestellt, daB, wenn vor allem die
Bakterien, sei es mit SSure, sei es mit Alkali, gentigend lange
vorbehandelt werden, die Phagocytose etwa ahnliche H6hen-
grade erreichen kann, wie wenn sie unter Mitwirkung des
Serums (bei der fiblichen Mischung von gleichen Teilen Leuko-
cytenaufschwemmung, Bakteriensuspension und Serum) sich
vollzieht. So konnte durch Vorbehandlung der Bakterien
wShrend etwa drei Stunden mit n/ 100 o — n /200 NaOH- oder
H 2 S0 4 -L5sung die Phagocytose so in die H5he getrieben werden,
daB sie das 6-, 9- bis 11-fache von der normalen spontanen
Phagocytose betrug.
Zu etwa entsprechenden Ergebnissen haben ebenfalls die-
jenigen Versuche gefiihrt, die unter sonst gleichen Versuchs-
bedingungen bei Gegenwart von Serum angestellt wurden,
und wir konnen hieraus schlieBen, daB die Vorbehandlung der
Bakterien mit SBure oder mit Alkali auch bei der unter Mit¬
wirkung des Serums stattfindenden Phagocytose eine Rolle
spielt. Bezflglich n&herer Angaben hierflber sei auf das auf
p. 534 Gesagte hingewiesen.
In Uebereinstimmung mit den im Anfang dieses Artikels
entwickelten theoretischen Betrachtungen ist der Versuch ge-
macht worden, an der Hand der von den vorausgesetzten elektri-
schen Ladungen der betreffenden korpuskularen Elemente er-
zeugten Anziehungskrafte und deren von verschiedenartigen
Versuchsbedingungen hervorgerufenen Veranderungen, die er-
zielten Ergebnisse dem Verstandnis nSher zu bringen. So
viel ich ersehen kann, glaube ich aussagen zu dttrfen, daB
die unter den verschiedenartigsten Versuchsbedingungen zum
Vorschein gekommenen Veranderungen der Verankerung der
Bakterien an das Leukocytenprotoplasma gewissermaBen eine
gflltige Erkiarung finden konnen in denjenigen Verranderungen
der elektrischen Ladungen, welche einerseits die Leukocyten
in erster Linie aber die Bakterien erfahren, wenn sie der Ein-
wirkung von Saure- resp. Alkalilosungen ausgesetzt werden.
Bewirkt eine Losung, mit der die Bakterien vorbehandelt
werden, daB ihre vorausgesetzte Elektronegativitat bei der
schlieBlichen Mischung mit den Leukocyten noch starker aus-
gepragt wird, mit einem Worte, daB die Potentialdifferenz
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
541
zwischen Phagocyt und phagocytablem Objekt bedeutender
wird, so haben die hierdurch bedingten gegenseitigen An-
ziehungskrafte der Kontrahenten eine regere und umfang-
reichere Anlagerung der letzteren an einander zur Folge. Und
es scheint mir, daB die Annahme solcher Ver&nderungen der
herrschenden elektrischen Ladungen der Leukocyten und der
Bakterien — und zwar nicht nur einer Verst&rkung und Ab-
schwSchung, sondern eventuell auch einer Umstimmung dieser
Ladungen, so daB der Leukocyt elektronegativ, die Bakterie
elektropositiv auftreten kann — zur Erkl&rung der Versuchs-
ergebnisse meistens gut ausreicht.
Hiermit ist jedoch keineswegs gesagt, daB die Sache tat-
s&chlich so liegen muB, oder daB nicht gleichzeitig auch andere
Momente als die genannten, in den entgegengesetzten elektrischen
Ladungen einerseits der Leukocyten andererseits der Bakterien
begrflndeten AnziehungskrSfte, eine Rolle spielen kbnnen.
Wir haben gefunden, daB sSurebeladene Bakterien von Leuko¬
cyten, welche mit Alkali behandelt worden sind, besonders
begierig angezogen werden, sowie daB andererseits mit SSure
behandelte Leukocyten auch sehr gern alkalibeladene Bak¬
terien an sich fesseln. Es konnte nun ebenso gut die Wirkung
ungesattigter chemischer Affinitaten als Primum movens zur
Geltung gekommen, und der den phagocyt&ren Vorgang be-
fordernde EinfluB der genannten Stoffe in einer kiinstlich ge-
steigerten chemotaktischen Wirkung seine Erkltrung finden.
Wie wir uns auch die hierbei treibenden Kr&fte vorstellen
wollen, eins dtirfte jedenfalls feststehen: bei dem Zusammen-
treffen von Bakterien und Leukocyten, kommt es zu einer
Wechselwirkung zwischen diesen physikalisch oder chemisch,
eventuell sowohl physikalisch wie chemisch verschiedenartig
geladenen zellul&ren Elemente, wobei ein Ausgleich der be-
stehenden Ladungen, wenn auch nicht immer eine vollst&ndige
Neutralisation derselben, die Folge sein dtirfte. Wenn die
Berflhrung der Kontrahenten miteinander zur Neutralisierung
bisher vorhandener Potentialdifferenzen zwischen Leukocyt
und Bakterie fOhrt, so wird hierdurch dre Oberflachenspannung
zwischen den betreffenden beiden festen Phasen und dem um-
gebenden flflssigen Medium Vorschub geleistet; diese Spannung
strebt nun, nach Beseitigung der entgegengesetzt wirkenden
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542
Max Oker-Blom,
elektrischen Krafte der Berflhrungsflache, eine Verminderung
der Oberflache zwischen den korpuskularen Elementen einer-
seits und dem flussigen Vehikel andererseits zu reduzieren,
d. h. sie fCihrt zur Zusammenballung jener Elemente und das
Verankern der Bakterien an das Leukocytenprotoplasma ist
besiegelt.
Icb kann nicht umhin, in den Mechanismus der ersten
Phase der Phagocytose und demjenigen der Agglutination in
groBen Ziigen analoge Erscheinungen zu erblicken, und
schlieBe mich also hierin der Auffassung von Levaditi und
Mutermilch ganzlich an. Es leuchtet ein, daB die obigen
Versuche fiir diese Auffassung gewissermaBen eine Stiitze ge-
liefert haben. Beim mikroskopischen Durchmustern der Pra-
parate hat sich ubereinstimmend herausgestellt, daB die Agglu¬
tination ein Vorgang ist, der in unverkennbarer Weise die
Gestaltung der Phagocytose beeinfluBt. Sind die Bakterien
zur Zeit, wo die Phagocytose anzufangen hat, schon grofiten-
teils agglutiniert, so w'ird diese meistens davon becintrachtigt,
was nicht Wunder nehmen kann, da ja nachher die Bedingungen
fiir eine gleichmaBige Phagocytose nicht mehr vorhanden sind.
Fur die analoge Natur der beiden Vorgange spricht aber noch
mehr der Umstand, daB, wenn die Agglutination der Bakterien
eben zur selben Zeit sich vollzieht, zu der die Phagocytose
sich entwickelt, das Ankleben beider Arten von korpuskularen
Elementen aneinander besonders energisch und ausgiebig vor
sich geht, und daB hierbei nicht nur eine Agglutination der
Bakterien unter sich, sondern zugleich eben auch eine Ver-
ankerung von Bakterien an das Leukocytenprotoplasma statt-
findet.
Wie nahe diese beiden Vorgange aucli mit einander ver-
wandt sein mogen, so wirkt die bereits stattgefundene Agglu¬
tination schlieBlich eine unverkennbare Beeintr&chtigung des
spater einsetzenden phagocytaren Vorganges, ein Umstand,
der eben das Studium der Bedeutung einer l&nger dauernden
Vorbehandlung, resp. der Anwendung konzentrierterer Losungen
hierzu meistens vereitelt. Um die Versuchsergebnisse rein
zu erhalten, sind wir also darauf hingewiesen, mit verhaltnis-
maBig stark verdiinnten Losungen der auf ihre Wirkung zu
prufenden Stoffe zu arbeiten.
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Bakterienverankerung an das Leukocytenprotoplasma.
543
Eine Ausnahme in der genannten Beziehung machen ge-
wissermaBen die in Gegenwart von Serum angestellten Ver-
suche, in denen eine schon eingetretene Agglutination den
spSter einsetzenden phagocytaren Vorgang immer noch befdr-
dern zu konnen scheint.
Wollten wir nun eine Parallele ziehen zwischen den tatigen
Prinzipien bei derjenigen Phagocytose, welche unter Mitwir-
kung der opsonisch wirkenden Serumbestandteile vor sich geht,
und den Faktoren, welche bei jener, ebenfalls recht ansehn-
lichen Phagocytose wirksam sind, die mit Hilfe von Saure und
Alkali kflnstlich hervorgerufen wird, so dflrfte etwa folgende
bildliche Darstellung den Parallelismus vielleicht am besten
zum Ausdruck bringen: Falls die Bakterien mit Saure vorbe-
handelt worden sind, und ihnen somit die Saure, bzw. die
H-Ionen als Ambozeptor anhaften, so spielt das beim Zusammen-
bringen der Kontrahenten hinzugefugte Alkali, bezw. die OH-
Ionen die Rolle des Komplementes, welches die Y T ereinigung
der betreffenden zelligen Elemente begunstigt und besiegelt;
far die mit einem OH-Ambozeptor beladenen Bakterien iiber-
nehmen die H-Ionen die Aufgaben des Komplementes. Es
liegt mir indessen — was besonders hervorgehoben sein mag
— fern, dem soeben gebrauchten Bilde eine groBere Bedeutung
vindizieren zu wollen, als ihm gebiihrt.
Wie immer sich die Einzelheiten verhalten mogen, so
scheint die erste Phase der spontanen Phagocytose, die Ver-
ankerung der Bakterien an das Leukocytenprotoplasma, auf
Grund der oben erzielten Ergebnisse ein Vorgang zu sein,
der in physikalisch-chemischen Kraften begrundet ist, und der
durch die von den Versuchsbedingungen bewirkten Verschie-
bungen der einerseits dem Leukocytenprotoplasma, anderer-
seits und vor allem aber den Bakterien anhaftenden elektri-
schen Ladungen sowie durch die hierdurch entstehenden Ver-
anderungen der vorliegenden Potentialdifferenzen, bzw. durch
die in diesen gegebenen Anziehungskrafte zwischen den be¬
treffenden korpuskularen Elementen eine recht plausible Er-
klarung erhalten kann.
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544
Jean Louis Burckhardt,
Naclidruck verbolcn.
[Aus dem Pharmakologischen Institut der Universitat Berlin;
Direktor: Gebeimrat Prof. Dr. A. Heffter (AbteiluDg fiir Im-
munit&tsforschung und experimentelle Therapie; Leiter: Prof.
Dr. E. Friedberger).]
tJeber das Blntbild bei Hflhnertuberkulose und dessen
Beziehnngen zur sogenannten Hfihnerlenkfimie nebst
Bemerkangen fiber das normale Htthnerblut
Von Dr. Jean Louis Burckhardt (Basel).
(Eingegangen bei der Redaktion am 12. Juni 1912.)
Die nachfolgenden Untersuchungen wurden auf Veran-
lassung von Herrn Professor Friedberger unternomraen,
um neue Anhaltspunkte iiber den Erreger der HQhnerleukktnie
zu gewinnen, einer Affektion, welche nach den Untersuchungen
von Ellermann und Bang sowie Hirschfeld und Ja¬
coby als experimentell iibertragbare Infektionskrankheit auf-
zufassen ist.
Als mutmaftlicher Erreger kam fiir uns in erster Linie die Tuberku-
lose in Betracht, sehon aus dem (Jrunde, wcil viele Hiihner der erwahnten
Untersucher tuberkulbs waren, so aueh das Huhn. welches uns Herr Prof.
Jacoby in dankenswerter Weise zu uberlassen die Giite liatte.
Wie ich gleich vorausschicken mochte, gelang es mir nicht,
mit Tuberkelbacillen ein der spontanen Hiihnerleukamie iden-
tisches Krankheitsbild zu erzeugen; doch scheinen mir die hoch-
gradigen BlutverSnderungen bei Tuberkulose interessant genug,
um trotzdem — als erster Teil der Arbeit — ausfiihrlich ver-
bffentlicht zu werden x ). Im zweiten Teile mochte ich den Begriff
der Hiihnerleukamie nach den vorliegenden Arbeiten kritisch
erortern und einige eigene Untersuchungen dariiber mitteilen.
Ich glaube namlich, dafi die neueren Untersuchungen iiber
das Blut und Knochenmark der Hiihner, besonders die embryo-
1) Eine vorliiiifige Mitteilung dariiber maehte ich im Sept. 1910 in der
Versammlung der Naturforscher und Aerzte in Kiinigsberg, bevor die ana-
tomischen Untersuchungen an normalen und pathologischen Hiihnem
vollendet waren; daher haben sich meine Anschauungen iiber die Deutung
der Befunde seither etwas veriindert.
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
545
logischen von Wera Dantschakoff, auch auf die Eenntnis
der Hflhnerleuk&mie ein nenes Licht werfen. Daher muB ich
zuerst eine Darstellung der normalen Verh<nisse — nach
oigenen und fremden Untersuchungen — vorausgehen lassen.
Vorbemerkungen fiber das Hfihnerblnt und die blut-
bildenden Organe.
Bei Beginn der vorliegenden Arbeit waren von zusammenfassenden
Angaben iiber das Huhnerblut nur die Arbeiten vonMeinertz und von
Ellermann imd Bang bekannt, iiber das Knochenmark die grundlegen-
den Arbeiten von Bizzozero sowie dicjenigen von Denys u. A. Seit-
her sind iiber das Blut die Studien von Kasarinoff und in allerletzter
Zeit diejenigen von Klieneberger und Carl erschienen, iiber das
Knochenmark die Arbeiten von Wera Dantschakoff und von
V e n z 1 a f f.
Ich halte es trotzdem fQr notig, die h&matologischen und
histologischen Details ausftihrlich wiederzugeben, da ich hie
und da zu Ergebnissen kam, welche von denen der tibrigen
Autoren abweichen.
Technik: Die Untersuchungsmethoden miissen aus verschiedenen
Griinden von denjenigen beim Menschen etwas abweichen.
Die Blutentnahme geschieht am beaten durch einen kleinen Scheren-
schnitt in den Kamm, nachdem dieser durch Reiben mit Aether etwas
hyperamisch gemacht wurde. Bei ganz anamischen Hiihnern mufite ich
manchmal aus der Fliigelvene entnehmen.
Zur Ziihlung der Leukocyten konnen wir die Roten nicht zerstoren,
me es beim menschlichen Blute iiblich ist, weil alle Zellen kernhaltig sind;
man wird darum durch die Erythrocyten und noch mehr durch die Blut-
pliittchen auBerordenllich gestort. Der Gebrauch der Verdiinnung 1:10
ist wegen der vielen anwesenden ZeUen unmoglich, und wir sind fur die
Ziihlung der Weifien auf diesclben Verdiinnungen wie fiir die der Roten
angewiesen. Dadurch wird die Fehlerquelle natiirlich vergroBert, noch
mehr aber durch den Umstand, dafi die kleinen Lymphocyten in der
Zahlkammer vom Anfanger kaum von den Kernen der Blutpliittchen
unterschieden werden konnen. Die Zahlung erfordert daher sehr viel
Uebung, und ich selbst bin am Anfange bei normalen Hiihnern teilweise
zu unmoglichen Zahlen gekommen. Ich habe fruchtlos verschicdene
FM)ungen versucht und zuletzt Rote und WeiBe einfach in physiologi-
scher Kochsalzlosung untersucht. Spater bin ich dann bei mehreren
Zahlungen beim selben Huhn zu sehr befriedigenden Resultaten gekommen.
Fehler von einigen Tausend Leukocyten sind iibrigens weniger wiehtig
als beim Menschen, da es sich schon normalerweise um viel grolkre
Zahlen handelt.
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546
Jean Louis Burckhardt,
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Manchmal habe ich in der Zahlkammer aueh nur die deutlich er-
kennbaren groBen Leiikoevten (also groBe Lymphoeyten und Polynukleare)
gezahlt und dann die Zahl der kleinen Lymphoeyten nach ihrem prozen-
tualen Vorkommen im Blutpraparat ergiinzt.
Mehrere Autoren haben das Auszahlen der WeiBen in der Zahl¬
kammer ganz aufgegeben. Ellermann und Bang geben an, daB sie
dort die Roten und Wei Ben zusammen zahlen und dann ihr Verhaltnis
nach den Ausstriehpraparaten ausrechnen. Die Blutplattchen werden an-
scheinend nieht berucksiehtigt. Klieneberger und Carl zahlen Rote,
WeiBe und Blutplattchen zusammen und stellen dann in den Ausstrichen
fest, wieviele WeiBe bzw. Plattehcn auf 3000 Rote fallen. Der oben an-
gegebene Fehler wird dadureh vermindert; die Resultate sind aber, wie
auch Klieneberger und Carl gestehen, wenig zufriedenstellend. Ich
fand iibereinstimmend mit diesen Autoren, daB die Verteilung nieht nur
der Blutplattchen, sondern aueh der WeiBen an verschiedenen Stellen der
Priiparate sehr verschieden ist, und habe darum diesen Weg aufgegeben,
da er zu noeh bedeutend grbBeren Fehlern fiihrt als der erste.
Aueh das Auszahlen der WeiBen in qualitativer Hinsicht ist etwas
schwerer als beim Mensehen, besonders da die Blutplattchen und Erythro-
evtenkerne sehr leicht zu Verwechslungen mit kleinen Lymphoeyten An-
laB geben.
Yon Farbungen hat sich mir diejenige von Giemsa am besten be-
wahrt, trotzdem die pseudoeosinophilen Granula erst bei sehr starker
Farbung deutlich werden und sich von den eosinophilen sehwer unter-
scheiden. Aus diesem Grunde machtc ich zu gleieher Zeit regelmiiBig
auch Priiparate nach May - Griin wald. Die Kombination von beiden
nach Pappenheim scheint nach den Bildern von Kasarinoff sehone
Resultate zu geben, ich selbst bin nach anfanglichen MiBerfolgen davon
abgekommen. AuBerdem fiirbte ich einige Priiparate nach Unna-
Pappenhei m, mit Triacid und anderen Farbungen zu speziellen Zweeken.
Abstriche der blutbildenden Organe wurden in derselben Weise gefiirbt.
Die Organe wurden in der Regel in Formol, einzelne Stiieke in
M iiller-Formol mdglichst lebensfrisch eingelegt. In der Regel wurden
sie in Celloidin eingebettet und mit Hamalaun-Eosin gefiirbt, was fur die
meisten Untersuchungen, aueh des Knoehenmarks, geniigt. AuBerdem
wurden einzelne Paraffinpriiparate mit andern Farbungen verwendet.
Im folgenden m6chte ich zuerst eine Beschreibung der
verschiedenen, im Blute vorkommenden Zellformen geben; ich
kann dabei auch gleich die als pathologisch beschriebenen
Formen beriicksichtigeu, da fast alle gelegentlich bei an-
scheinend gesunden Hiihnern im Blute Oder wenigstens im
Knochenmark vorkommen.
Ery throev ten: Ovale Zellen, relativ schwa eh (lurch Hiimoglobin ge-
fiirht. Kern oval, stark fiirbbar,mit grober, wolkigerChromatinstruktur. Schon
im normalen Blute finder) sich versehiedene Abweiehungen: Zellen mit etwas
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
547
kleinerem und dunklerem pyknotischem Kern, die als Altersformen erschei-
nen, und Zellen mit schwacher oder ungleich farbbarem mehr oder weniger
basophilem Protoplasma und groBerem hellerem fast oder ganz rundem
Kern. Letztere zeigen alle Uebergange zu den Erythroblasten des Knochen-
marks und miissen deshalb sicher als Jugendformen, nicht als Degene-
rationsformen, aufgefasst werden. Besonders reichlich sind diese Formen
nach Aderlassen oder infolge von experimenteller Anamie.
AeuBerst selten sind kernlose Formen; diese imponieren meist durch
Deformation oder Risse als Kunstprodukte. Viel haufiger sind sehr kleine
hamoglobinhaltige Plattchen, die wohl auch als Bruchteile zerstorter
Erythrocyten aufzufassen sind.
Thrombocyten oder Blutplattchen : Den Erythrocyten
auflerst ahnlich, mit demselben dunklen ovalen, meist etwas groBeren Kern.
Das Plasma ist ebenfalls meist langsoval, in den Praparaten aber meist
deformiert, und enthalt kein Hamoglobin. Oft fallen im hellblau gefarbten
Plasma einige azurophile Kornchen auf, die in Vakuolen gelegen sind.
Ihre Zahl und Lage ist nach meinen Befunden ziemlich inkonstant.
Auch hier finden sich noch haufiger als bei den Erythrocyten Formen
mit pyknotischem Kern, daneben einzelne rundkemige Jugendformen. In
vielen Praparaten sind iibrigens nur die mehr oder weniger zerstorten Kerne,
meist in Haufen gelagert und mit Resten des Protoplasmas umgeben, er-
halten. Oft lassen sie sich dann kaum von Lymphocyten unterscheiden.
Funktionell sind diese Thrombocyten wohl sicher mit der Gerinnung
in Zusammenhang zu bringen. Jedenfalls laBt die leichte Zerstorbarkeit
und die Verklebung zu Haufen ohne weiteres daran denken.
Pseudoeosinophile polymorphkernige Leukocyten
oder Stiibchenzellen: Der Kern ist meist in zwei, oft auch in drei
grobe Klumpen eingeteilt, die durch schmale Briicken verbunden werden.
Hie und da ist er aber auch bei normalen Hiihnern nur schwach gelappt
und ziemlich hell. Das Protoplasma ist leicht oxyphil. Die Granulationen be-
stehen aus groBen, meist nicht stiibchen- sondern spindelformigen kristall-
artigen Kornchen, die nach den farbtechnischen Kriterien von Ehrlich
und Pappenheim als pseudoeosinophil benannt werden miissen. In der
Mitte der Spindel wird oft ein ungefiirbter Punkt sichtbar, der je nach der
Stellung der Mikrometerschraube bald aufblitzt. bald schwarz erscheint.
Ueber die Zusammensetzung dieses Punktes wurde schon mehrfach dis-
kutiert, mir scheint er am einfachsten als Lichtbrechungsphanomen zu
erklaren. Zahl und Form dieser Granulationen ist etw r as verschieden.
Schon beiin normalen Huhn sind sie in einzelnen Zellen mehr stiibchen-
formig, in anderen teilweise rund.
Starker sind die Verschiedenheiten bei Anamie aus verschiedenen
Grlinden. Wir finden da polymorphkernige Zellen mit vorwiegend oder
ausschlieBlich runden Granulationen von normaler Tinktionsfahigkeit,
auBerdem Zellen, in denen basophile Kornchen allein oder neben den
oxyphilen vorhanden sind. Diese Kornchen sind bei Fiirbung nach
May-Griinwald bald deutlich blau, bald violett, nach Giemsa blau-
violett, und zeigen verschiedene GroBen. Noch andere Granulationen
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sind bei tier ersteren Farbung auBerst blafl gelbrot, oder sie imponieren
nur als ungefarbte Vakuolen, manchmal auch als feinste gefarbte Piinkt-
chen, die in einer groBen ungefarbten Stelle gelegen sind. Die Anzahl
soldier Granula in einer Zeile ist meist kleiner als bei normal entwickelten
Zellen. Die Kerne dieser Zellen, deren Granulationen nach den spater
zu bespreehenden Befunden im Knochenmark als unreif, nicht als abnorm,
angesehen werden miissen, sind toils normal gelappt, teils auffallend wenig
gebuchtet.
Auffallend sind nodi im normalen und pathologischen Blut einige
besonders kleinc Leukocyten, nicht groBer als kleine Lymphocyten, mit
wcnigen spindelformigen pseudoeosinophilen Granulationen. Nach Dan¬
ts chakoff entstchen sie direkt aus den kleinen Lymphocyten.
Myelocyten habe ieh im Blute nur unter pathologischen Verhiilt-
nissen gesehen. Ihr Kern entspricht meist ungefahr dem der spater zu
beschreibenden Lymphoidzellen, oder er ist etwas kleiner und dunkler und
dann meist spurweise gebuchtet. Das Protoplasma ist basophil; die Granu¬
lationen entsprechen in Form und GrdBe denjenigen, die eben bei den
jungen Zellen beschrieben wurden.
Eosinophile polymorphkernige Leukocyten: Die Zellen
sind meist spurweise kleiner als die pseudoeosinophilen. Der Kern zeigt
meist Brillenform. Die Granula sind im Gegensatze zu denen der mensch-
lichen Eosinophilen auBerst fein. Abnormc Formen fand ich nur bei zwei
anscheinend gesunden Hiihnern mit ausgesprochener Eosinophilie. Dort
hatten die eosinophilen — nicht pseudoeosinophilen — Zellen z. T. gelb-
liche groBere Granula. DaB auch diese Jugendformen entsprechen, halte
ich fur wahrseheinlich, konnte aber diese Frage nach den Befunden am
Knochenmark nicht entscheiden.
Mast zellen: Sie zeichnen sich durch basophile, grobe, wasserlds-
liche Granulationen aus. Der Kern ist bei Farbung nach May-Griin-
wald kaum zu unterscheiden, bei Giemsa fiirbung, wo die Granula aufge-
lost sind, liiBt er sich als plump, anniihernd yiereckig oder leicht hantel-
formig — selten ganz rund — leicht erkennen. Die Angabe von Kliene-
berger und Carl, daB auch stiibchenformige basophile Granula vor-
komraen, kann ich nicht bestatigen.
Sogenannte GroBe Lymphocyten, vielleicht besser als Lym¬
phoidzellen oder mit Dantschakoff als lymphoide Hamo-
bl as ten zu benennen: (Ich selbst habe diese Zellen in meiner vor-
liiufigen Mitteilung, wie Ellermann und Bang, einfach „groBe Mono-
nukleare tf genannt, ohne mich filr eine Auffassung als Lymphocyten oder
Leukocyten zu enschlieBen). Die Kerne sind sehr groB, ungefahr rund,
nach Max-Grunwald ziemlich homogen hellblau, nach Giemsa
leicht wolkig violett gefiirbt und ziemlich hell. Hie und da sind zwei,
manchmal nur ein Kemkorperchen zu erkennen. Soviel ich bemerken
konnte, lassen sich die Zellen aber dadurch nicht unterscheiden, und die
Sichtbarkeit hiingt nur vom Ausstreichen ab; auBerst diinne, sogar ge-
quetschte Zellen zeigen die Kemkorperchen am besten. (Auch sonst
hiingt die Farbe von Kern und Protoplasma auBerordentlich von der
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
549
Dicke des Ausstriches ab!) Das Protoplasma ist nach May-Griinwald
starker blau gefarbt als der Kern, nach Giemsa blaulich mit sehr
schwacher netzformiger Zeichnung. Ziemlich oft finden sich kleine azuro-
phile Kornchen, meist in Vakuolen gelegen. Im Nativpraparat fallen
diese Vakuolen viel mehr auf und und imponieren dort als ziemlich groSe
starker lichtbrechende Korper.
Eigentliche groBe Mononukleare und Uebergangsformen im
Sinne Ehrlichs sind selten. Klieneberger und Carl geben an, dafi
sie solche nie beobachtet haben. Der Kern ist dem der groBen Lympho-
cyten auBerst ahnlich, nur leicht gebuchtet, und der Buchtung entspricht
meist eine etwas hellere Stelle im Protoplasma. Das Plasma zeigt voll-
standig gleiche Farbung. Die Unterschiede sind also so gering, dafi ich
beim Zahlen diese Kategorie nicht berucksichtigte.
Nur unter pathologischen Verhaltnissen fand ich sonst typische
Lymphoidzellen und groBe Mononukleare mit iiuBerst groBen Kugeln,
deren Inhalt sich in der Art von normalen oder unreifen pseudoeosino-
philen Granulationen fiirbte. Solche Kugeln sind von Dantschakoff
im Knochenmark bei Hunger beschrieben und mit phagocytierten Erythro-
cvten in Verbindung gebracht worden, doch liegt es niiher, sie mit
Hirschfeld und Jacoby als Riesengranula zu bezeichnen. Von diesen
Zellen bis zu eigentlichen Myelocyten finden sich iibrigens alle Ueber-
gange. „Myeloblasten a konnen wir also nicht unterscheiden, und iiber-
haupt ist es mir, ebenso wie Dantschakoff, unmoglieh,
Unterschiede z wise hen den Vorstufen der Erythrocyten,
Leukocyten oder Lymphocyten zu finden.
Kleine Lymphocyten: Der Kern ist kleiner als bei den groBen
Lymphocyten, mit den iiblichen Blutfarbungsmethoden aber nur wenig
starker gefarbt als bei diesen. Deutlicher wird der Chromatinreichtum
bei Hamalaun-Eosinfarbung. Er zeigt dann starke, aber ziemlich ver-
schwommene Chromatinbalken, die manchmal an die Zeichnung des
menschlichen Plasmazellkerns erinnem, ohne sie aber an Deutlichkeit zu
erreichen. Das Plasma ist stark basophil, homogen, bald ganz schmal und
gleichmaBig um den Kern verteilt, bald reichlicher, besonders an der einen
Heite. Ein pi asm azellar tiger Hof ist manchmal leicht angedeutet. Azur-
korner fand ich ziemlich haufig; Kasarinoff gibt an, daB sie selten sind.
Mit tie re Lymphocyten diirften sich vielleicht unterscheiden
lassen. Sie zeigen alle Zwischenstufen zwischen groBen und kleinen
Lymphocyten, sind aber im Verhiiltnis zu den ausgesprochenen Formen
meist nicht sehr haufig. Bei der Zahlung habe ich sie immer zu einer
der beiden typischen Formen geziihlt, gebe aber zu, daB dies nur mit
einiger Willkiir geschehen konnte. Manchmal sind diese mittleren
Lymphocyten iibrigens den Erythroblasten auBerst ahnlich.
Angaben fiber die Zahl der roten und weiBen Blutkorper-
chen fand ich bei Ellermann und Bang. Sie geben fiir die Erythro¬
cyten ca. 3 (XX,) (XX), fiir die Leukocyten 30 (XX) pro Kubikmillimeter an.
Das Hiimoglobin betriigt nach ihnen 40—65 Proz. Relative Zahlen: Poly-
nukleare 37 Proz., Lymphocyten 40 Proz., groBe Mononukleare 23 Proz.
ZeiUchr. f. immumlatsforachung. Orig. Bd. XIV. 38
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550
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Ich selbst habe 1910 die Zahl der Erythrocyten auf 3—4 000000,
die der Leukocyten auf ca. 30 000 angegeben, als relative Zahlen: Stabchen-
zellen 20—25 Proz., Eosinophile 5—10 Proz.. Mastzellen 2—6 Proz., groBe
Lymphocyten ca. 20 Proz., kleine Lymphocyten ca. 50 Proz.
In neuester Zeit geben Klieneberger und Carl die Zahl der
Erythrocyten auf 3117 000, die der WeiBen auf 35 000—60 800, die der
Plattchen auf 22 900—130 000 an. Als mittlere Hamoglobinzahl nennen
sie 62 Proz. Relative Zahlen: groBe Lymphoc. 12,3 Proz., kleine Lymphoc.
51,5 Proz., Stabchenzellen 29,5 Proz., Eo. 4,5 Proz., Mastz. 2,2 Proz.
Als Mittel aus den letzten 20 meiner ca. 70 Zahlungen an normalen
Hiihnern mdchte ich nun die folgenden Zahlen geben: Erythrocyten
3 288 000, Leukocyten 23 500.
Relative Zahlen: Pseudo. 27,9 Proz., gr. Lymphoc. 12,8 Proz., kl.
Lymphoc. 48,5 Proz., Eo. 7,9 Proz., Mastz. 2,9 Proz.
Die kleinere Zahl der weiBen Blutkorperchen diirfte gegeniiber den
friiher gefundenen wohl richtig sein, da ich es besser gelernt habe, die
Blutplattchen von den Leukocyten zu trennen. Die relativen Zahlen und
die Zahl der Erythrocyten stimmen mit denen von Klieneberger und
Carl ziemlich gut iiberein; die von dem letzteren Autor angegebenen
hohen Leukocytenzahlen beruhen wohl sicher auf Fehlern.
Die Erkl&rung der Beziehungen der Blutkorperchen unter-
einander und ihrer vielfachen Uebergangsformen gibt uns eine
genaue Untersuchung des Knochenmarkes. Meine eigenen
Untersuchungen darUber an 5 normalen und 4 durch Blut-
verlust stark anamisch gemachten Hiihnern stimmen, was die
Bilder anbetrifft, vollstiindig mit den ausfiihrlichen Angaben
von Dantschakoff iiberein, so daB ich mich dartiber kurz
fassen kann. Eine Erkl&rung geben uns allerdings erst
Dantschakoffs schbne embryologische Untersuchungen.
Das Knochenmark des Huhnes besteht, wie seit den Unter¬
suchungen von Bizzozero bekannt ist, im wesentlichen aus weiten
kapillaren Venen, in deren Innerem die Bildungsstatte der roten und in
deren Zwischenraumen neben Fettgewebe die Bildungsstatte der weiBen
Blutkorperchen ist. Ueber die naheren Verhiiltnisse gingen die Meinungen
von Bizzozero, Denys u. A. auseinander. Dantschakoff konnte
nun zeigen, daB sich beim Hiihnerembryo aus densclben Mesenchym-
zellen zuniichst kleine und dann groBe Lymphocyten entwickeln, und
daB diese groBen Lymphocyten oder lymphoiden Hamol^lasten die Stamm-
zellen der roten und weifien Blutkorperchen sind.
Die Bildung der Erythrocyten geht im Embryo so vor sich,
daB die groBen Lymphocyten in die GefaBe wandern, 6ich dort durch
Mitosen vermehren und durch Hamoglobinaufnahme und andere Ver-
andemngen zu Erythroblasten werden. Diese Erythroblasten sind gegen
die Erothrocyten charakterisiert durch ihren groBeren hellen runden Kern,
und ihnen kommt wieder die Fiihigkeit der indirekten Kernteilung ziu
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
551
Wir finden dann am Rande der venosen Raume anfangs 1—2 Reihen
von Lymphoidzellen, daran schlieBen sich alle Stadien von Erythroblasten
und in der Mitte des GefaBes die fertigen Eiythrocyten. Kompliziert
werden die Verhaltnisse dadurch, daB sich beim erwachsenen Huhn diese
heteroplastische Bildung nicht wiederholt. Die Regeneration geschieht
dort vollig oder fast vollig durch homoeoplastische Bildung, d. h. dureh
Vermehrung der Erythroblasten. So kommt es, daB bis vor kurzem noch
die Meinung von Bizzozero Geltung hatte, daB die Roten nur aus
hamoglobinhaltigen Zellen entstehen, und daB die groBen Blutkorperchen
am Rande der GefaBe einfach als „Leukocyten tf aufzufassen seien. Ebenso
wie Dantschakoff konnte ich aber konstatieren, daB bei schweren
Anamien (auch schon nach mehrfachem Blutverluste) die heteroplastische
Bildung wieder zuriickkehrt, und daB dann Uebergangsformen der Lym¬
phoidzellen zu den Erythroblasten oft gefunden werden konnen.
In gleicher Weise wie die Erythrocyten werden nach Dantscha¬
koff innerhalb der GefaBe auch die Blutplattchen gebildet, ein Vorgang,
dem ich nicht geniigend Aufmerksamkeit geschenkt habe, um eine eigene
Meinung zu haben.
Weniger einfach, aber ahnlich, sind die Verhaltnisse in den Raumen
auBerhalb der GefaBe, an der Bildungsstatte der weiBen Blut¬
korperchen. Dort vermehren sich die Lymphoidzellen ebenfalls und
konnen sich in granulierte Zellen, Myelocyten, umwandeln. Diese haben
wieder die Fahigkeit, sich durch Mitose zu vermehren, be vor sie zu
eigentlichen polymorphkemigen Leukocyten werden. Andererseits werden
die groBen Lymphocyten auch zu kleinen Lymphoeyten und diese ihrer-
seits zu Plasmazellen, teilweise auch zu Mastzellen und zu Granulocyten.
DaB aus diesen kleinen Lymphocyten, die sich zum Teil in follikelartigen
Haufen lagern, unter Umstanden auch wieder groBe Lymphocyten werden
konnen, halt Dantschakoff fur wahrscheinlich, ich mochte es nach
den Befunden an stark anamischen Hiihnern fiir sicher annehmen.
Beim erwachsenen Huhn spielt aber die heteroplastische Bildung von
Granulocyten aus Lymphoidzellen keine groBe Rolle, sondern die Ver¬
mehrung geschieht hauptsachlich durch Mitosen in den Myelocyten. Das
Wiederauftreten der Lymphoidzellen bei Anamien fiihrt Dantschakoff
auf einzelne zuriickgebliebene Exemplare zuriick, mir scheint daneben
auch eine Umwandlung der kleinen Lymphocyten in den Follikeln vor-
zukommen. Sicher ist, daB die kleinen Lymphocyten beim Huhn keine
Altersformen, sondern vielfaltig entwicklungsfahige Zellen sind.
Die Abwechslung von homoeo- und heteroplastischer Bildung der Ery¬
throcyten und Granulocyten wird noch dadurch kompliziert, daB sich bei
homoeoplastischer Entwicklung die Mitosen in sehr verschiedenen Entwick-
lungsstadien bilden konnen, d. h. daB die Entwdcklung von Kern und
Plasma miteinander nicht immer parallel geht. Wir finden innerhalb der
GefaBe Mitosen in stark und in schwach hamoglobinhaltigen Zellen,
manchmal auch Erythrocyten mit vollig entwickeltem ovalen Kern, die
noch sehr wenig Hamoglobin haben, und typische Erythroblasten mit viel
Hiimoglobin. Bei den Granulocyten sind die Verhaltnisse ahnlich. Manchmal
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552
Jean Louis Burckhardt,
haben alle Zellen, auch die in Mitose befindlichen, gut entwickelte pseudo-
eosinophile Granula. Andere Male finden wir Myelocyten und Leukocyten
rait basophilen oder kaum farbbaren Granulationen. Auch hier laBt
sich der Satz aufstellen, dafi sich beim erwachsenen nor-
malen Huhne meist sehr weit entwickelte Zellen teilen;
unter pathologischen Umstanden geht die Differenzie-
rungzuriick,bi8 wirzum hetcroplastischen Typus kommen.
Erwahnt muB werdcn, daB Venzlaff zu etwas anderen Resultaten
gekommen ist. Er will die Bildung der roten und weiBen Blutkorperchen
von den kleinen Lymphocytcn ableitcn. Das ist teilweise ein Strcit um
Worte, da sich ja kleine und groBe Lymphocyten in einander umwandeln,
Andererseits scheint er mir die auch von Dantsehakoff beschriebene
und von mir beobachtete Tatsache zu iiberschatzen, daB die kleinen
Lymphocyten am Rande der Follikel im Embrvonalstadium und bei Anamie
Granula bilden konnen. Hier handelt es sich doeh wohl nur um die
sparlichen kleinen Granulocyten, die ich oben beim Blutc beschrieben
habe. Es laBt sich auch kaum denken, daB die ziemlich sparlichen
Follikel im Marke die einzigen Orte sein sollen, denen alle Zellen, rote
und weiBe, entspringen. Auf die Frage der von Ven zl af f beschriebenen
Stomata will ich nicht eingehcn. Ganz grundlos ist aber jedenfalls seine
Annahme, die auch von Sacharoff u. A. schon aufgestellt war, daB die
Granulationen durch Aufnahme von roten Blutkbq>erchen entstehen; wir
haben ja deutlich die Entwicklung aus kaum farbbaren und basophilen
Kdrnchen sehr vielfach beobachten konnen.
Die obigen Befunde lassen sich in das folgende Schema
zusammenfassen, zu dessen Erklarung nur bemerkt werden
muB, daB die Umwandlung I und II (heteroplastischer Modus)
meist nur unter embryonalen Verhaltnissen oder bei An&mie
zustande kommt, w&hrend man unter normalen Bedingungen
meist nur die Stadien III und IV findet.
I. Kleine Lymphocyten Fixe Mesenchymzellen
t +
II. Lymphoidzellen
(Vermehrung durch Mitose moglich)
III. Erythrohlasten Thromboblnsten Myel
ocyten Kleine Lymphocyten
(Mitosen moglich) (Mitosen ?) (Mitosen moglich) (keine Mitosen)
GroBe Mononubleilre
(Altersform)
IV. Erythroeyten Tlirombocyten Granulocyten Mastze
len Plasmazellen Granulocyten
(wohl nur kle'uie 4
Lmerhalb der GefiiBe
AuBerhalb der GefiiBe
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
553
Leber: In der Leber finden sich bei den meisten normalen Hiihnern
kleine perivaskulare Herde von kleinen und grofien Lymphocyten, da-
zwischen auch normalerweise hier und da granulierte Zellen. Letztere
zeigen meist einen Myelocytenkern. Mitosen habe ich unter normalen
Verhaltnissen und bei Anamie durch AderlaB nie gesehen.
Wiihrend diese Herde normalerweise keine groBe Rolle fur die Blut-
bildung zu spielen scheinen, vergroBem sie sich unter den pathologischen
Verhaltnissen, wie sie spater beschrieben werden, stark und zeigen oft
reichliche Mitosen.
Ellermann und Bang beschreiben auBerdem noch bei Leukamie
eine Blutbildung innerhalb der Leberkapillaren. Wie ieh spater ausfuhren
werde, seheint mir diese aber nicht ganz einwandsfrei bewiesen.
Milz: Auch in der Milz soil naeh Ellermann und Bang,
wenigstens unter pathologischen Verhaltnissen, myeloides Gewebe vor-
handen sein. Klieneberger und Carl geben an, daB sie nur lymphoide
Zellen gefunden haben. Der Bau der Milzpulpa ist iibrigens, wie die
meisten Autoren zugeben, sehr schwer verstandlich. Ieh selbst hiitte nach
meinen Schnittpriiparaten von normalen Huhnern das Vorkommen von
myeloidem Gewebe verneint, in Abstrichpraparaten fand ich aber zum
Teil ziemlich hiiufige Myelocyten und Erythroblasten in Fallen, wo solche
im Blute sieher nicht vorhanden waren. Ich muB demnach der Milz die
Fahigkeit der Blutbildung zusprechen, glaube aber, daB sie ebenso wie in
der Leber eine sehr gennge Rolle spielt.
Lymphdriisen 6pielen beim Huhn keine Bolle; an ihrer Stelle
finden wir, wie Koch und Rabinowitsch es fiir den Darm ausflihr-
lich beschreiben, an verschiedenen Stellen groBe Lymphfollikel. Solche
liegen z. B. vereinzelt in der Leber, Lunge etc. Die Driisen, welche von
Ellenberger und Baum am Halse beschrieben werden, konnte ich
nicht finden. Was makroskopisch als solche imj>onierte, erwies sich immer
als eine Thymuspartie.
I. Teil.
Blutveranderungen bei Hfihnertuberkulose.
Die erste Angabe, die ich fiber Blutveranderungen bei Hiihnertuber-
kulose finden kann, stammt von Moore. Er nennt unter den Symptomen
dieser Krankheit eine starke Anamie mit Riickgang der Erythrocyten bis
auf 1100000 und ein leichtes Ansteigen — „a slight increase" — der
Leukocyten, besonders der polynuklearen Formen. Weiter beschreibt er
in der Leber eine Verraehrung der Leukocyten und eine starke Blutuber-
fiillung zwischen den Tuberkelknotchen.
Ellermann und Bang erwiihnen ebenfalls eine Leukocvtose, ohne
nahere Angaben dariiber zu machen.
Hirschfeld und Jacoby geben dann im AnschluB an ihre Unter-
suchungen iiber Hiihnerleukamie eine genauere Beschreibung der tuber-
kulosen Blutveranderungen. Sie infizierten Hiihner durch intravcnose
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Jean Louis Burckhardt,
Injektion und beschreiben eine Vermehrung der Leukocyten bis auf 75(XX).
Dabei fanden sie etwa die Halfte der weiBen Blutkorperchen aus Lympho-
cyten odor groBen mononuklearen Elementen, die andere aus granulierten
polymorphkernigen Zellen bestehend. AuBerdem saheu sie recht zahlreiche
Mastzellen. Niihere Zahlen werden nieht angegeben. Veriinderungen der
Blutbildungsorgane im Sinne von Leukamie wurden vermiflt.
Meine eigenen Untersuchungen wurden an 26 Hflhnern
gemacht; davon sind 25 init Reinkulturen von Tuberkelbacillen,
groflenteils intravenSs, injiziert. Ihr Blutbefund wurde in
Abst&nden von ungef&hr einer Woche bis zum Tode verfolgt.
Ebenso wurden sie vor der Injektion auf normales Verhalten
des Blutbildes geprQft. Zu diesen experimentell infizierten
Tieren kommt noch eines (B 15), dessen Blutbefund schon bei
der Voruntersuchung am Tage nach dera Einkauf so stark
von der Norm abwich, daB es als tuberkuloseverd&chtig be-
zeichnet werden muBte. Die Diagnose wurde spSter durch
die Sektion bestatigt.
Teehnik: Trotzdem eine Spontaninfektion mit Leukamie aus den im
2. Teile angefiihrten Griinden nieht sehr zu fiircliten war, wurden diese
Hiihner selbstverstiindlich von den zu gleicker Zeit mit „ Leukamie virus"
Tabelle I. Hiihner intravenos und intraperitoneal
No. Dosis Vorher 1. Woche 2. Woche 3. Woche 4. Woche
B28 Tbb. U.l R. 2 680 000 . R. 2704000 . R. 3400000
‘/.o OesejW. 29 000 W. 66000 W. 20000
ip.? |
subkut.?'
B 29 Tbb. uJ R. 3 256 000 R. 3 064 000 R. 3 384 000 R. 1 760 000 R. 1 320 000
V.OeaeW. 41 000 W. 30000 W. 10000 W. 48000IW. 116000
iv.
B 30 Tbb. U. R. 3 584 000 R. 3 536 000 R. 3 224 000 j R. 2 104 000 R. 1 696 000
7, 0 OesejW. 38 000 W. 31000.W. 2 000lW. 52 000 W. 134000
iv. I
B 31 Tbb. F.! R. 3 392 0001 R. 3 376000 R. 3520000 R. 1592000 R. 3216000
'7,0 OesejW. 44 000 W. 49 000AV. 15 000 W. 123000 W. 51000
iv. i R. 1 816 OtX);
| W. 210000S
Tbb. F. i R. 3 904 000 R. 3 248 000 R. 2 664 000 R. 2 872 000 1 R, 2 816 000
7 10 Oese W. 10000 W. 26000 jW. 34 000 gr.W. 25 000 ; W. 245 000
ip. I R. 2 032 000
! gr.W. 158 000
B 33 Tbb. F. ! R. 3 228 000 R. 2 920 000 1 R. 2 928 000 R. 1 736 000 R. 1 408 000
7 10 Oese W. 46 000 : W. 46 000 ,gr.W. 12 000 W. 75 000: W. 100 000
iv- i I j I
5. Woche j
R. 3 224 OOO !
W. 46000;
I
R. 2 696 OOO 1
W. 114 OOO j
t I
t
R. 2 584 OOO
W. 108 OOO,
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
555
infizierten vollstandig getrennt gehalten. B15 und die beiden Serien
B 29—33 und B 36—47 waren zuerst im nebenan gelegenen Stalle, in
welchen auch die frisch gekauften Hiihner gebracht wurden. Als spater
in beiden Stiillen die Hiihnerpocken ausbrachen, kam die Serie B 54—64
in einen weiter weg gelegenen, durch einen Hof getrennten Raum und
blieb dort tatsachlich von den fiir kranke Hiihner auBerordentlich infek-
tiosen Pocken geschiitzt. Aus diesem Grunde kam auch der Schutz
gegeniiber einem eventuellen ff Leukamievirus a als moglichst sicher be-
zeichnet werden. Einige spater in Basel ausgefiihrte — nicht veroffent-
lichte — Versuche ergaben iibrigens gleiche Resultate.
Die Infektion geschah mit Tuberkelbacillen verschiedener Herkunft.
Den Stamm U. der Tabelle I verdanke ich Herrn Dr. Ungermann,
nach dessen Angabe es sich um die erste Kultur, frisch aus einem an
Tuberkulose gestorbenen Huhn, handelte. Stamm F. erhielt ich von Herrn
Prof. Ficker; nach seiner Angabe ist es ein alter Sammlungsstamm
des hygienischen Institutes Berlin. Die spateren Versuche wurden mit
selbstgeziichteten Bacillen aus tuberkulosen und mehr oder weniger leuka-
mischen Hiihnern, Nachkommen des uns von Herrn Prof. Jacoby iiber-
lassenen Stammes, unternommen. Alle Kulturen zeigten die typischen
Eigenschaften der Hiihnertuberkulose. Die Infektion geschah bei Tabelle II
und HI nie mit der ersten Kultur direkt aus dem Hiihnerkorper, sondern
mit der zweiten oder dritten Generation, so da£ also auch hier eine Misch-
infektion mit einem eventuellen „Leukamievirus" ausgeschlossen erscheint.
infiziert mit fremden Reinkulturen.
6. Woche
7. Woche
8. Woche
9. Woche
10. Woche
11. Woche
12. Woche
gr. W. 36 000
t
t
t
R. 3 232 000
W. 128000
R. 2800000
W. 151000
R. 2 328 000
W. 186000
R. 2 096000
W. 131000
R. 2800000
W. 151000 f
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556
Jean Louis Burckhardt,
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Aus den in Tabelle I zusammengestellten Versuchen geht
vor allem hervor, dafi die Hflhner mit diesen Dosen nur sehr
kurze Zeit lebten. Mit Ausnahme eines einzigen Tieres (B 28),
welches intraperitoneal Oder vielleicht nur subkutan geimpft
war, starben sie in der 5. bis 6. Woche. Beim Blutbefunde
miissen wir aus den in der Einleitung angefiihrten Grflnden
auf die Beachtung kleiner Schwankungen bis zu mehreren
Tausend WeiBen verzichten.
Schon in der 2. Woehe zcigt sich bei alien 4 intravends ge-
spritzten Hiihnern ein deutliches Absinken der Leukocytenzahl, das nicht
zufallig sein kann, besonders da es in einem Falle von ca. 30000 auf
2000, in den anderen Fallen auf 10000—15000 geht. Die 3. und 4. Woche
zeigen dann in alien Fallen, mit Ausnahme des schon oben erwahnten,
einen ganz auflerordentlichen Anstieg, welcher, wie z. B. bei B 31 und
B 32 zu sehen ist, ganz plotzlieh ansetzt. So kommen wir bei alien
Hiihnern — bei B 28 allerdings erst viel spater als bei den anderen — zu
Zahlen iiber 100000. Bei 2 von 6 Hiihnern wird sogar die Zahl von
200000 iiberschritten, und wir finden als hochste Zalil dieser Tabelle bei
B 32 in der 4. Woche 245 000 Leukocyten. Bei mehreren der Tiere fallt
dann wieder eine pramortale Abnahme auf, z. B. von 210000 auf 51000
und von 245000 auf 108000. Das plotzliche Ansteigen und die Abnahme,
welche teilweise in spiiteren Tabellen noch viel starker ist, machen uns
schon aufmerksam, wie notig eine haufige Zahlung ist, falls man den
Hohepunkt der Leukocytenkurve sicher finden will.
Bei den Erythrocyten finden wir nicht ganz so konstante Verhalt-
nisse, nur in zwei Fallen (B 30 und B 33) eine starke und konstante Ab¬
nahme bis auf etwa die Halfte der Norm, 1408000 und 1696000. Sonst
ist die Abnahme meist nicht so ausgesprochen oder etwas sprungweise
mit bedeutenden Erholungen. Besonders auffallend ist dies bei B 31, wo
in der 3. Woche einmal 1592000 und einmal 1816000 gezahlt wurden,
dann in der 4. Woche kurz vor dem Tode wieder 3216000. Dieser Befund
liefle zuerst an einen Fehler bei der letzten Zahlung denken, wenn nicht
ahnliche Besserungen in dieser und anderen Tabellen hiiufig waren.
Von qualitativen Verfinderungen der Leukocyten finden
wir vor allem ein Ansteigen der pseudoeosinophilen Zellen.
Auf dem Hohepunkt der absoluten Zahlen bilden sie in den
meisten Fallen ca. 70—80 Proz., zu denen mehrfach noch
5—10 Proz. Myelocyten kommen. Bemerkenswert ist aber,
daB sich unter diesen als pseudoeosinophil gezahlten Zellen
sehr wenige, manchmal gar keine, normalen Stabchenzellen
finden, sondern die Granula sind meist rund und sehr un-
gleich in der GroBe und sehr oft auch in der Farbbarkeit.
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Ueber das Blutbild bei Huhnertuberkulose etc.
557
Sie entsprechen also am ehesten den Jugendstadien, die wir
beira Knocbenmark beschrieben. Hie und da sind auch hier
basophile Granola neben anderen zu finden.
Eine geringe relative, aber betr&chtliche absolute Ver-
mehrung haben bei alien ZShlungen auf der H6he der Leuko-
cytenzahl auch die grofien Lymphocyten zu verzeichnen. Ihre
Zahl schwankt meist zwischen 16—25 Proz.; bei dem am
langsamsten verlaufenden Falle (B 28) betrSgt sie 44 Proz.
Ein relatives Absinken ihrer Zahl kommt nur einmal bei der
pr&mortalen Abnahme der Leukocytenzahl vor (B 31).
Eine SuBerst starke relative Abnahme bis auf 0,3 Proz.,
1 Proz., 2 Proz. und 5 Proz. zeigen dagegen die kleinen
Lymphocyten. Diese Zahlen entsprechen meist auch einer
deutlichen absoluten Abnahme. Ebenso verschwinden die
eosinophilen Zellen fast vdllig, w&hrend die Mastzellen zwar
eine relative Abnahme aber eher eine absolute Zunahme —
soweit SchlOsse aus so geringen Zahlen wie z. B. 0,3 Proz.
erlaubt sind — zeigen.
Bei der Betrachtung des Blutbildes f&llt noch besonders
auf, daB auch die Erythrocyten eine deutliche VerSnderung
zeigen. In gleicher Art wie bei den Granulocyten werden hier
junge Formen hfiufiger. Eine gesetzm&Bige Zunahme von
jungen Erythrocyten konnte ich allerdings nicht erkennen, da
die Prfiparate unter sich bedeutende Verschiedenheiten zeigen.
Manchmal herrschen Formen mit groBen hellen Kernen vor,
manchmal ist nur der H&moglobinmangel bei gut differen-
zierten Kernen auffallend. Dies ist schwer zahlenm&Big zu
vergleichen; oft hatte ich aber den Eindruck, daB ebenso wie
in der Zahl auch in der Form deutliche Besserungen vor-
kommen.
Andere Krankheitssymptome bestanden in starker Mattig-
keit und Bl&sse, die aber nicht immer ganz mit dem st&rker
oder schw&cher ver&nderten Blutbefunde flbereinstimmten.
Eine unangenehme Komplikation lag darin, daB mehrere der
Tiere w&hrend des Versuches an Htihnerpocken und Diphtherie
erkrankten, wie aus den Protokollen n&her zu sehen ist. Einige
m8gen grSBtenteils unter dem Einflusse dieser Affektion ge-
storben sein, bei anderen waren die Pocken zur Zeit des Todes
schon abgeheilt. Ein EinfluB auf die Blutver&nderung scheint
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558
Jean Louis Burckhardt,
durch die Pocken nicht zustande gekoramen zu sein, jedenfalls
nicht im Sinne einer Leukocytose. Dies beweisen die folgenden
Tabellen ohne Pocken, welche der ersten im groBen und ganzen
gleichen. Ueberdies untersuchte ich 3 in den verSffentlichten
Protokollen nicht angefiihrte Hiihner, welfche ich kiinstlich
mit Pocken infizierte, ohne eine Ver&nderung des Blutbildes
zu finden.
Bei der Sektion fand sich in alien Fallen eine starke Abmagerung
und als Hauptmerkmal eine Vergrbberung der Leber; ihr Gewicht
schwankte zwisehen 42 und 80 g. An Oberflache und Schnittflache lieben
sieh meist aUerfcinste gelbliche nicht vorspringende Piinktchen — sub-
miliare Tuberkel — nachweisen. Mehrmals waren auch diese kaum zu
erkennen; bei B 31 z. B. sehien die Leber nur mit einem feinen weibliehen
Netz iibcrzogen. Auberdem fanden sieh liier und da g rube re graugelbe
Herde von unregelmabiger Form. Auch die Milz war stark vergroBert,
meist mit dense!ben submiliaren Knotchen, einmal auch mit einem groberen
Herd. Veriinderungen des Peritoneums fanden sich nur bei den intraperi-
toneal geimpften Tieren. Das Knochenmark war immer deutlich myeloid
umgewandelt, aber verschieden, bald dunkelrot und trocken, bald himbcer-
geleeartig, bald graurot bis grau. Mehrmals waren deutliche feinste
Tabelle. II. Hiihner mit Reinkulturen von Tuberkel-
No.
j Dosis
Vorher 1. Woche
2. Woche
3. Woche
4. Woche
B 36
1 Tbb. B 1
j 7 I0 Oese
1 iv.
R. 28960001 R. 3592000
W. 1OU00 W. 28000
i
R. 1 504 000
W. 214 000
B 37
| <¥•
R. 3 240000 R, 3 224 000
W. 18 0001W. 19 000
|
i
R. 1 544 000
W. 135000
t
B 38
B 43
I Tbb. B1
7 J0 Oese
iv.
dgl.
R. 2 800000 : R. 2416000
W. 20 000! W. 5 000
R. 2 512 000
W. 28000
R. 2 872000!
W. 12 000 j
t
R. 2 704 000
W. 164 000
R. 4 528000
W. 4 00(0
t
B 44
R. 2 512 0001
W. 20 CKX) i
R. 2 256000
W. 79 000
t
R. 3 784 000
W. 6000
B 45
>>
R. 2 880000
W. 13 000
•
R. 1 936 000
W. 86000
B 40
Tbb. B1
7*o 0<»e
ip.
R. 3 096 0001
W. 27 000 1
!
•
R. 2 744 000
W. 192000
R. 3136000
W. 126 000
B 47 |
1
dgl.
R. 3 752 000 i
W. 24 000, |
•
R. 2 960000
W. 24000!
R. 2 768 000
W. 18 000
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Ueber das Blutbild bei Huhnertuberkulose etc.
559
Knotchen darin zu erkennen. DaB in einigen Fallen noch Pocken und
diphtherischer Belag des Schnabels dazu kamen, wurde schon oben erwahnt.
Andere Organveranderungen waren meist nicht zu erkennen.
Aus Leber und Knochenmark von B 29 wurden durch Kultur, in
anderen Fallen durch Abstriche und Schnitte Tuberkelbacillen, meist in
enormen Mengen, nachgewiesen.
