Trabajos del Museo de Ciencias Naturales

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JUNTA PARA AMPLIACIÓN DE ESTUDIOS É INVESTIGACIONES CIENTÍFICAS

INSTITUTO NACIONAL DE CIENCIAS FÍSICO-NATURALES

TRABAJOS DEl MUSEO NACIONAL DE CIENCIAS NATURALES

SERIE ZOOLÓGICA, NúM. 23.

SOBRE LA REPRODUCCIÓN

DE

DNNENTMPHA GRACGILTS LEIDY

POR

ANTONIO DE ZULUETA

Encargado de Cursos prácticos de Biología en el Museo,
(Con 1 lámina y 6 figuras en el texto.)

(Publicado el 15 de Agosto de 1915.)

MADRID
1015

ÍNDICE

Páginas.
LR A A E A A A 5
Material y técnica..... RAE US A lA 6
Observaciones sobre la nomenclatura y morfología........ so E
LA reproducción por; DIPArtiCiOB. «oc cda es ed EE E 10
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Introducción.

Ocupándome el verano pasado en el estudio de los comensales
intestinales de los Termes (1), llegó á mis manos, con retraso, la
memoria de Comes (1912), en que describe para Dinenympha
gracilis Lemmy (1877) un ciclo evolutivo completo y complicado.
Me asombró el leer en ella que la división del núcleo al reprodu-
cirse el animal por bipartición «é pi vicina alla amitosi che alla
cartocimest», precisamente cuando mis preparaciones muestran
numerosos individuos cuyo núcleo se divide por mitosis evidente
(figuras 1 á 4 de la lámina), de la que doy una descripción en la
presente nota.

El estudio de la división nuclear de Dinenympha gracilis es
interesante, no sólo porque obliga á suspender el juicio sobre
la memoria de Comes (1912), que habiendo descrito un ciclo
evolutivo complicado con tres medios diferentes de reproduc-
ción, no ha visto el más sencillo de ellos; sino también porque
nos muestra un Protozoo más con centro de división extranu-
clear, que obra como el centrosoma de las células de los Meta-
zOOS, y porque contribuye un poco á la resolución del debatido
problema de la posición sistemática de los Protozoos que viven

en el intestino de los Termes y Cucarachas.

69) Aprovecho con gusto la ocasión que se me ofrece para atestiguar
mi agradecimiento al Profesor Max Hartmann, de Berlín, por haberme in-
dicado el presente tema de estudio, y por la amable hospitalidad que me
concedió en su laboratorio del Institut fúr Infektionskrankheiten, durante
mi estancia como pensionado de la Junta para ampliación de estudios.

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid.—Ser. Zool., núm. 23.—1915.

6 A. DE ZULUETA

Material y técnica.

Los ejemplares de Termes Jucifugus Rossi, cuyos comensales
intestinales he estudiado, proceden de Banyuls-sur-mer, La Co-
ruña, Huelva, El Escorial y Cercedilla (provincia de Madrid) (1).

Las preparaciones han sido hechas desgarrando sobre un cu-
breobjetos la porción posterior del intestino del Termes, exten-
diendo sobre aquél el contenido y fijándolo por medio del subli-
mado en alcohol de Schaudinn. Para ello se deposita el cubre-
objetos, con la cara preparada hacia abajo, en la superficie del
fijador, en la que permanece por sí solo sin caer al fondo.

He empleado diversos colorantes, y he obtenido las prepara-
ciones mejores para el estudio de la división nuclear con la mez-
cla de verde de metilo y fucsina ácida, según la fórmula indicada
por Bómm y OrrEL (1907), y también con el método corriente de
hemalumbre y eosina.

Las preparaciones por la hematoxilina férrica de Heidenhain,
han resultado de menos utilidad. Las obtenidas por la fucsina
ácida sola, son muy buenas para contar el número de membranas
ondulantes. El método de coloración plasmática de Chatton por

la eosina y Lichtgrún, proporciona también datos de interés.

Observaciones sobre la nomenclatura y morfología.

Antes de entrar en la descripción de los fenómenos de división
que he observado, conviene hacer algunas indicaciones sobre la
nomenclatura y morfología de Dinenympha gracilis, estudiadas

ya anteriormente.

(1) Me complazco en reiterar aquí las gracias al Dr. Racovitza, de Pa-
rís; al Sr. Berraondo, de Albacete, y á mis compañeros del Museo de Ma-
drid Sres. Fernández-Nonídez y C. Bolívar, por su interés en procurarme
estos insectos.

SOBRE LA REPRODUCCIÓN DE DINENYMPHA GRACILIS Ñ

Con el nombre de Dinenympha gracilis Levy (1877), designo
por ahora el conjunto de formas descritas con esta denominación
por Lemmy (1877), Porter (1897) y Co-
MES (IQIO 6H y 10912) (1), sin pretender
con ello resolver la cuestión de si estas
diferentes formas son positivamente una
sola especie, y de si, en caso afirmativo,
las diferencias que entre ellas se ob-
servan se deben al dimorfismo sexual,
como supone Comes (1910 6 y 1912),
sin dar de ello, á mi juicio, pruebas su-
ficientes.

Entre estas formas de Dinenympha
gracilis se halla en gran número la que
representa esquemáticamente la fig. A,
la cual debe retener nuestra atención
porque á ella se refiere, casi sin duda,

le proceso de bipartición de que doy

cuenta en esta nota.
Sus dimensiones son muy variables; FiG. A.

o TA : PO Di ha gracilis Leidy.
hay individuos bien característicos, cuya 4 7YP00 sració Leióy

7 X 1,000
longitud no excede de 18 p.; en otros,
por el contrario, la longitud alcanza á 90 p. y aún más; lo co-
rriente es que oscile entre 60 y 70 py.

El aspecto general es piriforme, la parte más estrecha es la ex-

(1) Grassi y Foa (1911), opinan que las diferentes formas descritas por
los autores como Dinenympha gracilis son estados libres de una sola espe-
cie, la cual, durante un período de su vida, se fija á la pared del intestino
del Termes, y toma entonces otras formas que, considerándolas como es-
pecies diferentes, han sido descritas con los nombres Pyrsorympha vertens
Leroy (1877), y Lophophora vacuolata Comes (19104). Aunque esta hipótesis
de Grassi y Foa es probablemente cierta, creo preferible, en tanto que
no sea definitivamente confirmada, limitar el nombre Dinenympha gracilis
á las formas denominadas así por los autores arriba citados.

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid.—Ser. Zool., núm. 23.—1915,

8 A. DE ZULUETA

tremidad anterior del animal, y la más ancha la posterior. El
cuerpo está retorcido en espiral sinistrorsa á partir de la extre-
midad anterior; la espiral da una Ó dos vueltas.

La superficie del cuerpo se presenta recorrida por membranas
ondulantes que, como su nombre indica, están animadas por un
movimiento ondulatorio muy característico. stas se extienden
desde un punto común (cuerpo basal), situado en la extremidad
anterior del animal, junto al núcleo, hasta la extremidad posterior
del cuerpo, donde cada membrana termina separadamente, cons-
tituyendo una parte libre flageliforme muy fácil de ver en algu-
nos ejemplares, como el que que he dibujado, pero que parece
faltar en otros. Las membranas ondulantes no están uniforme-
mente distribuídas, sino todas situadas en la cara del cuerpo que,
por la torsión, resulta exterior.

El número de las membranas ha sido objeto de diferentes
apreciaciones. Por mi parte he observado que los individuos que
han llegado á su completo desarrollo poseen normalmente ocho;
pero por excepción he contado diez, y creo que puede darse el
caso de no haber más que seis, á juzgar por lo observado en la
fase de división representada en la fig. 2, sobre la cual insisto
al fin de este trabajo.

Como acabo de indicar, las membranas ondulantes se reunen
en la extremidad anterior en un punto común, el cuerpo basal ó
blefaroplasto. Éste es generalmente punctiforme y muy peque-
ño, pero algunas veces es alargado y más fácil de distinguir.
Comes (1910 5) ha señalado formas de Dinenympha gracilis, en
las cuales cada membrana se origina separadamente en un cuerpo
basal independiente; también he observado ésto en algunos ca-
sos, mas no es lo general.

Aparte de las membranas ondulantes, el cuerpo puede pre-
sentar apéndices filiformes en número muy variable: en algunos
individuos son numerosísimos y ocultan todo el cuerpo; en otros,
por el contrario, son en corto número, y en este caso están si-

tuados únicamente en la región posterior, y finalmente hay in-

SOBRE LA REPRODUCCIÓN DE DINENYMPHA GRACILIS 9

dividuos en los que faltan por completo. Estos apéndices filifor-
mes han sido interpretados por los autores como pestañas, como
flagelos, y Grassr (1894, 1911) los ha considerado como bacte-
rias adheridas por un extremo al cuerpo de Dinenympha.

El citoplasma puede contener inclusiones de dos clases:
1) Fragmentos de madera de forma irregular, á veces muy gran-
des (14 p1), que Dinenympha ha tomado del intestino de su pa-
trón. 2) Pequeñas esferas (1 próximamente) que es muy pro:
bable sean productos inmediatos de la digestión de la madera,
puesto que se comportan con los colorantes como los fragmen-
tos de ésta.

El núcleo es único y está situado en la extremidad anterior del
cuerpo. Es esférico y posee una membrana nuclear claramente
visible.

Su aspecto (figs. 5 á 7) es el de los núcleos vesiculares con
cuerpo interno (bláschenfórmige Kerne mit Binnenkóorper).

El cuerpo interno es de forma esférica más Ó menos perfecta,
de 244 y de diámetro, su estructura parece homogénea y no se
ve en él centriolo. Habitualmente no hay más que un cuerpo in-
terno, pero pueden existir dos Ó tres.

La cromatina periférica, que ocupa todo el espacio compren-
dido entre la membrana nuclear y el cuerpo interno excepto
una pequeña parte alrededor de éste (fig. 7), está dispuesta for-
mando una red cuyos filamentos se presentan muy limpios y
relativamente gruesos en unos casos (fig. Ó), mientras que en
otros la red no ofrece igual claridad (fig. 5).