Die in Tabelle II zusammengestellten Versuche wurden
zu zwei verschiedenen Zeiten mit Reinkulturen aus dem
tuberkulosen und leukamischen Huhn B 1 gemacht, und zwar
wurde in 6 Fallen intravenSs und in 2 Fallen intraperitoneal
injiziert.
Die Resultate waren den vorigen sehr ahnlich; nur war
in den meisten Fallen die Lebensdauer noch etwas kfirzer.
Sehen wir einstweilen von dem intraperitoneal geimpften Huhn B 47
ab, welches der Leukocytenzahl und dem Sektionsbefunde nach kaum er-
krankt war, so finden wir wieder in mehreren Fallen das Sinken der
Leukocytenzahl kurz nach der Infektion. Bei denjenigen Hiihnern, welche
die 3.—5. Woche erleben, erfolgt dann wieder der Anstieg auf Zahlen von
94 000—240 000, meist aber iiber 100000. Eines der Hiihner stirbt aller-
dings schon in der 2. Woche, vor der Blutuntersuchung, ein anderes in
bacillen aus leukamischen Hiihnern infiziert.
5. Woche
6. Woche
7. Woche;
8. Woche
1
9. Woche
10. Woche
11. Woche
R. 3 096 090
W. 108000
t
i
!
R. 2 688 000
W. 94 000
1
t
1
!
R. 2 696 000
W. 105 000
t
!
I }
R. 3 432 000
W. 14 000
R. 3 232 000
W. 71000
R. 3 704 000
W. 16000
•
R. normal
gr.W. 18000,
getotet
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560 Jean Louis Burckhardt,
der 3. YVoche mit 79 000 Leukocyten. Das prainortale Absinken dcr
Leukocytenzahlen ist hier nur in cinem Falle ausgepragt, wo der Wert
von 164 000 auf 4000 fallt.
Die qualitativen Ver&nderungen der roten und weiBen Blut-
k5rperchen sind denen der vorigen Tabelle ebenfalls Shnlich.
Wir finden auf dera Hohepunkte der Leukocytose Werte von pseudo-
eosinophilen Zellen, die zwischen 53 und 87 Proz. schwanken, meist aber
70—80 Proz. ausmachen Dazu kommen mehrfach wieder einige Prozente
Myelocyten. Bei den groBen Lymphocyten besteht in einem Falle (B 46)
eine sehr starke absolute und relative Vermehrung auf 46 Proz. In den
andern ausgezahlten Fallen sehwankt die relative Anzahl gegenuber dem
normalen Verhaltnisse um wenige Prozente auf- und abwarts, was immer
einer starken absoluten Vermehrung, oft auf das 6—8-faehe, gleiehkommt.
Dagegen nehmen wieder die kleinen Lymphocyten relativ und absolut sehr
stark ab, und auch die Eosinophylen nehmen ab und verschwinden oft;
weniger deutlioh ist die Abnahme der Mastzellen, wenn sie auch oft unter
den groBen Zahlen prozentual verschwinden.
Eine Abnahme der roten Blutkorperchen ist auch hier fast in alien
Fallen deutlich, scheint aber hauptsiichlich — soweit- sich bei der kurzen
Lebensdauer iiberhaupt Schlusse ziehen lassen — in der 3. Woche zu be-
stehen, wiihrend sich bei den langer lebenden Hiilinern spater oft wieder
eine deutliche Zunahme zeigt.
Das Auftreten von weniger differenzierten Formen unter
den Pseudoeosinophilen und den Erythrocyten ist wieder vdllig
gleich wie in der vorigen Tabelle, so daS ich es nicht zu be-
schreiben brauche.
Die flbrigen Krankheitssymptome bestehen immer in starker
Abmagerung und meist in deutlicber Schw&che und Blfisse
des Kammes, wobei diese beiden Symptome aber oft in merk-
wQrdigem Gegensatze zu dem Blutbefunde standen und beim
selben Huhne manchmal auffallend wechselten.
Die Sektion zeigte meist wieder eine sehr stark vergroBerte Leber,
deren Gewicht um 100 g betrug und die mit reichlichen submiliaren bis
miliaren Tuberkelknotchen besetzt w r ar. Dazu kam eine entsprechende
VergroBerung der Milz. Das Knochenmark ist bald hell-, bald dunkelrot,
bald graurot, immer aber zeigt sich eine Abnahme des Fettmarks; oft
enthalt es reichliche, makroskopisch erkennbare Tuberkelknotehen. AuBer-
dem finden sich manchmal Knotchen und diffuse Verdickungen im Mesen-
terium, einmal ein groBes Blutkoagulum liber der Leber und kasige bis
bindegewebige Massen im Peri ton ealraume, wie sie bei Hulmertuberkulose
auch friiher oft beschrieben wuirden.
Eine Ausnahme macht, wie oben schon kurz angefiihrt, das eine der
zwei intraperitoneal geimpften Hiihner, das nur einmal in der 6. Woche
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Ueber das Blutbild bei Huhnertuberkulose etc.
561
einen leichten Leukocytenanstieg aufwies, dann wieder normale Verhalt-
nisse und keine allgemeinen Krankheitssymptome zeigte. Es wurde in der
11. Woche getotet und zeigte auch pathologisch-anatomisch keine Allge-
meinerkrankung, besonders nicht die sonst typische VergroBerung von
Leber und Milz, sondern nur einige Knotchen in der Uragebung der
Impfstelle.
Die folgenden Versuche, deren Uebersicht in Tabelle III
zu finden ist, und die den Protokollen B 54 bis B 64 ent-
sprechen, hatten einerseits den Zweck, die Wirkung kleinerer
Dosen von Tuberkelbacillen zu prufen, da die vorhergegebenen
groBen Dosen so rapid zum Tode gefflhrt hatten. Anderseits
sollte die Wirkung kleiner Arsendosen auf Lebensdauer
und Blutbild geprflft werden. Die Arsendosen wurden m8g-
lichst klein gew&hlt. Nachdem ich in Versuchen festgestellt
hatte, daB 0,002 g von Acidura arsenicosum fur Tauben tod-
lich waren, wShrend diese eine einmalige Gabe von 0,001 er-
trugen, wShlte ich fiir die starken Hflhner den 100. Teil,
0,00002, als Anfangsdosis und stieg in einem Falle bis
auf 0,001.
Technik: Die arsenhaltige Losung wurde naeh Art des Liquor
kalii arsenieosi aus Aeidum arsenicosum, Kalium carbonicum und Aqua
dest. bereitet, zu einem entsprechenden Arsengehalt verdiinnt und intra-
muskuliir in den Brustmuskel injiziert.
Der Serie B 54 bis B 57 wurde vom 1. Tage der Tuberkellmcillen-
infektion, dem 4. VIII. 10 an, 0,000025 gegeben. Bei taglieher Ein-
spritzung sti('g die Dosis naeh je 3 Tagen auf 0,(XXX)5 und 0,(XX)1. Dann
wurde in denselben 3-tiigigen Abstiinden um jc Via gestiegen, bis am
6. IX. die Dosis von 0,001 erreieht war. Beim einzigen uberlebenden
Uuhn blieb dann die Dosis bis zum Tode, am 9. IX., gleieh.
Bei der Serie B 58 bis B 01 wurde erst 14 Tage naeh der Infektion
mit der Arsengabe begonnen, und infolgedessen wurden nur kleinere Dosen
injiziert. Am 17. VIII. wurde mit 0,00002 begonnen und naeh je 2 Tagen
auf 0,00004, 0,00(X)G, 0,00008 gestiegen. Am 27. VIII. wurde dann wie
bei der vorhergehenden Serie in Abstanden von 3 Tagen um A / 10 mg ge¬
stiegen, so daB das am liingsten lebende Huhn der j8erie vom 5.—7. IX.
0,0X15 ]jro die bekam.
Die 8erie B 02 bis 04 diente als Kontrolle, d. h. sie wurde mit den
gleiehen Mengen Tuberkelbacillen infiziert und bekam kein Arsen.
Fiir den Vergleich milssen wir B 55 ausschalten; wie die
Sektion zeigte, litt es sehr stark an einer Schimmelpilz-
erkrankung. Ohne auf diese einzugehen, mochte ich erwahnen,
daB ich noch einen andern Fall dieser Erkrankung beobachten
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562
Jean Louis Burckhardt,
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Tubelle III.
Buhner mit '/jo 0 ese Tbb. (aus B 29 geziichtet) in travenfts gespritzt und zumTeilmitArsenikbehandelt.
Ueber das Blutbild bei Hiitmertuberkulose etc.
563
konnte, ebenfalls als Komplikation der experimentellen Tuber-
kulose. In diesem zweiten Falle, der in den verwerteten
Protokollen nicht enthalten ist, waren An&mie und Leukopenie
noch viel auffallender, indem ich 8 Tage vor dem Exitus
1300000 Rote und ca. 6000 WeiBe und 2 Tage vor dem Tode
1016000 Rote und 1—2000 WeiBe fand.
Betrachten wir zunachst die Serie 54—64 als Ganzes, so finden wir
die Lebensdauer trotz dem geringeren Bakteriengehalt gegenuber den
friiheren Versuchen nicht vermehrt. Die meisten Hiihner starben in der
4. und 5. Woche, eines in der 6. und eines schon in der 3. Woche.
Eine Abnahme der Leukocytenzahl in den ersten Wochen, wie sie
in den beiden vorigen Tabellen zu finden ist, wird nirgends deutlich. Die
Leukocytose hingegen erreicht mehrfach, und zwar besonders bei den am
langsten lebenden Tieren, noch viel hohere Grade als bisher. Ich nenne
B 62 mit 305000 und B 54 mit 367000 Leukocyten. In alien Fallen wurde
die Zahl von 100000 mindestens bei einer Zahlung iiberschiitten. Mehr¬
fach tritt dann wieder die pramortale Abnahme, bald deutlicher, bald ge-
ringer zur Schau. Zahlen wie die von B 57, bei dem am 23. VIII. 62000,
am 27. VIII. 146000 und am 31. VIII. wieder 70000 gefunden wurden,
haben ein theoretisches Interesse, indem sie — in Verbindung mit den
relativen Zahlen und den Formen — die Erschopfung des blutbildenden
Apparates deutlich machen; sie zeigen aber auch, wie leicht der Gipfel
der Leukocytose zu verfehlen ist, falls nicht sehr haufig untersucht wird.
Dafi es sich nicht etwa um Fehler handeln kann, zeigt u. a. das folgende Huhn
(B 58), bei dem die Zahlungen noch ofter gemacht wurden, wobei die
Zahlen der roten und weiBen Blutkorperchen ganz gut ubereinstimmen.
Hier findet sich ein Leukocyten sturz von 119000 auf 18000 und bei B 63
ein solcher von 114000 auf 8000.
Auch die qualitativen Veranderungen sind zum Teil etwas andere
als bei den hervorgehenden Serien, indem die Vermehrung der Lymphoid-
zellen bedeutend starker ist. Mehrmals finden wir allerdings die gleichen
prozentualen Zahlen von Pseudoeosinophilen, also 70—80 Proz. und
manchmal noch einige Prozente Myelocyten. In vielen Fallen steigen
aber die Pseudoeosinophilen nur auf 30—50 Proz., und der Rest des Zu-
wachses entspricht einer Vermehrung der Lymphoidzellen. Diese erreichen
z. B. bei B 63 37 Proz., bei B 56 und 54 51 Proz. resp, 58 Proz. und bei
B 59 in einer Zahlung 63, in der nachsten 74 Proz. Allerdings finden
wir auch hie und da Falle mit nur kleiner relativer Vermehrung, also
ca. 18—20 Proz., ungefahr wie in den vorhergehenden Serien.
Die auBerordentliche Abnahme der kleinen Lymphocyten, das fast
vollige Verschwinden der Eosinophilen und die relative Abnahme der
Mastzellen bei annahernder absoluter Konstanz sind wieder vollig gleich
wie in den hervorgehenden Serien, hochstens noch ausgesprochener, so daB
sich manchmal beim Auszahlen von 3—500 WeiBen iiberhaupt keine kleinen
Lymphocyten fan den.
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564
Jean Louis Burckhardt,
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Zu den Veriinderungen der Leukocyten kommt wieder eine starke
Abnahme der Erythrocyten, welehe in mehreren Fallen ganz konstant
fortschreitet, bis auf Mengen von ca. 1500000 und 1100000. In wenigen
Fallen bleibt allerdings die Zahl der Roten fast konstant, z. B. bei B &4.
Auffallende Besserungen sind in dieser Tabelle nicht zu finden. Die
morphologischen Veriinderungen der Roten sind gleich wie in den friiheren
Serien.
Die iibrigen Krankheitscrscheinungen zeigen gegenuber den friiheren
Erfahrungen niehts Besonderes.
Aueh der Sektionsbefund ist ungefahr derselbe. Besonders bemerkens-
wert ist die starke VergrbBerung der Leber, deren Gewicht z. B. bei B59
122 g und bei B 54 169 g bet rug. Die Farbe der Leber war meist ziemlich
dunkel braunrot, zum Teil mit deutlichen miliaren Tuberkeln; in mehreren
Fallen waren aber solehe makroskopiseh nicht sichtbar. Manchmal zeigte
die Leber an der Oberflaehe eine netzformige, weiBliche Zeichnung. Oft
kamen grobe gelbe, seltener hellrote, ganz unregelmaBig begrenzte Herde
an Oberflaehe und Schnittflaehe vor, welehe sieh bei der mikroskopischen
Betraehtung groBenteils als Nekrosen erwiesen.
Aueh die Milz war meist stark vergrobert bis auf cm
und ca. 9 g. Tuberkelknotehen waren hier makroskopiseh meist nicht zu
erkennen. Bei B 58 bestanden sehr groBe und bei B64 kleine Herde von
altcn Blutungen, hauptsaohlioh unter der Kapsel.
Das Knoehenmark war in einzelnen Fallen noeh wenig verandert,
bestand also groBenteils aus Fettmark; meist war es hellrot, feueht und
ziemlich konsistent, nur bei B 54 deutlieh graurot.
Von anderen Befunden sind zweimal Verwaohsungen, kiisige Massen,
sowie gestielte und ungestielte Knotehen im Peritoneum und den Luft-
siieken zu erwahnen, sowie die fiir Huhnertuberkulose typischen harten
gelben „Coq>ora libera u in der Bauchhohle.
Der mikroskopische Befund soil spater fdr alle Serien
gemeinsam besprochen werden.
Betrachten wir nun die Frage, ob die Arsenwirkung sich
in dieser Tabelle bemerkbar maclit, speziell ob von einem
therapeutischen EinfluB die Rede sein kann, so mflssen wir
sagen, daB die Unterschiede gering sind. Zwar ist die Lebens-
dauer bei den mit Arsen behandelten Tieren, hauptsaehlieh bei
den von Anfang an behandelten, langer (durchschnittlich ca.
32:27:24 Tage); doch konnen diese Zalilen bei der Kleinheit
des Materials natUrlich durch ein einzelnes Tier stark beein-
fluBt, also zufallig sein. Jedenfalls ist die Anamie bei den
behandelten und unbehandelten Huhnern gleich stark. Auf-
fallig ist vielleicht, daB die ganz hohen Zalilen der Lymphoid-
zellen besonders bei den mit Arsen behandelten Tieren
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc. 565
zu finden sind. doch lassen sich sowohl im Grade der Leuko-
cytose wie auch in der relativen Verteilung keine deutlichen
Unterschiede feststellen.
Ein deutlicber ElnfluB des Arsens auf das Blutbild lfiBt
sich also nicht erkennen, und wir diirfen wohl alle gefundenen
Symptome bei der sp&teren allgemeinen Betrachtung auf die
Wirkung der Tuberkulose zurGckfflhren.
Tabelle IV.
Blutuntersuchungen bei einem Huhne mit Spontan-
tuberkulose (B 15)
23. IV.
5. V.
13. V.
15. V.
17. V.
Rote
2 508 000
3 472 000
3 388000
3 912000
t
WeiBe
142000
211000
115 000
277 000
Pseudoeosinoph.
58,5 %
52,5 %
54,75%
60 %
Myelocyten
o „
0,75 „
0,^5 „ j
2,75 „
Gr. Lympho.
28 _ „
38,5 „
39 „
34,25 „
Kl. Lympho.
9,5 „
7 „
3 „
2,25 „
Eosinophile
3 »
1,0 „
1,5 „
0,25 „
Mastz.
1 „
0,25 „
1 ,, 1
0,5 „
Die obige Tabelle IV gibt AufschluB iiber Blutunter¬
suchungen bei einem spontan erkrankten und zuf&llig gekauf-
ten tuberkulosen Huhn B 15. DaB hier keine Infektion mit
etwaigen Leukamievirus im Stalle des Institutes mbglich ist,
geht daraus hervor, daB das Huhn sofort am Tage nach dem
Einkauf den auffallendem Blutbefund zeigte und darum nicht
zu Versuchen verwendet wurde. Mit den infizierten Tieren
kam es auch spater nicht zusammen.
Wir finden hier Leukocytenwerte von 115000—277000.
Bei der Auszahlung stehen wieder die Pseudoeosinopbilen an
an erster Stelle mit 52— 60 Proz., dann folgen die Lymphoid-
zellen mit 28—39 Proz., dazu kommen noch einige Myelocyten.
Die kleinen Lyraphocyten sind GuBerst stark, die Mastzellen
und Eosinophilen zwar relativ, aber nicht absolut vermindert.
AuBerdem ist im Blutbilde das reichliche Vorkommen
von jungen und zum Teil abnormen Formen der Pseudo-
eosinophilen auffallend. Wenn wir gelapptkernige Zellen mit
plumpen und schlecht f&rbbaren Granulis noch als normale
Jugendformen ansehen kdnnen, ebenso auch die Myelocyten,
welche bei der FBrbung nach May-Grunwald zum Teil
ZeiUchr. f. Immunitatsforschung. Orlg. Bd. XIV. 39
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Jean Louis Burekhardt,
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gelbliche und rote Graaula beisammen zeigen, so sind doch
die Polynukle&ren mit spSrlichen und abnorm kleinen Korn-
chen merkwflrdig; denn die jugendlichen pseudoeosinophilen
Granula zeichnen sich sonst eher durch GroBe aus. Auffallig
ist, daB keine Anamie eingetreten ist, im Gegenteil finden
wir vor dem Tode eine abnorm hohe Erythrocytenzahl. Im
Blutbilde herrschen aber auch hier junge und sehr blasse
Formen vor.
Der Sektionsbefund ist von dem der Hiihner mit experi-
menteller Tuberkulose insofern verschieden, als es sich hier
in der Hauptsache nicht um eine Miliartuberkulose von Leber
und Milz handelt. Diese zeigen makroskopisch nur wenige
Knotchen und sind auch gegen die Norm nicht oder kaum
vergroBert (hochsteus im Gegensatze zum schlechten Er-
nahrungszustand konnte die GroBe der Leber auffallen). Das
Knochenmark hingegen zeigt dieselben miliaren Knotchen
wie bei der experimentellen Tuberkulose neben einem groBen
KSseherd. Den Hauptkrankheitsbefund bildet aber eine tumor-
artige, harte, gelbliche Masse, welche haupsachlich die Stelle
der rechten Lunge und ihrer Umgebung einnimmt. Auch
deren abdominaler Luftsack ist in eine tuberkulose AbszeB-
membran umgewandelt mit dickem kasig-eitrigen Inhalt.
AuBerdem finden wir zahlreiche subserose Knotchen tiber dem
Magen und am Mesenterium und kaseartige, harte Massen am
Halse.
Mikroskopisch zeigt sich im Knochenmark hauptsfichlich
eine Vermehrung der Lymphocyten innerhalb der GefiiBe.
Weniger stark ist sie auBerhalb derselben, und zwischen ihnen
finden sich dort auch pseudoeosinophile Zellen. In der Leber
finden sich miliare Tuberkelknbtchen von sehr verschiedener
GroBe neben Stellen von tuberkulosem Granulationsgewebe,
aber keine myeloiden Wucherungen. Der Knoten an der
rechten Lunge besteht aus ahnlichem Granulationsgewebe und
grofien nekrotischen Partien.
Betrachten wir die Ergebnisse dieses Abschnittes im Zu-
sammenhange, so finden wir bei den intravenos mit Tuberkel-
bacillen verschiedenster Herkunft — in einer Menge von 1 / 5 bis
V 50 Oese — injizierten Tieren meist eine Krankheitsdauer
von 4—5, seltener von 3—6 Wochen. Einmal trat der Tod
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Ueber das Blutbiid bei Hiihnertuberkulose etc.
567
schon in der 2. Woche ein, bevor die Blutuntersuchung gemacht
wurde.
Wir finden in alien diesen Fallen ein starkes Ansteigen der
weiBen BlutkSrperchen, und zwar iibersteigt ihre Zahl fast
immer 100000. Nur bei zwei intravenos geimpften Tieren
(B 44 und 45) ist 79000 resp. 94000 als Gipfel der Leuko-
cytose vermerkt. In vielen Fallen kommen aber wesentlich
hohere Zahlen vor, 5mal solche zwischen 200000 und
300000 und als Hohepunkte 305000 (B 62) und 367 000 (B 54).
Nach den wbchentlichen ZShlungen laBt sich als ziemlich all-
gemeine Regel — unter den von uns gewkhlten Bedingungen
— aufstellen, daB diese hohen Zahlen meist in der 4.
bis 5. Woche auftreten. Selten kommen sie friiher, und
nach den Tabellen I und II scheint sogar in der 1. und
2. Woche meist eine Leukopenie vorhanden zu sein. In
Tabelle III kommt diese nicht deutlich zum Ausdruck. Sehr
oft findet sich aber wieder ein Absturz der Leukocyten vor
dem Tode; dieser ist meist klein, hie und da aber so stark,
daB wir von den abnorm hohen Zahlen auf solche unter der
Norm kommen. Meist tritt dieser Sturz erst kurz vor dem
Tode ein, nur bei B 63 schon zirka 14 Tage friiher
(Absturz von 114000 auf 8000!). Bei der Kiirze und den
schnellen Veranderungen der Leukocytenkurve sind also sehr
haufige Ziihlungen notig, urn die Schwankungen richtig zu er-
halten und besonders die Hohepunkte festzustellen.
Im Verhaltnisse der weiBen Blutkorperchen untereinander
finden wir ebenso interessante Veranderungen. Am starksten
ist immer, mit Ausnahme von zwei Fallen, das Ansteigen
der Pseudoeosinophilen. Ihre Menge erreicht meist 70—80
Proz., denen mehrfach noch einige Prozente Myelocyten bei-
zurechnen sind. Ausftihrliche Zahlen finden sich bei der
Besprechung der einzelnen Tabellen. Auffallend ist, daB von
diesen Pseudoeosinophilen meist der groBere Teil oder Alle
ganz abnorme Verhaltnisse der Granulierung zeigen, nach
denen sie sich am ehesten als Jugendformen ansehen lassen.
Es sind dies meist runde und ungleich groBe Granula, welche
zum Teil nach May-Griinwald statt rot nur hellrot, gelblich,
blau oder iiberhaupt nicht farbbar sind. Aehnliche Granula
finden sich auch in den Myelocyten. Andere Formen zeigen
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558 Jean Louis Burckh&rdt,
trotz gut entwickelter und stark gebuchteter Kerne nur sehr
spSrliche und kleine Granula, oder sie haben einen so schlecht
farbbaren Kern, dafi sie kaum noch als normale Formen auf-
zufassen sind. Die mehrfach beschriebenen Riesengranula
habe ich bei diesen Experimenten nicht gefunden.
Demnachst ffillt die Vermehrung der Lymphoidzellen auf;
ihr prozentuales Ansteigen ist zwar meist gering und schwankt
oft zwischen 16 und 25 Proz. Aber schon ein Stehenbleiben
des prozentualen Verh<nisses wtirde einer starken absoluten
Vermehrung gleichkommen. Scbon in Tabelle I finden wir
aber einmal 44 Proz. Lymphoidzellen, in Tabelle II einmal
46 Proz. und in Tabelle III je einmal 51, 58 und 74 Proz.
Wahrend also diese Formen ansteigen, bleibt die absolute
Zahl der Mastzellen ungefahr gleich, die der Eosinophilen geht
zuriick und verschwindet manchmal. Ebenso ist in alien
Fallen eine prozentuale Verminderung der kleinen Lympho-
cyten, in den meisten auch eine starke absolute Verminderung
und hie und da ein volliges Verschwinden dieser Zellen zu
verzeichnen.
Dieses prozentuale Verhaltnis bleibt meist auch nach dem
Abfalle von der Hohe gleich oder es verschiebt sich noch
starker; daraus geht deutlich hervor, dafi der prfimortale
Leukocytensturz nicht etwa eine Riickkehr zu normalen Ver-
haltnissen ist, sondern einer Erschopfung der blutbildenden
Organe entsprechen mull.
Das Verhalten der roten Blutkorperchen ist etwas ver-
schieden. Oft finden wir eine starke und konstante Abnahme, hie
und da bis auf die Halfte der Norm und weniger. In vielen
Fallen ist diese Abnahme aber nur anfanglich, und es tritt
spater wieder eine Besserung ein. Mit der Abnahme zu-
sammen sieht man meist das Auftreten von abnormen Ery-
throcyten, welche wohl sicher als Jugendformen zu deuten sind,
und das Vorherrschen solcher Formen dauert meist bis zum
Tode fort.
Sehr ahnlich sind diese Verhaltnisse bei den intraperitoneal
geimpften Huhnern, bei denen die Erkrankung allerdings zum
Teil etwas langsamer auftrat, wahrend eines (B 47) fast vQllig
gesund blieb.
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
569
Dafi diese experimentellen Befunde auch unter natflrlichen
Verhaltnissen Geltung haben, zeigt die Untersuchung von B 15
(Tabelle IV), welches sofort bei der ersten Blutuntersuchung
auBerordentlich ahnliche Verhfiltnisse aufwies und bei der
Sektion als tuberkulSs erkannt wurde. Auch bei ihm finden
wir Leukocytenzahlen von 115000—277000, Zahlen der Poly-
nukle&ren von 52,5—60 Proz. und der Lymphoidzellen von
28—39 Proz.
Der pathologisch-anatomische Behind zeigt zunachst die mehr oder
weniger bekannten Veranderungen bei Tuberkulose. Makroskopisch finden
wir als kons tan testes Merkmal die VergroBerung von Leber und
Milz. Beide Organe zeigen oft, aber nicht immer, makroskopisch erkenn-
bare Miliartuberkel, auBerdem enthalt besonders die Leber groBere Flachen
von fremdem Gewebe und von Nekrosen, in deren Umgebung oft Blutungen
bestehen. Bei .der Milz sind Blutungen haufiger. In beiden Organen
kommen Rupturen vor, die zu groBen Blutergiissen fiihren konnen.
AuBerdem ist die Oberflache besonders der Leber oft von einem fibrin-
artigen, manchmal auch zuckerguBahnlichen Netz iiberzogen. Daneben
finden wir hie und da subserose Tuberkel und groBere gestielte Knotchen
some freie Korper und Verwachsungen in der Bauchhohle. Von anderen
Organen ist das Knochenmark mit miliaren und groBeren Herden beson¬
ders haufig befallen, danac*h folgt die Lunge mit ihren Luftsacken und
die Thymus. Die Niere ist fast immer frei, in meinen Versuchen (un-
gleich der spontanen Tuberkulose) meist auch die Darmschleimhaut.
Neben diesen Befunden ist die Veranderung des Knochenmarks, das
bei normalen alten Huhnern fast vollig aus Fettmark besteht, auffallend; doch
zeigen sich dabei ziemlich groBe Verschiedenheiten. Wir finden manch¬
mal ziemlich konsistentes dunkelrotes, ofter aber hellrotes oder graurotes
Mark. In anderen Fallen ist es aber sehr feucht, gallertig, selten schon
makroskopisch deutlich atrophisch.
Beim mikroskopischen Befunde miissen wir die typischen tuberku-
losen Veranderungen von denen, die nur indirekt damit zusammenhangen,
trennen. Von den ersten finden wir zunachst in alien Fallen mehr oder
weniger groBe miliare Tuberkel, wie sie besonders von P fan der sowie
von Koch und Rabinowitsch 1 ) beschrieben sind. Die Tuberkel
unterscheiden sich von denjenigen des Menschen durch ihre sehr groBen
und unregelmaBigen epitheloiden Zellen und ihre ganz unregelmiiBigen
Riesenzellen, dann aber besonders durch das fast konstante Fehlen eincs
Lymphocytensaumes, auch in fortgeschrittenen Stadien. Stattdessen fin-
det sich manchmal eine auBere Abgrenzung aus Bindegewebe von sehr
verschiedenem Kernreichtum; ofter fehlt aber eine solche vollstandig.
Vielfach enthalten die Tuberkel, besonders die verkiisten, ziemlich reich-
liche pseudoeosinophile polymorphkernige Leukocyten. Der Ka.se zeigt
1) Die niihere Literatur iiber Hiihnertuberkidose findet sich dort.
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die fur die Huhiiertuberkulose typist*he schollige oder hyaline Zusammen-
setzung, welche ihn in Verhindung mit der derben Konsistenz vielleieht
besser als „masse vitreuse a eliarakterisieren liebe. Im Gegensatze zu
Koch und Rabin owitsch fand ieh ihn aber sehr oft mit reichliehen
Kernresten angefiillt, und ebenfalls im Gegensatze zu diesen Autoren
konnte ieh aueh in den jungsten Fallen keine sogenannten „Lymphoid-
zelltuberkel tt bemerken. Epitheloidzellen, Riesenzellen und besonders aueh
der Kiise sind mit einer iiberrasehenden Menge von Tuberkelbacillen er-
fiillt, welche oft die bekannten drusenartigen Haufen bilden.
Ein weiteres histologisclies Charakteristikuin besteht in den bald
diffusen, bald seharf abgegronzten und tumorartigen Wucherungen von
Granulationsgewebe, die ieh lhiufig in der Leber, selten in der Lunge und
anderen Organen fand. 8ic bestehen zum Teil aus ziemlieh kernreieliem.
aber gefiibarmem Granulationsgewebe mit Fibroblasten, Leukocyten und
Lymphoeyten, zum Teil aueh aus mehr oder weniger hvalinem Binde-
gewebe, das aber oft stark mit Lymphoeyten infiltriert ist. Im Inneren
finden sieh oft grobe Felder der „ masse vitreuse", die manchmal, aber
nieht immer, dureh cine Sehieht von Epitheloidzellen und Riesenzellen
begrenzt sind, daneben aueh einzelne Tuberkel in versehiedenen 81adieu.
Oft sind diese Herde iibrigens so stark verkiist, dab man denken konnte,
es handle sieh uni tuberkulbse Infarktc oder einfaeh uni riesige Kon-
glomerattuberkel. Wenn man aber die vielfaehen Ausliiufer beriieksichtigt,
die besonders in der Leber in das umgebende-Gewebe reiehen, so muU
diese Auffassung wohl zuriiekgewiesen werden; flir die stark vorspringenden
Knoten am Peritoneum und anderen Organen ware eine solrhe Entstehung
aueh von vornherein ausg(‘sehlossen. Vielmehr handelt es sieh wohl um neu-
gebildete Horde und Knoten, welche den von alteren Autoren besehriebenen
„Sarkomen u und „8kleromen u cntsprechen. Fiir den let/teren Xamen
bietet die oft knorpelhafte Besehuffenheit des hyalinen Bindegewebes und
der „masse vitreuse" Veranlassung. In Uebereinstimmung mit Koch und
Rabinowit sell konnte aueh ieh konstatieren, dab Kalkablagerungen
darin wohl vollkommen fehlen.
Unter den sekundiiren Verauderungen verstehe ich die-
jenigen der blutbildenden Organe, vor allem des Knochen-
markes. Dort finden wir bei den meisten Huhnern eine Er-
weiterung der venosen Raume und eine starke Anfullung mit
den groBen weiBen Zellen, die wir als Vorstufen der roten
Blutkorperchen erkannt haben. Vielfach sind nur wenige aus-
gebildete Erytbrocyten und aueh wenige Erythroblasten vor-
handen, wiihrend die Lymphoidzellen ziemlieh reichliche Mitosen
zeigen. Wir finden also den in der Einleitung besehriebenen
heteroplastischen Modus der Blutbildung. In anderen Fallen
sind diese Verhaltnisse weniger stark ausgesprochen, aber wir
finden immerliin ziemlieh reichliche Lymphoidzellen und ihre
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Ueber das Blutbild bei Hlilinertuberkulose etc.
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Uebergange zu Erythroblasten und Erythrocyten. In den Ge-
websbalken des Knochenmarkes, der Bildungsstatte der weiBen
Blutkorperchen, besteht ebenfalls eine Vermehrung der Lym-
phoidzellen, daneben aber besonders eine Vermehrung der
Myelocyten. In beiden Formen finden wir haufige Mitosen;
es besteht also eine homoeo- und heteroplastische Bildung der
pseudoeosinophilen Leukocyten. Erw&hnenswert ist noch, daB
die Myelocyten sehr ungleich groBe und verschieden fftrbbare,
oft basophile Granula zeigen, was besonders in Abstrich-
pr¶ten deutlich wird. Kleine Lymphocyten fehlen fast
vollkommen. In diesen Fallen entspricht das Bild also einer
starken Hyperplasie der blutbildenden Elemente.
Hier und da finden wir aber bedeutend andere Verhait-
nisse. Das Fettmark ist ebenfalls verschwunden, jedoch die
Blutgef&Be sind viel weniger geftillt, und das Zwischen-
gewebe ist in den extremsten Fallen sehr zellarm und bdematos.
Mitosen fehlen fast vollig, und die Zellen des Zwischengewebes
entsprechen groBenteils kleinen Lymphocyten und plasmazell-
ahnlichen Formen und zeigen starke Degeneration der Kerne.
In kleiner Zahl kommen daneben auch die oben beschriebenen
Zellformen vor. Es besteht also in diesen Fallen eine vbllige
Erschopfung des Knochenmarkes. DaB diese Erschopfung
immer bei denjenigen Tieren vorkommt, bei denen der pr&-
mortale Leukocytensturz am st&rksten war, kann ich nicht
behaupten, doch zeigt sich eine gewisse Uebereinstimmung,
und die beiden Faktoren sind jedenfalls miteinander in Ver-
bindung zu bringen.
In der Leber besteht oft eine starke Vermehrung der
schon normalerweise vorkommenden perivaskul&ren Zellan-
sammlungen. Wahrend diese aber normalerweise anscheinend
nur kleine oder mittelgroBe Lymphocyten enthalten, finden
wir bei den tuberkulosen Hiihnern reichlich groBe Lymphoid-
zellen mit Mitosen, Myelocyten mit und ohne Mitosen und
wenige fertig differenzierte Pseudoeosinophile. Allerdings be-
stehen auch Falle, in denen die Infiltrate vollig fehlen oder
nicht vergroBert sind. Von dem oben beschriebenen Granu-
lationsgewebe in der Leber sind sie leicht zu unterscheiden,
da die Zellen in jenem viel groBer und unregelnuiBiger sind.
Im Inneren der Leberkapillaren konnte ich nichts von Blut-
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Jean Louis Burckhardt,
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bildungsherden sehen; nur sind die Kapillaren auBerordentlich
erweitert und in vielen Fallen, dem Reichtum des Blutes an
weifien Blutkbrperchen entsprechend, stark mit solchen an-
gefQllt.
Die Milz war meist so stark mit TuberkelknOtchen an-
gefQllt, daB dazwischen nur die stark erweiterten Kapillaren
und wenige extravaskulkre lymphocytenartige Zellen auffielen.
In Schnittpraparaten konnte ich, ebenso wie am normalen
Huhn, keine deutlicben Zeichen von Blutbildung erkennen;
daB die Abstrichpraparate reichliche unreife Formen enthielten,
ist bei der Zusammensetzung des Blutes natflrlich.
Nach dem Blutbilde und dem Sektionsbefunde finden wir
also, dafi eine Leukocytose und eine Anamie, eine Hyper-
funktion und eine Erscbopfung des blutbildenden Apparates
nebeneinander verlaufen, von denen bald die eine, bald die
andere starker zum Ausdruck kommt. Die im Blute kreisenden
Lymphoidzellen mbchte ich, wie ich in der vorhergehenden
Beschreibung auseinandergesetzt habe, als Vorstufen der
Erythrocyten ansehen, trotzdem im Blute deutliche Ueber-
gange zwischen ihnen und den Erythroblasten kaum zu er¬
kennen sind. Meine histologischen Befunde bestatigen aber
in dieser Hinsicht die Angabe von Dantschakoff so vSllig,
dafi kaum daran zu zweifeln ist, und auch in den Abstrich-
praparaten des pathologischen Knochenmarkes sind die Ueber-
gange ziemlich leicht zu verfolgen. Das Krankheitsbild ist
also zum Teil als ein Analogon der menschlichen perniziosen
Anamie aufzufassen, nur treten noch viel frtihere Vorstufen
im Blute auf als bei dieser. (Dabei ist aber zu berflck-
sichtigen, daB die roten Blutkbrperchen der HQhner Gberhaupt
weniger entwickelt sind als beim Menschen, da sie ja eigent-
lich den Erythroblasten derselben entsprechen.) Andererseits
herrscht eine so starke Leukocytose, daB man versucht ware,
das Bild als Leukamie zu nennen, besonders wegen den ab-
normen und jungen Formen der Granulocyten. Der ana-
tomische Befund, der ja meist Vermehrung des blutbildenden
Gewebes auch in der Leber zeigt, konnte auch fur diese Auf-
fassung herangezogen werden. Es ist aber wohl richtiger, nur
von einer Leukocytose zu sprechen, bei der ttberstiirzt gebildete
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Ueber das Blutbild bei Huhnertuberkulose etc. 573
und abnorme Formen der pseudoeosinophilen Zellen, darunter
auch typische Myelocyten, im Blute kreisen.
Da die Lymphoidzellen als gemeinsame Stammform der
roten und weiBen Blutkorperchen erkaunt wurden, konnten
die im Blute kreiseuden a priori natilrlich auch als Vorstufeu
der Leukocyten aufgefafit werden. Nach dem anatomischen
Befund, der uns diese Formen und ihre Mitosen hauptsSch-
lich im Inneren der venQsen RBume zeigt, ist diese Aunahme
fQr die flberwiegende Mebrzahl dieser Zellen aber wenig wahr-
scheinlich. Deokbar ist natQrlich, daB einige dieser Zellen
auch jflngsten Leukocyten entsprechen; wie grofi diese Zahl
ist, laBt sich aber nicht schatzen.
Wie diese Leukocytose mit der Tuberkulose zusammen-
hangt, ist schwer zu erkiaren. Die Menge der Leukocyten in
den Tuberkeln und in ihrer unmittelbaren NShe ist ja gering.
Vielleicht laBt sich an eine mechanische Wirkung denken, da
ja alle Htihner, auch das mit spontaner Tuberkulose, miliare
und manchmal auch grdBere Kndtchen im Enochenmarke
hatten. Ein Versuch an 2 HQhnern, mit Hiihnertuberkulin (das
uns von Herrn Prof. R u p p e 1 in liebenswtlrdiger Weise zur Ver-
fflgung gestellt wurde) eine ahnliche Wirkung durch wochenlange
Injektion ziemlich groBer Dosen zu erzeugen, miBlang vQllig.
Leichter laBt sich die An&mie — aus der allgemeinen
Kachexie — erkiaren, und im allgemeinen laBt sich auch aus
den Tabellen ablesen, daB bei den etwas langer lebenden
Huhnern dieses Symptom, also besonders das Auftreten der
Lymphoidzellen, in den Vordergrund trat, wahrend in den
akuten Fallen die proportionale Anzahl der polymorphkernigen
Leukocyten gr6Ber war.
Zum Schlusse mochte auch ich, wie Hirschfeld und
Jacoby darauf hinweisen, daB diesen Blutveranderungen bei
Tuberkulose intra vitam wohl eine diagnostische Bedeutung
zukommen sollte. Allerdings wird die Zahl der weiBen Blut-
kdrperchen vielleicht nicht in alien Fallen so hoch sein wie
in den meinigen, da die Tuberkel im Knochenmark doch wohl
eine Rolle ftir das Zustandekommen der Leukocytose spielen
konnten. Inwieweit solche bei spontaner Tuberkulose vor-
kommen, ist meines Wissens nicht untersucht, wenn auch
Moore eine Tuberkulose der Knochen bei den HQhnern als
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ziemlich haufig angibt. (In einem einzigen meiner Faile, bei
dem es uberhaupt nicht zu allgeraeiner Tuberkulose kara, war
die Leukocytose gering.)
Zusammenfassung des I. Teils.
Das Vorkommen einer starken Leukocytose bei spontaner
und experimenteller HQhnertuberkulose wird bestatigt.
Die Zahl der weiBen BlutkSrperchen ist in meinen Fallen
viel hoher, als dies frtiher beschrieben wurde (meist zwischen
100000 und 200000, seltener bis 367 000).
Proportional herrschen meist die Pseudoeosinophilen
weitaus vor; doch sind auch die Lymphoidzellen absolut und
relativ vermehrt und bilden entgegen fruheren Angaben
manchmal die Mehrzahl der weiBen Blutkorperchen.
Nach den in der Einleitung mitgeteilten Befunden mflssen
diese Lymphoidzellen wohl hauptsachlich als Vorstufen der
Erythrocyten angesehen werden, und das Blutbild bei Htthner-
tuberkulose entspricht also einer Mischung von Leukocytose
und „pernizioser“ Anamie.
II. Teil.
Bemerkungen fiber Huhnerleukamie.
Die vorstehenden Studien am normalen und pathologischen
Blut und Knochenmark haben mich zu einer Auffassung der
Huhnerleukamie gebracht, welche von der der friiheren Autoren
wesentlich verschieden ist. Diese mochte ich ira folgenden
kurz darlegen und den Befund bei Huhnerleukamie und
Tuberkulose vergleichen.
Das Krankheitsbild der Leukamie und Pseudoleukamie
beim Huhn wurde zuerst 1905 von Butterfield, dann 1907
gleichzeitig von Jutaka Kon sowie Koch und Rabino-
witsch nach zufalligen Sektionsbefunden beschrieben. Bei
einer aiteren Veroifentlichung (Moore, Infectious leukaemia
in fowls), die mir nicht zuganglich war, soli es sich nach dem
Urteil von Jutaka Kon und Eller man n und Bang um
eine andere akut infektiose Krankheit mit Leukocytose handeln.
Eigentlich bekannt wurde dann die Leukamie 1908 durch die
Versuche von EHermann und Bang, welchen es gelang,
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
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die Krankheit von einem Tier auf das andere zu iibertragen
und den Blutbefund beim lebenden Tier festzustellen. Diese
Versuche haben spater Hirschfeld und Jacoby weiter-
gefiihrt.
Das Krankheitsbild ist nach den ziemlich gut iibereinstimmenden
Befunden dieser Autoren kurz folgendes: Nach Ellermann und Bang
sowie Hirschfeld und Jacoby bcginnt die Krankheit init einer starken
Aniimie, und auch spater ist die Verminderung der Erythrocyten auf
1—l 1 /, Millionen eines der wichtigsten Symptome. Mit der Verminderung
der Zahl geht cine Verringerung des Hiimoglobingehaltes und das Auf-
treten von „Normo- und Megaloblasten a und polychromatophilen roten
Blutkorperchen einher. Hirschfeld und Jacoby sprechen geradezu
von Lcukanamie, und auch Ellermann und Bang legen der Aniimie
groBe Bedeutung bei. Das Charakteristikum der Krankheit besteht aber
in der Vermehrung der weifien Blutkorperchen, und zwar wurden in
einem Falle von Ellermann und Bang 600000, von Hirschfeld
und J acoby eimnal 873000 Leukocyten gezahlt; meist scheint es sich um
Zahlen von etwa 1 (X)CK» bis 300000 zu handeln. Dieser Anstieg wird nun
hauptsachlich durch die Vermehrung von groBen rundkernigcn Zellen
bedingt, welche ungcfahr den groBen Lymphocyten oder groBen Mono-
nukleiiren der Sauger entsprechen sollcn. Nach Ellermann und Bang
steigt ihre Zahl von ca. 23 Proz.der Norm auf 83—95 Proz.; nach
Hirschfeld und Jacoby „gehoren fast alle Leukocyten mit ver-
schwindenden Ausnahmen zum Typos der lymphoiden Zellen*. Die
polynuklearen granulierten Zellen vermindern sich nach Ellermann
und Bang von normalerweise 37 Proz. 1 ) auf wenige Prozent; wir finden
in ihren Protokollen otter Zahlen zwischon 2 und 6 Proz., etwa einmal
auch mehr, z. B. 34 und 41 Proz. Oft ist aber die relative Abnahme so
stark, daB sie zu einer absoluten wird; allerdings scheint mir das lange
nicht immer der Fall zu sein. Auch die Zahl der kleinen Lymphocyten
sinkt nach Ellermann und Bang von ca. 40 Proz. auf 10—1 Proz.
A uff allend ist auBerdem das Auftreten von rundkernigen granulierten
Zellen, welche Myelocyten entsprechen und von Zellen mit abnorm groBen
Granulis. Die niihere Beschreibung dieser Formen ist in der Einleitung
gegeben.
Die Krankheitsdauer ist fur die spoiltane Erkrankung nicht bekannt;
fur die experimentelle Uebertragung geben Ellermann und Bang cine
Inkubationszeit von 1—2 Monaten und darauf folgend eine Krankheits¬
dauer von 8 Tagen bis zu mehreren .Monaten an. Dabei orhielten EHer¬
mann und Bang nur etwa in 40 Proz. der geimpften Hiihner positive
Resultate, H irschfeld und Jacoby meist 50, einmal 100 Proz. Beide
Autorenpaare stellten Eemissionen des Blutbikles und Aenderungen, in
seltenen Fallen auch spontane Heilung fest.
1) Diese Zahl ist nach den oben angefiihrtcn Unlersucliungen sieher
zu hoch.
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Bei der Sektion fiillt makroskopisch eine Vergrbderung von Leber
und Milz, manchmol auch der Leber allein, auBerdem oft eine Grau-
farbung des Knoehenniarks auf. Von anderen Befunden werden oft
Blutungen in die Peritonealhdhle durch Leber und Milzruptur, ofters aueh
fibrinose Beliige der Leber beschrieben.
Mikroskopisch wird in der Leber ziemlieh ubereinstimmend eine
mehr oder weniger starke Zellanhiiufung in der Unigebung der Leber-
gefalle, daneben aueh eine diffusere Wucherung derselben Zellen zwischen
den Leberzellbaiken beschrieben, und zwar handelt es sich dabei uni
extravaskular gelegene rundkernige Zelien, zwischen welchen auch einzeln
oder herdweise granulierte Zellen vorkommen. Ellermann und Bang
legen daneben ein Hauptgewicht auf die Vermeil rung der Zellen inner-
halb dcr erweiterten Leberkapillaren, wo sich neben Erythrocyten reich-
liche grofle rundkernige Zellen und Mitosen fanden.
hn Knoehenmark beschreibt Jut aka Ron eine Wucherung von
ungleich groflen basophilen Zellen mit verbaltnismiiOig grodem Kern, da¬
neben uni- und multinukleare granulierte Zellen „teils reichlich vorhanden,
teils nur vereinzelt zu finden. . . . Die kapillaren und venbsen Blutgefade
sind stellenweise erweitert und mit leukocvtenreichem Blute gefiillt*.
Hirschfeld und Jacoby notieren nur kurz eine erhebliche Zunahme
des leukocytaren und Abnahme des erythroblastischen Gewebes. Eller¬
mann und Bang beschreiben eine Zunahme der grofien mononuklearen
Leukocyten im Inneren der Gefiide, dazu meist eine Erweiterung dieser
Gefade und eine Verminderung der dazwischen liegenden Gewebsbalken
mit teils ungranulierten, teils granulierten Zellen.
In der Milz besteht meist eine iihnliche Veriinderung, namlich Ver-
mehrung der groden Mononuklearen auf Kosten der roten Blutkorperchen
und der Follikel; nach Jut aka Kon sind diese Zellen wieder haupt-
saehlich extravaskular, von einem feinen Retikulum umgeben, dazwischen
auch viele granulierte Zellen; Ellermann und Bang riicken auch hier
wieder die Leukocyten innerhalb der Kapillaren in den Vordergrund. In
den Fallen von Koch und Rabinowitsch war keine Veranderung der
Milz festzustellen.
Von Veriinderungen anderer Organe wird etwa einmal eine intra-
oder auch extravaskuliire Infiltration der Nieren erwahnt. Aui^erdeni
sprechen Koch und Rabinowitsch von linsen- bis bohnengroBen
„Lymphomen a im Inneren der Blinddarme, Ellermann und Bang
einmal von Sarkomatose des Peritoneums. Ueber die Berechtigung dieses
letzteren Befundes werden wir spiiter noch sprechen.
Sowohl Ellermann und Bang wie Hirschfeld und Jacoby
fanden nun denselben Sektionsbefund aueh bei Tieren mit normalem
Blutbefunde und nehmen deshidb neben der leukamischen eine pseudo-
leukamische Erkrankung an. Sie erzielten auch aus einer Leukamie
durch Impfung manchmid Pseudoleukamie und umgekehrt. Ellermann
und Bang bemerken noch, dad in Fallen mit ausgesprochen leuk-
amischem Blutbefund die Infiltrationen der Leber manchmal klein, bei
Pseudoleukamie relativ grofi seien. Bei den Fallen der anderen Autoren,
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wo kein Blutbefund im Leben vorlag, wird nach den Befunden innerhalb
der Gefafie teils Leukamie (JutakaKon), teils Pseudolenkamie (Butter¬
field und Koch und Rabinowitsch) angenommen.
Ellermann und Bang konnten nun zeigen, dafi die Krankheit
durch zellfreie Filtration iibertragen werden kann, daB es sich also nicht
um Uebertragung von Tumorzellen handelt, welche etwa im infizierten
Tiere weiter wuchern. Weniger beweisend schcinen mir ihre Versuche,
nach denen sie glauben annelimen zu durfen, daB es sich um ein filtrier-
bares, d. h. ultramikroskopisches Virus handelt. Die Zahl der positiven
Resultate ist wold zu gering, um hier einen Irrtum sicher auszuschlieBen.
Hirschfeld und Jacoby konnten diese Tatsache nicht bestatigen, und
mir gelang es nicht, durch Filtration das „Leukamievirus a von der
Tuberkulose zu trennen.
Zum Studium der Huhnerleuk&mie habe ich Unter-
suchungen an fiber 30 Hfihnern gemacht, indem ich Organ-
emulsion des uns von Prof. Jacoby flberlassenen leukfimischen
und tuberkulosen Huhnes (H. J.) intravenfis fibertrug. Es ge¬
lang mir aber nie, das typische Bild der HfihnerleukSmie hervor-
zubringen, wahrscheinlich wegen der zu kurzen Lebensdauer,
und speziell konnte ich Tuberkulose und Leukfimie nicht trennen.
Ich mochte daher diese Experimente nicht ausfiihrlich veroffent-
lichen und nur einiges daraus hervorheben. In der ersten Generation
wnrden 9 Hiihner mit Organemidsion gespritzt. Sie zeigten eine Lebens¬
dauer von ca. 4—15 Wochcn und Leukocytenwerte von 64 000—2G0 000.
Dabei stimmten die hochsten Zahlen ziemlich deutlich mit der langsten
Lebensdauer iiberein. Auch beim prozentualen Verhaltnis war es auf-
fallend, dab die hohen Werte der Lymphoidzellen bis zu G8 und 75 und
77 Proz., sowie die hohen Prozentzahlen von Myelocyten (zum Teil mit
Riesengranulis) nur bei den am langsten lebenden Tieren vorkamen. Die
Sektion ergab bei alien diesen Hiihnern Tuberkulose, die mikroskopischen
Veranderungen wichen nicht von den fruher beschriebenen ab.
Zu gleicher Zeit mit diesen 9 Hiihnern wurden 3 Stuck mit Filtrat
der Organemidsion durch ein Chamberlandfilter injiziert. Davon blieben
zwei gesund, das dritte zeigte Tuberkulose und Ansteigen der Leukocyten-
zahl, wobei ich offen lassen mud, ob es sich hier um einen technischen
FebJer oder um Infektion im Stalle handelt.
Bei den spateren Generationen wurde die Lebensdauer immer kiirzer,
und die Blutverhiiltnisse wichen in keiner Weise von denen des vorigen
Abschnittes, wo mit Reinkidturen von Tuberkulose geimpft wurde, ab.
Zum Teil kann die Verkiirzung der Lebensdauer allerdings auch auf einer
dazu kommenden Infektion mit Huhnerpocken und Diphtheric beruhen,
im ganzen scheint aber eine Virulenzsteigerung vorzuliegen. Ich habe
daher in dem eingangs erwiihnten Vortrage die Hypothese aufgestellt,
dad e s sich bei den H ii h n e r n von Ellermann und Bang
s o w i e d c ii e n von H i r s c h f e 1 d u n d J a c o b v u n d m e i n e n u m eine
Infektion mit einem T u b e r k e 1 b a c i 11 e n s t a m m e h a n d e l n
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kdlintp, (1 cr an fang« wen ig virulent war undkeinetvpi-
s <• h e n V e r ii n d i> r u n g e n m a <• h t e fe t w a anal o g d e m M u c h s e h e n
Erreger der II oilgkinsc hcn Krankhcit), der aber dureh
h ii u f i g e Passage virulent e r w u r <1 c.
Untersuchen wir nun zuniichst, ob es sich bei deni
typischen Krankheitsbilde wirklich um eine Leukamie handelt.
Aus dein Blutbefunde scheint dies ohne weiteres nach dera
massenhaften Auftreten der Lymphoidzellen hervorzugehen.
Nachdem aber die obigen Untersuchungen zeigten, daB diese
Zellen, soweit sie innerhalb der GefaBe entstehen, als Vor-
stufen der roten Blutkorperchen anzusehen sind, mochte ich
das ganze Krankheitsbild viel eher als eine perniziose Anamie
ansehen, bei der die Vorstufen der Erythrocyten ins Blut ge-
langt sind. Daneben konmien allerdings auch typische und
atypische Vorstufen der granulierten Zellen vor. Wahrend
wir fiir die Leukamie eine Ilyperplasie des myeloiden Ge-
webes fordern, beschreiben E Hermann und Bang im
Ktiochenmark meist eine Atrophie der Gewebsbalken, also des
Gewebes, in dem die Leukocyten entstehen; in ihrer Zeichnung
(Zeitschr. f. Hyg., Fig. 2) wird aber ebenso sehr eine Atrophie
in der Bildungsstatte der Erythrocyten deutlich; denn die Ge¬
faBe sind fast leer, und wir sehen nur die extremsten Jugend-
formen ohne Mitosen. In der anderen Zeichnung (Centralbl.
f. Bakt.) sind die Verhaltnisse nicht ganz so typisch. Aller¬
dings muB ich bemerken, daB das Vergleichsbild von normalem
Knochenmark (Zeitschr. f. Hyg., Fig. 1) nicht mit meinen Be-
funden am erwachsenen Huhn iibereinstimmt, sondern wohl
eher einein jungen oder anamisch gemachten Huhn entspricht.
Bei normalen Htihnern fand ich das Fettgewebe tiberall vor-
herrschend, die GefaBe viel weniger weit uud die Gewebs¬
balken fast ohne granulierte Zellen. Ich mochte also gerade
die „Atrophie der Balken“ nicht so in den Vordergrund
stellen, sondern eher eine uberstiirzte heteroplastische Neu-
bildung in und auBerhalb der GefaBe und zuletzt eine Er-
schopfung des blutbildenden Gewebes annehmen. Dabei treffen
wir das Mark bei der Sektion manchmal im Zustande der
Hyperplasie, manchmal der Atrophie. Aehnlich ist das Bild,
wie ich oben gezcigt habe, schon nach wiederholten schweren
Aderliissen, nur sind dann die GefaBe meist stSrker gefullt
und die Mitosen reichlicher. Jedenfalls ist das Vorherrschen
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Ueber das Blutbild bei Huhnertuberkulose etc.
579
der Lymphoidzellen in beiden Fallen auf die heteroplastische
Bildung der Erythrocyten zu beziehen.
Auch die Befunde in der Leber lassen sich anders deuten,
als es besonders Ellermann und Bang tun. Hier ist in
den extravaskularen Infiltraten eine Bildungsstatte der poly-
morphkernigen Leukocyten zu sehen; die Befunde innerhalb
der GefaBe mbchte ich aber einfach aus der Hyperaraie er-
kiaren, bei der die groBen Lymphoidzellen sich in den er-
weiterten Kapillaren mehr ansammeln als in anderen GefaB-
gebieten. EHermann und Bang haben ja selbst gezeigt,
daB im stromenden Blute Mitosen vorkommen; also sind die
Mitosen in den LebergefaBen nicht beweisend fiir eine intra-
vaskuiare Blutbildung daselbst und ganz sicher nicht fiir eine
Bildung von Leukocyten. Der anatomische Befund zeigt also
eine Zunahme des myeloiden Gewebes in der Leber; doch
kommt eine solche ja nicht nur bei Leukamie, sondern beim
Menschen schon bei verschiedenen Infektionskrankheiten vor.
Beim Huhn, wo schon normalerweise perivaskuiare Zellhaufen
erhalten sind, hat dies noch weniger zu bedeuten und recht-
fertigt es wohl kaum, anatomisch eine Leukamie anzunehmen.
Ob im Blute eine Abnahme Oder Zunahme der Pseudo-
eosinophilen besteht, laBt sich nach den Zahlen der obigen
Autoren nicht immer erkennen, da meist nur Verhaitniswerte
und keine absoluten Zahlen gegeben werden. Eller mann
und Bang nehmen eine Abnahme an; doch scheint es sich
oft um eine leichte absolute Zunahme bei starker relativer
Abnahme zu handeln. So bedeutet bei meinem Huhne H. J.
der Befund von 4,5 Proz. Pseudoeosinophilen und 0,7 Proz.
Myelocyten bei einer Leukocytenzahl von 484000 eine absolute
Zunahme und nicht eine Abnahme.
SchlieBlich glaube ich, daB das Vorkommen einer
sogenannten Pseudoleukamie durch die oben an-
gefuhrten Publikationen nicht geniigend siclier-
geste 111 ist. Ich habe bei der Huhnertuberkulose beschrieben,
wie schnell sich das Blutbild verandern kann, wie einerseits
Hlihner mit starkster Leukocytose zurzeit des Todes kleine
Leukocytenwerte und ein atrophisches Knochenmark aufweisen
konnen; andererseits fand ich oft so plotzliches Ansteigen des
Blutbildes, daB ein einmaliger Blutbefund und besonders ein
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Sektionsbefuad bier nicht genligen, um die Diagnose auf
Pseudoleukamie mit Sicherheit zu stellen.
Die Frage, ob wir das Krankbeitsbild nicht dennoch
wegen des Prfidominierens der grofien weiBen Zellen Leukamie
benennen wollen, lafit sich natflrlich diskutieren. Sicber aber
fehlt jeglicbe Analogic mit einer der verschiedenen Formen
der menschlichen LeukILmie, und wir kOnnen nicht von einer
Vermehrung der lymphatischen oder myeloiden Elemente,
sondern nur von dem Vorkommen sehr unreifer Zellen reden.