Cromatina periférica y cuerpo interno se tiñen igualmente con
la mayor parte de los colorantes (figs. 5 y 6); pero la mezcla de
verde de metilo y fucsina ácida, pone en evidencia su diferente
naturaleza química. Con ella el cuerpo interno se muestra oxífilo
y toma color rojizo, mientras que la cromatina periférica apa-
rece basófila y se tiñe de verde (fig. 7); se conducen, pues, res-
pectivamente como el nucleolo y la cromatina de los núcleos
de los Metazoos (HerTrw1G, 1912, fig. 13).

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid. —Ser. Zool., núm. 23.—1915.

10 A. DE ZULUETA

Finalmente, Dinenympha presenta un orgánulo esquelético alar-
gado, el axostilo, que se extiende desde la proximidad del cuer-
po basal y del núcleo, al cual abraza en parte, hasta cerca del
extremo posterior del animal. El axostilo es elástico y muy eo-
sinófilo; con la coloración diferencial de Chatton retiene la eosina

con mucha más persistencia que los otros orgánulos del animal.

La reproducción por bipartición.

He observado esta forma de reproducción en individuos de
Dinenympha, de dimensiones muy varias; pero, como me parece
que existen algunas diferencias entre la manera de comportarse
en la bipartición las formas menores y las mayores, me limito aquí
á hablar de la bipartición de estas últimas, que conozco mejor.

Las preparaciones han sido hechas en diferentes épocas del
año. En las de invierno no se ven más que estados vegetativos;
por el contrario, en las de fin de Julio se ve un número conside-
rable de figuras de bipartición que, no obstante, están lejos de
representar todos los detalles de este fenómeno. Á pesar de ello,
como muestran la marcha general de la bipartición y permiten
sacar de ella algunas conclusiones, parece justificado dar la des-
cripción que sigue (1):

La bipartición de Dinenympha se verifica, sin formación de

(1) Grassi y Foa (1911) han visto seguramente fases de división de
Dinenympha, pues hablando del axostilo ó «benderella parassile» dicen
que «essa si forma nel processo di divisione ad un extremo del fuso,
»collegata con questo per mezzo di un corpuscolo (talvolta di un filuzzo?)
»che la precede nello sviluppo e devesi denominare centrosoma. (S'inten-
»de che anche all'altro estremo del fuso corrisponde un centrosoma e si
»forma un'altra benderella.) Dal centrosoma a quanto sembra si diparto-
»no anche i flagelli». Sin embargo, estos autores no dan otras indicacio-
nes sobre la división de Dinenympha, y en otro lugar de su memoria afir-
man que «Sorprendere in via di divisione le forme ospitate dal Termes
>lucifugus € molto malagevole».

SOBRE LA REPRODUCCIÓN DE DINENYMPHA GRACILIS II

quiste, en la porción posterior del intestino del Zermes lucifugus.

Los dos individuos que resultan de ella son iguales.

PROFASE.

Los individuos cuyo núcleo muestra la red de cromatina pe-
riférica, formada por filamentos muy limpios y relativamente
gruesos (fig. 6), van probablemente á dividirse en breve y su
núcleo se halla en profase; pero como no he encontrado figu-
ras de transición hasta la metafase, no puedo responder de la

exactitud de esta interpretación.

Merarase (Figs. I y 2).

La forma general tan característica de Dinenympha cambia
por completo: el axostilo ha desaparecido; el animal ha tomado
un aspecto amiboideo; su superficie está casi siempre desprovis-
ta de apéndices filiformes; las membranas ondulantes han per-
dido sus porciones terminales libres; el citoplasma no contiene
fragmentos de madera, pero muestra generalmente las inclusio-
nes esféricas de que hablé antes, las cuales aparecen teñidas de
verde en la figura 2 y de color anaranjado en la figura I.

El cuerpo basal de las membranas funciona como centro de
división extranuclear: es, por consiguiente, un cuerpo basal cen-
triolo. Para ello se divide en dos que, permaneciendo siempre
exteriores á la membrana nuclear, resbalan sobre ella hasta ocu-
par posiciones casi diametralmente opuestas (1).

Cada uno de los dos cuerpos basales hijos lleva consigo cua-
tro membranas ondulantes, y entre ellos no existe normalmente

centrodesma (fig. 1); pero en un solo caso en que, por excep-

(1) En ambas figuras (1 y 2) uno de los dos cuerpos basales se pro-
yecta en el campo limitado por la membrana nuclear, pero insisto sobre

el hecho de que los dos permanecen siempre exteriores al núcleo.

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid.—Ser. Zool., núm. 23.—1915.

12 A. DE ZULUETA

ción, Cada Cuerpo basal no lleva más que tres membranas, se ve
un centrodesma que se tiñe análogamente á ellas. Sobre la sig-
nificación de esta anomalía hablo al fin de esta nota (pág. 16).

La membrana nuclear subsiste y se hace más visible, el cuer-
po interno ha desaparecido, los dos cuerpos basales hijos deter-
minan los polos de un huso intranuclear, que presenta una placa
ecuatorial muy clara.

Este huso aparece claramente limitado y muestra sus filamen-
tos. Se tiñe por la eosina y la fucsina ácida.

La placa ecuatorial está constituída por cromosomas en nú-
mero variable, de forma irregularmente alargada, dispuestos pa-
ralelamente al eje del huso, formando una corona en la superfi-
cie de éste. Se tiñen fuertemente por el hemalumbre y por el

verde de metilo.

ANAFasE (Fig. 3).

En el citoplasma, cuerpos basales y membranas ondulantes no
hay cambio respecto á la fase anterior.

En el núcleo subsiste la membrana, aunque es menos visible;
los cromosomas se dirigen hacia los polos del huso, probable-
mente después de haberse dividido perpendicularmente al eje.
Fundo esta suposición en que los cromosomas que van hacia los
polos son más cortos que la mayor parte de los que están aún
en la placa ecuatorial.

Cuando ésta ha desaparecido á consecuencia de la emigración
de los cromosomas, el núcleo se alarga en el sentido del eje del
huso, éste desaparece, la membrana nuclear se estrangula en el
ecuador, terminando por quedar separados los dos núcleos hijos.

TrELOFAsE (Fig. 4).

Los dos núcleos hijos se separan uno de otro llevando cada
uno consigo su cuerpo basal y sus cuatro membranas ondu-

lantes.

SOBRE LA REPRODUCCIÓN DE LINENYMPHA GRACILIS 13

La marcha de los dos núcleos hijos es idéntica: la membrana
nuclear vuelve á hacerse más visible; los cromosomas se dividen
en gran número de gránulos cromáticos alargados, que se orien-
tan en dirección al cuerpo basal; las membranas ondulantes per-
sisten; se forma en cada núcleo un nuevo axostilo, que al princi-
pio es muy delgado y que ya desde su aparición se muestra muy
eosinófilo, el cual se origina á partir del cuerpo basal, probable-
mente por división de éste (1).

En este momento debe verificarse la división del citoplasma,
pues los individuos que de ella resultan (y son muy numerosos
en mis preparaciones) se distinguen, á parte de su pequeño ta-
maño, por sus cuatro membranas ondulantes, porque el cito-
plasma no contiene nunca partículas de madera y porque el nú-
cleo no tiene cuerpo interno y muestra su cromatina periférica
formando gránulos pequeños. La transformación de estos indi-

viduos jóvenes en formas vegetativas adultas me es desconocida.

Conclusiones y discusión.

En la reproducción por bipartición de Dinenympha gracilis el
núcleo se divide por mitosis evidente, caracterizada por tener
como centro de división el cuerpo basal de las membranas on-
dulantes, por la persistencia de la membrana del núcleo durante
todas las fases, por la formación de un huso acromático intra-
nuclear y de una placa ecuatorial constituída por cromosomas di-
ferenciados. Esta forma de división del núcleo pertenece al quinto
tipo de los admitidos por HarTMANN y SCHÚSSLER (1913) en los
Flagelados, y por el carácter de conservar la membrana nuclear

entra en el grupo de las mesomitosis de CHaTTON (IQIO).

(1) En un solo caso (fig. 3) he observado en la anafase la presencia de
un axostilo al lado de uno de los cuerpos basales. Dudo entre interpre-
tarlo como un residuo del axostilo primitivo ó como un axostilo formado
prematuramente.

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid.—Ser. Zool., núm. 23.--1915.

14 A. DE ZULUETA

La conclusión precedente es contraria á lo que expone Comes
(1912) en su memoria sobre la reproducción y morfología de
Dinenympha gracilis. En ella afirma que en la bipartición ó
«scissione» del Protozoo que nos ocupa la «divisione del nucleo

e piú vicina alla amitosi che alla cariocinesi» y describe, apo-
yándose en las cinco figuras que reproduzco (figuras B, C, D, E

FIG. D. Eu6. Bo

Figuras reproducidas de COMES (1912), lám. XI, figs. 5 49.

y F), un proceso sumamente irregular de división del núcleo, con
formación de un llamado huso acromático imperfecto, pero sin
que se formen cromosomas y sin que el cuerpo basal de las mem-

branas obre como centro de división.

ES

SOBRE LA REPRODUCCIÓN DE DINENYMPHA GRACILIS I5

La contradicción que existe entre mi conclusión y las afirma-
ciones de Comes (1912), nace de que, á mi juicio, este autor
no ha observado verdaderas fases de división; sus figuras 5,
6 y 8 (reproducidas aquí como B, € y E), no representan, como
el autor pretende, fases de división nuclear, sino individuos cuyo
núcleo está deformado á consecuencia de mala fijación; su figu-
ra 7 (D) que parece más una fase de división, tampoco es deci-
siva, y, finalmente, la figura 9 (F), que el autor interpreta como
una telofase, no creo que justifique esta interpretación, porque
las dos esferas mayores, que considera como núcleos, son de
estructura muy diferente; la inferior (probablemente la única que
es un núcleo) presenta una red cromática, mientras que la supe-
rior contiene gruesos gránulos esféricos semejantes á los que se
ven en una tercera esfera próxima y menor.