Der Beweis daflir, daB es sich bei diesen in der Hauptsache
um Vorstufen der Erythrocyten handelt, liegt, wie oben naher
ausgefiihrt ist, darin, daB im Knochenmark innerhalb der Ge-
faBe die Mitosen am haufigsten sind.
Sehr auffallend ist nun die h&ufige Kombination von
Leukamie und Tuberkulose. Hirschfeld undJacoby geben
sie oft zu, EHermann und Bang weniger oft, doch be-
schreiben diese letzteren Autoren so haufig tuberkuloseahn-
liche Bilder (weiBe Punkte und Striche in der Leber, fibrinose
Ueberzlige liber dieselbe etc.), ferner sind die allgemeinen
Symptome der Leukamie und Tuberkulose (enorme Ver-
groBerung von Leber und Milz, sogar mit Ruptur derselben)
so ahnlich, daB sie eigentlich kaum zufailig sein konnen.
EHermann und Bang beschreiben auch einmal (Zeitschr.
f. Hyg., p. 250) eine Bauchfelltuberkulose so typisch wie nur
moglich, ohne sie zu diagnostizieren. Sie schreiben zum
Schlusse, daB eine wirkliche Tuberkulose „wahrscheinlich“
nicht vorliege; der Beweis ware doch bei der enormen Bacillen-
menge nicht schwer zu bringen gewesen. Bei den von den-
selben Autoren so oft beschriebenen weiBen Punkten in der
Leber kann es sich kaum um perivaskulare Infiltrate ge-
handelt haben, da diese nach dem mikroskopischen Befunde
doch meist negiert werden.
Vergleichen wir nun das Blutbild der soge-
nannten Leukamie mit demjenigen der Tuber¬
kulose, so finden wir nicht soprinzipielleUnter-
schiede wie die friiheren Autoren. Bei beiden
besteht eine Wucherung der Leukocyten, d. h. der Pseudo-
eosinophilen und ihrer Vorstufen, und zu gleicher Zeit eine
starke Anamie. Nur tritt bei der sogenannten Leukamie
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc. 531
die An&mie viel mehr in den Vordergrund, bei der Tuber-
kulose die Vermehrung der Leukocyten. Dafi hier aber alle
UebergSnge bestehen, besonders daB auch bei der Tuber-
kulose manchmal die Lyraphoidzellen iiberwiegen, habe ich
gezeigt. Andererseits verzeichnen auch E Hermann und
Bang manchmal sehr groBe Werte von Polynukle&ren. Ana-
tomisch tritt bei beiden die myeloide Umwandlung des Fett-
marks in den Vordergrund, ebenso wie bei jeder anderen
Anamie. Dabei finden wir bei der Leukamie der Autoren
hauptsachlich eine Vermehrung der intravaskulSr gebildeten
Zellen, bei der Tuberkulose ebenso eine solche der extra-
vaskularen. Bei beiden kommt aber sehr oft eine vollige Er-
schopfung des Knochenmarks vor, wie ich es in mehreren
Fallen ausfuhrlich beschrieben habe. In der Leber tritt bei
beiden Erkrankungen oft, aber durchaus nicht immer, eine
Vermehrung der extravaskul&ren Zellhaufen ein; auBerdem
herrscht dort und in der Milz eine Hyper&mie, die zu enormer
VergroBerung dieser Organe ftihrt. Den Einwand, daB ein
absoluter Gegensatz zwischen beiden Blutbildern bestehe,
indem bei dem einen nur die lymphoiden, bei dem anderen
nur die myeloiden Zellen vermehrt seien, brauche ich nach
dem vorher Gesagten nicht mehr zu entkraftigen, ebensowenig
denjenigen, daB es sich bei der Tuberkulose nur um eine
relativ geringe Leukocytose handle.
Trotzdem ich also konstatieren muB, daB das Blutbild der
spontanen und experimentellen Tuberkulose nicht vollig mit
dem der Leukamie iibereinstimmt, mochte ich doch noch die
Hypothese verteidigen, welche ich bei meiner vorlaufigen Mit-
teilung aufgestellt habe, daB es sich bei der sogenan nten
Leukamie um eine langsam und unerkannt ver-
laufende Tuberkulose handeln konnte. Das Krank-
heitsbild der Hiihnertuberkulose mit seinem sarkomahnlichen
Granulationsgewebe ist ja anatomisch viel weniger typisch als
das der menschlichen Oder bovinen Form und sogar in aus-
gesprochenen Fallen manchmal zu verkennen. Jedenfalls ware
bei kilnftigen Fallen von „Huhnerleukamie“ sorgfaltig auf das
Vorkommen oder Fehlen von Tuberkelbacillen zu achten.
DaB die Tuberkulose nicht die einzige Ursache des Krank-
heitsbildes zu sein braucht, habe ich schon damals ausgefiihrt.
Zeitachr. f. Immunitytsforschung. Orig. Bd. XIV. 40
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582
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Iiizwischen bat die Arbeit von Kasarinoff dies deutlich
bewiesen. Dieser Aotor konnte durch Injektion von Ricin
und Saponin ein Blutbild hervorrufen, welches demjenigen
der fibertragbaren Hfihnerleukamie vollst&ndig gleicht Leider
berichtet er gar nichts fiber anatomische Untersuchungen und
nennt das Krankheitsbild einfach nach dem Blutbefunde eine
„leukamoide Myeloblastose u . Ich mochte nicht daran zweifeln,
daB es sich aucb hier urn eine Art von pernizioser Anfimie
bandelt, und daB die groBen weiBen Zellen als Vorstufen der
roten Blutkorperchen aufzufassen sind, welche infolge Er-
schopfung des Knochenmarks in den Kreislauf ttbertreten.
Zusammenfassung des II. Teiles.
Ebenso wie das Blutbild der Hfihnertuberkulose lSBt sich
auch dasjenige der sogenannten Hfihnerleukamie wohl am
ehesten als eine Art von pernizibser Anfimie erklaren.
Es besteht also bei diesen beiden Krankheiten kein
prinzipieller Unterschied im Blutbefunde, doch war es nicht
mbglich, in Versuchen mit Reinkulturen von Tuberkelbacillen
ein der Leukfimie identisches Bild zu erhalten.
Die bisherigen Arbeiten genflgen nicht, urn ein filtrier-
bares Virus fflr die Hfihnerleukamie sicher anzunehmen, und
es wfire nicht unmoglich, daB ein Zusammenhang zwischen
dieser vermeintlichen Leukfimie und Tuberkulose besteht
Ein Blutbild, das demjenigen der sogenannten Hfihner-
leukfimie anscheinend vollig gleich ist, hat fibrigens Kasarinoff
mit Blutgiften hervorrufen konnen; auch hier sind die groBen
weiBen Zellen wohl als Vorstufen der Erythrocyten anzusehen.
Protokolle.
Es ist zunhchst zu bemerken, daft fiir Protokolle und Tabellen siimt-
liohe in Berlin mit Reinkulturen von Tuberkelbacillen infizierten Hiihner
verwendet. warden. Die in der Reihe fehlenden Numniem entspreehen
Hiihnern, welche mit Orjraneniulsionen leukiimischer Hiihner etc. gespritzt
wurden.
Der mikroskopische Refund wurde nur beim Huhn H. J.. B 13 und
den Hiihnern der Tabelle ill veriiffentlieht, um nllzuviele Wiederholungen
zu venneiden. Bei den Hiihnern der anderen Tabellen finden sich ganz
dieselben Verhaltnisse.
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc. 583
Schliefilich ist es vielleicht wichtig, zu bemerkcn, daB es sich bei
alien Versuehen um alte ausgewachsene Hiihner handelte.
Huhn H. J. (von Prof. Jacoby erhalten). 23. III. gesundes Aus-
sehen, lebhaft, Kamm gerotet, blutet reichlich. R. 2288000, W. 484000,
Pseudo. 4,5 Proz., Myelo. 0,75 Proz., Gr. Mono. 91 Proz., Kl. Ly. 2,25 Proz.,
Eo. 0,75 Proz., Mastz. 0,75 Proz.
Erythrocyten, ziemlich gleichmaBig, oval mit wenig Hglb., Kern hell,
oval; selten eine ganz normale langsovale Zelle mit kleinem, dunklem
Kern. Keine eigen tliche Polychromasie.
Die groBen rundkernigen Zellen zeigen bei Giemsafarbung einen
sehr hellen, rotlichblauen Kern, ohne jegliche Struktur, nur ganz wenig
wolkig mit blaulichen, dunkleren und rotliehen, helleren Stellen. Der
Kern ist meist genau rund, selten oval oder leicht einseitig eingebuchtet;
die GrbBe betriigt 10—12, selten 6—8 jjl. Das Protoplasma ist meist nur
1 pi breit, zu alien Seiten des Kerns gleichmaBig verteilt, hellblau homo¬
gen (Praparate ziemlich dick ausgestrichen). An den diinnsten Stellen
sind die Kerne etwas grofier, von 12—14 p. Dm., etwas deutlicher rot gefarbt,
meist mit zwei deutlichen Kernkorperchen. Das Plasma ist viel groBer,
sehr hellblau und meist undeutlich begrenzt. Azurophile Granula sind
sehr selten. Dazwisehen kommen die gleichen Zellen etwa einmal mit sehr hell-
gefarbten pseusopodienartigen Ausstiilpungen vor, welche offenbar dureli
Quetsehung entstandene Kunstprodukte darstellen. Nach May-Griin-
wald sind die Kerne sehr undeutlich begrenzt, blau, dcr Protoplasma-
saum heller, der Kern aber von derselben Farbe und dadurch deutlich
abgrenzbar. In diesen rundkernigen Zellen kommen noch sehr selten
rundliche Granula vor, welche nach Giemsa blau, nach May-Griin-
wald teils rot, teils gelb, toils ubcrhaupt nicht gefarbt sind und dann
als Vakuolen imponieren; von den azurophilen Granulationen unterscheiden
sie sich deutlich durch ihre GrbBe. Diese Granula nehmen manchmal
das ganze Plasma ein, manchmal liegen nur wenige an einer Seite der
Zelle.
Die wenigen polynuklearen Zellen zeigen zum Teil gut entwiekelte
pseudoeosinophile Stiibchen, zum Teil kleine runde Granula. Einzelne
sind sehr klcin, fast nur von der Breite eines roten Blutkorperchens mit
runden Granulis.
Die kleinen Lymphocytcn zeigen bei Giemsafarbung einen dunk-
len, blaulichroten, stark wolkigen Kern; er ist meist ziemlich genau rund,
von etwa 6 p. Dm. Das Protoplasma ist etwas exzentrisch angeordnet,
hellrot, homogen und enthiilt meist einige kleine Vakuolen, darin azuro¬
phile Kornchen.
24. III. Das Huhn wird durch Entbluten getbtet. Sektion: MiiBige
Abmagerung. L(‘ber stark vergrbBert, graurot, mit reichlich 1—2 in in
messenden, weiBlichen, leicht vorspringenden Knritchen an Oberflache und
Schnittfliiche; sonst keine deutliche Zeichnung. Milz nicht vergrbBert,
hellrot, ohne deutliche Knbtchen. Knochenmark hellrot mit denselben
Knotchen wie in der Leber.
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M i k r o s k o p i s e h:
Das K n oehen m ar k zeigt sehr weite Gefiifie, die mit groben rund-
liehen hiimoglobinlosen Zellen fast ganz erfiillt sind. Diene Zellen ent-
halten grobe meist vbllig rumlliehe bUisohenformige und zienilieh he*lie
Kerne; ihr Protoplasma ist leieht basophil, homogen, Mitosen sind zieni¬
lieh hiiufig. Dazwisehen finden sieh, besonders gegen die Mitte der
venbsen Riiume zu, etwas kleinere moist hamoglobinhaltige Zellen, deren
Kerne wenig kleiner und dunkler siml, und einige ausgebildete Erythro-
eyten mit noeh dunkleren und ovalen Kernen. Uebergiinge zwisehen diesen
drei Formen siml nieht gerade selten. Die Gewebsbalken des Knoehen-
marks sind angefiillt teils mit Zellen, welehe sieh von den grub on Zellen
der venbsen Riiume nieht untersoheiden lassen, toils mit granulierten
Zellen, deren Kerne etwas kleiner, moist aber ebenfalls rundlieh und zieni¬
lieh hell sind. In beidon Formen finden sieh aueh liier zienilieh vide
Mitosen. Ausgeliildete polymorphkernige Leukoevten sind selten, kleine
Lymphoeyten feldeii fast vbllig. Liieken von Fettgewebe finden sieh an
den untersuehton Stellen nieht melir. Im Verhiiltnis zu den venuson
Kiiumen ist die Breite der (iewebsbalken etwas geringer, doeh kann
keineswegs von einer Atrophie gesproehen werden.
Leber: In einzelnen Sehnitten findet sieh reiehlieh anniihemd
normales Lebergewebe, in dem nur die etwas weiten Kapillaren auffallen.
1m Gewebe zerstreut liegen spiirliehe Tuberkelknbtehen, meist nur aus
Epitlieloidzellen olinc Yerkasung bestehend. Um die grbberen Gefiibe
finden sieh Infiltrate von granulierten und ungranulierten Zellen, welehe
den im Knoehenmark besehriebenen Zellen absolut gleiehen. Mitosen siml
aueh hier nieht selten, aber weniger hiiufig als im Knoehenmark. Die Zahl
der granulierten und ungranulierten Zellen mag ungefiihr gleieh sein,
doeh nehmen die ungranulierten meist die Peripherie, die granulierten das
Zentrum der Infiltrate ein. Naeh auben sind diese Horde kaum abge-
ahgegrenzt und reiehen mit vielen Ausliiufern zwisehen das umgebende
Lebergewebe. Jm Innern der Ka]>illaren sind die groben weiben Blut-
kbrperrhen abnorm hiiufig; Mitosen kbnnen hier nieht gefundeu werden.
M ilz: Auber leiehter Hyperamie und vereinzelten miliaren Tuberkel-
knbtehen bestehen koine abnormen Verhiiltnisse.
Ilerz: Zwisehen den Muskelfasern und in der Umgebung eiuiger
Gefiibe finden sieh mehrere unregelmabig begrenzte kleinste Horde mit
kleinen Lymphoeyten.
Xierc: Koine abnormen Verhiiltnisse.
B 15. Gekauft 22. IV., anseheinend gesund, 1000 g.
2b. I V. R. 250S000, W. 112( KX\ Pseudo. 58,5 Proz., Gr. Mono. 28 Proz.,
Kl. Ly. 9,5 Proz., Eo. 5 Proz., Mastz. 1 Proz.
5. V. R. :U72000, W. 211000, Pseudo. 52,5 Proz., Gr. Mono. MS,5
Proz., Mveloe. 0,75 Proz., Eo. 1,0 Proz., Mastz. 0,25 Proz., Kl. Ly. 7,0 Proz.
lb. V. Matt, Kamin blab, R. bbSSOOO, W. 115(X)0, Pseudo. 54.75 Proz..
Gr. Mono. b9 Proz., Mveloe. 0,75 Proz., Kl. Ly. b,0 Proz., Eo. 1,5 Proz..
Mastz. 1,0 Proz. (Granulationen sehr klein, rund, oft gelblieh).
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15. V. Sehr matt, R. 3912000, W. 277000, Pseudo. 60 Proz., Gr.
Mono. 34,25 Proz., Myeloc. 2,75 Proz., Kl. Ly. 2,25 Proz., Eo. 0,25 Proz.,
Mastz. 0,5 Proz.
17. V. Tot. Stark abgemagert. 710 g.
Sektion: Leber 45 g mit zahlreiohen, meist in Gruppen von 4 bis
5 Stuck stehenden, leicht vorspringenden Tuberkelknotchen von 2—4 mm.
Milz ca. 1,5 X 1*2 XI cm mit einem ca. 5 mm haltenden gelbweifien
Knoten und mehreren kleinen Knotchen, die teilweise konQuieren. Linke
Lunge von normaler Farbe und Konsistenz mit einigen gelblichen Knotchen
von ca. 2 mm Dm. An Stelle der rechten Lunge befindet sich ein ca.
4,5X^X^,b cm messender Tumor von gelblicher Farbe, hart an der Ober-
flache mit Knotchen von ca. 2 mm Dm. besetzt. Er zeigt auf dem Schnitt
fast knorpelharte Konsistenz, gelbe Farbe und sehr wechselnde Transparenz.
Kein Saft abstreifbar. Hinter dem Tumor laBt sich ein kleiner Rest der Lunge
erkennen, mit welchem der Tumor fest verwachsen ist. Der rechte ab-
dominale Luftsaek ist in eine gelbe, 1 mm dicke Membran umgewandelt,
an der Oberflaehe mit denselben Knotchen besetzt, und enthalt eine sehr
dicke eitrige Fliissigkeit. Magen mit reichlich subserosen ca. 1 mm
messenden Knotchen. Mesenterium und Ansatzstelle des Darmes an
demselben mit stark vorspringenden, zum Teil gestielten Knotchen von 1 bis
2 mm Dm. besetzt. Darraschleimhaut im obersten Teil gerotet, nirgends
Geschwiire. Hinter dem Kropfe liegt ein kasiger Korper von ca. 1,5 X1 X1 em
Dm. Hinter der Halswirbelsaule, unter der Haut ein gleicher, grofierer
Korper, zum Teil von der Konsistenz des Tumors in der Lunge, zum Teil
brocklig. Knochenmark dunkelrot, im untersten Teil des Unterschenkels
himbeerrot mit ziemlich vielen Knotchen von ca. 1 mm Dm. Der oberste
Teil des linken Unterschenkels papierdiinn, erfiillt mit derselben gelben
Masse wie die rechte Lunge. Ausstriche von rechter Lunge und Knochen¬
mark zeigen massenhaft Tuberkelbacillen.
Mikroskopischer Befund:
Knochenmark: Bei schwacher VergroSerung finden wir mit
H.-E.-Farbung meist grofie blaue Felder, die durch mehr oder weniger
zusammenhangende schmale und fein verzweigte Bander und Inseln von
roter Farbe getrennt sind.
Bei starker Vergroflerung sieht man, dafl die blauen Felder groflen-
teils, aber absolut nicht immer, den venosen Raumen entsprechen. Deren
Inhalt besteht meist aus grofien, ungefahr rundlichen Zellen mit sehr
groBem hellen Kern. Die Kerne sind blaschenformig, meist ungefahr
rundlich; ihr Chromatin ist in sehr feine Kornchen verteilt. Der Plasma-
saum ist hell, leicht blaulich gcfarbt, ziemlich homogen. Daneben finden
sich ahnliche Zellen mit etwas kleineren und dunkleren Kernen. Scltcn
sieht man in den beiden eben beschriebenen Zellformen eine leichte
Hamoglobinfarbung. Ausgebildete Erythrocyten mit dunklen langge-
streckten und auch jiingere mit hellen rundlichen Kernen sind in den
weiteren Gefaden ziemlich selten und liegen nur in der Mitte. In den
engeren Gefafien sind sie aber oft in der Mehrzahl, wahrend die oben be¬
schriebenen Zellen nur eine Randschicht bilden. Granulierte Zellen sind
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zwischen ihnen ziemlich sparlich. In den Arterien und einigen feilisten
Kapil laren herrschen die ausgebildeten Roten weitaus vor.
AuBerhalb der GefiiBe ist das Fettgewebe fast vollig versehwunden
und bildet nur selten eine kleine runde Liicke. Das Gewebe besteht
stellemveise fast ganz aus mittelgroBen rundlichen Zellen, deron Haupt-
eharakteristikum in den reiehliehen eosingefarbten ninden und ungleieh
groBen Granulis liegt. Diese Zellen bilden die oben beschriebenen roten
Biinder und Inseln. Ihre Kerne sind gegeniiber den oben beschriebenen
meist ziemlich viel kleiner und dunkler, groBenteils aber ebenfalls nnul-
lieh und nur sehr selten stark eingebuehtet. Neben diesen granulierten
ZeLlen finden sich aber aueh auBerhalb der Gefafie die undifferenzierten
Zellen mit groflem hellen Kern, welehe sich von den innerhalb der GefiiBe
beschriebenen nicht unterscheiden lassen. In ziemlich groBen Fliiehen
herrschen sie sogar ganz vor. Kleine Lymphoeyten sind auberst sparlich.
stellenweise ganz v r ersehwunden.
Im allgemeinen ist noch nachzutragen, daB sich sowohl innerhalb
als auBerhalb der GefiiBe spiirliehe Mitosen finden. Viel hiiufiger sind,
besonders auBerhalb der GetaBe, Zellen mit alien mdgliehen Btadien von
Kernzerfall, und zwar sind dies sowohl groBe undifferenzierte als aueh
gran ul iorte Zellen.
In einem Priiparat findet. sich ein kleiner Tuberkel, bestehend aus
ejiitheloiden Zellen, die sich von don oben beschriebenen als Lymphoid-
zellen aufzufassenden Zellen durch die GroBe und UnregelmaBigkeit ilirer
Kerne und iJire sehr wechselnden Dimensionen unterscheiden. Dazwisohen
finden sich groBe polvmoqihkernige Zellen und wenige kleine Lympho¬
eyten. In all diesen Zellen besteht starker Kernzerfall.
Abstriehe ties Knochenmarks zeigen hauptsiielilioh Lymphoidzellcn,
daneben ziemlich spiirliehe Myelocyten und junge Rote; sehr wenig aus-
gebildete Erythroeyten und Granulocyten.
Leber: In groBen Partien finden wir ziemlich normale Verhiiltnisse,
hochstens fiillt eine leichte Hyperamie auf. In den Kapillaren sind neben
Roten ziemlich viele Lymphoidzellen und besonders viele Pseudocosinophile.
Dazwischen bestehen einzelne groBe Tuberkclkndtchen mit nekrotischcn
Zentren, einigen unregelmaBigen Riesenzellen, mehr Oder weniger zer-
fallenden epitheloiden Zellen und kaum ausgesprochenem Lymphocyten-
sau m.
In anderen Partien finden wir ganze Flachen ubersiit mit viel
kleineren iiuBerst dicht liegenden Epitheloidtubcrkeln, welehe nur spiirliehe
Reste von Lebergewebe zwischen sich lassen.
An einer anderen JStelle herrscht ein Granulationsgewebe vor mit
epitlieloiden Zellen, spiirliehen pseudoeosinophilen Leukoeyten und kleinen
Lymphoeyten in starkem Kernzerfall. Dazwischen finden sich grolle me
regellnaBig begrenzte Nekrosen und einzelne Riesenzellen, meist von ganz
un regel miiBiger Form, seltener leieht an den Typus der Laugh an sschen
Riesenzellen erinnernd. Am Kande dieser Felder von Granulationsgewebe
finden sieh oft grbBere llerde von kleinen Lymphoeyten, seltener solche
von Pseudoeosinophilen, welehe ziemlieh weit und fein verzweigt zwischen
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
587
das Lebergewebe, d. h. zwischen Leberzellen und Kapillaren eindringen.
Die Leberzellen sind an diesen Stellen oft anscheinend intakt; hier und
da zeigen sie starke Ansammlung von Gallenpigraent, hier und da An-
fange von KemzerfalL Solche kleinere Herde von Lymphocyten und
Leukocyten kommen auch an anderen Stellen vor. Als Blutbildungsherde
sind sie wohl sicher nicht aufzufassen. Perivaskulare Infiltrationen um
die groBeren GefaBe fehlen hier vollig
Lunge: Der groBe Tumor besteht dort, wo eine Struktur iiberhaupt
noch deutlich ist, aus demselben Granulationsgewebe, wie es oben in
kleinen Partien der Leber besehrieben wurde. Dazwischen finden sich
Stellen mit aufierst zellarmem Bindegewebe, welches sparliche Spindel-
zellen und reichliche, teils homogene, teils spurweise fibrillare Grund-
substanz zeigt. Am ehesten gleichen diese Partien hyalinem Bindegewebe.
Sie gehen stellenweise unmerklich liber in nekrotisehes Gewebe, das aber
fast iiberall noch Kernreste enthalt. An anderen Stellen finden sich
groBe, vollig nekrotische Flachen, begrenzt von mehr oder wenig breiten
Lymphoeytenansammlungen, hier und da auch Saumen von epitheloiden
Zellen und Riesenzellen. Ueberdies liegen im Granulationsgewebe sowohl
einzelne als auch konfluierende Tuberkel von der oben beschriebenen
typischen Zusammensetzung des Hiihnertuberkels. An einer Stelle des
fast vollig hyalinen oder nekrotischen Gewebes finden sich noch Reste
von Lungengewebe, in dem besonders einige groBere Arterien noch er-
halten sind. Die linke Lunge zeigt vollig normale Verhiiltnisse.
Milz: Die Milz ist fast vollig durchsetzt von sehr kleinen Epitheloid-
tuberkeln, die fast nur durch sparliche Lymphocytensaume voneinander
getrennt sind. Dazwischen finden sich aber auch besser erhaltene Stellen
und einzelne groBere Tuberkelknbtehen. Irgendwelche Anhaltspunkte fiir
eine myeloide Umwandlung sind nirgends vorhanden.
Pankreas: Das Pankreas zeigt normale Verhaltnisse; doch finden
sich im umgebenden Bindegewebe einzelne Tuberkelknotchen.
H e r z: In der Umgebung einiger kleiner GefaBe und auch an
anderen Stellen finden sich ziemlich vicle, teilweise unregelmaBig be-
grenzte Knotchen, bestehend aus kleinen Lymphocyten. Nirgends Tuberkcl-
kndtchen.
B 28. 740 g.
21. V. R. 2680000, W. 29000, Pseudo. 3d Proz., Gr. Ly. 17 Proz.,
Kl. Ly. 41 Proz., Eo. 5 Proz., Mastz. 3 Proz.
23. V. Impfung mit Huhnertuberkelbaeillen (Stamm U.), i / i0 Oese
intraperitoneal (oder subkutan?).
31. V. R. 2701000, W. 66000.
14. VI. ziemlich gesund, R. 3 400 (XX), W. 20000.
18. VI. R. 3224 000, W. 46000.
23. VI. W. 36000.
1. VII. Kamm rot, ziemlich gesund, R. 3 232(XX), W. 128000.
22. VII. Matt, Kamm blab, R. 2800000, W. 151000.
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3. VIII. Matt, nieht sehr blab, R. 2328000, W. 180OCX), Pseudo.
40.3 Proz., Gr. Ly. 44 Proz., Kl. Lv. 3,3 Proz., Eo. 1.3 Pro/.., Mastz. 2,5 Proz.
Auffallend viele ahnorine Rote.
8. VIII Sehr matt, R, 2090 (XX), W. 1.31 000.
10. VLII. Moribund, R. 2‘SU)000, W. 131000, Pseudo. 08 Proz., Or.
Ly. 30 Proz., Ki. Ly. 2 Proz., Mastz. 1 Proz. Moribund, getdtet, 870 g.
Sektion: Starke Abmagerung. Ln einem Thymus teil cin derbes
gelbes Kndtehen von ea. 1 mm Dm. Leber 78 g, griinbraun mit reifh-
liehen weillen Herden, zum Toil ebon siehtbar, zum Teil bis 3 mm grofi,
die grdberen dureh Konfluieren der kleineren entstanden. Auf dem Schnitt
springen dieselben Herde leielit vor und zeigen zicmlieh derbe Kousistenz.
Milz ea. 2.7 X L7 X lv^ em, hell rot mit reiehliehen ea. 1 mm hsil tendon
weiben Herden, welehen auf Sehnitten stark vorspringende gelbe dcrbe
transparent^ Kndtehen entspreehen. Dazwisehcn sehr wenig rotes Gewebe.
Bauehdeeken an einer 2 X L”> rm messenden Stelle stark verdiekt mit
toils kiisigen, toils harten gelbweiOen Masson. I'liter dieser Stelle ist das
Peritoneum verdiekt und mit Kndtehen beset zt. Im Peritonealraum
finden sieh einige freie, talgartige eitrige Massen. Darin e o. B. Knoohen-
mark im Untersehenkel dunkelrot konsistent, im Obersehenkel toils Fort-,
toils Gallertmark; koine deutliehen Kniitehen.
B 29.
23. V. R. 3 230 000, W. 41 000, Pseudo. 27 Proz., Gr. Ly. 16 Proz.,
Kl. Ly. 50 Proz., Eo. 4,5 Proz., Mastz. 2,5 Proz.
23. V. Intravendse Injektion von ',7 Oese Tuberkelbaeillen Stamm U.
31. V. Gesund, Kamm etwas blab. It. 3 004 000, W. 30000.
7. VI. R. 3 3H4 0O0, VV. 10 CKO.
14. VI. Blab, matt. R. 1 760 000, W. 48 0(X).
17. VI. Blab. R. 1 320 000, W. 116 (XX).
28. VI. Munter, Kamm rot. R. 2 696 000, W. 114 0(0, Pseudo.
73.3 Proz., Gr. Ly. 25,3 Proz., Kl. Ly. 1 Proz., Mastz. 0,3 Proz. Viele sehr
unreife Rote. Pseudo, fast nie mit deutliehen Stabchen.
3. VII. Exitus. 640 g.
Sektion: Keine Poeken, koine Diphtheric. Kamm blab. Peri¬
toneum o. B. Leber mittelgrob, 42 g, gelbbraun mit ebon siehtbaren gelb-
liehen Pxinktehen vdllig iibersat. Auf Schnitt Gewebe zicmlieh derb mit
denselbcn Piinktehen. Milz ca. 1,5 X 1 X 1 cm > braunlich mit vielen gelb-
weiben Fieeken; auf Schnitt Gewebe sehr zah, braunlich mit undeutlichen
gelb weiben Fieeken. Knochenmark dunkelrot, zicmlieh feueht, bei genauer
Betraehtung von feinsten weibliehen Fieeken durehsetzt. Andere Organe
o. B. Abstriehe von Leber und Knochenmark zeigen sehr reiehliehe
Tuberkelbaeillen. Aus der Leber lassen sieh typische Hiihnertuberkel-
baeillen kultivieren.
B 30.
23. V. It, 3 584 000, W. 38 (XX).
23. V. Intravendse Injektion von l / J0 Oese Tuberkelbaeillen Stamm U.
31. V. R. 3 536 (XX), W. 31000.
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
589
6. VI. Ge8und. Kamra etwas blafi. R. 3 324 000, W. 2000.
13. VI. Eine Pocke am Kamm. Eiter in den Nasenlochern.
R. 2104 000, Gr. W. 52 000.
17. VI. R. 1696 000, Gr. W. 134 000, Pseudo. 77,3 Proz., Gr. Ly.
16 Proz., Myelocyten 6 Proz., Kl. Ly. 0,3 Proz., Mastz. 0,3 Proz., Pseudo,
sehr unreif, oft mit basophilen Kornchen.
23. VI. Exitus. Pocken am Kamm und Schnabelansatz, diphtheriseher
Belag im Schnabel, Eiter in den Nasenlochern.
S e k t i o n: Starke Abmagerung. Leber groB, 58 g, Oberflache braun-
rot mit feinsten gelbweiften Punkten und Streifen. Am Rande ein schwefel-
gelber Herd von ca. 1 mm Durchmesser. Im rechten Lappen ein ca. 0,5 cm
messender unscharf begrenzter gelblicher Herd, welcher ca. 2 mm in die
Tiefe reicht. Die Schnittflache zeigt sehr reichliche kleinste gelbweifie Herde
mit sehr schmalen rotbraunen Zwischenraumen. Milz ca. 2,5 X 1>5 X 1>5 cm.
Oberflache mit weiBlichen Piinktchen von StecknadelkopfgroBe. Auf
Schnitt Gewebe rot, trocken, mit deutlich vorspringenden gelblichen Knot-
chen. Pankreas sehr schmal mit sehr reichlichen vorspringenden feinsten
weiBlichen Knotchen auf graurotem Grunde. Lungen, Herz, Peritoneum
o. B. Darm besonders in den oberen Teilen mit reichlichen frischen
Schleimhautblutungen, nirgends Knotchen. Knochenmark iiberall rot,
trocken, kornig, ohne deutliehe Tuberkelknotchen.
B 81.
24. V. R. 3 392 000, W. 44 000, Pseudo. 13 Proz., Gr. Ly. 16 Proz.,
Kl. Ly. 52 Proz., Eo. 16 Proz., Mastz. 3 Proz.
24. V. Intravenose Injektion von l / l0 Oese Tuberkelbacillen Stamm F.
30. V. R. 3 376000, W. 49 000, Pseudo. 40 Proz., Gr. Ly. 17 Proz.,
Kl. Ly. 34 Proz., Eo. 6 Proz., Mastz. 3 Proz.
6. VI. Mehrere groBe Papeln an Kamm und Schnabelwurzel, Eiter
in den Nasenlochern. R. 3 520 000, W. 15 000.
13. VI. BlaB, matt, starke Pocken. R. 1592000, W. 123 000.
17. VI. Sehr matt mit reichlichen groflen Pocken. R. 1816 000,
W. 210000, Pseudo. 78,6 Proz., Gr. Ly. 16,3 Proz., Kl. Ly. 5 Proz., Pseudo,
unreif, Granula ziemlich grofi, oft basophil.
24. VI. Pocken am Eintrocknen. Keine Diphtherie. R. 3 216 000,
W. 51000, Pseudo. 79,6 Proz., Myeloc. 10 Proz., Gr. Ly. 7 Proz., Kl. Ly.
3,3 Proz., Pseudo, mit gelbcn und blauen Granidis.
27. VI. Exitus. Starke Abmagerung. 600 g.
Sektion: Reichliche Pocken. Diphtheriseher Belag. Leber 60 g,
an der Oberflache feines weiBlieh schimmerndes Netz, dazwischen zuin
Teil gelbliche Farbe. Auf Schnitt Farbe braunrot mit kaum erkennbaren
weiBlichen Piinktchen und Strichen. Milz 2,5X18X1,3 cm, graurot,
auBerlich o. B., in der Mitte einige konfluierende weiBliche Herde, im
ganzen ca. 3 X 4 mm einnehmend. Darm auBerlich o. B., in der Sohleim-
haut starke frische und alte Hamorrhagien, besonders im Duodenum.
Serose Haute zum Teil etwas verdickt, ohne deutliehe Knotchen. Knochen¬
mark iiberall dunkelrot, ziemlich konsistent, aber feucht.
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B 32. 2000 g.
24. V. K. 3 901000, W. 16 000.
24. V. lntraperitoneale Injektion von 1 / lo Oese Tuberkelbaeillen
Stamm F.
31. V. Ansehcinend gesund. R. 3 21S CKJ(J, W. 26 000.
7. VI. Gesund. K. 2 061000, W. 34 OK).
lo. VI. Gesund. R. 2 872000, Or. W. 23 000.
18. VI. Blab, matt. Koine Poe ken, keine Diphtheric. R. 2 032 OX).
Gr. W. 138 000.
28. VI. Etwas blab, starke Poeken. R. 2 810000, W. 245OX).
Pseudo. 71 Pro/., Mveloe. 5 Proz., Gr. Ly. 21,G Proz., Kl. Lv. 2 Proz.,
Mastz. 1 Proz.
4. VI I. Beide Aiigen vereitert. R. 2 384 (XX), W. 108 OX), Pseudo.
70 Pro/., Mveloe. 2,6 Proz., Gr. Ly. 23 Proz., Kl. Ly. 2,3 Proz.
7. VII. Exitus. 1300 g.
Sektion: Reiehliehe Poeken. Im Peritoneum Verwachsunken,
Knotehen und freie diehte eitrige Masset i von speckiger Konsistenz. Leber
GO g, dunkelrot, ohne Knotehen. Milz 1,9 X X fm, graurot, ohne
deutliehe Knotehen. Knoehenmark graurot. Abstriehe von Leber und
Knoehenmark zeigen keine Tuberkelbaeillen.
B 33. 1690 g.
24. V. R. 3 228 000, W. 4G000.
24. V. Intravenose Injektion von */,„ Oese Tuberkelbaeillen Stamm F.
30. V. Gesund. R. 3 220OK), \V. 46 OX).
7. VI. Gesund. R. 2 928 OX), Gr. W. 12 000.
13. VI. Matt, Kamm rot, Blut diinn. R. 1 730OK), W. 75 0 k).
18. VI. Matt. Keine Poeken, keine Diphthcrie. Blut reichlieh, diinn,
sehwer gerinnend. R. 1 408 OX), W. 1(H)OX), Pseudo. 63 Proz., Mveloe.
10 Proz., Gr. Ly. 24,3 Proz., Kl. Ly. 2,3 Proz. Pseudo, mit sehr wenig
entwiekelten Kernen, fast wie Mveloe., Granula ebenfalls unentwiekelt.
28. VI. Exitus. 110) g.
Sektion: Eine Poeke, leichtcste Diphtheric. Leber sehr groG, 8) g,
gelbbraun. An Obcrflsiehe und Sehnittflaehe feinstc gelbliehe Ptinktclien
mit sehmalem roten Ramie. Milz 2,3 X 1,7 X L7 cm, braunrot, ohne
Knotehen. Peritoneum etwas verdiekt mit feinsten Knotehen. Knoehen¬
mark im ()bersehenkei hellrot, feueht, im Untersehenkel oben gelbrot,
spiirlieh, kornig, unten Fettmark. Abstriehe von Leber und Knoehen¬
mark zeigen reiehliehe Tuberkelbaeillen.
B 30. 17.30 g.
10. VI. R. 2 8%OK), W. 10 000.
23. VI. Intravenose Impfung mit l / lQ Oese Tuberkelbaeillen aus B 1
(2. Generation).
4. VII. Gesund. R, 3 392 000, W. 28000.
20. VII. Blab, matt. R. 1 504 0*), W. 214 000, Pseudo. 87,73 Proz.,
Gr. Ly. 1) Proz., Kl. Ly. 3 Proz., Mastz. 0,73 Proz., Pseudo, gut ent-
wickelt.
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
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3. VIII. Moribund. R. 3 096 000, W. 108 000, Pseudo. 79 Proz.,
Myeloe. 6 Proz., Gr. Ly. 14,6 Proz., Kl. Ly. 0,3 Proz. Moribund, getotet.
Sektion: Starke Abmagerung, 900 g. Keine Pocken oder Diphtherie.
Leber 103 g, braunrot mit reichlichen feinsten weifiliehen Piinktchen an
Oberflache und Schnittflache. Am Rande einige gelbweifie leicht einge-
zogene Stellen, auf Schnitt nur ca. 1 mm tief, weiBlich. Milz 2,3 X 1,4 X 1,2 cm,
hellrot mit reichlichen weifilichen Piinktchen, welche auf Schnitt leicht
vorspringen. Am Mesenterialansatze des Darmes einige gelbweifle, 1—2 mm
Durchmesser haltende unregelmafiige Verdickungen. Knochenraark gelb-
rot, sparlich, mit deutlichen weifien Knotchen.
B 37.
16. VI. Leichte Pocken. R. 3 240000, W. 18 (XX), Pseudo. 25 Proz.,
Gr. Ly. 19,3 Proz., Kl. Ly. 34,6 Proz., Eo. 16 Proz., Mastz. 5 Proz.
25. VI. Impfung wie B 36.
3. VII. Pocken? R. 3 224 000, W. 19 000, Pseudo. 21 Proz., Gr. Ly.
11 Proz., Kl. Ly. 58 Proz., Eo. 7 Proz., Mastz. 3 Proz.
20. VII. Sehr blaB. R. 1544 000, W. 135 000, Pseudo. 73,3 Proz.,
Myeloe. 5,3 Proz., Gr. Ly. 19,3 Proz., Kl. Ly. 1,6 Proz., Mastz. 0,3 Proz.
Pseudo, zum Teil sehr unreif mit basophilen Kornchen.
24. VII. Exitus. 990 g.
Sektion: Starke Abmagerung. Leber 96 g, braunrot, flachenweise
gelblich. Oberflache und Schnittflache bei genauer Betrachtung mit reich¬
lichen feinsten gelblichen Zentren und rotem netzformigen Hof. Milz
kuglig, von ca. 2 cm Durchmesser, hellrot; auf Schnitt ziemlich derb, zah,
hellrot mit vielen feinsten transparenten weiflliehen Piinktchen und einigen
groberen Piinktchen (Tuberkeln ?). Knochenmark im Oberschenkel hellrot,
gallertig, ziemlich konsistent, im Untcrschenkel oben wenig hellrotes Mark,
weiter unten Fettmark. Abst riche von Leber und Knochenmark zeigen
reichliche Tuberkelbacillen.
B 38.
16. VI. R. 2 800 000, W. 26 000.
25. VI. R. 2 512 000, W. 28 000, Impfung mit l / 2Q Oese Tuberkel-
bacillen wie B 36.
4. VII. Blall. 2 Pocken am Kamin. R. 2 416000, W. 5000.
20. VII. BlaS. Pocken am Kamin, keine Diphtheric. R. 2 701000,
W. 164 000, Pseudo. 75.6 Proz., Myeloe. 12,6 Proz., Gr. Ly. 11 Proz.,
Kl. Ly. 0,6 Proz.
28. VII. Moribund. Blut aus der Fliigelvenc. R. 4 528 000, W. 4000.
Moribund, getotet.
Sektion: Grofte Pocken. Leber bedeekt mit braunroter Masse aus
altem geronnenen Blut. Zwischen den Diirmen und deni Magen eine
Cyste mit ziemlich derber, am Peritoneum adhiirenter Wand und braun-
rotera derben kriimeligen Inhalt, im ganzen ca. 25 g, Leber 95 g, braun-
griin mit reichlichen kleinsten weiben Piinktchen an Obertliiche und
Schnittflache. Milz ca. 2,5X^^X 1 0 cm, braunrot mit reichlichen
Tuberkelknotchen. Knochenmark graurot, reichlich.
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B 43. 1970 p.
30. VI. R. 2872000, W. 12000.
•1. VII. Intravendse Impfung mit l ; 2l) Oese Tuberkelbaeillen (2. Ge¬
neration aus B 1).
10. VII. Exit us, 1300 g.
Soktion: Leber 107) g, graurot mit kleinsten Kndtehen an Ober-
fliiehe und Schnittflarhe. Milz 3,4 V2,8X 2,8 cm, rbtlich mit denselben
Kndtehen. In dcr Bauehhdlde leieht getriibtc graue Fliissigkcit mit
grauweibliehen Fiiden. Knochenmark graurot. Abstrichc aus Leber, Milz
und Knochenmark zeigen reirhliehe Tuberkelbaeillen.
B 44. 17)10 g.
30. VI. R. 27)12000, W. 20 (XX).
4. VII. Intravendse Impfung wie B 43.
20. VII. Anseheinend gesuml. R. 227>6(XX), W. 79 000.
27). VII. Ex it us, 12S0 g.
Kcktion: Leiehte Abmagerung. Leber 98 g, bra unrot. Die Ober-
fliichc ist am reehten Leberlappen stellenweise mit dem Peritoneum parietale
und dem Blinddarm vcrwaehscn, aber leieht zu bisen. An den anderen
Stellen ist sie glatt, mit feinsten gelbliehen Punkten, welehe selten kon-
fluieren. Auf Schnitt diesel be Zeiehnung, daneben einige grdbere gelb-
liehe seharf abgegrenzte Felder. Nirgends Kndtehen. Milz 3.2 X 2,3
X L8 cm rot mit reiehliehen Venensternen an der Oberflaehe. Auf
Sehnitt troeken, sehr konsistent, hellrot, ohne Kndtehen. Magen mit
vielen V*—1 cm l)m. haltenden Knoten, die sieh auf Schnitt als abge-
kapselte subserdse Hamnrrhagien erkennen lassen und vielen Verwachsungen,
aus denen si<di 2 Steeknadeln herausldsen lassen. In der Muskulatur des
Magens finden sieh ebenfalls alte Hamorrhagicn. Knochenmark in Obor-
und Untersehenkel gelblieh bis hellrot. Mikr. tvpisehe Miliartuberkulose.
B 47>, 1870 g.
30. VI. R. 2880000, W. 13 000.
4. VII. Impfung wie B 43.
20. VII. Anscheinend gesund. R. 3 784 000, W. 6<XX).
2(5. VII. Matt, blab. R, 1 936000, W. 86000.
2. VIII. Matt, blab. R. 26SS000, W. 94 000.
7. VIII. Exitus, 1070 g.
Sektion: Starke Abmagerung. I^eber 73 g, braunrot, aufier einigen
gelbweiben Stellen, welehe 1—2 cm Dm. hultcn und nur ca. 2 mm in die
Tiefe gehen, ohne Zeiehnung. Nirgends Kndtehen. Milz ca. 2X 1,2X L :>> rnK
hellrot, ziemlieh derb, ohne deutliehe Tuberkelkndtchen. Herz, Perikard
mit reiehliehem Fibrin, Fpikard stellenweise verdickt, ohne Kndtehen.
Knochenmark hellrot, spiirlieh, stark mit Knoehen durehsetzt. Mikr.
wie B 44.
B 46. 1800 g.
30. VI. R. 3 096 (XX), W. 27000.
4. VII. Intraperitoncale Impfung mit l / J0 Oese Tnberkelbaeillen
aus B 1.
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
593
20. VII. BlaB aber lebhaft, R. 2744 000, W. 192000, Pseudo.
57,6 Proz., Myeloc. 0,3 Proz., Gr. Ly. 32,6 Proz., Kl. Ly. 7,6 Proz., Eo.
1 Proz., Mastz. 0,3 Proz.
26. VU. BlaB, matt, R. 3136000, W. 126000.
2. VIII. Sehr blaB, matt. R. 2696000, W. 105000. Pseudo. 53 Proz.,
Gr. Ly. 46 Proz., Kl. Ly. 1 Proz., Pseudo, zicmlich reif.
7. VIII. Exitus, 1220 g. Starke Abmagerung.
Sektion: Im Peritonealraum reichlich klare Fliissigkeit und gclbe
fettartige bis kiisige Massen. Peritoneum mit reiehlichen ca. 1 mm
messenden Knotchen und grbBeren, mcist gestielten Knoten von 2—4 mm
Dm. Einige gleiehe Knoten liegen frei im Exsudat, Mesenterium stark
verdiekt und retrahiert, vollig mit Knotchen besetzt. Leber: an der Ober-
fliiehe sehr reiehliche Knotchen meist unter 1 mm Dm., dazwiselien netz-
fomiige, weiBliche Zeichnung. Rander verdiekt, allseitig fest mit der Um-
gebnng verwaehsen durch sehr derbes hyalines Gewebe. Schnittflache
braunrot mit reiclilichen Knotchen. Milz ca. 2X1?5XV- cm, hellrot mit
reiehlichen Knotchen an der verdiekten Kapsel. Auf Schnitt wenige
kleine Knotchen. Pcrikard verdiekt, ohne Knotchen. Darmwand durch
subserose Knotchen stark verdiekt, Schleimhaut blaB, B. Knochenmark
dunkelbraunrot, sehr reichlich und sehr konsistent bis unten. Keine
Knotchen.
B 47. 1800 g.
30. VI. R. 3 752 (XX.), W. 21 (KX).
4. VII. Intraperitoneale Impfung wie B 16.
20. VII. Ansehcinend gesund. R. 2960000, W. 24000.
26. VII. R. 2768000, W. 18 (XX).
2. VIII. Gesund. R. 3 432000, W. 14 000.
8. VIII. Gesund. R. 3232000, W. 71 000.
24. VIII. R. 3 704 000, W. 16000. Pseudo. 24,5 Proz,, Gr. Ly. 39 Proz.,
Kl. Ly. 26,75 Proz., Eo. 5,25 Proz., Mastz. 1,5 Proz.
8. IX. R. normale Menge Gr. W. 18000. Das Huhn wird getotet,
Es zeigt sehr geringe Abmagerung.
Sektion: Leber und Milz nicht vergroBert mit einigen sparliehen
Tuberkelknotchen an der Oberflache. Bauchdecken an der Ein.stichst4.41e
stark verhartet und verdiekt. Am Peritoneum und Herzbeutel finden
sich wenige Tuberkelknotchen.
B 54. 2020 g.
23. VII. R. 3 472000, W. 30 (XX).
4. VIII. Intravenikse Impfung mit 1 r>0 Oese Tuberkelbacillen aus
B 29 und Bt^ginn der Arsentherapie (niiluuvs darul>er sielie }). 561).
9. VIII. R. 291200O, W. 20UK).
16. VIII. R. 2296(H'K), W. 10UH), Pseudo. 24 Proz., Gr. Ly. 18 Proz..
Kl. Ly. 53 Proz., Eo. 2 Proz., Mastz. 3 Proz.
23. VIII. Gesund aussehend. R. 2632000, W. 5OUU0, Pseudo. 30,3
Proz., Gr. Ly. 43,3 Proz., Kl. Ly. 22 Proz., Eo. 0,6 Proz., Mastz. 4,6 Proz.
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Pseudo, zum Toil mit sehlecht farbbarem Kern, s el ten mit basophiler
Kornelung.
29. VIII. Etwas blab. R. 2381000, W. lb 1000, Pseudo. 39,75 Proz.,
Gr. Ly. 58.5 Proz., Kl. Ly. 1,5 Proz., Mastz. 0,25 Proz.
3. IX. Blab. R. 1 73b UK), W. 307 OK).
8. IX. Sehr matt, Kainm rot. R. 2128000. W. 327000, Pseudo.
42.5 Proz., Gr. Lv. 57.25 Proz., Eo. 0,25 Proz. Pseudo, selir unreif zum
Teil mit ziemlieh groben roten Kugeln. Rote sehr abnorm.
9. IX. Exitus, 1340 g.
Sektion: Miibige Abmagerung, unter der Haut und im Abdomen
noeh ziemlieh reiehlieh Fett. Ueber Leber und Magen Verwaehsungen
mit Peritoneum parietale. Auberdein finden sieh liber der Leber derbe
gelbbraune Massen und einige gestielte Knbtehen von ea. 3 nun Dm. Am
Mesenterium und in den Luftsiicken hiingen einige kleinere Knotehen.
Leber 109 g, reehter Lappen braunrot ohne deutliehe Zeiehuung,
nur stellenweise unter d(‘n Rippenabdriieken blasser. An der Oberfliiehe
finden sieh wenige gGbliehe s(*hr un regel miibige Herde von 1—2 mm
Dm. und ein grober, anseheinend aus solchen entstandener von ea. 1 cm
Liinge und 1—3 mm Breite. Linker Lappen zum Teil mit unregelmabigen,
oft strahlenfbrmigen gelbgrauen Fleeken und Netzen iibersiit; grobe Teile
bestehen vbllig aus zusammenhiingenden, gelben, etwas eingesunkenen
Fleeken, deren grobter ea. 5 cm lang und 1 cm breit ist. Diese groben
Fleeken sind seharf begrenzt und haben meist eine sehmale dunkelrote
Randzone. Auf Sehnitt findet sieh ein iihnliehes, sehr derbes gelbweibes,
oft aueh rosafarbenes (lewebe alnveehselnd mit braunrot cun weiehem Leber-
gewebe. Von den groben gelben Herden liibt sieh wenig oder kein Saft
abstreiehen, Typisehe Tuberkelknbtehen finden sieh nirgends. Milz
3.5 X 2,5 X ^ cm (9 g}, hellrot, weieh, auf Sehnitt von derselben Farbe
mit alh‘rfeinsten transparenten Piinktehen, welehe anseheinend Follikeln
cntspreehen. Knoehenmark sehr reiehlieh graurot, feueht, weieh. Ovarium
atrophiseh, iibrige Organe blab, sonst o. B.
Mikroskopiseh : K noehen mark: Im Uebersiehtsbilde nehmen die
venbsen Riiume den Hauptplatz ein; zwi.sehen ihnen findet sieh. stellen-
weise fast ebenso breit, mveloides Gewebe. Fettmark ist sozusagen ganz
versehwunden. Die Zellen sind auberhalb und besonders aueh innerhalb
der Gefiibc so dielit gelagert, dab ihre Form kaum zu erkennen ist. Die
venbsen Riiume sind zum Teil fast ganz mit groben runden Zellen erfiillt ;
diese zeigen einen groben bliischonfbrmigen ungefahr runden Kern mit
ein bis zwei Kernkorperehen. Ihr Protoplasmasaum ist zum Teil ziemlieh
breit. Von ihnen finden sieh Uebergiinge zu Zellen mit kleineren runden
dunkleren Kernen und etwas sehmalerem, mit Hamaiaun-Eosin blau ge-
fiirbtem Plasmasaum. Die lctzteren Zellen liegen meist mehr gegen die
Mitte lies Gefiibes; nur selten sind dann im Zentrum noeh deutliehe
hiimoglobinhaltigc Erythroeyten zu finden, zum Teil mit genau demsell>en
runden, zum Teil mit noeh dunklerem ovalen Kern. Auberhalb der Ge-
fabe finden wir meist wieder diesel bon groben Zellen, dazwisehen aueh
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595
ganze Flachen von granulierten Zellen; doch sind diese in der Minderzahl.
Neben diesen Zellen sieht man selten noch einige kleine Lymphocyten und
Formen, welche den Plasmazellen gleichen. Mitosen finden sich inner-
und auBerhalb der GefaBe ungefahr in gleicher Zahl in den groBen
Zellen, daneben kommen auch solche in den Pseudoeosinophilen vor. Im
Gewebe regellos verteilt liegen einige kleine Epitheloidtuberkel ohne Ver-
kasung.
Leber: Die Leber ist an den meisten untersuchten Stellen fast
vollig angefiillt mit dichtliegenden kleinen Tuberkelknotchen, welche fast
nur aus groBen Epitheloidzellen und seltenen Riesenzellen bestehen; zum
kleineren Teile zeigen sie zentrale Nekrosen. Zwischen ihnen finden sich
sparliche Reste von Lebergewebe, dessen Zellen meist intakt und dessen
GefaBe erweitert sind. Von den Knoten sind sie meist nur durch eine
Oder mehrere Schichten von spindligen Zellen, nie durch einen eigentlichen
Lymphocytensaum getrennt. In diesen Gewebsresten finden sich nun, be-
sonders in der Umgebung von groBeren Gefafien, Zellinfiltrate, bestehend
aus groBen rundlichen oder polyedrischen Zellen mit hellen, rundlichen,
blaschenformigen Kernen und zicmlich haufigen Mitosen. Zwischen ihnen
liegen ahnliche aber etwas kleinere Zellen, die mit ihrem exzentrischen
Kern sehr an menschliche Plasmazellen erinnern. Die Radspeichenstruktur
und die Basophilie des Protoplasmas ist aber nicht so deutlich ausge-
driickt wie bei diesen. AuBerdem finden sich zicmlich sparliche granu-
lierte Zellen. Es handelt sich hier um myeloides Gewebe.
Nicht zu verwechseln sind diese zellreichen Herde mit anderen meist
groBeren Flachen von gefaBarmen Granulationsgewebe, das sich zunachst
durch seine groBen und polymorphen epitheloiden Zellen und Ziige von
zicmlich zellarmen Bindegewebe auszeichnet. Dazwischen liegen bald
haufige, bald seltene Lymphocyten, meist mit stark pyknotischem und
zerfallendem Kern. Im Innem dieses Granulationsgewebes finden sich
einzelne und konfluierende Tuberkel mit groBen Nekrosen sowie ganz
nekrotische Flachen. Diese nekrotischen Partien unterscheiden sich vom
menschlichen „Kase“ meist durch ihre deutliche, faserige und schollige
Zeichnung und durch haufige, gleichmiiBige, kleinste Kemreste. Nach
auBen sind sie oft, aber nicht immer, durch eine Zone von radiiirge-
stellten, besonders groBen und unregelmaBigen epitheloiden Zellen und
unregelmaBigen Riesenzellen umgeben. Am Rande dieses Granulations¬
gewebes finden sich iibriges zwischen seinen feinen Auslaufern oft Reste
von groBen hellen Leberzellen mit zum Teil zerfallenden Kernen, so daB
nicht deutlich zu erkennen ist, ob die groBen Nekrosen hauptsaehlieh
durch zugrunde gegangenes Lebergewebe oder Granulationsgewebe bedingt
sind. Jedenfalls finden sich in ihnen bei Tuberkelbacillenfarbung stellen-
weise groBe Haufen von Bacillen. Um etwaige tuberkulose Infarkte,
welche im Begriffe waren, sich durch Granulationsgewebe zu ersctzen,
kann es sich wegen der Form der Herde nicht handeln.
Milz: Die Milz ist von kleinsten Tuberkelknotchen so erfiillt, daB
nur kleine Reste von Pulpa dazwischen erhalten sind. Diese enthalten
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reichliche Erythrocyten und Lymphoidzellen sowie wenige Polynukleare.
Kleine Lymphoeyten sind ziemlich spiirlich. Mitosen kommen vor, sind
aber lange nieht so zahlreieh wie im Knochenmark. Aulierdem finden
sirh Zellen mit sclir groOen, hellen, runden odor eingebuchteten Kernen
und reichlieh hellem Protoplasma, welche Kernteile sowie ganze Erythro¬
cyten und Pseudoeosinophile in sirh aufgenommen haben.
B 55. 1500 g.
27. VII. R. 3 040 000, W. 29 (KK), Pseudo. 34,6 Proz., Gr. Ly. 13,3 Proz.,
Kl. Ly. 48,3 Proz., Eo. 2,3 Proz., Mastz. 1,3 Proz.
4. VIII. Infektion und Arsenhehandlung wie B >4.
9. VIII. R, 3 001 000, W. 12(xK).
10. VIII. R. 3010 000, W. 39 000, Pseudo. 30 Proz., Gr. Ly. 22 Proz.
Kb Ly, 30 Proz., Eo. 1,0 Proz., Mastz. 1,3 Proz.
22. VIII. Anseheinend gesund. R. 2 SOS 000, W. 59 0(10, Pseudo.
80,5 Proz., Myelo. 7 Proz., (Jr. Ly. 7,5 Proz., Kb Ly. 4,25 Proz., Eo.
0,25 Proz., Mastz. 0.5 Proz. Pseudo, oft mit wenig differenzierten Kernen
und basophilen Granulationen.