Los defectos de interpretación que existen en esta parte, la
más sencilla de la memoria de Comes (1912), obligan á suspen-
der el juicio sobre cuanto afirma respecto de la multiplicación
por «coniotomia» y sobre la conjugación con dimorfismo sexual;
porque no es probable que el autor que ha incurrido en estos
errores al estudiar la bipartición Ó simple división de un Fla-
gelado haya podido observar é interpretar con exactitud su ciclo
evolutivo completo; tanto más, cuanto que, según él, este ciclo
se realizaría en órganos diferentes del patrón.

Si comparamos la bipartición de Dinenympha gracilis con la
de otros Protozoos, vemos que tiene profunda analogía con la de
Trichomonas estudiada recientemente por KuczyxskI (1914). En
ambos casos tienen lugar los fenómenos siguientes: 1) Cuando el
cuerpo basal, que es al mismo tiempo centriolo, se divide, los dos
cuerpos basales hijos se separan resbalando sobre la membra-
na nuclear y forman entre ellos un centrodesma, constante para
Trichomonas, excepcional sólo para Dinenympha. Cada cuerpo
basal hijo lleva consigo una parte de los orgánulos de locomoción.
2) La membrana nuclear se conserva durante la división. 3) Se
forma un huso intranuclear que tiene por polos los cuerpos ba-

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid.—Ser. Zool., núm. 23.—1915.

16 A. DE ZULUETA

sales hijos. 4) Se forma una placa ecuatorial con cromosomas di-
ferenciados. 5) El axostilo desaparece. Los axostilos de los indi-
viduos hijos se forman junto á cada núcleo con independencia del
centrodesma.

Si se compara la división nuclear de Dinenympha con la de
otros Protozoos, con los que parece relacionada, vemos ya dife-
rencias importantes. Así en Zoenia, Trichonympha, Lophomonas,
Devescovina, Stephanonympha, Calonympha y Oxymonas, estu-
diados por Grassi y Foa (1904), Foa (1904) y JanickI (1910 y
1915), se ve que la división se verifica de un modo muy especial
que este último autor (1912) ha propuesto denominar div¿sión
nuclear de Grassí, apareciendo siempre un huso extranuclear ca-
racterístico, que es el primer origen del orgánulo esquelético de
las formas que lo poseen.

Aunque Jaxickr en su recientísimo trabajo (1915) pretende
referir también la división de Trichomonas al tipo de Grassi, creo
que difiere bastante, sobre todo por la ausencia de huso extranu-
clear y por el funcionamiento del cuerpo basal como centriolo,
diferencias que mis observaciones sobre Dinenympha tienden a
confirmar. El centrodesma exterior al núcleo, que he visto una
sola vez en una metafase, en que por excepción cada cuerpo
basal llevaba sólo tres membranas ondulantes (fig. 2), no creo
que pueda interpretarse como homóloga de un huso extranu-
clear. Más bien parece que se trata de un fenómeno de regulación,
y, según esta hipótesis, el centrodesma, que se tiñe como las
membranas ondulantes, se transfomaría en una de éstas que, al
dividirse el citoplasma, se rompería por un punto, con lo cual
cada Dinenympha hija quedaría con cuatro membranas ondulan-
tes, que es el número normal para los individuos que acaban de
resultar de la división.

La comparación entre la división de 7richomonas y la de Di-
nenympha demuestra con toda seguridad que este Protozoo es un
Flagelado, como ya afirmaron GRass1 y SANDIAS (1893-94) basán-
dose en caracteres del estado vegetativo, y descarta completa-

SOBRE LA REPRODUCCIÓN DE DINENYMPHA GRACILIS 07

mente la hipótesis de que pueda pertenecer á la clase especial
de Protozoos, los Triconinfídeos, que HarTMANN (IQ1IO) propuso
formar con los comensales de los Termes y Blatas, algunos de
los cuales (Lophomonas, Calonympha) el mismo Hartmann ha indi-
cado posteriormente (1913) que deben volver á los Flagelados.

Dentro de este grupo las observaciones de que doy cuenta
justifican la posición que Grassi y Foa (1911) señalaron al ani-
mal que nos ocupa al crear para él la familia «Dinenymphidae»
del orden «Polimastigina», el cual abraza también la de los Tetra-
mitidae á la que pertenece 77+1chomonas con quien tanta afinidad
muestra Dinenympha en los fenómenos de la bipartición.

Antes de terminar, me permito llamar la atención sobre que
el cuerpo basal de las membranas es al mismo tiempo centriolo
en la división nuclear. Este es un nuevo hecho en favor de la ho-
mología entre cuerpos basales y centriolos, combatida reciente-
mente por Jameson (1914) y defendida por MinchiN (1914).

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid. —Ser. Zool., núm.:23.—1915.

Résumé.

Parmi les diflérentes formes de Dinenympha gracilis Leidy,
Flagellé commensal intestinal de Termes lucifugus Rossi, celle
représentée schématiquement par la figure A doit attirer notre
attention, car c'est a elie que l'on doit rapporter, presque indubi-
tablement, le processus de division (bipartition) dont je rends
compte dans ce travail.