29. VIII. Sehr blalb R. 1370000, W. 20 000.
3. IX. R. 9S1 000, W. 18(KX).
7. IX. Exitus. S20 g.
Sektion: Aeuberste Abmagerung. Ueber der Leber liegt ein zahes
Blutkoagulum von ea. 5 cm Durehmesser und 0.5 cm l)icke. I nter der
Leber iin Bereiche des rechtcn Luftsaekes reicli 1 i<vlie Sehimmelrasen, von
SteeknadclkopfgrbOe bis 1,5 cm Durehmesser haltcnd, die kleinen weitb
die groOen in der Mitte hcllgnin. Diese Rasen sitzen auf der reehten
Niere, dem Mesenterium und einem Stuck Diinndarm, sowie an der
Bauehwand. Das Gcwebe darunter ist hyperiimiseh und leieht gesehwellt,
mit geringem Eiterl>elag. Feber einem Darmstuek sitzt ein 0,5 com
messender Rasen auf vorspringemlem Grunde, der in der Mitte eine ge-
schwiirartige Einsenkung und wallartig erhobene Riinder zeigt. Mesenterium
an der befallcnen Stelle stark verdiekt. Leber 02 g, braunrot, darauf ein
rundlieher ea. 1 cm haltender Fleck, zusammengesetzt aus gelbliehen,
stecknadclkopfgroOcn, nieht vorspringenden Herden. Auf Sebnitt spring!
derselbe Fleck ea. 1 cm ins Inn ere vor, und in seiner Nahe finden si eh
kleinere iibnliehe Knbtehcn. Dazwischen hvperamisehes Gewebe. Sonst
Leber ohne B., olme Tuberkelknotehen. Milz klein, 2,0Xb3Xb2 cm,
hellrot, auf Sehnitt braunlieh, troc-ken, mit kaum erkennbaren transparenten
weiOliehen Stellen. Darm ini Jnneren blalb Duodenum mit wenigeu
alien Hiimorrhagicn. Dem Gesehwiir an der Serosa entsprieht innen eine
stark hvpcriimische, zirkumskripte, leieht vorspringende Stelle, welche in
der Mitte anseheinend ebenfalls in Zerfall begriffen ist. Knochenmark
liberal! dunkclrot, ziemlich konsistent. Brustmnskulatur an der Stelle der
Injektionen mit einigen Nekrosen. Die iibrigen Organe ohne B.
Mikroskopiseh. Knochenmark: Die GefiiOe sind nieht er-
weitert, ihr Inhalt arm an Zellen mit wenig entwiekelten Erythroevten
und ganz sparliehen groben Lymphoeyten. Aueh das Zwisehengewebe
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ist zellarm, meist mit kleinen Lymphocyten und plasmazellahnlichen
Formen, dazwischen einige Pseudoeosinophile. Im Gewebe noch ziemlich
viele Fettliicken und einige kleinste Tuberkelknotchen.
Leber: Reichliche kleinste Tuberkelknotchen und Hyperamie. AuBer-
dem ganz kleine perivaskulare Infiltrate.
In der Umgebung der Nierenkapsel und an anderen Stellen
finden sich reichliche Schimmelpilzfaden in einem odematosen, ziemlich
zellarraen Granulationsgewebe.
Der Schimmelpilz erweist sich nach frischen Praparaten und Kulturcn
als Aspergillus glaucus.
B 66. 1620 g.
27. VII. R. 2 552000, W. 26 000, Pseudo. 25,3 Proz., Gr. Ly. 15 Proz.,
Kl. Ly. 37,6 Proz., Eo. 14,3 Proz., Mastz. 4,6 Proz. Auffallend viele jungc,
zum Teil basophile Erythrocyten.
4. VIII. Infektion und Behandlung wie B 54.
9. VIII. R. 2724000, W. 38000.
16. VUI. R. 2 568 000, W. 31 000, Pseudo. 40 Proz., Gr. Ly. 24,5 Proz.,
Kl. Ly. 27,5 Proz., Eo. 3,5 Proz., Mastz. 4,5 Proz.
23. VIII. R. 2 408 000, W. 103 000, Pseudo. 51,6 Proz., Gr. Ly. 38 Proz.,
Myelo. 2 Proz., Kl. Ly. 6,3 Proz., Eo. 1,6 Proz., Mastz. 0,3 Proz. Pseudo,
sehr unreif, hie und da Plasma und Granulationen basophil. Kerne oft
wenig gebuchtet, bei Giemsa-Farbung zum Teil nur am Rande einige ge-
fiirbte Stellen sichtbar.
29. VIII. Etwas blaB. R. 1832 000, W. 105 000.
3. IX. BlaB. R. 1 512 000, W. 259 000, Pseudo. 46,2 Proz., Gr. Ly.
51,2 Proz., Myelo. 1,4 Proz., Kl. Ly. 1,2 Proz. Erythrocyten sehr abnorm,
oft fast wie kleine Lymphocyten.
5. IX. Exitus. 940 g.
Sektion: Aeufierste Abmagerung. Leber 90 g, braunrot, makro-
skopisch ohne Tuberkelknotchen, auf Schnitt mit kleinen unregelmafiigen
gelblichen Flecken, besonders um die GefaBe. Milz 3,5 X 2 X 2 cm mit
reichlichen stecknadelkopfgroBen Herden unter der Kapsel und auf Schnitt.
Knochenmark rot, sehr sparlieh.
Mikroskopisch. Leber: Es herrscht starke Hyperamie, so daB
die Leberzellen oft nur als kleinste Inseln zwisehen den erweiterten
Kapillaren bleiben. In der Leber diffus verteilt finden wir ziemlich
reichliche kleine Epitheloidtuberkel ohne Nekrosen und meist ganz ohne
Lymphoeytensaum. Von diesen Tuberkeln anscheinend vollig unabhiingig
bestehen, besonders in der Umgebung grdBerer GefaBe, starke Ansamm-
lung meist granulierter Zellen. Diese zeigen fast immer runde helle
Kerne, analog den Myelocyten, und ziemlich viele Mitosen. Zwisehen
diesen Zellen finden sich aber immer auch groBe ungranulierte mit noch
groBerem helleren Kern und ebenfalls mit ziemlich reichlichen Mitosen.
Solche Herde zeigen oft eine kompakte Masse von 100 ji, seltener bis zu
400 jjl, und senden dann oft noch unregelmiiBige stralilen- und netzformige
Zeitschr. f. lmmuniWtsforschunir. 0ri&. Bd. XIV, 41
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Ausliiufer zwisehen das Lebergewebe. Innerhalb der Gefiiile ist von Blut-
bildung nirhts zu sehen.
K n o e h e n m a r k : Wie B 58. #
B 57. 1820 g.
27. VII. It. 2 702000, W. 20OU).
4. VIII. Infektion uud Behandlung wie B 54.
0. VIII. It. 5 201000, W. 25 000.
10. VIII. R. 2 550 (XX), W. 51 000, Pseudo. 24,6 Proz., Gr. Ly.
12,0 Proz., Kl. Ly. 5S,0 Proz., Eo. 2,5 Proz., Mastz. 2,5 Proz.
25. VIII. It. 1 S04(.H), W. 02(KK), Pseudo. 47,0 Proz., Gr. Ly. 57 Proz.,
Myelo. 1,5 Proz., Kl. Ly. 15,5 Proz., Mastz. 0,0 Proz. Pseudo, zuni Toil
selir unreif.
27. VIII. Selir matt, Blut ganz wiisserig. It. 1020 0(0, W. 146 QiX),
unreife Pseudo. 70 Proz., Gr. Lv. IS Proz., Myelo. 2,5 Proz., Kl. Ly.
0,5 Proz. m
51. VIII. It. 1 101 (KK), W. 77 000, unreife Pseudo. 85,0 Proz., Myelo.
0 Proz., Gr. Ly. 10 Proz., Mastz. 0,-4 Proz., Kl. Ly. nioht zu finden. Die
Pseudo, sind groilenteils fast wie Myeloeyten mit hellem, wenig gebuchtetem
Kern.
2. IX. Exitus. 12(X) g.
Sektion: Starke Abmagerung. Leber IX) g, braunrot, an der Ober-
fliiehe in it Venensternen und weililiehen unregelmiilligen und unscharfen
Fleeken bis zu 1 cm Durehmesser. Auf Sohnitt noch grbllere transparente
weiOliehe Horde bis 0,5 X - c,n niessend, oft mit hyperiimiseher Itand-
zone. Sonst ist das Gewebe braunrot, hyperamiseh. Keine Tuberkel-
knotehen zu erkennen. Milz 2,5 X 15 X ^ cm, hellrot, mit undeutliehen
feinen weilien Herden unter der Kapsel. Auf Sehnitt troekenes hell rotes
Gewebe mit vielen kleinsten, nioht vorspringenden transparenten Herden.
Knoehenmark hellrot, reielilieh, gallertig.
M i k r o s k op i s e h. Knoehenmark: Die venbsen Ranine sind
wenig erweitert und enthalten moist grolle Lymphocyten und junge Rote
in iinibiger Zahl. Aullerhalb der Gefiibe ist die Zellarmut selir auffallend.
In einer bdematdsen (irundsuhstanz finden sieh grotte Lymphocyten und
Myeloeyten, besonders erstere mit vielen Mitosen. Daneben relativ vide
aullerordentlich kleine Zellen mit runden odcr gebuehteten Kernen. Da-
neben plasmazelliUinliohe Eormen und Zellen mit deutlich zerfallendem
Kern. Die Liieken des Fettgewebes sind spiirlieh. Ini Gewebe einige
zum Teil verkiiste Tuberkel.
Leber: Mit iiuberst kleinen zahlreiehen Tuberkelknotehen ohne
Kiise, welelu* fast alle dureh einen Streifen von kernarmem Bindegowebe
seharf abgcgrenzt sind. Zwisehen diesen Knotchen findet sieh fast nur
ein Granulationsgewebe mit groben und kleinen Lymphocyten und Leuko-
cyten, darin selir spiirliehe Reste von Lcbersubstanz. Oft ist in groiVn
Fliiehen keine Spur von dieser zu sehen. An anderen Stellen finden sirh
ausgedehnte Part ion von sehr gefitll- und zellarmem Granulationsgewebe
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599
mit reichlicher hyaliner Grundsubstanz. Darin sind noch Reste von
groben GefaSen erhalten. Am Rande dieser Herde bestehen reichliche
frische und im Inneren einige alte Blutungen. Keine Blutbildungsherde.
B 68. 1620 g.
1. VII. R. 3 512000, W. 24 000. In den Praparaten mehrcre Eo.
mit gelben Granulationen (May-Griinwald). Ein kleiner Lymphocyt
mit normalem ninden Kern zeigt im Plasma, das an einer Seite ziemlich
reichlich ist, einige hellrote Granula.
4. VIII. Infektion wie B 54 (Arsenbehandlung erst spa ter).
9. VIII. R. 3 840 000, W. 17 000.
17. VIII. R. 3 152000, W. 35 000, Pseudo. 28,5 Proz., Gr. Ly. 20 Proz.,
Kl. Ly. 34,5 Proz., Eo. 12 Proz., Mastz. 5 Proz. Beginn der Arsenbehand¬
lung (naheres s. p. 561).
22. VDI. R. 2 872 000, W. 33 000, Pseudo. 33 Proz., Gr. Ly. 30,6 Proz.,
Kl. Ly. 31,6 Proz., Eo. 3 Proz., Mastz. 1,6 Proz.
27. VIII. R. 2 472 000, W. 71 000, Pseudo. 72,3 Proz., Myeloc. 2 Proz.,
Gr. Ly. 20,3 Proz., Kl. Ly. 5 Proz., Mastz. 0,3 Proz. Pseudo, sehx unreif,
Kerne wenig farbbar.
31. VIII. Blafi. R. 2 352 000, W. 119 000, Pseudo. 77,3 Proz.,
Myeloc. 3 Proz., Gr. Ly. 15 Proz., Kl. Ly. 4,3 Proz., Eo. 0,3 Proz.
3. IX. Bla6. R. 1928 000, W. 18 000.
7. IX. Moribund. Blut aus der Fliigelvene. R. 1920000, Gr. W.
17 000, Pseudo. 34 Proz., Myeloc. 18 Proz., Gr. Ly. 40 Proz., Kl. Ly. 8 Proz.,
Pseudo, meist mit spiirliehen, zum Teil basophilen Granulationen. Wird
moribund getbtet.
Sektion: 950 g, aufierste Abmagening. In der Brustmuskulatur,
an der Stelle der Arseninjektioncn kleine Nekrosen. Leber 82 g, braunrot,
ohne Zeichnung. Milz 3,2 X 2 X 2 cm, hellrot, am einen Pol ein leicht
vorspringender Bezirk von 1,5 cm Durchmesser, gelblich, in der Mitte
dunkelrot. Auf Schnitt zeigt sieh an einer anderen Stelle ein alter derber
BluterguB, welcher fast ein Drittel der Milz einnimmt. Knochenmark
rot, ziemlich feucht.
Mikroskopiseh. Knochenmark: GefiiBe mabig erweitert,
stellenweise fast ganz mit Lymphoidzellen, stellenweise in der Peripherie
mit diesen Zellen, im Zentrum mit Erythrocyten augefiillt. Zwischengewebe
breit, mit geronnener odematoser Grundsubstanz und spiirliehen Zellen,
welche zum Teil groBen Lymphocyten entspreehen. Daneben hauptsiiehlieh
ziemlich typische Plasmazellen und kleine Lymphocyten, sowie iihnliehe
Zellen mit zerfallendem Kern. Granulierte Zellen fehlen fast vollkoinmen.
Die kleinen Lymphocyten sind am hiiufigsten in der Umgebung einiger
Tuberkelknotchen.
Leber: Sehr reichliche, auBerst kleine niiliare Tuberkel ohne Ver-
kiisung, dazwischen miiBige Hyperiimie und ziemlich groBe perivaskulare
Infiltrate fast ohne granulierte Zellen.
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600
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B 59. 1120 g.
1. VIII. R. 3 088 000, VV. 21 (XX), Pseudo. 24 Proz, Gr. Ly. 20 Proz.,
Kl. Ly. 26 Proz., Eo. 22 Proz., Mastz. 8 Proz. Ini Priiparate zeigen die
Eo. oft gelhe Granula und fast runde Kerne.
4. VIII. Infektion wie B 54.
9. VIII. R. 3 112 000, W. 37 000.
17. VIII. R. 2 488 00(3, W. 129 000, Pseudo. 35 Proz., Gr. Ly. 63 Proz.,
Kl. Ly. 2 Proz. Pseudo, sehr unreif, etwa l / l von ihnen konnte nach
dem wenig gebuchteten Kern auch Myelocvten genannt werden. Beginn
der Arseninjektion.
22. VIII. R. 2 576 000, W. 272 000, Pseudo. 24 Proz., Myeloe. 1 Proz,
Gr. Ly. 74 Proz., Kl. Ly. 1 Proz. Pseudo, sehr unreif, mit wenig ge-
buchtetem Kern, zum Teil mit basophilen Granulationen und basophilem
Plasma.
26. VIII. Ex it us. 1200 g.
Sektion: Miillige Abmagerung. Brust- und Bauehhdhle angefullt
mit klarer, etwas griinlicher Fliissigkeit und dieken Eiterklumpen von
ca. 1 X - X 0,5 cm Durchmesser, wie Fett aussehend. Serose Haute ver-
dickt ohne Kndtehen. Im reehten abdominalen Luftsack etwas Eiter,
Wand verdiekt und getriibt. Leber sehr groS, 122 g, gelbbraun mit
feinsten, unscharf begrenzten, oft konfluierenden gelbweiflen Striehen und
eben solehen Fleeken von 2—4 mm Durehmesser an Oberflaehe und
Schnittfliiche. Milz 3,5 X 2,3 X 2 cm, hellrot mit feinen weiblicbeu, un¬
scharf begrenzten Piinktchen unter der Kapsel. Auf Schnitt Pulpa
fleisehrot, zicmlich derb, keine Zeichnung, keine Kndtehen. Herz groik
im Perikard etwas klare Fliissigkeit. In der Nahe der Spitze fiber dem
linken Ventrikel ein narbenahnlieher gelber, sehr scharf begrenzter Herd
von ca. 1 X 0,3 cm, ca. 2 mm in die Tiefe reichend; in der Mitte ein
feinster roter Fleck. Im Septum ebenfalls gelbliche Stellen. Knochen-
mark gelbrot, zicmlich konsistent, Ovarium atrophisch.
Mikroskopisch. Knochenmark ungefahr wie B 54.
Leber: Reichliehe kleine miliare Tuberkel. Sehr starke Hyperiimie.
Perivaskuliire Infiltrate zicmlich grott, mit granulierten und ungranulierten
Zelien.
B 60. 1750 g.
3. VIII. R. 3 704000, W. 12 (XX).
4. VIII. Infektion wie B 54.
10. VIII. R. 3528(XX), W. 320(X).
17. VIII. R. 2824000, W. 70000, Pseudo. 54,25 Proz., Gr. Ly. 35.75
Proz., Myeloe. 1 Proz., Eo. 2 Proz., Mastz. 0,5 Proz., Kl. Ly. 6,5 Proz.
22. VIII. R. 3 128000, W. 101 000, Pseudo. 61,3 Proz., Gr. Ly. 32,6 Proz.,
Myeloe. 4 Proz., Eo. 0,6 Proz., Mastz. 0,6 Proz., Kl. Ly. 0,6 Proz.
27. VIII. Gesund aussehend. R. 2616000, Gr. W. 100000.
31. VIII. R. 3152000, W. 98000, Pseudo. 73 Proz., Myeloe. 1,6 Proz.
Gr. Ly. 23,6 Proz., Kl. Ly. 1,6 Proz. Pseudo, sehr unreif.
2. IX. Ex it us. 1200 g.
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601
Sektion: Starke Abmagerung. Leber sehr groB, an der Ober-
flache reichliche Venensterne, zum Teil zu roten Netzen zusammenfliefiend.
Auf Schnitt Gewebe weich, braungriin ohne deutliche Zeichnung. Nirgends
Knotchen. Milz 3,2cm, hellrot, auf Schnitt konsistent, trocken,
Fleisch rot mit feinsten transparenten Herden (Follikel?). Herz o. B.
Lunge hyperamisch besonders rechts mit einzelnen eitrigen Bronchien.
Am Mesenterium und zum Teil auch frei im Peritonealraum finden sich
grofie harte Knoten von 1—4 cm Dm. Sie sind zum Teil bandformig
zum Teil flachenformig, an vielen Stellen verwachsen. Die Knoten sind
ungefahr kugelig, an der Oberfliiche hockerig, gelbweiB. Auf Schnitt zeigen
sie eine harte gelbweiBe etwas brocklige Substanz und zum Teil konzentrische
Schichtung. Die Schnittflache ist sehr trocken, die Konsistenz wie bei
einem harten Myomknoten. AuBerdem hiingen am Mesenterium und be¬
sonders am Ansatze des Darmes, seltener an andern Stellen einige lang-
gestielte Knotchen von 1—2 mm Dm. Ovarium klein, die groBten Eier
ca. 3 mm groB. Eileiter hyperamisch, im Innern mit Eiter und zwei
ca. 1,5 cm groBen, sowie einigen kleineren Knoten gleich denen im Peri-
tonealraume.
Mikroskopisch. Knochenmark: Das Fettmark ist noch relativ
reichlich. GefiiBe miiBig enveitert mit vielen Lymphoidzellen und wenig
Erythrocyten. Im Zwischengewebe reichliche Lymphoidzellen und granu-
lierte Zellen mit starkem Kernzerfall.
Leber wie B 59.
Milz mit klcinsten Epitheloidtubcrkeln vollig erfiillt, dazwischen
selten ein groBerer verkaster Tuberkel. Das geringe restierende Gewebe
besteht fast nur aus kleinen Lymphocyten und plasm azell-ahnliehen
Zellen, dazwischen enge Kapillaren. — Die oben beschriebenen Knoten
bestehen fast nur aus sehr reichlichen diehtgelagerten Zellen — kein Ge¬
webe —, die durch sparliche konzentrisch geschichtete fibrinartige Massen
verklebt sind. Die Zellen sind groB, rund mit groBen hellen, zum Teil
auch stark gebuchteten und zerfallenden Kernen. Sie zeigen keine Gra-
nulationen. In einigen Particn, die aber im Verhiiltnis zum Tumor sehr
gering sind, sind nur noch Kerntriimmer zu erkennen.
B 61. 1300 g.
1. VIII. R. 3010000, W. 20 000, Pseudo. 23 Proz., Gr. Ly. 11 Proz.,
Kl. Ly. 53 Proz., Eo. 6 Proz., Mastz. 7 Proz.
4. VIII. Infektion wie B 54.
10. VIII. R. 2864000, W. 25000.
17. VIII. R. 2752000, W. 43000, Pseudo. 41 Proz., Gr. Ly. 12 Proz.,
Kl. Ly. 13,3 Proz., Eo. 2,3 Proz., Mastz. 1,3 Proz. Beginn der Arsen-
injektion.
22. VIII. Lebhaft, etwas blass. R. 194H.XK1, W. 101 (XX), Pseudo.
76,5 Proz., Gr. Ly. 18,25 Proz., Kl. Ly. 4,25 Proz., Eo. 0,25 Proz., Mastz.
0,75 Proz. Pseudo, gut entwickelt.
27. Vm. Exitus. 1000 g.
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602
Jean Louis Burckhardt,
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Sektion: Miibige Abmagerung. Brustmuskulatur etwas blutig in-
filtriert mit einigen ansrheinend nekrotisehen Stellen. Bauehhohle rait
ca. 10 com diinner blutiger Fltissigkrit. Ix*ber 72 g , griinlich ohne Zeich-
nung. Schnitt fliiehe blutarm, ohne Knotchon. An der Oberflaehe cine
blascnartig abgchobene Stelle von ea. 1 cm I)m. Milz 2,7) X X
hell rot mit undent lichen weiblichen Flecken. Auf Schnitt Gewebe gelb-
rot, mittelweich ohne Zeichnung auber wenigen undeutlich vorspringeu-
den weiblichen Knotehen. Perikard stark durehblutet, darln wenig klare
serose Fliissigkeit. Herz klein, o. B. Knoehenmark gallertig, gelbrot
bis gelb.
B 02. Id7,0 g.
d. VIII. R. d rr>s000, W., 21000.
4. VIII. [nfcktion wie B 51.
10. vill. K. d072(HK), w. 2:umn.
17. VIII. R. ddGSnon, w. 27 OU), Pseudo. d7,d Pro/.. Or. Lv. 22,3
Proz., Kl. Lv. dl,d Pro/., Ko. 5 Pro/., Mast/. l,d Pro/.
2d. VIII. R. 2 720000, W. 27(0), Pseudo. dO Pro/., (Jr. Ly. 27>.d Proz..
Kl. Lv. dl,d Proz., Ko. 4,d Pro/., Mast/, d Proz.
dO. VIII. R. 2S72000, W. GOOno.
G. IX. W. 1 OS000, Pseudo, 57,5 Proz., Gr. Ly. dd,25 Pro/., Kl. Lv.
8 Proz., Ko. 0,75 Pro/., Mast/. 0,5. Pseudo, unreif, Kerne sehkrht
fiirbbar.
10. IX. Blab, lebhaft. R. 2 IOGOOO, W. d07)(XX).
Id. IX. Kxitus.
Sektion. Starke Abmagerung. Leber 00 g, gelbgraurot ; an der
Oberflaehe lassen sieh stellenweise feinste gelbliche Partien mit roter netz-
formiger Umgebung erkennen, im grobten Toil sind die gelblichen Partien
zu feiuen Netzen verbunden mit roten Zentren. Auf Schnitt Farbe gelb-
braun, keine deutliehe Zeichnung. Mil/ 2,8 X K8 X 1em (7>,7> g) hellrot;
auf Schnitt Konsistenz zicndich fi st, Farbe hellrot, keine Knotehen. Herz
auffallend blab, sonst o. B. Ovarium atrophiseh, Knoehenmark sehr
reichlich, zicndich konsistcnt, hellrot bis graurot, in den unteren Partien
Zlim Teil gelblieh.
Mik rosk o p i s e h. K n o e h e n m ark: Venose Riiume sehr weit, fast
nur mit gmben Lymphoeyten erfullt, dazwisehen sehr zahlreiehes Gewebe
mit reiehliehen groben Lymphoeyten und spiirlichen granulierten moist
rundkernigen Zellen. Reichliche Mitosen.
B 63. 1420 g.
4. V11T. R. d lOOOoO, W. 27) (.XX), I nfcktion wie B. 54.
10. VIII. R. d404 000, W. 44 (XX).
17. VIII. R. 2GOG (XX), W. 114 (MX), Pseudo. 55,25 Proz., Gr. Ly. 37
Proz., Kl. Lv. 4,5 Pro/., Myeloc. 2 Proz., Mastz. 1,25 Proz. Pseudo, sehr
unreif mit wenig differenziertem Kern.
2d. VIII. R. lG(XKHX), W. 8000, Pseudo. GG Proz., Gr. Ly. 21 Proz.,
Kl. Ly. 11 Proz., Mastz. 2 Proz. Pseudo, ganz ohne Stabehen, nur mit
kaum farbbaren mittelgroben Granulationen.
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Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose etc.
603
27. VTLI. Sehr matt, blaB, fast kein Blut. R. 1890000, W. 10000.
29. VIII. Exitus. 820 g.
Sektion: Starke Abmagenmg. Leber 65 g, braunrot ohne deut-
liehe Zeichnung; an einer ca. 2 qcm messenden Stelle an der Unterflache
diffuse Hamorrhagien unter der Kapsel. An Oberflaehe und Schnittflache
mehrere gclbe scharf abgegrenzte 2—4 mm messende Herde. Keine miliaren
Knotchen zu erkennen. Milz 2.5Xlv*Xl>2 cm braunrot, auf Schnitt
trocken, zah, braunlich mit sehr reichlichen kaum sichtbaren glasigen
Flecken. Knochenmark reichlich, gelbrot bis gelb.
B 64. 1700 g.
4. VIII. R. 3 672 000, W. 9000. Infektion wie B. 54.
10. VIII. R. 3192000, W. 13000.
16. VIII. R. 3456000, W. 102000, Pseudo. 72 Proz., Gr. Ly. 21,5
Proz., Kl. Ly. 5,5 Proz., Mastz. 1 Proz. Pseudo, sehr unreif, basophiles
Plasma, wenig gebuchtete Kerne, zum Teil gelbe bei Giemsafarbung blau-
rote Granida.
20. Vffl. Exitus. 1430.
Sektion: Geringe Abmagerung. Im Peritonealraum einige eitrige
Flocken. Leber 105 g, gelbbraun mit feinsten kaum sichtbaren weiBlichen
Piinktchen dicht besiit. Am scharfen Rande ein ca. 1 qcm haltender
gelblieher scharf abgegrenztcr nekrotischer Herd, an einer Seite von einer
schmalen roten Zone begrenzt. Auf Schnitt diesel ben feinsten Punktchen.
Konsistenz weich. Milz 2,5 X 1,3 cm groB, dunkelrot mit reichlichen
Herden unter der Kapsel. Auf Schnitt dieselben Herde und eine groBe
alte Hamorrhagie. Im Mediastinum eitrige Flocken. Herz und Lunge
o. B. Ovarium mit mehreren Eiern von 1—2 cm Dm., die im Innem
derbe Blutcoagula und eine briiunliche diinne Fliissigkeit enthalten.
Peritoneum mit einigen fraglichen Knotchen. Knocheumark reichlich,
gelbrot, transparent.
Zusammenfassung siehe p. 574, 582.
Zum Schlusse danke ich Herrn Prof. Friedberger fur
die Anregung zur vorliegenden Arbeit und sein stetes Interesse
fur dieselbe auch an dieser Stelle herzlich.
Literaturverzeichnis.
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Dan tschakoff, Wera, Anat. Hefte, Bd. 37, 1908.
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604 J. L. Burckhardt, Ueber das Blutbild bei Hiihnertuberkulose.
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Dantschakoff, Wera, Arch. f. mikr. Anat., Bd. 73, 1908.
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Ellenberger und Baum, Handb. d. vergl. Anat. d. Haustiere, 12. Aufl.,
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Klieneberger und Carl, Die Blutmorphologie der Laboratoriumstiere.
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Koch und Rabinowitsch, Virchows Arch., Bd. 190, 1907, Beiheft, p.246.
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Moore, Joum. of. Med. Research, Vol. 11, 1904.
Sacharoff, Arch. f. mikr. Anat., Bd. 45, 1895, p. 370.
Venzlaff, W., I. D. phil. Berlin, 1911.
Berichtigung.
In dem Artikel von Coca, Dorrance und Lebredo in der Zeit
schrift f. Immunitiitsf., Bd. 13, Heft 5, ist zu lesen:
p. 576 Zeile 9 statt pulished — published,
p. 578 Zeile 16 statt contusions — conclusions,
p. 581 Zeile 14 statt symptom — symptoms.
p. 584 Zeile 8 statt injected to — injected had been subjected to.
Fromtuannsche Huchdruckerei (Hermann Pohle) in Jena. — 4165
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Zeitschrift £ Immiuiitatsfijrschimg, Original! Bi HT. Ha 6.
Nachdruck verboten .
[Aus der Physiologischen Abteilung am Allgemeinen Kranken-
hause St. Georg in Hamburg.]
Ueber die Rolle der hypertonischen Kochsalzlosung
bei der Anaphylaxie 1 ).
Von Dr. A. Bornstein,
Vorsteher der Abteilung.
(Eingegangen bei der Redaktion am 11. Juni 1912.)
Friedberger und Hartoch 2 ) haben vor einiger Zeit
die interessante Beobachtung geraacht, daB es moglich ist,
durch Injektion ziemlich stark hypertonischer Kochsalzlosung
einen Schutz bei der aktiven und passiven Anaphylaxie zu
gewinnen. Die Autoren haben ein besonderes Gewicht auf
diesen Befund legen zu mflssen geglaubt. Sie hielten ihn von
erheblicher Wichtigkeit fiir die Erklarung der Anaphylaxie
in vivo. Die Tatsache selbst ist seitdem des ofteren bestatigt
worden, so von Lowit 3 ), von Armand-Delille und
Launoy 4 5 ), sowie namentlich von Ritz 6 ), wahrend Biedl
undKraus 6 ) wegen der Toxizitat der Kochsalzlosung Schwierig-
keiten hatten.
Bei der Zusammenstellung der einschl§gigen Literatur,
die ich zu anderen Zwecken vorgenommen batte, fiel es mir
auf, daB in den Arbeiten dieser Forscher ein Punkt nicht
gewilrdigt war, der vielleicht doch des Interesses wert ist,
nSmlich das allgemeine Verhalten des Organismus gegenilber
1) Herr Kollege Jacobsthal hatte die Liebenswiirdigkeit, bei der
diesjahrigen Tagung der Mikrobiologen in Berlin in der Diskussion iiber
Anaphylaxie am 1. Juni 1912 die Resultate dieser Versuche kurz mit-
zuteilcn.
2) Friedberger und Hartoch, Zeitschr. f. Iramumtatsf., Bd. 3.
3) Lowit, Arch. f. exper. Pathol., Bd. 65.
4) Armand-Delille et Launoy, Compt. rend. Soc. Biol., T. 72.
5) Ritz, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 12.
6) Biedl und Kraus, Zeitschr. f. Immunitiitsf., Bd. 7.
Zeitschr. f. ImmunitStsforschung, Orig. Bd. XIV. 42
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606
A. Bornstein,
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der Kochsalzinjektion. Das Verhalten des Organismus gegen-
flber konzentrierter Kochsalzlosungen hat ja schon seit Jahr-
zehnten die Aufmerksamkeit der Physiologen erregt, und wir
sind uber diesen Punkt einigermaBen genau informiert.
Von besonderer Wichtigkeit schien mir dabei die Ver-
anderung der Blutmenge nach der Injektion des Salzes. Es
waren zuerst die Arbeiten der Ludwigschen Schule von
v. Brasol 1 ), Klikowicz 2 ), ferner von Leathes 3 ), von
Miinzer 4 ) und Magnus 5 ), die uns darttber AufschluB ver-
schafften, daB einerseits sofort eine starke Diurese auftritt,
durch welche das Kochsalz ziemlich schnell eliminiert wird,
daB andererseits aber gleichzeitig eine groBe Menge von
Gewebsflussigkeit in das Blut iibergeht, und so eine mehr
oder minder betrachtliche Vermehrung der Blutmenge zu-
stande kommt.
DaB eine solche Vermehrung der Blutmenge an und fur
sich geeignet ist, das Anaphylatoxin zu verdiinnen und den
anaphylaktischen Shock zu mildern, ist wohl zweifellos, nament-
lich nachdem Friedberger 6 ) selbst neuerdings darauf hin-
gewiesen hat, daB durch starkere Verdunnung des injizierten
Anaphylaxiegiftes sonst todliche Dosen in untertodliche ver-
wandelt werden konnen. Es erhebt sich nur die Frage, ob
die durch hypertonische Kochsalzlosung hervorgerufene Ver¬
mehrung der Blutmenge so groB ist, daB sie unter den
speziellen Verhaltnissen der von Friedberger und Ritz
angewandten Versuchsanordnungen ausreicht, um die Schutz-
wirkung zu erkiaren.
Die Versuche, die ich angestellt habe, um durch Messung
der Blutmenge dieser Frage naher zu kommen, waren sehr
einfach. Es war dazu nur notig, die Konzentration eines
Stoffes im Blute zu bestimmen, dessen Gesamtmenge sicher
unverandert blieb; als solcher Stoff konnte das Hamoglobin
benutzt werden, da unter den speziellen Versuchsverbaltnissen
1) v. Brasol, Dubois’ Arch., 1884.
2) Klikowicz, Dubois’ Arch., 1886.
3) Leathes, Journ. of Physiol., Vol. 19.
4) Miinzer, Arch. f. exper. Pathol., Bd. 41.
5) Magnus, Arch. f. exper. Pathol., Bd. 44.
6) Friedberger, Mikrobiologen-KongreB 1912.
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Die Rolle der hypertonischen Kochsalzlosung bei der Anaphylaxie. 607
ein Lackfarbenwerden des Blutes jedenfalls ausgeschlossen
war. Die H&moglobinbestimmung hatte aufierdem den Vor-
teil, daB zu ibrer Ausfiihrung nur aufierordentlich geringe
Blutmengen notig waren, was bei der Kleinbeit des Versuchs-
tieres von ausschlaggebender Bedeutung war. Zur Bestimmung
des H&moglobingehaltes konnte das neue Sahlische H&mo-
meter benutzt werden. Ich habe mich davon flberzeugt, daB
dieses Instrument an Genauigkeit nicht hinter den kompli-
zierten Apparaten von Haldane Oder von Plescb zurflck-
steht, und daB bei einiger Uebung der Versuchsfehler nicht
grdBer als 1, hOcbstens 2 Proz. ist. Ich kann darin den Aus-
fQhrungen Biirkers 1 ) durcbaus beipflichten. Die Rechnung
gestaltet sich sehr einfacb; werden z. B. vor der Injektion
76 Proz., nach der Injektion 43 Proz. Hemoglobin gefunden,
und nennen wir die normale Blutmenge des Tieres 100, so
ist die Blutmenge nach der Injektion = 76 ^ 10Q = 177. Der
zur Analyse notige Blutstropfen wurde jeweils durch Punktion
einer Vene gewonnen. Als Versuchstiere wurden Meerschwein-
chen benutzt. Die intravenose oder intracardiale Injektion
geschah langsam im Verlaufe von 2—3 Minuten.
Die Resultate der Versuche zeigt die folgende Tabelle.
Tabelle.
CO
- 8
---
- -
Versuch
No.
Datum
Gewich
des Tier
Hamo-
globin
%
a fee
CQ a)
s
Bemerkungen
I
10. IV. 12
342 g
64%
100
normal
49 „
131
l / 9 Min. nach intravendser Injektion von
1 ccm 20-proz. NaCl
50 „
128
7 Min* nach der Injektion
64 „
100
17 Min. nach der Injektion
II
11. IV. 12
335 g
86 „
100
normal
67 „
128
|
2 Min. nach intravenoser Injektion von
1,1 ccm 20-proz. NaCl
9 Min. nach der Injektion
88 „
98
III
12. IV. 12
216 g
82 „
100
normal
190
sofort nach intravenoser Injektion von
j 43 „
1 ccm 30-proz. NaCl
1) Burker, Miinch. med. YVochenschr., 1912.
2) Blutmenge in Prozenten der Blutmenge bei Beginn des Versuches.
42*
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608 Born stein, Hypertonische Kochsalzlosung bei der Anaphylaxie.
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ofc
M
p 6
>
Datum
Gewicht j
des Tieres
Hiimo-
globin
", . 1
i § 1
« g
Bemerkungen
IV1
13. IV. 12
225 g
77 %
100
normal
54 „
142
sofort nach intracard. Injektion von
1,1 ccm 30-proz. NaCl
41 „
192
Tier stirbt 2 Min. nach der Injektion.
Blut sofort aus der Cava entnommen
V
9. V. 12
240 g
88 „
100
normal
44 „
200
1 Min. nach intracard. Injektion von
1 ccm 30-proz. NaCl
65 „
135
7 Min. nach der Injektion
70 „
126
10 Min. nach der Injektion
'
77 „
114
30 Min. nach der Injektion
VI
11. V. 12
260 g
76 „
100
normal
43 „
177
3 Min. nach intracard. Injektion von
1 ccm 30-proz. NaCl
Aus dieser Tabelle geht hervor, daB in alien Versuchen
eine betrSchtliche Vermehrung der Blutmenge durch die In-
jektion zustande gekommen ist, die bei den groBeren Ver-
suclistieren und den kleineren Kochsalzmengen etwa 30 Proz.,
bei den kleineren Tieren und den groBeren Kochsalzmengen
70—100 Proz. der Gesamtblutmenge betrug. Diese Vermehrung
ist naturlich zu einem Teile zuriickzufiihren auf die mit dem
Kochsalz eingefiihrte Wassermenge (1 ccm). Bedenken wir
aber, daB die Gesamtblutmenge der von uns benutzten Meer-
schweinchen etwa 13—20 ccm war, so folgt daraus, daB nur
ein ganz geringer Teil der Vermehrung des Blutes (etwa
5—10 Proz.) auf die Verdiinnung durch die Injektionsflflssig-
keit zuriickzufiihren ist, wahrend der groBte Teil durch Wasser-
anziehung aus dem Gewebe erklart werden muB.
Die Blutmenge war also durch die Kochsalzinjektion auf
das 1,3—2,0-fache des Normalwertes erhSht, im Mittel etwa
auf das 1,6-fache. In den Versuchen von Ritz ist die tSd-
liche Dosis des Anaphylatoxins auf etwas mehr als das 1,5-fache
unter etwa den gleichen Bedingungen erliSht. Es zeigt
sich so, daB die todliche Konzentration des Ana¬
phylatoxins im Blute vor und nach der Injektion
der hypertonischen Kochsalzlosung etwa die
gleiche geblieben ist.
Jedenfalls wurde diese Tatsache genugen, urn in praxi
die hemmende Wirkung des Kochsalzes gegentlber dem ana-
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Schittenhelm und Weichardt, Biologische Wirkung etc. 609
phylaktischen Shock zu erklSren. Ob auBerdem, wie Fried-
berger meint, uoch eine Wirkung des Kochsalzes auf das
Komplement als Adjuvans hinzukommt, ist eine andere Frage.
Jedenfalls dflrfte der praktische Effekt kein allzu groBer sein.
Zusammenfassung.
1) Durch Injektion hypertonischer Kochsalzlosung wird
eine Vermehrung der Blutmenge hervorgerufen.
2) Diese Vermehrung geniigt, urn die Hemmung des
anaphylaktischen Shocks durch Injektion hypertonischer Koch¬
salzlosung zu erklSren.
3) Ob die Wirkung hypertonischer Kochsalzlbsung auf
das Komplement auBerdem eine, wenn auch geringe, Rolle
bei dem Zustandekommen des Phanomens spielt, wird durch
unsere Versuche nicht entschieden.
Nachdruck verboten .
[Aus der Medizinischen Klinik und dem Hygienisch-bakterio-
logischen Institut der Universit&t Erlangen.]
Stndlen fiber die biologische Wirkung bestimmter
parenteral einverleibter Eiweifispaltprodukte l ).
Von A. Schittenhelm und W. Weichardt.
(Eingegangen bei der Bedaktion am 13. Juni 1912.)
Das Studium der parenteralen Verdauung kann nur da-
durch zu einem exakten gestaltet werden, dafi man versucht,
chemisch charakterisierbare Korper, wie sie als Zwischen-
stufen der Verdauung auftreten mtissen, zu isolieren, sie ge-
sondert zu injizieren und ihre Wirkung auf die verschiedenen
Funktionen zu studieren. In frflheren Mitteilungen an anderen
Stellen 2 ), wurden bereits eine Reihe von Befunden nach dieser
1) Wir erfreuten uns bei der Durchfiihrung der Versuche der fleiSigen
Mitarbeit von Herrn Dr. phil. Hans Freund.
2) Schittenhelm und Weichardt, Zeitschr. f. exper. Pathol, u.
Ther., Bd. 10 u. 11, 1912. — Schittenhelm und Weichardt, Ueber
Infektion und Immunitiit. Mitteil. 1—4. Munch, med. Wochenschr., 1910,
No. 34; 1911, No. 16; 1912, No. 2 u. No. 20. — Deutsche med. Wochenschr.,
1911. — Centralbl. f. d. ges. Physiol, u. Path. d. Stoffw., 1910, No. 17.
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610
A. Schittenhelm und W. Weichardt,
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Richtung hin veroffentlicht. Bei den vorliegenden Unter-
suchungen kam es vor alien Dingen darauf an, eine Reihe von
gut definierten EiweiBderivaten herzustellen und neben ibren
biologischen Wirkungen die von uns mehrfach betonte wichtige
Tatsache, daB es gelingt, durch Paarung bestimmter
Ei weiBspaltprodukte ihre Giftwirkung aufzu-
heben, durch neue Beispiele zu belegen.
Was zunachst die biologische Wirkung anlangt, so be-
riicksichtigten wir einmal die toxischen Allgemeinerscheinungen
und bestimmten nach Moglicbkeit die todliche Grenzdosis.
Wir berucksichtigten ferner die TemperaturverhSltnisse, die
Einwirkung auf den Blutdruck, die Atmung und die Blut-
gerinnung. Dazu kam unter UmstSnden das durch die Sektion
erhaltene pathologische Bild.
Ueber die Wirkung nativer EiweiBkbrper ist nach
den vorliegenden Untersuchungen anzunehmen, daB sie bei
der erstmaligen Injektion so gut wie keine Giftwirkung
entfalten, solange man mit den Mengenverh<nissen in ge-
wissen Grenzen bleibt. Hochstens beobachtet man eine leichte
Beeinflussung der Temperatur meist im Sinne einer Steigerung
und das Auftreten einer mehr oder weniger hochgradigen
Leukocytose. Doch finden sich diese Erscheinungen nicht
ganz regelmaBig. Als Paradigmen dieser Gruppe von EiweiB-
kbrpern sahen wir das Kasein, Eieralbumin, SerumeiweiBkorper
und ahnliche Stoffe *). Immerhin ist die Reihe der nach dieser
Richtung untersuchten EiweiBstoffe keine sehr groBe, da es
bei der tiberwiegenden Zahl bis jetzt noch keine exakte Me-
thode gibt, sie, ohne ihren Komplex in uniibersehbarer Weise
zu schadigen, in Losung zu erhalten. Es bedarf hierzu starker
Laugen und Sauren, meist bei erheblicher Hitzeeinwirkung,
einer Prozedur, bei der unmoglich ein partieller Aufschlufi
der Proteine im Sinne einer Hydrolyse verhindert werden
kann. Dabei kann aber aus einem an sich vollig ungiftigen
EiweiB ein toxisch wirkendes Produkt entstehen.
Von besonderem Interesse sind die zusammengesetzten
EiweiBkorper, wie wir sie vor allem in den Zellkernen als
Nukleoproteide und Nukleohistone, im Sperma als Nukleo-
1) 1. c. Zcitschr. f. exper. Pathol., 1912.
Gck igle
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter Ei weiBspaltprodukte. 01 ]
protamine, im Blut als HSmoglobin usw. finden. Sie sind bis
jetzt auf ihre biologische Wirkung so gut wie nicht unter-
sucht worden. Es war nun von besonderem Interesse, zu
studieren, wie diese Substanzen einesteils als solche, anderen-
teils wie ihre Komponenten einzeln sich verhalten.
Von friiberer Zeit liegt nur eine Arbeit aus dem
Kosse 1 schen Institut von Thompson 1 ) vor, welcher ver-
schiedene Protamine, das Klupein, das Salmin, das Sturin
und das Scombrin, sowie das His ton der Thymusdruse und
endlich Hydrolyseprodukte der Protamine, die sogenannten
Protone, auf Blutdruck, Atmung, Blutgerinnung und Leuko-
cytenzahl untersuchte. Er fand bei alien Protaminen eine
starke Senkung des Blutdrucks, welche in erster Linie auf
eine Vasodilatation als Folge der peripherischen Wirkung
dieser Korper auf die Wandungen der GefaBe, sodann aber
auch auf eine direkte Schw&chung des Herzmuskels zurflck-
zufiihren ist. Die Atmung zeigt ein charakteristisches Bild,
indem infolge peripherer Muskeliahmung die Erhebung der
Brustwand gelfihmt, die Zwerchfellatmung dadurch kompensa-
torisch vertieft erscheint. Die Blutgerinnung ist verringert,
die Leukocytenzahl des Blutes failt jah ab. Die Protone so-
wohl wie die AminosBuren, vor alien die Diaminosauren
(Hexonbasen) batten keinerlei EinfluB auf die genannten
Faktoren. Thompson schloB daher, daB die Wirkung dieser
Stoffe auf ihren speziellen Konstitutionen beruhe.
Thompson wies schon darauf hin, daB er dieselben Er-
scheiuungen, wie er sie als W r irkung der Protamine und der
Histone fand, bereits bei Einverleibung von Albumosen (Pep-
tonen) beobachtet habe. Die Literatur fiber die W T irkung von
Peptongemischen ist eine ziemlich groBe. Vor allem ist das Witte-
Pepton von zahlreichen Forschern untersucht worden. Wir iiber-
gehen diese Literatur, weil nach unserer Auffassung derartige
Gemische niemals imstande sind, Garantie fur eine Konstanz
der Praparate zu geben, und sich zweifellos schr oft eine
Reihe von Wirkungen summiert, die den sie zusammensetzenden
verschiedenen Substanzen im einzelnen angehoren. Wie sehr
derartige Fehlerquellen ins Gewicht fallen, zeigt vor allem das
1) W. A. Thompson, Zeitschr. f. physiol. Chem., Bd. 29, 1900, p. 1.
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A. Schi ttenhel in und W. Weichardt,
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Witte-Pepton, bei dem nach den Untersuchungen von Po-
pielski 1 ) die besonders wirksame Komponente (Vasodilatin)
durch Alkoholextraktion abgetrennt werden kann. Ehe man
also an die Wirkung von Gemischen gehen darf, muB man
suchen, die einzelnen Komponenten fflr sich zn fassen und in
ihrer biologischen Wirkung zu charakterisieren.
Bei den zusammengesetzten EiweiBkorpern bietet die
Untersuchung der Komponenten keinerlei Schwierigkeiten.
Es gelingt durch geringffigige Eingriffe, welche eine wesent-
liche Veranderung des EiweiBanteils unmoglich herbeifubren
konnen, die einzelnen Komponenten darzustellen. Eine H&mo-
globinlosung wird z. B. in der KSlte bei schwach saurer Re*
aktion ausgeathert, wobei das Hamatin spielend in den Aether
iibergeht, das Globin in dem wasserigen Anteil zuriickbleibt.
Das Histon wird aus dem Nukleohiston durch Behandlung
mit schwacher Saure in der Kalte in Freiheit gesetzt Durch
ahnliche einfache Reaktionen werden auch die Protamine dar-
gestellt. Es ist nun eine interessante Tatsache, dafi dieser
EiweiBanteil der zusammengesetzten EiweiBkorper von einer
biologischen Wirkung ist, wie wir sie als charakteristisch ffir
Peptone kennen.
Ueber die Wirkung der Abbaustufen ist aufier den Unter¬
suchungen Thompsons tiber die Protone und denen von
Schittenhelm und Weichardt 2 ) noch nichts bekannt. Im
folgenden beschaftigten wir uns eingehend mit der Differen-
zierung der Wirkung dieser wichtigen EiweiBkbrper und ihrer
Abbauprodukte.
Bei der Darstellung der Pr¶te wurden mannigfache
Erfahrungen gesammelt, die im folgenden wiedergegeben sind.
Die Pr¶te wurden in der Regel intravenos injiziert, in
einzelnen Fallen auch subkutan. Als Versuchstiere verwendeten
wir Meerschweinchen, Kaninchen und Hunde. Bei der weiteren
Beobachtung der Versuchstiere beschrankten wir uns nicht
nur auf die akute Wirkung der Pr¶te, sondern wir ver-
1) Popielski, Pfliigers Arch., Bd. 53, 1909, p. 66.
2) Schittenhelm und Weichardt, Zeitschr. f. exper. Pathol, u.
Ther., Bd. 10 u. 11, 1911. — Schittenhelm und Weichardt, Ueber
Infektion und Immunitiit. Mitteil. 1—4. Munch, med. Wochenschr., 1910,
No. 34; 1911, No. 16; 1912, No. 2 u. No. 20.
Gck igle
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter EiweiBspaltprodukte. (313
folgten auch das Befinden der Tiere fiber Wochen hinaus und
erhielten auf diese Weise interessante Einblicke in die Nach-
wirkungen dieser EiweiBderivate. Auf Grund unserer Er-
fahrungen halten wir gerade bei derartigen Prfiparaten diese
langer dauernde Beobachtung fttr ganz besonders wichtig.
A. Allgemeine biologische Wirkungen.
I. Gruppe der KemeiweiBkorper.
Diese Gruppe von EiweiBkSrpern ist vor allem durch
die bekannten Untersuchungen von K o s s e 1 physiologisch-
chemisch durchforscht worden. Besonders gut untersucht
ist das Nukleohiston der Thymusdrfise. Der EiweiB-
paarling, die Nukleinsfiure, hat, abgesehen von seiner
chemotaktiscken Wirkung, in normalen Dosen keinerlei bio¬
logische Effekte 1 ). Um so interessanter verhfilt sich das
H i s t o n. Dieser EiweiBkfirper zeichnet sich gegenflber
dem Kasein, Eieralburain usw. dadurch aus, daB er durch
Alkali f&llbar ist, wodurch seine basische Natur charakterisiert
wird. Diese hat ihren Grund in dem groBen Reichtum des
Kfirpers an Diaminosfiuren. Seine genauere, durch Hydro¬
lyse geklfirte Zusammensetzung ist, wie sie nach Untersuchungen
von Kossel, Abderhalden und Rona festgestellt wurde,
in nachfolgender Tabelle zu ersehen. Wir haben endlich noch
das Nukleoproteid von Bang in den Kreis der Unter¬
suchungen hereingezogen, das gleichfalls die Verbindung von
NukleinsSure mit einem EiweiBrest darstellt, dessen nfihere
Zusammensetzung jedoch bis heute noch nicht untersucht ist
Durch Verdauung mit Pepsin und Salzsfiure lfiBt sich nach
Kossel und Pringle aus Histon ein Abbauprodukt ge-
winnen, welches prozentualisch weit mehr Diaminosauren ent-
hfilt wie das Ausgangsprodukt Histon, das Histopepton.
Es war deshalb von besonderem Interesse, das Histopepton
zu untersuchen und festzustellen, ob die biologische Wirkung
dieser Gruppe allein dem Reichtum an Diaminosfiuren zuzu-
schreiben ist
1) SelbstversUindlich darf man zu derartigen Vereuchen nicht die im
Handel erhiiltliche Hefenukleinsiiure verwenden, welche in ihrem Bau von
der tierischen wesentlich abweicht. Man muS sich vie!mehr sclbst die
tierischen Nukleinsiiuren herstellen.
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614
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A. Schittenhelm und W. Weichardt,
Tabelle.
Thymus-
histon •)
Histo-
pepton a )
Globin *)
Glo-
bino-
kyrin 8 )
Gluto-
kyrin 1 2 3 4 5 )
Glykokoll
0,5
_
0
_
vorhanden
Alanin
Aminoisovalerian-
3,5
—
4,2
—
Sfiure
_
_
_
Leucin
11,8
_
30,0
_
_
Serin
_
_
0,6
_
_
Cystin
—
—
0,3
—
—
Asparaginsiiure
nicht
■ gefunden
! -
4,4
—
—
Glutaminsiiure
0,5
—
1.7
23,0
vorhanden
Ty rosin
5,2
2,9
1,5
_
_
Prolin
1,5
| 2,3
_
_
Phenvlalanin
2,2
_
1 4,2
_
_
Tryptophan
' -
vorhanden
—
Oxyprolin
—
| -
1,0
—
—
Arginin
15,5
! 16,0
5,4
21,46
67.9
Lvsin
6,9
18.1
4,3
21,66
32,1
Efistidin
1,0
3,2
11,0
1 32,17
1
nicht
gefunden
V e r s u c h e.
a) Nukleoproteid.
Darstellung: Sie geschah im wesentlichen nach J. Bangs An-
gaben 6 ) folgendermafien: 800 g frische Thymus wurden vom anhaftenden
Fett und den Hautcn gesiiubert, durch den Fleisehwolf zerkJeinert und
dann mit l 1 /, Liter einer 0,9-proz. Kochsalzlosung vereetzt und so 3G Stunden
im Eisschrank stdhen gelassen. Nach dieser Zeit wurde filtriert, das schwach
alkalisch reagierende, rosagefiirbte, milchige Filtrat, in dem Calciumchlorid
keinen Niederschlag hervorrief, wurde durch vorsichtigen Zusatz von Essig-
siiure gefiillt. Bis zur vollstiindigen Fallung waren 12 ccm einer 30-proz.
Essigsiiure nbtig.
Der Essigsiiurezusatz mufl mit Vorsicht geschehen, da sich das
Nukleoproteid im UeberschuB des F&llungsmittels leicht wieder I5st.
Der blafirote Niederschlag wurde auf ein Filter gebracht und mehrmals
mit Wasser, schliefllich mit Alkohol und Aether farblos gewaschen und bei
100° getrocknet.
Auf diese Weise erhielten wir das Nukleoproteid als ein feines, leichtes,
weiBes Pulver, das dieselben Eigenschaften zeigte, die J. Bang in seiner
Arbeit hervorhebt.
1) E. Abderhalden, EiweiBchemie. Jena 1909, p. 79.
2) E. Abderhalden, Biochem. Handlexikon, Bd. 3, 1910, p. 162.
3) Kir bach, Zeitschr. f. phys. Chem., Bd. 50, 1906, p. 134.
4) M. Siegfried, Sachs. Akad. d. Wissensch., Math.-physik. Kl^
1903, p. 82.
5) J. Bang, Hofm. Beitr., Bd. 4, 1904, p. 115 u. 362.
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Wirkung bestirnniter parenteral einverleibter EiweiBspaltprodukte. 615
Losung: Zur Bereitung der Injektionsfliissigkeit wurden 0,5 g
Nukleoproteid mit einigen Tropfen einer gesattigten Natriumkarbonatlosung
angerieben und nach Zusatz von ca. 5 ccm Wasser in der Kalte gelost.
Die mit Normalsalzsiiure neutralisierte Losung ergiinzten wir mit Wasser
auf 10 ccm und filtrierten sie durch Watte. Losung 5-proz.
Versuchl. Subkutan wurde einem 265 g schweren Meerschwein-
chen 0,2 g Nukleoproteid einverleibt. Die Injektion bewirkte am 1. Tage
ein Steigen der Temperatur und eine Gewichtsabnahme um 45 g innerhalb
4 Tagen. Nach 8 Tagen, als das Tier wieder an Gewicht zugenommen
hatte, bekam es wieder subkutan 0,2 g Nukleoproteid, die das Tier ohne
bemerkenswerte Erscheinungen und ohne Gewichtsabnahme vertrug.
Versuch 2. Ein Meerschweinchen von 280 g bekam intravenos
0,08 g Nukleoproteid, die innerhalb 2 Minuten starken Temperatursturz
von 36,8° auf 33,8°, hierauf ein Ansteigen der Temperatur auf 39,5°
innerhalb einer Stunde verursachten. Die Gewichtsabnahme war hier un-
bedeutend.
Versuch 3. Ein anderes Tier von 350 g bekam 0,1 g Nukleoproteid
intravenos. Auch hier waren zunachst Temperatursturz von 37,2° auf 35,2°
und bald darauf ein Ansteigen der Temperatur bis 39° bei geringem Ge-
wichtsverlust beachtenswert. Tier blieb munter.
b) Nukleohiston.
Darstellung: Nach Lilienfeld 1 ) wurden 750 g Thymusgcwebe,
wie bei der Darstellung von Histon beschrieben wurde, gesaubert, durch
den Flcischwolf getrielien und mit l\i 2 Liter Wasser 6 Stunden durch die
Schuttelmaschine geschuttelt. Der wasserige Extrakt wurde von den zelligen
Elementen abzentrifugiert und filtriert. Aus dem Filtrat fiillten wir das
Nukleohiston mit Essigsiiure. sammelten es auf einem Filter und fiillten es
zur Reinigung mit Essigsiiure noch dreimal um, nachdem wir es durch
Zusatz von einer Spur Natriumkarbonat bis zur schwach alkalischen Re-
aktion gelost hatten. Der zuletzt erhaltene Niederschlag wurde noch mit
essigsiiurehaltigem Wasser, Alkohol und Aether gewaschen, mit dem
Spatel zerkleinert und im Vakuum liber Schwefelsiiure getrocknet. Wir
erhielten auf diese Weise ein schneeweiBes leichtes Pulver. Ausbeute
4,5 g. Das Priiparat zeigte diesel ben Eigenschaften, wie sie Lilienfeld
in seiner Arbeit erwiihnt.
Losung: Zur Bereitung von InjektionsfUissigkeiten wurden 0.5 g
mit w r enig Normalnatronlauge angerieben, mit ca. 6 ccm Wasser schwach
erwiirmt und nach dem Erkalten mit Normalsalzsaure neutralisiert. Die
auf 10 ccm mit Wasser aufgefullte Losung wurde durch Watte filtriert.
Losung 5-proz.
Versuch 4. 0,08 g Nukleohiston wurden in sehr schwach alkalischer
Lbsung einem Meerschweinchen von 415 g intravenos injiziert. Das Tier
starb sofort unter Krampfen.
Die Sektion ergab geringe Lungenbliihung.
1) Leon Lilienfeld, Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd. 18, p. 478.
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A. Sehi ttenh'elm and W. Weichardt,
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Versuch 5. 0,15 g Nukleohiston, das wir Herrn Prof. I var Bang
verdanken, wurden einem Meerschweinchen von 300 g intravenos injiziert,
das Tier blieb vollig munter.
Versuch 6. Einem anderen Meerschweinchen von 520 g injizierten
wir 0,04 g Nukleohiston intravenos. Das Tier blieb munter, nahm
aber in den nachsten Tagen bei normaler Temperatur stark ab.
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht Temperatur
Bemerkung
14. III.
Nukleohiston 0,04
i
i 520
37,0
Intravendse Injektion.
15. III.
500
37,9
Tier bleibt munter
16. III.
1 470
36.3
17. III.
470
37,9
18. III.
455
37,3
19. III.
•140
38,3
20. III.
440
36.8
21. III.
445
38,8
22. III.
440
37,3
23. III.
430
38,2
24. III.
440
37,0
25. III.
435
37,7
26. III.
420
38,0
27. III.
410
38,1
28. III.
380
37,0
29. III.
410
37,2
30. III. j
415
37,0
In den nachsten 8 Tagen ging das Tier ein.
Versuch 7. Subkutan injizierten wir einem dritten Meerechwein-
chen, 345 g schwer, 0,05 g Nukleohiston. Das Tier blieb munter, zeigte
aber in den folgenden 9 Tagen ebenfalls bei normaler Temperatur Gewichts-
abnahme um 45 g. Auf eine subkutane Reinjektion nach Verlauf dieser Zeit
mit 0,1 g Nukleohiston reagierte es mit vorubergehenderTemperatursteigerung.
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkungen
14. III.
Nukleohiston 0,05
345
36,5
Subkutane Injektion.
15. III.
320
37,6
16. III.
315
37,5
17. III.
320
37,2
18. III.
315
37,4
19. HI.
315
37,2
20. HI.
320
37,2
21. III.
310
37,0
22. III.
300
37,5
23. III.
Nukleohiston 0,1
305
37,5
Subkutane Reinjektion.
24. III.
310
37,5
10“, 11“ Temp. 38,8
25. III.
310
38,5
26. III.
300
38,5
27. III.
320
39,0
28. III.
330
38,8
39. III.
325
37,8
30. III.
330
37,2
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Wirkung bestimniter parenteral einverleibter EiweiBspaltprodukte. 617
Versuch 8. Einera Tier von 370 g wurden 0,05 g und nach
9 Tagen 0,1 g Nukleohiston subkutan injiziert. Auch dieses Meer-
schweinchen nahra sehon nach der ersten Injektion an Gewicht ab (inner-
halb 9 Tagen um 35 g). Am 1. Tage nach der Reinjektion, die bei normaler
Temperatur vorgenommen wurde, bekam es wieder Fieber (39,4°) und nahm
in den niichsten Tagen weiter ab. Tier sonst niunter.
Tabcile.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkungen
14. III.
Nukleohiston 0,05
370
37,4
Subkutane Injektion.
15. III.
370
38,4
1G. III.
350
37,5
17. III.
350
37.4
18. III.
345
38,0
19. III.
335
38,4
20. III.
350
39,5
21. HI.
340
39,0
22. III.
335
38,3
i
23. III.
Nukleohiston 0,1
340
38.2
10 3 ° subk. Reinjektion.
24. III.
330
39,4
| Tier bleibt munter
25. III.
310
38,0
20. III. i
300
39.2
27. III. 1
315
38,2
28. III. 1
1
320
38,0
29. III.
320
38.3
|
30. III. |
1
320
38,5
i
!
c) Histon.
Darstellung: Unter Beniitzung der Angaben iiber die Darstellung
des Histon aus der Thymusdriise von Kossel und Kutscher 1 ) verfuhrcn
wir auf folgende Weise:
Eine groBere Menge Kalbsthymus wurde von anhaftendem Fctt und
den Hiiuten gesiiubert, durch die Fleischliaekmaschine zerkleinert und mit
ca. der doppelten Menge Wasser bei gewohnlieher Temperatur 6 Stunden
in die Schiittclmasc-hine geschiittelt. Hierauf wurde die Masse durch cin
engmaschiges Sieb koliert, die kolierte milchige FHissigkeit zentrifugiert
und das so erhaltene wiisserige Extrakt mit so viol Salzsiiure versetzt,
daB der Gehalt an Salzsiiure 0,8 Froz, bet-rug. Der Nicderschlag wurde
durch Zentrifugieren und Filtrieren entfernt und das klare Filtrat mit
Ammoniak gcfallt. Das so erhaltene Histon wurde mit ammoniakhaltigem
Wasser gewaschen, in Alkohol gebracht und sodann mit Alkohol, zuletzt
mit Aether vollig extrahiert.
In iiberschussigem Ammoniak loste sich das Histon. Es war also
mit dem Zusatz von Ammoniak Vorsieht geboten. Durch Ansiiuern mit
Salzsiiure konnten wir es nicht wieder erhalten, wohl aber nach Zusatz von
Alkohol und Aether zu gleichen Teilen.
Im letzteren Falle bekamen wir schneller cinen zu groBeren Flocken
1) H. Kossel und Kutscher, Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd. 31.
1900, p. 188.
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618
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zusammengeballten, schoneren Niederschlag, als bei der Fallung mit
Alkohol allein. Das Histon war in wenig Salzsaure sofort klar loslich.
Losung: Zur Bereitung von Injektionsfliissigkeiten wurden 03 g
Histon mit ca. 6 ccm einer 1 / lo -XormaIsalz8aiire verrieben, gelinde erwarmt,
nacb dein Erkalten mit Natriumkarbonatlosung neutralisiert. Hierauf wurde
das Gauze auf 10 ccm mit Wasser angefiillt und durch Watte filtriert
Losung 3-proz.
Versuch9. 0,02 g Histon wurden in neutraler Losung einem
Meerschweinehen von 2G0 g intravenos injiziert. Das Tier bekam sofort
Kriimpfe und schwere Dyspnoe. Nach 2 Minuten erfolgte der Tod.
Die Sektion zeigte geringe Lungenblahung.
VersuchlO. 0,01 g Histon wurde einem Meerschweinchen von
200 g intravenos injiziert. Die Temperatur des Tieres sank 3 Minuten
nach der Injektion von 37,4° auf 36,5°. Die Wirkung des Histons iiuGerte
sich an dem Tier ferner in Kaubewegungen und Abgang von Faeces und
im Sichstrauben der Haare. Das Tier erholte sich allmahlich wieder. Nach
1 1 Tag starb es.
Die Sektion ergab einen negativen Befund.
Versuch 11. Ein drittes Tier von 470 g bekam subkutan 0,04 g
Histon, die es gut vertrug. In den folgenden Tagen nahm das Tier bei
normaler Temperatur an Gewicht stark ab (von 470 g auf 3(30 g). Die
Reinjektion erfolgte subkutan nach 5 Tagen mit 0,06 g Histon. Das Tier
zeigte in den niichsten Tagen hdhere Temperatur und fortdauernde Ge-
wichtsabnahme (bis auf 360 g). Als zweite Reinjektion subkutan gaben
wir nach 9 Tagen, als das Tier an Gewicht wieder zugenomraen hatte und
die Temperatur wieder normal war, weitere 0,06 g Histon. Die Temperatur
sank innerhalb , / 3 Stunde von 37,5° auf 35,3°. 1 Stunde nach der In¬
jektion hatte das Tier Fieber (39,8°). Am niichsten Morgen starb es.
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
j Bemerkungen
9. III.
Histon 0,04
470
37,0
Subkutane Injektion
10. III.
i
450
37.6
11. III.
410
38,4
12. Ill.
380
37,8
13. III.
365
38,0
14. III.
Histon 0,06
360
37,5
Subkutane Reinjektion. Tier
15. III.
390
38,6
bieibt munter
16. III.
385
38,7
17. III.
380
38,8
18. III.
375
38,3
19. III.
365
38,1
20. III.
1
330
37,0
21. III.
1 380
37,5
22. III.
390
37,8
23. III.
Histon 0,06
j 380
37,5
Subk. Reinjektion. 10 15 , 10* s
24. Ill.
| 370
28,6
Temp. 35,3, 11« Temp. 39,8
Am 24. friih 8 15 hatte das Tier Laufkriimpfe. Temperatur 28,6°, ll 5 *
Exitus.
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter Eiweiflspaltprodukte. 619
Versuch 12. Ein viertes, 585 g schweres Meerschweinchen, bekam
zuerst nur 0,04 g Histon, nach 5 Tagen 0,06 g, nach weiteren 9 Tagen
abermals 0,06 g Histon subkutan injiziert. Die Korpergewichtsabnahme
erfolgte nach jeder Injektion. Nach der ersten betrug sie 65 g, nach der
zweiten 20 g. Die zweite Reinjektion gaben wir, als das Tier wieder an
Gewicht zugenommen hatte. Die Temperaturanderungen verliefen hier wie
im vorigen Versuch: l / f Stunde nach der Injektion Temperatursturz von
37,5° auf 35°. Nach einer weiteren halben Stunde bekam auch dieses
Tier Fieber (39,3°). Sonst blieb es munter, nahm aber in den nachsten
Tagen wieder stark ab.
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkung
9. III.
Histon 0,04
585
37,0
Subkutane Injektion
10. III.
540
37,6
ii. m.
535
38,0
12. HI.
510
38,0
13. HI.
520
38,0
14. III.
Histon 0,06
520
38,0
SubkutaneReinjektion. Tier
15. III.
520
38,0
bleibt munter
16. III.
520
37,3
17. III.
520
37,1
18. III.
515
37,2
19. III.
500
37,5
20. III.
520
37,0
21. III.
525
37,5
22. III.
535
37,3
23. III.
Histon 0,06
530
37,5
24. III.
510
38,6
11° subkutane Reinjektion.
25. III.
485
37,6
11 80 Temp. 35 u , 12° Temp.
26. III.
460
37,0
39,3°
27. III.
480
38,0
28. III.
500
37.8
29. III.
490
37,5
30. 111.
495
37,2
Tier ist in den nachsten 8 Tagen eingegangen.
d) Histopepton,
Darstellung: Nach Kossel 1 ) wurden 40 g des wie oben aus
Kalbsthymus dargestellten Histons mit 0,5 g Pepsin, pur. in lamell. und
*/ 4 Liter 0,8-proz. Salszaure unter zeitweisem Umschiitteln 10 Tage im
Brutschrank stehen gelasscn. Hierauf wurde die Losung neutralisiert und
filtriert, schlieSlich in einem Schiitteltrichter mit Natriumpikrat gefiillt.
Die Abscheidung des Niedersehlags begunstigten wir durch Schutteln mit
etwas Aether. Der Niederschlag wurde abgesaugt und mit einer ver-
dtinnten wasserigen Losung von Natriumpikrat gewaschen. Sodann brachten
1) A. Kossel und H. Pringle, Zeitschr. f. physiol. Chemie, Bd. 49,
S. 314.
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wir den Niederschlag in 3 Proz. Schwefelsiiure enthaltendem Wasser zur
Losung und befreiten diese von der Pikrinsaure durch Ausschiitteln nrit
Aether im Scheidetrichter. Die schwefelsaure Losung wurde in ca. 2 Liter
absolute!) Alkohols verriihrt. Das Histopeptonsulfat schied sich so als
weifier flockigcr Niederschlag aus. Er wurde sofort abgenutscht, mit al>
solutem Alkohol und Aether gewasehen und im Exsikkator getrocknet.
Ausbeute 5 g.
Das so gewonnene Sultat des Histopeptons zeigte dieselben Eigen-
schaften, wie das von Kos6el dargestellte. Es war leieht wasserloslich.
Die saner reagierende Losung gab mit Ferrocyankalium und Kupfer-
sulfat keinen Nicderschlag. Die Biuret- und Mi lions Reaktion fielen
positiv aus.
Versuch 13. Ein 380 g sehweres Meersehweinchen wurde mit 0,1 g
Histopeptonsulfat intravenos injiziert. Das Tier bekam sofort Krampfe
urid Ateml>eschwerden und ging akut ein. Die Sektion zeigte Lungen-
bliihung.
Versuch 14. 0,1 g Histopeptonsulfat wurde einem Meerschwein-
chen von 205 g subkutan injiziert. Das Tier starb 1V 2 Tag nach der
Injektion, naehdem es um 55 g abgenommen hatte.
Versuch 1 5. Einem dritton, 200 g sehweren Tier, gaben wir 0.08 g
Histopeptonsulfat intravenos. Es nalim in den michsten Tagen bei
hoher Temperarur (38,2—39 u ) stark ab. Nach 14 Tagen starb es.
Versuch 16. 0,02 g Histopeptonsulfat wurde einem Meerschwein-
chen von 430 g 11'° intravenos injiziert. Die Temperatur fiel von 37,9°
innerhalb 15 Minten auf 36,3°. 12 45 war die Temperatur auf 39,2° ge-
stiegen. In den folgendcn Tagen ging das Korpergewicht bei normaler
Temperatur bedeutend herunter. Nach 11 Tagen starb das Tier.
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkung
20. III.
Histopepton 0,02
430
37,9
Intravendse Injektion
21. III.
390
38,3 i
22. III.
300
38,3
23. III.
335
37,6
24. III.
330
38,0
25. III.
315
38.0
26. 111.
310
38,1
27. III.
305
38,2 1
28. III.
300
38,5 1
29. HI.
290
38,3 i
30. III.
275
!
Exitus iiber Nacht
Versuch 17. Einem anderen Tier von 300 g injizierten wir 0,05 g
Histopeptonsulfat intravenos. Es blieb munter, nahm aber in den
folgenden Tagen bei normaler Temperatur an Gewicht stark ab.
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter EiweiSspaltprodukte. 621
Tabelle.
Datum j
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkung
20.
III.
Histopepton 0,05
300
37,4
Intravenose
Injektion.
21.
III.
280
37,0
Tier bleibt
munter
22.
III.
270
37,1
23.
III.
255
37,8
24.
III.
250
38,3
25.
Ill
240
37,5
26.
III.
235
37.6
27.
III.
245
37,8
28.
III.
250
37,5
29.
III.
250
37,6
30.
III.
255
37,0
Aus den Versuchen geht zunachst hervor, dafi das
Bangsche Nukleoproteid vSllig nngiftig ist. Ab-
gesehen von einer im Anschlufi an die intravenose Injektion
sich einstellenden Temperaturschwankung (zuerst Temperatur-
sturz, dann Fieber) zeigten die Tiere keinerlei Erscheinungen.
Zu den Versuchen mit Nukleohiston standen uns zwei
PrSparate zur Verfflgung: das eine von Prof. Bang dar-
gestellte PrSparat erwies sich in Dosen von 0,15 g als un-
giftig, das zweite von uns dargestellte Prfiparat war relativ
giftig. Die Ursache der Differenz liegt entweder in kleinen
Verschiedenheiten der Darstellung oder aber daran, dafi unser
PrSparat ganz frisch nach der Darstellung und das Bang¬
sche Pr¶t nach langem Lagern verwendet wurde. Es ist
aber nicht ausgeschlossen, dafi durch das Lagern, welches
nach unseren Erfahrungen die chemischen Eigenschaften (L5s-
lichkeit) entschieden Sndert., auch die biologische Wirkung
beeinflufit wird. Die Grenze der Giftwirkung unseres PrtL-
parates lag zwischen 0,05 und 0,08 g. Die akute Wirkung
grSBerer Dosen fiufierte sich in Kr&mpfen und Atemnot, unter
der das Tier zugrunde ging. Bei der Sektion fand sich eine
geringe Lungenblahung, bei kleineren Dosen zeigte das Tier
in der Folge eine standige Gewichtsabnahme, welche
schliefilich zum Tode fflhrte.
Das Histon war weitaus giftiger als das Nukleo¬
histon. Schon Dosen von 0,01 g fGhrten den akuten Tod
unter Temperatursturz, Krampfen und Atemnot herbei. Bei
subkutaner Injektion beobachteten wir eine zunehmende
Eachexie. In Versuch 11, in dem das Tier mit subkutaner
Zdtachr. f. ImmunlUUfortchung. Orig. Bit XIV. 43
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622
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Injektion vorbehandelt war, fOhrte eine neuerliche subkutane
Injektion 14 Tage nach der ersten zu Fieber, dann zu einem
langsamen zunehmenden tiefen Temperatursturz, verbunden
mit Laufkr&mpfen. SchlieBlich erfolgte der Exitus. Offenbar
handelte es sich hier urn den Ausdruck einer Ueber-
empfindlichkeit.
Das Histopepton endlich erwies sich in Dosen von
0,1 g akut todbringend, wobei die Tiere Krampfe und
Dyspnoe bekamen. Kleinere Dosen erzeugten Fieber und
Absinken des Kbrpergewichts in den folgenden Tagen. Alles
in allera war es zweifellos bedeutend ungiftiger als das Histon.
IL Gruppe des H&moglobins.
Wir verwendeten zu unseren Untersuchungen H&mo-
globin aus Pferde- und solches aus Hundeblut.
Aus jedem der beiden wurde gesondert das Globin dar-
gestellt, der EiweiBkSrper des Hamoglobins, der sich mit der
Farbstoffgruppe, dem H&mochromogen, zum zusammengesetzten
EiweiBkbrper paart. Das Globin zeichnet sich gegenflber den
einfachen EiweiBkorpern, dem Serumalbumin, dem Kasein usw.
durch seinen auBerordentlich hohen Gehalt an Histidin aus.
Das Globinokyrin, welches durch Hydrolyse nach Sieg¬
fried aus dem Globin gewonnen wird, ist prozentualisch
reicher an Diaminosfiuren und Histidin, wie sein Ausgangs-
produkt. Ueber die Zusammensetzung der Kfirper gibt die
Tabelle p. 614 AufschluB.
a) Httmoglobin.
Darstellung: Sie geschah nach Fr. N. Schulz*) folgendermalJen:
10 Liter Pferdeblut, das durch Zusatz von ca. 200 g Ammonium-
oxalatlosung ungerinnbar gemacht wurde, stellten wir 2 Tage zum Ab-
sitzenlassen der Blutkorperchen in den Eisschrank. Der so erhaltene
Blutkorperchenbrei wurde mit dem doppelten Volumen Wasser verdiinnt
Nach Zinnoffsky 1 2 ) soil man den Blutkorperchenbrei mit dem dreifachen
Volumen Wasser zur Auflosung bringen. Abderhalden 3 ) und Schulz
nehmen dagegen nur das doppelte Volumen und erhalten dabei eine aller-
1) Fr. N. Schulz, Zcitschr. f. physiol. Chem., Bd. 24, 1S98, p. 449
—481.
2) C. Zinnoffsky, Zeitschr f. physiol. Chem., Bd. 10.1885, p. 16—34.
3) E. A bderhalden, Zeitschr. f. Biol., Bd. 39, 1901, p. 143.
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter EiweiBspaltprodukte. 623
dings langsamere Kristallisation, aber besser ausgebildete Kristalle und eine
gnte Ausbeute.
Die Blutlosung wnrde durch eine Eisraischung abgekiihlt, mit
Aether (70 ccm auf einen Liter) gut durchgeriihrt und mit ebenfalls ge-
kiihlter gesattigter Amraoniumsulfatlosung unter fortwahrendem Umruhren
nach und nach vermischt (700 ccm auf einen Liter). Der so entstandene
blaflrote Niederschlag von Fibrinogen und Globulin stieg allmahlich in die
Hohe. Die unten stehende klare, dunkel-granatrote Fliissigkeit wurde
nach einigen Stunden abgehoben, durch abgekiihlte Papierfilter in der Kiilte
filtriert und das Filtrat* in Porzellanschalen bei Zimmertemperatur, unter
gelegentlichem Umruhren stehen gelassen.
Nach dem Abfiltrieren der dem aufschwimmenden Niederschlage an-
haftenden Mutterlauge wurde diese in gleicher Weise behandelt.
Innerhalb 3 Tagen war die Kristallisation beendet. Die Kristalle
wurden abgenutscht und zur Reinigung in moglichst wenig Wasser gelost,
mit gesattigter Ammonsulfatlosung (80 ccm auf 100 ccm) wieder ausgefallt,
abgesaugt und bei Zimmertemperatur getrocknet.
Um ein moglichst reines Praparat zu erhalten, wurde die Urafailung
noch zweimal wiederholt. Wir erhielten schlieSlich schone, meist makro-
skopisch sichtbare Kristalle, die anfangs rot, spater durch Wasser-
abspaltung und Ueberfiihrung des Oxyhamoglobins in Methamoglobin braun
geworden waren.
Die an der Luft vollstandig getrockneten, zu Kugeln zusammen-
geballten Kristalle wurden zerrieben, in moglichst wenig Wasser gelost und
durch Dialyse vollig salzfrei gewaschen. Die Loslichkeit des Salzes konnte
durch Zusatz von wenig Ammoniumkarbonatlosung wesentlich erleichtert
werden.
Ein kleiner Teil der Hamoglobinlosung wurde im Faust-Heim-
schen Apparat bei niedriger Temperatur zur Trockne eingedunstet
und so fur biologische Vereuche verwendbar gemacht.
Den anderen Teil verarbeiteten wir auf Globin.
In gleicher Weise stellten wir aus 3 Liter Hundeblut ein Hiimo-
globin dar, dessen Kristalle im Mikroskop als schone Drusen und regel-
miiSige vierkantige Saulchen zu erkennen waren. Zum Auflosen der Blut-
korperchen verwendeten wir nach Abderhalden 1 ) wieder nur das doppelte
Volumen Wasser; in schwach erwiirmtem Wasser w T aren die Kristalle
leicht loslich.
Losung: Zur Bereitung von Injektionsfliissigkeiten wurden 1 g
Hamoglobin fein verrieben und mit ca. 6 ccm Natriumkarbonatlosung an-
geriihrt und nach der vollstiindigen Losung in den Dialysierschlauch ge-
bracht. Die dann neutral reagierende Losung w T urde auf 10 ccm aufgetiillt.
Losung 10-proz.
Versuch 18. Ein 335 g sehweres Meerschweinchen bekam intra¬
ven os 0,1 g Hamoglobin. Es blieb vollkommen munter. Das Gewicht
1) E. Abderhalden.
p. 545—547.
Zeitschr. f. physiol. Chem., Bd. 24, 1898,
43*
r
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624
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giDg innerhalb 5 Tagen urn 30 g herunter, hatte aber nach weiteren 6 Tagen
bereits wieder die alte Hdhe erreicht Eine Reinjektion wurde nach 10 Tagen
mit 0,4 g Hamoglobin Bubkutan vorgenoramen, nach 1 Stunde hatte das
Tier Fieber (39.2°). Das Gewicht fing wieder an abzunehmen, nacheinigen
Tagen stieg es wieder.
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
| Bemerkungen
8. III.
Hamoglobin 0,1
335
37,0
Intravenose Injektion.
9. III.
305
37.2
Tier vollkomraen
10. III.
310
37,2
munter
ii. m.
310
1 37,8
12. III.
310
37,7
13. III.
305
38,4
14. m.
320
37.8
15. III.
330
38,6
16. III.
330
37.8
17. III.
330
37.4
18. III.
•
320
37,4
19. III.
335
37,5
20. HI.
340
37,9
21. III.
345
37.8
22. III.
345
37,2
i
23. III.
Hamoglobin 0,4
335
3.S.8
: 10*° subk. Reinjektion.
24. III.
300
38,8
10*° Temperatur 39,2 0
25. III.
290
39,0
26. III.
290
39.0
27. IH.
305
38.2
28. III.
315
38,2
Versuch 19. Ein Meerschweinchen von 350 g bekam subkutan
0,004 g Hamoglobin. Das Tier blieb mnnter. Nach 1 Stunde war die
Tabelle. 1
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkungen
16. III.
Hamoglobin 0,004
350
37,0
9 60 subkutane Injektion.
17. IH.
350
37,3
10 60 Temperatur 38 e
18. III.
350
38,0
19. HI.
330
38,0
20. III.
320
37,5
21. III.
310
37,6
22. III.
:ioo
37,9
23. III.
315
37,4
24. HI.
320
37,8
25. III.
330
37,6
26. III.
335
37,6
27. III.
340
37,8
28. IH.
335
37,8
29. m.
335
37,6
30. IH.
Hamoglobin 0,1
330
37,8
IntravenOee Injektion.
Die Haare rich ten sich
senkrecht Her be-
nommen. Ueber Nacht
Exitus
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter Eiweiflspaltprodukte. 625
Temperatur von 37° auf 38° gestiegen. In den folgenden Tagen nahm
das Tier voriibergehend ab. Nach 14 Tagen reinjizierten wir ihm intra-
venbs 0,1 g Hamoglobin: Tiefe Benommenheit und Temperaturabfall.
Ueber Nacht Exitus.
b) Globin.
Darstellung: Eine 2—3-proz. Hamoglobinlosung aus salzfreiem
Hamoglobin wurde nach Fr. N. Schulz 1 ) mit stark verdiinnter Salzsaure
versetzt, bis ein flockiger, brauner Niederschlag entstanden war. Durch
weiteren Zusatz von Saure bis zur schwach sauren Reaktion ging der
Niederschlag wieder in Losung, jedoch war diese jetzt nicht mehr blutrot,
sondern braun gefarbt. Um den auf diese Weise vom Farbstoff getrennten
EiweiSkorper zu isolieren, gaben wir ca. V 5 Volumen Alkohol und : / a Volumen
Aether zu und lieflen das Ganze l\/ 2 Stunden in der Schiittelmaschine
schutteln. Hierauf trennten wir nach Zusatz von etwas Alkohol die
iitherische Schicht von der wasserig-alkoholischen im Scheidetrichter.
Die Erfahrung hatte gelehrt, daS es zweckmaflig ist, vor dem erst-
maligen Alkoholzusatz nur gerade soviel Salzsiiure zuzugeben, bis der ent-
standene Niederschlag wieder vollig verschwunden war, und vor dem Aus-
schiitteln im Scheidetrichter aufs neue Salzsaure zuzusetzen.
Die wiisserig-alkoholische Schicht wurde filtriert und durch vorsichtigen
Zusatz von stark verdiinntem Ammoniak das Globin als schwach gelb-
gefiirbter, grob flockiger Niederschlag gefiillt. Nachdem wir diesen ab-
gesaugt, wurde er zur Reinigung in schwach essigsaurem Wasser bei ca.
40° gelost und wieder mit Ammoniak gefiillt.
Beim Versetzen mit Ammoniak war Vorsieht notig, da schon ein
geringer Ueberschufi das Globin wieder loste.
Der Niederschlag wuirde mit Alkohol und Aether gewaschen und im
Exsikator getrocknet. Die Biuret-Reaktion fiel stark, die Millon-Re-
aktion schwach positiv aus.
Auf diese Weise wurde Globin aus Pferde- und aus Hundehamoglobin
dargestellt.
Losung: Zur Bereitung von Injektionsfliissigkeiten wurden 0,3 g
Globin mit 1 Tropfen Eisessig versetzt und mit 5 ccm Wasser durch Ver-
reiben zur Losung gebracht, diese mit Natriumkarbonatlosung neutralisiert
und mit Wasser auf 10 ccm ergiinzt. Losung 3-proz.
Versuch22. Es wurden einem Meerschweinchen von 340 g 0,06 g
Pferdeglobin intravenos injiziert. Das Tier bekam sofort Kriimpfe,
schwere Dyspnoe und starb. Die Sektion zeigte starke Lungenbliihung.
Versuch 23. Einem anderen 315 g schweren Tier gaben wir 0,03 g
Pferdeglobin intravenos. Es bekam bald darauf Kriimpfe und verlang-
samte Atmung, erholte sich aber bald vollkommen.
1) Abderhalden, Handb. d. biochem. Arbeitsmethode, Bd. 2.
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Versuch 24. Em anderes Tier von 535 g wurde mit 0,02 g
Pferdeglobin subkutan injiziert. 2 1 /, Stunde nach der Injektion hatte
es Fieber (39,3 °), was sich aber bald wieder verlor. In den nachsten Tagen
nahm es stark ab.
Tabellc.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bern erkun gen
20. III.
Globin 0,02
535
37,2
9° subkutane Injektion
21. III.
505
37,0
9'6
Temperatur 35,4 0
22. III.
480
36.1
9 80
„ 37,6°
23. III.
460
37,7
liso
„ 39,3°
24. III.
460
36,8
1245
„ 37,4°
25. III.
440
38,0
26. III.
1
425
37,6
27. III.
415
37,0
28. III.
410
37,0
29. III.
410
36,8
30. III.
415
36,5
Versuch 25. Subkutan wurde ein Meerschweinchen von 290 g
mit 0,015 g Pferdeglobin gespritzt. Das Tier bekam in den folgenden
Stunden etwas Fieber, zeigte aber sonst keine Anormalitiiten. Auch hielt
sich das Gewicht ziemlich auf der gleichen Hohe. Nach 5 Tagen bekam
das Tier weitere 0,025 g Globin subkutan, die eine voriibergehende Ge-
wichtsabnahine verursachten.
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkungen
20. III.
Globin 0,015
290
38,0
8 80 subkutane Injektion.
21. III.
290
38,2
8 46 Temperatur 36,6 °,
22. III.
295
37,8
9° 37,8°, 10° 38,0°,
23. III.
290
37,6
10 46 38,5°, ll ir ’ 37,3°
24. III.
300
38,0
25. III.
Globin 0,025
310
38,0
9 16 subk. Reinjektion.
26. III.
300
37,6
9* B Temperatur 37,2°.
27. m.
290
37,5
Tier munter
28. III.
295
38,5
29. III.
295
38,0
30. in.
300 j
37,6
Versuch 26. Ein Meerschweinchen von 290 g bekam subkutan
0,015 g Pferdeglobin. Das Tier blieb munter. In den folgenden Tagen
nahm es nur wenig ab, nach 2 Wochen reinjizierten wir intravenos 0,025 g
Globin. Die Temperatur ging innerhalb 5 Minuten von 37 auf 36,3° herunter.
Aufierdem zeigte das Tier tiefe Benommenheit, setzte Faeces ab, die Haare
striiubten sich, liber Nacht starb es.
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter EiweiBspaltprodukte. 627
Tabelle
Datura
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkung
16. III.
Globin 0,015
290
37,2
10° subkutane Injektion.
17. III.
280
37,3
11° Temp. 37,4®
18. III.
265
38,4
19. III.
265
37,6
20. III.
265
37,3
21. in.
250
37,0
22. in.
250
37,6
23. III.
260
37,8
24. III.
270
37,7
25. III.
265
37,6
26. III.
270
37,6
27. III.
280
37,5
28. III.
275
37,8
29. III.
270
37.5
30. III.
Globin 0,025
270
37,0
12 15 intrav. Injektion.
Tiefe Benommenheit,
Temperatur 12 20 36,3 °.
Ueber Nacht Exitus
Versuch 27. Einem Kaninchen von 1,73 kg injizierten wir 0,1 g
Pferdeglobin intravends. Das Tier bekam sofort typische Krampfe,
schwere Dyspnoe und starb eine Minute nach der Injektion.
Versuch 28. Ein 5340 g schwerer Foxterrier bekam 0,5 g Pferde¬
globin in die Ohrvene injiziert. Das Tier setzte sofort Faeces ab,
zeigte tiefe Benommenheit und schwere Dyspnoe. Nach 2 Stunden hatte
es Fieber (40,3°), was aber bald wieder verschwancL Nach 5 Stunden
hatte sich der Hund vollkommen erholt.
Versuch 29. Einem Dackel, der 6000 g wog, spritzten wir 1 g
Pferdeglobin in die Ohrvene. Er setzte sofort Faeces ab. Nach
Stunde bekam er schwere Dyspnoe, nach 3 Stunden Fieber (40,4°).
4 Stunden nach der Injektion war die Temperatur wieder auf 39,2° herunter-
gegangen. Wahrend dieser Zeit verweigerte das Tier jede Nahrung. Abends
frafi es wieder. Ueber Nacht und am nachsten Morgen ofter Erbrechen
und Durchfall. Das Tier erholte sich aber in den nachsten Tagen voll¬
kommen. Sein Gewicht ging etwas zuriick.
Versuch 30. Ein 350 g schweres Meerschweinchen bekam 0,08 g
Hundeglobin intravenos eingespritzt. Es ging unter typischen Krampfen
akut ein; Sektionsbefund: Lungenblahung.
Versuch 31. Einem anderen Meerschweinchen von 350 g gaben
wir 0,05 g Hundeglobin in tr a vends. Kurz nach der Injektion sank
die Temperatur von 37° auf 35 Q . Das Tier bekam Krampfe, erholte sich
aber innerhalb einer Viertelstunde vollkommen. Im Laufe der nSchsten
Tage nahm es voriihergehend an Gewicht ab.
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628
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Versuch 32. Einem 5 1 /., kg schweren Foxterrier wurden in die
Ohrvene 1,2 g Hundeglobin injiziert. Das Tier zeigte sofort tiefe Be-
nommenheit, liefi Faeces, fiel um, und bekam Krampfe. Dabei zog die
Xackenmuskulatur den Kopf weit zuriick. Der Hund stohnte zuweilen
laut und zeigte miihsame, verlangsamte Atmung, zeitweise Atemstillstand.
Dann setzten wieder dieselben Kriimpfe ein bei voliiger BewuStiosigkeit
und erhaltener Erregbarkeit der Pupillarreflexe. Reflexiiberempfindlichkeit
bestand nicht. Das Herz schlug etwas irregular, aber nicht beschleunigt
Nach 10 Minuten absolutes Sistieren der Atmung bei weitergehender
Herzaktion.
Bektionsbefuud: Das Herz war stark mit Blut gefullt, das Blut un-
geronnen. In alien Diirmen sab man hoehgradige diffuse GefaBinjektion,
am stiirksten am Pylorus, nach dem Enddarm zu abnehmend. Der Magen
war da von frei.
c) Globinokyrin-a-Sulfat (s. Abschnitt III).
Darstellung: Nach Siegfried 1 ) blieb ein Gemisch von 450 g
Hiimoglobin und 4,5 kg 12,5-proz. Salzsaure 12 Tage lang im Brutschrank
bei 3S° stehen, wurde darauf mit dem gleichen Volumen Wasser ver-
diinnt und nach dem Abfiltrieren der dunklen Ausscheidung unter gleich-
zeitigem Umriihren mit 10-proz. Phosphorwolframsiiure gefiillt. Da sich
nach Kir bach 2 ) das Rohkyrinphosphorwolfraraat im UeberschuB der
Siiure wieder lost, wurde ein solcher vermieden. Der feinfiockige Nieder-
schlag wurde abgenutseht und mit 5-proz. Schwefelsiiure chlorfrei ge-
waschen. Hierauf wurde er mit ca. 2 Liter Wasser und 120 ccm 10-proz.
Ainmoniaks bei 40° verriihrt, und nachdem alles Wolframat in Losung
gegangen, so viel feingepulvertes Bariumhydroxyd eingetragen, bis eine
abfiltrierte Probe mit Barythvdrat gerade noch einen Niederschlag gab.
Es wurde abgenutseht, der Niederschlag mit heiBem Wasser ausgewaschen
und das mit den Waschwiissern vereinigte Filtrat mit kaltem Barytwasser
vollstiindig ausgefiillt. Aus dem Filtrat dieses Niedersehlages wurde durch
Zusatz von Ammoniumkarbonatlosung der geringe BarytuberschuB beseitigt.
Das Bariumkarbonat wrnrde abgenutseht und das Filtrat auf dem W&«ser-
bade bis zur Sirupkonsistenz eingediimpft.
Der iiberschussige Ammoniak entwich dabei vollig. Durch mehr-
maligen Zusatz von destilliertem Wasser konntedas Verjagen des Ammoniaks
beschleunigt w r erden.
Der erhaltene Sirup (140 g) wurde in die vorher abgekiililte Mischung
von 54 ccm Wasser und 54 g konzentrierte Schwefelsaure aufgenommen
und mittels Tropftrichters in 8 Liter absoluten Alkohol unter stetem Um¬
riihren eintropfen gelassen. Die ausgeschiedenen gelblichen Flocken wurden
schnell abgesaugt, mit 99-proz. Alkohol und wasserfreiem Aether gewaschen
und iiber Schwefelsaure getrocknet.
1) M. Siegfried, Zeitschr. f. phys. Chem., Bd. 43, p. 46 (1904).
2) H. Kir bach, Zeitschr. f. phys. Chem., Bd. 50, p. 130.
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter Eiweiflspaltprodukte. 629
Das so gewonnene Rohsulfat (110 g) wurde in 62 ccm 5-proz. Schwefel-
saure geldst, die geringe Triibung durch Filtrieren beseitigt. Die Sulfat-
losiing wurde dann wie oben in 8 Liter absoluten Alkohols verruhrt, ab-
gesaugt, mit 99-proz. Alkohol und Aether gewaschen und im Exsikkator
getrocknet.
Die zweite Umfallung erfolgte in gleicher Weise durch Aufloeen des
Sulfats in 3-proz. Schwefelsaui^ und Verriihren der Losung in 8 Liter
absoluten Alkohols.
Um ein vollkommen reines Pr¶t zu bekommen, mufiten noch
mehrere Umfallungen vorgenommen werden. Die Verluste waren bei den
ersten Umfallungen ganz erhebliche. Sie betrugen, wie beigefiigte Tabelle
zeigt, bis zu 25 Proz.
Es wurde das feste Sulfat jedesmal in der entsprechenden Menge
2-proz. Schwefelsaure geldst und sofort wieder in absolutem Alkohol als
festes Sulfat gefallt, zuletzt 2 Stunden bei 95° im Trockenschrank getrocknet.
Im ganzen nahmen wir zwolf Umfallungen vor. Der Gesamtstickstoff
stieg dabei bis auf 13,52 Proz. (Kjeldahl). Aus Mangel an geniigendem
Material mufiten wir von weiteren Umfallungen Abstand nehmen. Aus-
beute 5 g.
Zusammenstellung der zur Reinigung des Rohsulfats
notigen Umfallungen.
ccm des
h ? so 4 -
haltigen
Wassers
%-Gehalt
an H. 2 S0 4
ccm von
99 %
Alkonol
Ausbeute
Stick-
stoff-
gehalt
0 /
'O
Rohsulfat
L Umfallung
62
5
8000
110 g
75
ii.
45
3
8000
45
m.
23
3
5500
35
12,6
IV.
18
2
3750
23
v.
12
2
2250
18
VI.
10
2
1150
15
VII.
9
2
1100
13
13,04
VIII.
8
2
850
11
IX.
7
2
780
9
X.
6
2
650
7,5
XI.
6
2
600
6
XII.
5
2
| 500
5 I
13,52
Das schwach gelb gefarbte Pulver 16ste sich leicht im Wasser und nur
wenig im Alkohol. Die Biuretreaktion verlief positiv, die Millonsche
Reaktion negativ.
In gleicher Weise suchten wir ein Globinokyrin direkt aus dem reinen
Eiweifik5rper des Blutes, dem Globin, darzustellen. Zu diesem Zwecke
wurden 100 g aus kauflichem Hamoglobin gewonnenes Globin mit einer
12,5-proz. Salzsaure bei Bruttemperatur 12 Tage stehen gelassen und dann
wie oben weiterverarbeitet
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630
A. Schittenhelm und W. Weichardt,
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Wir erhielten nach 3 Umfallungen 3,5 g Kyrin, das die gleichen
Eigenschaften, wie daa aus Hamoglobin dargestellte, zeigte.
Losung: Das Kyrinsulfat wurde jeweils zur Injektion in moglichst
wenig Wasser gelos t und neutralisiert.
Versuch 33. Ein Meerschweinchen von 430 g wurde mit 0,1 g
Globinokyrinsulfat intravenos injiziert Das Tier war sofort stark affi-
ziert, erlitt einen Temperatursturz von 37 auf 34,6° innerhalb 5 Minuten,
bekam Kriimpfe und starke Dyspnoe. Nach einigen Minuten erholte sich
das Tier wieder. V 4 Stunde nach der Injektion w r ar die Temperatur bis
auf 34,1° gesunken. In den folgenden Tagen nahm das Tier bei normaler
Temperatur stark ab (60 g innerhalb 11 Tagen).
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkungen
9. III.
Globinokyrin-a-
430
37,0
10 16 intrav. Injekt. Tier
10. III.
Sulfat 0,1
425
38,6
sofort stark mitgenom-
11. III.
420
38,6
men. 10 28 Temp. 34,6°,
12. III.
1
1
390
38.6
Kriimpfe, Dyspnoe, nach
13. III.
400
37,0
einigen Minuten erholt
14. III.
405
37,2
sich das Tier
15. III.
390
37,4
16. III.
390
38,4
17. III.
390
37,5
13. III.
1
380
37,5
19. HI.
375
38,5
20. III.
370
37,9
21. III.
380
38,2
22. III.
380
37,9
Versuch 34. Einem anderen 350 g schweren Meerschweinchen
gaben wir 0,1 g Globinokyrin-a-Sulfat intravends. Kurz nach der In¬
jektion sank die Temperatur von 37,2 auf 35,1°, nach 10 Minuten war sie
bereits wieder bis 38,0° gestiegen. Das Tier blieb ganz munter. In den
folgenden Tagen nahm es bei normaler Temperatur stark ab.
Tabelle.
Datum
Injektion
Gewicht
Temperatur
Bemerkungen
23. III.
!
Globinokyrin-a-
350
37,2
10 15 intrav. Injekt. Tier
24. III.
Sulfat 0,1
350
38,4
mitgenommen. lO^Tem-
25. III.
340
37,4
peratur 35,1 °, 10 ao Tem¬
26. III.
335
37,5
peratur 38,0®.
27. III.
330
37,8
28. III.
350
37,8
29. III.
360
37,6
30. III.
1
365
37,5
Gck igle
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter EiweiBspaltprodukte. 631
Aus diesen Versuchen geht folgendes hervor:
Das Hfimoglobin hatte in relativ groBen Dosen (0,1 g
intravenos, 0,4 g subkutan)aufiereinerleichten Beeinflussung der
Temperatur keinerlei Wirkung. Im Versuch 19, wo nach
vorhergehender Sensibilisierung eine intravenose Reinjektion
nach 14 Tagen vorgenommen wurde, starb das Tier an einer
Dosis, die sonst vollig unschadlich war. Es liegt also hier eine
Ueberempfindlichkeit vor.
Das Pferdeglobin war erheblich giftiger als das ur-
spriingliche Hamoglobin. Die todliche Dosis fiir ein Meer-
schweinchen liegt zwischen 0,03—0,06 g. Durch 0,03 g werden oft
voriibergehende Kr&mpfe und Dyspnoe verursacht. Post mortem
fand sich ausgesprochene Lungenbl&hung. Im allgemeinen
zeigte sich bei subletalen Dosen zun&chst Fieber, in den
folgenden Tagen eine rapide Gewichtsabnahme. Bei einem mit
Globin sensibilisierten Tier fiihrte eine nach 14 Tagen aus-
gefiihrte intravendse Reinjektion mit einer unter-todlichen
Dosis zu defer Benommenheit, Temperaturabfall und Exitus,
dem Ausdruck einer anaphylaktischen Reaktion (Versuch 26).
Kaninchen starben bei intravenoser Injektion durch Dosen von
0,075 bis 0,1 g (siehe auch Blutdruckversuche). Ein Hund
bekam auf eine intravenose Injektion von 0,5 g Pferdeglobin
Fieber und Atemnot, verbunden mit defer Benommenheit, die
l&ngere Zeit anhielt. Ein anderer Hund bekam auf 1 g Pferde¬
globin Fieber, Erbrechen und anhaltenden Durchfall.
Das Hundeglobin hatte im Meerschweinchenversuch die-
selben Wirkungen wie das Pferdeglobin. Besonders interessant
war ein Hundeversuch, bei dem das arteigne Globin in
einer Dosis von 1,2 g intravends injiziert zu einem schweren
Krankheitszustand mit tiefer Benommenheit und Krfimpfen,
ferner starker Atemstorung fiihrte. Der Tod trat infolge
Atemlahmung ein. Die Sektion ergab ein Bild, wie wir es
von der Enteritis anaphylactica her kennen.
Das Globinokyrin erwies sich in einer Menge von 0,1 g
als schwach toxisch. Die Tiere bekamen etwas Temperatursturz,
ein Tier voriibergehende Kr&mpfe und Dyspnoe, Erscheinungen,
die bereits nach einigen Minuten wieder behoben waren. Das
Kdrpergewicht nahm einigeTagelangab. Das Globinokyrin
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£32 A. Schittenhelm und W. Weichardt,
hat sich also als wesentlich wenigergiftigalssein
Ausgan gsprod ukt, das Globin, erwiesen.
m. Qruppe der Kyrine.
Die Kyrine werden aus den EiweiCkOrpern nach den
Siegfriedschen Angaben durch Saurehydrolyse bei Brut-
schranktemperatur gewonnen. Sie stellen die diaminosaure-
reichen Kerne der Eiweifikorper dar. Es war von besonderem
Interesse, diese Substanzen zu untersuchen, um zu erfahren,
ob sie im Verhaltnis zu ihren Ausgangsprodukten Aenderungen
der Giftwirkungen erkennen lassen, und um so etwaige Auf-
schliisse liber die Beziehungen von Konstitution und Wirkung
zu erhalten.
a) Gliitokjrln-a-Sulfat.
Darstellung: !Sie geschah nach M. Siegfried 1 ) folgendcrmaften:
Ein (iemisch von 400 g Gelatine und 4 kg 12,5-proz. Salzsiiure be-
lieUen wir 12 Tage lang im Brutechrank bei 38°. Die Fiiissigkeit wurde
hierauf mit der gleiehen Menge Wasser verdiinnt und nach dein Ab-
filtrieren des leichtllockigen Niederschlags unter fleifiigera Umriihren mit
10-proz. Phosphorwolframsaure gefiillt. Auch hier verrnieden wir einen
UeberschuB von Phosphorwolframsaure. Der feinfiockige weiBe Nieder-
schlag wurde abgenutscht und mit 5-proz. Schwefclsiiure chlorfrei ge-
waschen. Hierauf verriihrten wir ihn mit ca. 2 Liter Wasser und ICO com
10-proz. Ammoniaks bei 40° und gaben, als alles Wolframat gelost war,
Bariumhydroxyd zu, bis eine abfiltrierte Probe mit Barythydrat gerade
noch einen Xicderschlag gab. Es wurde abgenutscht., der Rest der Phos¬
phorwolframsaure durch gesiittigtes Bariumhydrat ausgcfiillt. Den geringen
UeberschuB von Baryt beseitigten wir durch Zusatz von Ammonium-
karlxinat. Das Filtrat wurde sodann zur Reinigung so lange nut konzen-
tricrter wiisseriger Bleiacctatldsung versetzt, als gerade noch ein Xiederschlag
entstand. Das Blei entfernten wir nach dem Abfiltrieren des Xlederschlags
durch Einleiten von SchwefelwasserstofT. Nach dem Abfiltrieren des Blei-
sulfids wurde die Fliissigkeit auf dem Wasserbade bis zur Sirupkonsistenz
eingedampft. Das in der Losung enthaltene ALmmoniumacetat entwich
dabei vollstiindig.
Die Weiterverarbeitung geschah, wie wir sie bereits beim Globino-
kvrin-a-Sulfat beschrieben.
Im ganzen konnten 8 Umfiillungen vorgenommen werden.
Die chemischen Eigenschaften dieses Glutokyrin-a-Sulfats waren die¬
sel ben wie beim Globinokyrin-a-Sulfat
Losung wie beim Globinokyrin.
1) M. Siegfried, Ber. d. math.-phys. Klasse der Kgl. Siichs. Ges.
d. Wissensch. zu Leipzig.
Gck .gle
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter EiweLBspaltprodukte. 633
Versuch 35. 0,1 g Glutokyrin-a-Sulfat wurden einem Meerschwein-
chen von 260 g intravenos injiziert. Das Tier blieb munter.
Versuch 36. Einem zweiten Tier von 285 g gaben wir 0,2 g
Glutokyrin-a-Sulfat intravenos. Auch diese Dosis hatte keine toxische
Wirkung.
Das Glutokyrin-a-Sulfat erwies sich in Dosen von 0,1 bis
0,2 g als vdllig ungiftig. Es l&Bt sich also hier gegenuber
dem Ausgangsprodukt, der Gelatine, welche gleichfalls in
diesen Mengen keine Wirkungen hervorbringt, kein Unter-
schied feststellen.
Das Globinokyrin-a-Sulfat dagegen hatte, wie wir schon
oben zeigten, eine gewisse Giftwirkung. Auch aus den Ver-
suchen von Schittenhelm und Weichardt, die sie mit
einem von Prof. Siegfried iiberlassenen Praparate anstellten,
ergab sich eine wechselnde Toxizitat, welche aber in keinem
Falle hohere Grade erreichte und vor allem nie an die Wirkung
des Globins und des Histons herangereicht hat.
Die Kyrine beeinflussen trotz ihrer Allgemeinwirkung in
intensiver Weise die Blutgerinnung (siehe p. 634).
B. Blutdruckversuche 1 ).
Versuch 37. Einem Kaninchen von 1,8 kg injizierten wir 0,01 g
His ton intravenos. Es folgte eine voriibergehende Blutdrucksenkung von
115 mm auf 86 mm.
Versuch 38. 0,02gHiston bewirkten beieinem anderen Kaninchen
tiefe Blutdrucksenkung, Pulsverlangsamung, Atembeschwerden. Kriimpfe,
bald darauf Absinken des Blutdruckes bis zur Nullinie und Exitus.
Versuch 39. 0,05 g eines von der Firma Hoffmann-La Roche
dargestellten Histons verursachten ebenfalls starke Blutdrucksenkung und
bald darauf Herzstillstand.
Versuch 40. Einem 1,85 kg schweren Kaninchen wurden zuerst
0,03 g Nukleohiston injiziert Bald darauf gaben wir weitere 0,15 g
Nukleohiston intravenos. Es zeigten sich keine Blutdruckiinderungen.
Versuch 41. 0,1 g Pferdehamoglobin wurde einem Kaninchen
intravenos gegeben. Eine Wirkung auf den Blutdruck war nicht vorhanden.
Versuch 42. 0,025 g Globin bewirkten bei einem 1,75 kg schweren
Kaninchen starke Blutdrucksenkung, weitere 0,02 g den Tod.
Versuch 43. 0,05 g Pferdeglobin, auf einmal eingespritzt,
wirkten auf ein 1,8 kg schweres Kaninchen sofort todlich. Die Blutdruck-
1) Bei diesen Versuchen stellte uns in dankenswerter Weise Herr
Prof. Heinz seine Apparate zur Verfugung.
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634
A. Schittenhelm und W. Weichardt,
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kurve sunk schnell bis zur Nullinie. Bei der sofortigen Oeffnung des Tieres
zeigt sich, wie auch ini vorigen Versuch, eine Liihmung des linken Ventrikels.
Versuch 44. 0,05 g eines aus kauflichem Hamoglobin dargestellten
Globing hattcn dunselben EfFekt.
Versuch 45. 0,2 g G1 obi n okyrin-a-Sulfat hatten beim Ka-
nincnen kcinen EinfluG auf den Blutdruck. Auch fielen die Blutdruck-
versuche mit 0,2 g eines von uns dargestellten Glutokyrin-a-SuIfats
und solche mit 0.25 g Kaseinokyrin-Sulfat, das uns von Herra
Prof. Siegfried in dankenswerter Weise zur Verfiigung gestellt war,
negativ aus.
Die Resultate der Blutdruckversuche stehen im allgemeinen
in guter Uebereinstimmung mit den (ibrigen. Das Nukleo-
histon zeigte ebenso wie das Hemoglobin keinerlei
Einfliisse auf den Blutdruck. Das Histon und das Globin
fiihrten zu einer tiefen Blutdrucksenkung, welche bei
Dosen von 0,05 g das Herabsinken bis zur Nullinie verursachten.
Die Kyrine hatten keinen EinfluB auf den Blutdruck.
C. Blutgerinnung8ver8uche.
Die Beeinflussung der Blutgerinnung durch Peptone ist
seit der Untersuchung von Schmidt-Mttlheim 1 ) und
Fano 2 ) eine bekannte Erscheinung. Wir stellten auch mit
unseren Priiparaten entsprechende Versuche an.
Die Praparate wurden in 2-proz. Losung, der wir gleiche
Mengen physiologischer Kochsalzlosung zugaben, mit frischem
Kaninchenblut auf 1 Proz. verdiinnt, je 2 ccm dieser Mischung
wurden in kleinen GlasnSpfchen zur Gerinnung angesetzt.
Als Kontrolle diente die entsprechende Mischung von
Blut mit physiologischer Kochsalzlosung, welche bereits nach
8V 2 Minuten geronnen war. Nach 10 Minuten gerann die
Probe mit Globin, nach 3372 Minuten die mit Globinokyrin-
a-Sulfat und mit Glutokyrin-a-Sulfat, w&hrend die Proben mit
Histon, Nukleohiston und Nukleoproteid nach l l / s Stunde noch
nicht geronnen waren, was mit der bereits von Pick und
Spiro 3 ) erkannten Peptonwirkung in Uebereinstimmung steht.
1) A. Schmidt-Miilkeim, Beitrag zur Kenntnis des Peptons und
seiner phvsiologiscken Bcdeutung, 1S80, p. 33.
2) Fano, Arch. f. Anat. u. Physiol., Phys. Abt., 1881, p. 277.
3) Pick und Spiro, Zeitschr. f. physiol. Chem., Bd. 31,1900/1, p. 34.
Gck igle
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Wirkung bestimmter parenteral einverleibter EiweiiJspaltprodukte. 635
Zusammenfassung.
Aus den Versuchen geht hervor, daB die zusammen-
gesetzten EiweiBkflrper als solche relativ un-
gif tig sind. Sie wirken in den angewandten Dosen nicht
auf den Blutdruck; sie fflhren zu keinen besonderen allge-
meinen Symptomen. Die EiweiBkomponente der zu-
sammengesetzten Proteine (Globin, Histon, Protamin)
erwies sich bei den Untersuchungen im Gegensatz zu den
einfachen Proteinen (Kasein usw.) als giftig. Sie
fiihren zu einer intensiven Blutdrucksenkung, sie
beeinflussen die Atraung, Blutgerinnung, die Tem-
peratur und fflhren in geringen Dosen zum Tod. Dabei
ist bemerkenswert, daB diese Wirkung auch den arteigenen
EiweiBkorpern zukommt.
Nach den Resultaten, die mit den Protaminen und
Histonen erhalten waren, schien die Moglichkeit gegeben, daB
diese Wirkung mit dem Reichtum an Diaminosauren zu-
sammenhflngt. Es zeigte sich aber bereits beim Globin,
dessen Diaminosfluregehalt den des Kaseins kaum ttbersteigt,
daB dieser allein fflr die Giftigkeit nicht ausschlaggebend
ist. Das wird noch weiter bestfltigt durch die relative Un-
giftigkeit der diarainosflurereichen Kyrine und des flhnlich
zusammengesetzten Histopeptons, welche gewissermaBen den
diaminosflurereichen Kern ihrer Ausgangsproteine darstellen.
Die toxischen Eigenschaften beruhen zweifellos auf ihrer
eigenartigen Gesamtkonstitution, in der dann
immerhin bei den Histonen und Protaminen der Reichtum
an Diaminosfluren, bei dem Globin der besonders hohe Gehalt
an Histidin, eine Rolle spielt, Charakteristika, durch die
sie sich gegenflber den anderen toxischen EiweiBkorpern aus-
zeichnen.
Die Versuche bestatigten wieder die von Schittenhelm
und Weichardt betonte und experimentell festgestellte Tat-
sache, daB an und fflr sich giftige EiweiBkorper auf zweierlei
Weise entgiftet werden konnen, entweder durch Paarung
mit an und fflr sich indifferenten Substanzen, wie
Nukleinsaure usw. Oder durch Aufspaltung in Korper von
kleinerer MolekulargrdBe.
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636 Schittenhelra und Weichardt, Biologische Wirkung etc.
Der entgiftende Paarling ftir das Hemoglobin ist das
H&mochromogen. Die Auffindung der Giftigkeit des
Globins und dessen Entgiftung durch das HSmo-
chromogen ist fflr das Verstandnis verschiedener patho-
logischer Erscheinungen von Bedeutnng. So scheint sie uns
eine Erklarung fur das Auftreten von Giften bei der HSmo-
lyse roter Blutkbrperchen zu sein. Auch bei anderen
pathologischen Prozessen spielt die Giftigkeit des Globins
eine Rolle, bei den Attacken der H&moglobinuriker, Zwischen-
fallen bei Bluttransfusionen usw. Ebenso sind die toxischen
Eigenschaften des Histons und der Protamine bei manchen
pathologischen Affektionen (z. B. Pankreasnekrose) von Be-
deutung 1 ).
Wir miissen hier noch die interessante Tatsache be-
sonders hervorheben, daB im AnschluB an die intravenose
resp. subkutane Applikation der untersuchten Substanzen bei
den Versuchstieren ein chronischer kachektischer
Zustand sich entwickelte, der sich in der stSLndig
zunehmenden Gewichtsabnahme und in zuweilen leichten
Temperaturschwankungen geltend machte. Wahrend sich die
einen Tiere nach einiger Zeit wieder langsam besserten,
fiihrte bei den anderen die Affektion zum Exitus. Worin der
Mechanismus der Erkrankung im einzelnen besteht, konnten
wir bis jetzt nicht mit Sicherheit auffinden. Jedenfalls aber
scheint uns die Kachexie erzeugende Eigenschaft dieser
parenteral wirkenden EiweiBprodukte bemerkenswert und mit
ihrer Konstitution in Zusammenhang zu stehen. Wir mochten
sie als proteinogene Kachexie bezeichnen.
1) 1. c. Miinchn. med. Wochensehr., 1912, No. 20.
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Friedberger, Ueber einen neuen keimdichten VerechluB etc. 637
Naclidruck verboten.
[Aus dem Pbarmakologiscben Institut der Universitat Berlin;
Direktor: Geheimrat Prof. Dr. A. Heffter (Abteiluug fur Im-
munit&tsforschung und experimentelle Therapie, Leiter: Prof.
Dr. E. Friedberger).]
Ueber einen neuen, keimdichten VerschluB fiir Zentri-
fagcnrffhrchcn und Kulturgef&Be.
Von E. Friedberger.
Mit 2 Figuren im Text.
(Eingegangen bei der Redaktion am 13. Juni 1912.)
Die Verwendung des iiblichen Watteverschlusses fur
sterile KulturgefaCe, die beziiglich der Luftdurchlassigkeit und
der Keimdichtigkeit nichts zu wiinschen tibrig laBt, ist doch
unangebracht, sobald es gilt, eine Fliissigkeit unter aseptischen
Kautelen zu zentrifugieren.
Denn bei einigermaBen erheblicher Umdrehungszahl wird
auch ein festeingedrehter Wattepfropf leicht in das Innere des
Rohrchens hineingeschleu-
dert werden.
Ich habe deshalb die
nebenstehend abgebildete
VerschluBkappe aus Metall
fiir Zentrifugenglaser an-
fertigen lassen, durch die
gleichfalls eine geniigende
Keimdichtigkeit gewahr-
leistet wird, und die Sto-
rungen, wie sie beim Watte-
pfropfenverschluB bestehen,
vollkommen wegfallen. Diese
VerschluBkappe besteht aus
einer vernickelten Blechhiilse, deren oberer Rand etwas um-
gebogen ist, und im Inneren, zwischen zwei Drahtnetzlagern
festgehalten, eine keimundurchltissige Schicht von Asbestwatte
tragt; unten ist die Hiilse so ausgezackt, daB sie aus federnden
Lamellen besteht, was die bequeme Anpassung auch an Zentri-
ZeiUchr. f. Immanitiitsforschong. Orig. Bd. XIV. 44
Fig. 1.
Fig. 2.
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G38 Friedberger, Ueber einen neuen kcimdiehten Verschlufi etc.
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fugenrohrchen verschiedenen Durchmessers innerhalb gewisser
Grenzen gestattet.