La longueur en est tres variable, elle oscille d'ordinaire de 60
%:
a 70 y. y

Son aspect général est piriforme, le petit bout correspond a
lextrémité antérieure, et le gros bout a la postérieure. Le corps
est tordu en spirale sinistrorse a partir de l'extrémité antérieure;
la spirale décrit un a deux tours.

La surface est parcourue par des membranes ondulantes—huit
normalement—-qui partent d'un point commun, corps basal, placé
a Pextrémité antérieure a cóté du noyau et vont jusqu'a la région
postérieure du corps ou chaque membrane se termine par une
partie libre flagelliforme.

Le cytoplasme renferme des fragments de bois et de petites in-
clusions sphériques.

Le noyau est unique, placé a l'extrémité antérieure, et possede
une membrane nucléaire aisément visible. 1l laisse voir un corps
interne oxyphile, et chromatine périphérique basophile (fig. 7).

Enfin Dinenympha possede un organe squelettique allongé,
Paxostyle, qui s'étend depuis la proximité du corps basal et du
noyau, qu'il entoure en partie, jusqu'a l'extrémité postérieure de
Panimal. Il est élastique et tres éosinophile.

Dans la reproduction par division (bipartition) de Dinernympha
gractlis, le noyar se divise par mitose évidente (figs. 1-4). Cette

SOBRE LA REPRODUCCIÓN DE DINENYMPHA GRACILIS 19

mitose est caractérisée par le fait qu'elle a comme centre de divi-
sion le corps basal des membranes ondulantes, et en outre, par la
persistance de la membrane du noyau durant toutes les phases,
parla formation d'un fuseau achromatique intranucléaire et d'une
plaque équatoriale constituée par des chromosomes différenciés.
Cette forme de division du noyau appartient au cinquieme type
admis pour les Flagellés par HarTMANN et ScHUssLER (191 3), et le
fait qu'elle conserve la membrane du noyau, la fait entrer dans le
groupe des mésomitoses de CHATTON (1910).

La conclusion qui précede est contraire a ce qu'expose Co-
MES (IQ12) dans son mémoire sur la reproduction et la morpho-
logie de Dinenympha gracilis. Dans ce travail il affirme qua la
division ou «scissione» du Protozoaire qui nous occupe, la «divi-
sione del nucleo é piú vicina alla amitosi che alla cariocinesi» et
il décrit—en donnant les cinq figures que je reproduis (fig. B, C,
D, E et F)—un processus de division tres irrégulier, avec for-
mation d'un soi-disant fuseau achromatique imparfait, mais sans
formation de chromosomes et sans que le corps basal des mem-
branes agisse comme centre de division.

La contradiction qui existe entre ma conclusion et les affirma-
tions de Comes (1912) naít de ce que, a mon avis, cet auteur n'a
pas observé de vraies phases de division: ses figures 5, 6 et 8 (re-
produites ici sous les lettres B, C et E) ne représentent pas,
comme il le prétend, des phases de division nucléaire, mais des
individus dont le noyau est déformé par suite de mauvaises fixa-
tions; sa figure 7 (D), qui ressemble davantage a une phase de
division, ne me parait non plus décisive; et finalement, quant a
sa figure O (F), qu'il interprete comme une télophase, je ne crois
pas qu'elle justifie cette interprétation, car les deux plus grandes
sphéres que Comes considere comme des noyaux ont une struc-
ture tres différente: l'inférieure (probablement la seule qui soit
un noyau) présente un réseau chromatique, tandis que la supé-
rieure contient de gros grains sphériques semblables á ceux que
Pon voit dans une troisieme sphere voisine et plus petite.

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid.—Ser. Zool., núm. 23.—1915. *

20 A. DE ZULUETA

Les défauts d'interprétation qui existent dans cette partie, la
plus simple du mémoire de Comes (1912), obligent á faire toutes
sortes de réserves sur ce qu'il affirme au sujet de la multiplica-
tion par «coniotomia» et sur la conjugaison avec dimorphisme
sexuel; car il n'est pas probable que Pauteur qui a commis ces
erreurs dans l'étude de la simple division d'un Flagellé, ait pu
observer et interpréter avec exactitude un cycle évolutif com-
plet, d'autant plus que, d'apres lui, ce cycle évolutif s'accompli-
rait dans des organes différents de lP'hóte.

Si Pon compare la division de Dinenympha gracilis avec celle
d'autres Protozoaires, on verra qu'elle a une profonde analogie
avec celle de Zr2chomonas étudiée récemment par KuczyNsKi1
(1914). Dans les deux cas il se produit les phénoménes suivants:
1) Quand le corps basal, qui est en méme temps centriole, se di-
vise, les deux corps basaux fils s'écartent en glissant sur la mem-
brane nucléaire et il se forme entre eux une centrodesmose, cons -
tante pour 7richomonas et exceptionnelle seulement pour D%-
nenympha (1). Chaque corps basal fils entraine avec soi une partie
des organes de la locomotion. 2) La membrane nucléaire se con-
serve pendant la division. 3) Il se forme un fuseau intranucléaire
qui a pour póles les corps basaux fils. 4) Il se forme une plaque
équatoriale avec des chromosomes différenciés. 5) L'axostyle dis-
paraít. Les axostyles des individus fils se forment á cóté de cha-
que noyau, indépendamment de la centrodesmose.

Si nous passons maintenant á comparer la division nucléaire
de Dinenympha avec celle d'autres Protozoaires avec lesquéls
elle parait alliée, nous verrons déja des différences tres impor-
tantes: ainsi, chez Foenia, Trichonympha, Lophomonas, Stepha-
nonympha, Calonympha et Oxymonas, étudiés par Grassi et Foa
(1904), Foa (1904) et Jaxick1 (IQIO et 1915), nous voyons que

(1) Dans les figs. 1 et 2, l'un des deux corps basaux fils est projeté
dans le champ limité par la inembrane nucléaire, mais j'insiste sur le fait
qu'ils restent toujours tous deux á l'extérieur du noyau.

SOBRE LA REPRODUCCIÓN DE DINENYMPHA GRACILIS 21

la division a lieu d'une facon particuliére que ce dernier auteur
(1912) a proposé de nommer division nucléaire de Grassi, et qui a
toujours lieu avec formation d'un fuseau extranucléalre caracté-
ristique qui est la premiere origine de l'organe squelettique des
formes qui en ont un.

Alors méme que Janick1 dans son mémoire tout récemment
paru (1915) prétend que la division de 7+1chomonas se rapporte
au type de Grassi, je crois qu'elle en différe assez par l'absence
du fuseau extranucléaire et par le fonctionnement du corps basal
comme centriole, phénoménes que mes observations sur Dine-
nympha portent a confirmer. La centrodesmose extérieure au
noyau que je n'ai vue qu'une seule fois dans une métaphase
(fig. 2) ou, par exception, chaque corps basal ne portait que
trois membranes ondulantes, je crois qu'on ne doit pas l'inter-
préter comme homologue d'un fuseau extranucléaire. Il paraít
qu'il s'agit plutót d'un phénomene de régularisation, et, d'apres
cette hypothese, la centrodesmose qui se colore comme les mem -
branes, deviendrait une membrane ondulante qui, au moment de
la division du cytoplasme, se briserait par un point, d'ou il s'en-
suivrait que chaque Dinenympha fille aurait quatre membranes
ondulantes, c'est a dire, le nombre normal pour les individus qui
viennent d'étre produits par la division.

La comparaison faite entre la division de 7r2chomonas et celle
de Dinenympha montre en toute assurance que ce Protozoaire
est un Flagellé, comme Grassi et Sanpras (1893-94) l'ont déja
affirmé en s'appuyant sur des caracteres de l'état végétatif, et
elle écarte completement l'hypothese de ce que Dinenympha
puisse appartenir a une classe spéciale de Protozoaires, les Tri-
chonymphidea, que HARTMANN (1910) avait proposé d'établir avec
les commensaux des Termites et des Blattes, dont quelques-uns
(Lophomonas, Calonympha...) ont été indiqués postérieurement
par HARTMANN (1913), comme devant rentrer de nouveau dans la
classe des Flagellés.

Mes observations justifient la place que Grassi et Foa (1911)

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid.—Ser. Zool., núm. 23.—1915,

22 A. DE ZULUETA

ont signalée dans cette classe a l'animal dont nous nóus occupons,
quand ils ont créé pour lui la famille «Dinenymphidae» de l'ordre
«Polimastigina», dans lequel rentre aussi la famille des Tetramiti-
dae a laquelle appartient 7richomonas, si voisin de Dinenympha

comme le démontrent les phénomenes de division.

Trabajos citados.

1907. Bom (A.) er OrpeL (A.)—Manuel de technique micros-
copique. Traduit par Rouville (Paris, Vigot freres,
I vol., 498 pp.)

I9IO a. Comes (S.) — Lophophora vacuolata (Comes) nuovo ge-
nere e nuova specie di flagellato dell'intestino dei
Termitidi (Catania, Bol. Acc. Gioenia, (2), fasc. 13,
pp. II-I19, fig. 1-3).

19105. — Alcune considerazioni citologiche a proposito del di-
formismo sessuale riscontrato in Dinenympha gractlis
Leidy (N. pr.). (Catania, Bol. Acc. Gioenia, (2), fasc. 13,
pp. 20-29.)

1912. — Reproduzione e morfologia di Dinenympha gracilis
Leidy flagellato ospite dell'intestino dei Termitidi.
(Arch. Protistenkunde, Jena, Bd. XXV, p. 212-216,
Taf. xt.)

IQIO. Charron (E.)—Essai sur la structure du noyau et la mi-
tose chez les Amoebiens. Faits et théories. (Arch. zool.,
Paris, 5* série, tom. V, mém. 6.)

1904. Foa (A.) —Ricerchi sulla riproduzione dei Flagellati.
IT. Processo di divisione delle Triconinfe. (Roma, Rend .
Acc. Lincei, ser. 5, vol. XIII, fasc. 12, pp. 618-625,
fig. 1-5.)

1904. Grass (B.) E Foa (A.) —Ricerche sulla riproduzione dei
Flagellati. 1 Processo di divisione delle Joenie e for-
me affini. (Roma, Rend. Acc. Lincei, ser. 5, vol. XIII,
p. 241-253, fig. 1-17.)