Da die VerschluBkappe dem Rande des Zentrifugenrohr-
chens von auBen aufsitzt, so ist natflrlich ein Hineinscbleudern
des Verschlusses in die Fliissigkeit auch beim stflrksten Zentri-
fugieren ausgeschlossen. Ferner kann man die Rohrchen viel
holier fflllen, als es der Fall ist, wenn die Watte hineinragt.
Ein entsprechender VerschluB l&Bt sich natflrlich auch
fur sterile KulturgefaBe (ReagenzglSser, Erlenmeyer-Kol-
ben usw. mit Nahrmedien) anwenden. Hier wird zwar der
WatteverschluB, was Luftdurchlassigkeit und Keimdichtigkeit
anbelangt, alien Anforderungen gerecht, er hat aber doch Nach-
teile, die bei unserem VerschluB in Wegfall kommen. Zunflchst
haftet hflufig beira Herausnehmen des Pfropfens die Watte an
der Innenwand des Glases fest, was beim AusgieBen der Nahr¬
medien zu Platten beim Entnehmen von Eulturmaterial mit
der Oese usw. lflstig ist.
Sodann ist bei dem AusgieBen der verflflssigten Nahr¬
medien beim gewflhnlichen WatteverschluB der Rand des
Reagenzglases nicht steril und muB vorher abgeglflht und
wieder erkaltet werden. Auch kommt beim Ueberimpfen von
Kulturen die untere Fiache des Wattepfropfens naturgemaB
mit der Luft in Beruhrung und muB deshalb vor dem Wieder-
einstecken abgebrannt werden. SchlieBlich sind die Watte-
pfropfe selten mehrmals verwendbar. Alle diese Nachteile
fallen bei unserem VerschluB weg. Namentlich bleibt der Rand
des Reagenzglases, durch die Metallhttlse gedeckt, von vorn-
herein steril und braucht nicht abgeglflht zu werden. Auch lafit
sich unsere VerschluBkappe durch die Verwendung von Asbest
an Stelle von Watte zur Einlage jederzeit wieder verwenden.
Urn eine Verdunstung von Kondenswasser zu verhflten,
empfiehlt es sich, an Stelle der bei WatteverschluB flblichen
Gummikappe eine Guttaperchascheibe von entsprechendem
Durchmesser auf den zuvor leicht erwflrmten oberen flber-
ragenden Rand der VerschluBkappe aufzulegen und leicht
anzudrttcken.
Natflrlich stellt sich der Preis dieser VerschluBkappe
holier als ein WatteverschluB, doch wird dieser Umstand auf
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Teodorascu, Verhalten von Paratyphus B- u. Pestifer-Stammen. 639
die Dauer durch die M6glichkeit der immer erneuten Ver-
wendung ausgeglichen.
Ein gewisser Nachteil besteht darin, daB man nur Rea-
genzgl&ser mit der Kappe verschlieBen kann, die oben keiuen
Rand haben. Solche Glaser aber sind fur bakteriologische
Zwecke ja auch sonst vielfach gebr&uchlich.
Die VerschluBkappe wird von der Firma F. & M. Lauten-
scblager-Berlin hergestellt.
Nachdruck verbotcn.
[Aus der Bakteriologischen Abteilung des ELaiserlichen
Gesundheitsamtes.]
Untersuchungen ttber das agglutinatorische Verhalten von
Paratyphus B- and Pestifer-Stammen 1 ).
Von Dr. Teodorason,
Freiwilligcm Hilfsarbeiter im Kaiserlichen Gesundheitsamte.
(Eingegangen bei der Redaktion am 22. Juni 1912.)
Von Haendel und Gildemeister war im vorigen
Jahre kurz darauf hingewiesen worden, daB bei ihren Unter-
suchungen einige Suipestifer- und Paratyphus B-Kulturen
gegeniiber Seris, welche mit den kulturell von der Paratyphus-
gruppe vollkommen verschiedenen Voldagsen- und Glaesser-
Stammen hergestellt waren, insofern ein auffallendes Verhalten
gezeigt batten, als die Suipestifer-Kulturen durch die betreffen-
den Sera sehr hoch, zum Teil bis zur Titergrenze mitaggluti-
niert, die Paratyphus B-Stamme dagegen iiberhaupt nicht Oder
nicht in nennenswerter Weise beeinfluBt wurden. Ich habe
nun mit einer grbBeren Anzahl aus dem Menschen und aus
Schweinen isolierter, der Paratyphusgruppe zugehoriger Stamme
einige Versuchsreihen bezflglich des agglutinatorischen Ver-
haltens dieser Kulturen gegeniiber Paratyphus-, Suipestifer-,
Voldagsen- und Glaesser-Seris angestellt, iiber deren Ergebnisse
ich Ihnen mit wenigen Worten berichten mochte.
Insgesamt waren zu den Versuchen annahernd 50 Stamme
herangezogen, von denen je etwa die Haifte aus menschlichem
1) Vortrag, gehalten auf der 6. Tagung der Freien Vcreinigung fur
Mikrobiologie in Berlin 1912.
44*
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640
Teodorascu,
Stuhl, bzw. aus Organen von Schweinen geziichtet waren.
Einige Kulturen stammten aus Schlachtprodukten. Zun&chst
prflfte ich die Starame gegenfiber einigen mit Paratyphus B-
Kulturen vom Menschen hergestellten agglutinierenden Sens.
Zwei der Sera waren von Kaninchen, eines dnrch Behandlung
eines Esels gewonnen. Die Ergebnisse dieser Versuchsreihe
sind aus der Tabelle I ersichtlich.
Tabelle I.
Agglutinat. Verhalten von Paratyphus B- und Pestifer-Stammen. 641
1:100 |l: 500
1:1000
1:3000
1:5000
1:10000
Agglutination desselben Serums mit Stammen vom Menschen.
| 1. P. B 2
1. P. B Storch
1. P. B Reich
2. P. B Strafiburg, 2. P. B Engl
3. P. B Sticker
3. P. B Scheib.
4. P. B Walk
4. P. B Wager
5. P. B
5. P. B Xeunkirchen
6. P. Aert
6. P. B Hiib.
7. Runge
7. P. B Brtick
j; j .j
8. Wagner
8. P. B Maafi
9. P. B Breslau
10. P. B Schottmiiller
11. P. B Tietz
12. P. B Hellwig
1:100
1:500
1:1000
1:3000
1:5000
| 1:8000
Paraty]
1. Glaesser
Dhus B
1
1
-Esclserum-Titer
1. P. 469 Leber
:
1:8000. Agglutinat
1. Dr.
2. Wurst
3. P. 459 Leber
4. P. 442 Darra
5. P. 468 Milz
6. P. 459 Lunge
7. P. Harn
8. P. K.
9. P. 270
10. P. 204
11. Voldagsen
;ion mit Stammen voi
1. P. 654
2. Salami
3. P. 590
4. P. 468 Darm
5. P. 242
n Schwein.
1. P. 417
2. Suipe8tifer
3. P. 200
Agglutination desselben Serums mit Stammen vom Menschen.
1
1. Parat. B 2
1. Storch
2. Wagner
2. Hellwig
3. Reich
4. Straftburg
5. Engl
6. Maa6
7. Walk
8. Tietz
9. Parat. B
10. Aert.
1. Runge
2. Sticker
3. Scheib.
4. Wager
5. Neunkirchen
6. Hub.
7. Brtick
8. Breslau
9. Schottmiiller
Schon bei diesen Versuchen zeigten die von Menschen
und Schweinen stammenden Stamrae zum Teil ein etwas ver-
schiedenes Verhalten. Verfolgen wir zunachst die mensch-
lichen Paratyphusstamme, so sehen wir, daB von jedem der
3 Sera etwa die Halfte dieser Kulturen bis zur Titergrenze
und jeweils fast alle Kulturen doch fiber die Halfte des Serum-
titers gut agglutiniert werden. Nur ganz vereinzelte Stfimme
wurden hochstens bis zu einem Drittel des Serumtiters und
nur ein Stamm der P. B 2 noch in geringerer Weise beein-
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642
Teodorasea,
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fluBt. Ganz anders ist das Verhalten der aus den Schweinen
und aus Schlachtprodukten erhaltenen Kulturen. Von diesen
wird die Hauptmasse nur etwa bis zu einera Drittel des Ag-
glutinationstiters der Sera agglutiniert, und nur ein verhaitnis-
milBig kleiner Teil der Stamme wird bis zur Halfte des Ag-
glutinationswertes Oder bis zur Titergrenze beeinfluBt. Die
Stamme verhalten sich allerdings dabei den einzelnen Seris
gegeniiber nicht gleichmaBig, wir sehen einen Stamm durch
das eine Serum hoher beeinfluBt wie durch die iibrigen und
bei anderen Stammen wieder das umgekehrte Verhalten.
Auch sind die Abweichungen in dem agglutinatorischen Ver¬
halten der beiden Kulturengruppen, der aus dem Menschen
und aus dem Schweine gewonnenen Stamme, nicht so grofi,
dafi man daraus weitergehende Schlusse ziehen k5nnte. Be-
merkenswert aber erscheint es, daB der heterologe Bac. Vol-
dagsen von alien 3 Seris recht gut mitagglutiniert wird, der
Bac. Glaesser dagegen so gut wie unbeeinfluBt bleibt. Ein
etwas anderes Ergebnis lieferte die Untersuchung mit 2 Sui-
pestifer-Eselseris, indem diesen gegenQber die Unterschiede in
Tabelle II.
1:100
1:500
1:1000
1:2000
Buipestifer-Eselserum-Titer 1: 2O00. Agglutination mit Stammen
vom Schwein.
1. Glaesser
1. Dr.
2. P. 654
3. Wurst
4. Salami
5. P. 417
6. Suipestifer
7. P. 159 Leber
8. P. 442
9. P. 4(38 Milz
I 11. P. Harn
I 12. P. K.
13. P. 270
14. P. 242
15. P. 204
16. P. 590
17. P. 200
18. P. 468 Darm
19. P. 469 Leber
10. P. 459 Lunge , 20. P. Voldagsen
Agglutination
mit Stammen vom Menschen.
1. Storch
2. Range
3. Hell wig
4. Parat. B 2
5. Strafiburg
6. Sticker
7. Engl
8. Scheib.
9. Wager
10. Neunkirchen
11. Hub.
12. Briick
13. Maa3
14. Walk
15. Breslau
16. Wagner
17. Schottmuller
18. Tietz
19. Parat. B
20. Aert.
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Agglutinat. Verhalten von Paratyphus B- und Pestifer-Stammen. 643
der AgglutinabilitSt bei alien St&mmen nur BuBerst gering
waren. Auch als ich ein verh<nismBBig niederwertiges Serum
anwandte, in der Hoffnung hier groBere Differenzen zu finden,
bestatigte sich diese Annahme nicht, indem alle Kulturen mit
einer Ausnahme bis zur Titergrenze, wenn auch verscbieden
kraftig, beeinfluBt wurden. (Siehe Tabelle II.)
Auch hier agglutinierten die Sera den Bacillus Voldagsen
bis zum Grenzwerte und lieBen den Bacillus Glaesser ziemlich
unbeeinflufit. Als ich dann die Kulturen mit einem Voldagsen-
Kaninchen serum vom Titer 1:10000 priifte, traten aber deut-
lichere Unterschiede zwischen den beiden Gruppen hervor
(Tabelle III).
Tabelle IH.
1:100
1:500
1:1000
1:3000
1:5000
1:10000
Volda
1
gsen-Kanii
ichenserum-Ti
i
|l.P.654Darm
iter 1:10 000. Ag|
rom Schwein.
11. P.200
glutination
11. Pest 590
mit Stammen
1 1. P. Dr.
2. P. 417 Darm
3. Suipestifer
2. P. Wurst
3. P. Salami
4. P. 459 Leber
5. P. 442
6. P. 468 Milz
7. P. 459 Lunge
8. P. Ham
9. P. K.
10. P. 270
11. P. 242
12. P. 204
13. P. 469 Leber
14 P. 459
15. P. 468 Darm
16. Voldagsen
17. Glaesser
Agglutination deeselben Serums mit St&mmen vom Menschen.
1. Wagner I
1. Storch II. Strafiburg
2. Runge |2. Engl
3. Hellwig 3. Brack
4. Reich 4. Maafi
5. Walk 5. Aert.
1. P. B Sticker
2. P. B Scheib.
3. P. Neunkirchen
4. P. Hub.
5. P. Breslau
6. P. Schottmuller
7. P. Tietz
8. P. B
1. Parat. B. 2
Es wurden zwar von diesem heterologen Serum sowohl
Pestifer- wie auch Paratyphusst&mme mitagglutiniert, die Be-
einflussung der Pestiferkulturen ging aber meist bis zur Titer¬
grenze, nur einige StSmme blieben zurflck, w&hrend von den
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644
Teodorascu,
aus den Menschen stammenden Kulturen nur ein Teil ein
Drittel des Agglutinatioustiters erreichte und fiber die Hfilfte
nur bis zu 1:10 des Wertes des Serums Oder darunter
agglutiniert wurde. Nur ein Stamm aus dem Menschen, der
P. B 2, wird bis zum Greuzwerte beeinfluBt. Noch stfirker aus-
gesprochen war nun das differente Verhalten der beiden Gruppen
einem mit dem Bacillus Glaesser hergestelltem Kaninchenserum
Tabelle IV.
Ghiesser-Kaninchenserum-Titer 1: 5000. Agglutination mit Stammen
vom Schwein.
1. r. 200 : 1. P. 654 1. P. 590 1. Dr. ! 1. Wurst
2. P. 417 2. Suipestifer 2. Salami
I 3. P. 459 Leber
j 4. P. 442 Darm
| 1 5. P. 4(iS Milz
| i | 0. P. 459 Lunge
I i I 7. P. Harn
i | 1 I 8.P.K
I I I 9. P.270
| . 10. P.242
j 'll. P.204
! I 112. P. 468 Dr.
I 13. P.469 Ltr.
I ' 14. Glaesser
! I i 15. Voldagsen
Agglutination desselben Serums mit Stammen vom Menschen.
1. Storek j 1. Helhvig 1. Parat. B. 2
2. Kmige 2. Sticker
3. Reich 3. Scheib.
4. Strabburg 4. Neunkirch.
5. Engl 5. Hub. ,
6. Wager ! 6. Breslau .
7. Briick 7. Aert. \
8. Maad
9. Walk
10. Wagner
11. Schottmuller
12. Tietz
13. Parat. B
von Titer 1:5000 gegenuber (Tabelle IV). Auch dieses hetero-
loge Serum agglutinierte alle Kulturen aus dem Schwein und
aus Schlachtprodukten bis zum Grenzwerte bis auf wenige
Stfimme, die tiberhaupt nicht oder nicht in nennenswerter
Weise beeinfluBt wurden. Ganz das entgegengesetzte Ver¬
halten zeigt das Serum gegenfiber den vom Menschen ge-
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Agglutinat. Verhalten von Paratyphus B- und Pestifer-Stamnien. 645
wonnenen Stammen, indera es diese fast ganzlich unbeeinfluBt
laBt. Nur der Stamm P. B 2 wird hier wie bei dem Voldagsen-
Serum auch bis zur Titergrenze agglutiniert. Zwei weitere
Voldagsen- und Glaesser-Sera zeigten gegeniiber den Para¬
typhusstammen aus dem Menschen das gleiche Verhalten; von
einer ausfiihrlichen Wiedergabe dieser Reihen ist daher ab-
gesehen worden. Jedenfalls kann man sich auf Grund dieser
Versuchsergebnisse nicht gut dem Eindruck verschlieBen, daB
sich tatsfichlich die gepriiften Stamme nach ihrem serologischen
Verhalten den heterologen, namentlich den Glaesser - Seris
gegeniiber in 2 Gruppen trennen lassen, indem die eine durch
die heterologen Sera in hohem MaBe, meist bis zur Titer¬
grenze mitagglutiniert wird, wahrend die andere denselben
Seris gegeniiber so gut wie keine Beziehungen aufweist. Der
ersten Gruppen gehoren hauptsachlich die aus Schweinen und
aus Schlachtprodukten gewonnenen Stamme zu, also die Kulturen,
die nach ihrem Fundort als Pestiferstamme bezeichnet waren,
wahrend die vom Menschen isolierten Paratyphus B-Stamme
meist das entgegengesetzte Verhalten zeigen. Allerdings trifft
dies nicht vollkommen fiir alle Stamme zu. Wiirde man etwa
auf Grund des serologischen Verhaltens den genannten hetero-
logischen Seris gegeniiber die untersuchten Stamme in diesem
Sinne nach Pestifer- und Paratyphusstammen abtrennen wollen,
so raiiBte man z. B. den aus dem Menschen gewonnenen P. B 2
der Pestifergruppe, den Pestifer 200 der Paratyphusgruppe
zurechnen. An sich wiirde dem ja nichts im Wege stehen,
da kein Grund vorliegt, weshalb nicht auch Pestiferarten im
menschlichen Stuhl und der Bacillus Paratyphus B in Schweinen
Oder Schlachtprodukten vorkommen sollen. Kulturen wie z. B.
Pestifer 654 und 417 wiirden etwa in der Mitte stehen, wenn
man sie nicht ebenfalls den Paratyphusstammen zurechnen
will. Ob sich nun immer auch bei Priifung eines noch groBeren
Kulturenmaterials — das mir zur Verfiigung stehende ist ja
zu einer bestimmten Entscheidung in dieser Richtung noch
nicht ausreichend — durchgehend ahnlich scharf ausgepragte
Unterschiede bemerkbar machen werden, muB noch dahin-
gestellt bleiben. Ich glaube aber. daB die bei meinen Ver-
suchsreihen aufgetretenen Erscheinungen so auffallend sind,
daB es nicht ausgeschlossen erscheint, auf diesem Wege mit
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646
O. Kara man n und W. Gaehtgens,
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Hilfe heterologer Sera vielleicht doch zu einer gewissen
Differenzierung innerhalb der Paratyphusgruppe kommen zu
kdnnen, und dafi es sich empfehlen wurde, noch weitere um-
fangreichere Untersuchungen nach dieser Eichtung vorzu-
nehmen.
Zusammenfassung.
Die geprtiften Stiimme lassen sich nach ihrem sero-
logischen Verhalten (Agglutination) gegentiber Glaesser-Seris
in zwei Gruppen trennen. Die Pestifer-Stain me werden in
hohem Grade mitagglutiniert, die menschlichen Paratyphus-
stamme nicht (vereinzelte Ausnahmen waren vorhanden).
(F.)
Nachdruek verbottn.
[Aus dem Staatlichen Hygienischen Institut zu Hamburg; Direktor:
Prof. Dr. Dunbar],
Experimented Untersuchungen liber die Bindung Ton
Pollentoxln und Antitoxin.
Von Dr. O. Eammann und Dr. W. Gaehtgens.
Mit 2 Kurven im Text.
(Eingegangen bei der Redaktion am 25. Juni 1912.)
Ueber die Natur der Vorgange bei der Entgiftung toxi-
scher Losungen durch Antitoxine herrschen zurzeit vor-
nehmlich drei verschiedene Anschauungen.
Ehrlich 1 2 ) und seine Schule*) gehen yon rein strukturchemischen
Auffassungen aus; sowohl Toxine als Antitoxine sind nach ihnen wohl-
charakterisierte chemische Individuen, die sich vermoge der zwischen
ihnen waltenden chemischen Affinitaten so miteinander vereinigen, wie
beispielsweise eine starke Siiure mit einer starken Basis. Dieser neu-
geschaflene Korper hat giinzlich veriinderte Eigenschaften und nichts mehr
gemeinsam mit den zu seiner Herstellung verwendeten Komponenten; es
tritt eine starke MolekularvergroBerung ein und die Trennung des neuge-
1) Klin. Jahrbuch, 1897.
2) Gesammelte Arbeiten zur Immunitatsforschung, Berlin 1904.
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Experim. Unters. iiber die Bindung von Pollentoxin u. Antitoxin. 647
wonnenen Stoffes in seine urspriinglichen Bestandteile ist durch leichtere
Eingriffe nicht mehr moglich, sondern kann nur unter Sprengung des neu-
gewonnenen Molekiils erreicht werden und auch nur dann, wenn die
Sprengung an dem Punkte stattfindet, wo der Zusammentritt erfolgt ist. Eine
derartige Regenerierung der einen Komjx>nente ist beispielsweise Morgen -
roth 1 ) gelungen, indem er aus einer neutralen Mischung von Toxin und
Antitoxin durch Einwirkung von Salzsiiure die Toxinkomponente wieder
abzuspalten vermochte. Unter der Annahme, daB nach dem Obengesagten
das Toxin die saure Affinitiit, das Antitoxin die basische Affinitiit beim
Zusammentritt zur neutralen Mischung licfern, ist leicht einzusehen, daB
nach Zusatz einer auBerordentlich starken Siiure, hier der Salzsiiure, die
schwiichere Aviditiit zwischen Toxin und Antitoxin gelost wird und eine
noch festere gebildet wird, so zwar, daB die basischen Aviditiiten des Anti¬
toxins mit der starken Salzsiiure in Reaktion treten, wahrend die schwach-
sauren Aviditaten des Toxins leer ausgehen, d. h. frei werden.
Dagegen sucht Arrhenius 2 ) in weit umfassenden Experimenten die
vorliegenden Neutralisierungsvorgiinge* als Gleicbgewichtszustiinde zwischen
Losungen mit schwacher Aviditiit zu deuten. Diese Anschauung hat jedoch
der spiiteren Kritik nicht standhalten konnen.
Die dritte Anschauung iiber die Neutralisationsvorgiinge beschiiftigt
sich mit der Absorption der Giftstoffe an den Antikorper. Die Absorptions-
wirkung zweier Stoffe ist abhiingig von der GroBe ihrer Oberfliichenent-
wicklung, d. h. Stoffe von sehr groBer Oberfliiehe, zu denen auch die
EiweiBsubstanzen gehoren, werden mit andern Kolloiden stets oder haufig
Absorptionsverbindungen eingehen. Es gibt jedoch auch ein spezifisches
elektives Absorptionsvermogen, das man Zustandsaffinitiit genannt hat,
wohin auch, will man die physikalische Theorie allein gelten lassen, die
Zustandsaffinitiit zwischen Toxin und Antitoxin gehort. ,
Zur Frage der Bindungsweise von Toxin und Antitoxin in vitro hat
Calmette 3 ) im Jahre 1895 gefunden, daB aus einer unschadlich gewor-
denen Mischung von Cobragift und dem zugehorigen Antitoxin durch
lOMinuten langes Erhitzen auf68° das Cobragift in giftiger Form wieder-
gefunden werden kann; bei 68° wird niimlich das Antitoxin, nicht aber
das Toxin weniger wirksam gemacht. Wassermann 4 ) stellte fest, daB
ahnliche Verhaltnisse beim Pyocyaneusgift und dessen Antitoxin vorliigen,
indem er durch Erhitzen dieser unschiidlichen Mischung auf 100° die Gift-
wirkung wieder herstellen konnte; auch hier wird das Antitoxin, nicht aber
das Gift durch Erhitzen zerstort. Die beiden Autoren ziehen hieraus den
SchluB, daB der Zusammentritt von Toxin und Antitoxin in vitro nicht
auf einer chemischen Bindung beruhen konne, sondern rein physikaliseher
Natur sei.
1) Berl. klin. Wochenschr., 1905, No. 50.
2) Arrhenius, „lmmunochemie“. Leipzig 1907.
3) Calmette, Ann. de lTnst. Pasteur, Vol. 9, 1895, p. 225.
4) Wassermann, Zeitschr. f. Hyg. u. Inf., Bd. 22, 1896, p. 263.
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648
O. Kammann und W. Gaehtgens,
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Martin und Cherry 1 ), die gleichfalls mit Schlangengift Versuche
angestellt habcm, machen in ihrer Arbeit „The nature of the antagonism
between toxins and antitoxins" darauf aufmerksam, und zwar mit Recht.
daB die SehluBfolgerung Calmettes und Wassermanns, es V>liebe in
vitro jede chemisehe Bindung aus, trotz der Zuverliissigkeit der Experi-
mente an sieh, nicht gereehtfertigt 1st. Sie gingen in ihren diesbeziigliehen
Experimenten von der Tatsache aus, daB aus einer Losung, die Stofle von
verschiedenen MolekulargroBen enthalt. die kleineren Molekiile von den
groBeren durch die sogenannte Ultrafiltration Bechholds mittels Gelatine-
filter getrennt werden kdnnen; gleiehzeitig nahmen sie an, daB die Mole-
kulargrbBe des Giftinolekuls bcdeutend kleiner ist, als diejenige der Ver-
bindung von Toxin mit Antitoxin und rechneten nunmehr darauf, dafi sie
das Toxin atis den Mischungen mit Antitoxin durch die Ultrafiltration
zuriiekgewinnen konnten, wenn der Zusammentritt des Toxinmolekiiles mit
dern Antitoxin physikalischer Xatur, d. h. von loekerer Absorptions-
bindung sei. Wenn dagegcn das Ultrafiltrat sich als giftfrei erwies, so
wiire das Schlangengift mit dein zugehorigen Antitoxin eine chernische
Bindung eingogangen. Das Resultat dies<T Versuche war folgendes: Stan-
den die Mischungen von Gift und Gegengift vor der Filtration 30 Minuten
lung, so waren die Filtrate davon siimtlich unwirksam geworden, d. h. die
zusunmengebrachten Stolle waren in feste ehemische Bindung getreten.
War dagegcn die Finwirkung des Toxins auf das Antitoxin in weniger als
30 Minuten erfolgt, so waren auch die Ultrafiltrate mehr oder weniger
gif tig geworden, je nach dern voraufgegangenen Grade der Misehung von
Toxin und Antitoxin.
Diese Versuche sprcehen also wenigstens nach langer
daueruder Einwirkungszeit fur eine feste chemisehe Bindung
des Toxintnolekiils mit dern zugehorigen Antitoxin.
Auch iiber die reine Absorptionshypothese ist man neuer-
dings noch verschiedener Meinung, da auch diese Hypothese
zur Deutung aller Erscheinungen bei der Entgiftung von
Toxin nicht ausreicht. Allerdings sprechen gerade die Gesetz-
mafiigkeit der Toxin- und Antitoxinbindung und besonders die
Hiimolysin- und Antihiimolysinkurven von Arrhenius und
Madsen 2 ), die der typischen Kurve einer physikalischen Ab¬
sorption ahneln, fiir die physikalische Bindung. Jedoch wird
eine ungezwungene und alle Erscheinungen in befriedigender
Weise deutende Anschauung, wie sie auch bereits von ver¬
schiedenen Seiten befiirwortet ist, darin gefunden, die Ent-
1) Martin and Cherry, Proceedings of the Royal Society, Vol. 63,
1898, p. 423.
2) Arrhenius et Madsen, „Communications de l’lnst s6rothera-
pifjue de l’Etat danois“, T. 1, 1900.
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Experim. Unters. iiber die Bindung von Pollentoxin u. Antitoxin. 649
giftung von Toxinen durch Antitoxine in zwei voneinander
unabhSngig verlaufenden Phasen anzunehmen.
Die erste Phase liefert die Absorptionsverbindung, die schon durch
mechanische Eingriffe wieder reversibel gemaeht werden kann. £ie verliiuft
deshalb auch nach dem allgemeinen giiltigen Gesetz der physikalischen
Absorption.
In der zweiten Phase tritt an die Stelle der lockcren Bindung die
feste chemische, die erst durch cnergiseher Eingriffe wilder in die Kom-
ponenten zuriickgefiihrt werden kann. Den allgemeinen stoehiornetrischen
chemischen Verbindungsverhiiltnissen zufolge mufi also diese Absiittigung
nach ganz bestimmtcn proportional on Gewichtsverhaltnissen erfolgen, die
man in dem Naraen „Gesetz der multiplen Proportioned zusammengcfaBt
hat. Dieses Gesetz besagt, daft beispielsweise fur cine Toxinlosung, von
welcher ein Giftteil durch 0,01 Antitoxin entgiftet wird, fiir 10 Giftteile
die 10-fache, fiir 100 Giftteile die 100-fache Antitoxinmenge zur vollstan-
digen Neutralisierung gebraucht wird, wenn beide Losungen in diesem
Mischungsverhaltnis in vitro vereinigt und cine gewisse Zeit, deren I)auer
allerdings ausschlaggebend ist, stehen gelassen wird.
AuBer den eben ausgesprochenen Entgiftungshypothcsen
wird neuerdings noch ein anderer Entgiftungsinodus diskutiert,
das ist der fermentative. Die fermentative Entgiftung baut
das Giftmolektil unter Molekularverkleinerung ab und beraubt
es ganzlich derjenigen Giftigkeit, die ihm urspriinglicli zukam,
wobei allerdings nicht ausgeschlossen ist, daB die Abbau-
produkte ihrerseits wieder giftiger sind, nur daB dann diese
Giftigkeit mit der urspriinglichen niclits zu tun hat. Diese
fermentative Giftbildung und weitere fermentative Entgiftung
spielt ja bei der Anaphylaxievergiftung die grOBte Rolle.
Da nun die eigentliehen Toxine wahrscheinlich gleichfalls zu
den Proteinkorpern zu zahlen sind, so ist die Annabme nicht
auszuscblieBen, daB auch sie, nach physikalischer oder auch
chemischer Bindung an das Antitoxin, unter Molekularver¬
kleinerung abgebaut werden, so daB wir es bei der anti-
toxischen Entgiftung vielleicht auch mit einer fermentativen
Giftzerstdrung zu tun liaben. An der Hand der bislierigen
Versuchsergebnisse iiber diese Frage kann noch nicht mit
Sicherheit entschieden werden, ob die antitoxische Entgiftung
wirklich durch sekundiire fermentative Tiitigkeit bedingt wird.
Dagegen wissen wir bereits aus Studien fiber die Serumana-
phylaxie, daB sich unter den Bruclistficken des fermentativen
Antitoxinabbaues ein Gift findet, das sogenannte Anaphylatoxin
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G50 O. Kammann urid W. Gaehtgens,
Friedbergers, welches als die Ursache der Serumkrankheit
anzusehen ist.
Mischt man in einem chemischen System mit schwachea
Aviditiiten, deren eine Komponente Lackmus rfltet, d. h. sauer
reagiert, deren andere Lackmus bl&ut, d. h. alkalisch reagiert,
die Komponenten in kleinen ZusStzen miteinander, so wird
man finden, dad der Umschlag des Indikators nicht scharf
erfolgt, z. B. beim Lackmus von rot nach blau oder umgekehrt,
sondern eine ganze Reihe Violettnuancen als Uebergangs-
farben aufweist, die samtlich in der sogenannten amphoteren
Zone des Systems liegen. Ganz ahnlich liegen auch die Ver-
haltnisse bei der Toxin- und Antitoxinbinduug, wo nach
Mischung beider Substanzen selbst sehr breite amphotere
Zonen vorkommen konnen.
Verdiinnt man eine konzentrierte, aber neutrale Mischung
von Toxin und Antitoxin, so wird man mit zunehmender Ver-
diinnung bald zu einem Punkte gelangen, wo die Mischung
trotz der prozentual gleichen Zusammensetzung zur Ausgangs-
losung anfangt, toxisch zu werden. Dieses Verdflnnungs-
phanomen kann aber offenbar nur in dem ersten Stadium
eiuer lockeren Bindung eintreten, w&hrend die im zweiten
Stadium verfestigte chemische Bindung durch eine einfache
Verdiinnung nicht mehr zu trennen ist.
Das sogenannte Gesetz der Multipla fand zu einer Zeit
auf die Bindungsverhiiltnisse zwischen Toxin und Antitoxin
Anwendung, als die quantitativen Wertbestimmungen noch
nicht so genau ausgearbeitet waren, wie es neuerdings mit
Hilfe der verfeinerten Methodik der technischen Mittel mog-
lich geworden ist. Bei diesem Gesetz spielen jedenfalls Kon-
zentrationen der Losungen, Intervall zwischen der Her-
stellung ihrer Mischung und ihrer Anwendung, EinfluB der
Temperatur, Injektionsmodus und andere Modalitaten die groRte
Rolle; aber selbst wenn es geliinge, alle diese storenden Neben-
umstande auszuschalten, bleiben immer noch gewisse, inner-
halb der Greuze der sogenannten amphoteren Zone gelegene
Ausnahmen von dem Gesetz der Multipla bestehen, die
naturgemaB bei Losungen um so geringer ausfallen, je kon-
zentrierter sie sind. da bei diesen die amphotere Zone mdg-
lichst klein ausfallt und ferner die Dissoziation, die bei ver-
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Experim. Enters. fiber die Bindung von Pollentoxin u. Antitoxin. 651
diinnten Losungen stets eine groBe Rolle spielen wird, fast
gSnzlich ausgeschaltet ist. Das sogenannte Gesetz der Multipla
gilt daher nicht absolut, sondern imraer nur ann&hernd fttr
die Neutralisierungsverh<nisse zwischen Gift und Gegengift.
C. Prausnitz 1 ) hat schon friiher und auch neuerdings 2 ) wieder die
Behauptung aufgestellt, dafi bei einer Neutralisation von Heufiebergift und
seinern Gegengift andere Verhaltnisse maGgebend seien, als es bei der
Neutralisation von echten Giften und Gegengiften der Fall sei. Da diese
Neutralisationsverhiiltnisse aber nach dem eben besprochenen Gesetz der
multiplen Proportionen verlaufen mfissen, so muB Prausnitz naturgemiifl
auch den SchluB ziehen, daB das Heufiebergift nicht zu den echten Toxinen
nach der Anschauung Ehrlichs zu rechnen sei, sondern ein sogenanntes
Endotoxin darstelle, eine Ansicht, die Prausnitz erst kfirzlich zu seiner
eigenen Auffassung gemacht hat.
Der eine von uns s ) hat schon im Jahre 1904 nachgewiesen,
dafi die Prausnitzschen Neutralisationskurven, nach denen
fflr wachsende Toxinmengen nicht, wie das Gesetz der Multipla
erfordert, proportional wachsende
Antitoxinmengen notig sind, sondern «o
weit mehr, mit einer Reihe von 80
Fehlerquellen behaftet sind. Bei- ‘®
spielsweise wiirden nach Praus-
nitz fflr eine Heufieberdosis, die ao
zur Neutralisation eine Antitoxin- 80
dosis erfordert, fur 2 Toxindosen 40
40
schon 3,8, fur 5 Toxindosen hin- ^ 20
gegen schon 125 Antitoxindosen *200
ndtig sein, so dafi folgende Neutra- g 80
lisationskurve (A) aus diesen Werten 0 so
resultiert (Kurve 1). Diese Praus- l0
nitzschen Feststellungen wurden 100
mit dem Gift aus Roggenpollen ge- 80
macht, w&hrend meine oben er- ,c
40
w&hnten Versuche, die streng nach ?0
dem Gesetz der multiplen Propor- 0
tionen verliefen, an einem Gift ge-
macht wurden, das in die Gruppe
1) Prausnitz, Berl. klin. Wochenschr., 1905, No. 9.
2) Prausnitz, Habilitationsschrift. Jena (G. Fischer) 1912.
3) Kammann, Berl. klin. Wochenschr., 1906, No. 26.
Kurve 1.
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(352 O. Kammann und W. Gaehtgens,
der Herbstkatarrh erzeugenden Ambrosiapflanzen gehort. Da
nun die Giftstofte von Anibrosiapollen sich von denjenigen der
Roggenpollen im biologischen Experiment als differenzierbar
erweisen, so liige immerhin, trotz der inneren Unwahrscbein-
lichkeit, die Moglichkeit vor, daB die Prausnitzschen Ver-
suche, die fiir das Roggenpollen toxin festgelegt sind, eine vom
Gesetz der Multipla abweichende Neutralisationskurve zeigten.
Zweck unserer nachfolgenden, auf Veran-
lassung von Herrn Prof. Dunbar ausgefiihrten
Versuche war es also, erneut die Frage aufzu-
nehmen, ob das Heufiebergift aus Roggenpollen
in seinem Neutralisationsverlialten gegen das
entsprechende Antitoxin der Ehrlichschen For-
derung einer proportionalen Abs&ttigung folgt
oder nicht.
Als Gift aus Roggenpollen stand uns ein Praparat zur
Verfiigung, welches durch vielfach angestellte Versuche gegen
friiher wesentliche Verbesserungen erfahren hatte. Wahrend
das alte Heutiebertoxin, mit dem aucli die friiheren Absiitti-
gungsversuche angestellt wurden, durchschnittlich in einer
Verdiinnung 1:40000 bei einem empfindlichen Patienten
wirksam waren, gelang es uns, durch ein Verfahren, das
Gegenstand einer besonderenAuseinandersetzung
sein wird ‘), die Giftigkeit bei vermindertem Stickstoffgehalt uni
mehr als das Ilundertfache zu steigern. Die Toxizitiit dieses
Praparates ging sogar so weit. dafi 1 Tropfen dieser Losung
in der Verdiinnung von 1:50 Millionen bei einem Patienten
noch wirksam war, und zwar uuter Anstellung sSnitlicher er-
forderlichen Kontrollen; dieser Patient hatte auf das gewohn-
liche Priiparat nicht weiter als bis zur Verdiinnung 1:100000
reagiert. Nach all diesen Versuchen will es uns scheinen, als
ob auch fiir dieses von alien unwirksamen Bestandteilen weit-
gehendst befreite Gift in seiner bisherigen Stellung zu den
A1 b u m i n e n der PolleneiweiBstoffe eine ver&nderte Auffassung
zu erwiigen ist.
Zur Neutralisation des eben beschriebenen Roggenpollen-
giftes wurde fiir alle nachfolgenden Versuche ein Serum be-
1) Erscheint in der Bioehem. Zeitschrift.
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Experim. Unters. iiber die Bindung von Pollentoxin u. Antitoxin. (j53
nutzt, das von einem monatelang mit Roggenpollenextrakt
vorbehandelten Pferde stammte. Dieses Serum war 40-wertig,
d. h. es neutralisierte noch in 40-facher Verdfinnung diejeuige
Giftdosis, die bei irgendeinem Heufieberpatieuten als Grenz-
dosis, d. h. bei Einbringung ins Auge als ebeu reizende Dosis
festgestellt wurde. Es machte hierbei keinen Unterschied, ob
ein Heufieberempfindlicher auf die Dosis 1:100 000 reagierte
oder sckon auf die Dosis 1:500 000 oder gar auf die 100-fach
schwachere Giftmenge; immer zeigte sich die Tatsache, daft
das verwendete Antiserum, wenn es die 100-fach schwachere
Grenzdosis des einen Heufieberpatieuten neutralisierte, auch
in derselben Menge die weit starkere Grenzdosis des anderen
Patienten absattigte. Unsere Versuche, die wir an einer ganzen
Reihe von Heufieberpatienten durchgefuhrt haben, gehen stets
davon aus, mit mbglichster Genauigkeit die eben
besprochene Grenzdosis aufzufinden. Es l&Bt sich
dieser Punkt mit groBer Sicherheit festlegen, wenn man mit
einem Tropfen einer Losung beginnt, die so stark verdttnnt
ist, daB jede subjektive und objektive Reaktion im Auge aus-
bleibt. Nunmehr steigt man auf das Doppelte der unwirksam
gefundenen Konzentration und so fort, bis derjenige Ver-
diinnungsgrad erreicht ist, wo nach Einbringung eines Tropfens
eine eben noch wahrnehmbare objektive Reaktion erfolgt, die
durch leichte Rotung der Conjunctiva, der Caruncel und der
Plica semilunaris erkenntlich wird. Wir fiigen gleich hier ein,
daB auch der Grenztiter bei ein und demselben Heufieber¬
patienten kein absolut festliegender zu sein scheint, sondern
an gewissen Tagen innerhalb geringer Grenzen schwanken
kann. So haben wir an einem unserer Patienten h&ufiger die
Beobachtung gemacht, daB seine Empfindlichkeitsgrenze, die
in der Mehrzahl der FSlle bei 1:400 000 lag, auf 1: 200 000
zurfickgegangen war, aber nach einiger Zeit wieder zur nor-
malen Hohe zuriickkehrte. Ob wir es hier mit einer durch
die h&ufige Einbringung von geringen Mengen Heufiebertoxin
einsetzenden Immunisierung zu tun haben, steht noch dahin.
Die Empfindlichkeitsgrenze der 5 Patienten, an denen wir
nachfolgend das Gesetz der multiplen Proportionen gepruft
haben, lag beim Patienten Ca. bei 1:200 000, beim Patienten
Zeitschr. f. Immunitatsforschung. Orig. Bd. XIV. 45
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654
O. Kammann und W. Gaehtgens,
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Chr. bei 1:1 Million, beira Patienten Kl. bei 1:400 OOO, beim
Patienten Ti. bei 1:1 Million und beim Patienten Vd. bei
1:800 000. Wir haben es also mit 5 Heufieberkranken zu tun,
die eine ganz verschiedene Empfindlichkeitsgrenze gegeniiber
dem Roggenpollentoxin besitzen; trotzdem sind die Versuchs-
ergebnisse, wie wir spater noch sehen werden, absolut flber-
einstimmend.
F(ir die Grenzdosis des Toxins wurde nunmehr auf em-
pirischem Wege diejeuige Serumdosis ermittelt, die gerade
noch eine vollstSndige Bindung des Toxins verursachte, was
wiederum durch das jegliche Ausbleiben einer Reaktion am
Auge innerhalb der iiblichen Beobachtungszeit von x /* Stunde
festgestellt wurde. Die Kombination dieser beiden Grofien,
der eben krank machenden Giftdosis und der diese Wirkung
eben aufliebenden Serumdosis, wurde nunmehr als feststehende
Grundlage fur die weiteren Prfifungen der Multipla benutzt.
Durchweg sind wir so vorgegangen, daB nach Festlegung des
neutralen einfachen Gift-Serumgemisches das 5-fache,
10-fache, 20-fache, 40-fache und 80-fache der Giftgrenzdosis
und der dazu gehorigen Serumdosis auf Neutralist geprflft
wurde.
DaB es sich dabei in der Tat um eben neutralisierte Ge-
mische handelte und nicht etwa um einen UeberschuB an
Antitoxin, lied sich durch folgenden Versuch zeigen:
25. III. 12. Patient Kl. Priifung des 4-fachen Multiplums.
2 s5 In das linke Auge 1 Tropfen der Mischung R. P. Toxin V 1: 50000
+ Serum 161 1:5 (aa).
2“ Keine Reaktion.
2 l,r ’ In das linke Auge 1 Tropfen R. P. Toxin V 1:400000.
2* 8 Etwas Jueken und Brennen, objektiv keine Veranderung.
2 M 1 Tropfen Antitoxin; das Auge war inzwischen nicht schlimmer
geworden.
Das Toxin-Antitoxingemisch hat also das Auge nicht ge-
reizt, wahrend die nachtrSgliche Eintr&ufelung der Toxingrenz-
dosis eine zwar leichte, aber deutliche subjektive Reaktion
ergab.
Wir sind, um das Endergebnis gleich vorweg
zu nehmen, iibereinstimmend zu dem Resultat
gekommen, daB fur die Abs&ttigung des Heu-
Gck igle
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Experim. Unters. iiber die Bindung von Pollentoxin u. Antitoxin. 055
fiebergiftes aus Roggenpollen ebenso gut das
Gesetz der multiplen Proportionen gilt, als
seinerzeit schon an dem Gift der Ambrosiapollen
festgestellt worden ist. Wie wir scbon auseinander-
gesetzt haben, gilt aucb bei echten Toxinen und Antitoxinen
das Gesetz der Multipla nicht absolut, sondern schwankt
innerhalb der Grenzen der amphoteren Zone, die bei kon-
zentrierteren Losungen fast ganz zu vernachlfissigen ist, bei
verdflnnteren Losungen, wo noch als weitere Fehlerquelle
Dissoziationserscheinungen auftreten konnen, auch nur gering-
fiigige Abweichungen ergibt.
Bei unseren vorliegenden HeufieberabsSttigungsversuchen,
die unter Berflcksichtigung aller optimalen Verhaltnisse der
Zeit, Temperatur und Konzentration angestellt worden sind,
haben wir sogar feststellen konnen, daB das Gesetz der
multiplen Proportionen fast absolut gilt, sowohl was die
verschieden empfindlichen Heufieberpatienten anbelangt, als
auch die schw&cheren bis starken Konzentrationen der
Miscbungen.
Wir lassen hier in extenso das Versuchsprotokoll einer
derart ausgefflhrten Versuchsserie folgen, dem wir weiter
unten die kurz zusammengefaBten weiteren Ergebnisse an-
fflgen.
25. III. 12. Patient Vo. Priifung auf Empfindlichkeit gegen
Roggenpollen toxin V.
10° vorm. In das rechte Auge 1 Tropfen R. P. Toxin V 1:800000.
10 8 Patient spiirt noch nichts.
10° Spur Jucken, ganz geringe Rotung, die nicht starker wild.
10* 1 Tropfen Antitoxin (Kaninchenserum).
10 U Symptome verschwunden bis auf eine ganz geringe Rfttung.
10 50 Auge wieder vollstiindig normal.
10 4 In das linke Auge 1 Tropfen R. P. Toxin V 1:400000.
10 ; Etwas Juckreiz, Warmegefiihl, Adern um die Pupille herum
gerotet.
10 U Symptome nicht schlimmer geworden.
10‘" 1 Tropfen Antitoxin (Kaninchenserum).
10*° Symptome fast ganz verschwunden, fiihlt sich noch an, als ob
eine kleine Schwellung vorhanden wiire.
Ergebnis: Die Empfindlichkeitsschwelle liegt hiernach beim Patienten
V6. bei 1:800 000.
45*
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656 o. K ammann und W. Gaehtgens,
13. IV. 12. Patient Vo. Feststellung der die Giftgrenzdosis neutrali-
sierenden Serumdosis. Priifung des Pollantins No. 161 auf 40-
Wertigkeit.
10 10 Ins rechte Auge 1 Tropfen der Mischung R. P. Toxin V
1: 400 000 -f Serum 161 1:20 (in der Mischung Toxin 1: SCO 000,
Serum 1 :40).
10 30 Koine Symptome.
Ergebnis: Das Serum 161 ist 40-wertig, d. h. 1 Tropfen der Sorum-
verdunnung 1:40 neutralisiert 1 Tropfen der Giftgrenzdosis 1:800 000.
Priifung des 5-fachon M u 11 i p l u m s.
10 17 Ins linke Auge 1 Tropfen der Mischung Toxinlosung V
1 :80 000 4- Serum 161 1:4 (in der Mischung Toxin 1 :160 COO,
Serum 1:8).
10 21 Eine Spur Jueken, das bald wither verschwindet.
10‘ i8 Ganz geringe Rotung der Karunkel.
10 30 1 Tropfen Antitoxin.
10 :,: ’ Auge normal.
Ergebnis: Die Absiittigung d(‘S 5-faehen Multiplums ist fast vollstiindig
erfolgt. (G renzreaktion.)
18. IV. 12. Patient Vo. Priifung des 10-fachen und 20-fachen
M n 1 tipi u m s.
I. Priifung des 10-fachen Multiplums.
4 U Ins rechte Auge 1 Tropfen der Mischung Toxin V 1:40000
4- Serum 161 1 :2 (in der Mischung Toxin 1 : SO000, Serum 1 :4).
4’- >0 Koine Symptome.
Ergebnis: Die Neutralisation ist vollstiindig erfolgt.
II. Priifung des 20-fachen Multiplums.
4 20 Ins linke Auge 1 Tropfen der Mischung Toxin V 1:20COO
4 Serum 161 konz. (in der Mischung Toxin 1:40 000, Serum
1 : 2 ).
4 23 Ein ganz geringes Jueken, das gleich wieder verschwindet.
4 a0 Subjektiv und objektiv nichts wahmehmbar.
Ergebnis: Die Neutralisation ist vollstiindig erfolgt.
22. IV. 12. Patient Vo. Priifung des 40-faehen und 80-fachen
M u 11 i p 1 u m s.
I. Priifung des 40-fachen Multiplums.
4 20 Ins rechte Auge 1 Tropfen der Losung: 105 mg Serum 1C1
trocken in 1 com Toxin 1:20 000.
5° Subjektiv nnd objektiv nichts wahrnehmbar.
Ergebnis: Die Neutralisation ist vollstiindig erfolgt.
II. Priifung des 80-fachen Multiplums.
4 32 Ins linke Auge 1 Tropfen der Losung: 210 mg Serum 161
trocken in 1 ccm Toxin 1:10 000.
5° Subjektiv und objektiv nichts wahrnehmbar.
Ergebnis: Die Neutralisation ist vollstiindig erfolgt.
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Experim. Enters, filter die Bindung von Pollentoxin u. Antitoxin. 057
Wie aus diesem in extenso wiedergegebenen Versuch
hervorgeht, ist fiir die Prflfung des einfachen bis 20-fachen
Multiplums das Serum in flOssiger Form benutzt, dagegen far
die 40* und 80-fachen Multipla in trockener Substanz. Dies
hat darin seinen Grund, daB wir bei Prufung des 20-fachen
Multiplums bei der Serumraenge angelangt sind, die in 1 ccm
des konzentrierten Serums zur Neutralisation erforderlich
ist. Bei Priifung der doppelten Dosis, also des 40-fachen
Multiplums, waren demnach 2 ccm des konzentrierten Serums
zur Neutralisation erforderlich, wodurch aber das Mischungs-
verhaltnis von Toxin und Antitoxin verschoben wiirde. Es
kame jetzt 1 ccm Toxin 1:10000 mit 2 ccm des konzentrierten
Serums zusammen, so daB das Toxin nicht mehr im Ver-
hiiltnis 1:2 auf die erforderliche Konzentration 1:20000 ver-
diinnt wiirde, sondern im Verhiiltnis 1:3. Umgekehrt wiirde
das Antitoxin im Verhiiltnis 2:3 verdiinnt werden. Ebenso
wiirde sich bei der Priifung des 80-fachen Multiplums kein
einfaches Mischungsverhaltnis ergeben haben, sondern ein
solches von 1:5 resp. 4:5. Urn diese Schwierigkeit zu um-
gehen, haben wir das Serum bei einer Temperatur von 20° C
im Luftstrom zur Trockne gebracht und eine quantitative
Trockensubstanzbestimmung gemacht, die fiir je 1 ccm des
Serums 101 105 mg Riickstand zeigte. Nunmehr losten wir
die 1 ccm fliissigen Serums entsprechende Menge Trocken-
antitoxin in 1 ccm der Toxinlosung 1:20000 und gelangten
auf diese Weise einwandsfrei zum 40-fachen Multiplum. Fiir
das 80-fache Multiplum wurden, dem eben beschriebenen Vor-
gehen entsprechend, 210 mg Trockenserum in 1 ccm Toxin¬
losung 1:10000 gelost. Die Losung ging in beiden Fallen
bei 37° glatt vor sich.
Auffallend ist an den Versuchen des Patienten V6., was
sich auch wiederholt bei anderen Versuchspatienten bestatigte,
daB das niedere 5-fache Multiplum sich nicht vollig reaktions-
los erwies, wahrend die viel hoheren Dosen der 40- und
80-fachen Multipla ohne jegliche Symptome verliefen, also
quantitativ abgesattigt waren. Dieses Ergebnis bestiirkt uns
in der Anschauung, die wir bereits friiher gegen diePraus-
nitzschen Neutralisationsversuche angefiihrt haben, daB in
verdiinnteren Losungen noch eine Dissoziation in freie Toxin-
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658
O. Kammann und W. Gaehtgens
und Antitoxinmolekeln eintreten kann, w&hrend diesclbe in
konzentrierteren Losungen vollstSndig ausbleibt WShrend
auBerdem Prausnitz seine verdflnnten Mischungen nur
V 4 Stunde im Thermostaten binden laBt, haben wir die Bindungs-
zeit auf voile 3 Stunden erweitert, da wir, wie wir weiter unten
noch ausfflhrlich besprechen werden, von der Ansicht aus-
gehen, daB innerhalb einer kurzen Bindungszeit erst eine
lockere physikalische Absorption zwischen Toxin und Anti¬
toxin stattfindet und erst in der 2. Phase der 3-stiindigen
Bindung ein festerer chemischer ZusammenschluB auftritt, der
der Dissoziation kaum mehr zugiingig ist und erst durch
starkere Eingriffe reversibel gemacht werden kann.
Folgende Tabelle gibt uns ein iibersichtliches Bild von
den Resultaten, die wir bei der PrOfung des Gesetzes der
Multipla an unseren Versuchspatienten erhalten haben.
Tabelle.
Patient
| GrbBe des gepriiften Multiplums
1-fach | 5-fach
10-fach | 20-fach j 40-fach
80-faeh
l.Ca.
II. Chr.
III. KL
IV. Ti.
V. Vo.
vollige Neu- vollige Neu¬
tralisation | tralisation
dgl. Grenzreaktion
„ ivbllige Neu¬
tralisation
„ | dgl.
iGrenzreaktion
! I
vollige Neu-'vbllige Neu-'vollige Neu¬
tralisation j tralisation j tralisation
dgl. Grenzreaktion dgl.
Grenzreaktion i „ ,,
! !
(nicht gepriift) (nicht gepriift) Grenzreaktion
vollige Neu-vollige Neu-vollige Xeu-
! tralisation ; tralisation . tralisation
vollisre Neu¬
tralisation
4'i-
»?
V
i
Hiernach kann kein Zweifel bestehen, daB auch das
Gift aus Roggenpollen in seinem AbsSttigungs-
verhaltnis zum zugehbrigen Antitoxin dem fur
alle echten Toxine gflltigen Gesetz der Multipla
folgt, so daB die Prausnitzsche Absattigungskurve A
unrichtig ist. Die Kurve verlauft also, wie nachstehendes
Diagramm zeigt, nicht mit steil aufsteigendem Ast, sondern
in einer graden Linie (B). (Siehe Kurve 2 auf p. 659.)
Wir haben bereits eingangs auseinandergesetzt, daB es
Martin und Cherry, die mit Schlangengift experimentiert
haben, gelungen ist, durch Ultrafiltration aus Gift-Gegengift-
mischungen die toxische Ivomponente zurflckzugewinnen, wenn
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Experim. Untere. iiber die Bindung von PolJentoxin u. Antitoxin. 659
diese Mischung weniger als 30 Minuten aufeinander eingewirkt
hatte. Die Autoren gin gen hierbei von der Ansicht aus, daB
das Toxin einen kleineren Molekularkomplex darstellt als das
Antitoxin und ein Gelatinefilter von bestimmter PorengrQBe
noch passieren kann, w&hrend das grdBere Antitoxinmolekill
zurQckbleibt Wir haben in Anlebnung an diese Versuche
von Martin und Cherry die Frage zu entscheiden versucht,
wie die Bindungsart des Heufiebertoxins an das Antitoxin
zeitlich verlSuft, ob sich bei kurzdauernder Einwirkung nur
ein reversibler physikalischer ProzeB abspielt, der dann bei
weitergehender Einwirkung in die feste chemische Bindung
tibergeht.
Zu diesem Zwecke haben wir uns, in Anlehnung an die
Bechhold schen Versuche, gelatinierte Berkefeldkerzen prfi-
pariert und vorerst festgestellt, daB sich durch ein derartiges
Filter Toxinldsungen unbesch&digt filtrieren lassen. Wir ver-
wendeten zur Filtration die Toxinldsung 1:10000 und prilften
das Filtrat an einem Patienten, der auf eine in gleicher Weise
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0. Kammann und W. Guehtgens,
hergestellte undgleich wirksameToxinlosung ohneFiltration
auf 1:400000 reagiert hatte. Nunmehr war die Empfindlich-
keit gegeniiber dem filtrierten Toxin auf 1:100000 gesunken,
so daB offenbar der Gallertfiltration ein nicht unerheblicher
Toxinverlust zugeschrieben werden muBte. Dies gilt aber nur
fur die erstmalige Filtration, wo noch grSBere suspendierte
Teilchen vorhanden sind, denn bei einer zweitmaligen Filtration
des Filtrates tritt kein Toxinverlust mehr ein.
Mit derartig vorbereiteten Gallertfiltern wurden nunmehr
die folgenden zwei Hauptversuche gemacht. Von dem eben
erwahnten Toxin wurden neutrale Mischungen mit Serum in der
Starke des 5-fachen Multiplums hergestellt, und fur den ersten
Versuch eine Viertelstunde bei 37° gehalten, fiir den
zweiten dagegen voile drei Stunden. Beide Mischungen
erwiesen sich an einem und demselben Patienten gepriift als
vbllig neutral. Nunmehr wurden beide Mischungen durch die
vorbereiteten Ultrafilter geschickt und die Filtrate wiederum
an demselben Patienten auf Wirksamkeit gepriift. Diejenige
Mischung, die uach Herstellung nur eine Viertelstunde bei 37°
gestanden hatte, gab folgende Reaktion:
5° Ins linke Auge cincn Tropfen der eben besprochenen Mischung.
b'* Spur Wiirmegefiihl.
5 12 Spur Rotung der Conjunctiva palpebralis.
5 1! * (ieringe Rotung der Conjunctiva im lateralen Augenwinkel;
Spuniningsgefiihl noch vorhanden.
5 :i0 Auge normal.
Das vorher neutrale, wahrend einer Viertelstunde bei 37°
hergestellte Reaktionsgemisch hatte also durch Ultrafiltration
seine Toxizitat teilweise wiedererlangt. Die Prufung des
Filtrates, das vorher 3 Stunden bei 37° gehalten war, ergab
dagegen iiberhaupt keine Reaktion. Wenngleich die im ersteren
Falle erzielte Giftwirkung nur in geringem MaBe in Erscheinung
trat und deshalb der Versuch die vorliegende Frage noch
nicht endgiiltig zu entscheiden vermag, glauben wir uns zu
seiner Wiedergabe und Deutung im Sinne von Martin und
Cherry doch berechtigt. Vielleicht wflrde eine Abkflrzung der
der Filtration vorangehenden Bindungszeit auf 5—10 Minuten
unsere Beobachtung noch iiberzeugender gestalten. Leider
waren wir an der Fortfiihrung dieser Versuche durch den
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Experim. Unters. iiber die Bindung von Pollentoxin u. Antitoxin. 661
Eintritt der Heufieberzeit verhindert und miissen uns daher
weitergehender Schliisse enthalten. Wir neigen auf Grund
obigen Befundes zur Auffassung, daB die Bindungszeit
voneinerViertelstunde zwargentigthat, um eine
neutrale Mischung zu liefern, daB dagegen diese
Bindung eine so lockere ist, daB sie schon durch
Filtration mittels Gallertfilter wieder gel6st
werden kann, indem die kleineren Toxinmolektile
hindurchfiltrieren.
Bei 3-stuudiger Bindungszeit erwies sich dagegen das
Ultrafiltrat als neutral, ein Beweis dafflr, daB entweder die
Toxin-Antitoxinverbindung unter starker MolekiilvergroBerung
so fest geworden war, daB nur eine optisch leere Losung das
Filter passierte, oder aber daB die neutrale Toxin-Antitoxin-
mischung in ihrer Gesamtheit das Filter passiert hatte.
Um die letztere Frage zu entscheiden, bedienten wir uns
des schon oben erwahnten Erhitzungsversuches von Calmette.
Bereits Prausnitz hatte gefunden, daB die Calmetteschen
Versuche, die an Cobragift angestellt worden waren, sich auch
auf das Heufiebertoxin ubertragen lieBen. Wir priiften auch
diesen Punkt nach, indem wir das an einem Patienten als
vSllig neutral erwiesene 5-fache Multiplum, das sogar etwas
Antitoxinttberschufl enthielt, eine halbe Stunde auf
72° C erhitzten und an demselben Patienten wiederum auf
Toxizitat prttften. Das Ergebnis war folgendes:
5 57 Ins rechte Auge eincn Tropfen der erhitzten Mischung.
559 Geringes Jucken.
6 2 Deutliches Jucken, geringe Rotung der Karunkel.
6 8 Ein Tropfen Antiserum.
6 10 Auge fast normal, subjcktiv nichts wahrnehmbar.
6 20 AuBer einer ganz geringen Rotung nichts mehr wahrnehmbar.
Durch die halbstiindige Erhitzung auf 72° ist also offen-
bar die Antitoxinkomponente allein zerstort worden, und die
Toxinkomponente, die unbeschadet weit hbhere Erhitzungs-
temperaturen vertragt, wieder in Freiheit gesetzt worden. Das
deutliche schnelle Auftreten der Symptome lieB eine starke
Reaktion, entsprechend der freigewordenen Toxindosis, be-
fflrchten; um diese zu vermeiden, wurde 6 Uhr 3 Min. Anti¬
serum gegeben.
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662 O. K a m m anil und W. G a e h t g e n s, Pollen toxin und Antitoxin.
In dieser Weise erhitzten wir auch das Ultrafiltrat des
Toxin-Antitoxingemisches, welches 3 Stunden bei 37° auf-
einander einwirken konnte. Es war keine Spur von Toxin in
Freiheit gesetzt, da das auf 72° erhitzte Filtrat keinerlei
Reaktion ausloste, so daB wir annehmen mtissen, dafi bei
3-stiindiger Einwirkung der Toxin - Antitoxinkomplex unter
MolekularvergrSBerung eine so feste Bindung eingeht, daB er
das Filter tiberhaupt nicht mehr passieren kann. Die eben
besprochenen Versuche sind jedoch, wie schon erwShnt, wegen
der herannahenden Heufieberzeit noch nicht an einem ge-
nflgend groBen Material gepriift, um als abgeschlossen gelten
zu konnen. Nach den bisherigen Versuchen haben wir jedoch
den Eindruck, daB eine kurzdauernde Einwirkungs-
zeit bis zu einer Viertelstunde nur eine lockere
physikalische Bindun g liefert, die reversibel ist,
daB dagegen diese lockere Bindung bei l&ngerer
E i n wi r k u n g s z e i t in eine festere chemische
Bindung iibergeht, die mit gewdhnlichen Mitteln
nicht gesprengt werden kann.
Zusammenfassung.
1) Die Neutralisation des Heufiebergiftes durch das ent-
sprechende Antitoxin folgt streng dem Gesetz der multiplen
Proportionen.
2) Einer umkehrbaren physikalischen Bindung folgt in
der zweiten Phase die feste chemische Bindung.
3) Das Heufiebertoxin ist hitzebestandiger als sein zuge-
horiges Antitoxin. Das erstere kann daher durch Erhitzen
auf 72° aus neutralen Mischungen wieder in Freiheit gesetzt
werden.
Go i igle
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A. Marxer, Experimentelle Tuberkulosestudien.
663
Nachdruck verboten.
[Aus der bakteriolog. Abteilung der chem. Fabrik auf Aktien
(vorm. E. Schering), Berlin.]
Experlmentelle Tuberkulosestudien.
IV.
Intravenose Immunisierungsversuche an Meerschweinchen.
Von Dr. A. Marxer.
(Eingegangen bei der Redaktion am 16. Juni 1912.)
In dieser Zeitschrift *) habe ich bereits Versuche mitgeteilt,
Meerschweinchen durch subkutane Vorbehandlung gegen die
subkutane Infektion einer gerade todlichen Dosis von Tuberkel-
bacillen zu schiitzen. Diese Immunisierungsversuche waren
mit Tuberkelbacillen, welche auf verschiedene Weise abgetotet
worden waren, vorgenommen worden. Ich konnte dabei zwar
keine absolute Immunit&t, aber doch mit einigen der ange-
w'andten Vaccins eine erhohte Widerstandsfahigkeit gegen
Tuberkulose erzielen. Auch in Heilversuchen war der thera-
peutische EinfluB dieser Vaccins unverkennbar.
Ich habe nun weitere Versuche an Meerschweinchen aus-
gefiihrt, um festzustellen, ob es nicht mit einer anderen
Applikationsweise der abgetoteten Tuberkelbacillen gelingt,
einer groBeren Anzahl dieser so tuberkuloseempfindlichen
Tierchen eine voile Immunity zu verleihen. GroBere Ver-
suchsreihen von Heilversuchen mit Kaninchen sind trotz der
bereits 10-monatigen Dauer noch nicht zu bewerten, da noch
eine Anzahl von Kontrollen ebenfalls lebt und noch keine
offensichtlichen Krankheitssymptome zeigt, so daB das Ende
der Versuche noch gar nicht abzusehen ist. Ein Teil dieser
Kaninchen erhielt nach der subkutanen Infektion verschiedene
Dosen von mit Oelseifenlbsung abgetdteten Tuberkelbacillen,
ein anderer glyzerinierte Tuberkelbacillen. Neben den Kon¬
trollen, die nur subkutan infiziert worden waren, wurden noch
1 ) A. Marxer, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 10, 1911.
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664
A. Marxer,
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weitere Kaninchen zur Kontrolle nach der Infektion mit einer
Kontrollosung von Tuberkelbacillen nachbehandelt. Diese
Kontrollosung, vielmehr Emulsion, enthielt die Tuberkel¬
bacillen in derselben Konzentration in physiologischer Koch-
salzlosung wie die Oelseifen- und Glyzerintuberkelbacillen-
emulsionen. Sie wurde genau so lange geschflttelt wie diese
und ebenfalls 1 Stunde auf 70—72° gehalten. Von dieser
Art Kontrollkaninchen lebt keines mehr. Die Tuberkulose ist
also durch die Nachbehandlung mit der ^Kontrollosung 11 bei
den betreffenden Tieren beschleunigt worden. Sonach sind in
physiologischer Kochsalzlosung geschiittelte und auf 70—72°
erhitzte Tuberkelbacillen direkt schiidlich zur Nachbehandlung
der Tuberkulose. Die Infektion war mit 10 mg eines sehr
virulenten Rindertuberkelbacillenstammes vorgenommen worden,
einer Dosis, der die Tiere in 3—4 Monaten hStten erliegen
miissen. Die Tuberkulose verliiuft aber bei Kaninchen so un-
regelmafiig, daB sie zu Immunisierungs- und Heilversuchen
nicht sehr geeignet sind. Es bleiben aber von kleineren
Versuchstieren nur die Meersclnveinchen iibrig, welche ziem-
lich zu gleicher Zeit einer Infektion erliegen, aber so uberaus
empfanglich sind. Vielleicht war es moglich, auch diese Tiere
gleichmiiBig mit Erfolg zu immunisieren, wenn die Vorbehand-
lung iutravenos vorgenommen wurde.
In folgender Tabelle sind Versuche wiedergegeben, bei
welchen die Halfte der immunisierten Meerschweinchen mit
verschiedenen Dosen intravenos gespritzt ist, die andere Halfte
liatte die Schutzdosis subkutan erhalten. S&mtliche Tierchen
wurden mit fast ebenso viel Kontrollen intravends infiziert.
Ich wahlte die Menge von Viooo mg des sehr virulenten
Tuberkelbacillenstammes deshalb, weil die Tuberkelbacillen-
emulsion, aus der die Verdiinnungen gemacht wurden, etwa
einen Monat im Eisschrank gestanden hatte und so wahrschein-
lich etwas von seiner Virulenz eingebuBt hatte. Aber die
Dosis erwies sich doch als zu hoch, da die Kontrollen bereits
in 6—7 Wochen starben. Zur Schutzimpfung wurde dieselbe
Oelseifentuberkelbacillenemulsion benutzt, die mir bereits vor
1 Jahre zu Immunisierungsversuchen gedient hatte. Tuberkel¬
bacillen wurden im Verhaltnis 0,1:5,0 2-proz. Natrium oleini-
cum 4 Tage im Brutschrank geschiittelt, dann 1 Stunde im
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Experimen telle Tuberkulosestudien.
665
Wasserbade auf 70—72° erhitzt, darauf nochmals 4 Tage in
den Schiittelapparat bei 37° gebracht. Die Mengen, welche
in den Tabellen unter Vorbehandlung angegeben sind, sind,
wie in alien meinen Versuchen, auf Bacillen berechnet.
Tabelle I.
Meer-
schw.
No.
Ge-
wicht
g
Vorbehandlung
Prufung
Resultat
165
270
6. XI. 11. 2,5 mg
19. XII. 11. 7,000
10. II. 12. tot. Hauptsachlich
Ts VI iv.
mg Tbk. iv.
Leber u. Milz tbk. Verander.
166
240
wie 165
dgl.
22. I. 12. wie 165
167
.230
dgl.
yy
17. II. 12. dgl.
168
' 250
yy
20. II. 12. „
169
220
11. II. 12. „
170
310
6. XI. 11. 10 mg, ,,
20. II. 12. „
Tb VI iv.
171
260
wie 170
26. II. 12. „
172
300
dgl.
27. II. 12. „
174
270
yy
22. 1. 12. „
176
280
6. XI. 11. 2,5 mg
yy
13. V. 12. tot: Lungentbk.
Tb VI L.A.H.
177
240
wie 176
28.XII.12. tot: ohne Veriind.
178
260
dgl.
22. I. 12. tot: Tuberkulose
179
240
yy
16. II. 12. dgl.
180
240
13. II. 12. afigemeine Tbk.
181
260
6. XI. 11. 10 mg
9. II. 12. dgl.
TsVI L.A.H.
182
260
wie 181
22. I. 12. tot: Tbk.
183
260 ■
dgl.
yy
4. III. 12. tot: allgem. Tbk.
184
240
13. II. 12. tot: Tb.
185
230
77
”
24. I. 12. dgl.
186
220
dgl.
7. II. 12. tot: allgem. Tbk.
187
210
27. I. 12. dgl.
188
250
22. I. 12. „
189
270
20. I. 12. „
190
275
1. II. 12. „
191
330
))
19. I. 12. „
192
310
24. I. 12. „
193
280
15. I. 12. „
194
340
. Kontrollen
yy
yy
30. I. 12. „
195
310
yy
16. I. 12. „
196
330
yy
12. I. 12. „
197
310
yy
22. I. 12. „
198
300
yy
22. I. 12. „
199
330
3. II. 12. „
200
340
6. H. 12. „
201
300
22. 1. 12.
202
300
V
7. n. 12. „
Tb VI = mit 2-proz. ftlsaurer Natronlosung abgetdtete Tuberkelbacillen
vom Typus bovinus. iv. = intravenos. L.A.H. = linke Achselhohle sub-
kutan.
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bv Google
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666
A. Marxer,
Digitized by
Ich hatte von den friiher geeignet gefundenen Ab-
totungsverfahren eines herausgegriffen, urn eine mbglichst
gleichmftGige Versuchsreihe zu bekommen. Die Meerschwein-
chen erhielten 6 Wochen vor der Infektion 2,5 und 10 mg
der durch Oelseifenlosung abgetoten Bacillen teils intravenos,
teils subkutan.
Trotzdem die Kontrollen ausnahmslos vor 8 Wochen an
Tuberkulose zugrunde gegangen sind, die Infektion also zn
stark war, ist doch eine ganze Anzahl der behandelten Tiere
langer am Leben geblieben als die Kontrollen. Wider Er-
warten war das bestimmunisierte Tierchen No. 176. Dieses
Meerschweinchen hat 2,5 mg subkutan erhalten. Es flberlebte
die letzte Kontrolle um 3 Monate. Ich hatte erwartet, daB sich
durch die intravenose Vorbehandlung eine schnellere und
sicherere Immunitat erreichen lassen wtirde als durch die sub-
kutaue, zumal die Infektion eine intravenose war. DaB durch
gleichzeitige und nachherige subkutane Behandlung bei sub-
kutaner Infektion eine gewisse Immunitat zu erreichen ist,
hatte ich bereits konstatiert, doch nahm ich dasselbe fur
eine intravenose Infektion nicht an.
Aus diesem Grunde hatte ich bei einer anderen Ver¬
suchsreihe die Meerschweinchen nur intravenbs vorbehandelt.
In diesem Versuche wartete ich mit der Infektion 3 Monate,
da nach Versuchen an groBen Tieren anzunehmen war, daB
der Schutz nach langerer Zeit ein besserer sei. Dies triflft
jedoch in meinen Meerschweinchenversuchen nicht zu. Nur
wenige der immunisierten Tiere lebten einige Wochen langer
als die Kontrollen.
(Siehe Tabelle II auf p. 667.)
Die einmalige intravenose Vorbehandlung der Meer¬
schweinchen mit in geeigneter Weise abgetbteten Tuberkel-
bacillen erzeugt bei diesen Tierchen keine bessere Immunitat
gegen eine intravenose Infektion als die subkutane Injektion
der toten Bacillen. Der Schutz ist bei 3-monatigem Zwischen-
raum zwischen Behandlung und Infektion nicht ausgepragter
als nach 6-wochigem Warten bis zur Infektion. Weitere
Versuche sollen zeigen, ob durch Kombination der intra-
venosen Injektion mit der subkutanen auch beim Meer¬
schweinchen bessere Resultate erzielt werden kbnnen.
Gck igle
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Experimen telle Tuberkulosestudien. 667
Tabelle II.
Meer-
schw.
No.
Ge-
wicht
%
Vorbehandlung
Priifung
Resultat
140
330
3. XI. 11. 2,5 mg Ts VI
8. II. 12. V.oooo mg
25.IV. 12. tot: allgem.
iv.
Tbk. iv.
Tbk.
141
360
wie 140
dgi.
26. 111. wie 140
142
375
dgl.
ii
19. V. dgl.
143
330 .
It
ii
IS. IV. „
144
410
ft
ii
5. IV. „
145
310 :
3. XI. 11. 5 mg Ta VI iv.
ii
31. III. „
146
380 1
wie 145
ii
24. V. „
148
310 i
dgl.
ii
11. IV. „
149
325
99
iy
10. II. 12. tot: keine
Veriindeningen
152
440
3.XI. 11. lOmgTaVIiv.
ii
2. IV. wie 140
153
415
wie 152
ft
3. V. dgl.
154
480
dgi.
ii
13. IV. „
155
380
3. XI. 11. 5 mg TsVI
14. II. 12. tot: keine
15 Min. gekocht iv.
Veriindeningen
156
410
wie 155
29. III. 12. vorwiegend
Leber u. Milz tbk.
157
420
dgl.
ii
15. IV. wie 140
158
330
11
ii
17. IV. dgl.
159
505 1
11
ii
17. IV. „
160
390
3. XI. 11. 10mgwiel55
ii
20. IV. „
161
350
10. XI. 11. wie 160
ii
10. V. „
163
390
wie 160
ii
8. IV. „
164
l 350 1
dgl.
ii
22. IV. „
203
330
8. II. 12. 7,oooo
25.III. 12. tot: allgem.
Tbk. iv.
Tbk.
204
330
dgl.
26. III. wie 203
205
360
19
26. III. dgl.
206
380
11
2. IV. „
207
340
28. III. „
208
380
\ Kontrollen
11
22. IV. „
209
330
11
4. IV. „
210
355
11
7. IV. „
211
320
11
30. III. „
212
330
11
6. IV. „
213
380
11
25. IV. „
214
380
11
8. IV. „
TsVI = mit 2-proz. olaaurer Natronlosung abgetotete Tuberkel-
bacillen vom Typua bovinua. iv. = intravenoa.
Zusammenfassung.
Die intravenose Vorbehandlung ist selbst gegeniiber einer
intravenbsen Infektion beim Meerschweinchen nicht vorteil-
hafter als die subkutane Immunisierung. Es scheint sogar
die subkutane Behandlungsmethode die wertvollere zu sein.
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668
Franz Wolf,
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Nachdruck vcrboten.
[Aus der Universitatskinderklinik in Heidelberg (Dir.: Prof. Moro)].
Ueber den Yerlauf der AntikSrperkarve beim Kaninchen
nach Intravendser Injektlon.
Von Dr. Franz Wolf.
Mit 9 Kurven im Text.
(Eingegangen bei der Red&ktion am 26. Juni 1912.)
Die vorliegende Arbeit dient als Grundlage fiir weitere
Untersuchungsreihen, die sich mit dem EinfluB gewisser
Pharmaka auf die Bildung von Antikorpern beim Kaninchen
beschaftigen sollen. Zu diesem Behufe mufite zunSchst die
Frage beantwortet werden, ob es gelingt, gewisse Gesetz-
mifiigkeiten im Verhalten der Antikorperbildung zu eruieren,
die zur Aufstellung von Normalkurven berechtigen.
Das Verdienst, die quantitative Auswertung in die Immunitatslekre
eingcfiihrt zu habcn, gebuhrt Ehrlich, der in seiner Arbeit Tiber Rian
und Abrin eine Immunitatseinheit festiegte mit deren Hilfe er den Verlauf
der Imrmmisierung niiher ckarakterisieren konnte 1 2 ). Die erste Methode
der Auswertung bestand darin, daft er das Multiplum der einfac-h todlichen
Dosis eruierte, mit andern Worten. daft er das Antigen quantitativ ab-
anderte und auf diese Weise den Grenzwert feststellte, der eben n(X‘h von
den im Organismus kreisenden Antikorpern gebunden werden konnte.
Die andere Methode stellt die Umkehrung dar: Man sucht das Mini¬
mum der immunisierenden Substanz aus, das noch eben die tbdliche Dosis
paralysiert; allgemein ausgedriickt: man variiert quantitativ den Antikdrper
und bestirnmt die unterste Greuze der Mengen, die noch eben die Imrauni-
tiitsreaktion auf ein quantitativ sich gleich bleibendes Antigen auslost*).
Diese Methoden ergaben erst die Moglichkeit, das erste Auftreten der Anti¬
kdrper exakt festzusteilen, das Ansteigen und den Abfall zu beobachton.
Kurvenmiiftige Darstellungen der Antikorperbildung liegen bereits
mebrfach vor. Die erste stammt von Ehrlich (Abrin- und Ricinversuehe).
Er stellte als bcsonders bemerkenswert fest, daft am 6. Tage der Ricindar-
reicbung eine plotzliche Bteigerung der Immunitat eintrete, worauf icb
1) Ehrlich, Ueber Ricin und Abrin, CentralbL der Bakt und Para-
sitenkunde, Bd. 10. 1891.
2) Brieger und Ehrlich, Zeitsehr. f. Hyg., Bd. 13, 1893.
Gck igle
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Ueber den Veriauf der Antikorperkurve beim Kaninchen etc. 669
spiiter noch zuriickkommcn werde. Eine andere Kurve Ehrlichs bezieht
sich auf Immunziegen, die rnit Tetanusbouillon vorbehandelt wurden. Bei
der quantitativen Auswertung an der weifien Maus fand Ehrlich den
ereten Anstieg am 5. Tage und das Maximum der Immunitat am 17. Tage 1 ).
Aus mehr praktischen Griinden stellten Salomonsen und Madsen
eine Diphtherieantitoxinkurve bei Pferden auf, in der Erwartung, den
Antitoxingehalt durch eine auf dem Gipfel der Kurve wiederholte Ein-
spritzung besonders stark steigern zu konnen 2 ). Andere Antikorper sind
gleichfalls in dem Verlaufe ihrer Bildung verfolgt worden. Bo untersuchte
v. Dungern die Priizipitine und studicrte an Veriinderungen der Kurve
nach bestimmter Vorbehandlung der Versuchstiere niiher den Mechanismus
der Prazipitinbildung 3 ).
Bei den vorliegenden Studien kam es im wesentlichen
darauf an, eine groBere Anzahl von Kaninchen unter ganz
gleichen Bedingungen auf ihre Immunkorperbildung zu unter-
suchen. Hierzu dienten als spezieller Fall der Antikdrper-
bildung die Vorg&nge bei der H&molyse. Die immunisierten
Tiere wurden reihenweise untersucht, d. h. derart, daB man
immer Tiere eines Wurfes raiteinander vergleichen konnte.
Das Gewickt der einzelnen Tiere betrug ca. 2000 g.
Die Tiere wurden in die Ohrvenen injiziert mit 1 ccm einer frisch
bereiteten 20-proz. Aufschwemmung von Rinderblutkorperchen in 0,85-proz.
NaCl-Losung. Die Blutkorperchen waren zuvor aus dem defibrinierten
Blut abzentrifugiert und 2mal mit 0,85-proz. NaCl-Losung gewaschen. Der
Hiimolysenversuoh gestaltete sieh folgendermaSen: Die Blutentnahme ge-
schah aus der Ohrvene des Kaninchens; das Serum wurde durch Zentri-
fugieren gewonnen, wurde durch halbstiindiges Erwiirmen im Wasserbad
von 50° C inaktiviert, sodann wurden Verdiinnungen des Semms mit
0,85-proz. NaCl-Losung hergestellt in 4 Abstufungen : 1:10; 1:100; 1:200;
1:400. Hiervon kamen jeweils in ein steriles Kohrchen: 0,5 ccm. Dazu
wurde 0,5 ccm einer 5-proz. Rindcrblutkorperchenaufschwemmung hinzu-
gefiigt und als Komplement 0,5 ccm Meerschweinchensemm in der Ver-
diinnung 1:10, welches einer Halsvene taglich frisch entnommcn wurde.
Die drei Komponenten wurden durch Schiitt<‘ln in moglichst innige Be-
riihrung gebracht und fiir 2 Stunden unter WattevcrschluS in den Brut-
schrank gestellt (37 °C). Nach 12—15-stiindigem Aufenthalt im Kiililschrank
wurde das Rcsultat des Versuchs protokolliert. Die Hamolysenversuche
W'urden tiiglich ausgefiihrt. Den olxm genannten Verdiinnungen des
Immunserums entsprachen folgende absoluten Werte: V
1) Ehrlich und Brieger, siehe oben.
2) Salomonsen and Madsen, Annal. de Tinst. Past., 1897, 1899.
3) v. Dungern, Spezifitiit der Antikorper in der Festschrift fur
R. Koch, Jena 1903; v. Dungern, Die Antikorper, Jena 1903.
ZeiUchr. f. Immunltlitsfomhung. Orig. Bd. XIV. 4G
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Go^ 'gle
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670
Franz Wolf,
Verdiinnung I (1:10) = 0,05 ccm;
Verdiinnung II (1:100 = 0,005 ccm;
Verdiinnung III (1:200) = 0,0025 ccm;
Verdiinnung IV (1:400) -= 0,00125 ccm.
Ich fuhre diese Zahlen besonders an, um sie spater mit den Hamo-
lysenversuchen Bui lochs vergleichen zu konnen 1 ).
Eine Beeinflussung des Immunisierungsverlaufes durch Aderlasse in
Form der zur Untereuchung notwendigen Blutentnahme kam wohl in den
hier angefuhrten Versuchen nicht zur Geltung, da die Anordnung nur
kleine Men gen Serum taglich erforderte.
Bei jedem Versuch wurde die Taughchkeit des Meerschweinchen-
serums durch eine Kontrolle gepriift: Meerschweinchenserum + Rinderblut-
korperchen bei 2-stiindigem Aufenthalt im Brutschrank soil keine Spur
Hamolyse ergeben.
Die in den Protokollen verwandten Abkiirzungen bedeuten: V = voll-
kommene Losung; Sp = Losung bis auf Spuren; + + + + = L6sung bis auf
einen die Kuppe zur Halfte bedeckenden Bodensatz; + + 4* = Losung bis
auf einen die Kuppe bedeckenden Bodensatz; + + = deutliche Rotung der
iiberstehenden Fliissigkeit; + = schwache Rotung der iiberstehenden
Fliissigkeit: c = Kontrollversuch.
I. Kaninchenreihe.
11. X. 1911. Kaninchen 201, 2300 g Gewicht
„ 200, 2150 „
„ 202 , 2000 „
99
9t
ll h a. m. Inj. v. 1 ccm 20-proz. Rinderblutkorperchenaufschwenimung.
14. X. 1911. 3X24 h post Inj. Blutentnahme.
Inun.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
200 I
+ +
200 II
+ +
200 in
+ + +
200 IV
+ + +
200 (Kontrolle)
+ + +!
201 I
+ +
201 II
+ +
201 III
+ + +
201 IV
+ + +
202 I
+ +
202 II
+ +
202 III
+ + +
202 IV
+ + +
1) Bulloch, Ueber die Beziehung zwischen Hamolysis und Bakterio-
lysis. Centralbl. f. Bakt., Bd. 29, 1901.
Digitized by
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Ueber den Verlauf der Antikbrperkurve beim Kaninchen etc. 671
Gleich bei diesem I. Versuch trat die eigentlich recht ungewohnliche
aber wohlbekannte Tatsache ein, dafi in seltenen Fallen das Meerschwein-
chenserum Normalambozeptoren fiir Rinderblutkorperchen besitzt, so dafi
dieser Versuch ausschalten mufi.
2 neue Meerschweinchen werden auf ihr Serum hin untersucht. Das
Serum in verechiedenen Verdiinnungen hergestellt: 1:10; 1:20; 1:40;
1:100 und davon je 0,5 ccm mit 0,5 ccm der Rinderblutkorpcrchenauf-
schwemmung zusammengebracht und auf 2 h einer Temperatur von 37°
ausgesetzt. Bei der Verdiinnung 1:10 werden bei beiden Tieren Spuren
gelost, alle iibrigen Rohrchen bleiben klar.
16. X. 1911. 5X24 h post. inj. 17. X. 1911. 6X24 h post inj.
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
200 I
Sp
200 1
V
200 II
++++
200 II
Sp
200 III
+++
200 III
++++
200 IV
++
200 IV
+++
201 I
++
200 c
e
201 II
e
201 1
++
201 III
e
201 II
+
201 IV
e
201 III
+
202 I
+ + +
201 IV
(+)
202 II
++
202 I
+++
202 III
+
202 11
++
202 IV
e
202 III
++
202 c
e
202 IV
+
18. X. 1911.
7 X 24 h post inj.
19. X. 1911.
8X24 h post. inj.
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
| Hamolyt. Effekt
200 1
V
200 I
V
200 II
Sp
200 II
Sp
200 III
+ + + +
200 III
Sp
200 IV
+ + +
200 IV
+ + + +
200 c
e
200 c
+ ++M
201 I
+ +
201 I
+ + + +
201 II
e
201 II
+ + +
201 III
e
201 III
+ + +
201 IV
e
201 IV
+ + +
202 I
+ + +
2< >2 I
+ + + +
202 II
+
202 11
+ + + +
202 III
e
202 III
+ + +
202 IV
e
202 IV
+ + +
Der Versuch ist wiedemm untauglich, weil das Meerschweinchen-
serum allein schon hiimolytisch gewirkt hat.
46*
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672
Franz Wolf,
20. X. 1911. 9 X 24 h post. inj. 21. X. 1911. 10X24 k post mj.
Imm.-8.-K.
Hiimolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
Hiimolyt. Effekt
200 I
V
200 I
V
200 II
V
200 II
V
200 III
Sp
200 III
V
200 IV
Sp
200 IV
++++
200 c
ganz schw. Rotung
200 c
e
201 I
V
201 I
V
201 II
+ + + “h
201 II
+ + + 4
201 III
+
201 III
+ + +
201 IV
6
201 IV
+ +
202 I
Sp
202 I
Sp
202 II
+ + “}“ +
202 II
+ + +
202 III
+
202 III
0 (Hemmung?)
202 IV
+
202 IV
+ +
22. X. 1911.
llX24 h post. inj.
23. X. 1911.
12X24 h post. inj.
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
( Hiimolyt. Effekt
200 I
V
200 I
V
200 II
V
200 II
V
200 III
Sp
200 III
Sp
200 IV
+ + + +
200 IV
+ + + +
200 c
e
200 c
+ (!)
201 I
Sp
201 1
Sp
201 II
+ + +
201 11
+ + +
201 III
+ +
201 III
+ +
201 IV
+
201 IV
+ +
202 I
+++ +
202 I
Sp
202 II
++ +
202 II
+++
202 III
+ +
202 III
+ +
202 IV
«
202 IV
+
24. X. 1911.
4. XI. 1911 24 X 24“ post. inj.
Imm.-S.-K.
| Hamolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
I Hamolvt-Effekt
200 I
V
200 I
V
200 II
Sp
200 II
Sp
200 III
++++
200 III
++++
200 IV
+++
200 IV
+ + +
200 c
0
200 c
(+) leicht gerotet
201 I
Sp
201 I
V
201 II
++
201 II
Sp
201 III
+
201 III
201 IV
0
201 IV
+++
202 I
++ + +
202 I
++++
202 II
++
202 II
+++
202 III
e
202 III
++
202 IV
«
202 IV
++
Einige technische Details sollen im Anschlufi an diesen Vorversueh
erortert werden.
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I
Ueber den Verlauf der Antikbrperkurve beim Kaninchen etc. 673
Die sehr storende Wirkung der Normalambozeptoren im Meerschwein-
chenserum wurde in den iibrigen Versuchen dadurch vermieden, daft das
Serum auf 1:20 verdiinnt wurde, wobei in den verwandten Mengen des
Serums noch ausreichend Komplement enthalten war. Ferner konnte man
in den aufgefuhrten Versuchen die Beobachtung machen, daft innerhalb
des hamolytischen Systems Hemmungen auftraten, die ohne Zweifel in dem
Kaninchenserum begriindet sind (vgl. 14. X. 11 2001 und 20011 oder
21. X. 11 200 III).
Diese vermutlich auf Antikomplementwirkung beruhenden Hemmungen
des Immunserums wurden derart verhindert, daft zuerst das Immunserum
mit dem Antigen fiir 1 Stunde bei Zimmertemperatur zusammengebracht
wurde und so Gelegenheit fand, an die Rinderblutkorperchen zu gelangen;
dann wurde das Serum abzentrifugiert, die Blutkorperchen mit 85-proz.
NaCl-LSsung gewaschen und jetzt erst mit dem Komplement vereinigt.
II. Kaninchenreihe.
23. X. 11. Kaninchen 206, 2150 g Gewicht
„ 207, 2150 „ „
„ 208, 1750 „ „
6 h p. m. lnjektion von 1 ccm 20-proz. Rinderblutkbrperchenauf-
schwemraung intravenos.
27. X. 11. 3 X 24 h + 15* post inj. Blutentnahme.
Imra.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
2061
+ + + +
206II
+ + +
206 III
e
2071
+ + + +
207II
+ + +
2081
+ + + +
208II
++ +
28. X. 11. 4 X 24 h + 15 h post inj. 29. X. 11. 5 X 24 h + 14 h post inj.
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
2061
Sp
2061
V
206II
+++
206II
V
206 III
++
206 III
+ + + +
2061V
+
206IV
+ + +
206c
e
206c
e
2071
+++
2071
V
207II
+
20711
++++
207 III
+ (—)
207 III
+++
207IV
fast 6
207IV
++
2081
+ + + +
2081
V
208II
+ +
208II
+ + + +
208 III
+
208 III
+++
208IV
fast 0
2081V
+ + +
30. X. 11. Hamolyseversuch miflgluckt
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Gck igle
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UNIVERSITY OF CALIFORNIA
674
Franz Wolf,
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31. X. 11. 7 X 24“ + 21“ post inj.
Iram.-S.-K. |
Hamolyt. Eflekt
2061
Sp
206II
Sp
206 III
Sp
206 IV
++++
206 c
e
2071
++++
207 II
++++
207 III
++++
207 IV
e
2081
e?
208 II
e?
208 III
e?
208IV
0?
2. XI. 11. 9X24“ + 15 h post inj.
3. XI. 11. 10X24“ + 15“ post. inj.
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
2061
V
2061
Sp
20611
Sp
206II
+ + + +
206 in
++ + +
206 III
+++
206IV
+ + +
206IV
. ++
206 c
leicht gerotet
206 c
e
2071
V
2071
Sp
207II
fehlt
207II
+ + +
207 III
fchlt
207 III
+ +
207 IV
+ + +
207 IV
+
2081
V
2081
Sp
208II
+ + + +
208II
+ + + +
208 in
+ + +
208 III
+ + +
208IV
+ + +
208IV
+ +
5. XI. 11. 12 X24 h + 17“ post inj.
25. XI. 11. 32 X 24“ + 17“ post inj.
Imm.-S.-K.
I Hamolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
i Hamolyt Effekt
2061
Sp
2061
++++
206 II
+++
206II
+++
206 III
++
206 III
++
206 IV
+ +
206IV
+
206c
e
206c
e
2071
Sp
2071
+ + + +
207 II
+ + +
20711
+ +
207 III
++
207 III
+ +
207IV
+
2071V
+
2081
Sp
2081
+ + + +
208II
+ + +
208 II
+ +
208 III
+++ (-)
2081II
+ +
208 IV
++
208 IV
+
Go 'gle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber den Verlauf der Antikdrperkurve beim Kaninchen etc. 075
III. Versuchsreihe.
7. XI. 11.
Kaninchen 210, 1400 g Gewicht
„ 211, 1500 „ „
„ 212, 1450 „ „
8 b p. m. Injektion von 1 ccm einer 20-proz. Rinderblutkdrperchenauf-
schwemmung intravends.
9. XI. 11. 1X 24 b + 12 b poet inj. *).
10. XI. 11. 2 X 24 h + 12 h post inj . l )
Imm.-S.-K.
| Hamolyt Effekt
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
2101
1 + +
2101
+
210 n
+ +
210II
schwach gerdtet
210 c
e
210 c
e
2111
++
2111
+
21111
++
21111
schwach gerotet
2121
++
2121
+
212II
4-4-
212II
schwach gerOtet
11. XI. 11. 3 X 24 b + 13 b post inj.
12. XI. 11. 4 X 24 h + 12 b post inj.
Imm.-S.-K.
Hamolyt Effekt
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
2101
schwache Rotung
2101
+
210II
210II
schwache Botung
210 c
e
210 III
«> yy
2111
+
210 c
0
21111
schwache Rotung
2111
4*
2121
+
211II
Oil TTT
schwache Rotung
212II
schwache Rotung
All ill
» »
2121
4- 4-
212 H
schwache Rotung
212 III
i} yy
13. XI. 11. 5 X 24 b + 16“ post inj.
14. XI. 11. 6 X 24 h + 12* post inj.
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
Imm.-S.-K.
Hamolyt. Effekt
2101
Sp
2101
-r+ + +
210II
+++
210 H
+ + +
210 III
+ +
210 III
+ +
210IV
4-
2101V
+
210 c
e
210 c
e
2111
Sp
2111
Sp
211II
+ + +
211II
++
211 III
+ +
211 HI
+
211IV
+
211IV
+
2121
+++ +
2121
4* 4- 4-
212II
+ +
212II
+
212 III
+
212 HI
e
212IV
e
1) Das Auftreten von Hamolysinen am 1., 2. and 3. Tage ist auf die
Gegenwart von Normalhamolysinen, die sich in Kontrollveisuchen leicht
feetstellen liefien, zuruckzufiihren. Ihre Menge war aber stets eine geringe.
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676
Franz Wolf,
16. XI. 11. 8 X 24 h + 12 h post inj. 17. XI. 11. 9 X 24 b + 12 h post inj.
Imm.-S.-K.
Hiimolyt. Eflekt
Imm.-S.-K.
Hiimolyt. Eflekt
2101
V
2101
V
210 II
Sp
210II
V
210 III
Sp
210 III
++++
210 IV
+ + + +
210IV
+++
210 c
e
210 c
e
211 I
V
2111
V
211II
Sp
211 II
Sp
211 III
++++
211 III
++++
211IV
+++
211IV
+ + +
2121
Sp
2121
Sp
212 II
++ +
212 II
+++
212 III
+ + +
212 III
+ + +
212IV
++ (+)
212 IV
+ +
Kanincben
210 +•
IS. XI. 11. 10 X 24“ + 12" post inj.
20. XI. 11. 12 X 24 h + 12* post inj.
Imm.-S.-K.
Hiimolyt. Eflekt
Imm.-K.-S.
Hiiraolyt. Eflekt
2111
Sp (fast vollk.)
2111
Sp
211II
Sp
211II
Sp
211 III
+ + + +
211 III
•r + + +
211IV
+ + +
211IV
+ + + +
211c
e
211c
e
2121
Sp (fast vollk.)
2121
Sp
212 II
+ ++ +
212 II
212 III
+ +
212 III
+++ +
212IV
+
212IV
++++
NB. Blieb aus Versehen 12 h im Brutschrank. Teilweise bakterielle
Hiimolyse.
16. XII. 11. 38 + 24 h post inj.
Imm.-S.-K.
Hiimolyt. Eflekt
2111
Sp
211II
+
211 III
+
211IV
+
211c
e
2121
+ + + +
212 II
+
212 III
+
212IV
+
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UNIVERSITY OF CALIFORNIA
678
Franz Wolf,
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Bei dem Immunitatsverlauf unterscheiden v. Dungern
und Madsen ganz allgemein:
1) die Latenzperiode;
2) den Anstieg;
3) den Abfall;
4) die Gleichgewichtsperiode.
Der Verlauf der Immunisierung ist ein ganz verschiedener
und zwar verschieden fQr die einzelnen Tierarten, die die Anti-
kdrper bilden und wohl auch bei diesen wieder verschieden,
je nach dem Antigen, das man injiziert. So fanden Salo¬
mon sen und Madsen das Diphtherieantitoxin bei Pferden
zuerst am 3. Tage auftreten, ansteigend bis zum 9. Tage, vom
10. Tage an abfallend und dann Gleichgewichtszustand. Anderer-
seits bekam Ehrlich bei seinen Versuchen mit Tetanustoxin
den ersten Anstieg am 5. Tage, das Maximum an Immun-
kdrpern am 17. Tage. Bulloch erhielt bei mit Rinderblut
immunisierten Kaninchen — also in Versuchen, die mit den
vorliegenden analog waren — am 4. Tage den Anstieg, das
Maximum am 8. Tage und den Abfall bis zum 9. Tage; von
da ab Gleichgewichtszustand.
Nach diesen kurzen Vorbemerkungen einiges zur Erlauterung der
Kurven. Als Ordinaten sind die Tage angenommen, die Hdhe der Abszissen
gibt die jeweils grbUten Mengen an nachweisbaren Immunkorpern an, aus-
gedriickt durch den grbbten hamolytischen Eflekt.
Es entsteht so die Kurve der absoluten Immunkorpermengen. Eine
Willkurliehkeit ist allerdings noch dann vorhanden, dafl ieh die Abstiinde
der einzelnen Lbsungsgrade als untereinander gleich annehme, obwohl mir
daruber nur ein subjektives Urteil zusteht. Da diese Tatsache aber fiir
alle Kurven zutrifft und es lediglich auf den Vergleich der Kurven unter¬
einander ankommt, so wird diese Art der Untersuchung doeh in keiner
Weise beeintrachtigt.
Der kritische Anstieg erfolgt bei den meisten Tieren
zwischen dem 3. und 4. Tag. Bei der dritten Tierreihe fand
sich am 2. Tage schon ein geringer UeberschuB an Anti-
korpern, der bis zum 4. Tage bis auf die Normalambozeptoren
herabsank, um am 5. Tage erst in die Anstiegperiode einzu-
treten. SpStere Versuche, die hier noch nicht aufgefflhrt sind,
bestatigten die Regel, daB der 3. Tag den kritischen
Anstieg bringt. Dieser Anstieg dauert an bis zum
5. oder 6. Tage, dann folgt fast ausnahmslos ein
Gck igle
Original from
UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber den Verlauf der Antikorperkurve beim Kaninchen etc. 679
Stillstand, bisweilen sogar ein leichter Abfall
derKurve bis zum 7.Tage und dann nochmals ein
neues Erheben bis zum 10. Oder 11. Tag und von
da an der Abfall, den ISnger zu verfolgen sich ertlbrigte,
da die Kurve, wie scbon bekannt, in die Gerade flbergeht.
Die nach mehreren Wochen gemachte Probe ergab dann auch
immer einen Immunitatswert, der dem kurz nach dem be-
ginnenden Abfall erkannten kaum nachstand. Priift man das
Maximum an H&molysinen, das von den einzelnen gleich vor-
behandelten Tieren erreicht wird, und vergleicht die Zahlen
untereinander, so ergeben sich Schwankungen dieses Wertes
innerhalb bestimmter Grenzen. Die grbBte Losungs-
fahigkeit, die ein Blut aufwies, hatte den Wert
0,0025 ccm Immunserum zur kompletten Losung
von 0,5 ccm 5-proz. Rinderblutkdrperchenauf-
schwemmung. Der geringste Wert fiirdiegleichen
Mengen betrug 0,005 ccm.
Bulloch behauptet, daB die Wirkung der Blutinjektion
abh&ngig sei von der Stelle der Inokulation, der Menge des
injizierten Blutes und der Individualist des Antikbrper pro-
duzierenden Organismus. Vorweggenommen sei, daB sicherlich
keine direkte Proportionality zwischen zugefflhrtem Antigen
und AntikSrper besteht. Die Versuche Bullochs, die so
ahnlich der hier angefiihrten Versuchsanordnung sind, ermog-
lichen es, das Verhaltnis zahlenmaBig festzulegen. Er injizierte
13 ccm defibrinierten Rinderblutes, welchem 7,15 ccm Rinder-
blutkorperchen entsprechen, prflfte mit 22 ccm 5-proz. Blut-
kSrperchenaufschwemmung und erhielt folgende Werte: Maxi¬
mum 0,05 ccm; Durchschnittswert 0,1—0,3 ccm.
Durch eine einfache Berechnung ergibt sich, daB bei In-
jektionen der 9-fachen Menge des Antigens nur die Halfte
des Immunkbrperwertes erreicht wird, den man bei direkter
AbhSngigkeit erwarten mOBte. Unter Voraussetzung dieses
AbhSngigkeitsverhaitnisses stimmen die Werte vorliegender
Arbeit vollkommen mit denen Bullochs Bberein.
Zum zweiten behaupten Bulloch sowie auch Salo-
monsen und Madsen 1 ), daB die Individualist des zu
1) Salomonsen und Madsen, Annal. d. l’lnstitut Pasteur, 1899.
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Gck igle
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680
Franz Wolf,
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immunisierenden Tieres eine groBe Rolle spiele. Das trifft
sicherlich bis zu einem gewissen Grade zu: wenn man die
obigen Kurven wahllos miteinander vergleicht, dann wird man
auch zu diesem Resultate kommen. Nimmt man jedoch die
Kurven eines Wurfes zur Hand, und vergleicht die Iramunitats-
werte der Tiere gleichen Wurfes, so ergibt sich, daB mit ge-
ringen Ausnahmen die Resultate auBerordentlich gut fiber-
einstimmen, sowohl der Verlauf der Kurve, die zeitliche
Uebereinstimmung der verschiedenen Phasen, wie auch die
absoluten Immunitatswerte. Es scheint also der Ver¬
lauf der Antikfirperkurve, der qualitativ ffir die ganze
Tierart bei bestiinmter Immunisierung festgelegt ist, in
quantitativer Beziehung bei blutsverwandten gleich-
altrigen Tieren ein einheitlicher und somit eine
familiencharakteristische Eigenschaft zu sein.
Sollte diese durch relativ wenig zahlreiche Versuche gesttitzte
Hypothese sich bewahrheiten, so wfire ein derartiges biologisches
Verhalten innerhalb eines Kreises von Individuen gleicher Ab-
stammung nicht alleinstehend, wie die Untersuchungen fiber
Vererbbarkeit der Isoagglutinine v. Dungerns beweisen x ).
— Jedenfalls aber ist die Uebereinstimmung bei Tieren gleichen
Wurfes so groB, daB man in der Lage ist, ein Geschwistertier
als Kontrolle ffir das Verhalten der Normalhfimolysine im
speziellen Fall heranzuziehen.
Freilich haben die hier niedergelegten Tatsachen vorlSufig
nur fur die Hfimolyse Geltung, eine Verallgemeinerung ist
nicht angangig, wie die weiter unten angeffihrten Versuche
betreifend die Bildung von Prfizipitinen ergeben.
Die Tiere wurden einmal mit inaktivem Rinderserum
(1 ccm intravenos) injiziert.
Es wurde in don crston Tagen sowohl auf noch kreisondes Rinder-
eiweiS, wie auf Rinderprazipitin untersucht. Fur die erste Priifung Irani
hochwertiges Antirinderserum in der Verdiinnung von 1:10 zur Ver-
wendung. Das auf Rinderprazipitin zu untereuchende Kaninchenserum
wurde auf fallende Mengen Rinderserum geschichtet, wovon Verdiinnungen
1:10 (1) 1:100 (2) 1:1000 (3) 1:10000 (4) 1:100000 (5) hergestellt
wurden.
1) v. Dungern und Hirschfeld, Zeitschr. f. Immunitatsf., Bd. 8,
Heft 4.
Gck 'gle
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UNIVERSITY OF CALIFORNIA
Ueber den Verlauf der Antikorperkurve beim Kaninchen etc. 681
Es kamen zum Yersuch 0,1 ccm unverdiinnten Kaninchenimmun-
serums auf 0,1 ccm der Rinderserumverdiinnung. Die Rbhrchen wurden
fiir 1 Stunde in den Brutschrank gc*stellt und die als Ring an der Grenz-
schicht sich bildende Triibung als positive Reaktion zu Protokoll genommen.
Nach Vermischung der beiden Korper durch Schiitteln und in 12-stiindiger
Aufbewahrung im Kiihlschrank wurde das Priizipitat am Boden in ver-
8chiedenen Abstufungen notiert. Nach cinem Vorversuch kara folgender
Wurf zur Untersuchung:
23. XI. 1911. Kaninchen 218 1950 g
„ 219 2050 g
„ 220 2100 g
6 h p. m. 1 ccm akt. Rinderserums intravenos.
24. XI. 22 h post inj.
Priifung auf RindereiweiS. Priifung auf Prazipitine.
Kan.-Ser.
Priizipitat
Imm.-S.-K.
| Priizipitat
218
Ring +4-
218 I
0
219
Ring + +
218 II
0
220
+ +
218 III
0
26. XI. 218
Ring +
dgl. auch 219
u. 220
219
+
220
Ring + +
27. XI. :
11. 3 X 24 h post inj.
Priifung auf RindereiweiS.
Priifung
auf Prazipitine.
Kan.-Ser.
Priizipitat
Imm.-S.-K.
| Priizipitat
218
+
218
0
219
+
219
e
220
+
220
0
28. XI. 11.
4 X 24 h -f 17 h post inj.
Priifung auf RindereiweiS.
Priifung
auf Prazipitine.
Kan.-Ser.
Priizipitat
Imm.-S.-K.
Priizipitat
218
Ring +
218 I, II, III
0
219
+
219 I, II, III
220
+
220 I, II, III
29. XI. 11. 5 X 24 h + 17 h post inj.
Priifung auf RindereiweiS.
Kan.-Ser.
Priizipitat
218
R(sehwach) -f
219
+
220
+
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682
Fran* Wolf,
Prufung auf Prazipitine.
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Kan.-Ser.
Prazipitat
Kan.-Ser.
Prazipitat
2181
R + +
2191
R 44
2201
+ +
218 II
e
219 II
R +
220 II
+
218 III
e
219 III
e
220 III
e
30. XI. 11. 6 X 24 11 + 17 h post inj.
Prufung auf Rindereiweifi.
Prufung auf Prazipitine.
Kan.-Ser.
Prazipitat
Imm.-S.-K. |
218
schwach
218 1
219
Ring +
218 n
220
+
218 III
218 IV
219 1
219 II
219 III
219 IV
2201
220 II
220 III |
220IV I
1. XII. 11. 7X24“ + 15 h post inj.
Prufung auf Rindereiweifi.
Kan.-Ser.
Prazipitat
218
219
! e
220
! e
Prazipitat
Ring schw. 4
Ring 4
4
4
Ring 4444
Ring 444
Ring 44
Ring +
Ring 44
Ring 44
4
+
Prufung auf Prazipitine.
Imm.-8.-K.
| Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
2181
Ring + +
2191
Ring + + + + +
2201
Ring + + +
218 II
Ring + +
219 II
Ring + +
220 II
Ring + +
218 III
+
219 III
Ring +
220 in
(+)
218 IV
e
219 IV
O
220 IV
0
218 V
e
219 V
6
220 V
0
2. XII. 11. 8 X 14 h post inj.
Das Rindereiweifi ist vollkommen geschwunden bei den 3 Kaninchen.
Prufung auf Prazipitine.
Imm.-8.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
2181
218 II
218 III
218 IV
Ring — ©I
(Ring) 0
e
e
2191
219 II
219 in
219 IV
Ring + +
Ring +
Ring +
©
2201
220 II
220 III
220 IV
Ring 4 +
Ring 4
(Ring) 4
©
Gck igle
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Ueber den Verlauf der Antikorperkurve beixn Kaninchen etc. 683
4. XII. 11. 10X24* + 18 h post inj.
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
2181
0
2191
+
2201
+
218 II
e
219 II
( + )
220 II
<+)
218 III
e
219 III
e
220 III
e
218 IV
0
219 IV
e
220 IV
e
5. XII. 11. 11 X24 h + 17* post inj.
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
2181
218 II
218 HI
218 IV
Ring +
Ringschw.+
Ringschw.-j-
e
2191
219 II
219 III
219 IV
Ring+ + +
+ +
Ring +
Ring +
2201
220 H
220 III
220 IV
Ringschw.+
Ring +
Ring +
Ring +
6. XII. 11. 12 X24 h + 18 h post inj.
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
2181
218 II
218 III
218 IV
Ring +
Ring +
Ring +
Ring +
7. XII.
219 I
219 II
219 III
219 IV
1911. 13 >
Ring + + +
Ring + +
Ring + +
Ring +
: 24 k + 17 h p<
2201
220 II
220 III
220 IV
)st inj.
Ring + +
Ring + +
Ring + -|-
Ring +
Imm.-S.-K.
Prazipitat
lmm.-S.-K.
Prazipitat
| Imm.-S.-K.j Prazipitat
218 I
218 II
218 III
218 IV
(Ring) 0?
Ring +
Ring +
Ring +
219 1
219 II
219 IH
219 IV
Ring + +
Ring + + +
Ring + + +
(+)
220 I
220 II
220 III
220 IV
Ring — (+)
Ring +
Ring +
e
Die geringer ausfallende fieaktion in der I. Verdiinnung wie in der
II. und III. Verdiinnung ist wohl bedingt durch Hemmungen, wdche
von dem Antigen ausgehen und bei der schwiicheren Verdiinnung daher
mehr zum Ausdruck kommen und dem Immunkorper starker entgegen
wirken als in den starkeren Verdiinnungsgraden.
9. XII. 1911. 15 X 24 h + 15 h post. inj.
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
Imm.-S.-K.
Prazipitat
218 I
218 II
218 III
218 IV
(Ring) e
Ring ?
1 Ring (+)
(Ring) ©
219 I
219 II
219 III
219 IV
Ring (+)
Ring +
Ring + +
Ring (+)
220 I
220 II
220 III
220 IV
(Ring) e
(Ring) + ?
(King) 6
(Ring) 0
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Gck igle
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084 F r. Wolf, Verlnuf der Antikorperkurve beim Kaninehen etc.
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11. XIL 1911. 17 X 24 h + 18“ post inj.
Imm.-S.-K.
Priizipitat
Imui.-S.-K.
Priizipitat
lmm.-S.-K.
Priizipitat
218 I
218 II
218 III
218 IV
Ring! +
Ring +
Ring +
Ring +
219 I
219 II
219 III
219 IV
Ring +
Ring +
Ring + +
Ring +
220 I
220 II !
220 III
220 IV
Ring (+)
Ring (+)
Ring (+)
i Rin g (t)
14. XII. 1911. 20X24 h + 12 h post inj.
Imm.-S.-K.
Priizipitat
Imm.-S.-K.j
Priizipitat
Imm.-S.-K.
Priizipitat
218 I
218 II
218 III
218 IV
(Ring) ( + )
King e
Ring (+)
Ring +
219 I
219 II
219 III
219 IV
1 (Ring) +
Ring (+)
| Ring +
; Ring +
220 I 1
220 II
220 III
220 IV
Ring +
Ring +
+
+
18. XI. 1911. 2 X 24 h + 12 k post inj.
Imm.-S.-K.
Priizipitat
Imm.-S.-K.
Priizipitat
Imm.-S.-K.]
1 Prazipitat
218 I
e
219 I
Ring 6
220 I
e
218 TI
e
219 II
Ring 6
220 II
e
218 III
(Ring) ( + )
219 III
Ring ( + )
220 III
e
218 IV
! (Ring) e
219 IV
Ring (+)
220 IV
1 e
AuBer dieser Reihe gelangten noch zwei andere Kaninchen-
wiirfe von je 3 Tieren zur Untersuchung. Das einzig Ueber-
einstimmende bei alien Reihen war die Latenzzeit, die 4—5
Tage betriigt. Die Beurteilung der Starke des Prfizipitats ist
nicht leicht, infolgedessen auch sehr subjektiv. Bei der hier
verwandten Versuchsanordnung w r ar das Maximum der ge-
bildeten Pr&zipitine ersichtlich bei den noch erfolgten Re-
aktionen mit Antigenverdiinnung bis zu 1:10000. Das eine
Protokoll wurde vollstiindig mitgeteilt, um zu zeigen, welch
groBen Schwankungen der PrSzipitingehalt unterworfen ist, die
jedoch bei keinem Tier die gleichen sind. Ferner soil das
Protokoll zeigen, daft die vielen Hemmungen, welche bei der
Reaktion auftreten, ohne leider ausgeschaltet werden zu k5nnen,
eine quantitative Beurteilung des ImmunitStsverlaufes schlechter-
dings unmoglich maclien.
Wiihrend iibrigens der Wurf 218—220 PrSzipitine vom
5.—24. Tage aufweist, linden sich bei einem anderen Wurf
221—223 Pr&zipitine nur vom 5.—9. Tag, um dann gSnzlich
zu verschwinden. Auch fur das noch vorhandene Antigen,
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Felix Gal, Untersuchungen iiber das Virulenzproblem. 685
das im Blut des injizierten Tieres kreist, gibt es keine regel-
m&Big begrenzte Frist, obgleich auch in dieser Beziehung die
Tiere eines Wurfes nShere Uebereinstimraung zeigen. So
sieht man beim ersten Wurf das RindereiweiB am 8. Tage
und bei dem zweiten Wurf erst am 11. Tag verschwinden.
Es ergibt sich hieraus, daB fiir die Pr&zipitinbildung eine
weitgehende Gesetzm&Bigkeit nicht aufgestellt werden kann
und deshalb diese Reaktion fiir die eingangs angegebenen
Untersuchungen unbrauchbar ist.
Die HSmolysinbildung eignet sich hingegen mit ihrer
augenscheinlicheren Reaktion gut zur Untersuchung pharma-
kologischer BeeinfluBbarkeit.
Zusammenfassung.
1) Nach einmaliger intravenoser Injektion von Rinderblut-
korperchen beim Kaninchen gelingt es weitgehende Gesetz-
m&Bigkeiten im Verhalten der Hamolysinkurve festzustellen,
die als Grundlage fiir die Beurteilung pharmakologisclier
Wirkungen auf die Produktion von Antikorpern dienen konnen.
2) Diese GesetzmSBigkeiten treten aber nur innerhalb ein
und desselben Wurfes mit hinreichender Scharfe zutage, so
daB in dieser Richtung lediglich solche Tiere untereinander
vergleichbar sind.
JV achdruck verbofrn.
[Aus dem Bakteriologischen Institut der Universitat in Budapest
(Direktor: Prof. Dr. Hugo Preisz).]
Untersuchungen fiber das Virulenzproblem.
Von Dr. Felix Gal.
(Eingegangen bei der Redaktion am 26. Juni 1912.)
Wenn wir uns die Beantwortung der Frage zur Aufgabe
machen, welcherlei Prozesse bei der Virulenzsteigerung der
Bakterien in Betracht kommen, so finden wir uns, sowie wir
den streng darwinischen Standpunkt verlassen und uns auf
das Gebiet konkreter physikalisch-chemischer Erklarungen be-
geben, sofort Schwierigkeiten gegeniibergestellt, welche geradezu
Zeitschr. f. ImmuniUtsforschung. Orig. Bd. XIV, 47
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Felix Gal,
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686
uniiberwindlich zu sein scheinen. Die hier sich abspielenden
Prozesse greifen tief in die fur die Menschheit wahrscheinlich
ewig ungelost bleibende Frage des organischen Lebens ein;
die Frage der Virulenz ist eigentlich ein Teil der Lebens-
frage. DaB dessen ungeachtet viele diese Frage mit einfachen
und unmittelbaren Erkiarungen abtun wollen, mag darin seinen
Grund haben, daB wir es hier mit Mikroorganismen, nSm-
lich mit im Vergleiche zu Lebewesen hoherer Ordnung sehr
einfach gearteten Organismen zu tun haben. Wenn wir jedoch
von ihrer GroBe absehen und ihre chemische Struktur in Be-
tracht ziehen, so werden wir bald einsehen, daB wir Schwierig-
keiten gegeniiberstehen, welche kaum kleiner sind als die
Lebensprobleme der Metazoen. Dies ubersehen jene Forscher,
welche mit ihren Erkiarungen die ganze Frage zu losen ver-
meinen, wfthrend sie uns zumeist lediglich eine Beschreibung der
sich hier abspielenden Prozesse bieten. Wir konnen zufrieden
sein, wenn wir das Virulenzproblem dem heutigen Stande der
Wissenschaft anpassen; eine, die ganze Frage umfassende
einheitliche Erklarung zu finden, wird uns wohl fflr immer
versagt bleiben.
Wenn wir jene Prozesse, welche bei der Virulenzsteigerung
eine Rolle spielen, verstehen wollen, so mtissen wir die Um-
stande in Betracht ziehen, unter welchen die Bakterienvirulenz
zu steigen ptiegt. Solche sind die Tierpassage, die Serum-
passage und die Virulenzsteigerung auf N&hrboden, unter
denen zwar die beiden letztgenannten sehr unsicher sind. An
diese schlieBen sich als neue Beobachtungen die Virulenz¬
steigerung durch Garnngspilze und durch Fer¬
ine nte an.
Die erste Art, die Tierpassage, ist die bekannteste und
am grUndlichsten untersuchte unter alien. Die Verhaltnisse
sind jedoch hier die inoglichst kompliziertesten, denn so wie
das Bakterium in den Tierkorper gelangt, tritt beiderseits
eine solche Masse von Reaktionsprodukten in Aktion, daB das
Virulenzproblem aufhort, eine isolierte Frage zu sein; un-
ziihlige Fragen der Immunitatslehre spielen hier mit, und wir
miissen jedem einzelnen Faktor der Immunitatslehre Rechnung
tragen. Und wenn wir einen Schritt weiter tun und berfick-
siclitigen, daB das Bakterium dem Wesen nach aus EiweiB-
Go^ 'gle
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L'ntersuchungen iiber das Virulenzproblem.