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid.—Ser, Zool., num. 23.—1913,

24 A. DE ZULUETA

IQII. Grassi (B.) E Foa (A.)—Intorno ai Protozoi dei Ter-
mitidi. (Roma, Rend. Acc. Lincei, ser. 5, vol. XX,
pp. 725-741.)

1893-94. — E SaNnpDIas (A.) —Costituzione della societa dei Ter-
mitidi. Osservazioni sui loro costumi con un'ap-
pendice sui Protozoi parassiti dei Termitidi e sulla
fauna delle Embidine. (Catania, Atti Acc. Gioenia,
ser. 1v, vol. VI, mem. vu, e vol. VII, mem. 1,
5 tav.) 3

IQIO. Hartmann (M.)—Untersuchungen úber Bau und Ent-
wicklung der Trichonymphiden (Trichonympha
hertwigi n. sp.). (Festschrift zum sechzigsten Ge-
burtstage Richard Hertwigs, Bd. lI, p. 352-396,
Taf. xvii-xxx).

1913. — u. H. SchússLer.— Flagellata. (In: Handwórter-
buch der Naturwissenschaften, Jena, Bd. III,
p. 1179-1226, 99 Fig.)

1912. HerrwiG (O.)—Allgemeine Biologie. 4. Aufl. (Jena, G.
Fischer, 1 vol. 8.) 187 PD. 4/90B19))

1914. Jameson (A. PrinoLe)—A new Phytoflagellate (Para-
polytoma satura, n. g., n. sp.) and its method
of nuclear division ( Arch. Protistenkunde, Jena,
Bd. XXXIIL p. 21-44, Taf. 11, 1 Fig.)

* IQIO. — Janicki (C.) —Untersuchungen an parasitischen Fla-
gellaten. I. Teil. Zophomonas blattarum Stein,
L. striata Bitschli. (Zs. wiss. Zool., Leipzig, Bd. VC,

p. 243-315.)
* 1912. — Bemerkungen zum Kernteilungsvorgang bei Fla-
gellaten, namentlich bei parasitischen Formen.
(Basel, Verh. Natf. Ges., Bd. XXIII, p. 82-111.)
1915. —- Untersuchungen an parasitischen Flagellaten. II.
Teil. Die Gattungen Devescovina, Parajoenia, Ste-
phanonympha, Calonympha. Uber den Parabasalap-
parat.—Uber Kernkonstitution und Kernteilung.

1914.

1877.

1881.

1014.

1897.

SOBRE LA REPROLUCCIÓN DE DINENYMPHA GRACILIS 25

(Zs. wiss. Zool. Leipzig, Bd. CXII, p. 573-6091,
Taf. xiu-xvm, 17 Fig.)

Kuczyxskt (M. H.) — Untersuchungen an Trichomo-
naden. (Arch. Protistenkunde, Jena, Bd. XXXIII,
p. 119-204, Taf. x1-xv1, 4 Fig.)

Lermy (J.)—On intestinal parasites of Zermes flavipes
(Philadelphia, Pa., Proc. Acad. Nat. Sci., pp. 146-
149.)

— The parasites of the Termites. (Philadelphia, Pa.,
J. Acad. Nat. Sci., new series, vol. VIIL, pp. 425-
447.)

MixcmiN (E. A.) —Remarks on the nature of the ble-
pharoplasts or basal granules of flagella. (Arch.
Protistenkunde, Jena, Bd. XXXIV, p. 212-216,)

Porter (J. FE.) —Trichonympha and other parasites of
Termes flavipes (Cambridge, Mass., Bul. Mus. Comp.
Zool., Harvard Coll., vol. XXXI, p. 47-69, 6 plats.)

* El trabajo de Janick1 (1910), que he consultado en otra oca-
sión, no he podido tenerlo á la vista al redactar esta nota. El del
mismo autor (1912) lo conozco sólo por la noticia crítica de JoL-
Los. (Arch. Protistenkunde, Jena, Bd. XXX [1913], p. 343-344.)

Trab. del Mus. Nac. de Cienc. Nat. de Madrid. -Ser. Zool., núm. 23.—1915.

Explicación de la lámina.

FASES DE BIPARTICIÓN Y DIFERENTES ASPECTOS DEL NÚCLEO

DE «DINENYMPHA GRACILIS> LEIDY

Todas las figuras tienen el mismo aumento (680 diámetros),
han sido observadas con los objetivos apocromáticos de Zeiss
2 mm. 1.30 y 1.5 mm. 1.30 y dibujadas con la cámara clara de
Abbe.

Las figuras 1, 3, 4, 5 y Ó corresponden á preparaciones teñi-
das con hemalumbre y eosina.

Las figuras 2 y 7 corresponden á preparaciones teñidas con
verde de metilo y fucsina ácida.

Fig. 1.—Metafase.

Fig. 2.—Metafase con formación excepcional de centrodesma entre los
cuerpos basales centriolos.

Fig. 3.—Principio de la anafase.

Fig. 4.—Telofase.

Figs. 5-6.—Núcleos,

Fig. 7. —Núcleo, corte óptico.

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