687
korpern besteht und der tierische Organisraus fiber zahlreiche
Stoffe verfiigt, welche in Aktion treten, wenn von aufien EiwejB
in denselben gelangt, so ist es klar, daB dieses Problem auch
vom Standpunkte der EiweiBchemie aus zu behandeln ist, und
so gelangen wir im Endresultate dahin, daB die auf diese noch
lange nicht abgeschlossene Wissenscbaft sich sttitzenden Kon-
klusionen vorlaufig nicht unanfechtbar sein konnen und immer
wieder neuerlicher Ergfinzung bedfirfen.
Als von uns wahrgenommene Tatsache ist es zu betrachten,
daB ein Bakterium, welches einen oder mehrere Tierkfirper
passiert hat, infektioser ist als das ursprfingliche, d. h. es ist
imstande, ein und dasselbe Tier in kleinerer Dosis und in
kfirzerer Zeit zu toten. Es taucht nun die Frage auf, was der
Unterschied ist zwischen dera ursprfinglichen und demjenigen
Bakterium, welches Tierkfirper passierte. Selbstverstandlich
muB diese Frage auch vom Standpunkte des Organismus aus
beantwortet zu werden, und so wird die Aufgabe eine ungemein
kornplizierte. Denn es ist klar, daB es nicht nur von Wichtig-
keit ist, festzustellen, inwiefern das Bakterium sich wfihrend
der Passage verfinderte, sondern auch inwiefern das Verhalten
des Organismus dem Bakterium gegenfiber eine Veranderung
erlitt, denn es ist auch denkbar, daB das Verhalten des Or¬
ganismus ein derartig verschiedenes ist, daB schon dieser
Umstand ffir die Erklfirung eines Teiles der Erscheinungen
genfigt.
Erkliirungen, welche auf diesem Gebiete moglich sind, konnen rnorpho-
logische sein oiler sich auf die Gesetze der Chemie oder der Immunitiits-
lehre stutzen. Dort, wo wir fiir die Virulenz eines Bakteriums liber eine
so einfaehe und pnizi.se Erkliirung vorfiigen, wie sie jene ist, welche Preisz
fiir den Anthraxbacillus anwendete, tritt jede andere Erkliirung hinter der
morphologischen zuriick. Der Anthraxbaeillus umgibt sich im empfiing-
lichen Tie re mifc einer Kapscl, und dii^se schiitzt ihn vor der schadhchen
Einwirkung des Tieres.
Es vollziehen sich demnach bi*i diesem Bacillus morphologische Ver-
iinderungen, welche uns gleichzeitig auch die Virulenzsteigerung erkliiren.
Bei anderen Bakterien, welche keine Kapsel bilden, ist eine morpho¬
logische Erkliirung nicht am Platze (die Theorie von Marx und Woithe
iiber den Zusammenhang der Babes-Ernstschen Kdrner und der Virulenz
wurde schon fallen gelassen), und miissen hier Beobachtungen der Immuni-
tiitslehre zu Hille genommen werden, wenn auch die auf die letztere ge-
stiitzt(‘n Erkliirungen allerdings viel weniger priizis und befrit^digend sind.
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Felix Gal,
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Es ist sclbstverstiindlich, dafl wir in erster Keihe nach cbemischen Er-
klarungcn, a Is dm priizisesten streben nnissen; zurzeit ist es jedoch noch
kaum mbglich, in der lmmunitatslehro eine einheitliche chemische Erkliming
zuwcgczubringcn.
K. Pfeiffer fiihrt den Unterschied zwischen vimlenten mid aviru-
lenten Cholerabakterien auf den Untcrschied zwischen den Rezeptoren zu-
riick, zu welehcm 8chlusso ihn die Bcobachtung leitete, da6 dicselben
versehicdene Menken Agglutinin bilden. Die Passage ist eigentlich das
fortwiihrende Funktionieren des Rezeptorenapparates, was die 8teigemng
der \ r irulenz zur Folge hat. NaturgemiiB wiirde diese Erklarung an eh
dann uieht als Losung der Frage betraehtet werden konnen, wenn aueh
bewiesen wiire, dafi die gleichen Kezeptoren als Antigene die Agglutinin-
bildung ausldsen, wie jene, welehe antilytisch, antiopsoniseh etc. wirken,
bzw. als Schutzmittel des Bakteriums funktionieren und so bei der Vimlenz
eine Rolle spielen.
Es sei kier noeh die Thcorie von Trail be erwiihiit, naeh weleher
mit der Oberfliichenspannung der Urngebung sich aueh die Virulenz der
Bakterien veriindert. Sieherlieh kann damit eine Virulenzabnahnie erkliin
werden, schwerlich hingegen eine Steigerung derselben, und die Theorie
ist ex peri men tell noeh uieht geniigend erliiirtet.
Am iiberzcugendsten unter den Theorien der Virulenz diirfte die
Agressintheorie sein mit ihren zahlreiehen Varianten. Ich komrao auf diese
noch spiiter zuriick.
Indem ich mit der Aufzahlung der Vorgiinge fortfahre, welehe die
Virulenzsteigerung befordern, erwiihne ich die 8crum passage, welehe durch
E. Hteinhardt, Miiller u. a. sehr griindlich studiert wurde. Nach
ersterem Forseker ist die Virulenz des Diphtherie- und Dysenteriebaeillus
im homologen Immunserum nicht nur keine gesteigerte, sondern im
Gegenteil diese Bakterien verlieren darin an lnfektionskraft, wahrend hin¬
gegen der Tvphusbacillus naeh mehreren Irani unserum passagen eine starke
Virulenzsteigerung aufweist.
Ich erwiihne hier aueh noch, dafi gewisse Bakterien, wenn sie auf
bluthaltigen Niihrboden geziichtet werden, zwar keine gesteigerte Virulenz
aufweisen, dennoch wenigstens die urspriingliche beibehalten. Diese Me-
thode ist indes keineswegs verliiBlich.
Eine bisher nicht bekannt gewesene Art der Virulenz¬
steigerung ist die von mir ktirzlich beschriebene (Centralbl.
f. Bakt., Bd. 61), welehe darin besteht, dafi der Colibacillus,
wenn er auf fliissigem Niihrboden mit gewissen GSrungspilzen
gemeinsam geziichtet wird, eine erhebliche Virulenzsteigerung
erfiihrt. Wahrend vorher eine ganze Kultur des Colibacillus
das Meerschweinchen nicht zu toten vermochte, konnte dies
nach Ziichtung mit Garungspilzen und darauf folgender Iso-
lierung schon bei Gaben von 2—4 mg bewirkt werden.
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Untersuchungen liber das Virulenzproblem.
689
Hier kommt also die Virulenzsteigerung ohne Einwirkung
irgendwelches tierischen Stoffes zustande. Die Garungspilze
iiben auf den Colibacillus eine eigenartige Reizwirkung aus,
unter welcher derselbe seine biologischen Eigenschaften ver-
andert. Wir konnen dieser Art von Virulenzsteigerung aus
dem Grunde eine groBe Wichtigkeit beimessen, weil durch
dieselbe die LSsung der Frage vereinfacht wird, indem eine
groBe Menge der hier in Betracht kommenden Stoffe, nament-
lich die nur im tierischen Organismus vorkommenden Lysine,
Opsonine etc., ausgeschlossen werden konnen, bei welchen es
sich als sicher herausgestellt hat, daB sie zur Virulenzsteige¬
rung nicht unbedingt notwendig sind. Ja es ist sogar zweifellos
geworden, daB die Reizwirkung, welche die Virulenzsteigerung
zustande bringt, nicht von etwas Lebendera stammen muB,
denn, wie wir sehen werden, wird dieselbe auch durch ab-
getotete Saccharomyceten ausgeiibt.
Ich gehe hier gleich auf eine Beobachtung iiber, welche
ich, von der fruheren ausgehend, machte. Urn die feineren
Details der durch Garungspilze verursachten Virulenzsteigerung
zu priifen, wollte ich untersuchen, welcher Bestandteil der
Garungspilze dieselbe verursacht und ob sie unabhangig vora
lebenden Pilz zustande kommt. Ich bereitete zuerst ein
wasseriges Extrakt aus Garungspilzen, welche mittels 80°
Hitze abgetStet waren, und zuchtete darin den Colibacillus,
welcher sich hier gut vermehrte, ohne daB jedoch eine Virulenz¬
steigerung zu beobachten war. Dasselbe versuchte ich nun
auch mit einem wasserigen Extrakt aus Garungspilzen, welche
mittels Chloroform abgetotet waren. Ich mischte in das¬
selbe Colibacillen und isolierte sie nacli 2 Tagen. Die kleinste
todliche Dosis dieses Colistammes betrug vorher 8 mg (sub-
kutan). Nach der Ziichtung ging sie auf 4 mg herunter. Der
Colibacillus zeigte also eine ziemlich groBe Virulenzsteigerung.
Da dieser Versuch bei den durch Hitze abgetbteten Bacillen
ein negatives Resultat ergab, so war der Gedanke naheliegend,
daB die Fermente der Garungspilze jener Faktor sind,
welcher bei der Virulenzerhohung eine Rolle spielt. Dies war
jedenfalls in bezug auf das Weitere maBgebend, und ich unter-
suchte jetzt, ob die verschiedenen, annShernd rein hergestellten
Fermente auf die Virulenz einen EinfluB ausiiben. Ich impfte
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Felix Gal,
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also Colibacillen in die Lfisungen folgender Fermente: Diastase,
Zymase, Trypsin und Erepsin. Nach 24 Stunden isolierte ich
die Bakterien aus den Lfisungen und injizierte in Meer-
schweinchen je 2 mg subkutan. Das Ergebnis mehrerer Ver-
suche war folgendes:
1) Meerschw., gcimpft mitOolibac., geziiehtet in 1 Proz. Diastase: Iebt
2) „ fJ ,, ,, ,, ,, 1 ,, ^\niase. lebt
3) .. ,, „ „ „ „ V )0 « » Trypsin: +n. 2Tagm
4) „ „ „ „ „ „ 1 „ Erepsin: t n. 2Tagen
Der Versuch hat gezeigt, daG die Virulenz des Coli¬
bacillus in der Trypsin-, sowie auch in der Erepsinlosuug
gestiegen ist. Diese Beobachtung kliirt uns nun fiber ver-
schiedenes auf. Der Umstand, daC ein proteolytisches Ferment
die Virulenz des Colibacillus zu beeinflussen vermag, macht
es wahrscheinlich, dad auch bei der durch Garungspilze ver-
ursachten Virulenzsteigerung der Einflufl von Fermenten eine
Rolle spielt, andererseits wirft er auch ein Licht auf die im
Organisinus sich abspielenden Prozesse. Namentlich macht
er es wahrscheinlich, dad auch im Organisinus proteolytische
Fermente die Virulenz beeinflussen konnen. Es ist demuach
klar, dad zwischen der in vitro vor sich gehenden und der im
Organisinus bei der Passage beobachteten Virulenzsteigerung
kein wesentlicher Unterschied besteht. Die proteolytischen
Fermente dienen ebenso dem Organismus wie den Saccharo-
myceten als wirksame Schutzwafl'en im Kampfe gegen Bakterien.
Im Organismus ist in dieser Beziehung das beste Beispiel das
Trypsin des Darmes, welches einer der wirksamsten bakteri-
ziden Stoffe des Organismus ist (Yioo-proz. Losung totet eine
ganze Kultur Typhusbacillen in einigen Stunden ab), aber
proteolytische Fermente besitzen auch die fibrigen Bestand-
teile des Organismus, und schliedlich hat jede einzelne Zelle
eine Schutzwaffe an seinem Endoenzym. Bei den Gfirungs-
pilzen spielen die Fermente als Schutzwaffen gleichfalls eine
bedeutende Rolle: dies bezeugt der durch Stanziale be-
obachtete Kampf zwischen Saccharomyces und Gonococcus,
aus welchem der Garungspilz als Sieger hervorgeht, wahrend
der Gonococcus zugrunde geht. Hat das Bakterium im Kampfe
gegen die Fermente sein Leben nicht eingebfifit, so geht es
mit erhohter Virulenz aus demselben hervor, und brauchen
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Untersuchungeu uber das Viruleuzproblem.
691
wir uns fiber den uns im ersten Momente unerklfirlich
scheinenden Umstand nicht roehr zu wundern, daB ein Bak-
terium, nach der Symbiose mit Saccharomyceten, gegenfiber
einem von den Gfirungspilzen so entfernt stehenden Organismus,
wie denijenigen des Tierkfirpers, an Virulenz gewonnen hat,
und dies tim so weniger, weil ja die Stoffe, welche hier in
Betracht kommen, sowohl im Tierkfirper wie auch im Gfirungs-
pilze einander sehr verwandt sind.
Auch vom Standpunkte des Organismus ist diese Be-
obachtung hochst wichtig, denn sie macht es wahrscheinlich,
daB Qualitfit und Quantitfit der Fermente des Organismus
Faktoren sind, welche auf die Virulenz der Bakterien von
EinfluB sind und mit dem Eindringen in die Details dieser
UmstSnde erfiffnen sich der Forschung weite Horizonte.
In der Erwfigung, daB bei der Virulenzsteigerung des
Colibacillus durch Saccharomyceten vielleicht ein spezielles
Gift des ersteren eine Rolle spielt, versuchte ich, aus dem-
selben jenen Stoff zu isolieren, welcher die Infektion ermfig-
licht und gleichzeitig die x eigenartigen anatomischen Ver-
finderungen, namentlich die Hfimorrhagien, erklart.
Wie ich nun schon damals ausfuhrte, fand ich zwar kein
Gift, hingegen aber einen Stoff, welcher virulente Colibacillen
infektios zu machen imstande ist. Die Herstellung dieses
Stoffes erfolgte in der Weise, daB ich 24-stfindige Kulturen
mit Wasser abwusch und die so erhaltene Emulsion im Therrao-
staten der Autolyse unterzog. Nach 3 Tagen filtrierte ich
dieselbe durch einen Tonfilter und dieses Filtrat verwendete
ich bei meinen Versuchen. Es stellte sich heraus, daB bei
gleichzeitiger Injektion beider Stoffe weniges von diesem Fil¬
trate (eiuige Zentigramm) eine kleine Menge (1 Zentigramm)
sonst avirulenter Colibacillen todlich gestaltet. Es schien mir
nun von Werte zu sein, mich mit dieser Frage eingehender
zu befassen, denn offenbar hatten wir im Problem der Viru¬
lenz einen Fortschritt zu verzeichnen, wenn es gelang, aus
dem virulenten Bakterium bestandig einen Stoff herzustellen,
welchem eine infektionsbefordernde Wirkung eigen ist und
welcher in avirulenten Bakterien nicht in so grofien Mengen
vorhanden ist. Angesichts der Wichtigkeit dieser Frage unter-
suchte ich von diesem Gesichtspunkte aus mehrere andere
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Felix Gal,
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Bakterien, aber nicht bei alien fand ich eine ausgesprochene
infektionsbefordernde Wirkung. In ziemlichem Made fand ich
eine solche bei V. Metschnikoff und sehr bedeutend beim
Typhusbacillus.
Ich bereitete von einem Laboratoriumsstamm des Typhus-
bacillus in oben beschriebener Weise ein Filtrat *und unter-
suchte dann am Meerschweinchen, ob dieses Filtrat subletale
Dosen des Typhusbacillus infektios zu machen imstande ist.
Eine solche Wirkung war bei kleinen Dosen desselben nicht
nachweisbar. Hierauf unterzog ich den Typhusstamm der Passage
durch 5 Meerschweinchen. Daraus verfertigte ich dann neuer-
dings ein Filtrat und untersuchte dasselbe. Die folgende Tabelle
zeigt das Resultat. In dieser sind die Versuche mit 3 Stammen
zusammengefadt; die infektionsbefordernde Wirkung ist in die
Augen fallend.
Menge der ein- Menge des
gefiihrten Bacillen ! Filtrates
Resultat
I. Typhusstamm, todliche Dosis 6 mg
(naeh der Passage todliche Dosis */ 10 mg).
1
1 JO m K
0,5 '
+ 2
Tagen
2
1
100 >>
0.2 1
dgl.
3
1 /&oo >> i
0,2 |
yy
4
* 1
1 ,600 » 1
0,2
lebt
II. Typhusstamm, todliche Dosis nach der Passage 1
(vor der Passage 4 mg).
to mg
1
'in o I
0,2
t 2
Tagen
2
«/
/ ioo yy 1
02
lebt
111. Typhusstamm, todliche Dosis
(vor der Passage
naeh der Passage 1
6 mg).
a mg
1
| 1 4o m g
0.2
t 2
Tagen
2
/ioo yy i
0.2
dgl.
3
1 i i
- ;,oo rr i
0,2
lebt
(Injektion immer subkutan.)
Das Filtrat aus den Typhusbacillen zeigt dieselben Eigen-
schaften, welche ich in bezug auf das Colifiltrat seinerzeit be-
schrieben habe. Es wirkt in kleinen Mengen, ist an sich nicht
giftig, kann aus virulenten Bacillen in ungleich groBeren
Mengen dargestellt werden als aus avirulenten und wirkt auf
die Trypsinverdauung hemmend ein. Dem Meerschweinchen
injiziert, war das Tier 5 Tage lang fiir die Infektion avirulenter
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Untersuchungen iiber das Yirulenzproblem.
693
Typhusbacillen empf&nglich. Seine, die Infektion avirulenter
Bacillen befordernde Eigenschaft verleiht ihra eine Aehnlichkeit
mit den Aggressinen (Bail, Kruse, Wassermann), so,
daB ich letztere behufs Vergleiches mit dem Filtrate etwas
ausffihrlicher behandeln muB.
Die ganze Frage kann auf die lSngsbekannte Tatsache
zuriickgefiihrt werden, daB es gewisse infektionsbefordernde
Stoffe gibt (die substances favorisantes der Franzosen).
Als erster erwahnt dieselben Wyssokowitz, welcher mit sterilen
Emulsionen des Colibacillus eine solche Wirkung verzeichnen konnte.
Nach ihm beobachteten Grawitz und de Bary, Bouchard, Roger
und andere iihnliche Wirkungen bei verschiedenen Bakterienprodukten.
Sodann bewies Gamaleia, daB den verschiedenen Stoff’en, wie z. B. dem
Papain, Pankreatin, Methamoglobin, den Glycocoll und dem Leuzin eine
solche Wirkung eigen ist. Nach ihnen beobachteten andere Autoren
(Deutsch, Wilde, Bauer) bei einer ganzen Menge von Stoffen eine
iihnliche Wirkung. SchlieBlich beobachtete sie Bail an Bakterien-
exsudaten, nanntc dieselben Aggressine und brachte sie mit der Virulenz
in Zusammenhang. Spater haben Wassermann, Doerr, Sauerbeck,
Ballner, Flexner u. a. einfach durch Abwaschen von Kulturen solche
„Aggressine“ hergestellt.
Was die Wirkungsweise dieser Stoffe betrifft, so ist Bouchard
der Ansicht, daB sie die Phagocytose hemmen; nach Bail sind die¬
selben negativ leukotaktisch, Sauerbeck endlich fiihrt ihre Wirkung auf
die Giftigkeit zuriick, welche er bei groBen Dosen nachgewiesen hat. Die
zahlreichen Versuche in bezug auf die Wirkungsweise dieser Stoffe haben
auch festgestellt, dafi dieselben eine leukocyde, antiopsonische und anti-
lytische Wirkung ausiiben. Es wurde untersucht, ob sie Ambozeptoren
oder Komplement binden; es ergaben sich keine einheitlichen Resultate,
doch scheint es, daB beides der Fall ist. Wer immer irgendeine neuere
Wirkung beobachtete, hat damit auch ihr Wesen zu entdecken geglaubt,
bis es sich aber zuletzt herausstellte, daB diese Stoffe auf nahezu siimtliche
daraufhin untersuchte Schutzwaffen des Organismus eine hemmende oder
geradezu zerstorende Wirkung ausiiben. In bezug auf ihre Spezifizitiit
differieren die Ansichten ebenfalls. Nach Jeszner schiitzen sie ganz
besonders jenes Bakterium, aus welchem sie hergestellt sind, aber auch
andere Bakterien, wenn auch in geringerem MaBe. Andere Autoren hin-
gegen nehmen einen vollkommen negierenden Standpunkt ein.
Ich meinerseits untersuchte das Filtrat der Colibacillen
in Hinsicht auf das Wesen ihrer Wirkung. Wie ich aber
bereits ausfiihrte, fand ich weder eine bedeutendere anti¬
opsonische, noch eine antibakterizide Wirkung, wenigstens
keine so groBe, daB es mdglich ware, damit ihre Wirkung zu
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Felix Gal,
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erkl&ren. Hingegen habe icb gefunden, daB ihre antitryptische
Wirkung, welche in bezug auf Bakterien zuerst yon Kantoro-
witz beschrieben wurde, sehr bedeutend ist, ja es hat sich
bei meinen Versuchen mit dem Filtrate von Typhusbacillen
sogar gezeigt, dafi diese Wirkung der Typhusbacillen sich im
Verlaufe der Tierpassage immerfort steigert Um dies noch
genauer zu prflfen, passierte ich einen schwachvirulenten
Typhusstamm durch Meerschweinchen. Der ursprfingliche
Stamm hat selbst in Mengen von einer 7* Kultur bei sub,-
kutaner Injektion das Meerschweinchen nicht getotet, wohin-
gegen die 8. Passage schon in einer Menge von 1 mg das
Tier tbtete. Aus jeder Passage verfertigte ich in vorher-
beschriebener Weise ein Filtrat und untersuchte letzteres in
bezug auf seine antitryptische Wirkung auf Serumplatten.
Ich mengte in Trypsinlosungen von verschiedener Verdflnnung
eine jeweilig gleiche Menge Filtrates und versetzte diese
Mischung sodann auf Serumplatten.
Passage
0,01 Proz. | 0,05 Proz. | 0,1 Proz. | 0,5 Proz. | 1 Proz.
Trypsin + Filtrat
0
1
2
3
4
5
6
7
8
gelost
nicht gelost
dgl.
gelost
nicht gelost
dgl
gelost
nicht gelost
dgl
gelost
gelost
nicht gelost nicht gelost
Aus der Tabelle ist zu entnehmen, daB die Wirkung eine
aufsteigende Tendenz zeigt, bei der 8. Passage hemmte das
Filtrat selbst schon die 1-proz. TrypsinlSsung. Ich muB be*
merken, daB ich noch mehr Typhusst&mme in dieser Richtung
untersuchte; die Wirkung war nicht immer eine so aufflillig
steigende, aber die Steigerung war nach mehreren oder
wenigeren Passagen immer wahrzunehmen.
Wir haben es hier demnach mit einer Wirkung von ganz
besonderer Wichtigkeit zu tun, wobei haupts&chlich von In-
teresse ist, daB sie bei Produkten virulenter Bakterien in
starkerem MaBe in die Erscheinung tritt, als bei solchen
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Untersuehungen iiber das Virulenzproblem.
G95
weniger virulenter. Die Wirkung ist noch wenig bekannt
und untersucht, ihre Tragweite vorlfiufig noch nicht absehbar,
aber jedenfalls ist sie so groB und bestiindig, wie jede andere
Erscheinung in der Immunologie, so daB mau bei Problemen
der Immunit&tslehre auch mit diesem Faktor rechnen muB.
Was das Wesen der Wirkung der infektionsbefordernden
Stoffe im allgemeinen betrifft, so weisen unsere diesbeziig-
lichen Kenntnisse noch gar viele Lucken auf und doch bieten
dieselben uns in bezug auf die Virulenz den einzigen ver-
wertbaren Anhalt (abgesehen vom Anthraxbacillus, bei welchem
das Kapselbildungsvermogen die notige Erklarung bietet).
Der Umstand, daB die verschiedenen Autoren das Wesen der
Wirkung in verschiedenen Erscheinungen, wie z. B. in leuko-
cyter, negativ leukotaktischer, Antiambozeptor-, Antikomplemeut-
Wirkung suchen, scheint im ersten Moment fur die Unbe-
stimmtheit dieser Stoffe zu sprechen, so daB bezweifelt werden
mflBte, daB diese das Wesen der Sache zu erklaren vermogen.
Bei reiflicherem Nachdenken muB sich uns jedoch die Ver-
mutung aufdriingen, daB ihre Wirkung auf chemischen Ge-
setzen beruht. Im Organismus treten mit ihnen chemische
Stoffe (Fermente, deren Abbauprodukte etc.) in Reaktion. Die
Begriffe der Immunitatslehre und der Chemie bilden Teile
eines anderen Begriffskomplexes, einer anderen Entwicklung, so
daB auf der einen Seite Komplemente, Ambozeptoren, Opsonine,
Lysine etc., auf der anderen Seite aber Fermente, Antifermente
und die Abbauprodukte der Fermente zwei ganz verschiedene
Begriffskoniplexe darstellen. welche vorliiufig nicht vollstandig
zu vereinbaren sind, obwolil dieselben sich einauder immer
mehr nahern. Ja ihre Kreise schneiden einander sogar schon
zuweilen (ich erinnere nur an die von Emmerich und Low
beschriebene Agglutination und Bakteriolyse durch Fermente),
so daB wir den Eindruck gewinnen, daB sie einander ganz
decken werden, sobald beide Gebiete vom immunologischen
sowie vom im engeren Sinne chemischen Standpunkte aus
geniigend untersucht sein werden.
In betreff der chemischen Beziehungen in der Immuni¬
tatslehre stehen wir schon vielen konkreten Tatsachen gcgcn-
iiber. Die Untersuehungen von Pfeiffer, Biedl und
Kraus, Friedberger etc. uber Bakteriengifte haben der
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Felix Gal,
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Wissenschaft einen ganz neuen Gesichtskreis eroffnet. Die
Tatsache, daB aus einem Gemisch von Antigen + Ambozeptor
-f-Komplement ein giftiger Stoff entsteht und daB Fried-
berger bei Bakterien nach der Digestion im Serum die
Bildung einer giftigen Substanz nachwies, hat letzteren dazu
bestimmt, samtliche Infektionen in ahnlicher Weise zu er-
kliiren. Da diese Frage mir nun auch vom Standpunkte der
Virulenz von Wichtigkeit war, machte ich hhnliche Versuche
an Mausen. Wie wir sehen werden, bildete sich kein sofort
totendes Gift, aber die Mause gingen nach Stunden oder
Tagen ein.
Der Vcreuch bestand darin, dad ieh 2 ccm Kaninchenserum mit 8
von Agar abgewaschenen und mittels Chloroform abgetoteten Kulturen
dcs Typhusbacillus vermisehte und diese Mischung in den 37° Thermostaten
stcllte. In verschiedenen Zeitintervallen entnahm ich der Mischung 1’roben.
zentrifugierte sie rein und injizicrte mehreren Miiusen je 0,1 cctn subkutan.
Das Resultat mehrerer Versuche ist in folgender Tabelle dargestellt:
| Zeitdauer der Digestion
Resultat
1. Mans
1 Stunde
lebt
2. „
2 l L Stunden
i f 3 Tage an Intoxikation
3. „
3
t 1 Tag „
4. „
4
dgl.
5. „
24
leiit
Was den Zusamnienhang zwischen dem Tod und der Dauer
der Digestion betrifft, so stimmt das Versuchsergebnis mit
dem von Friedberger beobachteten ziemlich Uberein. Die
2., 3., 4. Maus ging zugrunde, jene, welche das 24 Stunden
lang digerierte Serum bekam, blieb am Leben. Die erst-
erwahnten gingen an dem durch das Serum aus dem Bak¬
terien abgespaltenen peptonartigen Gifte zugrunde. Nach
24 Stunden waren die Peptone schon weiter gespalten und es
sind uugiftige Produkte entstanden. Bei dem Prozesse baut
das im Serum vorhandene Ferment die Bakterien ab und wir
konnen uns die Wirkung im groBen und ganzen so vorstellen,
daB sich in bezug auf die letztere 2 Stadien entwickeln, zuerst
die Peptone und dann schlieBlich Verbindungen von kleinerer
Molekiilgrofie, hauptsachlich Aminos&uren. Die infektions-
befordernde Wirkung der Typhus- bzw. Colifiltrate, sowie die-
jenige anderer Bakterienprodukte (Aggressine etc.) ist damit
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Untersuchungen liber das Virulenzproblem.
697
unserem Verstandnisse schon n&her gerflckt, wahrend mittels
der aiteren Infektionstheorien ihre Erkiarung unmoglich ge-
wesen ware. Auf die Erkiarung komme ich spater nock zu-
rflck und will vorher noch meiner vergleichenden Unter¬
suchungen in bezug auf die Bakterienautolyse und Serum-
digestion Erwahnung tun, bei welchen es sich herausgestellt
hat, daB die in den beiden Prozessen entstehenden Produkte
einander auffallend ahnlich sind, mithin diese Prozesse als
nahezu identische anzusehen sind.
Ich untersuchte vergleichend die Serum- und Wasser-
digestion, indem ich mich dabei an einen Anaphylatoxinver-
such Aronsons hielt, aber auch darauf achtete, daB sowohl
der im Serum, als auch der im Wasser sich abspielende Pro-
zeB unter streng identischen Umstanden vor sich gehe. Die
Untersuchung geschah in der Weise, daB ich einerseits in
25 ccm Meerschweinchenserum, andererseits in 25 ccm pbysio-
logischer Kochsalzlosung je 7 Agarkulturen des Typhusbacillus
vermengte und das Gemisch in den Schiittelapparat stellte.
In verschiedenen Zeitintervallen entnahm ich sodann der
Fliissigkeit Mengen von je 5 ccm, zentrifugierte sie scharf
und injizierte die reine Fliissigkeit mchreren Meerschweinchen
intraperitoneal.
Das Ergebnis ist in folgender Tabelle zusammengefaBt:
Zeitdauer des
Schiittelns
Kesultat bei der Serum-
digestion
Resultat bei der Wasser-
digestion
1 Stnnde
lebt
| lebt
2 Stunden
f 10 Stunden
t 18 Stunden
3 »
dgl.
lebt
5
lebt
yf
24
Sowohl bei der Serum- wie auch bei der Wasserdigcstion
entstanden eine Zeitlang giftige, spater jedoch ungiftige Pro¬
dukte. DaB der Verlauf der Spaltung kein vollkommen gleicli-
artiger ist, findet seine Erkiarung darin, daB einerseits die
bei der Spaltung im Wasser wirkenden Endofermente, anderer¬
seits die spaltenden Fermente des Serums nicht vollstandig
identisch sind. Darum zeigen die Reaktionsprodukte, trotzdem
sie im groBen und ganzen gleichartig sind, dennoch kleinere
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Abweichungen voneinander. Andererseits ist auch der zeit-
liehe Veriauf der beiden Fermentreaktionen kein vollstandig
gleicher. Wenn wir jedocli das Wesen der Spaltuug naher
betrachten, so nehmen wir in beiden Fallen 2 Stadien wahr:
Das giftige Peptonstadium und das Stadium der ungiftigen
Produkte. Die Produkte der beiden Reaktionen fihneln einander
aber auch noch in bezug auf ihre infektionsbefSrderude Eigen-
schaft. Denn nicht nur den Bacillenautolysat ist eine solche
Wirkung eigen, sondern auch bei den durch die Serum-
digestion entstehenden Produkten mussen wir eine solche
voraussetzen. Einerlei, ob wir nun die Infektion als Pepton-
oder als Anaphylatoxinvergiftung betrachten, in beiden Fallen
ist mittels dieser Annahme die Vernichtung, die Intoxi-
kation des Organismus erklarbar, aber nicht unmittelbar er¬
klarbar ist die Infektion, die Vermehrung der Bakterien.
Hier mussen wir unbedingt annehmen, dafi die Spaltungs-
produkte einerseits giftig wirken, andererseits aber die Fort-
wucherung immer neuerer Bakterien ermoglichen.
Wenn wir die Anaphylatoxin- bzw. Peptontheorie als In-
fektionstheorie verwerten wollen, so mtiBten wir die schon
durch Versuche best&tigte Tatsache mit in Betracht ziehen,
daB im vergifteten Organismus Bakterien sich vermehren
konnen, denen der gesunde widersteht. Diesbezflglich wurden
schon zahlreiche Versuche durchgeftihrt. So z. B. hat Acker¬
man n bei den Aminverbindungen nachgewiesen, daB dieselben
bei Bakterienspaltungen entstehen, wahrend Barger, Dale
und Laidlaw nachwiesen, daB sie dieselben Symptome ver-
ursachen, wie die Peptonvergiftung. Scherem eczynszky hat
nachgewiesen, daB im durch Amine vergifteten Organismus
sich solche Bakterien vermehren konnen, welche denselben
vorher nicht angreifen konnten. Nach Injektion von 0,01 g
Hydroxylamin entstand beim Kaninchen eine Selbstinfektion
durch Staphylokokken und seine natiirliche Immunit&t gegen
Pneumobacillen horte auf. — Das Gift greift jedenfalls jede
einzelne Zelle an und hindert sie an der Produktion von
Schutzwaffen, demnach der vergiftete Organismus Infektionen
gegeniiber schutzlos ist. — Das vergiftete Tier disponiert
also zur Infektion, denn es ist seiner Schutzwaffen gegen
dieselbe beraubt. DaB dies tatsachlich der Fall ist, bezeugen
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Untersuchungen fiber das Virulenzproblem.
699
Untersuchungen von Briot und D op ter, welche zeigten,
daB bei der Spaltprodukt-Vergiftung die lytischen Substanzen
des Serums verschwinden. Nach Friedberger, Lfiffler etc.
verschwindet (fas Komplement, nach Tsuru und Nolf ent-
steht eine st&rkere Leukopenie.
Was nun die Wirkung der Autolysate, Filtrate etc. be-
trifft, so besteht deren Wesen darin, daB sie beim Serum-
ferment die Spaltung bis zu Endprodukten verhindern, weil
ja das Filtrat selbst eine Mischung von Spaltprodukten dar-
stellt, und so wird auch die Annahme hinffillig, daB im Filtrate
irgendein spezieller Stoff enthalten sei. Vielmehr wird seine
Wirkung durch die Re versibilitat der enzymatischen
Prozesse verstandlich.
Zur Bekraftigung des hier Gesagten wiederholte ich den
frfiher beschriebenen Mauseversuch, diesmal jedoch in der
Weise, daB es moglich war, die Wirkung des infektions-
beffirdernden Filtrates auf die Serumdigestion deutlich wahr-
zunehmen. Zu diesem Zwecke mischte ich neuerdings 8 ab-
gewaschene und abgetotete Typhuskulturen und stellte die
Mischung in den Thermostaten. Nach 3 Stunden, als ich an-
nehmen konnte, daB das giftige Stadium bereits eingetreten,
setzte ich 0,2 ccm aus dem wasserigen Autolysat der Mischung
zu und entnahm
derselben sodann
zeitweilig Proben.
Resultat war folgendes:
Zeitdauer der
Digestion
Resultat
1. Maus
3 Stunden
+ nach 24 Stunden
9
5 „
t „ 24 „
3. „
12
+ „ 24 „
4. „
24 „
t „ 48 „
Entgegen den frfiheren Resultaten war jetzt auch die
24-stiindige Digestion giftig. Zu erklaren ist diese Erscheinung
damit, daB das Filtrat die Spaltung der giftigen Produkte bis
zu den Endprodukten verhindert hat, was so aufzufassen ist,
daB, wenn wir das Filtrat, wie schon frfiher auseinandergesetzt,
als Mischung von Endprodukten der Proteolyse, also etwa von
Aminosauren, betrachten, es selbstverstfindlich ist, daB letztere,
indem sie in das System des tryptischen Fermentes und des
EiweiBsubstrates hineingeraten, die Spaltung bis zu End¬
produkten im Sinne des Massenwirkungsgesetzes verhindern
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700
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und es werden sich niehr intermedifire, giftige Produkte an-
liaufen, als sonst. Die Intoxikation wird also durch
Peptone zustande gebracht, die Infektion durch Peptone
sowohl, wie auch durch die Endprodukte. Die Peptone
verhindernalsZellgifte dielmmunkfirperproduk-
tion, die Endprodukte wieder verhindern dieselbe dadurch,
daB sie die Menge der Peptone vermehren.
Im Organismus sind die Verhaltnisse naturlich viel kom-
plizierter, denn derartige Produkte entstehen nicht nur aus
Bakterien. Wenu wir die hier vor sich gehenden Prozesse
ganz einfach auf ihre Eleuiente zurtickffihren, so haben wir
uns den Verlauf der Infektion folgendermaBen vorzustellen:
Sobald das Bakterium in den Organismus gelangt, wird
sein EiweiB gespalten und es entwickelt sich vor allem das
Peptonstadiuin mit seinen giftigen Wirkungen. Selbiges
geht sodann in das Stadium der Endprodukte fiber. Die
Menge der Peptone wird aber deshalb nicht, wie man im
ersten Moment glauben kiinnte, geringer, sondern dieselben
vermehren sich im Gegenteile fortwfihrend, indem die Produkte
der fortgesetzten Spaltung den weiteren Abbau hemmeu und
jemehr Endprodukte entstehen umsomehr Peptone haufen sich
an. Wenn hinwiederum die Peptone schon in solcher Menge
vorhanden sind, daB sie eine giftige Wirkung auf die Zellen
ausuben, so kann nach dem fruher Gesagten auch die Infektion
zustande kommen. Umgekehrt, je rnehr Endprodukte aus dem
Organismus ausscheideu, ura so mehr Peptone konnen weiter
gespalten werden und die einmal in Gang geratene Aus-
scheidung vermehrt auch die Ausscheidung der Gifte.
Was nun die Verschiedenheit der Virulenz betrifft, so
mfissen wir anuehmen, daB aus virulenten Bakterien
bei der Spaltung mehr Endprodukte sich bilden,
als aus nicht virulenten und diese selbst ver¬
hindern die Spaltung bis zu Endprodukten. DaB
dies tatsachlich der Fall sein muB, darin wurde ich durch die
Beobachtung bestarkt, daB ich aus virulenten Bakterien mehr
infektionsbefiirdernde Stoffe herstellen konnte, als aus nicht
virulenten. Im Organismus sind die Verhfiltnisse freilich nicht
so einfach, denn dort kommen auch andere Spaltungen in Be-
tracht, deren Produkte einen ahnlichen Charakter haben. So
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Untersuchungen iiber das Virulenzproblem.
701
z. B. bildet nicht nur der Organismus aus Bakterien Spalt-
produkte, sondern umgekehrt nehmen auch die Bakterien selbst
an der Spaltung Teil, denn auch diese besitzen proteolytische
Ferraente, auBerdem spielen hier anch die Produkte des
normalen EiweiBstoffwechsels eine Rolle.
Was den quantitativen Unterschied zwischen den aus
virulenten und avirulenten Bakterien entstehenden Spalt-
produkten betrifft, so geht seine Erkl&rung aus einem ganz
einfachen Vernunftschlusse hervor. Wir haben hier blofi mit
zwei Moglichkeiten zu rechnen. Die eine w&re, daB das
virulente Bakterium ein st&rkeres Gift bildet, als das avirulente,
die zweite, daB bei gleichen Bakterienmengen aus den virulenten
Bakterien mehr Gifte herausgelbst werden, als aus avirulenten.
Die erste Auffassung kann fallen gelassen werden, denn es
ist nicht wahrscheinlich, daB das Bakterium, welches w&hrend
einiger Tierpassagen seine biologischen Eigenschaften im
groBen und ganzen beibehalten hat, seine chemische Kon-
stitution, so tlndere, daB es andere Gifte produziert. Auch
der Unterschied in der Vermehrung der Bakterien spielt
keine grbBere Rolle, wenn von gleichen eingefQhrten Bakterien¬
mengen die Rede ist, denn ein solcher besteht — wenigstens
auf NkhrbSden — zwischen virulenten und avirulenten Bak¬
terien nicht. Bestehen bleibt also nur die letzte Moglichkeit,
daB namlich aus virulenten Bakterien bei gleicher Bakterien-
menge mehr Gifte abgespalten werden, als aus avirulenten.
Diese Auffassung wird durch die Beobachtung der EiweiB-
chemiker (Hammarsten u. a.), daB im Organismus nach
einer EiweiBinjektion Fermente frei werden, welche jenes
EiweiB abbauen kdnnen, wahrscheinlich gemacht. Das gleiche
geschieht auch nach der Injektion von Bakterien. Wir miissen
annehmen, daB im von virulenteren Bakterien infizierten
Organismus mehr Fermente entstehen, als im mit avirulenten
geimpften, d. h. daB virulente Bakterien einen stSrkeren
Reiz zur Fermentproduktion ausQben, als avirulente und vom
Standpunkte der Virulenz ist dies die wichtigste Eigenschaft,
welche die Bakterien bei der Tierpassage gewonnen haben.
Es ist dies naturlich eine biologische Eigenschaft, welche
weder n&her zu detinieren, noch exakt zu erkl&ren ist und
ZeiUchr. f. ImmunitAUforschang. Orig. tid. XIV. 48
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702
Felix Gal
wohl lange eine offene Frage bleibt. Aber mit der Annahnie
derselben gewinnen die Erscheinungen eine einfache Erkl&rung.
Unserer Auffassung gem&B, vermag ein mit virulenten Bak-
terien geimpftes Tier mehr Bakterien zu 16sen, als ein mit
avirulenten geimpftes, was — vorausgesetzt, daB die Gift-
produktion mit der Bakterienlosung annahernd parallel geht
(was jedenfalls angenommen werden kann) — mittels eines
einfachen Bakteriolyseversuch kontrollierbar ist.
Ich impfte zu diesem Zwecke 2 Meerschweinchen mit
Colibacillen von verschiedener Virulenz. Der eine Stamm
totete in einer Menge von 2 mg diese Tiere, vom anderen
erwies sich selbst eine ganze Agarkultur als unschfidlich.
Letzterer war also, praktisch genommen, avirulent. Nach
12 Stunden entnahm ich den Tieren das Blut und prflfte die
Sera auf ihre Bakterizidie gegeniiber den Colibacillus. Ich
erhielt folgendes Resultat:
VcTHUch
1
Zahl dor Keime
i 2 ccm Serum aus
dem mit virulenten
Hac. g( k impften Tier
2 ccm Serum aus
dem mit avirulenten
Bac. geimpften Tier
Nach Einimpfung 1
12(>5
! 11 to
„ 1 St unde
752
1052
„ 3 Stunden
:tt>4
1 SsG
II
Nach Einimpfung
ir,r,r,
j 1375
i „ 1 St undr
KH >5
t 1010
„ 3 Stunden
7bO
000
111
i
Nach Einimpfung
1550
S 1430
„ 1 iStundr
650
1 1120
1
„ 3 Stunden
420
840
Das Serum des mit virulenten Bacillen geimpften Tieres
loste also die Bakterien um vieles starker, als dasjenige des
mit avirulenten Geimpften, sohin meine frfiher zum Ausdruck
gebrachte Annahme bestStigt wird, daB namlich das viruleute
Bakterium mehr tryptische Fermente aus dem Organismus frei
machen kann, als das avirulente.
Im ersten Moment scheint die Annahme paradox und
mit der taglichen Erfahrung unvereinbar zu sein, daB virulente
Bakterien sich im Organismus schneller auflosen, als avirulente.
Sie gewinnt jedoch an Wahrscheinlichkeit, wenn wir bedenken,
daB die virulenten Bakterien durch ihre an und fflr sich grSBere
Resistenz doch bloB zum Teil der Auflosung anheimfallen und
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Untersuchungen iiber das Virulenzproblem.
703
daB die Produkte der aufgelOsten Bakterien den flbrigen den
Weg ebnen, indem ihre giftigen Produkte sich so stflrmisch
entwickeln, daB sie sehr bald in genQgender Konzentration
vorhanden sind, um den Organisraus zu vergiften und ferner
durch die sich rasch bildenden Endprodukte, indirekt die
giftigen Produkte vermehren und so eine Intoxikation und
Infektion zustande bringen.
So sehen wir denn, daB die verschiedenen Bakterien-
produkte: Aggressine, Extrakte etc., welche eine infektions-
befOrdernde Wirkung besitzen, eine einheitliche Erkl&rung
gewinnen und das Wesen ihrer Wirkung auf einer und der-
selben Grundlage beruht. Von diesem Standpunkte aus be-
trachtet, sind die Aggressine, wSsserigen Extrakte, Autolysate
und Filtrate ganz verwandter Natur. Ihr wirksames Element
bilden die in ihnen befindlichen Spaltprodukte, welche als
Endprodukte der Spaltung aufzufassen sind, und weil ferner
die enzymatischen Prozesse reversibcl sind, die Spaltung in
einem intermediaren Stadium aufhalten und so die Vergiftung
und indirekt die Vermehrung der Bakterien be-
fordern. Die Theorie wird auch durch die Tatsache gestiitzt,
daBGamaleia bei Aminosauren (Leucin, Tyrosin) eine stark
infektionsbefordernde Wirkung beobachtete.
Es liiBt sich demzufolge auch die ganz oder zum Teil
spezifische Wirkung der Filtrate leicht erkl&ren. Wie ich
schon erwahnt habe, wirkt das Filtrat der Typhusbacillen
hauptsachlich und schon in kleinsten Dosen auf den Typhus-
bacillus selbst infektionsbefordernd, dasjenige des Colibacillus
hinwiederum auf den Colibacillus. Auch bei einigen Aggressinen
wurde nachgewiesen, daB sie hauptskchlich auf jenes Bakterium
einwirken, aus welchem sie entstanden sind, auf andere Bak¬
terien hingegen uicht oder doch nur in geringem MaBe. Wir
konnen uns dies am einfachsten in folgender Weise erklaren:
Wenn der Typhus- bzw. Colibacillus in den Organismus ge-
langt, so nehmen wir an, daB
der Typhusbacillus a, b, c Peptone, dann a 1 , b l c 1 Endprodukte,
„ C o 1 i b a c i 11 u s c, d, e „ „ c‘, d 1 , e l „
ergibt. Wenn wir nun mit dem Typhusbacillus zusammen die
Produkte a 1 , b 1 , c 1 in Form eines Typhusfiltrates in den Orga¬
nismus einftihren (auch bei der Wasserautolyse entstehen diese
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704
Felix Gal,
Produkte), so werden die Produkte a, b, c sich stiirmisclier
entwickeln und vergiftend wirken. Sobald wir jedoch die
Produkte c 1 , d 1 , e l in Form eines Colifiltrates einffibren, kann
die Wirkung nicht zustande kommen, denn diese Produkte
gehoren nicht zum Spaltungssystem des Typhusbacillus. DaB
eine geringe Wechselwirkung dennoch vorhanden ist, findet
in der Anwesenheit des Produktes c 1 seine Erklfirung, welches
beiden Bakterien gemeinsam ist, und es ist zu vermuten, daB
bei mehreren Bakterien solche gemeinsame Produkte vorhanden
sind, wahrend der groBte Teil derselben verschiedenartig ist.
Die gemeinsamen Produkte sind es also, durch welche die
verschiedenen Bakterienprodukte aufeinander befordernd ein-
wirken.
DaB eine solche Verschiedenheit der Bakterienspaltungeu
und ihrer Produkte tatsachlich besteht, wird durch die fiber
die Bakterienenzyme und Spaltungen durchgeffihrten Unter-
suchungen bewiesen. Diese Untersuchungen zeigen immer
deutlicher, daB zwischen den einzelnen proteolytischen Fer-
menten wesentliche Unterschiede bestehen. Die Fermente im
allgemeinen sind definiert durch das Substrat, auf welches sie
einwirken, und durch die Produkte, welche bei der Reaktion
entstehen. Die Untersuchung der Bakterienproteasen hat ge-
zeigt, daB dieselben auf verschiedene Substrate einwirken, und
daB auch die Produkte verschieden sind. Demnach ist es
klar, daB zwischen den Bakterienenzymen scharfe Unterschiede
bestehen.
Die Untersuchungen von Fermi haben gezeigt, daB die
gelatinelosende Kraft der verschiedenen Bakterienproteasen eine
jeweilig verschiedene ist, z. B.
Vibrio Finkler-Prior lost, eine Gelatinesiiule von 10 mm
,, Met schnikoff „ „ „ „ 7 „
Bacillus Prodigiosus „ „ „ „ 5 „
,, Anthracis ,, „ ,, ,, 3 ,,
,, Tetani ,, „ „ ,, 8 ,,
Auf ein und dasselbe Substrat wirken die verschiedenen
Bakterienenzyme verschieden ein: Ovalbumin wird verflussigt
durch den Vibrio cholerae, Vibrio Finkler-Prior, Bacillus
prodigiosus, Bac. pyocyaneus, hingegen aber nicht durch den
Anthraxbacillus. Der Vibrio cholerae und V. Finkler losen
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Untersuchungen iiber das Virulenzprobleni. 705
Serum, die anderen in dieser Hinsicht untersuchten Bakterien
aber nicht.
DaB die Produkte bei der Hydrolyse immer verschieden
sind, ist gleichfalls durch die Untersuchungen von Fermi
bewiesen. So z. B. bereitet der Bac. pyocyaneus aus Fibrin
Aminosauren, besonders Arginin, der Streptococcus aus Fibrin
auBer Aminosauren auch Bernsteinsaure, Essig- und Butter-
saure, Pyridinbasen, Ammoniak und Methylamin.
Gegen W&rme, Licht und Siiuren verhalten sich die
Bakterienenzyme ebenfalls verschieden; am wenigsten licht-
empfindlich sind der Staphylococcus und der Bac. indicus.
DaB die Bakterienproteasen voneinander verschieden sind,
ist auch durch die Untersuchungen von KSmmerer und
Mogulescu wahrscheinlich gemacht. Nach diesen Autoren
wirkt das Serumantitrypsin auf Pankreas- und Hefetrypsin
gleichmaBig ein, wShrend es sich der Pyocyaneustryptase
gegenubcr ganz anders verhalt. Auch sie sind der Ansicht,
daB die Hydrolyse bei den diversen tryptischen Fermenten
verschiedenartig vor sich geht.
Ich habe dies alles aus dem Grunde angefuhrt, weil daraus
die Wahrscheinlichkeit hervorgeht, daB aus den Bakterien bei
der Proteolyse verschiedene Spaltprodukte entstehen, welche,
wie wir gesehen haben, die partielle Spezifizitat der Filtrate
verursachen.
Wenn wir nun den ganzen hier behandelten Stoff Ober-
blicken, so gelangen wir zu dem Resultate, daB bei der Virulenz
sehr verschiedenartige Faktoren in Frage kommen. Wir haben
gesehen, daB Garungspilze und deren Extrakte, sowie ver¬
schiedene Fermente die Virulenz beeinflussen und ferner, daB
der Organismus in bezug auf Fermentproduktion sich gegen-
flber Bakterien verschiedener Virulenz verschieden verhalt.
Nach unserer Auffassung gewinnt demgem&B die Frage der
infektionsbefordernden Stoffe eine neue einheitliche Erklarung.
Es steht fest, daB bei diesem Problem noch immer ein Faktor
zuriickbleibt, welchen wir uns nicht erklaren konnen, und der
auch wohl niemals vollkommen aufgeklart werden wird, und
so behelfen wir uns derzeit mit der Annahme teleologischer
Momente. In der Erkenntnis der Tatsachen haben wir jeden-
falls einen Schritt nach vorwSrts gemacht.
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706
Claus Schilling und Friedrich,
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Zusammenfassung.
1) Garungspilze und Extrakte chemisch abgetdteter Ga-
rungspilze erhohen die Virulenz einiger Bakterienarten.
2) Fermente, wie beispielsweise Trypsin, Erepsin, erhohen
die Virulenz des Colibacillus.
3) Die Bakterienfiltrate, Extrakte, Aggressine etc. sind
ihrem Wesen nach die Endprodukte einer Proteolyse. Ihre
infektionsbefordernde Wirkung findet in der Reversibility der
enzymatischen Prozesse eine einheitliche Erklarung.
Xachdruck verboUn .
[Aus dem Konigl. Institut fdr Infektionskrankheiten ,,Robert
Kuch u ; Direktor: Geh. Obermed.-Rat Prof. Dr. Gaf fky. Leiter:
des Tropenlaboratoriums Prof. Dr. C. Schilling.]
Ueber Immunitttt bel Pirosoma cauls.
Von Prof. Dr. Claus Schilling und Dr. Friedrich.
(Eingegangen bei der Redaktion am 29. Juni 1912.)
Eine nahezu absolute Immunit&t, wie wir sie beira Schar-
lach und den Pocken beobachten, koinmt bei Protozoen-In-
fektionen nur in sehr wenigen FSllen, namlich beim Kflsten-
fieber und bei der Spirosomose der Hiihner vor. Zwar hat
Theiler beim Kiistenfieber neuerdings einen Fall beobachtet,
bei dem eine Reinfektion mit todlichem Ausgang stattfand,
und in bezug auf die Huhnerspirosomose liegt eine Be-
obachtung von Schaudinn vor, daB das Blut eines Tieres,
welches die Krankheit bereits seit langer Zeit iiberstanden
hatte, noch infektos war. Doch gehbren derartige Vorkomm-
nisse ohne Zweifel zu den seltensten Ausnahmen.
Die meisten Protozoeriinfektionen fiihren, wenn sie nicht
akut todlich enden, zu einem Zustand, welchen wir als ^labile
Infektion“ bezeichnen: Die Parasiten verschwinden zwar nach
dem ersten Anfall ganz Oder fast ganz aus dem Blute, bleiben
aber in den inneren Organen erhalten und geben spater durch
starke Vermehrung zu Riickfallen Veranlassung. Klassische
Beispiele fur solche labile Infektionen liefern die Pirosomen-
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Ueber Immunitat bei Pirosoma canis.
707
infektionen. Rinder, welche das Texasfieber iiberstanden
haben, sind zwar selbst unempfanglich ftir eine neue Infektion,
ihr Blut bleibt aber jahrelang infektios. Solche Tiere sind nun
auf den verseuchten Weiden st&ndig den Stichen infizierter
Zecken ausgesetzt, werden also immer wieder superinfiziert,
ohne zu erkranken (von Reinfektionen darf man nicht sprechen,
weil ja die primSre Infektion noch nicht erloschen ist). Die
Unempf&nglichkeit fiir Superinfektionen ist einecharakteristische
Begleiterscheinung bei der labilen Infektion. Die Malaria und
die Syphilis liefern weitere Beispiele fiir diesen Zustand.
Es erheben sich nun folgende Fragen: Ist der Zustand der
Unempfindlichkeit gegen Superinfektionen bedingt durch das
Vorhandensein virulenter Parasiten? Sind solche virulente,
wenn auch an Zahl sehr sparliche Parasiten notwendig, damit
die Unempfindlichkeit erhalten bleibt? Geht mit dem Ver-
schwinden der Parasiten auch die Unempfindlichkeit verloren?
Um zur L5sung dieser Fragen einen Beitrag zu liefern,
stand uns ein Hund (I) zur Verftigung, der im Herbst 1910
(das genaue Datum ist nicht mehr zu ermitteln) mit unserem
Pirosomenstamm geimpft worden war und eine typische In¬
fektion durchgemacht hatte.
a) Von Hund I warden 20 com Blut aus der Halsvcne entnommen und
auf 2 ganz kleine Hunde (H und III) intraperitoneal verinipft. Diese
Hunde blieben dauernd frei von Parasiten.
Das Blut des Hundes I enthiilt also keine
virulenten Pirosomen mehr.
b) 5 ccm Serum von Hund I werden einem ganz jungcn Hund (IV)
in die Bauehhdhle eingespritzt; sofort danach werden demselben Tiere
0,5 ccm pirosomenhaltigen Blutes von einem Passagehund intraperitoneal
injiziert. 4 Tage nach der Injektion treten Pirosomen in seinem Blute auf,
das Tier stirbt am 5. Tage.
Das Serum von Hund I schfltzt also nicht
gegen gleichzeitige Infektion.
c) 0,5 ccm des zur Infektion von Hund IV verwendeten Pirosomen-
blutes wurden mit 5 ccm gewohnlicher Niihrbouillon versetzt und einem
ganz jungcn Hund (V) in die Bauchhohle injiziert. Nach 5 Tagcn er-
krankt der Hund und geht am 8. Tage an Pirosomose zugrunde.
Dieser Hund dient also als Kontrolle fiir die Virulenz
des verwendeten Materials.
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708 Cl. Schilling und Friedrich, Immunitat bei Pirosoma canis.
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d) Hund I wnrde am gleichen Tage wie Hund IV und V mit 5 ccra
Blut von unserem Passagestamm intraperitoneal infiziert. 3 Tage nach der
Injektion erschiencn Parasiten im Blute, blieben miiBig zahlreich und waren
am 5. Tage wieder verschwunden. Das Tier war deutlich krank, erholte
sich aber nach einigen Tagen wieder. Blutharnen wurde nicht beobachtet.
Die Immunitat des Hundes, welche er durch die erste
Erkrankung erworben hatte, war im Laufe von mehr als
l 1 /* Jahren vollstandig verschwunden, das Tier verhielt sich
der Reinfektion gegeniiber wie ein ausgewachsener, nicht vor-
behandelter Hund. Dieser Versuch zeigt in sehr klarer Weise,
daB„ wenn die Krankheitserreger aus dem Tierkorper ver¬
schwunden sind, auch die Immunitat gegen Reinfektionen
nicht mehr vorhanden ist. Es ist also der SchluB erlaubt, daB
die Immunitat an das Vorhandensein der Parasiten gebunden
ist. Nur unter dem EinfluB der Parasiten bilden sich die
Schutzstoffe, welche sich gerade bei der Hundepirosomose in
so praziser Weise zur Darstellung bringen lassen. Diese
Schutzstoffe gentigen, um bei Superinfektionen eine Vermehrung
der neu eingedrungenen Parasiten zu unterdrfleken. W r enn
aber im Laufe vieler Monate die Parasiten allmahlich ausge-
storben sind. so verschwinden auch die Schutzstoffe aus dem
Blutplasma, die Unempfindlichkeit geht verloren, das Tier ist
einer erneuten Infektion zuganglich. Treten hingegen immer
neue Superinfektionen hinzu, so bleibt die Immunitat auf ihrer
Hohe. Von der Malaria ist bekannt, daB sie da, wo sie als
„Saisonmalaria u auftritt, z. B. in Stideuropa, keine Immunitat
hervorruft, wahrend in den Tropen die Eingeborenen sich
zum wenigsten einer hochgradig herabgesetzten Empfanglich-
keit gegeniiber Neuinfektionen erfreuen.
Zusammenfassung.
Die Immunitat gegen Superinfektionen ist bei Hunde¬
pirosomose nur so lange vorhanden, als noch virulente Para¬
siten im Korper vorhanden sind.
Fromtnannsch- Buehdruckerei (Hermann Pohle) in Jena, — 416*
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